Efecto de dos especies nativas de Trichoderma sobre huevos y juveniles 2 de Meloidogyne sp en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Ó. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. AC I. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. IN. Efecto de dos especies nativas de Trichoderma sobre huevos y. EM AS. juveniles 2 de Meloidogyne sp. en condiciones de laboratorio TESIS. ST. PARA OBTENER EL TÍTULO DE:. DE. SI. BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO. TRUJILLO – PERÚ 2014. DI. RE. CC. IO. N. AUTOR: Br. Olinda Marianella Del Castillo Algarate. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. M UN. Dr. Orlando Velásquez Benítez. IC. AC I. Ó. N. TRUJILLO. A. Y. CO. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ÁT. IC. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. RM. VICE-RECTORA ACADÉMICA DE LA UNIVERSIDAD. DE. IN. FO. NACIONAL DE TRUJILLO. EM AS. Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori VICE-RECTORA ADMINISTRATIVA DE LA UNIVERSIDAD. IO. N. DE. SI. ST. NACIONAL DE TRUJILLO. Dr. Santiago Alberto Uceda Duclos. DE TRUJILLO. DI. RE. CC. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AC I. Ó. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. M UN. Dr. José Mostacero León. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. FO. Dr. Willian Zelada Estraver. Dra. Bertha Soriano Bernilla. SI. ST. EM AS. DE. IN. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. DI. RE. CC. IO. N. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. DEL ASESOR. IC. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis. M UN. titulada: “Efecto de dos especies nativas de Trichoderma sobre huevos y juveniles 2. IC. A. Y. CO. de Meloidogyne sp. en condiciones de laboratorio”.. RM. ÁT. CERTIFICA:. FO. Que la investigación ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido por. DE. IN. la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. EM AS. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. ST. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. SI. Por tanto, autorizo al Bachiller OLINDA MARIANELLA DEL CASTILLO. DE. ALGARATE, continuar con los procedimientos según sus fines.. IO. N. Z<s. DI. RE. CC. Trujillo, Mayo 2014. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AC I. Ó. N. PRESENTACIÓN. CO. M UN. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. Cumpliendo con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. A. Y. Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y. ÁT. IC. elevado criterio la presente Tesis titulada: “Efecto de dos especies nativas de. RM. Trichoderma sobre huevos y juveniles 2 de Meloidogyne sp. en condiciones de. FO. laboratorio”, con el objetivo de obtener de Título Profesional de Biólogo -. DE. IN. Microbiólogo.. DE. SI. ST. EM AS. Espero que este trabajo sea de su aprobación.. DI. RE. CC. IO. N. Trujillo, Mayo 2014. Br. Olinda Marianella Del Castillo. Algarate. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. MIEMBROS DEL JURADO. Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. Presidente. Secretario. MS.C. Miguel Muñoz Ríos Vocal. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. Ms. C. Juan Wilson Krugg. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. APROBACIÓN. AC I. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que. M UN. IC. el presente Informe de Tesis ha cumplido con los requisitos formales y. ÁT. IC. A. Y. CO. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. RM. Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza. EM AS. DE. IN. FO. Presidente. Secretario. MS.C. Miguel Muñoz Ríos Vocal. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Ms. C. Juan Wilson Krugg. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. M UN. A Dios por haberme otorgado la vida,. AC I. Ó. N. DEDICATORIA. por guiarme siempre, por haberme encaminado las veces que he caído, porque siempre estás. CO. ahí cuando te necesito. Por llenar mi corazón. ÁT. IC. A. Y. de amor, fortaleza, fe, esperanza y alegrías.. A mis Padres, Marianella y Cesar,. RM. por darme la vida, por sus enseñanzas y su. FO. comprensión, por todo su apoyo, porque. IN. siempre están a mi lado, por dar todo por mí y. DE. mis hermanos, por la voluntad que. ponen en. Gracias.. A Carlos, por tu compañía, por tus. consejos, por los jalones de orejas, por tu. apoyo en los momentos más difíciles, por tu cariño incondicional, por estar ahí cuando te necesito, por todo lo vivido junto a ti…por eso y mucho más…mil gracias mi cielo!!!. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. sacarnos adelante cada día de sus vidas. Mil. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. AGRADECIMIENTOS. De todo corazón le doy las gracias al Blgo. Mblgo. Juan Héctor Wilson Krugg;. M UN. IC. profesor de la Cátedra de Micología y Fitopatología, gracias por su asesoramiento, sus enseñanzas, por sus consejos, recomendaciones, y sobre todo gracias por brindarme su. CO. amistad. Muchas gracias por creer en mí para ejecutar y culminar este trabajo. También quiero agradecer de todo corazón a la Ing. Lisset Graterol Caldera, Jefe del. A. Y. área de Investigación y Desarrollo (I&D) – Campo, de la Empresa Camposol S.A., decirle. ÁT. IC. muchísimas gracias por la oportunidad brindada.. RM. Agradezco enormemente a mis amigos Roxana N. Ávila Ibañez y Guillermo J. Cox Trigoso, sólo les puedo decir que los quiero mucho, y que aprecio mucho su amistad, gracias. FO. por todas esas vivencias juntos, hemos aprendido mucho los unos a los otros, gracias porque sé. IN. que puedo contar con Uds. siempre…muchísimas gracias mis queridos amigos.. DE. Y por último no siendo menos importante, muy al contrario, a la persona que le voy a. EM AS. agradecer es a aquella persona que le puso sentido a mi vida, es aquella persona que le debo mi felicidad, es aquella persona que me ha apoyado desde siempre, es aquella persona que con su amor, cariño y comprensión, siempre me ha alentado a no retroceder, a no rendirme y a. mil gracias!!!.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. buscar siempre mis ideales…te amo “Carlos Collantes Arana”… por eso y mucho más te doy. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. Se determinó el efecto de dos Trichodermas nativas sobre juveniles 2 del. Ó. nemátodo fitopatógeno Meloidogyne sp. en condiciones de laboratorio. Para lo. AC I. cual se realizaron seis tratamientos que consistieron en T1 (L. esculentum sin. IC. Meloidogyne sp.), T2 (L. esculentum con Meloidogyne sp.), T3 (L. esculentum. M UN. con Meloidogyne sp. y Oxamyl) y T4 (L. esculentum con Meloidogyne sp. y P chlamydosporia); T5 (L. esculentum con Meloidogyne sp. y Trichoderma sp.. CO. aislado de planta sana-zona interna), T6 (L. esculentum con Meloidogyne sp. y. Y. Trichoderma sp. aislado de planta enferma-zona periferie). Para evaluar el. IC. A. porcentaje de peso radicular de L. esculentum, de nódulos radiculares producidos. ÁT. por Meloidogyne sp. y el porcentaje de J2 de Meloidogyne sp. Se sembró L.. RM. esculentum en 30 bolsas de almácigo las cuales contenían sustrato en una proporción (2:1), distribuidas en 5 bolsas por tratamiento. Luego se inoculó. FO. 15000 huevos de Meloidogyne sp. por bolsa a excepción del tratamiento control. Trichoderma sp. SI, Trichoderma sp. ETP y P.. DE. de 106 conidias/mL de. IN. negativo (T1). Posteriormente, a los 5 días de siembra se inoculó una suspensión. EM AS. chlamydosporia respectivamente, con 5 inoculaciones más de cada hongo con un intervalo de 10 días entre cada inoculación; mientras que al T3 se le inoculó por única vez 900 ppm de Oxamyl y al tratamiento control negativo solo se le. ST. agregó agua, todos los tratamientos fueron incubados a temperatura ambiente. SI. durante 1 mes y 15 días. Para determinar el efecto de Trichoderma sp. SI y. DE. Trichoderma sp. ETP sobre huevos de Meloidogyne sp. se inoculó 2 mL de. N. cada hongo y oxamyl, a una concentración de 106 conidias/mL y 900 ppm. CC. IO. respectivamente en pocillos que contenían 1 mL de agua destilada estéril con. DI. RE. aprox. 100 huevos de Meloidogyne sp. dejándose incubar por 72 horas, constó de cuatro repeticiones por tratamiento. Se concluye que Trichoderma sp. SI y. Trichoderma sp. ETP disminuyen significativamente tanto la población de huevos como juveniles 2 de Meloidogyne sp. en condiciones de laboratorio, y que Trichoderma sp. SI es el que ejerce el mayor efecto nematófago.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. AC I. Ó. AUTORIZACIÓN DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO…….. N. Pág.. IC. ASESOR……………………………………………………………………….…. ii. iv v. MIEMBRO DEL JURADO………………………………….………………….... vi. CO. M UN. PRESENTACIÓN……………………………………………………………....... Y. APROBACIÓN………………………………………….…………..………….... IC. A. DEDICATORIA………………………………………………….......................... vii viii ix. RESUMEN………………………………………………………………….......... x. INTRODUCCIÓN.………………………………………………….…......... 1. II. MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………………..... 7. FO. DE. IN. I.. RM. ÁT. AGRADECIMIENTOS…………………………………………..…………......... EM AS. 1. Material de estudio …………………………………………………….... 2. Procedimiento……………………………………………..……………..... 7 7. ST. 2.1 Evaluación del efecto de dos Trichoderma nativos sobre juveniles 2. SI. de Meloidogyne sp…………………………………………………... 8. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2.1.1 Obtención de cultivo joven de Trichoderma sp. SI, Trichoderma sp. ETP y P. chlamydosporia….……………... 8. 2.1.2 Propagación de cultivo de Trichoderma sp. SI, Trichoderma sp. y ETP …………………………..…………………………….... 9. 2.1.3 Recolección, esterilización y preparación del sustrato……….. 9. 2.1.4 Tratamiento superficial y siembra de semillas de L.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10. 2.1.5 Obtención de huevos de Meloidogyne sp….…….……….…. 10 10. de Trichoderma. IC. 2.1.7 Estandarización del inoculo de conidias. AC I. Ó. 2.1.6 Inoculación de Meloidogyne sp……………………….……. N. esculentum var. Río Grande “Tomate”……….…….…..…... de. Trichoderma. nativos. y. 11. P.. CO. 2.1.8 Inoculación. M UN. nativos y P. chlamydosporia………………………………... 11. 2.1.9 Preparación e inoculación de Oxamyl……………..………... 11. A. Y. chlamydosporia…………………………………………….... 12. ÁT. IC. 2.1.10 Lectura de los resultados………………..…………………... RM. 2.2 Evaluación del efecto de Trichoderma sp. SI y Trichoderma sp. 12. 2.2.1 Preparación de las suspensiones de los tratamientos………….... 12. 2.2.2 Lectura de los resultados…………………………………….... 13. 2.3 Análisis de datos…..……………………………………………….... 13. EM AS. DE. IN. FO. ETP obre huevos de Meloidogyne sp……………………………….. 14. ST. III. RESULTADOS ……………………………………………………………... SI. Fig. 1. Porcentaje de peso radicular de las plantas de L. esculentum var.. de tratamiento con Trichoderma sp. SI y Trichoderma sp. 15 ETP………………………………………………………………………….. DI. RE. CC. IO. N. DE. Río Grande infectadas con Meloidogyne sp., después de 2 meses. Fig. 2. Porcentaje de nódulos presentes en raíces de las plantas de L. esculentum var. Río Grande infectadas con Meloidogyne sp., después de 2 meses de tratamiento con Trichoderma sp. SI y. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 16. Trichoderma sp. ETP…………………….……………………………….. AC I. Ó. final de juveniles 2 de Meloidogyne sp. en suelo después de 2. N. Fig. 3. Porcentaje inicial de Meloidogyne sp. en suelo, frente al porcentaje. IC. meses de tratamiento con Trichoderma sp. SI y Trichoderma sp.. 17. M UN. ETP …………………………………………………………………………. CO. Fig. 4. Observación microscópica (40x) de la diferencia de huevos de Meloidogyne sp. no parasitados y parasitados con cada hongo, 18. IC. A. Y. a las 72 horas de inoculación…………………………….……….. ÁT. Fig. 5. Observación microscópica (40 x) de la secuencia de destrucción. RM. que sufren los huevos de Meloidogyne sp. frente a Trichoderma SI,. FO. a las 24, 48 y 72 horas de incubación…………………….………. 19. DE. IN. Fig. 6. Observación microscópica (40 x) de la secuencia de destrucción que sufren los huevos de Meloidogyne sp. frente a Trichoderma 19. IV. DISCUSIÓN…………………………………………...……………………. 20. ST. EM AS. a las 24, 48 y 72 horas de incubación………………….... ETP,. SI. V. CONCLUSIONES………………………………………………….….……. 26. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………. 27. IO. N. DE. VI. RECOMENDACIONES…………………………………………………….. CC. ANEXOS.………………………………………………………………….…….. Anexo 1.. Cultivo puro de Trichodermas nativos………………………………. Anexo 2.. Cultivo puro de Pochonia chlamydosporia………………………….. Anexo 3.. Bolsas. RE DI. 25. de. almacigo. con. sustrato. 2:1. para. 35 36 36. cada. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) 37. Anexo 4.. Huevo de Meloidogyne sp………………………………………….... 37. Anexo 5.. Raíces de Olea europea “Olivo” con presencia de nódulos causados. AC I. Ó. tratamiento…………………………………………………………... N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Pocillos. M UN. Anexo 6.. CO. conteniendo…………………………………………………………. Recuento de conidias de Trichodermas nativos. 39. en cámara de 40. Y. Anexo 7.. 38. IC. por Meloidogyne sp. ……………………………………………….... Plantines. de. tomate. inoculados. con. Pochonia 41. ÁT. Anexo 8.. IC. A. Neubauer…………………………………………………………….. con. huevos. de. Meloidogyne. DE. infección. FO. Raíces de plantines de tomate luego de un mes y medio de. IN. Anexo 9.. RM. chlamydosporia…………………………………………………….... sp…………………………………………………………………….. 42. EM AS. Anexo 10. Porcentaje promedio de peso radicular de L. esculentum frente a diferentes. ST. los. 43. SI. tratamientos…………………………………………………………. presentes en raíces de L. esculentum frente a los diferentes tratamientos………………………………………………………….. 44. CC. IO. N. DE. Anexo 11. Porcentaje promedio de nódulos producidos por Meloidogyne sp.. DI. RE. Anexo 12. Porcentaje promedio de juveniles 2 de Meloidogyne sp. en suelo frente a los diferentes tratamientos………………………………….. 45. Anexo 13. Análisis de varianza (ANAVA) y post anava de los porcentaje de. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 46. Anexo 14. Análisis de varianza (ANAVA) y post anava de los porcentajes de. AC I. Ó. evaluadas…………………………………………………………….. N. peso radicular de L. esculentum frente a los diferentes tratamientos. IC. nódulos producidos por Meloidogyne sp. presentes en raíces de L.. 47. M UN. esculentum frente a los diferentes tratamientos evaluadas…………... CO. Anexo 15. Análisis de varianza (ANAVA) y post anava de los porcentajes. Y. finales de juveniles 2 de Meloidogyne sp. en suelo frente a los tratamientos 48. IC. A. diferentes. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. evaluadas…………………………………………………………….. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCION. Ó. N. El cultivo de Lycopersicon esculentum, L. (tomate) es la hortaliza más. AC I. difundida en todo el mundo y la de mayor valor económico. Su demanda. M UN. IC. aumenta continuamente y con ella su cultivo, producción y comercio. El incremento anual de la producción en los últimos años se debe principalmente. CO. al aumento en el rendimiento y en menor proporción al aumento de la superficie. A. Y. cultivada1.. ÁT. IC. El tomate es un cultivo de alto riesgo fitosanitario en países tropicales,. RM. especialmente por los daños causados por enfermedades y plagas que afectan. FO. desfavorablemente los resultados productivos y económicos del cultivo. Los. IN. nemátodos fitoparásitos se encuentran en un lugar cimero en este grupo de. DE. patógenos a escala mundial, siendo bien reconocidas las pérdidas ocasionadas. EM AS. en el cultivo de hortalizas, donde el tomate es de los más afectados. Los nemátodos parásitos de plantas anualmente provocan pérdidas aproximadas del. DE. SI. ST. 12 % de la producción total de alimentos y fibras en el mundo 1.. N. Los nematodos son gusanos microscópicos no segmentados que constituyen el. CC. IO. grupo más abundante de animales multicelulares en la tierra, ocupando la. otros nemátodos, parásitos de insectos y herbívoros o parásitos de plantas2.. DI. RE. mayoría de hábitats. Existen nemátodos bacterívoros, fungívoros, predadores de. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El género Meloidogyne, agrupa a los nemátodos formadores de nódulos. N. radicales y comprende al menos 80 especies. En diversos cultivos, especies de. AC I. Ó. este género causan importantes daños alrededor del mundo. Su efecto puede ser. IC. directo al disminuir el rendimiento por el daño al sistema radical o indirecto al. M UN. infectar los tubérculos y causar agallas o protuberancias que les confiere una. CO. apariencia verrugosa que afecta su calidad y reduce su valor comercial. Seis. Y. especies del género Meloidogyne son consideradas de importancia global en el. IC. A. cultivo de tomate: Meloidogyne arenaria, M. chitwoodi, M. fallax, M. hapla, M.. ÁT. incognita, y M. javanica. Las 3 primeras son importantes en climas templados,. FO. RM. mientras que las otras 3 lo son en climas tropicales y subtropicales 3.. DE. IN. Meloidogyne spp. son nemátodos endoparásitos sedentarios (desarrollan su ciclo dentro de la planta hospedadora). Pasan por huevo, 4 estadios juveniles y. EM AS. adulto. Los juveniles. del segundo estadío son los únicos infectivos,. ST. desplazándose hasta las raíces e instalándose cerca del sistema vascular donde aumento de tamaño y número,. SI. se alimentan de las células induciéndoles. IO. N. DE. formando las típicas agallas o nódulos2.. DI. RE. CC. Un ciclo completo de Meloidogyne sp. puede durar un mes en condiciones óptimas y alargarse varios meses en condiciones desfavorables, dependiendo de la especie del nemátodo y factores ambientales como temperatura, humedad, tipo de suelo, etc. Las poblaciones más altas de juveniles en suelo suelen alcanzarse en primavera y otoño, dependiendo mucho de la temperatura. La 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. dispersión propia en el suelo es muy lenta (uno a dos metros por año), pero se. N. ve muy favorecida por prácticas culturales en las que interviene el hombre 2... AC I. Ó. El nemátodo del nudo de la raíz, daña a las plantas al debilitar las puntas de la. IC. raíz y al inhibir su desarrollo o estimular una formación radical excesiva, pero. M UN. principalmente al inducir la formación de hinchamiento de las raíces, las cuales. CO. no solo privan a las plantas de sus nutrientes, sino también del agua. El nemátodo estimula a las células para que crezcan y también licua parte de su. IC. A. Y. contenido, el cual succiona a través de su estilete2,4.. ÁT. Los síntomas más característicos son los que aparecen sobre los órganos. FO. RM. subterráneos de las plantas. Las raíces infectadas se hinchan en la zona de. IN. invasión y desarrollan las agallas típicas del nudo de la raíz, las cuales tienen un. DE. diámetro 2 o 3 veces mayor al de las raíces sanas2,4 .. EM AS. El control de nemátodos se realiza usualmente por la combinación de varias estrategias de manejo. El control cultural, utiliza tratamientos como barbechos,. SI. ST. inundaciones, aplicaciones de abonos orgánicos, plantas trampa y de cobertura,. DE. rotación de cultivos, etc.5. El control físico, utiliza tratamientos como. N. solarización, vapor de agua, encharcamiento, etc. Estos métodos, reducen. CC. IO. bastante las poblaciones de nemátodos fitoparásitos como Meloidogyne sp.; y. DI. RE. pueden ser usados de manera individual o combinada, pero son poco usados por los agricultores, ya que demandan una alta inversión y su aplicación requiere de periodos largos, reduciendo el tiempo de producción agrícola 6.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Actualmente, el control químico es una de las medidas que más se utilizan para. N. minimizar los daños causados por Meloidogyne sp., pues es indudable el efecto. AC I. Ó. eficaz que estos productos tienen sobre las diferentes especies de este. IC. nemátodo. Sin embargo, una de las principales limitaciones del uso de los. M UN. nematicidas, es que su aplicación frecuente modifica la microflora y microfauna. CO. del suelo, alterando las cadenas tróficas, eliminando los microorganismos. Y. antagonistas de los nemátodos fitoparásitos 8.. IC. A. Entre los agentes microbianos para el control de nemátodos formadores de. ÁT. agallas a nivel internacional, el hongo parásito facultativo de huevos de. FO. más promisorios para este fin9.. RM. nemátodos Pochonia chlamydosporia ha mostrado ser uno de los organismos. DE. IN. La ventaja de usar productos biológicos es que no hay residualidad química en el tejido vegetal, adaptándose a un sistema de producción orgánica abriendo. ST. continuo10.. EM AS. una ventana de exportación muy especial y lucrativa que va en un ascenso. SI. Los hongos nematófagos son habitantes del suelo que utilizan sus esporas o. DE. micelio para capturar nemátodos vermiformes. Se les encuentra en diferentes. IO. N. tipos de sustratos y son capaces de sobrevivir en condiciones climáticas o. DI. RE. CC. nutricionales extremas en diferentes regiones geográficas del mundo10. Su abundancia varía de 1,8–150 propágulos por gramo de suelo y esto obedece principalmente a la cantidad de materia orgánica, contenido de agua, tipo de suelo, temperatura y presencia de nemátodos hospederos10. De acuerdo a su. estrategia de captura, se clasifican en hongos endoparásitos y depredadores. Los 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hongos endoparásitos se caracterizan por la formación de estructuras adhesivas. N. o de ingestión (conidios adhesivos o ingeribles, o zoosporas móviles) que. AC I. Ó. infectan nemátodos o parasitan huevos formando un apresorio11. Los hongos. IC. depredadores en cambio, se caracterizan por producir una red hifal extensa en el. M UN. sitio donde se encuentren. Las estructuras predadoras de estos hongos pueden. CO. ser muy simples como los que forman hifas adhesivas septadas, redes. Y. adhesivas, ramificaciones adhesivas, botones adhesivos, anillos no constrictores. A. o especializados que forman anillos que se encargan de sostener los nemátodos. RM. ÁT. IC. vivos10.. FO. Los hongos del género Trichoderma, en particular T. harzianum, son usados. DE. IN. para el control de enfermedades porque producen metabolitos que inhiben el. ST. parasitismo11.. EM AS. crecimiento de otros hongos, y el alto nivel de competencia por el sustrato y el. SI. Recientemente, se han reportado trabajos sobre el uso potencial de. DE. Trichoderma sp. en el control de Meloidogyne sp. Sin embargo, las especies del. IO. N. género Trichoderma sp. son más conocidas por estar entre los antagonistas más. DI. RE. CC. utilizados para el control de un grupo importante de patógenos del suelo 12. Los mecanismos de acción por las que las especies de Trichoderma sp. desplazan al fitopatógeno son fundamentalmente tres, así tenemos, la competencia directa por el espacio o por nutrientes13, 14, la producción de metabolitos antibióticos15, 16. y el parasitismo directo de determinadas especies de Trichoderma sp. sobre 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las especies fitopatógenos17. Las raíces colonizadas por Trichoderma sp.,. N. frecuentemente presentan mejor crecimiento y peso radicular que las plantas no. AC I. Ó. tratas, incrementando la productividad del cultivo y su resistencia a factores. IC. bióticos y abióticos adversos 18, 19, 20.. M UN. Considerando que las especies de Trichoderma sp. son muy usadas en el. CO. control biológico de hongos fitopatógenos, especialmente de aquellos que. Y. atacan a partes subterráneas de los vegetales; ejerciendo un efecto. IC. A. positivo sobre el crecimiento de las plantas, haciéndolas más vigorosas, con. ÁT. mejor desarrollo del sistema radicular, aumentando los mecanismos de. RM. defensa de las plantas; y que además se ha demostrado que Trichoderma sp.. FO. también puede controlar nemátodos, permitiendo que los agricultores empleen. DE. IN. Trichoderma sp. no solo como hongo antagonista, sino también como hongo nematófago, haciendo de esta manera que los costos del tratamiento de sus. EM AS. cosechas disminuyan ya que solo necesitarían aplicar. un. solo. tipo. de. ST. controlador biológico. Por otra parte, se tiene conocimiento que el éxito del sean. SI. control biológico radica en obtener y utilizar microorganismos que. DE. aislados en los lugares nativos donde se presente la enfermedad, ya que para el. IO. N. control se debe considerar la variabilidad del. las condiciones bióticas. y abióticas. DI. RE. CC. términos de su adaptación a. aislamiento del hongo en. específicas12.Por lo cual la presente investigación tiene como objetivo evaluar el efecto de dos especies nativas de Trichoderma sp. sobre huevos y juveniles 2 de Meloidogyne sp. en condiciones de laboratorio.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. Material de estudio. IC. AC I. 1.. N. II. MATERIAL Y MÉTODO. Cultivos puros de dos Trichodermas nativas y Pochonia chlamydosporia. M UN. 1.1. CO. proporcionado por el Laboratorio de Fitopatología del Departamento. ÁT. IC. A. Biológicas, Universidad Nacional de Trujillo.. Y. Académico de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias. Huevos de Meloidogyne sp. extraídos de raíces de Olea europea “Olivo”.. 1.3. Treinta plantas de Lycopersicon esculentum var. Río Grande “Tomate”.. 1.4. Nematicida Nemate® 240 SL, cuyo principio activo es Oxamyl.. Procedimiento. DE. SI. 2.. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. 1.2. IO. N. El diseño experimental utilizado incluyó 6 tratamientos, de los cuales, 1 fue 3 controles positivos. y 2 experimentales, todos ellos con 5. CC. control negativo,. DI. RE. repeticiones.. 2.1 Evaluación del efecto de dos Trichodermas nativos sobre juveniles 2 de. Meloidogyne sp.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.1 Obtención de cultivo joven de Trichodermas nativos y Pochonia. N. chlamydosporia.. AC I. Ó. A partir de cada cultivo puro de Trichoderma SI, Trichoderma. IC. ETP, y P. chlamydosporia se procedió a resembrar por puntura. M UN. respectivamente, en tubos de ensayo conteniendo Agar Papa Dextrosa. CO. (PDA), los cuales fueron incubados a 25°C durante 7 días,. de. Trichodermas. ÁT. 2.1.2 Propagación. IC. A. Y. obteniéndose así un cultivo joven de cada hongo.. y. Pochonia. FO. RM. chlamydosporia.. nativos. IN. A partir de los cultivos jóvenes de Trichoderma SI, Trichoderma. DE. ETP se realizó una siembra por suspensión en frascos planos de. EM AS. vidrio conteniendo Agar Papa Dextrosa (PDA), los cuales fueron incubados a 25 °C durante 7 días. Posteriormente se obtuvo una. SI. ST. suspensión de conidias a partir de estos cultivos, lo que se. fueron incubadas a temperatura ambiente por dos semanas.. DI. RE. CC. IO. N. DE. inoculó en bolsas de polipropileno conteniendo arroz, las cuales. 2.1.3 Recolección, esterilización y preparación del sustrato. El sustrato estuvo conformado por dos partes de suelo y una parte de humus de lombriz de tierra (2:1). Se recolectó aproximadamente 60 Kg de suelo agrícola del campus de la Universidad Nacional de 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo que fue trasladado al laboratorio de Fitopatología, donde fue. N. tamizado y lavado con agua de caño, y posteriormente esterilizado. AC I. Ó. en autoclave a 121°C durante 15 minutos. El humus no se sometió a. IC. esterilización ya que hubiera perdido sus propiedades como abono.. M UN. La preparación del sustrato consistió en agregar 2 Kg de suelo y 1. CO. Kg de humus en cada bolsa de almácigo, llenándose 30 bolsas, que. Y. fueron distribuidas en 5 bolsas por tratamiento.. IC. A. 2.1.4 Tratamiento superficial y siembra de semillas de L. esculentum. ÁT. var. Río Grande Tomate.. RM. Las semillas se lavaron con agua destilada estéril para eliminar los. IN. FO. productos químicos de la certificación, luego se desinfectaron. DE. sumergiéndolas en alcohol al 70% durante tres minutos y se. EM AS. lavaron 10 veces consecutivas con agua destilada estéril; por último, se las dejó secar en condiciones de esterilidad. Se. ST. determinó el % de germinación de las semillas para posteriormente. DE. SI. sembrar por maceta, una semilla de L. esculentum var Rio Grande,. Obtención de huevos de Meloidogyne sp.. DI. RE. CC. IO. N. 2.1.5. a una profundidad de 1 cm.. Las masas de huevos fueron extraídas de raíces de Olea europea que se encontraban infectadas con Meloidogyne sp. Las raíces fueron lavadas con agua de caño y los nódulos presentes fueron cortados finamente. Se colocó en. frascos que contenían. una. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. solución de hipoclorito de sodio al 0.5% para su lavado,. N. sometiéndolos a agitación por 5 minutos aproximadamente. Luego. AC I. Ó. se tamizaron y se determinó el número de huevos de Meloidogyne. IC. sp., estandarizándose hasta obtener una concentración de 5,000. Y. CO. M UN. huevos de nemátodos por kilogramo de sustrato 38.. IC. A. 2.1.6 Inoculación de Meloidogyne sp.. ÁT. Inmediatamente sembradas las semillas de L. esculentum, se. RM. procedió a la inoculación de la concentración de la dosis. IN. FO. estandarizada de huevos de Meloidogyne sp., Esto se realizó para. DE. todos los tratamientos a excepción del grupo control negativo, que. EM AS. no se inoculo con Meloidogyne sp.. ST. 2.1.7 Estandarización del inoculo de conidias de los Trichodermas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. nativos y P. chlamydosporia. Se agregó 10 mL de agua destilada estéril y 1 gr del arroz colonizado con el hongo respectivo a un matraz estéril, agitándose moderadamente a fin de liberar las conidias del hongo, determinándose la concentración de la suspensión resultante, mediante la Cámara de Neubauer, para posteriormente estandarizar dicha suspensión a la concentración de 106 conidias/mL. Este. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. procedimiento se empleó para cada uno de los hongos a. AC I. Ó. N. evaluar.. IC. 2.1.8 Inoculación de los Trichodermas nativos y P. chlamydosporia.. M UN. A los 5 días de sembrada la semilla de L. esculentum se inoculó una. CO. suspensión de 106 conidias/ml a cada tratamiento a evaluar. Para. Y. cada tratamiento se realizó 5 inoculaciones más del hongo. IC. A. respectivo, con un intervalo de 10 días entre cada inoculación. Las. ÁT. macetas se incubaron a temperatura ambiente y en fotoperiodo.. RM. 2.1.9 Preparación e inoculación de Oxamyl.. IN. FO. Se agregó 2 mL del Nematicida a un matraz conteniendo 98 mL de. DE. agua destilada, cantidad necesaria para lograr una concentración de. EM AS. 900 ppm. A los 5 días de la inoculación de Meloidogyne sp. y siembra de L. esculentum se realizó la primera y única inoculación. SI. ST. del Nematicida.. DI. RE. CC. IO. N. DE. 2.1.10 Lectura Se realizó a los dos meses de inoculada la suspensión de 5,000 huevos de nemátodos por kilogramo de sustrato. Para esto se procedió a tomar una muestra de 100 gr de sustrato de cada tratamiento y se evaluó el nivel de infestación de juveniles 2 de Meloidogyne sp. en el sustrato inoculado. Cada sustrato se pasó por. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tamices de 145 y 38 µm, de mayor a menor tamaño. N. respectivamente. También se procedió a extraer las plantas. AC I. Ó. pertenecientes a cada tratamiento y se realizó el conteo de. se. expresaron. como. porcentaje. promedio. M UN. resultados. IC. nodulaciones y peso de las radicular de L. esculentum, estos. CO. respectivamente.. Y. Cada tratamiento constó de 5 repeticiones; y tanto los tratamientos. IC. A. inoculados y no inoculados con Meloidogyne sp. fueron sometidos a. RM. ÁT. la misma evaluación,. Evaluación del efecto de dos especies nativas de Trichoderma sobre. FO. 2.2. DE. IN. huevos de Meloidogyne sp.. EM AS. 2.2.1 Preparación de las suspensiones de los tratamientos.. ST. A partir del cultivo puro de cada hongo se preparó una suspensión. 2mL de cada suspensión en pocillos que contenían 1mL se suspensión de agua destilada estéril con aproximadamente 100 huevos.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. de 106 conidios/mL y una suspensión de oxamyl, se colocó. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.2 Lectura. N. La evaluación se realizó a las 24, 48 y 72 horas después de la. AC I. Ó. inoculación, realizándose observaciones al microscopio a 40X. IC. respectivamente.. M UN. Cada tratamiento constó de 4 repeticiones, y también fueron. A. Análisis de datos. ÁT. IC. 2.3. Y. CO. evaluados los tratamientos control.. RM. La determinación del efecto de dos Trichodermas nativos sobre juveniles. FO. 2 de Meloidogyne sp., se realizó analizando el porcentaje de peso. IN. radicular, porcentaje de nodulación en plantas de L. esculentum y el. DE. porcentaje de juveniles 2 de Meloidogyne sp. presentes en el sustrato,. EM AS. procesados mediante la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. (ANOVA), utilizando el paquete estadístico SPSS v.15 40.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. AC I. Ó. N. III.. IC. En la figura 1 se observa que el porcentaje del peso radicular de las plantas de L.. M UN. esculentum var. Río Grande infectadas con Meloidogyne sp. es mayor en las plantas. Y. CO. inoculadas con Trichoderma sp. SI.. IC. A. En la figura 2 se observa que el porcentaje de nódulos presentes en raíces de las. ÁT. plantas de L. esculentum var. Río Grande infectadas con Meloidogyne sp. es mayor. FO. RM. en las plantas inoculadas solo con Meloidogyne sp., mientras que el menor porcentaje. DE. IN. se halló en las plantas inoculadas con Trichoderma sp. SI.. EM AS. En la figura 3 se observa que las dos especies de Trichoderma evaluadas disminuyen significativamente la cantidad de juveniles 2 de Meloidogyne sp. luego de 2 meses de. DE. SI. ST. evaluación.. En la figura 4, 5 y 6 se observa que los dos Trichodermas nativas como los. DI. RE. CC. IO. N. tratamientos positivos destruyen los huevos de Meloidogyne sp.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 332. 218. 218. AC I. 250. Ó. N. 300. 100. 100. a. 50. 103. 87. a. b. a. c. b. T3. T4. T6. FO. RM. ÁT. IC. Tratamientos. T5. A. T2. Y. 0 T1. M UN. 150. IC. 200. CO. Porcentaje de peso radicular de l. sculentum.. 350. DE. IN. Fig. 1. Porcentaje de peso radicular de las plantas de L. esculentum var. Río Grande infectadas con Meloidogyne sp. en 6 tratamientos, después de 2 meses de evaluación con dos Trichoderma nativos.. SI. ST. EM AS. T1: Plantas sin Meloidogyne sp., T2: Plantas con Meloidogyne sp., T3: Plantas con Meloidogyne sp. y Oxamyl, T4: Plantas con Meloidogyne sp. y P. chlamydosporia, T5: Plantas con Meloidogyne sp. y Trichoderma SI y T6: Plantas con Meloidogyne y Trichoderma ETP.. b: p > 0.05. c: p > 0.05. DI. RE. CC. IO. N. DE. a: p > 0.05. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. 100. Ó AC I. 90 70. IC. 80. M UN. 59. 60. 50. 50. 41. CO. 40. 23. a. 10. b. c. c. 0 T2. T3 T4 Tratamientos. T5. T6. FO. RM. T1. c. IC. 0. a. A. 20. Y. 30. ÁT. porcentaje de nodulospresentes en raices de L . sculentum. 100. EM AS. DE. IN. Fig. 2. Porcentaje de nódulos presentes en raíces de las plantas de L. esculentum var. Río Grande infectadas con Meloidogyne sp. en 6 tratamientos, después de 2 meses de evaluación con dos Trichoderma nativos.. DE. SI. ST. T1: Plantas sin Meloidogyne sp., T2: Plantas con Meloidogyne sp., T3: Plantas con Meloidogyne sp. y Oxamyl, T4: Plantas con Meloidogyne sp. y P. chlamydosporia, T5: Plantas con Meloidogyne sp. y Trichoderma SI y T6: Plantas con Meloidogyne y Trichoderma ETP.. b: p > 0.05. c: p > 0.05. DI. RE. CC. IO. N. a: p > 0.05. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) AC I. Ó. 55. 60. IC. 50. 30. M UN. 35. 40. 24. 18. 0 T3. T4. ÁT. T2. IC. 0 T1. c. c. c. c. Y. b. a. 10. CO. 16. 20. A. porcentaje final de juveniles 2 de Meloidogyne sp.. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. T5. T6. FO. RM. Tratamientos. DE. IN. Fig. 3. Porcentaje inicial de Meloidogyne sp. en suelo, frente al porcentaje final de juveniles 2 de Meloidogyne sp. en suelo, en 6 tratamientos, después de 2 meses de evaluación con dos Trichoderma nativos.. SI. ST. EM AS. T1: Plantas sin Meloidogyne sp., T2: Plantas con Meloidogyne sp., T3: Plantas con Meloidogyne sp. y Oxamyl, T4: Plantas con Meloidogyne sp. y P. chlamydosporia, T5: Plantas con Meloidogyne sp. y Trichoderma SI y T6: Plantas con Meloidogyne y Trichoderma ETP.. b: p > 0.05. c: p > 0.05. DI. RE. CC. IO. N. DE. a: p > 0.05. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Fig. 4. Observación microscópica (40x) de la diferencia de huevos de Meloidogyne. EM AS. sp. no parasitados y parasitados con las dos especies,de Trichodermas nativas a las 72 horas de inoculación: A. Huevo de meloidogyne sp. sin inoculacion, B. Penetración de hifas, C. Adherencia de hifas a la capa vitelina, D. Roptura de la pared celular, E.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Desintegracion total del huevo de Meloidogyne sp.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. Fig. 5. Observación microscópica (40 x) de la destrucción que sufren los huevos de. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. Meloidogyne sp. frente a Trichoderma SI a las 24, 48 y 72 horas de incubación.. CC. Fig. 6. Observación microscópica (40 x) de la destrucción que sufren los huevos de. DI. RE. Meloidogyne sp. frente a Trichoderma ETP a las 24, 48 y 72 horas de incubación.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. N. IV.. AC I. Ó. De los resultados obtenidos al evaluar el efecto de dos Trichodermas nativos. IC. sobre Meloidogyne sp., se observó que el porcentaje de peso radicular de. M UN. Lycopersicon esculentum disminuye cuando se encuentra infectado por nemátodos;. CO. esto podría deberse a que la formación de huevos es un proceso que implica una gran. Y. demanda de agua, nutrientes y productos de la fotosíntesis por lo tanto las raíces son. IC. A. mucho más susceptibles volviéndose raquíticas y por consiguiente disminuye la. ÁT. eficiencia en la formación de raíces primarias y secundarias21. De forma contraria se. RM. observó que el porcentaje de peso radicular de Lycopersicon esculentum se mantiene. FO. cuando se aplica oxamyl, por lo que este nematicida no es fitotóxico si se aplica en el. EM AS. DE. IN. momento y a la dosis recomendada.21. Por otro lado, el porcentaje de peso radicular de L. esculentum aumentó. ST. significativamente en los tratamientos utilizados (T4, T5 y T6) respecto a las plantas. SI. no inoculadas (T1), el resultado obtenido puede deberse a la capacidad enzimática y. DE. parasita21, a la producción de metabolitos estimuladores del crecimiento vegetativo. IO. N. por parte de Pochonia chlamydosporia y Trichoderma sp. o a que ambos hongos son. CC. endófitos7,22.. DI. RE. Smith et al., señalan que estos incrementos pueden atribuirse a la eliminación de patógenos menores que se encuentran en la rizósfera23; se han señalado otras. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. alternativas, Windham, encontró que Trichoderma produce un factor regulador de. Ó. N. crecimiento sobre plantas de tomate, tabaco y rábano24.. AC I. Altamore et al.sugieren que la promoción del desarrollo se debe a que Trichoderma. IC. tiene la capacidad de solubilizar el manganeso sin importar el pH del medio ni la. M UN. disponibilidad del mismo, es decir, que lo solubiliza constantemente, estos autores. CO. señalan que este microelemento es requerido para varias funciones fisiológicas de las. Y. plantas, tales como la fotosíntesis, el metabolismo del nitrógeno y la síntesis de los. IC. A. compuestos aromáticos como precursores de aminoácidos y hormonas, de fenoles y. ÁT. de lignina; resaltando, que por consiguiente el manganeso juega un papel importante. FO. RM. en el crecimiento y la resistencia a enfermedades de las plantas25.. IN. Con respecto al porcentaje de nódulos producidos por Meloidogyne sp. en raíces de L.. DE. esculentum, según el análisis estadístico. existe diferencia significativa entre los. EM AS. tratamientos 1y5; tratamientos 3,4,6 y el tratamiento 2 (control positivo) donde solamente se inoculó Meloidogyne sp., esto quiere decir que Trichoderma SI afecto. SI. ST. considerablemente al nemátodo impidiendo que se forme mayor cantidad de nódulos;. DE. oxamyl, P. chlamydosporia y Trichoderma ETP consiguieron el mismo objetivo de. N. reducir los nódulos pero no fueron tan efectivos en comparación con Trichoderma SI. CC. IO. ya que este último estadísticamente resulto ser igual que el control negativo (sin. RE. inoculación de Meloidogyne sp.) .A diferencia del tratamiento 2 el porcentaje de. DI. nódulos formados en raíces fue mayor que todos. En relación a los nódulos debemos añadir que las especies Meloidogyne sp. son endoparásitos sedentarios. Los especímenes jóvenes móviles en la segunda etapa (J2) emergen de los huevos, se. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mueven hacia las raíces y penetran en ellas a través de la punta, en las regiones de. N. una penetración previa, o donde se encuentran pequeñas heridas21.. AC I. Ó. En la raíz, los J2 invaden la endodermis y, al entrar en la estela, inducen la. IC. producción de células gigantes con núcleos múltiples que se derivan del parénquima. M UN. vascular o de la diferenciación de las células vasculares en la parte central de la. CO. estela. La formación de estas células gigantes trastorna o bloquea los vasos de xilema que la rodea. También se induce la multiplicación de las células corticales, lo que. IC. A. Y. resulta en la formación de llagas características 3,21.. ÁT. Los especímenes jóvenes J2 se alimentan de estas células gigantes y mudan tres veces. RM. para convertirse en hembras adultas que crecen rápidamente. La disección de las. FO. llagas revela las típicas hembras hinchadas en varias etapas de maduración. Cuando. DE. IN. las hembras maduran, forman sacos 3,21.. La reproducción es partenogénica. Un alto porcentaje de machos se producen sólo en. EM AS. condiciones adversas. Los huevos se depositan dentro de una matriz gelatinosa para. ST. que se forme una masa de huevos. Una sola masa de huevos puede contener varios. SI. centenares de huevos. En las raíces primarias, carnosas y gruesas, las masas de. IO. N. DE. huevos pueden quedarse dentro de la raíz21,26.. CC. El nematicida oxamyl (control positivo) disminuyó a un 59% la cantidad de. DI. RE. nódulos formados respecto al total, mientras que en los tratamientos donde se. aplicaron las 2 especies de Trichoderma, se presentó una disminución del porcentaje de nódulos (Fig. 2), esto puede deberse a que Trichoderma al ser aplicado a las raíces, forma una capa protectora, haciendo una simbiosis. El hongo se alimenta de los 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. exudados de las raíces y las raíces son protegidas por el hongo y al mismo tiempo. N. reduce o elimina las fuentes de alimento para las J2 de Meloidogyne, impidiendo. AC I. Ó. además el ingreso del nemátodo a la raíz, variando este tipo de protección según la. M UN. IC. especie de Trichoderma27,48,49,50.. CO. Al realizar el análisis estadístico se observó que la dos especies de Trichoderma. Y. nativos disminuyen la población de juveniles 2 de Meloidogyne sp., siendo. IC. A. Trichoderma SI el que presentó mayor efecto, esto probablemente se deba a que. ÁT. Trichoderma es capaz de producir diferentes antibióticos volátiles y no volátiles; y. RM. que se ha demostrado que puede parasitar, controlar y destruir los fitonemátodos7. Es. FO. así que, Pérez et. al.28 afirman que Trichoderma spp. es un biorregulador efectivo. IN. contra nemátodos del género Meloidogyne por medio de sus toxinas e hifas. Méndez. DE. y Polanco29 informan resultados similares, obteniendo un notable decrecimiento de. EM AS. las poblaciones de nemátodos formadores de agallas con una dosis de 8kg/ha de T.. ST. harzianum en diferentes etapas del cultivo del tomate al reducir las poblaciones de. DE. SI. grado tres y cuatro, de una escala de cinco grados, a grado uno.. IO. N. El efecto que tienen las dos especies de Trichodermas nativos utilizados sobre. CC. huevos de Meloidogyne sp., se podría deber a que este género parasita al fitopatógeno. DI. RE. mediante enrollamiento, ganchos y cuerpo de tipo apresorio, que penetran la pared celular por acción hidrolítica de las enzimas quitinasas y gluconasas30,43. Estas enzimas pueden degradar la cutícula de los insectos, cuya estructura está compuesta por quitina31, 32,33. El huevo de Meloidogyne presenta una capa vitelina externa, una 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. capa media de quitina y una capa interna de glicolipídos .Esto explicaría porque lo. N. huevos de nemátodos son grandemente afectados con el tratamiento de las especies. IC. AC I. Ó. de Trichoderma 34,35.. M UN. Las cepas de Trichoderma se diferencian entre sí por los niveles de expresión de. CO. las enzimas hidrolíticas, lo cual determina sus características antagónicas35,41,42, esto. Y. explicaría porque el porcentaje de J2 de Meloidogyne sp. difiere en las dos especies. IC. A. de Trichoderma tratadas, además éste género produce metabolitos que actúan como. ÁT. nematicidas, tales como Trichodermin, Suzukacilina, Alameticina, Dermadina,. RM. Penicilina, Trichotecenosa y Tricorzinianos que se han reportado como sintetizados. FO. por Trichoderma harzianum; o Gliotoxina producido por Trichoderma viride 36,37,39,39,40. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. .. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. AC I. Ó. N. V.. CO. M UN. y juveniles 2 de Meloidogyne sp. en condiciones de laboratorio.. IC. Los dos Trichodermas nativos estudiados tienen un efecto negativo sobre los huevos. Y. Trichoderma sp. SI es el que ejerce el mayor efecto inhibitorio sobre juveniles 2 de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Meloidogyne sp.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. VI. RECOMENDACIONES. AC I. Ó. Realizar estudios en campo utilizando Trichoderma nativos para evaluar si el. IC. comportamiento de dichas cepas son las mismas que se obtuvieron a nivel de laboratorio,. M UN. teniendo en cuenta que las condiciones ambientales podría influir en los resultados.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. un buen efecto sobre huevos y juveniles 2 de Meloidogyne sp.. CO. Realizar la identificación de los de los Trichoderma nativos estudiados ya que presentaron. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. IC. Nemátodos. Universidad de Pinar del Río, México; 2010; p 1-2.. AC I. 1. Santana Y, Del Busto A. Alternativas agroecológicas en el manejo de. M UN. 2. Talavera, M. 2003. Manual de nematología agrícola. introducción al análisis y control nematológico para agricultores y técnicos de agrupaciones de. CO. defensa vegetal.. 3. Montero Z, García C, Salazar L, Valverde R, Gómez L. Detección de. A. Y. Meloidogyne incognita en tubérculos de papa en Costa Rica .Rev. Agronomía. IC. Costarricense.2007;31(1):78.. RM. Editorial Limusa. México. 756 p.. ÁT. 4. AGRIOS, G. 1988. Fitopatología. Trad. del Inglés por Manuel Guzmán Ortiz.. FO. 5. Sandoval B, Claudio R. Manejo integrado de enfermedades en cultivos. IN. hidropónicos. Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la. DE. Alimentación. Universidad de Talca. 2004; p. 1 – 53. 6. Zavaleta E. Alternativas del manejo de las enfermedades de las plantas. Rev.. EM AS. Terra. 1999; 17 (3): 201 – 207. 7. Baños Y et. al. Efecto de enmiendas orgánicas y Trichoderma spp. en el. SI. 233.. ST. manejo de Meloidogyne spp. Rev. Bras. de Agroecología. 2010; 5(2): 224 –. DE. 8. Araya M. Situación actual del manejo de nemátodos en banano (Musa AAA) y plátano (Musa AAB) en el Trópico Americano. En: Rivas G, Rosales F. y otras plagas asociadas al cultivo de las musáceas en los trópicos. Actas del taller “Manejo convencional y alternativo de la Sigatoka negra, nemátodos y otras plagas asociadas al cultivo de las musáceas” celebrado en Guayaquil;. DI. RE. CC. IO. N. editores. Manejo convencional y alternativo de la Sigatoka negra, nemátodos. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ecuador. 11-13 de agosto de 2003. Montpelier, FR. INIBAP; 2003. p. 79 – 102. Ceiro W, Puertas A, Arévalo J, Hidalgo L. Efectos de la aplicación. N. 9.. AC I. Ó. de Pochonia chlamydosporia var. catenulata Kamyscho ex Barron y Onions. (Zare y Gams) sobre el desarrollo de plántulas de tomate (Solanum. M UN. IC. lycopersicum L.).Rev. Protección vegetal. La Habana 2011; 26(2):1.. 10. Peraza W, Orozco M, Esquivel A, Rivera G, Chaverri F. Aislamiento e. CO. identificación de hongos nematófagos nativos de zonas arroceras de Costa. Y. Rica. Rev. Agronomía mesoamericana.2011; 22(2):233-243.. IC. A. 11. Reyes R, Barranco B, García G, Jiménez G. Actividad in vivo de. ÁT. Trichoderma harzianum sobre Sclerotium rolfsii en plántulas de tomate. Rev.. RM. Manejo Integrado de Plagas y Agroecología .Costa Rica 2002; 45-48.. IN. FO. 12. Ezziyyani M, Pérez C, Sid A, Requena M, Candela M. Trichoderma. DE. harzianum como biofungicida para el biocontrol de Phytophthora capsici en. 26: 35 – 45.. EM AS. plantas de pimiento (Capsicum annuum L.). Rev Anales de Biología. 2004;. ST. 13. Chet I, Ibar J. Biological control of fungal pathogens. Rev. Applied. SI. Biochemistry & Biotechnology. 1994; 48: 37 – 43.. DE. 14. Belanger R, Dufuor N, Caron J, Benhamou N. Chronological events. Botrytis cinerea: Indirect evidence for sequential role of antibiotics and parasitism. Rev. Biocontrol Science Technology. 1995; 5: 41 – 54.. DI. RE. CC. IO. N. associated with the antagonistic properties of Trichoderma harzianum against. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..