Efecto del tiempo de exposición del gas ozono sobre el número de bacterias y hongos presentes en el laboratorio de inmunología de la Universidad Nacional de Trujillo

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AC IÓ. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y. A. Y. CO. M. UN IC. PARASITOLOGÍA. IC. Efecto del tiempo de exposición del gas ozono sobre el. RM. ÁT. número de bacterias y hongos presentes en el laboratorio de. IN FO. inmunología de la Universidad Nacional de Trujillo.. DE. TESIS. AS. PARA OPTAR EL TÍTULO DE:. SI ST. EM. BIÓLOGO – MICROBIOLÓGO AUTOR:. ASESORA: Dra. MANUELA LUJAN VELÁSQUEZ. DI. RE. CC. IO. N. DE. BR. WILLIAN GIANCARLOS DOMÍNGUEZ PAREDES. TRUJILLO – PERÚ 2015. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. RECTOR. IN FO. Dr. Rubén Vera Véliz. Dr. Pedro Lavalle Dios SECRETARIO GENERAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. VICE – RECTOR ACADÉMICO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE. M. UN IC. AC IÓ. N. CIENCIAS BIOLÓGICAS. CO. Dr. José Mostacero León. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. DECANO. DE. Dr. William Zelada Straver. Dra. Bertha Soriano Bernilla. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIO. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. Dr. Heber Robles Castillo. M. __________________________. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. PRESIDENTE. DE. __________________________. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Dra. Manuela Lujan Velásquez. __________________________ Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR La que suscribe, asesora de la tesis titulada: “Efecto del. N. tiempo de exposición del gas ozono sobre el número de bacterias y. AC IÓ. hongos presentes en el laboratorio de inmunología de la Universidad. UN IC. Nacional de Trujillo”.. CO. M. CERTIFICA:. Y. Que la presente investigación ha sido desarrollada de conformidad. IC. A. con su correspondiente proyecto y teniendo en cuenta las orientaciones. RM. ÁT. pertinentes al tesista.. IN FO. En cuanto al informe, éste ha sido redactado bajo mi asesoramiento de acuerdo al formato establecido en la Facultad de Ciencias Biológicas y. DE. ha acogido las observaciones alcanzadas.. EM. AS. Por ello, autorizo al Bachiller Willian Giancarlos Domínguez. IO. N. DE. SI ST. Paredes, continuar con los trámites correspondientes según sus fines.. CC. _____________________________. RE. Dra. Lujan Velásquez Manuela. DI. ASESORA. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. N. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador,. AC IÓ. declaran que la presente tesis ha cumplido con los requisitos. UN IC. formales y fundamentos teóricos, siendo APROBADA por. IC. A. Y. CO. M. UNANIMIDAD.. RM. ÁT. __________________________. IN FO. Dr. Heber Robles Castillo. EM. AS. DE. PRESIDENTE. SI ST. __________________________. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. Dra. Manuela Lujan Velásquez. __________________________ Dra. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. AC IÓ. N. PRESENTACIÓN. UN IC. En cumplimiento con las disposiciones vigentes establecidas. M. en el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de. CO. Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado criterio la presente tesis titulada: “Efecto del tiempo de exposición del gas ozono sobre el. A. Y. número de bacterias y hongos presentes en el laboratorio de inmunología. IC. de la Universidad Nacional de Trujillo”, con el propósito de obtener el. ÁT. Título Profesional de Biólogo – Microbiólogo. RM. Esperando que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su. IN FO. criterio establecido, y a que el presente sea merecedor de vuestra. SI ST. EM. AS. DE. aprobación.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Trujillo, 09 de marzo del 2015. _____________________________________ Br. Willian Giancarlos Domínguez Paredes. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AC IÓ. UN IC. bendiciones y culminar un objetivo más.. N. A DIOS por brindarme fortaleza día a día, por sus. A mis padres, WILFREDO DOMÍNGUEZ SACHÚN y. CO. M. ANITA PAREDES ZARE por ser mis mejores amigos en. Y. los que puedo confiar, por el apoyo emocional y moral que. RM. ÁT. IC. A. me brindarán todos los días.. IN FO. A mi Hermana, ALEJANDRA JIMENA DOMÍNGUEZ PAREDES por acompañarme en la ejecución de esta. DE. investigación, por ser mi buena amiga, compañera de risas buena música.. DE. SI ST. EM. AS. en momentos estresantes, y lo mejor de todo que sabe de. momento. DI. RE. CC. IO. N. A mi familia en general por su comprensión en todo. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS docente de la catedra de. N. A la Dra. Manuela Lujan Velásquez. AC IÓ. Inmunología de la Escuela de Microbiología y Parasitología de la. UN IC. Universidad Nacional de Trujillo por su asesoramiento, orientación en la. CO. M. ejecución, la redacción del respectivo informe y consejos.. Y. A mi tío Humberto Paredes Zare, quien con ayuda de él se pudo dar. RM. ÁT. IC. A. inicio a esta investigación.. IN FO. A mis buenos amigos Katicita Chacón Rodríguez, Héctorín Bacilio. DE. Pérez, Juanito Guzmán, Edgarín Méndez Olulo por su enorme apoyo. AS. académico brindado para la realización de esta tesis y por su incondicional. SI ST. EM. amistad.. “gracias” por ser esa. compañera. DE. Lourdes Grados Rodríguez. N. incondicional y por ser full energía, por tu apoyo profesional, moral y por. DI. RE. CC. IO. estar a mi lado compartiendo buenas y malas experiencias.. A mi banda favorita Red Hot Chili Peppers por los buenos sonidos que todos los días se encuentran en mi ambiente de trabajo.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN En la actualidad se sabe que la gente se encuentra en ambientes interiores entre el. AC IÓ. N. 80 al 90% de su tiempo, lo que conlleva a que estos lugares tengan importantes efectos sobre la salud humana y la eficiencia en el trabajo es así que acuerdo con la. UN IC. necesidad presentada antes estos problemas ambientales nace el uso comercial del. gas ozono para la eliminación de contaminantes del aire en interiores, y el objetivo. CO. M. en la presente investigación fue evaluar el efecto del gas ozono a una concentración. Y. de 7,4 ppm por un periodo de 1,4,8 horas en el laboratorio de Inmunología de la. IC. A. escuela de Microbiología y parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo. Se. ÁT. determinó el número inicial así como la identificación del genero de bacterias. RM. presentes en aire como en superficies y hongos presentes en el aire, para esto se. IN FO. determinó cinco puntos de muestreo para los plaqueos ambientales y dos para los análisis de superficies, luego se procedió a la aplicación del gas ozono al ambiente. DE. del laboratorio de Inmunología durante 1, 4 y 8 horas, después de cada exposición. AS. se realizaron los plaqueos ambientales y los análisis de superficie, para el recuento. EM. y la identificación posterior. Los géneros de bacterias encontradas en los plaqueos. SI ST. ambientales fueron: Micrococcus sp. y Staphylococcus sp. Y los géneros de. DE. bacterias encontrados en superficies fueron: Staphylococcus sp y Bacillus sp. Así. N. como los géneros de hongos presentes en los plaqueos ambientales fueron:. IO. Aspergillus sp, Penicillium sp, Cladosporium sp, Alternaria sp, Fusarium sp. Se. DI. RE. CC. realizó el recuento de bacterias presentes en aire y superficies resultando un mejor efecto bactericida a las 8 horas de exposición en aire, mas no hubo el mismo efecto en superficies, para el caso de hongos se observó el mejor efecto fungicida a las 8 horas de tratamiento con gas ozono.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO. N. Pág.. AC IÓ. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO .......................................... ii. UN IC. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS ............................................ iii MIEMBROS DEL JURADO .................................................................................................. iv. CO. M. ASESORA ............................................................................................................................ v. Y. APROBACION .................................................................................................................... vi. IC. A. PRESENTACION ................................................................................................................ vii. ÁT. DEDICATORIAS ................................................................................................................ viii. RM. AGRADECIMIENTOS .......................................................................................................... ix. IN FO. RESUMEN........................................................................................................................... x. DE. CONTENIDO ...................................................................................................................... xi. AS. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1. EM. MATERIAL Y MÉTODOS.................................................................................................... 12. SI ST. 1. Área de estudio ........................................................................................................ 12. DE. 1.1. Determinación del número inicial de los microorganismos. DI. RE. CC. IO. N. contaminantes presentes en el laboratorio de Inmunología .................................. 12 1.1.1.. Calculo del número de puntos de muestreo ............................. 12. 1.1.2.. Toma de muestra de aire........................................................... 12. 1.1.3.. Toma de muestra de superficie ................................................. 13. 1.1.4.. Cuantificación e Identificación de bacterias.............................. 14. 1.1.5.. Cuantificación e Identificación de hongos................................. 14. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.2. Evaluación de la efectividad del equipo de ozonificación ................................ 15 Tratamiento de ozonificación .................................................... 15. 1.2.2.. Análisis después del tratamiento de gas ozono ........................ 15. AC IÓ. N. 1.2.1.. 2. Análisis de resultados ............................................................................................... 16. UN IC. RESULTADOS.................................................................................................................... 17. M. DISCUSIÓN ....................................................................................................................... 24. CO. CONCLUSIÓN ................................................................................................................... 34. IC. A. Y. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ....................................................................................... 35. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. ANEXOS............................................................................................................................ 46. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. 1. NTRODUCCIÓN. IC. En muchas de las actividades humanas los microorganismos en el medio ambiente. M UN. representan un riesgo oculto ya que los humanos respiramos millones de litros de aire, de los. CO. cuales estos contienen polvo y gotas de humedad, en los que se encuentran presentes diversos. Y. microorganismos; estos son transitorios y variables, dependiendo del ambiente (Pasquarella et. IC. A. al., 2000; Pasquarella et al., 2012; Hernández y Marín, 2013). Por ende la contaminación del. ÁT. aire siempre ha sido un importante problema de salud ambiental (Brunekreef y Holgate, 2002).. RM. Se sabe que la gente se encuentra en ambientes interiores entre el 80 al 90% de su tiempo, lo. EM AS. DE. IN. eficiencia en el trabajo (Yu, et al., 2009).. FO. que conlleva a que estos lugares tengan importantes efectos sobre la salud humana y la. Los factores que afectan un ambiente interior incluyen principalmente a la temperatura, la. ST. humedad, tasa de intercambio de aire, circulación de aire, ventilación, contaminantes de. SI. partículas, contaminantes biológicos y contaminantes gaseosos (Yu, et al., 2009). Así como el. DE. grado de contaminación microbiana en estos ambientes está influenciado por factores tales. IO. N. como la frecuencia de ventilación, el número de personas presentes en el ambiente , el grado. CC. de las actividades que realizan los individuos dentro de los locales (Del Carmen de la Rosa,. RE. 2000). Así mismo los microorganismos que causan infecciones y alteran la calidad del aire en. DI. los centros sanitarios o cualquier otro ambiente interno pueden estar influenciados por la acción de distintas partículas suspendidas (Napoli et al., 2010; Scwhartz y Martínez, 2012). Estos microorganismos no crecen en el polvo pero el nivel de crecimiento se puede controlar 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. naturalmente mediante el grado de humedad, tamaño, nivel de las partículas de polvo, la. AC I. Ó. una temperatura más alta tiene un nivel microbiano bajo (Pasquarella et al., 2012).. N. temperatura y la velocidad del aire. Por lo general, el aire seco con bajo contenido de polvo y. M UN. IC. La atmósfera no tiene una microbiota autóctona y este es un medio para la dispersión rápida y global de muchos tipos de microorganismos (Sehulster y Chinn, 2003; De La Rosa et al.,. CO. 2002). De los cuales los microorganismos patógenos asociados con la transmisión del medio. A. Y. ambiente (agua, alimentos, suelos, superficies, y aire) abarcan cientos de bacterias, hongos y. ÁT. IC. virus (Sinclair et al., 2012). Estos sobreviven con dificultad en el aire, y por ello algunos. RM. patógenos solo se transmiten en los humanos en distancias cortas. No obstante otros patógenos. FO. resisten condiciones de sequedad y pueden permanecer vivos en el polvo durante largos. IN. periodos de tiempo (Hernández y Marín, 2013). Entre los microorganismos presentes en la. DE. atmósfera, las bacterias a menudo se encuentran en cantidades elevadas, a pesar de su alta tasa. EM AS. de mortalidad, debido a factores ambientales los cuales causan estrés, principalmente la. SI. ST. deshidratación (Toloza y Lizarazo, 2011; Chandra et al., 2005).. DE. Las esporas de Clostridium difficile son duraderos y resistentes a los métodos habituales de. N. limpieza. La contaminación del ambiente inanimado por C. difficile se ha informado que se. CC. IO. produce en zonas muy próximas a pacientes infectados. En el caso de los Bacilos. RE. gramnegativos entéricos son los que normalmente no se extienden a pacientes desde el entorno. DI. inanimado seco, por lo que generalmente no son viables después de un secado, que dura 7 horas o menos (Zeynep et al.,2004). Sin embargo, Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii están fuertemente asociados con la contaminación del medio ambiente (Robert y Bala, 2004). 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En el caso de hongos ambientales estos pueden ser principalmente patógenos oportunistas,. Ó. N. algunos produciendo micotoxinas, y estos a su vez pueden estar presentes como esporas, las. AC I. cuales se consideran la tercera causa más frecuente de patología alérgica después de los ácaros. M UN. IC. y los pólenes (Rocha et al., 2013).Estas estructuras pueden ser inhaladas y al resistir la desecación, pueden permanecer en el aire indefinidamente y transportarse lejos de su fuente. A. Y. CO. (Sehulster y Chinn, 2003; Toloza y Lizarazo, 2011).. ÁT. IC. Como medidas de enfrentar a estos microorganismos de ambientes interiores actualmente en. RM. el mercado se encuentran los biocidas, que de acuerdo a su blanco de acción, han sido. FO. clasificados en preservativos, esterilizantes, antisépticos y desinfectantes. Estos dos últimos. IN. constituyen la primera línea de defensa, y son productos químicos capaces de inhibir o destruir. DE. los microorganismos presentes sobre objetos inanimados y/o superficies. Entre estos agentes se. EM AS. encuentran un grupo de compuestos que tiene gran auge en la actualidad, como los agentes iónicos y anfóteros, estos tienen la propiedad de lesionar la integridad de la membrana celular,. SI. ST. tales como los compuestos de amonio cuaternario (QAC), como el bromuro de laurildimetil-. DE. bencil-amonio, agente activo de la mayoría de los desinfectantes utilizados en los centros. N. hospitalarios a nivel nacional. Este tipo de agentes se caracterizan por no presentar olor, son de. CC. IO. pH neutro, solubles en agua, de acción polivalente, soportan cambios de temperatura sin alterar. RE. su estructura, se mantienen estables a temperatura ambiente y no necesitan de recipientes ni de. DI. almacenamientos especiales (Ramos et al., 2011).. Para el caso del aire en ambientes interiores, El hipoclorito de sodio (NaOCl) es el desinfectante actual de elección debido a sus propiedades antibacterianas Aunque este 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. compuesto es un potente agente antibacteriano, que es tóxico a altas concentraciones. Así mismo la radiación ultravioleta (UV) producida artificialmente en el espectro de 2.537. Ó. N. angstroms (A), ha sido utilizada hasta la actualidad en los diferentes laboratorios como única. AC I. medida de esterilización, por su actividad germicida esterilizante por más de 30 años. La. M UN. IC. inactivación de los microorganismos por luz UV está en función de la dosis de energía radiante; la efectividad de una determinada intensidad de la radiación es propia del intervalo de tiempo,. CO. sin embargo la dosis requerida para los diferentes microorganismos, varia ampliamente, las. A. Y. bacterias vegetativas son de 3 a 10 veces más susceptibles a la inactivación que las bacterias. ÁT. IC. esporuladas; los hongos y las esporas son de 100 a 1.000 veces más resistentes que las bacterias. RM. vegetativas. Las bacterias esporuladas sobre superficies de acero inoxidable requieren. IN. FO. aproximadamente 800 w min/cm para su inactivación (Condori, 2009).. DE. Los compuestos oxidantes son productos que liberan oxígeno naciente, su efecto generalmente. EM AS. es breve, porque el oxígeno naciente se combina rápidamente con toda materia orgánica, volviéndose inactivo. Su espectro de actividad es sobre bacterias vegetativas, virus,. SI. ST. micobacterias y esporas. Los compuestos oxidantes utilizados como antisépticos son las. DE. soluciones de peróxido de hidrógeno, permanganato de potasio, ácido paracético y el ozono; el. N. ozono es el mejor desinfectante, atacando a todo tipo de microorganismos, bacterias, virus,. RE. CC. IO. protozoos, e inhibiendo su crecimiento (Leonardo y Eliana, 2005).. DI. El uso comercial en relación al gas ozono para la eliminación de contaminantes del aire en. interiores, fue concebido hace más de 100 años (Boeniger, 1995), las investigaciones realizadas en el siglo XIX sobre las propiedades del ozono mostraron que es capaz de reaccionar con la. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mayoría de sustancias orgánicas e inorgánicas hasta su oxidación completa, entre ellas muchas. Ó. N. sustancias de importancia bioquímica (Mcnair y Lesher, 1963).. AC I. Un gran número de usos comerciales se han encontrado para el ozono incluido en la. M UN. IC. desinfección del agua embotellada, las piscinas y tratamiento de aguas residuales (Zeynep et al., 2004; Moore et al., 2000; Broadwater et al., 1973). Así como aplicaciones en la industria. CO. alimentaria tales como la higiene en superficie de los alimentos y el saneamiento de equipos en. A. Y. plantas de alimentos (Zeynep et al., 2004). El ozono es un producto utilizado como. ÁT. IC. desinfectante, pero en estado natural es inestable, se autodescompone rápidamente para. RM. producir oxígeno, y por lo tanto no deja residuos en los alimentos o ambientes (Napoli et. FO. al.,2012; Shilpa et al., 2013). Este compuesto es uno de los desinfectantes más potentes. IN. conocidos (Menzies et al.,2003); es un gas que se puede obtener por procesos electroquímicos,. EM AS. 200 nm (Sanchis, 2002).. DE. por descarga de arco o someter el oxígeno a radiación ultravioleta con una longitud de onda de. SI. ST. La inactivación de bacterias por el ozono es un proceso complejo debido a que el ozono. DE. ataca numerosos constituyentes celulares incluyendo proteínas, lípidos insaturados y sistemas. N. enzimáticos respiratorios en la membrana celular, peptidoglicanos en la capa celular, enzimas y. CC. IO. ácidos nucleicos en el citoplasma, incluyendo peptidoglucanos en capas de esporas. El ozono. RE. molecular es el principal inactivador de microorganismos, pero así mismo se enfatiza en la. DI. actividad antimicrobiana ya que los productos de su descomposición, son: .OH, .O2, y HO.3 . Además posee la capacidad única de destruir impurezas industriales tóxicos o nocivos (fenoles, cianuros, tetraetilo plomo y otros) y la inactivación biológica de contaminantes como virus y bacterias (Murray et al., 2008; Chang, 2971; Glaze y Kang, 1989; Hunt et al., 1997). 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El ozono oxida varios componentes de la membrana que dirigen el equilibrio interno celular,. Ó. N. causando lisis (Scott y Lesher, 1963; Murray et al., 1965). Cuando la bicapa de lípidos. AC I. poliinsaturados y los grupos sulfhidrilos de las enzimas es oxidada por el ozono, se interrumpe. M UN. IC. la actividad celular normal incluyendo la permeabilidad que lleva a una muerte rápida. Segun Dave (1999), el tratamiento de Salmonella enteritidis con agua ozonizada. interrumpe el. CO. proceso normal de la membrana lo que fue evidenciado en el microscopio electrónico, por otro. A. Y. lado pequeños tiempos de exposición de E. coli con gas ozono compromete la permeabilidad de. ÁT. IC. la membrana pero no inicialmente. Investigaciones posteriores de Komanapalli y Lau, (1996). RM. concluyeron que esto se obtuvo progresivamente a exposiciones largas. Ingram y Haines. FO. (1949), encontraron que una de las principales enzimas inactivadas por el ozono es la enzima. IN. Deshidrogenasa en el sistema enzimático celular; Takamoto et al.,(1992) y Chang, (1971). EM AS. de enzimas del sistema respiratorio. DE. determinaron que el ozono ejerce su efecto bactericida frente a E.coli a través de la inactivación. ST. Según Moat, (2009), la OMS indica que los niveles de exposición del gas ozono recomendados. SI. son 0,1 ppm durante 8 horas o 0,2 ppm durante 15 minutos y los estudios más específicos. DE. acerca del efecto bactericida y bacteriostático, viricida, fungicida y esporicida del ozono. IO. N. señalan, con respecto a otros bactericidas que este se manifiesta a bajas concentraciones (0,01. CC. p.p.m. o menos) y durante periodos de exposición muy cortos. Incluso a concentraciones. RE. ínfimas de ozono del orden de 0.01 p.p.m. se observa un efecto bacteriostático (Ricaurte, 2006).. DI. Con toda la información descrita anteriormente se considera al ozono como un potente bactericida a concentración de 0.01 ppm (0.02mg/m3), corroborado por la investigación de Elford y Tvan (1942), pero también con efecto tóxico para el humano a concentraciones 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mayores de 0.1 ppm (100 ppb) que aumenta conforme crece la concentración del gas. Estos datos también han sido recopilados por la World Health Organization, y manifiesta que en. Ó. N. ambientes donde permanezcan personas más de 8 horas/día la concentración no deberá ser. AC I. superior a 0,1 p.p.m., o lo que es lo mismo 0,2 mg 𝑂3/m3 de aire ya que si las personas son. M UN. IC. sometidas a estas concentración durante 3 años, se manifiestan los efectos adversos para la salud. La Food and Drug Administration es más conservadora y toma como límite 0.05 ppm. CO. (0.1 mg 𝑂3/m3 de aire) para las mismas condiciones. De tal manera que las concentraciones. A. Y. nocivas para disminuir la mayor población bacteriana es completamente tolerable para el ser. ÁT. IC. humano sin efectos adversos (Elford y Tvan, 1942; WHO, 2011; FDA, 2011).. RM. Moore et al. (2000), Señalan que en la industria alimentaria, la desinfección se conseguía. FO. tradicionalmente por los medios de calor en forma de agua caliente o vapor y productos. DE. IN. químicos tales como el cloro. Es así que la investigación el gas ozono resultó un tratamiento. EM AS. eficaz en la desinfección de superficies de contacto con el producto, ya que normalmente deberían estar limpiando varias veces al día con el tratamiento químico tradicional, así como. ST. las superficies y paredes. Esto se podría reducir a ser limpiados sólo una vez a la semana. Así. SI. como resaltan en la investigación que el ozono al ser un gas, puede desinfectar todas las áreas. DE. (es decir, el contacto con alimentos y zonas sin contacto). A diferencia de empañamiento. IO. N. químico, que es sólo efectiva en superficies horizontales en lugar de verticales, los resultados. RE. CC. obtenidos durante su investigación indican que el ozono era igual de eficaz en ambos.. DI. Moat et.al (2009), indican que al aplicar el gas ozono en la descontaminación de un. ambiente de salud y exponer ciertos microorganismos como E. coli, C. difficile, S. aureus, E. faecalis, indican una disminución en la población microbiana. Estos microorganismos fueron 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. expuestos a diferentes tiempos (min) y diferentes concentraciones (ppm).Los organismo más sensible en cualquiera de las concentraciones del presente estudio fue E. coli, y C. difficile. La. Ó. N. cepa de enterococo examinado en el presente estudio era más resistente al tratamiento que E.. AC I. coli o S. aureus, en este sentido se puede considerar que se obtuvo una desinfección mayor. M UN. IC. cuando se usó una concentración del gas de 5 ppm durante 45 min .Esto podría permitir la modificación de los procedimientos de desinfección para analizar la zona a tratar, con bajas. CO. concentraciones utilizadas en escalas de tiempo relativamente largos en áreas donde los. ÁT. IC. A. Y. ambientes no permiten una alta concentración de ozono.. RM. En la actualidad la calidad del aire en interiores puede ser el problema ambiental más. FO. importante de nuestros tiempos (Yu et al., 2009). Se sabe que la presencia de microorganismos,. IN. y contaminantes provenientes del aire exterior o de la calle, pueden incrementar el nivel de. DE. contaminantes del aire interior. Las reacciones de estos contaminantes tienden a originar el. EM AS. fenómeno llamado: Síndrome del Edificio Enfermo (SEE) (Rodríguez y Alonzo, 2004).Siendo así que la oficina o el ambiente interior, es ahora el lugar de trabajo para más de 70% de la. ST. fuerza de trabajo en toda América Latina y Europa occidental, muchos informes han. N. DE. SI. documentado problemas de salud relacionados con este entorno de trabajo (Donate et al., 2000).. CC. IO. El gas ozono, se puede utilizar como otra alternativa a la desinfección tanto de ambientes. RE. aéreos como de superficies de laboratorios siendo este capaz de inactivar diferentes bacterias. DI. patógenas humana, aunque algunos protozoos, ooquistes, hongos y esporas requieren un mayor tiempo de contacto con el ozono que las bacterias y los virus (Burgassi et al.,2009). Este gas se presta para mejorar la higiene y la descontaminación tanto del ambiente como de los equipos de laboratorios, desarrollando sistemas gaseosos que pueden penetrar y llegar a lugares 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. inaccesibles a los enfoques convencionales como el caso de la luz UV ya que posee una nula penetración, y al no llegar a todos los sitios por esterilizar en un ambiente de laboratorio, así. Ó. N. también como en el caso de los compuestos químicos ya que la mayoría de estos son tóxicos. M UN. IC. AC I. para la salud.. Según Hernández y Marín, (2013) la calidad del aire en interiores se refiere a la contaminación. CO. del aire dentro de bibliotecas, salas de espera, edificios de oficinas y en zonas de gran afluencia. A. Y. de personas, causada por agentes microbiológicos, ocasionando efectos adversos en la salud a. ÁT. IC. corto y largo plazo es así que también la WHO en su manual de bioseguridad propone. RM. alternativas de técnica de desinfección y esterilización. Los Laboratorios de las profesiones. FO. Médicas de las Universidades, no escapan a esta realidad (WHO, 2011; FDA, 2011). Y se hace. IN. importante la investigación con respecto al gas ozono y su aplicación en el ambiente de un. DE. laboratorio debido la escasa información con respecto a nuevos procedimientos en la. EM AS. desinfección de ambientes así como a la mejora de calidad de los mismos. Por lo que la presente investigación plantea evaluar cuál es el efecto del tiempo de exposición a 1h, 4h y 8h. SI. ST. del gas ozono a 7,4 ppm sobre el número de bacterias y hongos presentes en el laboratorio de. DI. RE. CC. IO. N. DE. inmunología de la Universidad Nacional de Trujillo. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. 2. MATERIAL Y MÉTODOS. AC I. 2.1. Área de estudio. M UN. IC. 2.1.1. Determinación del número inicial de los microorganismos contaminantes. A. Y. 2.1.1.1. Cálculo del número de puntos de muestreo. CO. presentes en el laboratorio de Inmunología. ÁT. IC. Para realizar el cálculo de los puntos de muestreo se siguió el método de. RM. Sanchis, (2002). Primero se obtuvo el volumen del laboratorio de. FO. inmunología siendo este de 135 m3 (Anexo 10). Luego se calculó la raíz. IN. cúbica del volumen dando como resultado 5, este número representó la. EM AS. DE. cantidad de puntos de muestreo.. 2.1.1.2. Toma de muestra de aire. SI. ST. Se realizó la toma de muestra, utilizando el método de Sedimentación en. DE. Placa Petri. Se colocaron dos placas Petri por punto de muestreo. Las. DI. RE. CC. IO. N. placas de Petri contuvieron Agar Yeast Glucose Chloramphenicol (YGC). para aislamiento de hongos, y Agar sangre (AS) para el cultivo de bacterias aerobios nutricionalmente exigentes. Las placas estuvieron expuestas al ambiente por 30 min, Se incubaron las placas con (AY) por 56 días de 30 a 35 °C, Las placas con medios para bacterias se incubaron de 24-48 horas. El resultado se expresó en unidades formadoras de colonias (UFC) por tiempo de exposición (Guía técnica, 2005) (Anexo 1). 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.1.3. Toma de muestra de superficie. Ó. N. El análisis superficial se evaluó tomando dos puntos de muestreo, las. AC I. muestras fueron tomadas utilizando el método del hisopo las cuales fueron. M UN. IC. recolectadas con un hisopo estéril impregnado con Agua peptonada salina (APS) estéril y colocando en contacto directo con la superficie. Para. CO. estandarizar la técnica, se utilizó plantillas de cartulina de 10x10 cm. A. Y. estériles y se realizó 15 pases con el hisopo en forma de zigzag por cada. ÁT. IC. área; esto permitió abarcar un área significativa de la superficie y el. RM. hisopo se dejó dentro del APS unos 10-15 minutos luego se realizó la. FO. siembra de 1 ml, de dicha solución en (PCA); 0,1 ml en Agar Mc Conkey. IN. (AM) y Agar Sangre (AS), para heterótrofos, bacterias gram negativas,. DE. microorganismos aerobios nutricionalmente exigentes respectivamente; Se. EM AS. llevaron todos los medios a incubación de 24 a 48 horas a 35 °C (Bonilla y. SI. ST. Pérez, 2014) (Anexo 1).. DE. 2.1.1.4. Cuantificación e Identificación de Bacterias. DI. RE. CC. IO. N. Se procedió a realizar el recuento bacteriano expresado en ufc/30min. Para el caso de la identificación de los géneros se realizó tinción Gram, para el caso de Micrococcus, se procedió a la Prueba de la catalasa y sensibilidad a la bacitracina (Anexo 3), Para el caso del género Staphylococcus se realizó prueba de la catalasa y la coagulasa (Anexo 4), para el género Bacillus solo se realizó la tinción gram (Anexo 3), estos procedimientos fueron realizados según manual Holt JG (1994). 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.1.5. Cuantificación e Identificación de Hongos. Ó. N. En el caso de hongos se realizó la lectura luego del periodo de incubación. AC I. de 6 días, reportándolos como recuento de hongos ufc/30min, para la. M UN. IC. identificación se realizó una coloración en fresco con azul de lactofenol y luego una observación al microscopio y a partir de sus estructuras. CO. morfológicas se logró identificar los géneros (Anexo 2), según Deacon,. ÁT. IC. A. Y. (1988); Alexopoulos, (1962).. FO. RM. 2.1.2. Evaluación de la efectividad del equipo de ozonificación. IN. 2.1.2.1. Tratamiento de ozonificación. DE. El ambiente y las superficies en estudio fueron desinfectados por un. EM AS. equipo generador de gas ozono, modelo Aqua 6 (Anexo 11), con una concentración promedio de 600mg/h. el ambiente estuvo expuesto a gas. SI. ST. ozono durante 1h, 4h, 8h. Luego de 20 minutos después de cada. DE. tratamiento se realizaron los análisis respectivos. Este posterior manejo. ozono se recolectó información de parámetros físicos como temperatura y humedad.. DI. RE. CC. IO. N. estadístico de los resultados encontrados. Antes de cada exposición con. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.2.2. Análisis después del tratamiento de gas ozono. Ó. N. Se realizó tanto un plaqueo ambiental como análisis microbiológico de. AC I. superficies, luego de cada proceso de aplicación del gas ozono al. M UN. IC. ambiente de inmunología se procedió a la identificación y recuento de los microorganismos tanto en el aire como en las superficies .así como. CO. esta descrito en los procedimientos desde el apartado 2.1.2 hasta el. ÁT. IC. A. Y. apartado 2.1.5.. FO. RM. 2.2. Análisis de resultados. IN. Los resultados se presentan en gráficas y figuras para determinar las principales. DE. medidas de tendencia central. Se realizó la prueba de ANOVA y POST ANOVA. EM AS. mediante el programa SAS v.20 para determinar la existencia de una diferencia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. significativa entre los tratamientos realizados (Anexo 9).. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3. RESULTADOS. N. En la Tabla 1. Se presentan los géneros de bacterias identificadas luego del plaqueo ambiental. AC I. Ó. en aire y del análisis de superficie, antes y después de los tratamientos con gas ozono, siendo. IC. Staphylococcus un género presente en ambos hábitats antes del tratamiento con gas ozono. En. M UN. la tabla 2. Se presentan los géneros de hongos identificados luego del plaqueo ambiental de aire. CO. antes y después de los tratamientos con gas ozono.. Y. En la Figura 1, se observa el recuento promedio de bacterias presentes en el aire expuestas al. IC. A. gas ozono a las 0, 1, 4 y 8 horas. Así mismo también se observa la existencia de una diferencia. RM. ÁT. significativa (Anexo 8) que existe entre todos los tratamientos con respecto al tratamiento de 0. FO. horas, y una mayor diferencia entre el tratamiento de 0 horas y de 8 horas.. IN. En la figura 2, se observa el recuento promedio de mohos presentes en el aire expuestas al gas. DE. ozono a las 0, 1, 4 y 8 horas. Se presenta un elevado recuento inicial de hongos así como el. EM AS. decreciente recuento conforme aumenta el tiempo de exposición, y el análisis estadístico (Anexo 8), realizado representa la existencia de una diferencia significativa entre los. SI. ST. tratamientos realizados de 0 horas y 8 horas, mas no entre los tratamientos de 1 hora y 4 horas.. DE. En la figura 3, se observa el recuento promedio de bacterias presentes en la superficie expuesta. IO. N. al gas ozono a las 0, 1, 4 y 8 horas. Se presenta el tratamiento a las 8 horas de exposición como. DI. RE. CC. el más eficiente pero según el análisis estadístico (Anexo 8) no existe diferencia significativa.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. Géneros de bacterias aisladas e identificadas tanto del aire como de superficies antes y después del tratamiento con gas ozono, en el laboratorio de Inmunología.. M UN. IC. AC I. Ó. Tabla 1.. Después. Y. CO. Antes. Géneros de Bacterias presentes en Superficie. Géneros de bacterias presentes en aire. Micrococcus sp.. Staphylococcus sp.. Micrococcus sp.. Staphylococcus sp.. Bacillus sp.. Géneros de Bacterias presentes en Superficie Staphylococcus sp. Bacillus sp.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Géneros de bacterias presentes en aire. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AC I. Ó. N. Tabla 2. Géneros de Hongos aisladas e identificadas del aire antes y después del tratamiento con gas ozono, en el laboratorio de Inmunología.. Después. Géneros de hongos presentes en el aire. Géneros de hongos presentes en el aire. Aspergillus sp.. Aspergillus sp.. A. Y. CO. M UN. Antes. Cladosporium sp.. IC. Penicillium sp.. ÁT. Cladosporium sp.. RM. Alternaria sp.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. Fusarium sp.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. A. D. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. C. A. Y. CO. M UN. IC. B. CC. IO. N. Figura 1. Recuento promedio de bacterias presentes en el aire, expuesto a 7,4 ppm de gas ozono durante 0; 1; 4 y 8 horas, en el laboratorio de Inmunología.. DI. RE. A> B > C > D: p< 0.05: existe diferencia significativa. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. A.

(30) Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. A. AB. B. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. AB. IO. N. DE. SI. Figura 2. Recuento promedio de hongos presentes en el aire, expuesto a 7,4 ppm de gas ozono durante 0; 1; 4 y 8 horas, en el laboratorio de Inmunología.. DI. RE. CC. A>AB>B: p<0.05: Existe diferencia significativa. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. A. Y. CO. M UN. A. A. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. A. IO. N. DE. Figura 3. Recuento promedio de bacterias presentes en superficies expuestas a 7,4 ppm de gas ozono durante 0; 1; 4 y 8 horas, en el laboratorio de Inmunología.. DI. RE. CC. A: p>0.05: No existe diferencia significativa. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 4. DISCUSIÓN. N. Luego de las evaluaciones se pudo obtener 2 géneros de bacterias (Tabla 1), y cinco géneros de. AC I. Ó. hongos (Tabla 2), ambas aisladas del aire, de los cuales los hongos fueron los más resistentes. IC. en cuanto a cantidad de supervivientes llegando así algunos a permanecer y resistir en el. M UN. ambiente expuesto a 7,4 ppm gas de ozono durante 8 horas. De los hongos aislados el género. CO. Aspergillus es uno de los que se pudo identificar luego del tratamiento de 8 horas, siendo. IC. A. presentes en placas expuestas a 0 y 1 hora de gas (Tabla 2).. Y. Fusarium y Cladosporium los géneros menos resistentes ya que solo se les pudo observar. RM. ÁT. La Identificación de los hongos aislados a partir del aire tienen importancia tanto clínica como. FO. medioambiental ya que las especies del género Aspergillus (Anexo 2), en la cual se evidenció. IN. un predominio dentro de los organismos fúngicos aislados, estos pueden producir diversas. DE. patologías en el ser humano denominadas aspergilosis. Además es importante señalar que no. EM AS. sólo la concentración de esporas juega un papel principal, sino también el tiempo de exposición al ambiente y las características inmunológicas de los individuos que intervienen en el. ST. desencadenamiento de estas micosis (Borrego, 2010). Es así que los géneros predominantes. DE. SI. como Aspergillus, se pudieron detectar en casi todos los puntos de muestreo debido a la gran. N. cantidad y variedad de especies que habitan en el laboratorio así como el flujo de aire que. IO. ingresa por las ventanas ubicadas una frente a la otra, o ya sea por el tránsito de los estudiantes,. RE. CC. no dejando de lado otros factores como, la temperatura y la humedad importantes para el. DI. desarrollo de estos microorganismos. También se detectó Cladosporium y, Penicillium lo cual coincide con lo reportado según, Michel y Renier (2012), donde se establece a estos tres géneros como los principales contaminantes de ambientes interiores. Así también los géneros de Alternaría y Fusarium. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En relación a los dos géneros de bacterias aisladas estos tienen forma de cocos Gram positivos y pertenecen a los géneros de Micrococcus y Staphylococcus. Se pudo encontrar en mayor. Ó. N. cantidad a Micrococcus, esto probablemente se debe a la características particulares del. AC I. genero Micrococcus que al ser de origen humano o animal, se encuentra con frecuencia en el. M UN. IC. aire por su gran supervivencia, ya que posee pigmentos carotenoides que son fotoprotectores y además se ha comprobado su mayor resistencia al impacto sobre medios sólidos (Mathews,. CO. 1959 ; Del Carmen de la Rosa, 2000). Por otro lado según Hero (2006) algunos Staphylococcus. A. Y. resistentes a la meticilina ya que pueden de hecho sobrevivir en polvo o en materiales sintéticos. ÁT. IC. por más de 5 semanas, y probablemente los identificados en esta investigación no sean. RM. resistentes es así que al no estar en superficies de apoyo y al no tener las características de. DE. IN. genero Staphylococcus que Micrococcus.. FO. sobrevivir mucho tiempo en el aire, es por eso que se encontró menos cantidad de bacterias del. EM AS. La presencia de estas bacterias en el aire se puede deber a ciertos factores como al constante proceso de descamación de la piel, bacterias que se encuentran en las superficies y. se. ST. transportan en partículas de polvo en suspensión; este ambiente al ser un ambiente de. SI. laboratorio este se encuentra en constante circulación de estudiantes a la vez que de animales. N. DE. de experimentación (Goh et al., 2000).. IO. En las superficie de la mesa de laboratorio de inmunología analizada se pudo encontrar el. RE. CC. género Staphylococcus (Anexo 4) y Bacillus (Anexo 3) dando a conocer que las bacterias como. DI. Staphylococcus es resistente a algunos factores ambientales como la desecación y temperatura, esto coincide con Alice (2000) que menciona a los estafilococos, los cuales sobrevivieron días a meses en tejidos tanto de algodón, como poliéster y destaca la supervivencia de este género en superficies. El género Bacillus es muy resistente ya que tiene a la formación de esporas 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. como una forma de resistencia frente a condiciones adversas. Se realizó análisis de superficies para Gram negativos en medio de cultivo Mac Conkey pero no se detectaron en los tres ensayos. Ó. N. realizados, estos se debe por su estructura ya que son más susceptibles a los factores. AC I. ambientales ya mencionados y además a los continuos tratamientos de desinfección, por parte. M UN. IC. de los estudiantes y profesores antes de utilizar las superficies para sus respectivos ensayos. CO. microbiológicos, investigaciones, etc.. Y. Tal como se observa En la Fig.1 la cantidad inicial promedio de unidades formadoras de. IC. A. colonias de bacterias presentes en el aire antes de efectuar el tratamiento con el gas ozono fue. ÁT. de 6 ufc/30 min. La ventilación y el continuo recorrido de personas son factores que ayudan a. RM. propagar la cantidad de bacterias, y durante las 3 repeticiones de los ensayos no hubo mucha. FO. concurrencia al ambiente por eso la cantidad de bacterias encontradas en la presente. DE. IN. investigación no fue tan elevada (Anexo 5), distinto a lo que representa Borrego (2010) quien. EM AS. realizó su investigación en un ambiente de biblioteca reportando elevados recuentos bacterianos. Pero a pesar que hubo bajos recuentos, pueden encontrarse bacterias las cuales. ST. podrían producir ciertas patologías y afectar la salud de individuos susceptibles (Menzies,. SI. 2003). Además según los resultados se observa que la carga bacteriana va decreciendo al. DE. aumentar los tiempos de exposición hasta 1 ufc/30min en promedio. Los resultados de 1 hora y. IO. N. 4 horas no son tan relevantes ya que se trató de conseguir la mayor eficiencia del gas en los. RE. CC. ensayos y esto se consiguió a las 8 horas de tratamiento.. DI. Las condiciones en las que se realizaron estos ensayos son importantes así como el tipo de ambiente al que se expuso el gas ya que, tanto a las bacterias como el ozono tienen condiciones óptimas para un mejor desarrollo en cuanto a las bacterias, y una mejor eficiencia en cuanto al gas ozono. Se trató de estandarizar las repeticiones realizándolas en condiciones iguales, pero 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. el primer ensayo se realizó a fines de diciembre y los otros dos entre enero y febrero, tiempo de verano con lo cual al aumentar la temperatura dada por la estación, disminuyó la humedad y se. Ó. N. mantuvo en un rango de 59%-62% (Anexo 8) Asimismo, es inferior al nivel de 85% de. AC I. humedad relativa que requieren las cepas bacterianas para su crecimiento, debido a su mayor. M UN. IC. necesidad de agua según Valentín, (2007).Por lo que no se pudo detectar cantidades mayores. CO. de bacterias que permitan determinar con mayor facilidad un mejor efecto del gas ozono.. Y. Se realizó el estudio estadístico Anova y se pudo obtener un p<0.05 (Anexo 9), lo que indica. IC. A. que existe una diferencia significativa entre estos tratamientos de ozono, se realizó también el. ÁT. post anova para observar la relación entre los tratamientos, y se puede encontrar que las. RM. diferencias más resaltantes son el tratamiento a 8 horas y el de 0 horas, este análisis representa. FO. que hay un efecto significativo y recomendable para eliminar casi la totalidad de las bacterias. EM AS. que se encuentren en el aire.. DE. IN. con el tratamiento del gas ozono a 7.4 ppm durante 8 horas frente a las bacterias suspendidas. En la Fig.2 se puede observar que la cantidad de mohos presentes en el ambiente de estudio. ST. alcanza un promedio de 21 ufc/30min con lo cual nos indica una cantidad inicial de mohos en. DE. SI. el ambiente. Las tres repeticiones que se realizaron para obtener este promedio inicial a 0 horas. N. no fueron homogéneos (Anexo 6), dado que en el primer ensayo se pudo encontrar un. IO. promedio de 40 ufc/30min para luego encontrar en las dos repeticiones siguientes, promedios. RE. CC. de 11 ufc/30min y 13 ufc /30min. Se puede observar la gran diferencia de los 3 ensayos a 0. DI. horas, se debe tener en cuenta que una semana antes del primer ensayo hubo una limpieza del ambiente en estudio y esto conlleva a remover papeles ,mayor tránsito de personas; realizando así un aumento en las fluctuaciones de aire interior y suspendiendo así esporas de mohos, el primer ensayo se realizó a fines de diciembre y los otros dos se realizaron entre enero y febrero 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. lo que marca una diferencia no solo en tiempo sino también en condiciones ambientales muy. Ó. N. distintas a las iniciales.. AC I. La cantidad de microorganismos es inversamente proporcional al tiempo de exposición del gas. M UN. IC. ozono. Como se observa en el tratamiento a 8 horas el cual disminuyó en promedio hasta 3 ufc/30min, este fue un descenso en el recuento de hongos bastante pronunciado, pero también. CO. existen hongos que no fueron eliminados en el tratamiento a 8 horas, no se puede asegurar que. A. Y. hay resistencia ya que no se investigaron las especies de los hongos hallados, pero también. ÁT. IC. podría deberse a otros factores como la difusión del gas ozono, la concentración del gas ozono. FO. RM. así como también la humedad relativa del ambiente .. IN. Según Gallo (1993), Valentín (2007) el rango óptimo de humedad relativa para que los hongos. DE. se desarrollen es 60% - 90%, sin embargo, una humedad relativa elevada y una alta temperatura. EM AS. son condiciones que favorecen la contaminación microbiológica del aire en ambientes internos, aunque siempre es necesario un sustrato como madera, celulosa, etc. (Shelton et al., 2002). Para. SI. ST. estos ensayos la humedad relativa se mantuvo entre (53% - 62%) es así que este rango se. DE. encuentra dentro de las condiciones apropiadas para que estos hongos puedan desarrollarse. N. excepto por el dato de 53% que se presentó en el tercer ensayo obtenido en febrero y en el cual. CC. IO. no se pudo detectar muchos hongos, y esto se debería a que no se encontraba en un rango. RE. óptimo de humedad.. DI. Se realizó el análisis estadístico a estos resultados y se obtuvo un p>0.05 (Anexo 9), lo que resulta que no existe una diferencia significativa entre los tratamientos realizados. Además se observa en la fig.2 una diferencia considerable entre los resultados de los tratamientos a 0 horas 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. y a 8 horas es así que el programa estadístico resalta esta diferencia y expresa la existencia de una diferencia significativa solo entre estas, en cambio los resultados de 1 hora y 4 horas no. Ó. N. expresan una significancia con respecto al tratamiento a 0 horas, ya que el recuento de hongos. AC I. fue elevado en comparación al tratamiento de 8 horas , y según la FDA (2011) los ambientes de. M UN. IC. laboratorio permiten la presencia de menos de 3 ufc/30min.. CO. Para el análisis de superficies, se observa en la Fig.3 la cantidad inicial de bacterias presentes. Y. que corresponde a un promedio de 17 ufc/30min mientras que en los tratamientos a 1 hora, 4. IC. A. horas y 8 horas resultaron recuentos elevados (Anexo 7), según la norma de FDA 2011. Los. ÁT. géneros bacterianos encontrados en las superficies analizadas, fueron Staphylococcus y. RM. Bacillus, ambos son microorganismos muy resistentes y las estructuras de resistencia de estos,. FO. la concentración del gas ozono así como el tiempo de exposición son posibles causas de. DE. IN. recuentos elevados en los tratamientos a 8 horas con gas ozono. Pero se sabe que según. EM AS. Sharma y Hudson (2008) el gas ozono presenta un efecto bactericida en muestras de cortinas,. ST. ropa de cama, muebles, paredes y es conveniente para superficies blandas.. SI. Se realizó el análisis estadístico resultando un p>0.05 (Anexo 9), con lo cual no se encontró. DE. diferencia significativa entre los tratamientos de gas ozono que se realizó a las superficies. Y se. IO. N. observa que existió una reducción en los recuentos bacterianos presentes en las superficies pero. CC. en las repeticiones que se realizaron los recuentos fueron muy dispersos en la mayoría de los. DI. RE. tratamientos y no fueron homogéneos.. En la investigación se utilizó una concentración de 7.4 ppm de gas ozono con la cual solo se pudo obtener solo un grupo de resultados con diferencia significativa, el tratamiento para 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. bacterias presentes en el aire expuestos a 8 horas, no dejando de lado los resultados posteriores los cuales también tienen importancia científica ya que se observó una disminución en la. Ó. N. cantidad de microorganismos a un tiempo de exposición de 8 horas en todos los tratamientos.. AC I. Los Factores más importantes como la humedad relativa fueron reportados para esta. M UN. IC. investigación, ya que cuando este decrece disminuye el agua disponible para los microorganismos, lo que causa deshidratación y por lo tanto la inactivación de muchos de ellos.. CO. Así como la desecación que puede causar una pérdida de viabilidad, El límite menor para el. A. Y. crecimiento de hongos es del 65% de humedad relativa; mientras que las bacterias requieren un. ÁT. IC. porcentaje mayor y al encontrarse en estación de verano la humedad relativa disminuyo y más. RM. en el último tratamiento ya que la temperatura aumentó y este factor disminuye la viabilidad de. FO. los microorganismos (Hernández y Marín, 2013).. DE. IN. No se manipuló la aeración la cual es un factor que incide en el estado de conservación de los. EM AS. objetos presentes en los ambientes interiores, con lo cual se evapora la humedad y se reduce la temperatura superficial, modificándose estos dos factores ambientales de los que depende el. ST. crecimiento microbiano (Hernández y Marín, 2013). Es así que al no manejar estos factores se. SI. pudo ver alterada tanto la efectividad del ozono como la viabilidad de los microorganismos. N. DE. presentes tanto en las superficies como en el aire.. IO. Sharma y Hudson (2008), usó gas ozono en 25 ppm durante 75 min, apoyando la sugerencia de. RE. CC. que las esporas bacterianas podrían combatirse con tratamientos de ozono a estas condiciones.. DI. Se refiere a aumentar la concentración en periodos cortos y según De Boer et al. (2006), se. estima que concentraciones de 12 ppm se ha utilizado para la descontaminación de habitaciones. Y la FDA que es la Organización Americana que se encarga de establecer parámetros de contaminación microbiana en Laboratorios Clínico – Médicos menciona que los 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ambientes de laboratorio entran en una clasificación A (grado 100) donde se establece que los ufc/m3 deben ser <3. Es así que los resultados encontrados son bacterias y hongos en el aire los. Ó. N. cuales el tratamiento de gas ozono a 8 horas coloca dentro de esta norma como ambiente. IC. AC I. estéril.. M UN. Es así que Sharma y Hudson (2008), sugieren que el ozono se puede generar a bajo precio, y. CO. aunque tóxico, este se disocia rápidamente a oxígeno, la liberación de este compuesto puede. Y. ser controlado desde fuera de la habitación. Además los costos para la desinfección de un. IC. A. ambiente interior cada cierto tiempo resultan no tan rentables para los fines de cualquier. ÁT. empresa. Además el gas ozono ofrece una potencial ventaja saludable sobre los agentes. RM. liberadores de cloro y otros desinfectantes comunes. Y esta investigación es un primer paso ya. FO. que al no encontrarse mucha información acerca de los usos del ozono en el aire en Perú, esta. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. acuerdo a sus requerimientos.. DE. IN. nace como una alternativa para mejorar la calidad del aire de diversos ambientes interiores de. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. 5. CONCLUSIÓN. AC I. Ó. El gas ozono a una concentración de 7,4 ppm con tiempo de exposición de 8 horas disminuye el. IC. número de bacterias y hongos presentes en el laboratorio de inmunología de la escuela de. M UN. Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo de 135 m3 con un equipo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. generador de ozono modelo Aqua 6.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. AC I. Ó. N. Alexopoulos C. Introducción a la Micología. 2a ed. Buenos Aires: Editorial universitaria; 1962.. M UN. IC. Brunekreef B, Holgate S. Air pollution and health. Lancet. 2002; 360: 1233–1242.. CO. Borrego S, Perdomo I , Guiamet P , Gómez de Saravia S. Estudio de la concentración. A. Y. microbiana en el aire de depósitos del Archivo Nacional de Cuba. Augmdomus. 2010; 1:. RM. ÁT. IC. 118-137.. DE. IN. ASSOC. J. 1995; 56 : 590-598.. FO. Boeniger M. Use of ozone generating devices to improve indoor air quality. AM. IND. HYG.. EM AS. Bonilla, A; Pérez, J: aislamiento y caracterización fenotípica de microorganismos presentes en sala de partos de un hospital de primer nivel del departamento de cundimarca. [En. DE. Disponible en:. SI. ST. Línea]Ed. Pontificia Universidad Javeriana. Fecha de Acceso: 16 de Julio del 2014.. CC. IO. N. http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis193.pdf. RE. Broadwater WT, Hoehn R C, King, PH. Sensitivity of Three Selected Bacterial Species to. DI. Ozone. APPL. MICROBIOL. 1973; 26(3): 391-393.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Burgassi S, Zanardi I, Travagli V, Montomoli E, Bocci V. How much ozone bactericidal activity is compromised by plasma components? Journal of Applied Microbiology. 2009;. AC I. Ó. N. 106: 1715–1721.. M UN. IC. Buttner M P, Stetzenbach L D. Monitoring Airborne Fungal Spores in an Experimental Indoor Environment to Evaluate Sampling Methods and the Effects of Human Activity on Air. A. Y. CO. Sampling. APPL. ENVIRON. MICROBIOL.1993; 59(1):219-226.. ÁT. IC. Chandra M, Venkata M., Jayarama R. Assessment of microbial (bacteria) concentrations of. RM. ambient air at semi-arid urban region: influence of meteorological factors. Applied. FO. Ecology and Environmental Research. 2005; 3(2): 139-149.. DE. IN. Chang SL. Modern concept of disinfection. J Sanitation Eng Div. 1971.97:689- 707.. EM AS. Condori Aruquipa D. Elaboración de manual de limpieza y desinfección de los ambientes de. ST. laboratorio de microbiología de alimentos “SELADIS” gestión 2009. TRABAJO. DE. SI. DIRIGIDO. Universidad Mayor de San Andrés, 2009.. IO. N. Cookson B, Peters B, Webster M, Phillips I, Rahman M, Noble W. Staff Carriage of Epidemic. CC. Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus. J. CLIN. MICROBIOL. 1989; 27(7): 1471-. DI. RE. 1476.. Dave SA. Efficacy of ozone against Salmonella enteritidis in aqueous suspensions and on poultry meat [MSc thesis]. Columbus, Ohio, U.S.A.: Ohio State University. 1999.p 26-68. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..