Determinación cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta Resolución, en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo Perú, 2017

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. BIOQUÍMICA. TESIS II. M. AC. IA. Y. “Determinación cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta Resolución, en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú, 2017”. CA. DE. FA R. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BL. Ms. CURO VALLEJOS, Yuri Freddy. BI. ASESOR:. QUIROZ RODRIGUEZ, Diego Armando. IO TE. AUTOR:. TRUJILLO – PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios, por moldear mi carácter cada día, y darme una nueva vida en Cristo Jesús. Teniendo una esperanza de vida eterna.. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. A mis padres Rosa y Manuel por el apoyo incondicional, ejemplo de valor, amor, esfuerzo y perseverancia; y por haberme dado la oportunidad de ser profesional y concluir este camino.. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. A mis hermanas Rosa y Anahís, por el cariño, respeto y comprensión que siempre me muestran, además del apoyo incondicional que me dan ante cada reto que emprendo.. A Ada mi compañera de vida, por su confianza, comprensión y amor que me demuestra día a día; por llenarme de luz y gozo. Y ser el motor que impulsa mis días.. Los quiero mucho Diego. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS En primer lugar, agradecer a Dios por darme vida para poder concluir este trabajo, por darme fortaleza física y mental que han sido indispensables en nuestro camino. De igual manera agradecer al Ms. Yuri Freddy Curo Vallejos, asesor de este trabajo de investigación, por su esfuerzo, paciencia, apoyo y conocimientos brindados para la. El autor. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. realización del presente, Dios lo bendiga siempre.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO En cumplimiento con las normas dispuestas en el reglamento de grados de la Escuela de Pre Grado de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de. IC. A. Trujillo. Someto a su justa consideración, el Informe de Proyecto de Investigación Tipo. UI. M. II.. O Q. “Determinación cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta. Y. BI. Resolución, en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú,. DE. FA R. M. AC. IA. 2017”. BI. BL. IO TE. CA. Trujillo, Octubre 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. Dra. GONZALES POSITO, Gladys (Presidenta). IC. A. Dr. SAAVEDRA SUAREZ, Segundo Francisco (Jurado). BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. Ms. CURO VALLEJOS, Yuri (Jurado). i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente trabajo de investigación se realizó en la ciudad de Trujillo-Perú, 2017, con el objetivo de determinar la concentración de aspartame presente en las bebidas carbonatadas de cinco marcas (Coca Cola Zero, Inca Kola Zero, Sprite Zero, Fanta Zero. A. y Guaraná Light) y compararlas con las especificaciones del Codex Alimentarius,. M. IC. haciendo uso de un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un. O Q. UI. detector UV-Visible con una columna de Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud. BI. y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó 15% de acetonitrilo + 85% de. Y. buffer fosfato de sodio 0,02M a pH 5,0 de 0-3 minutos, y 30% de acetonitrilo + 70% de. AC. IA. buffer fosfato de sodio 0,02M a pH 5,0 de 3-14 minutos; midiéndose a una longitud de. M. onda de 227nm, con una velocidad de flujo de 1,0mL/min., se inyectó una muestra de. FA R. 10μL, a una temperatura de 30°C. Las concentraciones de aspartame obtenidas fueron:. DE. 19,14mg/Kg en Guaraná Light, 131.04mg/Kg en Inca Kola Zero, 90.92mg/Kg en Coca. CA. Cola Zero, 153.38mg/Kg en Sprite Zero y 30.79mg/Kg en Fanta Zero. Las 5 bebidas. IO TE. carbonatadas no superan las especificaciones límites indicados en el Codex alimentarius. BL. para aspartame, de 600mg/kg. Sprite Zero tiene la más alta concentración de aspartame,. BI. y Guaraná Light la menor concentración. Palabras Claves: Bebida carbonatada, Aspartame, HPLC.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The present study was carried out in the city of Trujillo-Peru, 2017, with the objective of determining the concentration of aspartame present in the carbonated beverages of five brands (Coca Cola Zero, Inca Kola Zero, Sprite Zero, Fanta Zero and Guaraná Light) and comparing them to Codex Alimentarius specifications using an Agilent 1100. IC. A. chromatograph with diode array, a UV-Vis detector with a Octadecylsilane (C18) column. UI. M. 150 mm long and 4.6 mm in diameter, as a mobile phase, 15% acetonitrile + 85% of. O Q. buffer 0.02M sodium phosphate at pH 5.0 was used for 0-3 minutes, and 30% acetonitrile. BI. + 70% of buffer 0.02M sodium phosphate at pH 5.0 of 3-10 minutes; measured at a. IA. Y. wavelength of 227nm, at a flow rate of 1.0mL/min, a sample of 10μL was injected at a. M. AC. temperature of 30 °C. The concentrations of aspartame obtained are: 19.14 mg/kg in. FA R. Guaraná Light, 131.04 mg/kg in Inca Kola Zero, 90.92 mg/kg in Coca Cola Zero, 153.38. DE. mg/kg in Sprite Zero and 30.79 mg/kg in Fanta Zero. The 5 carbonated beverages do not. CA. exceed the limit specifications indicated in the Codex alimentarius for aspartame, of. IO TE. 600mg/kg. Sprite Zero has the highest concentration of aspartame, and Guaraná Light the. BL. lowest concentration.. BI. Key Words: Carbonated beverages, Aspartame, HPLC.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE RESUMEN ................................................................................................................... i ABSTRACT ................................................................................................................. ii I.. INTRODUCCIÓN ................................................................................................ 1. II.. MATERIAL Y MÉTODO .................................................................................... 8. IC. A. a) MATERIAL ......................................................................................................... 8. UI. M. 1) Material de estudio: ......................................................................................... 8. O Q. 2) Material y Equipo de laboratorio: .................................................................... 8. BI. b) MÉTODO............................................................................................................. 9. Y. 1. Población y muestra ........................................................................................ 9. RESULTADOS .................................................................................................. 17. M. III.. AC. IA. 2. Procedimiento23............................................................................................. 10. CONCLUSIONES .............................................................................................. 22. DE. V.. FA R. IV. DISCUSIÓN ...................................................................................................... 15. CA. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ......................................................................... 18. BI. BL. IO TE. ANEXOS .................................................................................................................... 29. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Actualmente vemos un crecimiento del consumo de bebidas carbonatadas no alcohólicas; solamente la región de las Américas cuenta con el 39% del consumo mundial de este tipo de bebidas, siendo E.E.U.U. el líder indiscutible en volumen seguido en la región por México y Argentina. A pesar de la seminegativa imagen de los refrescos de cara al consumidor, los datos de crecimiento continúan mostrando la. UI. M. IC. A. confianza del consumidor en el producto. 1. O Q. Según el INEI (2012), se tiene a la bebida gaseosa como uno de las principales. Y. BI. bebidas no alcohólicas que consume el peruano con 27 litros 300 mililitros al año o. IA. 2 litros 300 mililitros de consumo promedio per cápita al mes; esto fue tomado de. FA R. M. AC. una encuesta entre los años 2008-2009. No se cuenta con datos actualizados. 2. DE. La bebida carbonatada es un producto obtenido por disolución de edulcorantes. CA. nutritivos y gas carbónico en agua potable tratada, pudiendo estar adicionada de. IO TE. saborizantes naturales y/o artificiales, jugos de frutas, acidulantes, conservadores, emulsionantes, y estabilizantes, antioxidantes, colorantes, amortiguadores, agentes. BI. BL. de enturbiamiento, antiespumantes, y espumantes. 3. El problema está en ciertos componentes utilizados en la elaboración de estos productos, como es el caso del azúcar: la cantidad no es la adecuada para el consumo por parte de los niños; los colorantes: que poseen cierto grado alergénico; los edulcorantes artificiales: que también poseen cierto grado alergénico y están en la mira de los especialistas, por lo cual deben ser utilizados en cantidades controladas; y por último, los aditivos: aunque en su mayoría son permitidos en la elaboración de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. alimentos y bebidas, existe una gran preocupación sobre sus efectos en la salud de las personas, principalmente cuando se utilizan en conjunto, pues pueden potenciar o tornarse inseguros. 4. La preocupación de los consumidores respecto a la calidad e inocuidad de los alimentos que diariamente consumen se ha incrementado. Los aditivos alimenticios. IC. A. son usados en gran cantidad de alimentos y han creado gran controversia por los. UI. M. posibles efectos carcinogénicos que algunos pueden causar. Entre ellos los. O Q. edulcorantes han creado mayor controversia, es por eso, que el uso está limitado por. Y. BI. el Codex Alimentarius y el consumo diario aceptable determinado por el Comité de 5. M. AC. IA. Expertos en Aditivos Alimenticios (JECFA, por sus siglas en inglés).. FA R. La adición de edulcorantes artificiales, no nutritivos, a las bebidas carbonatadas como. DE. sustituto de la sacarosa es muy común, debido a que tienen menor poder calórico, y 6. CA. mayor dulzura (entre 30 y 3 000 veces); entre ellos destaca el aspartame.. IO TE. El aspartame (N-L-α-aspartil-L-fenilalanina-1-metil éster, nombre químico, Anexo. BL. 1), conocido comercialmente por el nombre de NutraSweet®, que fue descubierto en. BI. 1965, es usado para reemplazar edulcorantes naturales. Es poderosamente dulce, se usa para endulzar grandes cantidades de alimentos y bebidas, debido a que es más dulce que la sacarosa y su dulzura depende del tipo de alimento donde se usa, variando en el rango de 170 a 230 veces mayor a la sacarosa. Es encontrada en más de 6 000 productos incluyendo: bebidas carbonatadas, bebidas no alcohólicas en polvo, chocolates, gomas de mascar, caramelos, postres, yogurt, edulcorantes de mesa y algunos productos farmacéuticos, como vitaminas y grajeas sin azúcar para la tos. 5, 6, 7 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La molécula de aspartame está compuesta por dos aminoácidos naturales: fenilalanina y acido aspártico, los cuales le dan al aspartame características hidrofóbicas e hidrofilias. Además, es susceptible a la degradación bajo un amplio rango de condiciones (calor, humedad y pH). Aunque generalmente se usa como un edulcorante intenso, el aspartame en realidad proporciona calorías, como lo hace el. IC. A. azúcar de mesa (sacarosa) y otros componentes de los alimentos. Sin embargo, dado. UI. M. que el aspartame es aproximadamente 200 veces más potente que el azúcar de mesa. O Q. común, se necesita solo 1/200 de una cucharadita para reemplazar cada cucharadita. IA. Y. BI. de azúcar en un alimento o bebida. 5, 6. M. AC. El cuerpo metaboliza el aspartame de forma completa, como si fuera una proteína u. FA R. otro componente de los alimentos. Las enzimas en el tracto digestivo descomponen. DE. el aspartame en sus componentes fundamentales: el ácido aspártico (40%), la. CA. fenilalanina (50%) y el metanol (10%). Luego, el cuerpo absorbe y utiliza estos. IO TE. componentes de la misma manera en que se encuentran cuando se les obtiene de otras. BI. BL. fuentes alimenticias. 6. El ácido aspártico, un metabolito de aspartame, es un aminoácido excitatorio que normalmente se encuentra en niveles altos en el cerebro. Estos niveles están controlados por la barrera hematoencefálica que protege al cerebro de grandes fluctuaciones en el aspartato plasmático. La fenilalanina es un aminoácido esencial para la producción de monoamina en el cerebro y se encuentra en casi todos los alimentos que contienen proteínas. Debido a los altos niveles de fenilalanina en la. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sangre, el consumo de aspartame puede causar daño cerebral. Ciertos aminoácidos se incrementan en el cerebro después del consumo de aspartamo.. 8−13. Entre los metabolitos, el metanol, que se libera durante la digestión del aspartamo, es un tóxico que causa toxicidad sistémica. Se han probado dosis grandes de aspartamo y sus metabolitos individuales en humanos y otros animales. Se ha. IC. A. informado de que no sólo los metabolitos del metanol sino también el metanol en sí. UI. M. son tóxicos para el cerebro. El destino metabólico primario del metanol es la. O Q. oxidación directa a formaldehído y después al formiato. Los efectos tóxicos del. BI. metanol en los seres humanos se deben a la acumulación de su metabolito formiato. M. AC. IA. Y. y se correlaciona con los niveles de formiato. 14−18. FA R. Según Ashok (2015), la alteración observada en los animales alimentados con. DE. aspartamo puede deberse a su metabolito metanol y formiato elevado. Los radicales. CA. libres elevados debido al metanol pueden inducir estrés oxidativo. Su estudio. IO TE. confirma la presencia de metabolitos tóxicos después de la administración de. BI. BL. aspartamo. 19. Según Kuk (2016), el consumo de aspartamo se asocia con mayores deficiencias relacionadas con la obesidad en la tolerancia a la glucosa. Hallándose una influencia significativa con el Índice de Masa Corporal (IMC) y la tolerancia a la glucosa (interacción: p = 0,004). 20. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Según Choudhary (2016), la administración de aspartame (40 mg/kg peso corporal/día) durante 90 días o sus metabolitos pueden aumentar el estrés oxidativo en órganos inmunes de ratas albinas Wistar. 21. Según la Norma General del Codex Alimentarius CODEX STAN 192‐1995, la cantidad de aditivo que se añada a un alimento debe ser igual o inferior a la Dosis. IC. A. Máxima de Uso establecida para dicho aditivo en determinado alimento,. UI. M. constituyendo así la dosis mínima necesaria para lograr el efecto técnico previsto.. O Q. Para las bebidas a base de agua aromatizada (o saborizada) con gas, clasificación en. Y. BI. la cual se encuentran las bebidas carbonatadas de dieta, la Dosis Máxima de Uso para. IA. el aspartame es de 600mg/kg de alimento (Anexo 2); cantidad que será utilizada. M. AC. como referencia para la comparación de la concentración de aspartame presente en 22. DE. FA R. la muestra de bebidas carbonatadas de dieta a estudiar.. CA. En la actualidad, el mercado nos ofrece una gran variedad de bebidas refrescantes, la. IO TE. mayoría carbonatadas; la aparición de nuevas marcas va en aumento. El hecho. BL. alarmante es el gran auge que tienen en los niños, y jóvenes, que se convierten en. BI. auténticos adictos por su dulce sabor, por la capacidad adictiva de alguno de sus componentes y por los continuos impactos publicitarios que reciben de este mercado. Son auténticas bombas para la salud. Como Químicos Farmacéuticos, pertenecientes al equipo de salud, una de nuestras funciones es la de servir a la comunidad, contribuyendo de esta manera al mantenimiento, prevención y recuperación de los pobladores. Por tales motivos, se estimó conveniente realizar el presente trabajo de investigación “Determinación 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. cuantitativa de aspartame por Cromatografía Líquida de Alta Resolución, en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú, 2017”, en base a los resultados de las muestras, puede conocerse si se está cumpliendo con los niveles máximos permisibles. Con estos resultados se proporciona información útil a las autoridades sanitarias, para tomar decisiones y acciones que aseguren un mejor control y seguimiento de la fabricación de bebidas carbonatadas para su consiguiente. M. O Q. UI. causen efectos colaterales por el hecho de consumirlos.. IC. A. autorización, y con ello proporcionar a la población productos de calidad que no. BI. Ante lo cual se planteó el siguiente problema:. IA. Y. ¿Cuál es la concentración de aspartame en bebidas carbonatadas, determinado por. AC. Cromatografía Líquida de Alta Resolución, que consume la población de Trujillo-. FA R. M. Perú, 2017?. DE. Y la siguiente hipótesis:. IO TE. CA. Los niveles de aspartame en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú; superan los límites máximos permisibles establecidos por el JECFA. BL. (Comité de Expertos en Aditivos Alimenticios, siglas en inglés), 600 mg/kg para. BI. Aspartame.. De acuerdo a lo expuesto, el trabajo se orientó a cumplir los siguientes objetivos: Objetivo General  Determinar la concentración de aspartame, por Cromatografía Líquida de Alta Resolución en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú. Objetivos Específicos 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Verificar si la concentración de aspartame presente en las bebidas carbonatadas de cinco marcas que consume la población de Trujillo, cumple con lo especificado en Codex alimentarius.  Comparar entre sí, la concentración de aspartame presente en cada una de las. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. cinco marcas de bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. a) MATERIAL 1) Material de estudio:. Guaraná Light. -. Inca Kola Zero. -. Coca Cola Zero. -. Sprite Zero. -. Fanta Zero. Y. BI. 2) Material y Equipo de laboratorio:. O Q. UI. M. IC. -. A.  Cinco marcas de bebidas carbonatadas: 5 de cada una. IA.  Material de Vidrio:. Embudo de decantación de 250 mL.. -. Fiolas de 10, 25, 50, 100, 500 y 1 000 mL.. -. Pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 mL.. -. Probetas de 25 y 100 mL.. CA. DE. FA R. M. AC. -. IO TE. -. Vasos de precipitación de 50, 100 y 250 mL. Viales de 1,5 mL.. BI. BL.  Equipos: -. Cromatógrafo Agilent 1 100 series.. -. Balanza Analítica Sertorius.. -. Micropipeta 20-200 𝛍L.. -. Micropipeta 500 𝛍L.. -. Potenciómetro (pH-metro)..  Reactivos: -. Acetonitrilo grado HPLC. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -. Disodio hidrogeno fosfato. -. Ácido fosfórico. -. Agua destilada. -. Agua ultra pura. -. Aspartame.  Otros Computadora Pentium IV. -. Filtros jeringa de 0,2 μm de poro, y 25 mm de diámetro. -. Impresora. -. Jeringas descartables de 3 mL. -. Membrana de celulosa regenerada de 47 mm de diámetro y 0,2. IC. M. UI O Q. BI. Y. IA AC. M. μm de poro. CA. b) MÉTODO. FA R. Memoria USB de 8 Gb. DE. -. A. -. IO TE. 1. Población y muestra. BL. Universo Muestral 16. BI. Bebidas carbonatadas en presentación de 500 mL y envase desechable que se expenden en la ciudad de Trujillo.. Muestra 18 Cinco unidades de cada una de las cinco marcas de bebidas carbonatadas, en presentación de 500mL y envase desechable; que se expenden en la ciudad de Trujillo.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. Procedimiento23 a). Toma de muestra Se tomó 5 muestras de bebida carbonatada de cada marca (Coca cola Zero, Inca Kola Zero, Sprite Zero, Fanta Zero, Guaraná Light) obtenidas al azar de diferentes supermercados (Plaza Vea, Metro,. M. Preparación de los estándares. UI. b). IC. A. Tottus y Wong) del distrito de Trujillo, en el mes de mayo.. O Q. Se preparó una solución madre de aspartame de 800ppm, de las. M. AC. Realizando cálculos:. IA. Y. BI. cuales se extrajo 16; 32; 64; 96; 128 y 160 ppm de aspartame.. FA R.  Fiola 1º(10ml): se colocó 200µl de la solución madre y agua. DE. ultra pura hasta aforarla.. CA.  Fiola 2º(10ml): se colocó 400µl de la solución madre y agua. IO TE. ultra pura hasta aforarla.. BI. BL.  Fiola 3º(10ml): se colocó 800µl de la solución madre y agua ultra pura hasta aforarla..  Fiola 4º(10ml): se colocó 1200µ de la solución madre y agua ultra pura hasta aforarla.  Fiola 5º(10ml): se colocó 1600µl de la solución madre y agua ultra pura hasta aforarla.  Fiola 6º(10ml): se colocó 2000µmlde la solución madre y agua ultra pura hasta aforarla.. c). Preparación de la muestra 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se desgasificó cada bebida carbonatada, por separado se tomaron 5 mL de cada una de ellas y se les adicionó 5 mL de agua ultrapura, cada solución fue homogenizada; de cada una de éstas soluciones se tomó 2 mL y se filtró haciendo uso de un filtro jeringa de celulosa regenerada de 25 mm de diámetro y 0,2 µm de poro; colocándose en. M. Determinación de la linealidad. UI. d). IC. A. viales de 1,5 mL.. O Q. Para determinar la linealidad del método, se evaluaron 6 soluciones. Y. BI. estándares comprendidas 16 y 160 µg/mL para aspartame; se empleó. IA. un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se utilizó un. M. AC. detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150. Preparación de la fase móvil. CA. e). DE. FA R. mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior.. IO TE. Como fase móvil se empleó 15% de acetonitrilo + 85% de buffer. BI. BL. fosfato de sodio 0,02 M a pH 5,0 de 0-3 minutos y 30% de. f). acetonitrilo + 70% de buffer fosfato de sodio 0,02 M a pH 5,0 de 314 minutos.. Acondicionamiento del equipo de Cromatografía Líquida de Alta Resolución Se puso a trabajar el equipo de HPLC, según como lo indica el Procedimiento Estándar de Operación (PEO) para el Manejo del Cromatógrafo Líquido de Alta Resolución marca Agilent. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. g). Análisis de la muestra Se leyó a una longitud de onda de 227 nm, con una velocidad de flujo de 1,0 mL/min., una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C.. h). Determinación de la concentración de aspartame en la muestra El primer parámetro cromatográfico utilizado fue el tiempo de. IC. A. retención del aspartame; dicho parámetro indica si el edulcorante. UI. M. artificial presente, es o no aspartame, ya que se compara la posición. O Q. de los picos del cromatograma de la solución patrón con los. Y. BI. cromatogramas de cada una de las cinco marcas de bebidas. IA. carbonatadas. El segundo parámetro cromatográfico a utilizado, fue. M. AC. el área bajo el pico cromatográfico, el cual se extrapoló en la. FA R. ecuación de la curva de calibración; para obtener el valor de la. DE. concentración de aspartame presente en cada unidad de bebida. CA. carbonatada.. Extrapolación del área bajo la curva a mg/kg. BI. BL. IO TE. i). 𝑥=. (𝑚𝑈𝐴 ∗ 𝑠 − 𝐵) 𝐹 × 𝐴 𝜌. Donde: x: Concentración de aspartame en mg/kg. mUA*s: Área bajo la curva, obtenido por el HPLC. A: Pendiente de la ecuación lineal de la curva de calibración. B: Constante de la ecuación lineal de la curva de calibración F: Factor de dilución, siendo su valor: 2. ρ: Densidad de la bebida carbonatada. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. TABLA 1: Linealidad de las concentraciones en 𝛍g/mL de aspartame.. CONCENTRACIÓN 𝛍g/mL. ÁREA PICO (mUA*s). 1. 16. 19.78594. 2. 32. 37.62578. 3. 64. 73.92799. 4. 96. 5. 128. 6. 160. A. NIVEL. O Q. UI. M. IC. 113.45627. 184.06577. AC. IA. Y. BI. mUA*s: Medida del área bajo la curva. 145.91922. M. CURVA DE CALIBRACIÓN. FA R. 200. y = 1.1402x + 1.5401 R² = 0.9996. DE. 160. CA. 140 120. IO TE. 100. 80 40. BL. 60. BI. ÁREA DE PICO (mUA*s). 180. 20. 0 0. 50 100 150 CONCENTRACIÓN DE ASPARTAME (ug/mL). 200. GRÁFICO 1: Curva de calibración de aspartame.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 2: Concentración de aspartame en bebidas carbonatadas que consume la población de Trujillo-Perú, 2017.. SPRITE ZERO. FANTA ZERO. DESVIACIÓN ESTANDAR. 19.14. 1.18. 131.04. 2.75. 90.92. 8.78. 153.38. 5.45. 30.79. 2.49. DE. FA RM. AC. IA. Y. BI O. Q. UI. M. IC. A. PROMEDIO (mg/Kg). A. TE C. COCA COLA ZERO. IO. INCA KOLA ZERO. 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5. CANTIDAD ENCONTRADA (mg/kg) 17.78 18.31 19.05 20.73 19.86 135.49 130.25 128.67 131.69 129.08 89.99 104.22 79.98 88.03 92.39 148.17 156.33 146.87 158.71 156.84 27.43 31.96 33.62 31.88 29.07. BL. GUARANA LIGHT. MUESTRA. BI. BEBIDA CARBONATADA. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. En la tabla 1 y gráfico 1, se presentan los resultados de la linealidad para aspartame, empleando concentraciones de 16, 32, 64, 96, 128 y 160 μg/mL; obteniéndose: áreas de pico que van desde 19.78594 a 184.06577, una pendiente de 1.1402 y un coeficiente de correlación de 0.9996; lo cual nos indica la. A. sensibilidad del método aplicado por HPLC, así como de una buena linealidad. M. IC. entre la concentración de las diluciones del estándar y sus respectivas áreas de los. BI. O Q. UI. picos.. IA. Y. El comportamiento lineal de un método, debe ser demostrado dentro del intervalo. AC. en el cual es probable que se trabaje, en esta investigación el intervalo debe estar. FA R. M. entre 20 y 200% de la concentración de trabajo y el coeficiente de correlación de. DE. la regresión lineal debe encontrarse entre 0.98 y 1.00; el coeficiente de la. CA. correlación al cuadrado debe ser mayor de 0.995, cumpliendo dicho parámetro en. BL. IO TE. nuestra curva de calibración. 23. BI. En la tabla 2 se presenta la concentración de aspartame en cada bebida carbonatada que consume la población de Trujillo - Perú, donde se evidencia que las 5 bebidas contienen aspartame (desde 19.14 a 153,38), siendo Sprite Zero la que mayor cantidad presenta, y Guaraná Light la menor.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Es importante mencionar que las bebidas carbonatadas: Inca Kola Zero, Coca Cola Zero, Sprite Zero y Fanta Zero, muestran en sus etiquetas al aspartame como edulcorante; mientras que Guaraná Light indica a la sucralosa. (Anexo 3).. Según un trabajo realizado por Nuñez E. (2009), el límite de detección de. A. aspartame utilizando el método descrito en el presente trabajo es de 2.0μg/mL;. M. IC. mientras que el límite de cuantificación es de 6.67μg/mL. Estos datos afirman la. O Q. UI. posible presencia de aspartame en la bebida carbonatada de marca Guaraná Light,. AC. IA. Y. BI. no mencionada en la etiqueta. 23. M. Se pudo demostrar que los niveles de aspartame en las 5 bebidas carbonatadas. FA R. analizadas que consume la población de Trujillo-Perú, no superan los límites. DE. máximos permisibles establecidos por el JECFA (Comité de Expertos en Aditivos. CA. Alimenticios, siglas en inglés), de 600 mg/kg para Aspartame. Y para superarlo,. IO TE. en el caso de Sprite Zero (con mayor concentración), tendría que ingerirse un. BI. BL. aproximado de 4kg (aproximadamente 4 litros) de bebida carbonatada.. Se recomienda un cuidado especial con estas bebidas, por los motivos antes descritos, sobre todo las personas que las ingieren todos los días, y en cantidades alarmantes.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES.  La concentración de aspartame es: 19,14mg/Kg en Guaraná Light, 131.04mg/Kg en Inca Kola Zero, 90.92mg/Kg en Coca Cola Zero, 153.38mg/Kg en Sprite Zero y 30.79mg/Kg en Fanta Zero.. M. O Q. UI. indicados en el Codex alimentarius de 600mg/kg.. IC. A.  Las 5 bebidas gaseosas no superan las especificaciones límites para aspartame. Y. BI.  Sprite Zero tiene la más alta concentración de aspartame, y Guaraná Light la. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. menor concentración.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Industriaalimenticia.com [En línea]. E.E.U.U.: Rioja I.;2016 [actualizado 2 de sep 2016;. citado. 20. de. abr. 2017].. Disponible. en:. http://www.industriaalimenticia.com/articles/88482-informe-anual-de-bebidas. 2. INEI.gob [En línea]. Perú: INEI; 2012 [citado 20 de abr 2017]. Disponible en:. IC. A. https://www.inei.gob.pe/media/MenuRecursivo/publicaciones_digitales/Est/Lib1. UI. M. 028/cap01.pdf.. [En. línea]. [citado. 20. abr. BI. 2015.. 2017].. Disponible. en:. Y. Perú.. O Q. 3. Guevara A. Bebidas carbonatadas. Universidad Nacional Agraria La Molina.. AC M. bidas%20carbonatadas.pdf.. IA. http://www.lamolina.edu.pe/postgrado/pmdas/cursos/dpactl/lecturas/SeparataBe. FA R. 4. Zapata L. Bebidas de Fantasía (gaseosas del tipo cola). Organización de. DE. consumidores y usuarios de Chile. Chile. 2012. [En línea] [citado 20 abr 2017].. CA. Disponible en: http://www.odecu.cl/images/PDF/Informe%20Bebidas.pdf.. IO TE. 5. Morales J. Cuantificación de Aspartame y Acesulfame-k por Cromatografía. línea]. [citado. 20. abr. 2017].. Disponible. en:. BI. [En. BL. Líquida de Alta Resolución (HPLC). Universidad Zamorano. Honduras. 2007.. https://bdigital.zamorano.edu/bitstream/11036/662/1/AGI-2007-T030.pdf. 6. Galdámez J. Cuantificación de aspartame en bebidas carbonatadas de dieta de tres marcas que se expenden en supermercados de la ciudad de Guatemala. Universidad de San Carlos de Guatemala. Guatemala. 2011. [En línea] [citado 20 abr 2017]. Disponible en: http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/06/06_3173.pdf. 7. Garriga M, Metcalfe D. Aspartame intolerance. [J] Ann Allergy. 1988;61(Pt 2):63–69.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 8. Maher T, Wurtman R. Possible neurologic effects of aspartame, a widely used food additive. [J] Environ Health Persp. 1987; 75:53–57. 9. Fernstrom J, Fernstrom M, Gillis M. Acute effects of aspartame on large neutral amino acids and monoamines in rat brain. [J] Life Sci. 1983; 32(14):1651–1658. 10. Haschemeyer R, Haschemeyer A. Proteins. A Guide to Study by Physical and Chemical Methods. New York: John Wiley & Sons; 1973. p. 1–30.. IC. A. 11. Dailey J, Lasley S, Burger R, et al. Amino acids, monoamines and audiogenic. UI. M. seizures in genetically epilepsy-prone rats: effects of aspartame. [J] Epilepsy Res.. O Q. 1991;8(2):122–133.. Y. BI. 12. Diomede L, Romano M, Guiso G, et al. Interspecies and interstrain studies on the. IA. increased susceptibility to metrazol-induced convulsions in animals given. M. AC. aspartame. [J] Food Chem Toxicol. 1991;29(2):101–106.. FA R. 13. Yokogoshi H, Roberts C, Caballero B, et al. Effects of aspartame and glucose. DE. administration on brain and plasma levels of large neutral amino acids and brain. CA. 5-hydroxyindoles. [J] Am J Clin Nutr. 1984;40(1):1–7.. IO TE. 14. Kruse J. Methanol poisoning. [J] Intensive Care Med. 1992;18(7):391–397.. BL. 15. Jeganathan P, Namasivayam A. Methanol induced biogenic amine changes in. BI. discrete areas of rat brain: Role of simultaneous ethanol administration. [J] Ind J Physiol Pharmacol. 1998;32(1):1–10. 16. Tephly T, McMartin K. Methanol metabolism and toxicity. AspartamePhysiology and Biochemistry. New York: Marcel Dekker; 1984. pp. 111–140. 17. Tephly T. The toxicity of methanol. [J] Life Sci. 1991;48(11):1031–1041. 18. Osterloh J, Pond S, Grady S, et al. Serum formate concentrations in methanol intoxication as. a. criterion. for. hemodialysis.. [J]. Ann Intern Med.. 1986;104(2):2000–2003. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 19. Ashok I, Sheeladevi R, Wankhar D. Acute effect of aspartame-induced oxidative stress in Wistar albino rat brain. Journal of Biomedical Research. 2015;29(5):390396.. Disponible. en:. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4585433/#b10. 20. Kuk J, Brown R. Aspartame intake is associated with greater glucose intolerance in individuals with obesity. Applied Physiology, Nutrition, and Metabolism, 2016,. A. Disponible. en:. IC. 41:795-798.. UI. M. http://www.nrcresearchpress.com/action/showCitFormats?doi=10.1139%2Fapn. O Q. m-2015-0675.. Y. BI. 21. Choudhary AK, Devi RS. Effects of aspartame on hsp70, bcl-2 and bax expression. IA. in immune organs of Wistar albino rats. Journal of Biomedical Research. Disponible. en:. M. AC. 2016;30(5):427-435.. FA R. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5044715/.. DE. 22. Codex Alimentarius. (2010). Norma General del Codex para los Aditivos. CA. Alimentarios, CODEX STAN 192‐1995.. IO TE. 23. Núñez E. Contenido de cafeína, aspartame y ácido benzoico determinado por Cromatografía Líquida de Alta Resolución en bebidas carbonatadas que consume. BI. BL. la población de Chiclayo – Perú. Perú. 2014.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 1. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. MOLÉCULA DE ASPARTAME. FA R. N-L-α-aspartil-L-fenilalanina-1-metil éster. BI. BL. IO TE. CA. DE. Fuente: JECFA, 2001. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 2 NORMA GENERAL DEL CODEX PARA LOS ADITIVOS ALIMENTARIOS (CODEX SATN 192‐1995). BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Valores de la dosis máxima permitida para el aspartame en las diferentes categorías de alimentos.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fuente: JECFA, 2016. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 3. O Q. UI. M. IC. A. ETIQUETAS DE LAS BEBIDAS CARBONATADAS ANALIZADAS. COCA COLA ZERO. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. INCA KOLA ZERO. FANTA ZERO. BI. BL. SPRITE ZERO. GUARANÁ LIGHT. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 4: CROMATOGRAMAS DEL ESTANDAR. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Estándar 1 (16𝛍g/mL). 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Estándar 2 (32𝛍g/mL). 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.





(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 5: CROMATOGRAMAS DE LAS MUESTRAS. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Guaraná Light 1. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Guaraná Light 2. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.




(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Inca Kola Zero 1. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.





(52) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Coca Cola Zero 1. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.





(57) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Sprite Zero 1. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.





(62) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. Fanta Zero 1. 53 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.





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