Efecto in vitro de diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid sobre la germinación y crecimiento de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. SI ST. EM. AS. DE. Efecto in vitro de diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid sobre la germinación y crecimiento de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii. DE. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. AUTOR: Br. BERRU ZAVALETA LISSET YHAIRA. DI. RE. CC. IO. N. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. TRUJILLO-PERÚ 2013. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. Orlando Velásquez Benites. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. IC. A. Y. CO. M. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ÁT. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. RM. VICE-RECTORA ACADÉMICA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. EM. AS. DE. IN FO. TRUJILLO. Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori. NACIONAL DE TRUJILLO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. VICE-RECTORA ADMINISTRATIVA DE LA UNIVERSIDAD. Dr. Santiago Alberto Uceda Duclos. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. Dr. Hermes Mario Escalante Añorga. M. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. ÁT. IC. A. Y. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. RM. Dr. César Agusto Jara Campos. AS. DE. IN FO. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EM. Dra. Bertha Soriano Bernilla. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe: Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg asesor de la presente. AC IÓ. N. tesis titulada: Efecto in vitro de diferentes concentraciones del insecticida. Imidacloprid sobre la germinación y crecimiento de Beauveria bassiana y. M. UN IC. Hirsutella thompsonii.. Y. CO. CERTIFICA:. IC. A. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. ÁT. correspondiente proyecto de tesis y teniendo en cuenta las orientaciones. RM. pertinentes.. Que, el informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las. IN FO. observaciones y sugerencias alcanzadas. Por ello, autorizo a la Bachiller Berrú Zavaleta Lisset Yhaíra para continuar con los procedimientos correspondientes. AS. DE. según sus fines.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Trujillo, Diciembre 2013. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de. UN IC. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a su consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada: Efecto in vitro de. M. diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid sobre la germinación y. RM. ÁT. Espero que este trabajo sea de su aprobación.. IC. A. Y. obtener el título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. CO. crecimiento de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii, con el objetivo de. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. Trujillo, Diciembre 2013. DI. RE. CC. Br. Lisset Yhaira Berrú Zavaleta. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. --------------------------------------------. M. Ms.C. Gerardo Alayo Espinoza. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. PRESIDENTE. --------------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg. -----------------------------------------------Ms.C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaran que el presente Informe de Tesis titulado: Efecto in vitro de diferentes concentraciones. AC IÓ. N. del insecticida Imidacloprid sobre la germinación y crecimiento de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii, ha cumplido con los requisitos formales y. IC. A. Y. CO. M. UN IC. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. ÁT. --------------------------------------------. RM. Ms.C. Gerardo Alayo Espinoza. EM. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. --------------------------------------------. -----------------------------------------------Ms.C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A Dios por guiarme, y permitir concluir un objetivo. AC IÓ. N. más en mi vida. A mis padres, por ser los mejores amigos infalibles. UN IC. que me han ayudado a crecer como persona, con mucho amor y cariño les dedico todo mi esfuerzo y. M. trabajo puesto para la realización de esta tesis,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. momento.. mi apoyo en todo. Y. bienestar y educación siendo. CO. quienes a lo largo de mi vida han velado por mi. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. Al Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, Profesor Auxiliar D.E. del. AC IÓ. N. Departamento de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de. CO. M. UN IC. Trujillo, por otorgarme el asesoramiento en la realización de la presente Tesis.. Y. Al Ms.C. Miguel Ángel Muñoz Ríos, Profesor Auxiliar T.C. del. IC. A. Departamento de Microbiología y Parasitología de Universidad Nacional de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. Trujillo por su apoyo incondicional para la realización de este trabajo.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se determinó el efecto de diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid. AC IÓ. N. sobre la germinación y crecimiento de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii, para lo cual se trabajó con 3 concentraciones distintas de Imidacloprid. UN IC. (87.5 ppm, 175 ppm y 350 ppm). El efecto de Imidacloprid sobre el porcentaje de. CO. M. germinación de B.bassiana y H. thompsonii se determinó colocando 2mLde cada concentración del insecticida en frascos pequeños, adicionando. 2mL de la. A. Y. suspensión de esporas, con lo cual se obtuvo una concentración final de 1x105. ÁT. IC. esporas/mL , incubándose a una temperatura de 25 ºC, durante 24 horas, al cabo. RM. de las cuales se realizó el conteo de conidias germinadas y no germinadas.Para el. IN FO. porcentaje de crecimiento se incorporó el insecticida en agar Sabouraud, y se. DE. sirvió en placas Petri, así como también una placa control para cada hongo, se. AS. sembró por puntura en la parte central de las placas de Petri de acuerdo a su. 3 días. Se encontró. que Imidacloprid no disminuye. SI ST. ambiente durante. EM. correspondiente concentración de cada insecticida, incubándose a temperatura. significativamente la germinación in vitro de los hongos B .bassiana y H.. DE. thompsonii. En relación al crecimiento radial de estos hongos, se encontró que. IO. N. Imidacloprid a concentraciones mayores tiene un efecto negativo sobre el. DI. RE. CC. crecimiento, mientras que a concentraciones menores no hubo ningún efecto.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO Pág.. AC IÓ. Asesor............................................................................................................ N. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo .................................... UN IC. Presentación.................................................................................................. Miembros del Jurado..................................................................................... CO. M. Aprobación……………………………………………………………….... Y. Dedicatoria..................................................................................................... IC. A. Agradecimientos............................................................................................ iv v vi vii viii ix x. IN FO. RM. ÁT. Resumen........................................................................................................ ii. DE. INTRODUCCIÓN......................................................................................... AS. MATERIAL Y MÉTODOS .......................................................................... EM. 1. Material de estudio................................................................................ SI ST. 2. Procedimiento........................................................................................ 1. 7 7 7. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2.1 Resiembra de los cultivos de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii …..…...………………………….. 7. 2.2 Evaluación del efecto del insecticida Imidacloprid sobrela germinación Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii .……………………………………………………… 2.2.1 Evaluación del efecto del insecticida sobre la germinación de esporas de Beauveria bassiana. ….. 2.2.1.1. Preparación. de. las. soluciones. 7. 7. doble. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. concentradas del insecticida Imidacloprid……… 7 2.2.1.2 Reactivación del cultivo de Beauveria bassiana 2.2.1.3 Preparación del inóculo de esporas……………. N. AC IÓ. 2.2.1.4 Inoculación e incubación para la evaluación de. 8. UN IC. la germinación………………………………... 2.2.1.5 Lectura…………………………………………. 8 9. CO. M. 2.2.2 Evaluación del efecto del insecticida sobre la. 9. Y. germinación de esporas de Hirsutella thompsonii….. IC. A. 2.3 Evaluación del efecto del insecticida Imidacloprid sobre. ÁT. el crecimiento de Beauveria bassiana y Hirsutella. RM. thompsonii…………………………………………………….. 9. IN FO. 2.3.1 Evaluación del efecto del insecticida sobre el 9. DE. crecimiento de Beauveria bassiana…………………….. AS. 2.3.1.1 Preparación del medio de cultivo con diferentes. EM. concentraciones del insecticida………………….. SI ST. 2.3.1.2 Siembra e incubación…………………………….. 2.3.1.3 Lectura…………………………………………….. 10 10 11. DE. 2.3.2 Evaluación del efecto del insecticida sobre el 11. .. 3. Análisis de datos……………………………………………………. 11. DI. RE. CC. IO. N. crecimiento de Hirsutella thompsonii……………………. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS........................................................................................... 12 Fig.. 1. Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana frente a. de. laboratorio. y. a. las. 24. horas. de. AC IÓ. condiciones. N. diferentes concentraciones (ppm) del insecticida Imidacloprid en. 13. UN IC. incubación...................................................................................... Fig.2. Observación microscópica (40x) de esporas de Beauveria. CO. M. bassiana frente a diferentes concentraciones del insecticida. 14. Y. Imidacloprid……………………………………………………... IC. A. Fig.3. Porcentaje de germinación de Hirsutella thompsonii frente a. ÁT. diferentes concentraciones (ppm) del insecticida Imidacloprid,. RM. en condiciones de laboratorio y a las 24 horas de. IN FO. incubación……........................................................................... 15. DE. Fig.4. Observación microscópica (40x) de esporas de Hirsutella. AS. thompsonii frente a diferentes concentraciones del insecticida 16. EM. Imidacloprid (ppm)……………………………………………. Porcentaje de Crecimiento de Beauveria bassiana frente a. SI ST. Fig.5.. diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid, en. DE. condiciones. de. laboratorio. y. a. los. 10. días. de 17. CC. IO. N. incubación.................................................................................... DI. RE. Fig. 6. Crecimiento radial de Beauveria bassiana frente a diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid, en condiciones de laboratorio y a los 10 días de incubación………………………. 18. Fig.7. Porcentaje de crecimiento de Hirsutella thompsonii frente a. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. diferentes concentraciones (ppm) del insecticida Imidacloprid, en condiciones de laboratorio. y a. los. 10. días de. AC IÓ. Fig. 8. Crecimiento radial de Hirsutella thompsonii frente a diferentes. 19. N. incubación……………………………………………………….. UN IC. concentraciones del insecticida Imidacloprid, en condiciones de. M. laboratorio y a los 3 días de incubación……………………….. 21. Y. CO. DISCUSIÓN................................................................................................. 20. 27. ÁT. IC. A. CONCLUSIONES...................................................................................... 28. IN FO. RM. RECOMENDACIONES............................................................................. DE. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ....................................................... 34. EM. AS. ANEXOS……………………………………………………..………....... 29. SI ST. Anexo 1. Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana frente a las. DE. diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid (ppm).. DI. RE. CC. IO. N. Anexo 2. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de germinación de. Beauveria. bassiana. frente. a. las. diferentes. concentraciones del insecticida Imidacloprid, utilizando el método HSD de Tukey.. Anexo 3. Porcentaje de germinación de Hirsutella thompsonii frente a las diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid (ppm).. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 4. Análisis de varianza (ANAVA) del porcentaje de germinación de. Hirsutella. thompsonii. frente. a. las. diferentes. concentraciones del insecticida Imidacloprid, utilizando el. UN IC. AC IÓ. N. método HSD de Tukey.. Anexo 5. Porcentaje de crecimiento de Beauveria bassiana frente a las. CO. M. diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid. Y. (ppm).. IC. A. Anexo 6. Crecimiento radial de Beauveria bassiana a la concentración. ÁT. de 0 ppm del insecticida Imidacloprid durante 10 días de. RM. evaluación en condiciones de laboratorio. IN FO. Anexo 7. Crecimiento radial de Beauveria bassiana a la concentración. DE. de 87,5 ppm del insecticida Imidacloprid durante 10 días de. AS. evaluación en condiciones de laboratorio……………………….. EM. Anexo 8. Crecimiento radial de Beauveria bassiana a la concentración. SI ST. de 175 ppm del insecticida Imidacloprid durante 10 días de evaluación en condiciones de laboratorio…………………….. CC. IO. N. DE. Anexo 9. Crecimiento radial de Beauveria bassiana a la concentración de 350 ppm del insecticida Imidacloprid durante 10 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. DI. RE. Anexo10. Análisis de varianza (ANAVA) de la media de crecimiento de Beauveria bassiana frente a las diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid, utilizando el método HSD de Tukey. Anexo 11. Porcentaje de crecimiento de Hirsutella thompsonii frente a. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid (ppm).. de 0 ppm del insecticida Imidacloprid. AC IÓ. concentración. N. Anexo 12. Crecimiento radial de Hirsutella thompsonii a la. condiciones de. UN IC. durante 10 días de evaluación en laboratorio. de 87,5 ppm del insecticida Imidacloprid condiciones de. IC. A. durante 10 días de evaluación en. Y. concentración. CO. M. Anexo 13. Crecimiento radial de Hirsutella thompsonii a la. ÁT. laboratorio. de 175 ppm del insecticida Imidacloprid. IN FO. concentración. RM. Anexo 14. Crecimiento radial de Hirsutella thompsonii a la. AS. laboratorio. condiciones de. DE. durante 10 días de evaluación en. EM. Anexo 15. Crecimiento radial de Hirsutella thompsonii a la de 350 ppm del insecticida Imidacloprid. SI ST. concentración. durante 10 días de evaluación en. condiciones de. DE. laboratorio. DI. RE. CC. IO. N. Anexo 16. Análisis de varianza (ANAVA) de la media de crecimiento de. Hirsutella. thompsonii. frente. a. las. diferentes. concentraciones del insecticida Imidacloprid utilizando el método HSD de Tukey.. xvi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. N. La mayor parte de los problemas fitosanitarios son causados por hongos,. AC IÓ. insectos, virus y nemátodos, quienes colonizan diversas partes de la planta,. UN IC. provocando desde la disminución de la calidad del producto y hasta la pérdida total del cultivo1. Sin embargo las enfermedades de las plantas varían generalmente en la. CO. M. cantidad de problemas que causan, dependiendo de una gran variedad de. IC. A. Y. condiciones y el ciclo de la enfermedad del organismo implicado1, 2,3.. RM. ÁT. En la última década han ido apareciendo diferentes métodos de control de. IN FO. plagas. Se entiende como control de una plaga, a aquel que logra mantener su población en un nivel de densidad que resulte menor que aquel en que comienza a. DE. producir daños económicos4. Es por ello que los objetivos y acciones de un método. AS. de control, es proteger los cultivos y las cosechas del ataque de las plagas,. SI ST. EM. utilizando recursos naturales y/o técnicas artificiales 5.. DE. El control de plagas y enfermedades depende, en gran parte, de la aplicación de. N. productos químicos5. Estos productos representan un papel muy importante en la. CC. IO. reducción de los daños económicos en los cultivos. Sin embargo la toxicidad. RE. elevada de algunos de ellos, su persistencia en el medio y su mal uso han llevado a. DI. un replanteamiento de las técnicas de control de plagas6.. Imidacloprid es un insecticida de amplio espectro cuyo. principio activo es 1-. (6-chloro-3-pyridylmethyl)-N-nitroimidazolidin-2-ylideneamine; pertenece a un. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. nuevo grupo químico conocido como cloronicotinilos que se caracterizan porque afectan la transmisión de los estímulos del sistema nervioso de los insectos. Por su mecanismo de acción ha sido clasificado en el grupo de los neonicotinoides, debido. AC IÓ. N. a que se asocia con los receptores nicotínicos en la membrana postsináptica. Actúa. UN IC. por contacto e ingestión y en actividad sistémica. Su alta solubilidad en el agua permite que sea absorbido por las raíces cuando se aplica al suelo a través de los. CO. M. sistemas de riego presurizado o en tratamiento de semillas. Aplicado al follaje es también absorbido por las hojas moviéndose en el interior de la planta en forma. ÁT. IC. A. Y. ascendente7.. RM. A pesar de todo los beneficios que ofrecen los controladores químicos o. IN FO. plaguicidas, como es el caso de los insecticidas, pueden convertirse en un serio. DE. problema para el agricultor y la sociedad, ya que toda sustancia química usada en la. AS. agricultura puede provocar un efecto negativo en el ambiente si es mal aplicada o. EM. utilizada en altas dosis, pudiendo causar el uso prolongado de un mismo plaguicida. SI ST. problemas de resistencia, fenómeno que consiste en la aparición de biotipos. DE. tolerantes de una especie anteriormente controlada por un plaguicida 8.. IO. N. Por lo tanto, es necesario y conveniente que los programas de Manejo. CC. Integrado de Plagas (MIP) y Manejo integrado del Cultivo (MIC) incluyan el uso. DI. RE. racional de estos plaguicidas químicos, basados en parte en el desarrollo de estrategias y manejo y prevención del desarrollo de resistencia a los plaguicidas por los insectos y patógenos9 .Por estas. razones se requieren de nuevas estrategias. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. para el control de plagas y enfermedades. Por ello una de las estrategias como alternativa atractiva podría ser el control biológico de plagas10, 11. El control biológico contempla la introducción de especies no- nativas de. AC IÓ. N. controladores y el uso de plaguicidas derivados de animales, plantas, hongos,. bacterias, virus y minerales con el objetivo de prevenir, repeler, eliminar o bien. UN IC. reducir el daño causado por las plagas9,10. Además estos existen en la naturaleza. M. como una forma natural de mantener el equilibrio de las poblaciones de la flora y la. Y. CO. fauna12. Dentro de este contexto, los hongos entomopatógenos son los primeros. A. agentes en ser utilizados para el control de plagas, siendo las especies más. RM. ÁT. IC. utilizadas Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii13.. IN FO. Beauveria bassiana es un hongo filamentoso de la clase Hyphomycete, y está. DE. conformada por hifas septadas de 2,5 a 25 μm de diámetro, de donde se forman. AS. conidióforos simples raramente agrupados, con apariencia de jarrón (más ancho en. EM. el centro que en los extremos), los cuales sostienen los conidios, originados de. SI ST. forma simpodial o acrópeta, dando una apariencia en zigzag al raquis. Tanto las. DE. esporas como las hifas, no son pigmentadas (hialinas) 14.. IO. N. El hongo B. bassiana conocido como entomopatógeno desde 1835 año en que. CC. se descubrió causando la muerte de gusanos de seda (Commonwealth Mycological. DI. RE. Institute, 1979). Se encuentra de forma natural en suelos y sobre diversos órdenes de insectos (coleópteros, dípteros, heterópteros, homópteros, lepidópteros, tisanópteros) así como sobre ácaros tetraníquidos, por lo que ha sido utilizado para el control de plagas de dichos órdenes en diversos países5.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El hongo Hirsutella thompsonii, pertenece al phyllum Deuteromycota (hongo imperfecto), clase Hyphomycetes y orden Moniliales, presenta micelio septado,. AC IÓ. N. fino y hialino con un diámetro de 1.7 a 3.3 m. La hifa se desarrolla generalmente en. UN IC. forma simple excepto en especies que producen simena, esporula moderadamente, su célula conidiógena es una fiálide gris de 10 a 15 mm de longitud originándose en. M. las partes laterales de la hifa. Las conidias son esféricas de 2 a 4 mm de diámetro. IC. A. Y. CO. con la superficie verrucosa15.. ÁT. Hirsitella thompsonii es un patógeno especifico de ácaros, principalmente. RM. eriófidos y tetraníquidos. La conidia de este hongo entra en contacto con la cutícula. IN FO. del ácaro, la cual se caracteriza por producir una capa húmeda a manera de. DE. mucilago que sirve en la adhesión de estas sobre su hospedero; la invasión del. AS. hemocele es por penetración directa de la cutícula y posteriormente coloniza el. SI ST. EM. interior del ácaro16.. Sin embargo y dado que en general el control biológico no basta por sí solo. DE. para reducir las densidades de población de los artrópodos plaga por debajo de los. IO. N. umbrales económicos de daños, hay que tratar de compatibilizar su uso con otras. CC. muchas técnicas, en especial, el control químico 17. Aunque el control químico se. DI. RE. utiliza hoy en día de una forma más racional que antaño, aún existen muchos insecticidas autorizados en los cultivos que pueden ser no selectivos para una cierta especie de enemigo natural18. Por tanto dentro del MIP se han realizado diversos. estudios de compatibilidad entre controladores biológicos (organismos benéficos) y. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. los diversos plaguicidas. 19. .Así, Batista, Almeida y Lamas estudiaron la. compatibilidad in vitro de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii con dos concentraciones de Thiamethoxam, encontrando que dichos hongos eran. UN IC. AC IÓ. N. compatibles con este químico. 20.. Asimismo, Sanpedro y Rosas estudiaron la acción tóxica de los plaguicidas:. CO. M. Cupravit®,Maneb®,Malathion® ,Morestan® y Nuvacron® sobre cuatro cepas de. Y. H.thompsonii, encontrando que Nuvacron® , Morestan® y Malathion® serían los. A. plaguicidas a recomendar en un programa de Manejo Integrado de Plagas (MIP),. RM. ÁT. IC. donde se utilice H. thompsonii21.. IN FO. De la misma manera Anderson y col. Evaluaron la compatibilidad “in vitro”. DE. de 13 aislamientos nativos de Beauveria bassiana con insecticidas químicos piretroides (ciperetrina,deltametrina),. AS. organofoforados (Malatión, Fenitron). EM. encontrándose que las formulaciones ensayadas afectaron significativamente la. SI ST. germinación conidial, aunque de una manera diferencial dependiendo del aislamiento fúngico, el insecticida y la dosis. La Cipermetrina manifestó un. DE. comportamiento esporicida sobre los 13 aislamientos, y la mayor compatibilidad, a. IO. N. la mitad de la dosis recomendada22. Además Smitha y col. estudiaron el efecto de. CC. insecticidas como: Carbendazim, Quinalphos, Phorate, Carbaryl y Chlorpyriphos. DI. RE. sobre Hirsutella sp encontrando que Phorate presentaba compatibilidad con este. hongo, ya que inhibía en un menor porcentaje su crecimiento; por el contrario Carbendazim, Quinalphos, Carbaryl y Chlorpyriphoseran considerados altamente tóxicos para este hongo 23.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Por otro lado Alves et al. (1993), demostró que Torque 500 SC, Danimen300 CE y Morestan50, presentaron selectividad sobre Hirsutella sp24.. AC IÓ. N. Ante la escasa información sobre la compatibilidad de los agroquímicos y otros. UN IC. hongos habitantes del suelo como B. bassiana y H.thompsonii, es crucial que el agricultor conozca acerca de los impactos adversos que Imidacloprid y pueda tener. CO. M. sobre la eficacia de organismos utilizados como controladores biológicos, esto. Y. permitirá a los agricultores encontrar la dosis apropiada entre los controladores. IC. A. biológicos y los químicos, para así planificar mejor la aplicación de los tratamientos. IN FO. RM. actividad de los hongos habitantes del suelo.. ÁT. fúngicos y/o químicos adecuados a efecto de minimizar cualquier efecto nocivo a la. DE. Por tal razón, el presente trabajo de investigación tiene como objetivo conocer. AS. el efecto “in vitro” de Imidacloprid sobre la germinación y crecimiento de B.. EM. bassiana y H.thompsonii, a fin de conocer si existe alguna incompatibilidad entre. SI ST. este producto agrícola y estos hongos, ya que de darse dicha incompatibilidad sería muy importante un cambio inmediato en las medidas de control que se dan en. DE. las empresas agrícolas, como las de La Libertad donde se efectúan este tipo de. DI. RE. CC. IO. N. control.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. 1. Material de estudio Cultivos puros de Beauveria bassiana y de Hirsutella thompsonii proporcionados. por. el. Laboratorio. de. AC IÓ. N. . Fitopatología. del. UN IC. Departamento Académico de Microbiología y Parasitología,. Insecticida “LANCER” , cuyo principio activo es el Imidacloprid. CO. . M. Universidad Nacional de Trujillo.. A. Y. 2. Métodos. IC. 2.1 Resiembra de los cultivos de Beauveria bassiana y Hirsutella. RM. ÁT. thompsonii:. proporcionados. IN FO. Los cultivos puros de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii por. el Laboratorio de Fitopatología, fueron. DE. sembrados en tubos de ensayo de 16 x 180 mm conteniendo Agar Sabouraud e incubados a temperatura ambiental (aprox. 25 ± 2 ºC),. EM. AS. durante 10 días.. SI ST. 2.2 Evaluación del efecto del insecticida Imidacloprid sobre la. DE. germinación Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii.. DI. RE. CC. IO. N. 2.2.1 Evaluación del efecto del insecticida sobre la germinación de esporas de Beauveria bassiana. 2.2.1.1 Preparación de las soluciones doble concentradas del insecticida Imidacloprid Se realizaron diferentes. diluciones del insecticida. Imidacloprid en agua destilada estéril hasta alcanzar las. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. concentraciones de 175, 350, y 700 ppm a partir de su muestra original 2.2.1.2 Reactivación del cultivo de Beauveria bassiana. AC IÓ. N. Para la reactivación de Beauveria bassiana a partir del. UN IC. cultivo puro guardado se procedió a sembrar por puntura en frascos planos con agar Sabouraud inclinado y luego se. CO. M. incubó durante 7 a 10 días a temperatura ambiental.. Y. 2.2.1.3 Preparación del inóculo de esporas. IC. A. El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de. ÁT. solución Tween 80 al 0.1% a cada frasco plano con Agar. RM. Sabouraud que contenía a Beauveria bassiana, luego se. IN FO. agitó moderadamente con el fin de liberar las esporas del. DE. hongo. Seguidamente, la suspensión resultante fue. AS. colocada en un matraz estéril, donde se determinó la. EM. concentración de esporas mediante el recuento en Cámara. final de 2 x 105 esporas/mL.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. de Neubauer, que fue estandarizada a una concentración. 2.2.1.4 Inoculación e incubación para la evaluación de la germinación. Se colocó 2 mL de cada dilución del insecticida doble concentrado en frascos pequeños de vidrio estériles, a los cuales se les agregó 2mL de la suspensión de esporas obtenido previamente, con lo cual se obtuvo una dilución. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de 1x105esp/mL y concentraciones finales de 87.5, 175, y 350 ppm del insecticida Imidacloprid. Se preparó también una suspensión de esporas control (0 ppm), agregándole 2. AC IÓ. N. mL de la suspensión de esporas en 2mL de agua destilada. UN IC. estéril.Posteriormente cada frasco se incubó a una. CO. M. temperatura de 25 ºC como promedio, durante 18 horas.. Y. 2.2.1.5 Lectura. IC. A. Se agregó gotas de azul de lactofenol en cada uno de los. ÁT. frascos (de cada concentración del insecticida y el control),. láminas excavadas Se contaron esporas. IN FO. a 40x en. RM. luego se observó y se realizó el recuento en el microscopio. DE. germinadas, para cada concentración del insecticida. AS. evaluado, incluyendo el control, con el fin de determinar el. EM. porcentaje de germinación de las 3 repeticiones realizadas.. SI ST. 2.2.2 Evaluación del efecto del insecticida sobre la germinación de. Se procedió de la misma manera que el ítem 2.2.. DI. RE. CC. IO. N. DE. esporas de Hirsutella thompsonii.. 2.3 Evaluación del efecto del insecticida Imidacloprid sobre el crecimiento de Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii 2.3.1 Evaluación del efecto del insecticida sobre el crecimiento de Beauveria bassiana. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.1.1 Preparación del medio de cultivo con diferentes concentraciones del insecticida Se preparó Agar Sabouraud para ser mezclado con el. AC IÓ. N. insecticida Imidacloprid, el cual fue vertido en cuatro. UN IC. matraces rotulados, conteniendo cada uno de ellos 120 ml de medio. El medio de cultivo fue esterilizado en autoclave y se. CO. M. dejó enfriar hasta una temperatura aproximada de 50°C.. Y. Estando aún fundido el medio, se procedió a realizar la. IC. A. respectiva mezcla con el químico, de tal manera que a tres de. ÁT. los cuatro matraces se le adicionó el químico hasta obtener. RM. una concentración de 87.5, 175 y350 ppm. El matraz restante,. IN FO. conteniendo medio de cultivo, fue utilizado como testigo, por. DE. ello no se le adicionó sustancia alguna. Luego, el medio de. AS. cultivo de cada matraz fue servido en placas de Petri estériles. SI ST. EM. (cuatro placas por cada concentración, incluyendo el testigo).. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2.3.1.2 Siembra e incubación A partir del cultivo puro de B. bassiana se sembró por puntura en la parte central de las placas Petri conteniendo agar Sabouraud previamente preparadas en el paso anterior (4 placas por concentración incluidas las placas del control); las cuales fueron incubadas a temperatura ambiental por los 3 días.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.1.3 Lectura A partir del segundo hasta el doceavo día de siembra, se midió el radio de crecimiento micelial en milímetros (mm.). AC IÓ. N. del hongo en diferentes direcciones, obteniendo un radio. UN IC. promedio de crecimiento por día por cada concentración de los insecticidas y el grupo control. Los resultados de. CO. M. crecimiento de Beauveria bassiana se expresaron en. Y. milimetros y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en. IC. A. cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%),. IN FO. RM. ÁT. de la siguiente manera:. 2.3.2 Evaluación del efecto del insecticida sobre el crecimiento de. DE. Hirsutella thompsonii. AS. Se procedió de la misma manera que el ítem 2.3. EM. 3. Análisis de datos. SI ST. La determinación del efecto del insecticida Imidacloprid sobre. DE. los hongos evaluados, se realizó analizando el porcentaje de. las diferentes concentraciones del insecticida, procesando los datos en base a la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA). según el paquete estadístico SPSS v. 1.. DI. RE. CC. IO. N. germinación y el porcentaje de crecimiento de dichos hongos, en. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. En la Figura 1. se observa que las tres concentraciones del insecticida. AC IÓ. N. Imidacloprid tienen el mismo efecto sobre la germinación de Beauveria. CO. M. las conidias germinadas y no germinadas de B. bassiana.. UN IC. bassiana, mientras que en la fig.2. Se presenta la observación microscópica de. Y. En la Figura 3. se observa que las tres concentraciones del insecticida. IC. A. Imidacloprid tienen el mismo efecto sobre la germinación de Hirsutella. ÁT. thompsonii, mientras que en la fig.4. se presenta la observación microscópica. IN FO. RM. de las conidias germinadas y no germinadas de H.thompsonii.. DE. En la Figura 5. se observa que el porcentaje de crecimiento de Beauveria. AS. bassiana, disminuye hasta un valor de 94,31%, mientras que en la fig,6.. EM. observamos el crecimiento radial de B.bassiana frente a las diferentes. SI ST. concentraciones del insecticida Imidacloprid.. DE. En la Figura 7. se observa que el porcentaje de crecimiento de Hirsutella. IO. N. thompsonii, disminuye hasta un valor de 84,46 %, mientras que en la fig, 8.. concentraciones del insecticida Imidacloprid.. DI. RE. CC. observamos el crecimiento radial de H.thompsonii frente a las diferentes. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) 100. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. 99.44. 100. a. 96. CO. M. 92.95. 94. a. 88.80. A. 90. Y. 92. a. ÁT. IC. 88 86. RM. Germinación (%) de B. bassiana. UN IC. a. 98. IN FO. 84 82. 87,5 175 Concentración (ppm) de imidacloprid. 350. EM. AS. DE. 0. SI ST. Fig.1.Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana frente a diferentes concentraciones (ppm) del insecticida Imidacloprid a las 24 horas de. a: p>0.05 No existe diferencia significativa. DI. RE. CC. IO. N. DE. incubación.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Control. N. 87.5ppm. AC IÓ. g. g. RM. ÁT. IC. 350ppm. A. 175ppm. Y. CO. M. UN IC. g. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. g. Fig.2.Observación microscópica (40x) de conidias germinadas y no germinadas. DE. de B. Bassiana frente a diferentes concentraciones del insecticida. g: Espora germinada. DI. RE. CC. IO. N. Imidacloprid (ppm).. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) 100. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 85.38. 90. a. M. a. 80. 64.47. a. 70. CO. Germinación (%) de H. thompsonii. UN IC. 93.89. 100. Y. 60. a. IC. A. 50. ÁT. 40. RM. 30 20. IN FO. 10 0. 87.5 175 Concentración (ppm) de imidacloprid. 350. SI ST. EM. AS. DE. 0. Fig. 3. Porcentaje de germinación de Hirsutella thompsonii frente a diferentes. DE. concentraciones (ppm) del insecticida Imidacloprid a las 24 horas de. a: p>0.05 No existe diferencia significativa. DI. RE. CC. IO. N. incubación.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) 87.5ppm m. g. UN IC. Control. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÁT. IC. A. Y. CO. M. g. 350ppm. g. DE. IN FO. RM. 175ppm. DE. SI ST. EM. AS. g. germinadas y no germinadas de H.thompsonii frente a. diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid. g: Espora germinada. DI. RE. CC. IO. N. Fig.4.Conidias. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) 100.00 100.00. 99.06. a. 98.12. CO. 99.00. a. 98.00. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Crecimientio (%) de B. bassiana. Y. a. IC. A. 97.00. ÁT. 96.00. RM. 95.00. b. IN FO. 94.00. DE. 93.00. 94.31. 92.00. AS. 91.00. 87.5. 175. 350. Concentración (ppm) de imidacloprid. DE. SI ST. EM. 0. DI. RE. CC. IO. N. Fig.5. Porcentaje de crecimiento de Beauveria bassiana frente a diferentes concentraciones (ppm) del insecticida Imidacloprid, en condiciones de laboratorio y a los 12 días de incubación. a: p>0.05 No existe diferencia significativa b: p<0.05 Si existe diferencia significativa. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) 87.5ppm. 175ppm. 350ppm. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. Control. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ST. Fig.6.Crecimiento radial de B.bassiana frente a diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid, en condiciones de laboratorio y. DI. RE. CC I. O. N. DE. SI. a los 12 días de incubación.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100.00. UN IC. 100.00. M. 92.80. 95.00. CO. Crecimientio (%) de H. thompsonii. a. a. 87.57. A. Y. 90.00. IC. 84.46. b. ÁT. 85.00. RM. b. IN FO. 80.00. 87.5. 175. 350. Concentración (ppm) de imidacloprid. EM. AS. 0. DE. 75.00. SI ST. .. Fig.7. Porcentaje de crecimiento de Hirsutella thompsonii frente a diferentes. DE. concentraciones (ppm) del insecticida Imidacloprid, en condiciones de. a: p>0.05 No existe diferencia significativa b: p>0.05 No existe diferencia significativa. DI. RE. CC. IO. N. laboratorio y a los 12 días de incubación.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) 175ppm. 87,5ppm. 350ppm. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. Control. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC I. O. N. DE. SI. laboratorio y a los 12 días de incubación.. ST. Fig.8.Crecimiento radial de H. thompsonii frente a diferentes concentraciones del insecticida Imidacloprid, en condiciones de. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. En relación a los resultados obtenidos sobre el porcentaje de germinación de. conforme aumentó la concentración del. UN IC. que hubo una leve disminución. AC IÓ. N. Beauveria bassiana y Hirsutella thompsonii (Figura 1 y 3 ), se puede observar. insecticida Imidacloprid , presentando las concentraciones de 87,5 ppm a 350. CO. M. ppm valores entre 99.44 hasta 88.80 %, en el caso del hongo B.bassiana. Y. ;mientras que las mismas concentraciones del mencionado químico sobre la. IC. A. germinación de H. thompsonii , presentaron valores de 93,89 hasta 64,47 %. ÁT. .Así pues pese a que el porcentaje de germinación para H. thompsonii fue. RM. mucho menor a la concentración 350 ppm ,en comparación con B. bassiana; al. IN FO. realizar el análisis estadístico (Anexo 2 y 4) se puede comprobar que no existe. DE. diferencia significativa entre las concentraciones 0 ppm,87,5 ppm, 175 ppm y. AS. 350 ppm, para ambos hongos, es decir este químico no tuvo ningún efecto. SI ST. EM. sobre la germinación.. DE. El hecho de que las concentraciones utilizadas de Imidacloprid no hayan tenido. N. ningún efecto sobre la germinación de Beauveria bassiana y Hirsutella. CC. IO. thompsonii, (Figura 1 y 3), puede deberse a que estos organismos como un. DI. RE. mecanismo fisiológico de resistencia a Imidacloprid25, puedan metabolizarlo y liberar compuestos que puedan ser utilizados, como nutrientes secundarios. Así como también las sustancias presentes en la formulación de este insecticida, podrían utilizarse directamente como nutrientes, permitiendo la germinación de dichos hongos. 26,27. .Ademas existen estudios donde demuestran, que ciertos. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hongos como Trichoderma, son capaces de metabolizar a través de su batería enzimática insecticidas como clorpirifos, utilizándolo como fuente de azufre y. AC IÓ. N. de fósforo28.. UN IC. Así mismo el porcentaje de germinación de B. bassiana y H. thompsonii frente a Imidacloprid, es relativamente bajo, apreciando también que gran porcentaje. CO. M. de las conidias si germinaron, esto puede deberse a que existe una variabilidad genética entre conidias, lo cual les confiere resistencia a inhibidores. Y. 29. .. ÁT. IC. A. microbianos. RM. En las Fig. 5 respecto al porcentaje de crecimiento de B. bassiana frente al. IN FO. insecticida Imidacloprid, se puede observar que hubo una disminución hasta. DE. de 94,31 %, a la concentración de 350 ppm. Sin embargo a pesar que los. AS. porcentajes de crecimiento fueron muy cercanos al control, según el análisis. EM. estadístico (Anexo 10 ) , se observa que no existe diferencia significativa entre. SI ST. el control y concentraciones menores de 350 ppm, es decir estadísticamente son iguales y por lo tanto no producen ningún efecto sobre el crecimiento;. DE. mientras que entre el control y 350 ppm si hubo diferencia significativa, es. IO. N. decir a partir de esta concentración hubo un efecto negativo sobre el. DI. RE. CC. crecimiento de B. bassiana.. En la Fig. 7 sobre el porcentaje crecimiento de H. thompsonii frente a Imidacloprid, a diferencia que en la Fig. 5, se puede observar que fue mucho menor, presentado valores de 92, 80 hasta 84,46 % a las concentraciones de 87,5 ppm a 350 ppm; sin embargo, según el análisis estadístico (Anexo 16), se. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. muestra que a 0 ppm y 87,5 ppm no hay diferencia significativa, es decir a 87,5 ppm no se afecta el crecimiento; en cambio a 0 ppm y 175 ppm si hubo diferencia significativa, es decir a partir de 175 ppm, hubo una disminución. Sobre el crecimiento de B.bassiana a. UN IC. AC IÓ. N. sobre el crecimiento de este hongo.. concentraciones de Imidacloprid. CO. M. menores de 350 ppm y el crecimiento de H. thompsonii a concentraciones. Y. menores de 175 ppm del mismo químico, como se mencionó anteriormente, no. IC. A. se ve afectado el crecimiento, esto puede deberse a que la toxicidad de una. ÁT. sustancia química es directamente proporcional a su concentración. Ello. RM. implicaría que el insecticida en cuestión a esas concentraciones no afectaría de. IN FO. manera considerable, los cambios que ocurren en la membrana celular de los. DE. hongos; así como no produciría cambios en la actividad metabólica a nivel. SI ST. EM. crecimiento30, 31.. AS. vesicular pues ambos hongos tendrían la energía suficiente para efectuar su. En relación al crecimiento Imidacloprid a partir de una concentración de 350. DE. ppm disminuye el crecimiento de B. bassiana mientras que en el caso de H.. IO. N. thompsonii, esta disminución ocurre a partir de una concentración de 175 ppm. DI. RE. CC. del mencionado químico. Este efecto negativo sobre el crecimiento a concentración mayores que la concentración más baja (87.5 ppm), podría deberse a que el efecto negativo de toda sustancia tóxica está directamente relacionada con su concentración, es decir, a mayor concentración de esta se unirán más rápidamente a los receptores presentes en las células alterando el. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. normal funcionamiento de estas32. Así mismo Imidacloprid dentro de su molécula contiene imidazol, este grupo funcional es constituyente de muchos fungicidas, por lo tanto el Imidacloprid podría afectar a los hongos de la misma. AC IÓ. N. manera como lo hace el imidazol, afectando al citocromo P450, lo que. UN IC. interfiere el metabolismo del lanosterol(dificulta la C-14 alfa desmetilación), que es un paso para la biosíntesis del ergosterol llevando a una disminución de. M. esta y, de forma secundaria, a un acúmulo de esteroles anómalos (esteroles 14-. membranas,. lo. que. lleva. a. una. desestructuración. de. IC. A. las. Y. CO. alfa-metilados) 33, 34. Además la falta de ergosterol, altera la permeabilidad de. ÁT. los orgánulos intracelulares y de la capacidad de división. Secundariamente, el. IN FO. RM. acúmulo de esteroles anómalos contribuye a la fragilidad y muerte celular 35,36.. DE. Además cabe indicar que en la fig. 7 las concentraciones 175 ppm y 350 ppm. AS. de Imidacloprid, tienen el mismo efecto sobre el crecimiento de H. thompsonii. EM. , esto se debe a que el insecticida , para que actúe sobre el hongo debe ingresar. SI ST. en él , y alterar su membrana tal como se explicó anteriormente, donde el ingreso de agua y en este caso arrastrando el insecticida hacia el interior del. DE. hongo está condicionado por un “punto de saturación”, es decir la cantidad. IO. N. máxima de agua que puede ingresar en el hongo, y en este caso el punto de. DI. RE. CC. saturación para este hongo se dio en la concentración de 175 ppm por lo tanto así aumentemos la concentración del insecticida este no seguirá ingresando más allá del punto de saturación; por lo tanto el efecto será el mismo en dichas concentraciones 25,37.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los. resultados obtenidos indican que Imidacloprid es compatible con B.. bassiana y H. thompsonii. , pues afecta su crecimiento a concentraciones. mayores, pero no su germinación ;ya que según Rashid et al, la inhibición del. AC IÓ. N. crecimiento vegetativo no es un buen indicador de los efectos de los. UN IC. insecticidas, pero la germinación de los conidios es el factor clave38,39; dado que estudios in vitro tienen la ventaja de exponer a la medida posible el. CO. M. microorganismo a las formulaciones químicas, lo que no ocurre en condiciones. Y. de campo , donde varios factores actúan como barreras contra dicha. A. exposición, por ejemplo, la cobertura vegetal imperfecta por el producto. RM. ÁT. IC. proporciona un refugio espacial del entomopatógeno40 .. IN FO. Estos resultados concuerdan con los estudios hechos por Oliveira y Neves, insectidas Avermectina y Piretroides son. DE. quienes encontraron que los. AS. compatibles con el hongo B. bassiana25. Así mismo Purwan y Sachan. EM. encontraron que el insecticida Oxidemetón metil, presentó mejor desempeño en. SI ST. combinación con B. bassiana contra el lepidóptero Spilarctia obliqua 41.. DE. Además Shi et al.. evaluaron los efectos de los. acaricidas Piridaben ,. IO. N. Propargita , Hexitiazox y Azociclotina sobre B. bassiana, encontrando que los. DI. RE. CC. insecticidas. Piridaben. ,. Propargita. y. Hexitiazox. no. afectaron. significativamente la germinación de B.bassiana, mientras que Azociclotina resultó imcompatibe para este hongo42.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Trabajos también realizados por, Sanpedro y Rosas estudiaron la acción tóxica de los plaguicidas: Cupravit®,Maneb®,Malathion® ,Morestan® y Nuvacron® sobre cuatro cepas de H.thompsonii, encontrando que Nuvacron® sería el. AC IÓ. N. plaguicida a recomendar en un programa de Manejo Integrado de Plagas (MIP), donde se utilice H. thompsonii; y el Morestan® y Malathion® podrían. UN IC. ser utilizados también, pero a concentraciones menores y controladas21.Por otro. M. lado Alves et al. (1993), demostró que Torque 500 SC, Danimen300 CE y. IC. A. Y. CO. Morestan50, presentaron selectividad sobre Hirsutella sp24.. ÁT. Estudios de compatibilidad tambien mencionan que ciertos agroquímicos son. estos hongos son compatibles. IN FO. Lamas también reportan que. RM. compatibles con B. bassiana y H. thompsonii, por ejemplo a Batista, Almeida y con. DE. Thiamethoxam y otros insecticidas. Los resultados que obtuvieron fue que acción de los. AS. Thiamethoxan era compatible con estos hongos, y que la. EM. pesticidas en el crecimiento vegetativo y esporulación varía en función de la. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. naturaleza química de los productos, concentración y la especie microbiana20.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. El insecticida Imidacloprid en el rango de 0 ppm a 350 ppm no disminuyen. UN IC. AC IÓ. N. significativamente la germinación in vitro de Beauveria bassiana.. El insecticida Imidacloprid en el rango de 0 ppm a 350 ppm no disminuyen. Y. CO. M. significativamente la germinación in vitro de Hirsutella thompsonii.. IC. A. El insecticida Imidacloprid a concentraciones menores de 350 ppm no. ÁT. disminuyen significativamente el crecimiento de Beauveria bassiana., mientras. DE. IN FO. crecimiento in vitro de este hongo.. RM. que a partir de la concentración 350 ppm tiene efecto significativo sobre el. AS. El insecticida Imidacloprid a concentraciones menores de 175 ppm no. EM. disminuyen significativamente el crecimiento de Hirsutella thompsonii,. SI ST. mientras que a partir de la concentración 175 ppm tiene efecto significativo. DE. sobre el crecimiento in vitro de este hongo.. de 175 ppm a 350 ppm no hay. IO. N. El insecticida Imidacloprid en el rango. DI. RE. CC. diferencia significativa sobre el crecimiento in vitro de Hirsutella thompsonii.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIÓN Cabe resaltar que los resultados encontrados en el laboratorio pueden diferir con. AC IÓ. N. los obtenidos en campo, en consecuencia es recomendable realizar estudios en. UN IC. campo para evaluar el efecto real que ejerce el insecticida Imidacloprid sobre B.bassiana y H.thompsonii y hasta qué punto las concentraciones de este. CO. M. insecticida que manejan los agricultores en campo son compatibles con la. Y. aplicación de estos hongos para así poder programar mejor la aplicación de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. ambos controladores dentro de un plan de manejo integrado.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ibarra JE, Del rincón C,et al. Los microorganismos en el control biológico de. 2.. AC IÓ. 1.. N. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. insectos y fitopatógenos. Alam.2006; 48(2):133-120.. Pschidt J W. Como diagnosticar y controlar las enfermedades de las. de Agricultura de los Estados Unidos.. M. UN IC. plantas. 1a ed. Oregon2003. Universidad estatal de Oregon. Departamento. Agrios G. Fitopatología. 2ª ed. México: Ed. Uteha; 1995. 4.. Romero F. Manejo Integrado de Plagas: las Bases, los Conceptos, su. CO. 3.. A. Y. Mercantilización. 1a ed. México 2004. Universidad Autónoma Chapingo.. SantaMaría A, Costa-Comelles J, Alonso A, Rodríguez JM y Ferrer J. Beauveria bassiana(Balsamo). RM. Ensayo del hongo entomopatógeno. ÁT. 5.. IC. Instituto de Fitosanidad, Montecillo.. IN FO. Vuillemin para el control de la mosca blanca de los cítricos Aleurothrixusfloccosus(Maskell) (Homoptera: Aleyrodidae) y su acción. DE. sobre el parásito Cales noacki(Howard) (Hymenoptera: Aphelinidae). Bol. AS. San Veg Plagas 1998; 24: 695-706. Papamija, R.2002. Estudio de las poblaciones de nematodos como. EM. 6.. bioindicadores de sanidad en suelos cultivados con maracuyá Passifola. Colombia. SI ST. edulis Var flavicarpa, en los municipios de Roldanillo, La Unión y Toro.. DE. URL:http://200.13.202.26:90/pronatta/proyectos/pdf/public/201763423ter. N. uber.pdf. Ficha Técnica de LANCER® (Farmex S.A). CC. IO. 7. 8.. Tabener. A. Et al. Manejo de poblaciones de malezas resistentes a. DI. RE. plaguicidas 100 preguntas sobre resistencias. (Internet) (Acceso 20 agosto del 2001). Roma. FAO; 2007 ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/010/al 422s/al 422500.pdf. 9.. Prado G.2005. Reducción del uso y desarrollo de resistencia plaguicidas en el cultivo de arroz y frijol en Colombia, Venezuela y Ecuador. Colombia URL:http://www.fontagro.org/sites/default/files/stecnico/final_infotec_05_ 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 438.pdf 10.. Carballo M, Guharay F. Control Biológico de plagas agrícolas. 1a ed. Managua: CATIE; 2004.. 11.. RoggHelmuth W.. Manejo Integrado y Control Biológico de Plagas y. AC IÓ. 12.. N. Enfermedades. Ecuador: Ed. AbyaYala; 2000. Torres H, Orteaga AM, Alcázae J, Ames T, Palomino L.CONTROL. Beauveria brongniartii. GuiaCIP.1993.Lima.37. Motta PA, Murcia B. Hongos entomopatógenos como alternativa para el. CO. 13.. M. http://www.cipotato.org/library/pdfdocs/ResGuide43860.pdf. UN IC. BIOLOGICO DEL GORGOJO DE LOS ANDES (Petromyces spp con. A. Echevarría F. Caracterización biológica y molecular de aislamientos del. IC. 14.. Y. control biológico de plagas. J Appl Sci.2011. 6(2): 77-79.. ÁT. hongo entomopatógeno Beauveria bassiana (Bálsamo) Vuillemin. Tesis. del café de Costa Rica. Cartago 2006.. Ficha Técnica CB07. Hirsutella thompsonii en control de ácaros. IN FO. 15.. RM. para optar el grado de Bachiller en Ingeniería en Biotecnología. Instituto. fitopatógenos. Centro nacional de referencia de control biólogico 1999. Rosas JL, Sampedro L, Variabilidad de cepas de Hirsutella thompsonii, a. DE. 16.. AS. partir de ácaros fitófagos en tres sistemas terrestres del estado de Colima,. Jacas J., Caballero P. & Avilla J. El control biológico de plagas,. SI ST. 17.. EM. México. Revista Mexicana de Biodiversidad. 2006. 77:7-16.. enfermedades y malas hierbas y la sostenibilidad de la agricultura.2005:. DE. 15-30. (eds). UJI/Univ. Pública Navarra. http://www.e-buc.com/portades/9788480217750_L33_23.pdf. N. Croft, A. Arthropod biological control agents and pesticides. John Wiley y. IO. 18.. CC. Sons. 1990.New York. 723 pp.. RE. http://www.horticom.com/pd/print.php?sid=71747. DI. 19.. 20.. Bielza P. Compatibilidad activa de plaguicidas y fauna auxiliar. Revista Especial 2007; 200: 1 - 6.. Batista A, Almeida JE, Lamas C. Effect of Thiamethoxam on Entomopathogenicmicroorganisms.NeotropicalEntomologil.2001.30(3):43 7-447.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..