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Inducción de embriogénesis somática a partir de embrión cigotico inmaduro de Persea americana Mill Var Hass “palto”, utilizando 2,4 diclorofenoxiacético y bencil amino purina

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI EN. CI. Inducción de embriogénesis somática a partir de embrión cigotico inmaduro de Persea americana Mill.Var. Hass “palto”, utilizando 2,4diclorofenoxiacético y bencil amino purina. TESIS. CA. DE. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE. BIÓLOGO AUTOR:. ASESOR: Dr. Chico Ruíz Julio Roger. BI. BL. IO. TE. MARIA AURELIA POLO SANCHEZ. Trujillo-Perú 2017. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. Dr. Orlando Moisés Gonzales Nieves. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. CI EN. CI. AS. BI. O. Rector. Dr. Rubén Vera Veliz. Dr. Weymer Portocarrero Cárdenas Vicerrector de Investigación. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Vicerrector Académico. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. Freddy Rogger Mejía Coico. LO. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. CI EN. CI. AS. BI. O. Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas. Dr. Segundo Eloy López Medina. IO. TE. CA. DE. Jefe del Departamento de Ciencias Biológicas. Dr. Freddy Peláez Peláez. BI. BL. Director de la Escuela Académico Profesional de Ciencias Biológicas. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AS. Señores miembros del jurado Dictaminador: En cumplimiento con las disposiciones vigentes de la Universidad Nacional de. IC. Trujillo, Facultad de Ciencias Biológicas pongo a vuestra consideración y criterio. G. el Informe de Tesis titulado: ´´Inducción de embriogénesis somática a partir de. LO. embrión cigotico inmaduro de Persea americana Mill.Var. Hass “palto”, utilizando 2,4-diclorofenoxiacético y bencil amino purina ´´. Siendo uno de los requisitos. Trujillo, mayo del 2017. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. indispensables para optar el Título de Biólogo.. BI. -----------------------------------------Br. María Aurelia Polo Sánchez. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe, en calidad de asesor del informe de Tesis: ´´ Inducción de. AS. embriogénesis somática a partir de embrión cigotico inmaduro de Persea. IC. americana Mill.Var. Hass “palto”, utilizando 2,4-diclorofenoxiacético y bencil. amino purina ´´, certifica que ha sido desarrollado en conformidad con los. LO. y sugerencias alcanzadas por los miembros del jurado.. G. objetivos propuestos, que el Informe ha sido revisado y acoge las observaciones. O. Por lo tanto, autorizo al Br. Polo Sánchez María Aurelia, para continuar con el. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. trámite correspondiente.. --------------------------------------------. BI. BL. Dr. Julio Chico Ruiz. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA A: Dios, por brindarme el regalo de vivir y poder crecer como persona y profesional. Por estar conmigo en cada. AS. paso que doy, por fortalecer mi corazón e iluminar mi. IC. mente, por haber puesto en mi camino a aquellas. G. personas que han sido soporte y compañía durante todo. LO. el período de ejecución.. O. A: Mis padres María y Francisco por ser uno de los. BI. pilares fundamentales de lo que hasta ahora he logrado. AS. en la vida, tanto académica, como moralmente, por su incondicional apoyo mantenido perfectamente hasta el. CI EN. CI. día de hoy.. A:mi abuelita Aurelia Gonzales Bocanegra por haber sido uno de los pilares más importantes en mi vida y un ejemplo de mujer alegre,. DE. luchadora y llena de bondad. Por haberme enseñado que si quieres lograr algo en la vida siempre tienes que hacerlo con mucho esfuerzo y. CA. trabajo. Y aunque ahora no está a mi lado quiero decirle que siempre. BI. BL. IO. TE. seguiré su ejemplo y nunca olvidare la maravillosa persona que fue.. A: Mi esposo Edwin y mis dos hijos (Piero y Cielo); por su apoyo y amor incondicional que me brindan día a día, por quererme con mis virtudes y defectos, y, creer en mí siempre. Por ser la fuerza que me impulsa a ser mejor cada día.. vi. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO Agradezco el apoyo brindado de mi asesor Dr. Julio Chico Ruiz. AS. que, con paciencia y optimismo me enseño que por más difícil AGRADECIMIENTOS: e imposible que parezca cumplir una meta siempre se puede. IC. lograr. gracias profesor sus lecciones y experiencias vividas. BI. O. LO. G. que me ayudaran en el transcurso de vida profesional. |. A mis padres María y Francisco por su apoyo y amor que. fueron. AS. incondicional. una. de. las bases. CI. fundamentales para poder culminar la realización de. CI EN. este proyecto de tesis.. DE. A la Universidad Nacional de Trujillo, en especial a la plana docente de la Facultad de Ciencias. que. me. CA. Biológicas por sus enseñanzas y conocimientos ofrecieron. mi. formación. BI. BL. IO. TE. profesional.. durante. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. BI. CI EN. CI. AS. Presidente. O. Dra. Mercedes Elizabeth Chaman Medina. Secretario. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Dr. Roger Veneros Terrones. Dr. Julio Roger Chico Ruíz Vocal. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. APROBACIÓN. AS. BI. O. LO. G. IC. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el presente informe de TESIS titulado: Inducción de embriogénesis somática a partir de embrión cigotico inmaduro de Persea americana Mill.Var. Hass “palto”, utilizando 2,4-diclorofenoxiacético y bencil amino purina, ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales siendo aprobados por UNANIMIDAD. CI. Dra. Mercedes Elizabeth Chaman Medina. Dr. Roger Veneros Terrones Secretario. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Presidente. Dr. Julio Roger Chico Ruíz Vocal. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. RESUMEN. Persea americana Mill “palto”; es una dicotiledónea, importante en la. IC. gastronomía, estética, nutrición y medicina. En la actualidad se propaga por. G. métodos convencionales empleando injertos en patrón nodriza, el cual requiere. LO. de un espacio considerable si se pretende obtener una producción grande; motivo por el cual el interés de emplear técnicas in vitro como la embriogénesis. O. somática; para obtener una producción a gran escala de genotipos deseados. BI. empleando lugares poco espaciosos y de esa manera beneficiar a la micro y macro empresa dedicadas a la producción de este fruto. En el presente trabajo. AS. se hizo con el objetivo de poder demostrar la inducción de embriogénesis. CI. somática a partir de embrión cigotico inmaduro de “palto”; cuyos tratamientos fueron: I:2,4-D/BAP (0.1/0 ppm); II:2,4-D/BAP (0.1/1 ppm); III:2,4-D/BAP (0/1. CI EN. ppm); IV:2,4-D/BAP (0.1/5 ppm); V:2,4-D/BAP (0/5 ppm); VI:2,4-D/BAP (0,1/10 ppm); VII:2,4-D/BAP (0/10 ppm), cada uno con sus tres repeticiones .La evaluación partió de explantes con callo y continuo hasta los 60 días en que se. DE. obtuvo el embrión , tomando como dato la ganancia en peso ,longitud y el número de embriones por tratamiento. Se encontró que solo los tratamientos (V. CA. y VII), fueron los únicos que obtuvieron embriones, con un total de (84 y 78) por tratamiento, siendo ambas cantidades casi similares por lo cual no hubo. TE. diferencias significativas entre ellos respectivamente. Por consiguiente, la. IO. Inducción de embriogénesis somática a partir de embrión cigotico inmaduro de Persea americana Mill.var. Hass “palto”, utilizando 2,4-diclorofenoxiacético y. BL. bencilaminopurina, logró inducir embriones somáticos en los tratamientos de (V. BI. y VII); de 5 y 10 ppm BAP a los 60 días de la evaluación.. Palabra clave: Persea americana, embriogénesis somática, embrión cigotico, cultivo in vitro. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ABSTRACT Persea americana Mill "avocado"; Is a dicotyledonous, important in gastronomy,. IC. aesthetics, nutrition and medicine. At present, it is propagated by conventional. G. methods employing grafts in nurse pattern, which requires considerable space if. LO. it is intended to obtain a large production; Which is why the interest of using in vitro techniques such as somatic embryogenesis; To obtain a large scale. O. production of desired genotypes using places that are not very spacious and thus. BI. benefit the micro and macro enterprises dedicated to the production of this fruit. In the present work was made with the aim of being able to demonstrate the. AS. induction of somatic embryogenesis from immature citotic embryo of "palto";. CI. Whose treatments were: I: 2,4-D / BAP (0.1 / 0 ppm); II: 2,4-D / BAP (0.1 / 1 ppm); III: 2,4-D / BAP (0/1 ppm); IV: 2,4-D / BAP (0.15 ppm); V: 2,4-D / BAP (0/5 ppm);. CI EN. VI: 2,4-D / BAP (0.1 / 10 ppm); VII: 2,4-D / BAP (0/10 ppm), each with its three replicates. The evaluation was based on explants with callus and continuous until the 60 days in which the embryo was obtained, taking as data the gain in weight. DE. , Length and the number of embryos per treatment. It was found that only treatments (V and VII) were the only ones that obtained embryos, with a total of. CA. (84 and 78) per treatment, both being almost similar quantities, so that there were no significant differences between them respectively. Consequently, the. TE. induction of somatic embryogenesis from the immature cigotic embryo of Persea americana Mill.var. Hass "avocado", using 2,4-dichlorophenoxyacetic and. IO. benzylaminopurine, was able to induce somatic embryos in the treatments of (V. BI. BL. and VII); Of 5 and 10 ppm BAP at 60 days of evaluation.. Key words: Persea americana, somatic embryogenesis, cigotic embryo, in vitro. culture.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. iv. LO. G. DEL ASESOR DEDICATORIA. AS. APROBACIÓN. BI. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. O. AGRADECIMIENTO. CI. RESUMEN. CI EN. ABSTRACT ÍNDICE. vi vii viii ix x xi xii xiii. 1. CA. INTRODUCCIÓN. v. xiv. DE. LISTA DE FIGURAS LISTA DE TABLAS. iii. IC. PRESENTACIÓN. ii. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. 9. RESULTADOS. 14. DISCUSIÓN. 33. CONCLUSIONES. 38. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 39. BI. BL. IO. TE. MATERIAL Y MÉTODOS. ANEXOS. 45. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LISTA DE FIGURAS. AS. Fig.1 Fig.1. (a y b) Frutos inmaduros de P. americana Mill “palto”; para la extracción del material biológico (barra de 10 mm). (c) Semilla extraída del fruto. IC. inmaduro de Persea americana Mill “palto” (barra de 10mm). (d y e) Sección del. G. embrión de Persea americana Mill “palto”; con el cual se trabajó en la presente. LO. experiencia. 9. O. Fig.2. Efecto de los reguladores del crecimiento en la formación de callos en. BI. explantes de embriones inmaduros de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. (a). AS. Callos friables de color verde transparente; obtenido de 5 ppm de (BAP) a los 50 días en 2,4-D a 5 ppm (visto en estéreo a 2.5 de aumento). (b y c) Callos. CI. friables de color amarillo obtenido de 5 ppm de (BAP) a los 20 días en 2,4-D a 5. CI EN. ppm (visto en estéreo a 2 de aumento). (d) Callo friable de color blanco que salió de un callo compacto; obtenido de 5 ppm de (BAP) a los 40 días en 2,4-D a 5 ppm (visto en estéreo a 1.5 de aumento). (e) Callo de color blanco trasparente; obtenido de 10 ppm de (BAP) a los 45 días en 2,4-D a 5 ppm (visto. DE. 26. en estéreo a 2.5 de aumento). CA. Fig.3. (TESTIGO). Corte transversal de ex plante (embrión inmaduro) de Persea. TE. americana Mill.Var. Hass “palto, sin regulador de crecimiento. Células grandes 27. IO. de forma irregular. BL. Fig.4. Aglomeración de Células Embriogénicas (CE) para la formación de. BI. Embriones Somáticos (ES); a los 20 días en una concentración de 5 ppm de bencilaminopurina (BAP); cuyo ex plante fue expuesto por 10 días a 2,4-D a 5 ppm. Células pequeñas de forma regular. 27. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig.5. Embriones Somáticos globulares (ESg) separándose del tejido; a los 20 días en una concentración de 10 ppm de (BAP); cuyo ex plante fue expuesto 28. IC. AS. por 10 días a 2,4-D a 5 ppm. G. Fig.6.Formacion de Embrión Somático (ES) separándose del tejido; a los 23. LO. días en una concentración de 5 ppm de (BAP); cuyo ex plante fue expuesto por 28. BI. O. 10 días a 2,4-D a 5 ppm. Fig.7. Embrión somático en forma de corazón (ESc) a los 30 días en 5 ppm de 29. CI. AS. (BAP); cuyo ex plante fue expuesto por 10 días a 2,4-D a 5ppm. CI EN. Fig.8. Embrión somático (ES) separándose del tejido; a los 60 días en 10 ppm. DE. de (BAP); cuyo ex plante fue expuesto por 10 días a 2,4-D a 5 ppm. 29. Fig.9. Embrión somático (ES) separado del tejido; a los 30 días en 10 ppm de 30. TE. CA. (BAP); cuyo ex plante fue expuesto por 10 días a 2,4-D a 5 ppm. Fig.10 y 11. Explantes con embriones somáticos (ES) en un medio de 10 ppm 30. BL. IO. (BAP) a los 60 días. BI. Fig.12. Embriones somáticos (ES), extraídos de explantes expuestos en un. medio de 10 ppm (BAP) a los 60 días. 31. Fig.13 y 14. Cortes histológicos de los embriones somáticos (ES) extraídos de explantes en un medio de 10 ppm (BAP) a los 60 días. 31. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig.15 y 16. Explantes con embriones somáticos (ES) en un medio de 5 ppm (BAP) a los 85 días. 32. 32. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. de (BAP); cuyo ex plante fue expuesto por 10 días a 2,4-D a 5 ppm. AS. Fig.17. Embriones somáticos (ES) separados del tejido; a los 85 días en 5 ppm. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LISTA DE TABLAS. 11. AS. Tabla 1. Componentes del medio de cultivo Murashige y Skoog (1962). Tabla 2. Tratamientos empleados para la inducción de embriogénesis somática. IC. en embriones cigóticos inmaduros de Persea americana Mill.Var. Hass “palto”, 12. LO. G. utilizando 2,4-diclorofenoxiacético y bencilaminopurina. O. Tabla 3. Total, de explantes de P. americana Mill.Var. Hass “palto” empleados. BI. en la experiencia en la obtención de callos con 2,4 -D a 5 ppm y 20 días de 14. CI. AS. Edad. CI EN. Tabla 4. Promedios para diferencia de peso en los callos, del explante (embrión inmaduro) de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días 15. DE. de la experiencia; en los diferentes tratamientos con BAP y 2,4-D. Tabla 5. Análisis de varianza para evaluar si existen diferencias significativas en. CA. la ganancia en peso, de los explantes con callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia; en los diferentes 16. TE. tratamientos con BAP y 2,4-D. IO. Tabla 6. Prueba de DUNCAN, para determinar las diferencias significativas entre. BL. tratamientos en cuanto a la ganancia en peso de los explantes con callos de P.. BI. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia 17. Tabla 7. Promedios para la diferencia en longitud de los explantes con callos, de Persea americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia; en los diferentes tratamientos con BAP y 2,4-D. 18. xvi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 8. Análisis de varianza para evaluar si existen diferencias significativas en longitud, de los explantes con callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia; en los diferentes tratamientos con BAP 19. AS. y 2,4-D. Tabla 9. Prueba de DUNCAN, para determinar las diferencias significativas. IC. entre tratamientos en cuanto a la diferencia en longitud de los explantes con. G. callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la 20. O. LO. experiencia. BI. Tabla 10. Callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto” de 60 días de edad. AS. expuestos a los diferentes tratamientos en relación a la contaminación, 21. CI. fenolización y necrosis. También se reporta la presencia de embriones. CI EN. Tabla 11. Morfología de los callos del explante (embrión inmaduro) de Persea americana Mill.Var. Hass “palto”, a los 20 y 60 días de haber sido tratados con 22. DE. 2,4-D y BAP. CA. Tabla 12. Numero de callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”, de los tratamientos V y VII; en la cual se obtuvo embriones somáticos y el promedio de 23. IO. TE. embriones por explante, a los 60 días de la experiencia. BL. Tabla. 13. Morfología y fases de los embriones somáticos de P. americana. Mill.Var. Hass “palto”, a los 50 y 60 días de haber sido tratados con 2,4-D y BAP, 24. BI. en los tratamientos V y VII. Tabla 14. Análisis de varianza, para evaluar si existen diferencias significativas en el número de explantes con embriones de P. americana Mill.Var. Hass “palto”, entre los tratamientos V y VII, a los 60 días de la experiencia. 24. xvii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 15. Prueba de DUNCAN, para determinar las diferencias significativas entre tratamientos en cuanto al número de explantes con embriones de P. 25. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. americana Mill.Var. Hass “palto”, a los 60 días de la experiencia. xviii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCION. Persea americana Mill “palto”; es una dicotiledónea perteneciente a la familia. AS. Lauraceae.El género Persea botánicamente se clasifican en tres grupos o razas. que son: Persea americana var. Drymifolia, Persea nubigena var. Guatemalensis. IC. y Persea americana Mill. var. Americana. El “aguacate”, como se le conoce en. G. Centroamérica y México, y, como palta en el Perú y otros países más al sur, es. LO. originaria del sur de México, Guatemala y las Antillas; de donde se distribuyó por las regiones de América central y Meridional con una antigüedad que fluctúa. O. alrededor de los 8 mil años. P. americana es un árbol de 26 m de altura, cultivado. BI. por sus frutos comestibles, los cuales son muy variados en cuanto a su forma,. AS. color y superficie. Las formas predominantes son el piriforme, esférico u ovoide, en el color es el verde amarillento hasta el morado o casi negro y en su superficie. CI. es desde lisa y brillante hasta la corrugada y opaca. La importancia de este. CI EN. producto tiene que ver mucho con su uso multifuncional: se utiliza como acompañamiento del pan, como parte de ensaladas, como plato exclusivo o acompañamiento en diversos platos de la gastronomía de cada país. Del fruto se extrae un aceite utilizado como producto de belleza y como medicamento en. DE. problemas dermatológicos; cuyo aceite posee vitamina A, B, D, E, G y principalmente fitosterol y lecitina, en la parte nutricional es alimento con un. CA. importante aporte de ácidos grasos mono insaturado, grasa, fibra, vitamina B6, potasio, calorías, ácidos grasos poliinsaturados y agua, etc. La semilla sirve. TE. como tónico capilar y también es eficaz contra la enterocolitis (diarrea) y como. IO. abortivo (Mostacero y col., 2009; Garbanzo, 2011; Lemus y col., 2010;. BI. BL. Alcaraz, 2009; Bernal y col., 2008; Herrera y Narrea, 2011).. El Ministerio de Agricultura y Riego (MINAGRI), considera al “palto” como 16º producto agrícola más importante a nivel mundial por su aporte al valor bruto. De acuerdo a las últimas cifras publicadas por la FAO, las áreas cosechadas de palta en el mundo se han venido incrementando de una manera sostenida durante la última década. En el año 2000 las áreas cosechadas alcanzaban las 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 340 mil hectáreas, y para el año 2012 se disponía de 486 mil hectáreas, reflejando un 43% de crecimiento respecto al año 2000; con un volumen producido de 4,36 millones de toneladas. Los principales países exportadores de palta en el mundo, geográficamente se dividen en dos grandes bloques, los países del hemisferio norte, en el que destaca nítidamente México como primer. AS. exportador mundial y también como primer productor mundial de palta. En el. IC. hemisferio sur, tenemos los países que muestran un dinámico comportamiento, entre éstos destacan Perú, Chile y Sudáfrica. Ocupando el Perú en el 2014 el. G. tercer lugar como exportador a nivel mundial superando las 60 mil toneladas,. BI. O. LO. siendo su principal país importador Holanda (Galantini y col., 2015).. Hay muchas variedades de palta en el Perú, pero pocas son aptas para el. AS. mercado local o de exportación; las más conocidas son “Fuerte”, “Hass” y “Nabal”, se comercializa todo el año con marcada demanda y variada. CI. estacionalidad de producción; (Herrera y Narrea,2011). Dichas variedades son. CI EN. atacadas por un sin número de enfermedades entre la cual destaca en todas las regiones productoras del mundo “la pudrición de la raíz” causada por Phytophthora cinnamomi (Herrera y Narrea, 2011). Y plagas como Heliothrips. DE. haemorrhoidalis “trips del palto”, Oligonychus yothersi y Oligoychus punicae “arañita roja”, Bemisia sp “mosca blanca de los brotes”, y viroides como ASBVD. CA. (Avocado Sunblotch Viroid) conocido como “mancha del sol” (Ataucusi ,2015; Herrera y narrea, 2011). Motivo por el cual se vienen desarrollando métodos y. TE. procedimientos de cultivo in vitro; los cuales comprenden aspectos como el cultivo de células a partir de tejidos del fruto, cultivo de protoplastos, cultivo de. IO. meristemos, microinjertación, transformación genética entre otros (Suarez y. BI. BL. col.,2004).. El cultivo in vitro es un conjunto de técnicas que nos permiten mantener células in vitro con una gran aproximación a sus propiedades y funciones in vivo. El cual es realizado sobre un medio nutritivo en condiciones estériles, y, puede ser de: plantas, semillas, embriones, órganos, explantos, células y protoplástos (Castillo, 2004; García, 2002). 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El cultivo in vitro se divide en tres tipos: cultivo de órganos, explantes primarios y cultivos de células. En el primero ,la organización tridimensional del órgano in vivo se mantiene, aunque sólo sea parcialmente, y mantiene todas o algunas de las características histológicas del tejido original, el segundo, esta constituidos. AS. por fragmentos pequeños de tejidos u órganos que se adhieren a una superficie. IC. en la que generalmente crecen las células más periféricas del explante y el. tercero ,está formado por células dispersas disgregadas de un tejido vivo, de un. G. cultivo primario, o de una línea celular, mediante distintos sistemas mecánicos,. BI. O. LO. químicos o enzimáticos (García, 2002).. El cultivo de tejidos “in vitro” y la producción de callos ha facilitado, el aislamiento. AS. de células y protoplastos, la producción de metabolitos secundarios de interés biológico, el desarrollo de los trabajos de organogénesis o sea la producción de. CI. brotes y raíces, la conservación de germoplasma, la introducción de nueva. CI EN. variabilidad genética y el desarrollo de la embriogénesis somática (González. DE. ,2000).. La embriogénesis somática (ES), se refiere al desarrollo de estructuras. CA. embriogénicas a partir de células de origen somático; sin la necesidad de la fusión de gametos (Litz y Jarret,2013; Azcón y col., 1993 ;Manzanilla ,2004). TE. .Esta técnica , se caracteriza por su amplia capacidad para obtener embriones somáticos de muy diversas partes de la planta, así podemos utilizar como. IO. explantos: ápices radiculares y caulinares, hipocótilos, peciolos, pedúnculos,. BL. hojas jóvenes y en general tejidos y órganos con características embrionarias, meristemáticas o reproductivas (embriones e inflorescencias inmaduras, trozos. BI. de escutelo, nucela, endospermo, tejido ovárico, óvulos y polen) (Manzanilla ,2004).La ES, es importante porque nos permite obtener en un solo proceso estructuras completas con ápice y raíz, que pueden ser almacenadas y encapsuladas perfectamente (Litz y Jarret,2013;Celestino y col .,2005).. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Existen dos tipos de embriogénesis somática in vitro: directa e indirecta. La primera implica la existencia de células somáticas predeterminadas a seguir la vía embriogénica y la segunda implica la necesidad de una inducción de un callo para que las células sigan la vía embriogénica, y así cambiar su competencia a. IC. AS. la expresión de embriogénesis (Azcón y col.,1993; Manzanilla ,2004).. El proceso de embriogénesis, ocurre en 4 fases: La primera fase empieza con la. G. inducción de la embriogénesis somática; en la cual células individuales. LO. competentes (estado 0), forman masas pro embriogénicas en presencia de. O. auxina y adquieren paulatinamente el potencial para formar embriones, dando. BI. lugar a agregados celulares en (estado 1). En la segunda fase se da la proliferación y mantenimiento de los embriones somáticos; en la cual los. AS. agregados celulares son transferidos a un medio sin auxinas, produciéndose así una activación de la división celular (estado 2) en zonas localizadas de dichos. CI. agregados que conduce a la formación de embriones globulares. En la tercera. CI EN. fase se da la maduración de los embriones somáticos, y, la cuarta fase culmina con la germinación de los embriones somáticos; pasando por los estados de corazón, torpedo y cotiledonar (Azcón y col., 1993; Manzanilla ,2004). La ES. DE. es un método aplicado hoy en día para la obtención de semillas artificiales (SA), permite crear semillas de plantas, mejoradas y con unas características Una SA no es más que el embrión somático. CA. apropiadas según interese.. encapsulado; ya que los embriones obtenidos en el laboratorio son frágiles y muy. TE. pequeños, siendo incapaces de soportar las condiciones medioambientales y las técnicas de manejo a las que tendrían que someterse para su desarrollo. Por. IO. esto es necesario proteger su viabilidad, de manera que se han ideado dos. BL. métodos de producción de SA; el primero es fabricando un sistema hidratado mediante una encapsulación en hidrogeles y el segundo es utilizando un sistema. BI. de desecación de los embriones. Entre los cultivos que se han obtenido embriones somáticos o también llamados semillas artificiales están: alfalfa. (Medicago sativa), soja (Glycine max), apio (Apium graveolens) y pasto ovillo (Dactylis glomerata) (Hebe y Mroginski ,2010).. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para lograr este mecanismo “in vitro” juegan un papel primordial los reguladores de crecimiento que se deben añadir a los medios de cultivo; según los requerimientos de los diferentes medios y los objetivos que se persigan. De los cuales los más utilizados son las auxinas (AIA, ANA, 2,4-D) y las citoquininas (KIN, Zeatina, BAP) generalmente en concentraciones que oscilan entre 0,1 –. AS. 10,0 mg/L (González ,2000). Las auxinas son un grupo de hormonas que regulan. IC. muchos aspectos del desarrollo y crecimiento de las plantas. La más abundante. es el ácido indolacético (AIA). Su síntesis ocurre mayormente en meristemos. G. apicales y tejidos jóvenes de donde son transportadas al resto de la planta. Entre. LO. las principales funciones, las auxinas promueven la elongación celular, inhiben. O. el crecimiento de raíces primarias, median la respuesta a tropismos, reprimen la. BI. abscisión de órganos e inducen el desarrollo floral y de frutos. Por otro lado, las citocininas son hormonas esenciales en el accionar de varios procesos. AS. vinculados al crecimiento, desarrollo de las plantas y relacionados a la acción de varios genes. Se trata de derivados de la base adenina que en su posición N 6. CI. muestra varias substituciones, no teniendo la adenina sola, efecto hormonal. CI EN. alguno. Cuya función es estimular la división celular, activar la brotación de yemas, inducir organogénesis y retardar la senescencia (Jordan y Cassareto,. DE. 2006).. CA. Se han realizado experiencias en embriogénesis somática en frutales empleando distintos órganos y partes de la planta; entre los cuales está, la experiencia de. TE. Jiménez y Guevara (1996); sobre “La regeneración in vitro mediante la embriogénesis somática de variedades de cítricos. II.efecto del “plateo” de. IO. suspensiones celulares en medio de cultivo con diferentes carbohidratos sobre. BL. la inducción de embriones”. Para la cual emplearon suspensiones celulares de callos friables de 8 cítricos (C. sinensis c.v. “Washington navel”, C. sinensis c.v.. BI. “Acosta 6”, C. sinensis c.v. “Ridge”, C. Jambhiri c.v. “Milan”, C. mitis, C. reticulata c.v. “Daney”, C. reticulata c.v. “Cleopatra” y C. limon c.v. “LAC”); los cuales fueron cultivados en medio semisólidos con sacarosa ,glicerol ,galactosa o lactosa .En la cual el tratamiento con sacarosa fue el que estimuló en mayor grado el desarrollo embriogénico, seguido por los tratamientos con glicerol, lactosa y galactosa; siendo “Acosta 6” el que obtuvo mejores resultados en la obtención 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de embriones somáticos con 80 % a las 5 semanas. Aguilar y col (2008); realizó un trabajo sobre embriogénesis somática en plátanos y bananos, empleando como muestras flores masculinas y femeninas. Obteniendo como resultados al primer mes, distintos tipos de callos (callos no embriogénicos de apariencia nodular, callos compactos; no embriogénico color blanco cristalino, callos. AS. embriogénicos compactos; con embriones individuales), y, a partir de cuarto mes. IC. se observó los callos embriogénicos friables (ci) o callos ideales dependiendo. del cultivar. Para luego ser puestos a germinar para la aparición de los embriones. G. somáticos y su proceso de desarrollo en un medio M4, luego su aclimatación y. LO. finalmente puestos al vivero. Realizaron evaluaciones de estabilidad genética a. O. las plantas regeneradas; llegando a la conclusión de que el cultivo de bananos. BI. posee baja frecuencia en la producción de callo embriogénico en la fase de inducción, la cual varía entre el 1 y el 10% dependiendo del cultivar, la falta de. AS. sincronización del desarrollo embriogénico, es decir, que, en fases posteriores a la inducción de la embriogénesis somática, es difícil homogenizar toda la. CI. población de embriones hacia el mismo estado de desarrollo. Por lo tanto, en. CI EN. cualquier fase es frecuente observar embriones en todas las etapas de desarrollo. DE. embriogénico.. En otra experiencia hecha en Cuba, emplearon Carica papaya var. Maradol rojo,. CA. variedad más importante en dicho país. Cuyo objetivo era obtener embriones somáticos de “papaya” var. Maradol rojo; a partir de embriones cigóticos. TE. inmaduros. Primeramente, se evaluó el 2,4 -D; en la formación de embriogénesis somática (ES), en las concentraciones de (3, 5, 10, 15 mg. l-1) en un medio de. IO. cultivo basal Murashige y Skoog (MS); la cual obtuvo buenos resultados en la. BL. formación de ES en todos los tratamientos. Sin embargo, existieron diferencias significativas en cuanto a la frecuencia y el número de embriones formados en. BI. cada tratamiento, en las concentraciones menores de 2,4-D se obtuvo una. embriogénesis somática directa de alta frecuencia, sin la formación previa de callo, mientras que en la mayor concentración de 2,4-D (15 mg. l-1) se observó la formación de callos. Atendiendo a los resultados se seleccionó la concentración de 5 mg. l-1 para la formación de ES. En el mismo trabajo se empleó el ANA en concentraciones de 0.1, 0.2 y 0.4 mg. l-1 en combinación con 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 6-BAP a 0.2, 0.4 y 0.8 mg. l-1, para obtener embriones somáticos ,los resultados no fueron muy buenos ;ya que solamente se obtuvo respuesta en la combinación 0.2 mg.l-1 de ANA y 0.4 mg.l-1 de 6-BAP con una frecuencia de solo 12.5% .Para la multiplicación de ES emplearon el ANA y el 2,4-D ;siendo este último en la concentración 2 mg.l-1 el mejor medio de cultivo para la multiplicación de los. AS. embriones somáticos. En cuanto a la germinación de ES se emplearon dos. IC. citoquininas (kinetina. y el 6 -BAP), fue el 6-BAP; el que supero en sus resultados a la kinetina en su concentración de 0.22 mg. l-1, con un porcentaje de. G. germinación de (92.63%) en comparación con los tratamientos con kinetina.. LO. Llegaron a la conclusión de que es posible formar embriones somáticos de. O. papaya variedad Maradol rojo a partir de embriones cigóticos inmaduros y. BI. regenerar plantas (Posada y col.,2007). En otro trabajo emplearon de igual forma embriones cigóticos inmaduros, para la inducción de embriogénesis. AS. somática, en el fruto de Psidium guajava L “guayaba” var. Enana Roja Cubana de 25 a 35 días después de la antesis con un diámetro de 3,5 a 3,8. CI. cm.Empleando 2,4-D en las concentraciones de (1, 5 y 10 mg L-1) .Las variables. CI EN. evaluadas fueron: porcentaje de formación de callo con estructuras embriogénicas (%FCEE), número de embriones somáticos por explante embriogénico (NES) y porcentaje de embriones cigoticos (EC) en. etapa. DE. globular(G), corazón(C), torpedo (T) y cotiledonar (CT).Fue la concentración de 1,0 mg L-1 de 2,4-D el que logro inducir ES en un (15,15% FCEE) de forma. CA. indirecta y de baja frecuencia a partir de EC en etapas de desarrollo T (12%) y CT (7,7%), observándose el mayor porcentaje de EC en dichos estado en frutos. TE. inmaduros de 25 - 35 días después de la antesis, cuyo largo y ancho estuvo. BL. IO. alrededor de los 4,0 y 3,5 cm, respectivamente (Vílchez y col.,2002).. Manzanilla (2004); realizó un trabajo en Colombia de embriogénesis somática,. BI. empleando como explante el tejido nucelar; en el cultivo de Mangifera indica L.”mango”; en tres variedades (Ataulfo, Haden y Tommy Alkins); utilizando como regulador de crecimiento 2,4-D en un medio MS, dicho trabajo no tuvo muy buenos resultados en la inducción de embriones somáticos; con un 12.38 % para Ataulfo ,2.86 % Haden y 0 % Tommy Alkins).Actualmente en distintas partes del mundo se vienen realizando trabajos. de embriogénesis somática en. palto;. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. empleando distintos tipos de explantes; con el objetivo de mejorar la calidad y producción de este fruto con gran demanda de exportación, entre los cuales están el de Vidales y col (2003);los cuales emplearon como explante el tejido nucelar de Persea americana variedad Hass, utilizando como reguladores 2,4-D en la formación de callo con un 20 % de eficiencia en la concentración de 1 mg/L y - 0.4 mg/L).Del mismo modo Suarez y col (2004). IC. concentraciones de (4. AS. (Picloram – AIB) en la formación del embrión con un 17 .8 % ;en las. ;emplearon como explante el tejido nucelar en tres cultivares de palto (Vero ,. G. Beach SE2,Vero, Beach 1 y Yama, 381);utilizando hormonas como picloran (mg/L). LO. y tiamina (0.4) ;en el cual no hubo formación de callo y la inducción de embriones. O. fue muy bajo con 2.5 % Vero, Beach SE2 y 3.25 % para Vero, Beach 1 y Yama,. BI. 381.Por otro lado Rodríguez y col (1999 ) ,realizaron su experiencia en palto empleando como explante embriones zigoticos maduros e inmaduros ;utilizando. AS. como hormonas BA (6-bencil amino purina ) y el GA3 (ácido giberelico ) ;en los siguientes tratamiento BA en la concentración de 0.5 mg/L y de BA - GA3 con (0.5. CI EN. el GA3 con 3 -10 brotes por embrión.. CI. m/L - 0.5 mg /L) ; el tratamiento que obtuvo mejores resultados fue el que contenía. DE. El presente trabajo, tuvo como objetivo demostrar la inducción de embriogénesis somática a partir de embrión cigotico inmaduro de Persea americana Mill. CA. Var.Hass “palto”; observándose las fases de embriogénesis somática mediante cortes histológicos y otras características como longitud, peso, color y forma de. BI. BL. IO. TE. los callos, y; la presencia – ausencia de embriones somáticos.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y METODOS. AS. Lugar experimental. IC. El presente trabajo se realizó en el laboratorio de Fisiología y Cultivo de. G. Tejidos Vegetales, Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional. LO. de Trujillo (UNT).. O. Material biológico. BI. Se empleó 315 callos obtenidos de embriones de frutos inmaduros de Persea americana Mill “palto”; de la variedad Hass. El cual fue adquirido en el pueblo de. AS. Buena Vista, distrito de Chao, provincia de Virú. De esta semilla se extrajo una porción del embrión cigotico que contenía: eje, raíz e hipocotilo.. CI EN. CI. Semillas de frutos inmaduros. a. CA. DE. Frutos inmaduros. e. Embrión. b. BI. BL. IO. TE. c. d. Fig.1. (a y b) Frutos inmaduros de P. americana Mill “palto”; para la extracción. del material biológico (barra de 10 mm). (c) Semilla extraída del fruto inmaduro de Persea americana Mill “palto” (barra de 10mm). (d y e) Sección del embrión de Persea americana Mill “palto”; con el cual se trabajó en la presente experiencia. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Desinfección del material biológico para la obtención de callos. En el laboratorio la semilla se desinfecto con alcohol al 70 % y lejía al 2.5 %. Se lavó la semilla con agua de caño, tres veces, luego se dejó en alcohol por 30”,. AS. se lavó posteriormente con agua estéril, a continuación, se colocó en lejía por 2, 30”, finalmente se lavó con agua estéril por tres veces. Con auxilio de una pinza. IC. y bisturí en una cámara de siembra se procedió a abrir la cubierta de la semilla. G. para exponer al embrión. Se separó el eje, raíz e hipocotilo de cada embrión. LO. cigotico inmaduro y se colocó en una placa con papel filtro estéril para su siembra. CI EN. CI. AS. BI. O. inmediata.. Preparación del Murashinge y Skoog (MS).. DE. El medio de cultivo MS (Murashige y Skoog, 1962) se preparó con macronutrientes, micronutrientes y vitaminas preparadas en soluciones madres (10x). Además, se agregó sacarosa al (3%) y agar al (1%) (Tabla 1.). Para los. BI. BL. IO. TE. CA. tratamientos se agregaron los reguladores de crecimiento, el 2,4-D y BAP.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1. Componentes del medio de cultivo Murashige y Skoog (1962).. Macronutrientes. AS IC LO O BI AS CI 30 g/l 10 g/l. DE. 2, 0 0,5. CI EN. 100 0,1 0,5. G. 27,8 37,3 6,2 22,3 8,6 0,25 0,025 0,025 0,83. IO. TE. CA. (NH4) NO3 MgSO4.7H2O KNO3 KH2PO4 CaCl2.2H2O Micronutrientes FeSO4.7H2O Na2EDTA H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O KI Vitaminas myo- Inositol Tiamina HCl Acido nicotínico Glicina Piridoxina HCl Sacarosa Agar. mg/L 1650 370 1900 170 440. BL. Pre tratamiento con 2,4-D. BI. Los callos para los tratamientos fueron inducidos en el medio MS que contenía 2,4-D a 5 ppm, en un ambiente de completa oscuridad por aproximadamente 10 días y, a partir de estas muestras se inició la presente experiencia.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tratamientos Inducción de embriogénesis somática (ES) Para la inducción de embriones, los explantes fueron colocados en un ambiente en la cual se pudo controlar las horas luz y oscuridad; las. AS. cuales fueron :(16 horas de luz y 8 horas de oscuridad).. IC. Se empleó un diseño simple completamente al azar, con 7 tratamientos. G. (45 explantes por tratamiento) ,3 repeticiones y cada repetición con 15. O. LO. explantes.. BI. Tabla 2. Tratamientos empleados para la inducción de embriogénesis somática en embriones cigóticos inmaduros de Persea americana Mill.Var. Hass “palto”,. CI. AS. utilizando 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) y bencilaminopurina (BAP).. CI EN. REGULADORES DE CRECIMIENTO. TRATAMIENTO. DE. I. CA. II III. BL. IO. TE. IV. V. 2,4-D 0.1. BAP ---. 0.1. 1 ppm. ---. 1 ppm. 0.1. 5 ppm. ---. 5 ppm. 0.1. 10 ppm. ---. 10 ppm. BI. VI. VII. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Evaluaciones. Se evaluó la contaminación, fenolización y necrosis.. AS. De los callos. IC. Color y forma.. . LO. G. De las fases de la ES. Se observaron las fases de embriogénesis somática en. . O. los callos embriogénicos obtenidos; mediante cortes. BI. histológicos, y así observar el proceso de formación del embrión. Se utilizó micrótomo y coloración con eosina, se. CI. AS. observó al microscopio electrónico (binocular zens).. CI EN.  Se evaluó el número de embriones obtenido por cada. DE. explante..  Se evaluó la ganancia en peso del explante partiendo del. CA. peso inicial de explante con callo hasta el peso final a los 60 días de explantes con embriones. Igual procedimiento se. IO. TE. hizo con la longitud del explante.. BI. BL. Análisis estadísticos. Se empleó el análisis estadístico ANAVA; para determinar si hay diferencia. significativa entre los distintos tratamientos empleados, y, el análisis de DUNCAN para determinar entre que tratamientos hubo diferencias significativas, en la inducción de embriogénesis somática de P. americana Mill.Var. Hass “palto”.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Tabla 3. Total, de explantes de P. americana Mill.Var. Hass “palto” empleados. 323 (80,7 %). 77 (19,3 %). 9. (9,25 %). BI. No. 39. O. 37. Si. Necrosados. G. Fenolizados. (2,25 %). (9,75 %). AS. 400. Contaminados. LO. Callo. № Explante. IC. AS. en la experiencia en la obtención de callos con 2,4 -D a 5 ppm y 20 días de edad.. CI. Leyenda:. CI EN. Si: explantes en las cuales si se produjeron callos, que son en esta experiencia 323 explantes.. No: explantes en las cuales no se produjeron callos, que son en esta experiencia 77. DE. explantes.. CA. Se pudo determinar que la muerte principal de los explantes para la obtención de callos en 2,4 -D a 5 ppm; fue por necrosis con un (9,75 %), seguida por. TE. contaminación por hongos y bacterias con un (9,25 %); los cuales son valores muy bajos como para poderse considerar que influyeron en dicha experiencia.. IO. Siendo la causa más baja de muerte de los explantes: los fenolizados con un. BL. (2,25 %); de un total de 400 explantes iniciados para la experiencia. De la misma. BI. forma se puede observar que de 400 explantes iniciados solo el (80,7 %) generó callos; inducidos por la hormona 2,4-D a 5 ppm (Tabla 3).. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 4. Promedios para diferencia de peso en los callos, del explante (embrión inmaduro) de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días. Tratamientos. AS. de la experiencia; en los diferentes tratamientos con BAP y 2,4-D.. Promedio de incremento de masa (g). 0,01 g. IV. 0,01 g. V. 0,02 g. Leyenda:. 0,01 g. -. 0,01 g. 0,04 g. DE. Tratamientos. 0,05 g. CI EN. VII. 0,01 g. 0,01 g. CI. VI. G. III. LO. 0.02 g. O. II. 0,01 g. BI. 0.01 g. AS. I. 60 días. IC. 20 días. I:2,4-D/BAP (0.1/0 ppm); II:2,4-D/BAP (0.1/1 ppm); III:2,4-D/BAP (0/1 ppm); IV:2,4-. TE. (0/10 ppm).. CA. D/BAP (0.1/5 ppm); V:2,4-D/BAP (0/5 ppm); VI:2,4-D/BAP (0,1/10 ppm); VII:2,4-D/BAP. IO. En cuanto a la diferencia en peso en gramos de los explantes con callos de P.. BL. americana Mill.Var. Hass “palto”, se encontró que los tratamientos (V y VII).. BI. Fueron los únicos que aumentaron su peso (g) de (0.01 g y 0.01 g) a los 20 días. y (0.05 g y 0.04 g) a los 60 días, en comparación de los tratamientos I, II, III que. no hubo aumento de peso alguno. El análisis de varianza muestra que hay diferencias significativas entre tratamientos (Tabla 4 y 5).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 5. Análisis de varianza para evaluar si existen diferencias significativas en la ganancia en peso, de los explantes con callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia; en los diferentes. ANOVA para Peso por Tratamientos Gl. Cuadrado Medio. Entre grupos. 0.00437333. 4. 0.00109333. Intra grupos. 0.0002. 10. 0.00002. Total (Corr.). 0.00457333. 14. Razón-F. Valor-P. IC. Suma de Cuadrados. LO. G. Fuente. AS. tratamientos con BAP y 2,4-D.. 0.0000. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. 54.67. La prueba de DUNCAN nos indica que hay diferencias significativas entre los. IO. tratamientos que fueron comparados (V y VII), más no existen diferencias. BL. significativas entre los tratamientos (I, II y III), en cuanto a lo que se refiere. BI. ganancia en peso (Tabla.6: A y B).. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 6. Prueba de DUNCAN, para determinar las diferencias significativas entre tratamientos en cuanto a la ganancia en peso de los explantes con callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia.. G. Grupos Homogéneos. LO. Media. 3 3 3. 0.01 0.01 0.0166667. X X X. 7. 3. 0.0366667. X. 5. 3. 0.0533333. X. AS. CI. CI EN. B) Contraste. Sig.. Diferencia. +/- Límites. -0.00666667. 0.00813603. 0. 0.00813603. *. -0.0433333. 0.00813603. *. -0.0266667. 0.00813603. 0.00666667. 0.00813603. DE. 1-2. CA. 1-3. 1-7. IO. 2-3. TE. 1-5. O. 1 3 2. BI. Método: 95.0 porcentaje LSD TRATAMIENTOS Casos. IC. A). *. -0.0366667. 0.00813603. 2-7. *. -0.02. 0.00813603. 3-5. *. -0.0433333. 0.00813603. 3-7. *. -0.0266667. 0.00813603. BL. 2-5. BI. AS. Pruebas de Múltiple Rangos para Peso por Tratamientos. 5-7 * 0.0166667 * indica una diferencia significativa.. 0.00813603. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Se puede determinar que el valor máximo de crecimiénto de los explantes con callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. Fué del tratamiénto V con (5.6 mm) a los 20 días y (8.3 mm) a los 60 días, seguido por el tratamiénto VII con un valor de (5.6 mm) a los 20 días y (7.5 mm) a los 60 días; en comparación a los demás tratamiéntos que no hubo crecimiento significativo alguno. El análisis de varianza muestra que si existe diferencias significativas entre tratamientos (Tabla. 7y 8). Tabla 7. Promedios para la diferencia en longitud de los explantes con callos, de. LO. G. experiencia; en los diferentes tratamientos con BAP y 2,4-D.. IC. Persea americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la. Promedio de incremento de longitud (mm). BI. O. Tratamientos. AS. 60 días 5,7 mm. 5,6 mm. 5.8 mm. 4,9 mm. 5,2 mm. 5,3 mm. -. 5,6 mm. 8.3 mm. 5,4 mm. -. 5,6 mm. 7, 5 mm. 5,7 mm. CI. I. 20 días. CI EN. II III. DE. IV V. CA. VI. TE. VII. IO. Leyenda:. BL. Tratamientos. I:2,4-D/BAP (0.1/0 ppm); II:2,4-D/BAP (0.1/1 ppm); III:2,4-D/BAP (0/1 ppm); IV:2,4-. BI. D/BAP (0.1/5 ppm); V:2,4-D/BAP (0/5 ppm); VI:2,4-D/BAP (0,1/10 ppm); VII:2,4-D/BAP (0/10 ppm).. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 8. Análisis de varianza para evaluar si existen diferencias significativas en longitud, de los explantes con callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia; en los diferentes tratamientos con BAP. AS. y 2,4-D.. Gl. Cuadrado Medio. Entre grupos. 21.4827. 4. 5.37067. Intra grupos. 1.52667. 10. 0.152667. Total (Corr.). 23.0093. 14. Razón-F. Valor-P 0.0000. G. Suma de Cuadrados. LO. Fuente. IC. ANOVA para Longitud por Tratamientos. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. 35.18. CA. La prueba de DUNCAN nos indíca que exísten diferéncias significativas en cuanto ganáncia de longitúd en los tratamiéntos que fuerón comparados con (V. TE. y VII), mas no hubo diferencias significativas entre los tratamiéntos (I, II y III). IO. respectivaménte (Tabla.9: A y B).. BL. Tabla 9. Prueba de DUNCAN, para determinar las diferencias significativas entre tratamientos en cuanto a la diferencia en longitud de los explantes con callos de. BI. P. americana Mill.Var. Hass “palto”. A los 20 días y a los 60 días de la experiencia.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Pruebas de Múltiple Rangos para Longitud por Tratamientos. Método: 95.0 porcentaje LSD TRATAMIENTOS Casos 3. 5.23333. 2. 3. 5.76667. X. 1. 3. 5.76667. X. 7 5. 3 3. 7.5 8.36667. X X. G. IC. 3. Grupos Homogéneos X. LO. Media. AS. A). +/- Límites. 1-2. 0. 0.710837. 1-3. 0.533333. 1-5. *. 1-7. *. -2.6. 0.533333. 0.710837. -2.6. 0.710837. -1.73333. 0.710837. *. -3.13333. 0.710837. *. -2.26667. 0.710837. *. 0.866667. 0.710837. *. 3-5. CA. DE. 2-7. TE. *. IO. 0.710837 0.710837. 2-5. 5-7. 0.710837. -1.73333. 2-3. 3-7. AS. Diferencia. CI. Sig.. CI EN. Contraste. BI. O. B). BL. * indica una diferencia significativa.. BI. Se puede observar que la causa mayor de muerte de los explantes con callo de P. americana Mill.Var. Hass “palto”, en el trascurso de la experiencia fue causada por necrosis con un (30.2 %) y quien le continua son aquellos que murieron por contaminación que es el (19.3 %); de 315 explantes con callos. También se pudo determinar que solo dos tratamientos fueron los únicos que nos dieron resultados positivos en cuanto a embriones (Tabla. 10).. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 10. Callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto” de 60 días de edad expuestos a los diferentes tratamientos en relación a la contaminación, fenolización y necrosis. También se reporta la presencia de embriones.. 45. 15. -. -. II. 45. 9. 1. 3. III. 45. 7. 2. IV. 45. 5. 3. V. 45. 11. VI. 45. 4. VII. 45. 10. Total. 315. 37. NO. -. 3. SI. -. 41. NO. -. 5. SI. 6 (1.9 %). 95 (30.2 %). CI EN. O. NO. CI. 6. BI. NO. AS. LO. NO. 2 (SI). DE. Tratamientos. 61(19.3 %). AS. I. Leyenda:. Contaminados Fenolizados Necrosados Embriones % % %. IC. № de callos. G. Tratamientos. I:2,4-D/BAP (0.1/0 ppm); II:2,4-D/BAP (0.1/1 ppm); III:2,4-D/BAP (0/1 ppm); IV:2,4-. BI. BL. IO. TE. (0/10 ppm).. CA. D/BAP (0.1/5 ppm); V:2,4-D/BAP (0/5 ppm); VI:2,4-D/BAP (0,1/10 ppm); VII:2,4-D/BAP. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 11. Morfología de los callos del explante (embrión inmaduro) de P. americana Mill.Var. Hass “palto”, a los 20 y 40 días de haber sido tratados con 2,4-D y BAP. Luz. Tratamientos. Callo Color. I. -. II. -. -. -. -. amarillo. Amorfa. -. -. amarillo. Amorfa. I. -. -. II. -. -. III. -. -. IV. -. -. V. Marrón, verde transparente, Blanco trasparente y lechoso -. LO BI. AS. V. O. IV. CI. VI. CI EN. VII. TE. CA. DE. Presente. IO. VI. BL. VII. BI. -. -. III. 40. -. IC. Ausente. G. 20. Forma. AS. Día. Verde transparente y Blanco transparente. Amorfo. Amorfo. Leyenda: Tratamientos I:2,4-D/BAP (0.1/0 ppm); II:2,4-D/BAP (0.1/1 ppm); III:2,4-D/BAP (0/1 ppm); IV:2,4D/BAP (0.1/5 ppm); V:2,4-D/BAP (0/5 ppm); VI:2,4-D/BAP (0,1/10 ppm); VII:2,4-D/BAP (0/10 ppm).. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se puede observar (Fig. 2); que el color y forma de los callos a los 20 diás de estar en los distíntos tratamiéntos en ausencia de luz presentan un color Amarillo y forma amorfa; pero luego de 40 diás de la experiencia cuando dichos tratamientos estuvieron expuestos a la luz; muchos de ellos cambiarón de color a un (Marron, Verde transparente, Blanco transparente y lechoso), originandose. G. IC. AS. así el embrión (Tabla. 11).. LO. Se puede determinar que de los dos tratamiéntos positivos en la obtención de. O. embriónes ,el que obtuvo la mayor cantidad por explante fué el tratamiénto V con. BI. 14 embriónes ; a los 60 días de culminar la experiencia y en segundo lugar estuvo el tratamiénto VII con 6 embriónes por explante; ambos de un color (Blanco).En. AS. cuanto al número de fases a los 60 días en el tratamiénto V fué de (73 G y 11 C ) y en el tratamiénto VII fué de (33 G ,7 C y 34 T ).Sin embargo el total de. CI. embriónes originados por tratamiénto fué casi similar con (84 y 78 embriónes);. CI EN. por lo cual el analisís de varianza indicó que no existe diferencias significativas entre tratamientos (Tabla.12 ,13 y 14).. DE. Tabla 12. Numero de callos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”, de los tratamientos V y VII; en la cual se obtuvo embriones somáticos y el promedio de. TE. CA. embriones por explante, a los 60 días de la experiencia.. V. 6. Embriones somáticos por explante 14. VII. 13. 6. № de callos. BI. BL. IO. Tratamientos. Total 84 (51,9 %) 78 (48,1 %). Leyenda: Tratamientos V: 2, 4-D/BAP (0/5 ppm); VII: 2, 4-D/BAP (0/10 ppm). 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla. 13. Morfología y fases de los embriones somáticos de P. americana Mill.Var. Hass “palto”, a los 50 y 60 días de haber sido tratados con 2,4-D y BAP, en los tratamientos V y VII.. Tratamiéntos. 50. V VII. MORFOLOGIA Color Forma Blanco Globular y Corazon. 60. V. Blanco. Globular y Corazon. VII. Blanco. Globular, Corazon y Torpedo. AS. Día. BI. O. LO. G. IC. FASES 21 (G) 61,8% 13 (C) 38,2% 73 (G) 86,9% 11 (C) 13,1% 37 (G) 47,4% 7 (C) 10.0% 34 (T) 43,6%. AS. Leyenda:. CI. Tratamientos. V: 2, 4-D/BAP (0/5 ppm); VII: 2, 4-D/BAP (0/10 ppm).. DE. CI EN. G: Globular; C: Corazon; T: Torpedo.. Tabla 14. Análisis de varianza, para evaluar si existen diferencias significativas. CA. en el número de explantes con embriones de P. americana Mill.Var. Hass “palto”,. TE. entre los tratamientos V y VII, a los 60 días de la experiencia.. IO. ANOVA para explantes con embriones por tratamientos Suma de Cuadrados. Gl Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. Entre grupos. 8.16667. 1. 8.16667. 4.90. 0.0913. Intra grupos. 6.66667. 4. 1.66667. Total (Corr.). 14.8333. 5. BI. BL. Fuente. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 15. Prueba de DUNCAN, para determinar las diferencias significativas entre tratamientos en cuanto al número de explantes con embriones de P.. A). 3. 2.0. X. 7. 3. 4.33333. X. CI. AS. 5. O. LO. Grupos Homogéneos. BI. Método: 95.0 porcentaje LSD tratamientos Casos Media. G. IC. Pruebas de Múltiple Rangos para embriones por tratamientos. AS. americana Mill.Var. Hass “palto”, a los 60 días de la experiencia.. Contraste. Sig.. Diferencia. +/- Límites. -2.33333. 2.92664. DE. 5-7. CI EN. B). TE. CA. * indica una diferencia significativa.. IO. La prueba de DUNCAN nos confirma que no existen diferencias significativas. BI. BL. entre los tratamientos (V y VII); con respecto al número de embriones (Tabla.15).. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. b a. AS. a. a. a. IC. a. G. c. BI. O. LO. a. AS. d. CA. DE. CI EN. CI. e. Fig.2.Efecto de los reguladores del crecimiento en la formación de callos en. TE. explantes de embriones inmaduros de P. americana Mill.Var. Hass “palto”. (a). IO. Callos friables de color verde transparente; obtenido de 5 ppm de (BAP) a los 50 días en 2,4-D a 5 ppm (visto en estéreo a 2.5 de aumento). (b y c) Callos. BL. friables de color amarillo obtenido de 5 ppm de (BAP) a los 20 días en 2,4-D a 5. BI. ppm (visto en estéreo a 2 de aumento). (d) Callo friable de color blanco que. salió de un callo compacto; obtenido de 5 ppm de (BAP) a los 40 días en 2,4-D a 5 ppm (visto en estéreo a 1.5 de aumento). (e) Callo de color blanco trasparente; obtenido de 10 ppm de (BAP) a los 45 días en 2,4-D a 5 ppm (visto en estéreo a 2.5 de aumento).. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. Aumento: 10 X. AS. Fig.3. (TESTIGO). Corte transversal de explante (embrión inmaduro) de P. americana Mill.Var. Hass “palto, sin regulador de crecimiento. Células grandes. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. de forma irregular.. Aumento: 10 X. (CE) para la formación de (ES). Fig.4. Aglomeración de Células Embriogénicas (CE) para la formación de Embriones Somáticos (ES); a los 20 días en una concentración de 5 ppm de bencilaminopurina (BAP); cuyo ex plante fue expuesto por 10 días a 2,4-D a 5 ppm. Células pequeñas de forma regular. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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