Aislamiento e identificación de lactobacillus spp de heces de niños lactantes y caracterización parcial in vitro de su potencial probiótico”

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. “AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE Lactobacillus spp.. DE. DE HECES DE NIÑOS LACTANTES Y. EM. AS. CARACTERIZACIÓN PARCIAL IN VITRO DE SU. Tesis para obtener el título de Biólogo-Microbiólogo. Br. Sara Lucía Rojas Gallardo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. POTENCIAL PROBIÓTICO”. TRUJILLO – PERÚ 2011. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AUTORIDADES UNIVERSITARIAS QUE OTORGAN EL TÍTULO DE BIÓLOGO MICROBIÓLOGO. CO. M. Rector de la Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. DR. ORLANDO VELASQUEZ BENITES. DRA. VILMA MENDEZ GIL. ÁT. IC. A. Y. Vicerrector Académico de la Universidad Nacional de Trujillo. DR. PEDRO LUIS LAVALLE DIOS. IN FO. RM. Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo. DE. DR. HERMES ESCALANTE AÑORGA. EM. AS. Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas. DR. CESAR JARA CAMPOS. DE. SI ST. Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas. DR. PEDRO ALVARADO SALINAS Parasitología. DI. RE. CC. IO. N. Director de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. DEDICATORIA. A IC ÁT. A mi hermanita, Diana Alba, por su amor, comprensión y sobre todo por ser mi mejor amiga.. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. A mis padres, Elizabeth y Sixto por sus valores y principios que siempre me inculcaron y todo ello con una gran dosis de amor y sin pedir nunca nada a cambio.. Y. CO. M. UN IC. A Dios, por su amor inmerecido y por darme siempre la paz que solo Él la sabe dar.. DI. RE. CC. IO. N. A mi mamá Ines, a mi tía Juana y mis primos Ana, Yanina, Joel y Samuel, por creer en mi siempre y por su amor y cariño siempre brindado.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AGRADECIMIENTO. CO. M. UN IC. AC IÓ. A la Ms.C. Icela Marissa Rodríguez Haro, Profesora Asociada del Departamento de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, por sus valiosos consejos y orientación profesional brindados durante la realización del presente trabajo de investigación.. RM. ÁT. IC. A. Y. Al Blgo-Mblgo Jimmy A. Rodríguez Juárez y Anabel Salas Mariños, por su ayuda, apoyo profesional y valiosa amistad que me brindaron durante el desarrollo de esta investigación.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. A mis amigos, Percy, Juan, Sandra, Elithza, Jacky y Cinthia, quienes estuvieron presentes apoyándome en los buenos y malos momentos; y sobre todo por brindarme una amistad sincera.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. UN IC. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio el trabajo de investigación titulado:. IC. A. Y. CO. M. ―Aislamiento e identificación de Lactobacillus spp. de heces de niños lactantes y caracterización parcial in vitro de su potencial probiótico‖. Trujillo, Mayo del 2011. ----------------------------------------Sara Lucía Rojas Gallardo Bachiller en Ciencias Biológicas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones cometidos en la elaboración del presente trabajo, me someto a vuestro dictamen.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. UN IC. AC IÓ. N. La que suscribe, asesora de la presente tesis titulada: ―Aislamiento e identificación de Lactobacillus spp. de heces de niños lactantes y caracterización parcial in vitro de su potencial probiótico‖.. CO. M. CERTIFICA:. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. Que la investigación ha sido ejecutada de acuerdo a lo establecido en el plan propuesto; con las debidas orientaciones brindadas a la tesista y acogiendo las sugerencias pertinentes, por lo que autorizo a la Bachiller Sara Lucía Rojas Gallardo para continuar con los trámites correspondientes.. AS. --------------------------------------------------. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Dra. Icela Marissa Rodríguez Haro Profesora Asociada del Departamento de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. M. Sc. Julio Arellano Barragán PRESIDENTE. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Dictaminador, dan por aprobado el presente trabajo.. Dra. Icela Rodríguez Haro VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Dr. Steban Ilich Zerpa SECRETARIO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo aislar e identificar Lactobacillus spp.. AC IÓ. N. con potencial probiótico parcial a partir de heces de niños lactantes provenientes del distrito de Trujillo, de la provincia de Trujillo, departamento de La Libertad en los. UN IC. meses de junio del 2010 a abril del 2011. A partir de 12 muestras de heces de niños. M. lactantes se aislaron 196 cepas de microorganismos. Solo 24 cepas se identificaron. CO. como Lactobacillus spp. Los cultivos fueron identificados a través de sus. A. Y. características morfológicas, tintoriales y bioquímicas. Se realizaron pruebas in vitro. ÁT. IC. para determinar su caracterización parcial probiótica, que consistieron en:. RM. crecimiento en medios hostiles como pH ácido (caldo MRS a pH 2.0 y 3.0 con HCl). IN FO. y alcalino (pH 9.0) así como también en presencia de sales biliares (caldo MRS con 0.30% y 0.5% de sales biliares), pruebas de virulencia (actividad gelatinasa y. DE. hemolítica). Los 24 cultivos presentaron resultados óptimos para todas las pruebas.. EM. AS. También se evaluó la actividad antimicrobiana contra Staphylococcus aureus ATCC. SI ST. 25923, observándose halos de inhibición al emplearse extracto crudo de los cultivos. Se evaluó la capacidad de coagulación de la leche, en donde sólo el 50 % presentó un. DE. coágulo firme y compacto. En conclusión de los 196 cultivos aislados 12 cumplieron. DI. RE. CC. IO. N. con las características para ser considerados como probióticos.. ABSTRACT. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. This study aimed to isolate and identify Lactobacillus spp. probiotic potential. AC IÓ. N. from feces of children from the district of Trujillo, in the province of Trujillo, La Libertad department in the months of June 2010 to April 2011. From 12 stool. UN IC. samples from infants were isolated 196 strains of microorganisms. Only 24 strains. CO. M. were identified as Lactobacillus spp. The cultures were identified by their. A. Y. morphological, staining and biochemical. In vitro tests were conducted to determine. ÁT. IC. their partial characterization probiotic, which consisted of: growth in hostile. RM. environments such as acidic pH (pH 2.0 MRS broth and 3.0 with HCl) and alkaline. IN FO. (pH 9.0) and also in the presence of bile salts (broth MRS with 0.30% and 0.5% bile. DE. salts), virulence tests (gelatinase and hemolytic activity). The 24 cultures showed. EM. AS. optimal results for all tests. We also evaluated the antimicrobial activity against. SI ST. Staphylococcus aureus ATCC 25923, used crude extract for crops was observed. DE. inhibition halos. We evaluated the ability of coagulation of milk, where only 50%. IO. N. had a clot firm and compact. In conclusion of the 196 isolates 12 met the. DI. RE. CC. characteristics to be considered as probiotics.. ÍNDICE. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Pag. viii. AC IÓ. N. RESUMEN………………………………………………………………… I.. INTRO. UN IC. DUCCIÓN………………………………………………………. CO. M. II.. MATER. 11. A. Y. IAL Y MÉTODO……………………………………………….. 1. ÁT. IC. III. RESULTADOS ………………………………………………………… 21. RM. IV. DISCUSIÓN………………………………………………………….... IN FO. V. CONCLUSIONES………………………………………………………. DE. VI. RECOMENDACIONES………………………………………………. EM. AS. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………….. 35 36 37 47. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. VIII. ANEXOS……………………………………………………………... 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. I. INTRODUCCIÓN. En el transcurso del tiempo el ser humano sufre enfermedades que. UN IC. afectan el tracto gastrointestinal, y éstas pueden ser ocasionadas por. M. bacterias, parásitos y virus. Las diversas patologías intestinales que puede. CO. sufrir el hombre son frecuentemente la diarrea del viajero, diarrea asociada. A. Y. con antibióticos y diarrea aguda; intolerancia a la lactosa; enfermedad. ÁT. IC. inflamatoria intestinal y la úlcera gastroduodenal1.. IN FO. RM. La dieta consumida hace unos miles de años por nuestros antecesores contenía un 50% menos de proteínas, un 75% menos de grasas. DE. saturadas y un 90% menos de sodio, pero a la vez consumían entre 4 y 10. AS. veces más fruta y fibra que el actual, lo que le aportaba 10 veces más. EM. vitaminas y antioxidantes. Pero la más llamativa diferencia con nuestros. SI ST. antecesores es que en su dieta ingerían diariamente más de 109 bacterias. DE. beneficiosas para la salud3.. IO. N. Elie Metchnikoff, ruso galardonado con el premio Nobel por sus. DI. RE. CC. trabajos en el Instituto Pasteur a comienzos del siglo pasado, propuso que ciertos microorganismos tienen influencia sobre la longevidad de distintas poblaciones como los turcos, búlgaros y armenios, esto debido a las características en su alimentación. Con estudios posteriores se demostró que estas personas consumían grandes cantidades de leche fermentada, en. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las cuales se encontraban las bacterias Streptococcus thermophilus y. N. Lactobacillus bulgaricus4.. AC IÓ. Existen estudios que demuestran que ciertos grupos de bacterias. UN IC. tendrían efecto benéfico en el humano cuando son ingeridas, aplicándose el término de probióticos a este grupo de microorganismos presentes en. CO. M. los alimentos, teniendo cada vez mayor aceptación por el público1,5.. A. Y. El término probiótico es una palabra relativamente nueva que. ÁT. IC. significa ―a favor de la vida‖ y actualmente se utiliza para designar las. RM. bacterias que tienen efectos beneficiosos para los seres humanos y los. IN FO. animales. La observación original de la función positiva desempeñada por éstas bacterias se atribuye a Eli Metchnikoff, que afirmó que "la. DE. dependencia de los microbios intestinales con respecto a los alimentos. EM. AS. hace posible adoptar medidas para modificar la flora de nuestro organismo. SI ST. y sustituir los microbios nocivos por microbios útiles"6,7.. DE. Lilly y Stillwell, usaron el término probiótico para describir a. N. aquellas sustancias secretadas por un microorganismo que estimulan el. CC. IO. crecimiento de otras, en contraposición al término antibiótico. La palabra. DI. RE. fue aplicada posteriormente para referirse a extractos de tejidos que estimulaban el crecimiento bacteriano, sin embargo, Parker fue el primero en usar el término probiótico de acuerdo con el sentido que hoy conocemos, es decir organismos que contribuyen al balance microbiano. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. intestinal. Fuller en 1989, intenta mejorar la definición hecha por Parker, con objeto de recalcar el carácter microbiano de los probióticos, la. AC IÓ. N. importancia de la viabilidad y el aspecto de beneficio para el huésped animal; definió de nuevo el término como "un suplemento dietético basado. UN IC. en microbios vivos que afecta beneficiosamente al huésped animal. M. mejorando su equilibrio intestinal". Actualmente, la OMS define a los. CO. probióticos como ―microorganismos, sean bacterias o levaduras, que. IC. A. Y. ingeridos en cantidad suficiente son beneficiosos para el hospedero‖8,9.. ÁT. En los últimos años se ha observado un creciente interés tanto por. RM. parte de la comunidad científica cómo por parte de la población en. IN FO. general, hacia el papel que estos microorganismos pueden desempeñar en. DE. el mantenimiento de la salud y en la prevención y tratamiento de diferentes. EM. AS. enfermedades4,10.. SI ST. Los profesionales de la salud están reconociendo cada vez más los efectos beneficiosos de los probióticos sobre la salud y la nutrición. DE. humana. Estudios científicos recientes sobre las propiedades y la. IO. N. funcionalidad de microorganismos vivos en los alimentos sugieren que los. DI. RE. CC. probióticos desempeñan un importante papel en las funciones inmunitaria, digestiva y respiratoria, y que podrían tener un efecto significativo en el alivio de las enfermedades infecciosas en los niños y otros grupos de alto riesgo11. Por tal razón, es recomendable consumirlos junto con alimentos donde se encuentren en buenas condiciones de vitalidad y sean capaces de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. integrarse a la flora intestinal autóctona previamente que éstos hayan sido. N. probados científicamente12,13.. AC IÓ. El año 2004 el Cochrane Datebase of Systematic Reviews publicó el. UN IC. análisis de 23 estudios de probióticos en el tratamiento de la diarrea. infecciosa. Los autores destacaron el efecto positivo en reducir la diarrea y fueron. similares. en. países. desarrollados. M. resultados. y. CO. estos. Y. subdesarrollados con excepción de la infección provocada por rotavirus. ÁT. IC. A. donde se ha visto escasa eficacia5.. RM. Se ha postulado que los probióticos podrían estimular el catabolismo. desconjugación. IN FO. del colesterol reduciendo así la colesterolemia, debido a la capacidad de de las sales biliares que poseen algunas de estas. DE. bacterias14,15. A la vez ciertos probióticos son capaces de aumentar la. EM. AS. inmunidad innata, por ejemplo mediante un incremento de la capacidad. SI ST. fagocítica. Adicionalmente, se ha descrito que los probióticos pueden producir una estimulación de la inmunidad adquirida o específica. DE. induciendo la producción de inmunoglobulinas específicas del tipo A, que. DI. RE. CC. IO. N. son las que defienden las mucosas16.. Los probióticos tienen múltiples mecanismos de acción, éstos pueden. implicar la prevención de la proliferación de bacterias patógenas, la unión o la penetración de agentes patógenos a la mucosa, la estimulación de la función barrera de la mucosa, o alterar la inmunorregulación (disminución de las moléculas proinflamatorias y la promoción de protección). Aunque varias. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. especies de probióticos bloqueen la adhesión epitelial y la invasión por patógenos microbianos in vitro17. Además estos pueden producir muchas. N. sustancias tóxicas como el peróxido de hidrogeno (H2O2), bacteriocinas y. UN IC. AC IÓ. algunos ácidos orgánicos18.. Numerosas bacterias reconocidas como probióticos pertenecen al. CO. M. grupo de las Bacterias Ácido Lácticas (BAL). Muchas de estas bacterias. Y. benefician la salud de humanos y animales mientras que otras deterioran. IC. A. cervezas, vinos y productos cárnicos procesados. Las BAL benéficas están. ÁT. entre el grupo de microorganismos más importantes usados en la. RM. fermentación de alimentos debido a que contribuyen en cuanto a sabor y. IN FO. textura en estos productos e inhiben el deterioro de alimentos causado por. DE. bacterias al producir sustancias inhibidoras del crecimiento (bacteriocinas). EM. AS. y gran cantidad de ácido láctico19.. SI ST. Las principales bacterias ácido lácticas utilizadas actualmente como probióticos en humanos. y con datos clínicos comprobados son las. DE. bacterias del género Lactobacillus, Bifidobacterium, Lactococcus,. IO. N. Streptococcus y Sacharomyces20,21. Siendo los miembros del género. DI. RE. CC. Lactobacillus. y. Bifidobacterium. principalmente. usados. como. probióticos22.. Los lactobacilos y las bifidobacterias son componentes normales de la microflora intestinal humana, los cuales son comúnmente utilizados. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. como probióticos añadidos a los productos alimenticios principalmente a causa de las actividades promotoras para la salud23,24. Estableciéndose beneficiosos. utilizando. Lactobacillus. rhamnosus. y. AC IÓ. N. efectos. Bifidobacterium lactis con fines de prevención y de tratamiento de la. UN IC. diarrea aguda, causada principalmente por rotavirus en niños8. Según los. M. reportes de un estudio realizado in vivo, la ingestión de leche fermentada. CO. conteniendo L. acidophilus y bifidobacterias puede aumentar la actividad. Y. fagocítica frente a E. coli así como también estimular la producción de . El estudio realizado por. A. 25. IC. Ig A contra una atenuada Salmonella typhi. RM. ÁT. Baken en el 2006 con Lactobacillus casei (Shirota) detectó principalmente. IN FO. la mejora de respuestas inmunitarias innatas y la promoción de la. DE. reactividad inmunológica mediada por Th126.. AS. Probablemente la mayor comparación disponible entre las especies. EM. Lactobacillus y Bifidobacterium presentes en heces humanas son las Mitsuoka y por Biavati y colaboradores. Mitsuoka. SI ST. reportadas por. DE. mencionó a Lactobacillus crispatus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus como las mayores especies de la. N. salivarius, y Lactobacillus reuteri. IO. microflora de Lactobacillus. Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus. DI. RE. CC. ruminis, Lactobacillus casei, y Lactobacillus brevis fueron detectados ocasionalmente. Entre las bifidobacterias, Bifidobacterium longum predominó en los humanos adultos, mientras que Bifidobacterium bifidum fueron detectados ocasionalmente. A diferencia, Bifidobacterium infantis y Bifidobacterium breve fueron las especies más prevalentes en las heces de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. infantes, con B. longum y B. bifidum detectados ocasionalmente. La identificación de los aislamientos fueron determinados por características. N. fenotípicas y la determinación del porcentaje molecular del par G+C del. UN IC. AC IÓ. genoma de éstos BAL27.. Arici y colaboradores en el 2006, determinaron algunas. CO. M. características de Lactobacillus aisladas de heces de niños lactantes, las. Y. especies identificadas fueron Lactobacillus rhamnosus, L. paracasei spp.. IC. A. paracasei, L. fermentum, L. buchneri, L. brevis, L. curvatus y. ÁT. Lactobacillus sp. Concluyeron que algunas de estas cepas tenían una. RM. amplia aplicación potencial en la fermentación de los alimentos como. IN FO. cepas probióticas. Se encontraron que algunas de estas cepas tienen la. DE. capacidad de producción de bacteriocinas con actividad antimicrobiana de. EM. AS. amplio espectro28.. SI ST. Como se ha podido ver, dentro de los probióticos de gran interés se encuentran las bacterias del género Lactobacillus, siendo éstos. DE. ampliamente utilizados a nivel industrial, debido a su mayor tolerancia a la. IO. N. acidez y su fácil manipulación19, el cual consiste en un grupo diverso de. DI. RE. CC. BAL incluidos en el phylum Firmicutes, clase Bacilli , orden Lactobacillales y familia Lactobacillaceae29.. Los lactobacilos son bacilos o coco-bacilos Gram-positivos que frecuentemente forman cadenas. Son catalasa negativos, no esporulados y. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en general inmóviles (unas pocas especies presentan flagelos perítricos). Fermentan varios carbohidratos principalmente a lactato y acetato. En. AC IÓ. N. cuanto a su temperatura óptima de crecimiento, pueden ser mesófilos o termófilos. El pH óptimo de crecimiento oscila entre 5,5 y 6,2. Son. UN IC. anaerobios aerotolerantes y su crecimiento se ve favorecido en atmósfera. CO. M. microaerófila con un 5-10% de CO216,30.. Y. Es un género muy amplio en el que se incluyen más de 100. IC. A. especies con propiedades heterogéneas. Esta diversidad se vé reflejada en. ÁT. el contenido en G+C de sus miembros, que varía desde un 32% hasta un. IN FO. RM. 52%. También desde el punto de vista fenotípico y atendiendo a sus características metabólicas, se pueden clasificar en tres grupos en función. fosfocetolasa:. Homofermentativos. estrictos,. Heterofermentativos. AS. y. DE. de la presencia o ausencia de las enzimas fructosa -1,6- difosfato aldolasa. EM. facultativos y Heterofermentativos estrictos. Esta clasificación no. SI ST. concuerda con los resultados del análisis de sus secuencias del ADNr 16S. DE. ni obedece a relaciones filogenéticas entre las especies, sino que deriva de. N. la clasificación inicial propuesta por Orla-Jensen en 1924 y que se sigue. CC. IO. utilizando por motivos prácticos. Las bacterias Homofermentativas. DI. RE. utilizan la vía de Embden Meyerhof-Warburg-Parnas (EMWP) para generar lactato como el único producto de la fermentación, mientras que las bacterias Heterofermentativas utilizan la vía de las Pentosas fosfocetolasas (PKP) para producir una mezcla de CO2, etanol, acetato y. lactato16,31.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las diversas especies de este género pueden ser halladas en distintos ambientes, se ha demostrado que éstas bacterias forman parte de. N. la flora intestinal normal de pescados30; de pollos, demostrándose su. AC IÓ. presencia tanto en el buche, íleon así como también en el ciego32. Además,. UN IC. se encuentran en un gran número de productos fermentados, como leches,. M. carnes o vegetales, así como en el tracto digestivo humano y en la saliva.. CO. Otras especies son comensales del hombre; éstas se sitúan a nivel de la. Y. cavidad bucal, del tracto digestivo y del tracto urogenital femenino33.. IC. A. Dentro de todas estas especies, las cepas más empleadas a nivel industrial. RM. ÁT. son Lactobacillus casei, L. reuteri, L. acidophilus, L. plantarum y L.. IN FO. bulgaricus34.. DE. Como se ha visto, Lactobacillus tiene diversidad de ambientes en. AS. los cuales se pueden encontrar, pero mayormente son habitantes del. EM. intestino delgado en humanos y animales22. No obstante, los seres. SI ST. humanos nacemos en condiciones axénicas, pero inmediatamente después. DE. del nacimiento (1 ó 2 días) se inicia la colonización por parte de varios. N. microorganismos que provienen principalmente de la madre, ya sea por el. IO. consumo de la leche materna y también por el niño al pasar por el canal. DI. RE. CC. natural del parto. Esta flora microbiana se divide en tres grandes grupos: 1) La flora dominante compuesta por los géneros Bifidobacterium y. Bacteroides, 2) La flora subdominante compuesta por bacterias del género Lactobacillus y 3) La flora contaminante, la cual es potencialmente patógena10,35,36.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El desarrollo de la flora intestinal comprende 4 fases. La primera de adquisición. de. microorganismos,. enterobacterias,. estreptococos. y. AC IÓ. N. estafilococos del canal vaginal y zona perineal materna. La segunda ocurre durante el periodo de lactancia materna o artificial y es rica en. UN IC. bifidobacterias, enterococos y enterobacterias; el pH fecal es más bajo en. M. los niños lactados al pecho. La tercera fase empieza con la introducción de. CO. alimentación complementaria con aumento de enterococos y bacteroides,. Y. permaneciendo constantes enterobacterias y bifidobacterias. La cuarta fase. IC. A. tiene lugar cuando el lactante es destetado e inicia la alimentacion del. RM. ÁT. entorno familiar, estabilizándose alrededor de los 2 años de edad con. IN FO. predominio de 100-1.000 especies anaerobias por cada especie aerobia con predominio de Bacteroides, Bifidobacterium, Eubacterium, Clostridium,. AS. DE. Lactobacillus y Fusobacterium16,20.. EM. La flora normal puede modificarse cuando el ser humano sufre. SI ST. infecciones con patógenos entéricos en cualquier etapa de su vida, ya que. DE. en muchos casos debe aplicarse tratamientos antimicrobianos que no. N. inhiben totalmente al patógeno sino también a la flora beneficiosa, es así. IO. como el estudio de la microflora fecal, en niños lactantes de 1 a 3 meses de. DI. RE. CC. edad, han demostrado que el uso de antibióticos (tales como penicilinas o cefalosporinas), provoca un aumento de la bacteria Escherichia coli y bacteroides, bifidobacterias y lactobacilos (bacterias benéficas) son suprimidas a niveles indetectables en la mayoría de los bebés durante el tratamiento con dichos antibióticos2.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Por lo expuesto, hoy en día los Lactobacillus son el centro de una intensa. investigación. internacional. por. su. capacidad. de. actuar. AC IÓ. N. antagónicamente frente a microorganismos patógenos, tales como: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella enteritidis, coli,. Yersinia. enterocolítica,. Candida. albicans. y. UN IC. Escherichia. M. Cryptosporidium parvum18,37-40. Así mismo cumple un papel esencial en la. CO. fermentación de alimentos (especialmente por su capacidad para producir. Y. varios compuestos antimicrobianos) y, el número de alimentos y otros. IC. A. productos dietéticos conteniendo cepas vivas de lactobacilos, se ha. RM. ÁT. incrementado significativamente en los últimos años41. Se han aislado a. IN FO. los lactobacilos de diversas muestras como heces de niños lactantes los cuales fueron sometidos a diversas pruebas para determinar si podrían ser. AS. DE. empleadas como probióticos28,42,43.. EM. El propósito del presente trabajo fue aislar e identificar. SI ST. Lactobacillus spp. con potencial probiótico a partir de heces de niños. DE. lactantes provenientes de la ciudad de Trujillo, Provincia de Trujillo,. N. departamento de La Libertad, durante los meses de junio de 2010 a enero. IO. de 2011. Este trabajo contribuirá a incrementar los conocimientos. DI. RE. CC. científicos en esta área a fin de obtener cultivos probióticos típicos o autóctonos de la microbiota de niños que puedan ser empleados en la población en alimentos funcionales, como aditivos naturales para la conservación de alimentos o microencapsulados también como cultivos. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. iniciadores en alimentos fermentados, con el fin de reducir el porcentaje de. AC IÓ. N. enfermedades gastrointestinales y mejorar su respuesta inmune.. UN IC. II. MATERIAL Y METODO. CO. M. A. Material Biológico. A. Y.  12 muestras de heces de niños lactantes de 15 a 30 días de. IC. nacidos de la ciudad de Trujillo, provincia de Trujillo del. RM. ÁT. departamento de La Libertad, durante los meses de junio. IN FO. del 2010 a abril del 2011.. DE.  Vacuna GEL NB Probiótica, Normalizador Biológico de la. AS. Flora Intestinal: Lactobacillus acidophilus – Lactobacillus 40 ml. Laboratorios LMB H. COLICHÓN.. SI ST. EM. bulgaricus.. proveniente de la Colección Americana de Cultivos Tipo.  Cultivo de Escherichia coli, aislada por el Laboratorio de Bacteriología de la Universidad Nacional de Trujillo.. DI. RE. CC. IO. N. DE.  Cultivo indicador: Staphylococcus aureus ATCC 25923.  Cultivo de Salmonella typhi, aislada por el Laboratorio de Bacteriología de la Universidad Nacional de Trujillo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo.  Cultivo de Serratia licuefasciens, aislada por el Laboratorio. AC IÓ. N. de Bacteriología de la Universidad Nacional de Trujillo.. UN IC. B. Método. CO. M. 1. Obtención y procesamiento de la muestra. Y. Se recolectaron en forma aséptica, en frascos estériles 12. IC. A. muestras de heces de niños lactantes de la ciudad de Trujillo,. ÁT. provincia de Trujillo. Los frascos conteniendo las muestras fueron. IN FO. RM. transportadas en un cooler conteniendo geles pack, en un tiempo no mayor de 30 minutos, hasta el laboratorio de Bacteriología del. DE. Departamento Académico de Microbiología y Parasitología de la. AS. Facultad de Ciencias Biológicas - Universidad Nacional de. SI ST. EM. Trujillo, donde fueron analizadas.. Las. muestras. fueron. sometidas. a. un. proceso. de. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2. Aislamiento de Lactobacillus spp.. enriquecimiento selectivo en Caldo Man Rogosa Sharp (MRS) pH 5,5, incubándose durante 24-48 horas a 37ºC en condiciones de microaerobiosis. Posteriormente se realizó diluciones seriadas hasta el valor de 10-3 en caldo MRS, las cuales fueron sembradas por duplicado y por estría en placas petri que contenían agar MRS, las. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. placas fueron incubadas durante 48 horas a 370C en atmósfera de microaerobiosis. Transcurrido el tiempo de incubación se. AC IÓ. UN IC. condiciones de microaerobiosis durante 48 horas a 370C.. N. seleccionaron las colonias típicas y se obtuvo cultivos puros en. M. 3. Selección e identificación preliminar de Lactobacillus spp.. CO. Transcurrido el tiempo de incubación se seleccionaron las teniendo. en. cuenta. Y. típicas,. las. características. A. colonias. ÁT. IC. morfológicas, obteniéndose cultivos puros en Agar MRS inclinado. RM. en condiciones de microaerobiosis. A cada colonia aislada se le. IN FO. realizó observaciones al microscopio, realizándose las coloraciones. DE. de Gram, Ziehl-Neelsen y Wirtz. De igual manera, se llevó a cabo. AS. la prueba de catalasa con Peróxido de Hidrogeno al 3% y de la. EM. oxidasa. A partir de los resultados, fueron seleccionadas las. SI ST. colonias catalasa y oxidasa negativa y aquéllas cuyas células resultaron ser morfológicamente bacilos gram positivos, ácido-. de los lactobacilos.. DI. RE. CC. IO. N. DE. alcohol sensibles y carentes de endosporas, características propias. 4. Identificación bioquímica de Lactobacillus spp. A cada cultivo puro se le realizaron pruebas bioquímicas como: producción de ácido y gas a partir de glucosa, reducción de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. nitratos, producción de H2S, producción de indol, movilidad y tipo. 4.1. Producción de ácido y gas a partir de glucosa.. AC IÓ. N. de metabolismo bacteriano44.. UN IC. Para demostrar la producción de ácido y gas a partir. M. de glucosa, se utilizó el Caldo MRS adicionándole el. CO. indicador Púrpura de Bromocresol y colocando campanas. A. Y. Durham, donde fueron inoculados los cultivos en estudio.. ÁT. IC. El medio inoculado se incubó a 370C durante 48 horas, en. RM. condiciones de microaerobiosis. El viraje de color del. IN FO. indicador de púrpura a amarillo, se tomó como reacción. DE. positiva para la producción de ácido, así también se observó. AS. la presencia o ausencia de gas dentro de la campana. SI ST. EM. Durham.. DI. RE. CC. IO. N. DE. 4.2. Reducción de nitratos Para determinar la capacidad de reducción de nitratos a nitritos o nitrógeno atmosférico, se usó Caldo Nitrato (Britania), donde fueron inoculadas las bacterias en estudio. El medio inoculado se incubó a 370C durante 24 horas, en condiciones de microaerobiosis. Transcurrido el tiempo de incubación se procedió a agregar 0.5 mL. de Reactivo A de nitrito y 0.5 mL. de Reactivo B de nitrito, la. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. formación de un complejo rojo indicó una reacción positiva44. Se utilizó como control positivo a Escherichia. UN IC. 4.3. Producción de sulfuros, indol y movilidad. AC IÓ. N. coli.. M. Para determinar la producción de sulfuros (H2S) e. CO. indol y también observar la movilidad bacteriana se hizo. A. Y. uso del medio Movilidad Indol Ácido Sulfhídrico (SIM).. ÁT. IC. Los cultivos fueron inoculados por picadura en forma. RM. vertical a partir de cultivos puros jóvenes y luego se. IN FO. incubaron a 37°C por 24 horas en condiciones de. DE. microaerobiosis. Pasado este tiempo se observó la formación de un precipitado negro y la movilidad.. EM. AS. Asimismo se procedió a agregar el reactivo de Kovac’s para. SI ST. evidenciar la presencia de indol. La formación de un anillo. utilizó como controles positivo a Sanlmonella typhi para la detección de sulfuros y movilidad y a Escherichia coli para la detección de indol.. DI. RE. CC. IO. N. DE. grosella en la superficie indicó una reacción positiva44. Se. 4.4. Tipo de Metabolismo Bacteriano, fermentación de la glucosa.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para demostrar si la degradación de la glucosa se produce por vía oxidativa o por vía fermentativa, se hizó. AC IÓ. N. uso del Medio de Oxidación-Fermentación (O/F) según Hugh y Leifson suplementado con glucosa, los cultivos. UN IC. fueron sembrados por duplicado por picadura en medio O/F. M. en el cual uno de los tubos fue cubierto con parafina líquida.. CO. El medio inoculado se incubó a 370C durante 48 horas en. Y. condiciones aerobias. El viraje del indicador de verde a. IN FO. RM. ÁT. IC. A. amarillo evidenció una reacción positiva.. DE. 5. Caracterización parcial probiótica de Lactobacillus spp.. AS. 5.1. Capacidad de licuefacción de la gelatina. EM. Para demostrar la capacidad de licuefacción de la. SI ST. gelatina, se utilizó el medio Gelatina Nutritiva, donde los. DI. RE. CC. IO. N. DE. cultivos en estudio fueron sembrados por picadura vertical. El medio sembrado se incubó a 370C durante 24 horas, en condiciones de microaerobiosis. Antes de realizar la lectura se colocaron los tubos en refrigeración, a una temperatura de 4ºC por 2 horas. El medio licuado indicó una reacción positiva (actividad gelatinasa). Se utilizó como control positivo a Serratia licuefasciens.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 5.2. Resistencia al pH ácido. Los cultivos puros se cultivaron en caldo MRS a pH. AC IÓ. N. 6.5 y 370C durante 18 horas. Posteriormente se realizó una dilución equivalente al tubo Nº 1 del Nefelómetro de. UN IC. MacFarland (3x108 cel/mL). A partir de esta suspensión se. M. inocularon 40 µL en tubos con 4 mL de caldo MRS,. CO. ajustado a un pH de 2,0 y 3,0. Todas las muestras fueron. A. Y. incubadas a 370C durante 60 y 90 minutos en condiciones. ÁT. IC. de microaerobiosis. Además, se conformaron los controles. RM. positivo y negativo al sembrar los cultivos en Caldo MRS a. IN FO. pH 6,5 bajo las mismas condiciones. Tanto al momento de. DE. la inoculación como al final del tratamiento ácido, se hicieron recuentos en placas con agar MRS, realizando. EM. AS. diluciones hasta 10-5 e incubando a 37ºC durante 48 horas. SI ST. en microaerobiosis. Se consideraron como resistentes al pH. igual o mayor al 45 % de las bacterias inoculadas58.. DI. RE. CC. IO. N. DE. ácido aquellos cultivos que mostraron una supervivencia. 5.3. Tolerancia a sales biliares. 40 µL de la suspensión de células equivalente al tubo Nº 1 del Nefelómetro de MacFarland fueron inoculados en tubos con 4 mL de caldo MRS con concentración de 0.3% y 0.5% de sales biliares. La. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. incubación se realizó durante 4 y 8 horas a 370C, en condiciones de microaerobiosis. Tanto al momento de la. AC IÓ. N. inoculación como al final del tratamiento se realizaron recuentos en placas con agar MRS, realizandose diluciones. UN IC. e incubando a 37ºC durante 48 horas. Se consideraron como. M. resistentes a las sales biliares aquellos cultivos que. CO. mostraron una supervivencia igual o mayor al 45% de las. ÁT. IC. A. Y. bacterias inoculadas58.. RM. 5.4. Coagulación de la leche. IN FO. Para esta prueba se sembraron los cultivos de. DE. Lactobacillus spp. en leche tindalizada. A cada tubo. AS. conteniendo 4 mL de leche se le inoculó 40 µL de una. EM. suspensión equivalente al tubo Nº 1 del Nefelómetro de. SI ST. MacFarland. Estos fueron incubados durante 24 horas a. el tiempo de coagulación, así como la firmeza del coágulo invirtiéndose el tubo.. DI. RE. CC. IO. N. DE. 37ºC. Se realizaron observaciones seriadas determinándose. 5.5. Producción de hemolisinas Para realizar esta prueba se sembraron los cultivos de Lactobacillus spp. por estría en Agar Sangre de carnero. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. al 6%. Se incubaron los cultivos a 37ºC en condiciones de microaerobiosis durante 48 horas. La lectura se realizó. AC IÓ. N. observando la presencia de halos de hemólisis.. UN IC. 5.6. Actividad antimicrobiana. CO. M. Para esta prueba se empleó como cultivo indicador a proveniente de la. Y. Staphylococcus aureus ATCC 25923. IC. A. Colección Americana de Cultivos Tipo.. RM. ÁT. Los cultivos de Lactobacillus spp. seleccionados. IN FO. fueron sembrados en caldo MRS durante 24 horas a 37ºC en microaerobiosis. Transcurrido el tiempo de incubación, los. DE. cultivos se centrifugaron a 1500 rpm durante 15 minutos,. AS. manteniendo las condiciones de esterilidad.. SI ST. EM. En placas conteniendo medio BHI más agar se. sembró, por la técnica de siembra en camada, S. aureus. sacabocado estéril y se colocaron en cada pocillo 50µL de los sobrenadantes de los cultivos de Lactobacillus spp. anteriormente centrifugados.. DI. RE. CC. IO. N. DE. ATCC 25923. Luego se practicaron orificios con un. Estas placas fueron incubadas a 37ºC durante 24 horas y la lectura se realizó observando halos de inhibición del crecimiento alrededor de los pocillos.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Asimismo se utilizó un testigo de antibiosis negativo (Solución Salina Fisiológica Estéril) y uno positivo. AC IÓ. N. (Sobrenadante de cepa control de Lactobacillus spp.). 6.1. Control de esterilidad medios. de. cultivos. empleados. CO. Los. M. UN IC. 6. Control de calidad de los medios de cultivo. fueron. A. Y. esterilizados en autoclave a 121 ºC por 15 minutos a 15. ÁT. IC. libras de presión. Para el control de calidad de la esterilidad,. RM. se empleó cinta para control de vapor húmedo 3M. Una vez. IN FO. autoclavados los medios se procedió a servir en placas. DE. estériles, de las cuales fueron tomadas al azar 2 y luego. AS. incubadas a 37 ºC por 24 horas. Para los medios líquidos se. SI ST. EM. procedió de la misma manera.. Para el control de la eficiencia de los medios de. cultivo se empleó cepas patrones de Lactobacillus acidophilus, manifestando crecimiento óptimo en dichos medios de cultivo.. DI. RE. CC. IO. N. DE. 6.2. Control de eficiencia. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) III. RESULTADOS. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El género Lactobacillus está incluido dentro del gran grupo de. Bacterias Ácido Lácticas (BAL). Los cultivos aislados y purificados fueron identificados de acuerdo a los criterios descritos en el Manual Bergey, estas. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. pruebas estuvieron basadas principalmente en las establecidas para las BAL.. N. La pruebas realizadas fueron confirmatorias para este género44,45.. AC IÓ. En la Tabla 1 se muestra las características morfológicas. UN IC. macroscópicas, microscópicas y tintoriales de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes provenientes de la ciudad de Trujillo, Provincia de. CO. M. Trujillo - La Libertad, durante los meses de junio del 2010 a abril del 2011.. Y. La característica cultural de las colonias fueron de bordes regulares y. IC. A. prevaleció la de aspecto cremoso opaco. En las características de morfología. RM. ÁT. individual se observaron bacilos, siendo estos inmóviles y no presentan. IN FO. esporas. Dentro de las características tintoriales, se observaron Gram. DE. positivos y bacilos ácido alcohol sensibles.. AS. En la Tabla 2 se muestran las características bioquímicas de. EM. Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes provenientes de la. SI ST. ciudad de Trujillo, Provincia de Trujillo. Todos los cultivos fueron catalasa,. DE. oxidasa, reducción de nitratos a nitritos, producción de ácido sulfhídrico. N. (H2S), gas e indol negativos y presentaron metabolismo fermentativo. DI. RE. CC. IO. estricto según la prueba de oxidación – fermentación.. Las sales biliares y la acidez gástrica son algunas de las barreras a superar por los microorganismos que actúan como probióticos. De allí partió el interés en realizar el crecimiento de las cepas aisladas en diferentes medios hostiles. En la Tabla 3 se observa la tolerancia al pH ácido y alcalino. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de los cultivos de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes. El 100% de los cultivos mostró una sobrevivencia mayor al 45% al tratamiento. AC IÓ. N. ácido y desarrolló en el tratamiento alcalino.. UN IC. En la Tabla 4 se observa la tolerancia a las sales biliares de los. cultivos de Lactobacillus spp. y el desarrollo de todos los cultivos. CO. M. seleccionados en caldo MRS con 0.3% y 0.5% de sales biliares.. Y. En la Tabla 5 se muestra la evaluación de rasgos de virulencia de. IC. A. Lactobacillus spp. Ninguno de los cultivos presentó actividad gelatinasa ni. RM. ÁT. hemolítica.. IN FO. En la Tabla 6 se muestra la capacidad de coagulación de leche y la actividad antimicrobiana de Lactobacillus spp. Todos los cultivos tuvieron. DE. actividad antimicrobiana pero sólo 12 de ellos tuvieron la capacidad de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. coagular la leche, formando un coágulo compacto.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1.. Características morfológicas y tintoriales de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes provenientes de la ciudad de. AC IÓ. N. Trujillo, Provincia de Trujillo - La Libertad, durante los meses de junio del 2010 a abril del 2011.. Cultural. Forma. Esporulación. regular cremosa. bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo bacilo Bacilo Bacilo Bacilo. -. regular cremosa regular cremosa regular cremosa regular cremosa. AS. regular cremosa. DE. regular cremosa regular cremosa regular cremosa. EM. regular cremosa. SI ST. regular cremosa regular cremosa regular cremosa. N. DE. regular cremosa regular cremosa regular cremosa regular cremosa regular cremosa regular cremosa regular seca regular cremosa. A. IC. IN FO. regular cremosa. ÁT. regular cremosa. RM. regular cremosa. IO. CC RE DI. Individual. CO. Colonia. Y. Puros Nº. M. Morfológicas. Cultivos. Lb 1 Lb 2 Lb 3 Lb 4 Lb 5 Lb 6 Lb 7 Lb 8 Lb 9 Lb 10 Lb 11 Lb 12 Lb 13 Lb 14 Lb 15 Lb 16 Lb 17 Lb 18 Lb 19 Lb 20 Lb 21 Lb 22 Lb 23 Lb 24. UN IC. Características de los cultivos aislados. Tintoriales Gram. BAAR. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. -. Movilidad -. + : Reacción positiva - : Reacción negativa BAAR: Bacilo ácido alcohol resistente. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2. Características bioquímicas de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes provenientes de la ciudad de Trujillo, Provincia de. 2011.. DI. RE. CC. -. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. CO. Y. RM. IN FO. M. Prueba O/F. DE. AS. -. EM. SI ST. -. DE. IO. N. Lb 1 Lb 2 Lb 3 Lb 4 Lb 5 Lb 6 Lb 7 Lb 8 Lb 9 Lb 10 Lb 11 Lb 12 Lb 13 Lb 14 Lb 15 Lb 16 Lb 17 Lb 18 Lb 19 Lb 20 Lb 21 Lb 22 Lb 23 Lb 24. de Nitratos. A. Oxidasa. Ferm.de Glucosa. IC. Catalasa Puro Nº. Reducción. ÁT. Cultivo. UN IC. Características Bioquímicas. AC IÓ. N. Trujillo - La Libertad, durante los meses de junio del 2010 a abril del. Producción. Acido Gas H2S Indol + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. -. -. +: Reacción positiva - : Reacción negativa H2S: Ácido sulfhídrico O/F : Oxidación/Fermentación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. -.

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 3. Tolerancia al medio ácido (pH 2 y pH 3) y al medio alcalino (pH 9), de cultivos de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes. AC IÓ. N. provenientes de la ciudad de Trujillo, Provincia de Trujillo - La. UN IC. Libertad, durante los meses de junio del 2010 a abril del 2011. Tolerancia a pH ácido y alcalino. 90 min. 24 horas. 90 min. 24 horas. Lb 1 Lb 2 Lb 3 Lb 4 Lb 5 Lb 6 Lb 7 Lb 8 Lb 9 Lb 10 Lb 11 Lb 12 Lb 13 Lb 14 Lb 15 Lb 16 Lb 17 Lb 18 Lb 19 Lb 20 Lb 21 Lb 22 Lb 23 Lb 24. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. A. IC ÁT. RM IN FO. DE AS. EM. SI ST. DE. N. IO CC. Tolerancia a pH 9. M. Puro Nº. RE DI. Tolerancia pH 3. 90 min. 24 horas. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. CO. Tolerancia a pH 2. Y. Cultivo. +: indica crecimiento bacteriano. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. +. Lb 6. +. ÁT. +. +. +. Lb 9. +. +. Lb 10. +. +. Lb 11. +. +. Lb 12. +. +. Lb 13. +. +. Lb 14. +. +. Lb 15. +. +. Lb 16. +. +. Lb 17. +. +. Lb 18. +. +. Lb 19. +. +. Lb 20. +. +. Lb 21. +. +. Lb 22. +. +. Lb 23 Lb 24. +. +. +. +. RM. IN FO. DE AS EM SI ST DE N IO CC. +. +. Lb 8. RE. +. +. Lb 7. DI. Y. Lb 5. A. +. IC. Lb 4. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Tabla 4. Desarrollo en medio MRS con diferentes concentraciones de sales biliares de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes provenientes de la ciudad de Trujillo, Provincia de Trujillo - La Libertad, durante los meses de junio del 2010 a abril del 2011. Tolerancia a las Sales Biliares Cultivo a las 24 horas 0.3% 0.5% Puro Nº + + Lb 1 + + Lb 2 + + Lb 3. +: indica crecimiento bacteriano. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 5. Pruebas de virulencia de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes provenientes de la ciudad de Trujillo, Provincia de Trujillo -. AC IÓ. N. La Libertad, durante los meses de junio del 2010 a abril del 2011.. Actividad Gelatinasa. Actividad Hemolítica. M. Cultivo. Y. -. A IC ÁT RM IN FO. DE AS EM. SI ST. DE N IO CC RE DI. -. CO. Puro Nº Lb 1 Lb 2 Lb 3 Lb 4 Lb 5 Lb 6 Lb 7 Lb 8 Lb 9 Lb 10 Lb 11 Lb 12 Lb 13 Lb 14 Lb 15 Lb 16 Lb 17 Lb 18 Lb 19 Lb 20 Lb 21 Lb 22 Lb 23 Lb 24. UN IC. Pruebas de Virulencia. - : Reacción negativa. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 6. Capacidad de coagulación de leche y actividad antimicrobiana de cultivos de Lactobacillus spp. aislados de heces de niños lactantes. AC IÓ. N. provenientes de la ciudad de Trujillo, Provincia de Trujillo - La. UN IC. Libertad, durante los meses de junio del 2010 a abril del 2011.. Cultivo. Coagulación de Leche. CO. M. Capacidad de los Cultivos. Actividad Antimicrobiana. DI. RE. CC. IO. N. A IC ÁT RM IN FO. DE. + + + + + + + + + + + + -. AS EM SI ST. DE. Lb 1 Lb 2 Lb 3 Lb 4 Lb 5 Lb 6 Lb 7 Lb 8 Lb 9 Lb 10 Lb 11 Lb 12 Lb 13 Lb 14 Lb 15 Lb 16 Lb 17 Lb 18 Lb 19 Lb 20 Lb 21 Lb 22 Lb 23 Lb 24. Y. Puro Nº. + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +. +: Reacción positiva - : Reacción negativa. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV. DISCUSIÓN. AC IÓ. N. 24 cultivos fueron aislados de heces de niños lactantes e identificados como Lactobacillus spp. según su fenotipo. Fueron aislados en. UN IC. medio sólido y conservados en medio líquido, se observaron como colonias. M. medianas, de bordes regulares y de aspecto cremoso y seco u opaco (Tabla. CO. 1). Esta morfología cultural variada coincide con lo presentado por Jackson. Y. y Vera que aislaron BAL dentro de ellos Lactobacillus a partir de heces. RM. ÁT. IC. A. humanas y masas fermentadas respectivamente46.. IN FO. Por décadas la diferenciación entre género ha sido basada en las características fenotípicas. Bajo el microscopio de luz las bacterias del. DE. género Lactobacillus se observan generalmente como bacilos Gram. AS. positivos, no esporulados y ácido alcohol sensibles (Tabla 1); sin embargo. SI ST. EM. la morfología celular dentro del mismo género varía mucho ya que puede presentarse formas largas, cortas, rectas, ligeramente curvadas o. Por sus características bioquímicas, estas bacterias pueden. CC. IO. N. DE. cocobacilares dependiendo de las especies y subespecies19.. DI. RE. considerarse como pertenecientes al género Lactobacillus debido a su. capacidad de crecer en condiciones de microaerobiosis, ser inmóviles, así también por presentar una reacción catalasa, oxidasa y producción de H2S negativos y por producir acidez a partir de la fermentación de la glucosa. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (Tabla 2)44,45. La movilidad y la producción de H2S son usualmente negativos a excepción de algunas especies19. Arici y col. aislaron especies. AC IÓ. N. como Lactobacillus paracasei ssp. paracasei, L. fermentum y L. buchneri a partir de heces de niños, los cuales produjeron grandes cantidades de H2S en. CO. M. UN IC. agar TSI28.. Y. Los microorganismos anaerobios facultativos como es el caso de. IC. A. Lactobacillus presentan un tipo de metabolismo estrictamente fermentativo.. RM. ÁT. Las bacterias Homofermentativas utilizan la vía de Embden Meyerhof-. IN FO. Warburg—Parnas (EMWP) para generar lactato como el único producto de la fermentación, mientras que las bacterias Heterofermentativas utilizan la. DE. vía de las Pentosas fosfocetolasas (PKP) para producir una mezcla de CO 2,. AS. etanol, acetato y lactato16,31. Según los resultados obtenidos en el presente. EM. trabajo (Tabla 2) se observó que una de las características de los cultivos. SI ST. evaluados fue su metabolismo fermentativo ya que se observó en los 24. DE. cultivos la producción de acidez a partir de la fermentación de la glucosa. DI. RE. CC. IO. N. tanto en aerobiosis como en anaerobiosis.. La fermentación homoláctica de la glucosa se lleva a cabo por la vía de Embden-Meyerhof por la cual convierte un mol de azúcar en dos de ácido láctico utilizando para dicho fin la presencia de la enzima Aldolasa, la. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cual escinde la Fructosa-1,6bisP en dos moléculas de Triosa-3P. Teniendo en cuenta los resultados, todos los cultivos aislados presentaron. N. fermentación homoláctica, dado por la presencia de acidez marcada y la. AC IÓ. ausencia de gas en los tubos evaluados (Tabla 2)47. Estos resultados son. UN IC. comparados con los estudios que realizó Badis en leche de cabra, en los. M. cuales aisló gran cantidad de especies de Lactobacillus con características. Y. CO. homolácticas.. IC. A. La fermentación heteroláctica en cambio se lleva a cabo por la vía. RM. ÁT. de las Pentosas Fosfato, en la cual sólo cerca de la mitad de la glucosa es. IN FO. convertida en ácido láctico y el resto aparece como CO2, alcohol, ácido fórmico o acido acético. Éstas carecen de la enzima Aldolasa y no pueden. DE. romper la Fructosa-1,6bisP a Triosa-3P, en cambio oxidan la glucosa-6P a. AS. 6-fosfogluconato que luego descarboxilan para producir pentosa fosfato;. EM. ésta, a su vez, se escinde en triosa fosfato y acetil fosfato mediante la. SI ST. enzima fosfocetolasa47. En este caso según los datos obtenidos, ninguno de. Los microorganismos probióticos tienen la necesidad de resistir a. CC. IO. N. DE. los cultivos resultaron ser heterofermentativos.. DI. RE. los factores adversos en el tracto gastrointestinal cuando pasan a través de ella, como la acidez del estómago y las sales biliares que se excretan en el duodeno.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para. esta. investigación. se. decidió. seleccionar. las. cepas. con una resistencia de más del 45%, para asegurar que las bacterias lleguen. N. a la concentración adecuada (6 a 8 logaritmos / g de consumo alimentos) en. AC IÓ. el intestino y ejerzan su efecto probiótico57. Las bacterias probióticas deben. UN IC. alcanzar el sitio donde desarrollan su acción benéfica por lo que es. M. necesario que sobrevivan a las barreras del tracto gastrointestinal. La. CO. primera barrera es la disminución de los valores de pH en el estómago con. Y. una exposición de 90 minutos29. Aunque el pH del estómago puede llegar a. IC. A. 1, la mayoría de investigadores utilizan como referencia pH3.0, ya que a pH. RM. ÁT. inferior a 2.0 se produce, de forma general un importante descenso de la. IN FO. viabilidad de estos microorganismos16. Existen muchos estudios en relación al estudio cuantitativo de tolerancia a la acidez de los Lactobacillus, los. DE. cuales indican que dichas cepas toleran in vitro durante 90 minutos a pH 2.0. AS. y durante 3 horas a pHs 3.0 y 3,5 32,48,49,50. En nuestro estudio utilizamos una. EM. prueba cuantitativa, motivo por el cual los resultados se pueden comparar de. SI ST. forma directa con los que se obtienen por métodos cuantitativos. Los. DE. resultados obtenidos reportaron que todos los cultivos aislados resistieron. N. las condiciones extremas de pH 3.0 durante 3 horas, sobreviviendo más del. CC. IO. 45%. Esta capacidad es atribuida a la presencia de un gradiente constante. DI. RE. entre el pH extracelular y citoplasmático de la bacteria, cuando éstas alcanzan un valor umbral las funciones celulares son inhibidas y las células mueren51.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La resistencia a las sales biliares es considerada una característica importante en cepas que serán denominadas probióticas52. En el presente. AC IÓ. N. estudio todos los cultivos evaluados demostraron tolerar y crecer en presencia de 0.3% de sales biliares durante 4 y 8 horas, e incluso a las 24. UN IC. horas. Se menciona, que el promedio de concentración de sales biliares es. M. alrededor de 0.3% y que puede llegar hasta 2.0% durante la primera hora de. CO. digestión. Este efecto ha sido investigado por muchos autores como Cebeci. Y. y Gürakan (2003), Boonkumklao y col (2006) y Rondón y col (2008) y se. IC. A. piensa que pueden estar relacionadas con la habilidad para desconjugar las. RM. ÁT. sales biliares por la actividad enzimática específica de la Sal Biliar. IN FO. Hidrolasa (SBH), la cual hidroliza la bilis conjugada y así reduce su efecto. DE. tóxico49,51.. AS. Para ser considerado como bacteria probiótica, ésta no debe tener. DE. SI ST. patógenos11.. EM. características de virulencia, es decir no invasivos, no carcinógenos y no. N. Una de las consideraciones que hay que tener en cuenta en el. CC. IO. momento de caracterizar probióticos son los criterios de seguridad, aunque. DI. RE. no se han encontrado propiedades patógenas o virulentas en Lactobacillus,. en ciertas condiciones, algunas cepas han sido relacionadas con efectos perjudiciales, como por ejemplo raros casos de bacteremia. Es por ello, que dentro del presente estudio se consideraron pruebas de factores de virulencia. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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