Efecto de la concentración del aceite esencial de Rosmarinus officinalis sobre el crecimiento de Microsporum canis in vitro

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. de la concentración del aceite esencial de Rosmarinus. CI EN. "Efecto. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA. DE. officinalis sobre el crecimiento de Microsporum canis in vitro". TESIS. BIÓLOGO - MICROBIOLOGO. BI. BL. IO. TE. CA. PARA OBTENER EL TITULO PROFESIONAL DE. AUTOR: Br. ROOSVELT ARTURO HERNANDEZ MESTANZA ASESOR Dr. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO TRUJILLO – PERU 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IC. Dr. Orlando Moisés Gonzales Nieves. BI. O. LO. G. RECTOR. AS. Dr. Rubén César Vera Véliz. CI EN. CI. VICERRECTOR ACADÉMICO. DE. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. BI. BL. IO. TE. CA. VICERRECTOR DE INVESTIGACIÓN. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. IC. Dr. Freddy Rogger Mejía Coico. BI. O. LO. G. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. Dr. William Elmer Zelada Estraver. DE. CI EN. CI. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CA. Dr. Jaime Asunción Agreda Callirgos. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. BI. BL. IO. TE. DIRECTOR DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe, profesor asesor de la tesis titulada: "Efecto de la concentración del. AS. aceite esencial de Rosmarinus officinalis sobre el crecimiento de Microsporum. IC. canis in vitro". LO. G. CERTIFICA:. Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la. O. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. BI. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. CI. AS. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. Por lo tanto, autorizo a ROOSVELT ARTURO HERNANDEZ MESTANZA,. Trujillo, Diciembre del 2018. TE. CA. DE. CI EN. continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. IO. -------------------------------------------------Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo. BI. BL. ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. Señores miembros del jurado:. AS. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados. IC. y Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología. G. de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo,. LO. pongo a vuestra consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:. O. "Efecto de la concentración del aceite esencial de Rosmarinus officinalis. BI. sobre el crecimiento de Microsporum canis in vitro" con el cual pretendo. Trujillo, diciembre del 2018. CA. DE. CI EN. CI. AS. obtener el Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.. BI. BL. IO. TE. ------------------------------------------------------Br. Roosvelt Arturo Hernández Mestanza. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. CI. AS. BI. O. LO. G. Msc. Juan Héctor Wilson Krugg. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Msc. Jaime Enrique Agreda Gaitán. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI EN. CI. AS. BI. O. Msc. Juan Héctor Wilson Krugg. LO. G. IC. AS. APROBACIÓN. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Msc. Jaime Enrique Agreda Gaitán. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. LO. G. A Dios, que sin ÉL todo esfuerzo realizado es en vano.. AS. DEDICATORIA. BI. O. A mi madre, Amalia Mestanza Cruzado, por el esfuerzo constante que siempre ha realizado para poder educarme. Un esfuerzo que no solo ha sido económico, sino. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. que también emocional.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. AGRADECIMIENTO. O. LO. G. A Dios, por darnos la vida y permitir realizarnos como personas de bien.. BI. En forma muy especial a mi madre, que gracias a ella he podido realizarme como. CI EN. CI. AS. persona y profesional.. A Joann Guerrero Rubio, Oscar Barba Barboza y Cecilia Diaz Arias, por su. CA. DE. amistad y el apoyo incondicional recibido.. A mis profesores: Dr. Julio Arellano, Dr. Marco Salazar y Dra. Icela Rodríguez,. BI. BL. IO. TE. por su amistad y por el apoyo constante en la realización de esta tesis.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ……………………II AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS…………………………………. …………………III. AS. DEL ASESOR ..............................................................................................................IV. IC. PRESENTACIÓN .........................................................................................................V MIEMBROS DEL JURADO .........................................................................................VI. G. APROBACIÓN ............................................................................................................VII. LO. DEDICATORIA ..........................................................................................................VIII AGRADECIMIENTO ....................................................................................................IX. BI. O. INDICE………………………………………………………………………………………………………………………………………X RESUMEN ...................................................................................................................XI. AS. INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 1 OBJETIVOS ................................................................................................................. 4. CI. MATERIAL Y METODO ................................................................................................ 5 LUGAR DE EJECUCIÓN: .......................................................................................... 5. 2.-. COLECCIÓN DE MUESTRA BIOLÓGICA: .................................................................... 5. 3.-. SELECCIÓN DE MATERIAL BIOLÓGICO: .................................................................... 5. 4.-. PROCESAMIENTO: ................................................................................................. 5. CI EN. 1.-. DE. a.- Obtención del aceite esencial de R. officinalis. ............................................. 5 b.- Preparación de las concentraciones del aceite esencial. .............................. 6. CA. c.- Obtención de cultivo monospórico de Microsporum canis. ............................ 6 d.- Siembra, incubación y lectura del crecimiento de M. canis. .......................... 7 DISEÑO EXPERIMENTAL.......................................................................................... 8. TE. 5.-. RESULTADOS ............................................................................................................. 9. IO. DISCUSIÓN ................................................................................................................ 11 CONCLUSIONES ....................................................................................................... 13. BL. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................ 14 ANEXOS ........................................................................................................... 19. BI. II.-. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN La presente investigación tuvo como propósito evaluar el efecto del aceite esencial. AS. de Rosmarinus officinalis “romero” sobre el crecimiento de Microsporum canis in. IC. vitro, para la cual, se preparó y esterilizó el medio agar Sabouraud conteniendo. G. concentraciones de dicho aceite esencial de 0 (control), 2, 5, 10 y 50 µL/mL,. LO. respectivamente. Se sembró por puntura central un fragmento de micelio. O. proveniente de un cultivo monospórico del hongo en estudio, se incubó a 25 °C. BI. por 14 días y se realizaron las lecturas del crecimiento micelial en milímetros de. AS. diámetro. Se encontró que el aceite esencial de romero en la concentración de 2 µL/mL reduce el crecimiento micelial de M. canis a un 60.41% y concentraciones. CI. ≥5µL/mL no permiten el crecimiento del hongo en estudio. Se concluye que el. CI EN. incremento (0 - 2 µL/mL) de la concentración aceite esencial de hojas de R. officinalis reduce el crecimiento micelial de M. canis y concentraciones ≥5µL/mL. DE. lo reducen al 0 %, in vitro.. CA. Palabras clave: Rosmarinus officinalis, aceite esencial, Microsporum canis,. BI. BL. IO. TE. crecimiento.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN En las últimas décadas, el aumento de la resistencia antifúngica y el decremento. AS. de la disponibilidad económica para adquirir medicamentos, han promovido. . Cabe destacar que dicha búsqueda. 1-3. G. tratamiento contra las distintas micosis. IC. investigaciones en búsqueda de compuestos fitoquímicos como una alternativa al. LO. alcanza a productos de origen natural vegetal, que sean seguros, no tóxicos,. BI. sería una excelente alternativa a investigar.. O. eficaces y de bajo costo; así, los aceites esenciales y en este caso el de romero. AS. En Perú, se han evaluado los efectos de plantas provenientes del nororiente, como. CI. Cassia reticulata, Ilex guayusa Loes, Piper lineatum y Terminalia catappa4;. CI EN. encontrando que extractos de estas plantas presentaron actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli, Candida albicans y Microsporum canis. En Brasil y Colombia, se realizaron. DE. estudios con plantas en las cuales encontraron que diversos extractos inhibieron. CA. el desarrollo de hongos, en los que se incluye a M. canis 5, 6. El romero, Rosmarinus officinalis, es una de las plantas más utilizadas. TE. artesanalmente por la población, esto debido a sus múltiples propiedades. IO. medicinales que posee 7. El romero pertenece a la familia Lamiaceae, es una. BL. planta tipo arbusto que presenta tallos de forma prismáticos, sus hojas son finas,. BI. estrechas, agudas y pequeñas que contienen aceites esenciales con diversos principios activos 8-10. El aceite esencial de romero presenta propiedades antimicrobianas contra una diversidad de agentes patógenos, probablemente debido a que presenta un alto contenido de 1,8-cineol 10-12. Las patologías más comunes en la clínica humana y 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. veterinaria en animales menores es la de dermatofitosis, producida Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton, siendo el dermatofito más importante M. canis común en perros y gatos.. AS. La dermatofitosis por M. canis es una infección que se presenta a menudo en forma asintomática y se considera como una antropozoonosis asociada a 13. . El diagnóstico de una. IC. animales menores que afecta piel, pelo y uñas. LO. G. dermatofitosis por M. canis se realiza por cultivo, que permite observar las características culturales macroscópicas, tales como la forma y el color del micelio. O. y las microscópicas como la presencia de macro y microconidias14. Por otro lado,. BI. existen pruebas rápidas, basadas en la observación directa de pelos, escamas o. AS. raspado de uñas donde se puede observar las artrosporas o hifas sobre el material. CI. infectado. Asimismo, la biopsia de piel es un método no necesario, aunque es. CI EN. efectivo 15.. Por otro lado, el tratamiento para la dermatofitosis depende de la extensión de las lesiones; siendo principalmente tópico y se utilizan productos antimicóticos en. DE. presentaciones de pomadas, soluciones o cremas conteniendo ketoconazol,. CA. miconazol, clotrimazol o terbinafina y para las lesiones generalizadas se usan champús antimicóticos y tratamiento sistémico. . La elección de la droga en. 16. TE. particular a usar para las infecciones sistémicas es la griseofulvina, sin embargo,. IO. también se utiliza el ketoconazol e itraconazol, aunque estos suelen generar. BL. ciertos efectos adversos como vómitos, diarrea, y anorexia, y son hepatotóxicos . Un inconveniente importante de los tratamientos con estas drogas es que. 17, 18. BI. suelen ser efectivos después de varios meses 19.. Se han evaluado los efectos antibacterianos y antifúngicos de los aceites esenciales obtenidos de hojas frescas de romero, aislados por hidrodestilación obteniendo actividad en contra de las siguientes especies bacterianas: Klebsiella. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. pneumoniae, Alcaligenes faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Leuconostoc cremoris, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris, Escherichia. coli y Bacillus subtilis, entre otras. Las especies fúngicas Aspergillus ochraceus, Aspergillus parasiticus, Fusarium culmorum y Alternaria alternata, mostrando una sensibilidad. AS. significativa a los aceites volátiles 20.. IC. Generalmente, los aceites esenciales son mezclas complejas de hasta más de. LO. G. 100 componentes (metabolitos secundarios) que pueden ser compuestos alifáticos de bajo peso molecular (alcanos, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres. O. y ácidos), monoterpenos, sesquiterpenos y fenilpropanos. Estos metabolitos. propiedades. biológicas,. propiedades. antiinflamatorias,. . Otras actividades biológicas también se. 21. CI. antioxidantes, y anticancerígenos. como. AS. diversas. BI. secundarios cubren un amplio espectro de efectos farmacológicos mostrando. CI EN. reportan como biocidas en contra de una amplia gama de microorganismos como bacterias, hongos, virus, protozoarios insectos y plantas22. Las hojas contienen aceite esencial, polifenoles, pigmentos flavónicos (apigenina,. alcaloides. diterpénicos. (isorosmaricina,. metilrosmaricina,. CA. rosmarínico),. DE. luteolina), ácidos orgánicos (cafeico, clorogénico, fenólico, neoclorogénico,. rosmaricina), flavona (repritina), diterpenoides (picrosalvina, rosmadiol, rosmanol,. TE. rosmarinol, rosmariquinona), ácido ursólico, taninos, salvigenina, hispidulina,. IO. nepetina y genkwareno 21 .. BL. Los aceites esenciales surgen como una alternativa al control de plagas y. BI. enfermedades pues su aplicación a nivel de laboratorio ha demostrado eficiencia en el control de agentes fitopatógenos, creando la posibilidad de contar con productos que garanticen inocuidad en el medio ambiente y garantizando producciones sanas y libres de residuos contaminantes21.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La actividad antifúngica de extractos de plantas usadas en medicina popular contra diversos hongos, que causan infecciones frecuentes en humanos, ha sido ampliamente estudiada, debido a los efectos adversos de algunas de las drogas antifúngicas utilizadas actualmente, a que son poco efectivas e inducen. AS. frecuentemente resistencia, a los elevados costos de los tratamientos. IC. antimicóticos, numerosos investigadores han encaminado sus trabajos hacia la. G. búsqueda y aplicación de nuevos compuestos biológicamente activos que exhiban. LO. efectos secundarios mínimos. Por ello, el presente estudio evalúa el uso de. O. alternativas naturales, como los aceites esenciales del romero, para el control de. AS. BI. este tipo de infecciones.. Evaluar el efecto de la concentración del aceite esencial hojas de. CI EN. . CI. OBJETIVOS. Rosmarinus officinalis sobre el crecimiento de Microsporum canis, in vitro. Obtener el aceite esencial de hojas de R. officinalis (romero).. . Preparar diferentes concentraciones del aceite esencial de R. officinalis con. DE. . BI. BL. IO. TE. CA. las que se evaluará el crecimiento de M. canis.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y METODO 1.-. Lugar de Ejecución:. AS. El presente trabajo de investigación fue realizado en el laboratorio de. IC. Tecnología Enzimática y Productos Naturales, Departamento de Química. 2.-. LO. G. Biológica y Fisiología Animal de la Universidad Nacional de Trujillo Colección de Muestra Biológica:. BI. O. El material biológico para este proyecto fueron hojas de R. officinalis “romero”, las que se colectaron de cultivos agrícolas ubicados en la provincia. Selección de Material Biológico:. CI. 3.-. AS. de Otuzco.. CI EN. El material biológico colectado fue debidamente clasificado, seleccionado, es decir, se tomaron las hojas aparentemente sanas y completas. Estas. DE. hojas fueron cegadas con todo tallo a partir de plantas con dos años de siembra y en el comienzo de su floración (información personal), esto con el. Procesamiento:. TE. 4.-. CA. fin de su posterior rebrote.. BI. BL. IO. a.- Obtención del aceite esencial de R. officinalis. La obtención del aceite esencial de R. officinalis se realizó en un equipo de acero inoxidable de destilación por arrastre de vapor de agua. , en el laboratorio de Farmacognosia, Departamento. 24. Académico de Farmacotecnia – Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional de Trujillo. Para ello se trabajó con hojas frescas de romero obtenidas según el paso anterior. Se preparó dicho equipo,. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. el cual consta de un recipiente grande con una rejilla móvil donde se colocó el material vegetal y el fondo contiene el agua destilada; se cerró herméticamente y la tapa porta el refrigerante que en su parte distal se colecta el hidrolato conteniendo el aceite esencial, el cual es. AS. separado en una pera de separación.. IC. Se trabajó con 6 kg de hojas frescas del material en estudio y se. LO. G. procedió a extraer el aceite esencial, con el vapor de agua generado en el mismo recipiente donde se colocaron las hojas de romero sobre. O. una rejilla o cesta. Se destiló por aproximadamente 20 minutos hasta. BI. agotar los aceites esenciales de dichas hojas y se obtuvo 6 mL del. AS. aceite esencial. Finalmente, el volumen obtenido del aceite esencial. CI. se colocó en un frasco de color ámbar con previa rotulación y se. CI EN. conservó en refrigeración a 4°C hasta el momento de su uso. b.- Preparación de las concentraciones del aceite esencial. Se prepararon diferentes concentraciones (V/V) del aceite esencial de. DE. R. officinalis en solución de tween 80 al 0,1% 25 en viales de 2 mL y se. CA. conservaron en refrigeración.. TE. c.- Obtención de cultivo monospórico de Microsporum canis.. BI. BL. IO. El cultivo de M. canis fue obtenido por donación del laboratorio del. Instituto de Medicina Tropical de la Facultad de Medicina, Universidad Nacional de Trujillo. A fin obtener resultados confiables, respecto a la reproducibilidad, fue necesario realizar un cultivo un monospórico de M. canis para garantizar la autenticidad y pureza del hongo en estudio y los datos obtenidos en la investigación. El aislamiento monospórico. 25. fue a. partir de una colonia micelial y se procedió de la siguiente manera: 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se resembró M. canis en un tubo inclinado con medio de agar Sabouraud. , se incubó a temperatura ambiente (22 ± 2°C) durante. 26. 20 días. En una solución acuosa estéril de Tween 80 al 0.1% se preparó una suspensión de esporas, a partir del crecimiento micelial. AS. esporulado del hongo, se agitó suavemente y vertió a tubo tapa rosca. IC. estéril la suspensión de esporas. Se sembró 200 µL de dicha. G. suspensión de esporas medio agar Sabouraud y distribuyó. LO. homogéneamente con una espátula de Drigalski, se incubó a 25 ± 2°C. O. por 20 días.. BI. De una pequeña colonia de micelio en crecimiento, se transfirió un. AS. fragmento del mismo micelio a otra placa con agar Sabouraud (una. CI EN. condiciones anteriores.. CI. colonia - una conidia) y se incubó nuevamente en las mismas. d.- Siembra, incubación y lectura del crecimiento de M. canis. A partir de los cultivos monospóricos de M. canis, se sembró por. DE. puntura central 27, un fragmento de micelio de dicho cultivo en placas. CA. de agar Sabouraud conteniendo cada una de las concentraciones del aceite esencial de romero preparadas previamente. Se incubó a. TE. temperatura ambiente (24 ± 2°C aprox.) por 15 días. Se observó el. BI. BL. IO. crecimiento micelial diariamente a partir del cuarto día de incubación, se midieron los diámetros (mm) del crecimiento micelial del hongo en estudio. 28. y se determinó el porcentaje crecimiento e inhibición de. crecimiento en cada tratamiento. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 5.-. Diseño experimental. Bioensayos: Los bioensayos o tratamiento se realizaron por estímulo creciente. Cada placa contuvo las concentraciones (V/V) del aceite esencial. Concentración (µL/mL). [1]. Testigo. 0. [2]. Tratamiento. 2. [3]. Tratamiento. 5. [4]. Tratamiento. [5]. Tratamiento. BI. O. LO. 100 %. AS. CI EN. CI. 10. 50. Crecimiento micelial (mm). IC. Testigo / Tratamiento. G. Nº. AS. de romero en relación al medio de cultivo:. A% B% C% D%. Donde: 100 ≥ A ≥ B ≥ C ≥ D. DE. Para garantizar la confiabilidad y reproducibilidad de los resultados se. BI. BL. IO. TE. CA. realizaron 3 ensayos y cada uno de los ensayos fue por triplicado.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS Se encontró que el aceite esencial de las hojas de Rosmarinus officinalis en. AS. concentraciones mayores e iguales a 5uL/mL no permiten el crecimiento micelial. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. de Microsporum canis in vitro (Fig. 1). BI. BL. Figura 1. Efecto de diferentes concentraciones del aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis sobre el crecimiento de Microsporun canis, in vitro, expresado en %. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Figura 2.. Observación del crecimiento micelial de Microsporum canis en los diferentes tratamientos con el aceite esencial de Rosmarinus officinalis “romero” y en el control. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN En el presente estudio, el aceite esencial de romero inhibió el crecimiento de M. AS. canis en un 36,6% a una concentración V/V de 2 µL/mL y una inhibición completa. IC. del 100% a partir de la concentración de 5 µL/mL. Esta actividad se le atribuye a. G. la naturaleza hidrófoba de los aceites esenciales que generan pérdida de la. LO. integridad de la membrana y de la filtración del material celular. La actividad. O. antifúngica del aceite esencial de romero ya ha sido demostrada en varios. BI. trabajos, donde encontraron29 un MIC de 90 µg/mL para Candida albicans, 120. AS. µg/mL para Rhodotorula glutinis, 60 µg/mL para Schizosaccharomyces pombe, 180 µg/mL para Saccharomyces cerevisiae y 120 µg/mL para Yarrowia lipolytica;. CI. en dicho estudio el componente principal del aceite esencial de romero fue. CI EN. verbenona, la concentración de microorganismos fue de 105 conidios/mL y la técnica utilizada fue diferente de la utilizada en el presente estudio. En otro. DE. trabajo30 describieron que el aceite esencial de romero presentaba un MIC de 1000 µg/mL y un MFC de 4000 µg/mL para Aspergillus niger; también se ha reportado. CA. que el aceite esencial de romero inhibió el crecimiento micelial de Fusarium. verticillioides, así concentraciones ≥150 µg/mL un 17% y 600 µg/mL un 67% en. IO. TE. comparación al control positivo de nistatina que lo hace en un 79%. Los resultados obtenidos no fueron comparados con ningún agente antifúngico. BL. comercial, por lo tanto, no se podría comparar el efecto del aceite esencial de. BI. romero con los encontrados en la literatura, ya que las condiciones de trabajo fueron diferentes. Se ha encontrado que algunos agentes antifúngicos inhiben el crecimiento celular al interrumpir la biosíntesis de ergosterol, que resulta de la unión de antifúngicos al ergosterol en la membrana celular. Esto significa que en este proceso se afecta 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. la integridad y la función de algunas de las proteínas unidas a la membrana y por lo tanto, conduce a trastornos osmóticos, interrupción del crecimiento celular. y proliferación 31. Los aceites esenciales de romero probablemente son capaces de activar un mecanismo semejante a los antifúngicos comerciales como la nistatina,. AS. ya que se ha encontrado que 1000 µg/mL produce menor inhibición de ergosterol. IC. que una concentración de 600 µg/mL de aceite esencial de Rosmarinus officinalis. LO. G. L. “romero” cuando los cultivos fueron Incubados durante 14 días a 25ºC 32. Por otro lado, los resultados encontrados del efecto del aceite esencial de romero. O. sobre el crecimiento de M. canis es muy superior (2 µL/L) a los reportados por otro. BI. autor trabajando con el mismo hongo, pero aislado de muestras veterinarias, quien. AS. demostró ser sensible in vitro a las concentraciones de 50 000 y 100 000 ppm , cabe resaltar que. 33. CI. (µL/L) de aceite de romero o que es igual a 50 y 100 µL/mL. CI EN. la metodología de trabajo de dichos autores es distinta a la utilizada en la presente tesis.. El incremento en el costo de los antimicóticos comerciales, la disminución del. DE. poder adquisitivo de la población en general, hacen de este trabajo una posibilidad. CA. de poder utilizar este aceite esencial de romero; ya sea como loción o como ungüento de naturaleza tópica, en el tratamiento de esta micosis, la cual es un. TE. problema de naturaleza estética, que en las estaciones calurosas y húmedas. IO. (como lo es el verano) se convierte en una micosis de importancia a tomar en. BL. cuenta.. BI. Finalmente, según los resultados encontrados, in vitro, el aceite esencial de hojas de Rosmarinus officinalis puede ser utilizado como producto alternativo en el tratamiento de dermatomicosis, por lo que habría que realizar investigaciones in vivo con el mismo aceite esencial y a concentraciones más bajas. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. CONCLUSIONES. IC. Concentraciones iguales y mayores de 5 µL/mL del aceite esencial de. G. Rosmarinus officinalis tienen efecto inhibitorio del crecimiento de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. Microsporum canis in vitro.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.. Domingo D, López-Brea M. Plantas con acción antimicrobiana. Rev Esp. IC. Abad M, Ansuategui M, Bermejo P. Active antifungal substances from natural. G. 2.. AS. Quimioterapia. 2003; 16: 385-393.. Guerra L. Evaluación de la actividad antimicrobiana y antioxidante de aceites. O. 3.. LO. sources. ARKIVOC; 2007. 7: 116-145.. BI. esenciales de plantas usadas en medicina tradicional. Tesis de Maestría.. Ruiz J, Roque M. Actividad antimicrobiana de cuatro plantas de nororiente. CI. 4.. AS. México: Universidad Autónoma de Nuevo León. 2011. 118 p.. 5.. CI EN. peruano. Ciencia e Investigación. 2009. 12: 41-47. Lizcano A, Vergara J.. Evaluación de la actividad antimicrobiana de los. extractos etanólicos y aceites esenciales de las especies vegetales Valeriana. DE. pilosa, Hesperomeles ferruginea, Myrcianthes rhopaloides y Passiflora. CA. manicata frente a microorganismos patógenos. Tesis de Grado. Bogotá,. 6.. TE. Colombia: Pontificia Universidad Javeriana. 2009. 131 p. Rodríguez D, Kozusny-Andreani D. Utilização de extratos de plantas. IO. medicinais e óleo de Eucaliptus no controle in vitro de Microsporum canis. Rev. BI. BL. Cub Plantas Med. 2010. 15: 119-125.. 7.. Purca T. Efectividad antibacteriana «in vitro» del extracto etanólico de Rosmarinus officinalis (romero) sobre la flora salival. Tesis de Cirujano Dentista. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos. 2013. 97 p.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 8.. Ruiz M, Nieto D, Larios R. Tratado elemental de botánica. 13ª ed. México: Ed ECLAL. 1975. 655 p.. 9.. López M. El romero, planta aromática con efectos antioxidantes. OFFARM.. AS. 2008. 27: 60-63.. IC. 10. Díaz P, Cabrera M, Alem D, Larrañaga P, Ferreira F. Dalla M. Antifungal. G. activity of medicinal plant extracts against phytopathogenic fungus Alternaria. LO. spp. Chilean J Agric Res. 2011. 71: 231-239.. O. 11. Estrada S. Determinación de la actividad antibacteriana in vitro de los. BI. extractos de romero (Rosmarinus officinalis) y tomillo (Tymus vulgaris). Tesis. AS. de Bioquímico Farmacéutico. Riobamba, Ecuador: Escuela Superior. CI. Politécnica de Chimborazo. 2010. 87 p.. CI EN. 12. Teixeira L. Avaliação do uso do extrato de alecrim de jardim (Rosmarinus officinalis Linn) no controle do biofilme dental. Tesis de Cirujano Dentista.. DE. Curitiba: Universidad Federal de Paraná. 2012. 28 p. 13. Scott D, Miller W, Griffin C. Dermatología en pequeños animales. 2º ed.. CA. Argentina: Inter-Médica. 2002. 1349 p.. TE. 14. Guaguere E. Terapia dermatológica del perro. 3º ed. España: Elsevier. 2007.. IO. 272 p.. BL. 15. Birchard S, Sherding R. Manual clínico de procedimientos en pequeñas. BI. especies. 2º ed. México: McGrawHill. 2002. 1941 p.. 16. Escobedo J. Dermatofitosis, diagnóstico y tratamiento. [Internet]. Disponible en:http://dermatologiaveterinariaPuebla.blogspot.com/2011/04/dermatofitosis .html. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 17. Maddison J, Page S, Church D. Farmacología clínica en pequeños animales. Argentina: Inter-Médica. 200.4. 300 p. 18. Plumb D. Manual de farmacología veterinaria. 6º ed. Argentina: Inter-Médica.. AS. 2010. 1256 p.. IC. 19. Cervantes RA. Ringworm infection in dogs and cats. In: Carmichael L (ed).. G. Recent advances in canine infectious diseases. 2003. Ithaca: IVIS. [Internet].. LO. Disponible en: http://www.ivis.org/advances/infect_dis_carmichael/cervantes/. O. ivis.pdf. BI. 20. Yelasco, A. Medicinal Plants from Pampallakta: an Andean Community in. AS. Cuzco (Perú). Fitoterapia. 1995. 66 (5): 447-462.. CI. 21. García, R. Especies y subspecies de Erwinia en Actividad Biocontroladora de. CI EN. hongos de suelo sobre microorganismos fitopatógenos. Tesis para optar al grado de Biólogo. Universidad del Azuay, Cuenca, Ecuador. 2000.. DE. 22. Kalemba, D. & Kunicka, A. Antibacterial and antifungical properties of essential oils. Current Medicinal Chemistry. 2003. 10:813-829.. CA. 23. Davicino R, Mattar M, Casali Y, Correa S, Pettenati E, Blas M. Actividad. TE. antifungica de extractos de plantas usadas en medicina popular en Argentina.. IO. Rev. Peru. Biol. 2007. 14(2): 247-251.. BL. 24. Sharapin N, Machado L, Pinzón R. Fundamentos de Tecnología de procesos. BI. fitoterapéuticos. Edit. CAB-CYTED. Bogotá D.C. (Colombia). 2000.. 25. Cañedo V, Ames T. Manual de Laboratorio para el Manejo de Hongos Entomopatógenos, Centro Internacional de la Papa (CIP). Lima, Perú, 2004. 62p. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 26. JANKE, D. Pilznährboden nach SABOURAUD, modifiziert MERCK, ein neuer Trockennährboden zur Züchtung von Dermatophyten. - Zschr. Haut- u. Geschl.-Krankh. 1961. 15; 188-193.. AS. 27. Winn WC, Allen SD, Janda WM, Koneman EW, Procop GW, Schreckenberger PC y Woods GL. Koneman-Diagnóstico Microbiológico, Texto y Atlas en color.. G. IC. 6ª ed. Edit Médica Panamericana S.A. Buenos Aires, Argentina. 2008.. LO. 28. Pérez-Cárdenas J. A., Hoyos A. M., Cárdenas C. Sensibilidad antimicótica. O. de diferentes especies de hongos aislados de pacientes con micosis ungueal. BI. en la ciudad de Manizales (Caldas, Colombia). Biosalud, 2013. 11 (2): 26-39.. AS. 29. Sacchetti, G., Maietti, S., Muzzoli, M., Scaglianti, M., Manfredini, S., Radice,. CI. M., et al. (2005). Comparative evaluation of 11 essential oils of different origin. CI EN. as functional antioxidants, antiradicals and antimicrobials in foods. Food Chemistry, 91, 621–632.. 30. Jiang, Y., Wu, N., Fu, Y. J., Wang, W., Luo, M., Zhao, C. J., et al. (2011).. DE. Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of. CA. Rosemary. Environmental Toxicology and Pharmacology, 32, 63–68.. TE. 31. Bendaha, H., Yu, L., Touzani, R., Souane, R., Giaever, G., Nislow, C., et al. (2011). New azole antifungal agents with novel modes of action: synthesis and. IO. biological studies of new tridentate ligands based on pyrazole and triazole.. BL. European Journal of Medicinal Chemistry, 46, 4117–4124.. BI. 32. Da Silva N., Polis L., Faggion J., Oliveira P., Yumie C., Galerani S.A., Grespan R., Botião S., et al. Antifungal activity and inhibition of fumonisin production by Rosmarinus officinalis L. essential oil in Fusarium verticillioides (Sacc.) Nirenberg. Food Chemistry. 2015. 166: 330–336.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 33. Dentone, S.; Morales S. Determinación in vitro de la Actividad Antimicótica del Aceite de Romero (Rosmarinus officinalis) sobre Microsporum canis. Revista de Investigaciones Veterinarias del Perú, RIVEP, Lima Perú. 2017. 28, (1):. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. 56-61pp.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. ANEXOS. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Datos obtenidos del efecto de las diferentes concentraciones del. AS. Anexo 1.-. IC. aceite esencial de Rosmarinus officinalis sobre el crecimiento de. LO. G. Microsporun canis, con sus repeticiones y expresado en milímetros.. 2. R2. R3. R1. 33. 32. 33. 19. 33. 32. 33. 31. 31. 32. IO. R. 33. TE. BL. 32. BI. Promedio. %. 33. R2. 19. R3. R1. R2. R3. R1. R2. R3. R1. R2. R3. -. -. -. -. -. -. -. -. -. 22. 21. -. -. -. -. -. -. -. -. -. 20. 22. 22. -. -. -. -. -. -. -. -. -. 19. 21. 21. -. -. -. -. -. -. -. -. -. DE. 14. 50. 20. 20. CA. 1. 10. CI. n. 5. AS. incubació. BI. 0 uL/mL. CI EN. Días de. Aceite esencial de Rosmarinus offcinalis (µL/mL). O. CONTROL. 32.33. 20.50. 0. 0. 0. 100. 36.59. 0. 0. 0. crecimiento. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Composición del aceite de romero.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. Anexo 2.-. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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