Validación del método analítico por expectrofotometría uv/vis para la cuantificación de enalapril maleato 10mg tabletas recibiertas”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACÍA Y BIOQUÍMICA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE. Q. U. ÍM. IC. A. FARMACIA Y BIOQUÍMICA. M. AC. IA. Y. BI O. “VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO POR EXPECTROFOTOMETRÍA UV/VIS PARA LA CUANTIFICACIÓN DE ENALAPRIL MALEATO 10mg TABLETAS RECIBIERTAS”. E. FA R. TESIS II. BL. IO. TE. C A. D. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. AUTORES:. NUREÑA FLORES MARCO ANTONIO ROMERO MERINO SINDY KATERINE. ASESOR: Dr. ALVA PLASENCIA PEDRO MARCELO.. Trujillo – Perú 2012 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍM U. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q. Dr. Miranda Leyva, Manuel PRESIDENTE. IC. A. JURADO EVALUADOR. BI. BL. IO. TE. C A. Q.F. Rengifo Penadillos, Roger MIEMBRO. Dr. Alva Plasencia, Pedro MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI O. Q. U. ÍM. IC. A. A Dios, por brindarnos la dicha de la salud, bienestar físico y espiritual; por ser muestro guía y luz en nuestro camino, y sentirlo a cada paso que damos, brindándonos la seguridad que necesitamos para salir adelante.. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. A nuestros, padres y hermanos, a quienes amamos y guardamos mucho respeto, por su apoyo incondicional, durante nuestra formación tanto personal como profesional y por su comprensión a lo largo de nuestro existir.. A nuestros amigos y personas que nos apoyaron a realizar éste trabajo, en especial a nuestro asesor Pedro Alva y a la los miembros del jurado por ser nuestros guías en este proyecto.. Los Autores. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACION. SEÑORES MIENBROS DEL JURADO: De acuerdo con lo dispuesto con las disposiciones legales y vigentes establecidas en el. reglamento de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la. A. Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración y elevado nivel de. “VALIDACIÓN. BI O. Q. U. ÍM. IC. criterio profesional, el presente informe de Tesis II:. DEL. ANALÍTICO. POR. Y. UV/VIS PARA LA CUANTIFICACIÓN DE. IA. ESPECTROFOTOMETRÍA. MÉTODO. FA R. M. AC. ENALAPRIL MALEATO 10 mg TABLETAS RECUBIERTAS.”. D. E. Es propicia esta oportunidad para hacer extensivo nuestro más profundo sentimiento. C A. de agradecimiento a nuestra Alma Mater y a toda la plana docente que lo conforma,. IO. TE. por su meritoria labor de educadores y por la formación profesional que nos han. BL. brindado a través de sus enseñanzas y experiencias. De manera muy especial. BI. agradecemos la valiosa colaboración de los señores Miembros del Jurado.. Trujillo, Abril del 2012. NUREÑA FLORES MARCO. ROMERO MERINO SINDY. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE Pág.. IC. A. RESUMEN ……..…………………………………………… i. Q. U. ÍM. ABSTRACT …….………………………………………….. ii INTRODUCCIÓN ……..……………………………. 01. II.. OBJETIVOS …….………………………………….. 07. III.. MATERIAL Y MÉTODO …….…………………… 08. IV.. RESULTADOS …………………………………….... 25. V.. DISCUSIÓN ……..…………………………………... 30. VI.. CONCLUSIONES ……..……………………………. 35. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. I.. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ……..……… 36 VIII. ANEXOS …….………………………………………. 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. En el presente trabajo se realizó la validación del método analítico espectrofotométrico para la cuantificación de Enalapril maleato tabletas recubiertas. Para el análisis de Enalapril maleato 10mg tabletas recubiertas, lote N° 10474161 (Laboratorio Farmindustria S.A), se utilizó agua purificada. IC. A. como disolvente y 352nm como longitud de máxima absorbancia. El método. U. ÍM. utilizado en el presente informe fue específico para el analito entre los. BI O. Q. excipientes. Las muestras fueron sometidas a degradación ácida, alcalina, fotólisis, oxidación y termólisis; obteniendo una interferencia menor al 2,0%. El. IA. Y. ensayo de linealidad del método presentó un coeficiente de correlación de. AC. 0,9945; el test estadístico de linealidad expresa la conformidad, y para la. M. linealidad del sistema presento un coeficiente de correlación de 0,99567. Para. FA R. la exactitud, el porcentaje de recuperación fue de 99,91%, para el test G de. E. Cochran se obtuvo G experimental menor que G tablas (0,784 ˂ 0,797) y para el. C A. D. ensayo estadístico t de Student se obtuvo t experimental menor que t tabla. TE. (0,741 ˂ 2,306), por lo que la exactitud es conforme según sus respectivas. IO. especificaciones. Para la repetibilidad del sistema se obtuvo un CV de 0,632%.. BL. Para la repetibilidad del método se obtuvo un CV de 0,474%. Para la precisión. BI. intermedia el CV entre un analista y el otro fue de 0.59%; siendo aceptable para la validación. Los parámetros de validación determinados permiten dar como validado el método analítico propuesto por para la cuantificación de Enalapril maleato tabletas recubiertas.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. In this paper we validate the spectrophotometric analytical method for quantification of enalapril maleate coated tablets. For analysis of Enalapril maleate 10mg coated tablets, batch No. 10474161 (Farmindustria Laboratory SA), purified. IC. A. water was used as solvent and as a length of maximum 352 nm absorbance. The. ÍM. method used in this report was specific for the analyte between the excipients.. Q. U. Samples were subjected to acid degradation, alkaline, photolysis, oxidation and. BI O. thermolysis obtaining an interference less than 2.0%. The test of linearity of the. Y. method presented a correlation coefficient of 0.9945, the statistical test of linearity. AC. IA. expresses conformity, and the linearity of the system presented a correlation. M. coefficient of 0.99567. For accuracy, the recovery rate was 99.91%. For G. t test. t table (0.741 ˂ 2.306),. statistic was. E. the Student. so that. D. and. FA R. Cochran test was obtained an experimental G smaller than G tables (0.784 ˂0.797). the. obtained experimental t accuracy is. as. less. according. than to. C A. their respective specifications. For the repeatability of the method yielded a CV of. IO. TE. 0.474%. For intermediate precision CV between an analyst and the other was 0.59%,. BL. still acceptable for validation. Validation parameters determined as validated to. BI. allow the proposed analytical method for quantification of enalapril maleate coated tablets. For the repeatability of the system obtained a CV of 0.632%. For the repeatability of the method we obtained a CV of 0.474%. For intermediate precision CV between an analyst and the other was 0.59%, still acceptable for validation. Validation parameters determined as validated to allow the proposed analytical method for quantification of enalapril maleate coated tablets.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Para cualquier empresa es de suma importancia contar con sistemas que demuestren que el producto o servicio final es de calidad, esto toma una relevancia aún mayor en la industria farmacéutica, en donde un medicamento que no cuente con los estándares de calidad adecuados pudiese tener consecuencias que perjudiquen al paciente. La fuerte competitividad industrial de la que somos testigos actualmente ha revolucionado el concepto de calidad, aumentando la importancia que ésta ya había. IC. A. tenido tradicionalmente. Hoy en día, la calidad se utiliza como sello de garantía de. BI O. Q. U. ÍM. cualquier proceso industrial (1, 2).. Y. Calidad es un parámetro importante en todos los sectores industriales, ésta es aún de. AC. IA. más relevancia en la industria farmacéutica, ya que consciente de su alta. M. responsabilidad, actúa siempre buscando mejorar la calidad del medicamento a lo. FA R. largo del proceso que lo crea. El objetivo es uno y es importante conseguirlo plenamente, esto es, el medicamento seguro, estable y eficaz. Sin embargo, a pesar de. D. E. los esfuerzos de control y fabricación, se exige una mejora continua y máximas. C A. garantías de la calidad. Y es en el avance para conseguir un total dominio de la. BI. BL. IO. TE. calidad, es cuando surge el concepto de validación (3, 4, 5).. La validación es un procedimiento claramente diseñado para establecer en forma documentada que un sistema, un equipo, un proceso de producción o una metodología analítica de control de un producto cumplen con los parámetros de calidad especificados. El termino validación ha sido definido en la literatura, de diversas maneras y por un numerosos autores. Aunque los términos dados son diferentes el significado de las mismas es siempre el mismo: a) especificar e implementar, b) aprobar y c) documentar; además de garantizar la calidad del medicamento a través de los estudios de validación son aplicables a los métodos analíticos, los equipos, los. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sistemas y servicios del establecimiento (como aire, agua vapor) y procesos (como el de fabricación, limpieza esterilización, liofilización, etc.) (5, 6, 7, 8).. Validación de un método de análisis es el proceso por el que se establece, por estudios de laboratorio, que las características de rendimiento del procedimiento de satisfacen los requisitos de las aplicaciones analíticas previstas. Características de rendimiento analítico típico que deben ser consideradas en la validación de los tipos de. A. procedimientos que se describen en un documento como la Farmacopea. Debido a que. ÍM. IC. diferentes opiniones con respecto a la terminología y el uso, junto con una. BI O. Q. U. delimitación de un típico método o métodos por los que se puede medir (9, 10).. IA. Y. Las típicas características analíticas utilizadas según La Farmacopea Americana (USP) en la utilización del control de calidad. AC. en el método analítico. son: precisión,. M. especificidad, detección límite de cuantificación, límite linealidad, rango y robustez;. FA R. en el caso de procedimientos, revalidación puede ser necesaria en los siguientes casos:. E. una presentación a la USP de un procedimiento analítico revisado; o el uso de un. C A. D. procedimiento general establecido con un nuevo producto o materia prima (9).. TE. Las características de desempeño del método se expresa en función de los siguientes. BI. BL. IO. parámetros analíticos:. Especificidad Capacidad de evaluar de forma inequívoca el analito en presencia de componentes que se pueden esperar estar presentes en la muestra, tales como impurezas, productos de degradación y componentes de la matriz, este parámetro debe ser determinado antes de iniciar el estudio de cualquier otro parámetro de validación, dado que debe conocerse en qué grado de la respuesta del método es únicamente proporcionada por el analito, sin interferencias de otras sustancias relacionadas de una u otra forma con él (9, 10).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Entre las pruebas que se examinan las siguientes consecuencias: a) Pruebas de identificación: Asegurar la identidad del analito. Los controles b). De pureza: Garantizar que todos los procedimientos analíticos realizados permiten una declaración precisa del contenido de impurezas de un analito (por ejemplo, la prueba de sustancias afines, límite de metales pesados, impurezas volátiles orgánicas).. c). Ensayos: Proporcionar un resultado exacto, lo que permite una declaración. Q. U. ÍM. IC. A. precisa sobre el contenido o la potencia del analito en una muestra (9, 10).. BI O. Linealidad y Rango. IA. Y. La linealidad de un procedimiento analítico es su capacidad para obtener resultados de. AC. las pruebas que son directamente, o por una transformación matemática bien definida,. M. proporcional a la concentración de la sustancia analizada en muestras dentro de un. FA R. rango determinado (9, 10).. D. E. El rango de un procedimiento analítico es el intervalo entre los niveles superiores e. C A. inferiores del analito (incluyendo estos niveles) que han demostrado que se. BL. IO. TE. determinará con un adecuado nivel de precisión y linealidad del método (9, 10). BI. Exactitud. Procedimiento analítico que expresa. la cercanía de los resultados de la prueba. obtenidos mediante ese método y el valor verdadero, debe ser demostrado en todo el rango especificado pera el método analítico. La exactitud se expresará como el porcentaje de recuperación de la cantidad valorada con respecto a la cantidad conocida del analito añadida a la muestra o como la media obtenida y el valor aceptado como verdadero, conservando los intervalos de confianza. Para ello utiliza Límite de Detección y Límite de Cuantificación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Límite de Detección (LD) Es una característica de ensayos límite. Es la menor cantidad de analito en una muestra que puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, declarado en condiciones experimentales. Por lo tanto, ensayos límite simplemente corroborar que la cantidad de analito es por encima o por debajo de cierto nivel. El límite de detección se expresa generalmente como la concentración de la. IC. A. sustancia analizada en la muestra (9, 10).. U. ÍM. Límite de Cuantificación (LC). BI O. Q. Es la menor cantidad de analito en una muestra que puede ser determinada con precisión aceptable y exactitud en las condiciones experimentales declaradas. El. AC. FA R. M. analizada en la muestra (9, 10).. IA. Y. límite de cuantificación es expresado como la concentración de la sustancia. D. E. Precisión. C A. Es el grado de acuerdo entre los resultados de las pruebas individuales cuando el. TE. procedimiento se aplica repetidamente a múltiples muestreos de una muestra. IO. homogénea. La precisión de un procedimiento analítico se expresa generalmente como. BI. BL. la desviación estándar o desviación (coeficiente de variación) de una serie de mediciones. Precisión puede ser una medida de ya sea el grado de reproducibilidad o de repetibilidad del procedimiento analítico bajo condiciones normales de funcionamiento. a) Repetibilidad: Estudia la variabilidad del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra en las mismas condiciones operativas (por un mismo analista, con los mismos aparatos y reactivos, etc.) en un mismo laboratorio y en un periodo de tiempo corto.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b) Precisión Intermedia: Estudia la variabilidad del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra pero en condiciones operativas diferentes (diferentes analistas, aparatos, días, etc.) y en un mismo laboratorio. c) Reproducibilidad: Estudia la variabilidad del método bajo condiciones operativas diferentes en distintos laboratorios (9, 10).. Teniendo en cuenta esta amplia variedad de exigencias analíticas, es lógico que los. A. requieren diferentes esquemas, según la. IC. procedimientos de pruebas diferentes,. U. ÍM. clasificación de la USP 33, estos métodos se dividen en cuatro categorías:. BI O. Q. Categoría I: Procedimientos analíticos para la cuantificación de los principales componentes de la masiva de drogas sustancias o ingredientes activos (incluidos los. IA. Y. conservantes) en acabado de productos farmacéuticos (10).. AC. Categoría II: Procedimientos analíticos para la determinación de impurezas a granel. FA R. M. de drogas sustancias o compuestos de degradación en productos farmacéuticos. E. terminados. Estos procedimientos incluyen ensayos cuantitativos (10).. D. Categoría III: Procedimientos analíticos para la determinación de las características. TE. C A. de rendimiento (10).. IO. Categoría IV: Pruebas de identificación. Para cada categoría, se necesita información. BI. BL. analítica diferente (10).. El control de calidad del medicamento debe garantizar la efectividad y seguridad para lo cual es destinado, es por ello que la adecuada validación garantizará de forma consistente y permanente la confiabilidad y validez de los datos.. El enalapril maleato es un polvo cristalino blanquecino que se funde a 143°C, Ph alrededor de 2,5 y muy soluble en agua ; su amplio uso del enalapril como inhibidor. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de la enzima convertidora de la angiotensina indicada en el tratamiento de hipertensión e insuficiencia cardiaca congestiva (ICC). Al ser el enalapril un profármaco no muy activo, debe sufrir hidrólisis por esterasas del hígado para producir enalaprilato (ejerce. A. efecto potente inhibitorio de la ECA) que es el ácido dicarboxílico original activo (5).. Q. U. ÍM. IC. Figura 1. Enalapril. BI O. Hay que tener en cuenta que el método espectrofotométrico en comparación al. Y. realizado por cromatografía (HPLC), presenta un margen de error debido a no ser tan. IA. específico en la cuantificación por no detectar moléculas, sino que se rige a un rango. AC. de valores en el campo visible a través de principios físicos químicos, además que el. FA R. M. presupuesto de un ensayo espectrofotométrico es mucho menor que uno realizado en. C A. D. E. HPLC y por tanto más accesible a realizarlo.. TE. Dada la importancia de lo mencionado, en el presente trabajo se ha realizado un. IO. estudio para validar un método de análisis por espectrofotometría UV/VIS para la. BL. cuantificación de enalapril maleato 10mg tabletas recubiertas y su correspondiente. BI. aplicación, lo cual garantizará que los resultados que se obtengan sean confiables. (11,. 12). .. PROBLEMA ¿Cumple con los criterios de validación el método analítico Espectrofotométrico UV/VIS para la cuantificación de Enalapril maleato 10 mg Tabletas Recubiertas?. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. OBJETIVOS. GENERAL: . Demostrar que el Método Analítico empleado para la cuantificación de Enalapril maleato 10 mg Tabletas Recubiertas, cumple con los parámetros de validación. A. (exactitud, precisión, especificidad, linealidad y rango) para el uso específico. Q. U. ÍM. IC. previsto.. Y. Determinar los parámetros de validación: Exactitud, precisión, especificidad,. IA. . BI O. ESPECÍFICOS:. M FA R. . AC. linealidad y rango.. Evaluar los parámetros de validación mencionados para establecer si cumplen con. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. los criterios correspondientes.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. MATERIAL Y MÉTODO. 1. MATERIAL 1.1.. Material de estudio 140 tabletas de Enalapril Maleato elaboradas en Lab. Farmindustria S.A. Lote N° 10474161. ÍM. Estándar:. Q. U. 1.2.1.. IC. A. 1.2. Material y Equipo de laboratorio. BI O. Estándar secundario de Enalapril Maleato del Lab. Induquímica S.A. Reactivos:. IA AC. E. 1.2.2.. FA R. M. Potencia: 98.91%. Y. Lote N°: 200980417. D.  Yodato de potasio 3x10-3 M. (KIO3). C A.  Yoduro de potasio 5x10-2 M. (KI). IO. TE.  Ácido Clorhídrico 0.01N. BL.  Peróxido de hidrógeno 3% v/v. BI.  Hidróxido de sodio 0.01N. 1.2.3.. Solvente:  Agua purificada. 1.2.4.. Materiales de vidrio: De uso común de laboratorio. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2.5.. Equipos:.  Espectrofotómetro UV/VIS Marca. : GENESYS -Thermo Electron. Modelo. : XS 345DR. Calibración y/o verificación : CONFORME. Modelo. : B0631009. IC. : PerkinElmer. U. ÍM. Marca. A.  Espectrofotómetro UV/VIS. AC M.  Balanza analítica. IA. Y. BI O. Q. Calibración y/o verificación : CONFORME. FA R. Marca Modelo. : BP301S : CONFORME. IO. TE. C A. D. E. Calibración y/o verificación. : SANTODIUS. BI. BL.  Purificador de agua Marca. : BARNSTEAD. Modelo. : BF-4545. Calibración y/o verificación. : CONFORME. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. MÉTODO. 2.1. SELECCIÓN DE LA TÉCNICA ANALÍTICA. La técnica analítica propuesta por los autores Nafisur Rahman y Sk Manirul Haque, del Departamento de Química de la Universidad. Musulmana de. Aligarh en la India, es un método alternativo espectrofotométrico donde el. A. grupo hidroxilo en la molécula de enalapril brinda el medio ácido a la solución. ÍM. IC. en medio acuoso, el exceso de I2 proveniente de la mezcla de yoduro y yodato. U. de potasio permite la reacción con enalapril maleato con dando como resultado. BI O. Q. la formación de iones triyoduro que son los que permiten la coloración ámbar (6). FA R. M. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA. AC. IA. Y. .. D. E. Se compraron al azar 140 tabletas de Enalapril maleato 10mg de un mismo lote. C A. (Lote N° 10474161) en la ciudad de Trujillo y que no hayan cumplido con la. BI. BL. IO. TE. fecha de expiración.. 2.2. RECOLECCIÓN DE DATOS:. 2.2.1. Determinación del peso promedio de las tabletas. Se registro el peso individual de 20 tabletas y se procedió a calcular el promedio de los valores obtenidos (Ver Anexo 1).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2. Método analítico por espectrofotometría UV/VIS.. a. Condiciones Espectrofotométricas: : Espectrofotómetro UV/VIS : 10 mm : 352 nm : Agua Destilada : Agua Destilada. ÍM. IC. A. Equipo Celda Longitud de Onda Blanco Diluyente. U. b. Preparación del estándar. BI O. Q. Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a fiola de 50mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y -2. M, enrasar a volumen con. IA. Y. 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. AC. agua destilada y homogenizar.. FA R. M. Concentración final de Enalapril: 0.05mg/mL.. E. La solución preparada se analiza de acuerdo a las condiciones. TE. C A. D. espectrofotométricas indicadas en el punto 2.3.2.a. BI. BL. IO. c. Preparación de la muestra Triturar y homogenizar no menos de 20 tabletas, tomar un peso equivalente a 2.5mg. y extraer por separado en un volumen. suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, enrasar a volumen con agua. destilada y homogenizar. Concentración final de Enalapril: 0.05mg/mL.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La solución preparada se analiza de acuerdo a las condiciones espectrofotométricas indicadas en el punto 2.3.2.a. d. Cálculos (Ver Anexo 2). 𝐴𝑏𝑠𝑚𝑝 𝑚𝑔 𝑊𝑠𝑡 𝐹𝐷𝑠𝑡 ̅̅̅̅) =( )𝑥( )𝑥( ) 𝑥(𝐹𝐶)𝑥(𝑃𝑜𝑡𝑠𝑡 )𝑥(𝑃𝑝 𝐴𝑏𝑠𝑠𝑡 𝑊𝑚𝑝 𝑓𝑑𝑚𝑝 𝑡𝑎𝑏. Donde:. Wmp. = Peso de la muestra en mg.. Potst. = Potencia del estandar. ÍM. = Absorbancia del estándar = Peso del estámdar. = Peso promedio de tabletas. FDst. = Factor de dilución del estándar. U. Absst Wst. Pp. Fdmp = Factor de dilución de la muestra. Q. = Ansorbancia de la muestra. FC. = Factor de Conversion. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Absmp. IC. A. 𝐸𝑛𝑎𝑙𝑎𝑝𝑟𝑖𝑙.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3. VALIDACION DEL MÉTODO ANALÍTICO 2.4.1. ENSAYO DE ESPECIFICIDAD. Se comprobó la inalterabilidad sometiendo a situaciones de estrés para generar compuestos de degradación que puedan interferir en el análisis. Para evaluar la inalterabilidad se sometió a situaciones de estrés tales como: Degradación ácida, alcalina, por oxidación, fotólisis y termólisis. Se contrastó con el estándar al 100 % para expresar el resultado en función del porcentaje de interferencia.. IC. A. 2.3.1.1. Evaluación del Principio Activo. ÍM. Se sometió al analito a situaciones de estrés como: Degradación ácida,. Q. U. alcalina, fotólisis, oxidación y termólisis. Estás pruebas se realizaron en. BI O. las condiciones espectrofotométricas según el punto 2.3.2.a. Y. A. Preparación del Estándar a Condiciones Normales. AC. IA. Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a. M. fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 -2. FA R. mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. M, enrasar a volumen con agua. E. destilada y homogenizar.. C A. D. B. Degradación Acida. TE. Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a. BI. BL. IO. fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, verter 5 mL de ácido. clorhídrico 0,01N, enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar.. C. Degradación Alcalina Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, verter 5 mL de Hidróxido de. Sodio 0,01N, enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. D. Oxidación Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 -2. mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. M, verter 5 mL de peróxido de. hidrógeno 3% v/v, enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar.. E. Fotolisis. A. Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a -2. M, aforar con agua destilada y. U. mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. ÍM. IC. fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5. BI O. Q. homogenizar. Someter por 6 horas a Luz ultravioleta.. IA. Y. F. Termólisis. AC. Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a. M. fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5. FA R. mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, aforar con agua destilada y. C A. D. E. homogenizar. Someter por 6 horas a Temperatura de 65 ºC.. IO. TE. 2.3.1.2. Evaluación de la Forma Farmacéutica. BI. BL. Se sometió a situaciones de estrés como: fotólisis, humedad relativa y Termólisis.. Estás. pruebas. se. realizaron. en. las. condiciones. espectrofotométricas según el punto 2.3.2.a. A. Preparación de la Muestra en Condiciones Normales Pesar un equivalente a 2,5 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M,. enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. Fotólisis Pesar un equivalente a 2,5 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M,. enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar. Someter por 6. IC. A. horas a Luz ultravioleta.. ÍM. C. Termólisis. Q. U. Pesar un equivalente a 2,5 mg de enalapril maleato, pulverizar,. BI O. homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de. Y. agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro whatman Nº. IA. 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de. M. -2. M, enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar.. FA R. 10. AC. yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x. C A. D. E. Someter por 6 horas a Temperatura de 65ºC.. IO. TE. 2.3.2. ENSAYO DE LINEALIDAD.. BL. Primero se determinó la Linealidad del sistema, en el cual solo se trabajó. BI. con estándares. Posteriormente se determinó la Linealidad del método, en el cual se trabajó con estándares y con la matriz del producto (6).. A. LINEALIDAD DEL SISTEMA Para la evaluación de este parámetro se prepararon tres curvas de calibración; pesando cinco estándares correspondientes a cinco concentraciones de dicho analito, las cuales estuvieron en un intervalo de: 80%, 90%, 100%, 110% y 120% (6).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Estándar al 80% Pesar aproximadamente 2 mg de enalapril maleato estándar, llevar a fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, aforar con agua destilada y leer en. espectrofotómetro a 352 nm. (6). Concentración final = 0,04 mg/mL. A. Estándar al 90%. ÍM. IC. Pesar aproximadamente 2,25 mg de enalapril maleato estándar, llevar a. M, aforar con agua destilada y leer. Q. -2. BI O. mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. U. fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5. M. FA R. Estándar al 100%. AC. IA. Y. en espectrofotómetro a 352 nm. (6). Concentración final = 0,045 mg/mL. Pesar aproximadamente 2,5 mg de enalapril maleato estándar, llevar a. D. E. fiola de 50 mL , agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5. C A. mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, aforar con agua destilada y leer. BI. BL. IO. TE. en espectrofotómetro a 352 nm. (6). Concentración final = 0,05 mg/mL. Estándar al 110% Pesar aproximadamente 2,75 mg de enalapril maleato estándar, llevar a fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, aforar con agua destilada y leer en. espectrofotómetro a 352 nm. (6). Concentración final = 0,055 mg/mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Estándar al 120% Pesar aproximadamente 3 mg de enalapril maleato estándar, llevar a fiola de 50 mL, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, aforar con agua destilada y leer en. espectrofotómetro a 352 nm. (6). Concentración final = 0,06 mg/Ml. B. LINEALIDAD DEL METODO. IC. A. Se pesaron muestras de enalapril maleato, de manera que se obtuvieron. U. BI O. Q. analizando cada nivel por triplicado (6).. ÍM. 5 niveles de concentración diferente (80, 90, 100, 110 y 120%). Y. Muestra al 80%. IA. Pesar un equivalente a 2 mg de enalapril maleato, pulverizar,. AC. homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua,. FA R. M. con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de -2. M,. D. E. potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. TE. C A. enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar (6).. IO. Concentración final = 0,04 mg/mL. BI. BL. Muestra al 90% Pesar un equivalente a 2,25 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10 -2 M, enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar (6). Concentración final = 0,045 mg/mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Muestra al 100% Pesar un equivalente a 2,5 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10 -2 M, enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar (6).. IC. A. Concentración final = 0,05 mg/mL. U. ÍM. Muestra al 110%. BI O. Q. Pesar un equivalente a 2,75 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua,. IA. Y. con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir. AC. el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de. M. potasio 3 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5.0 x 10 -2 M, enrasar. FA R. a volumen con agua destilada y homogenizar (6).. C A. D. E. Concentración final = 0,055 mg/mL. TE. Muestra al 120%. IO. Pesar un equivalente a 3 mg de enalapril maleato, pulverizar,. BI. BL. homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3 x 10-3 M y 1.5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10 -2 M, enrasar a volumen con agua destilada y homogenizar (6). Concentración final = 0,06 mg/mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.3. ENSAYO DE EXACTITUD. Para la evaluación de este parámetro pesamos cantidades conocidas de la muestra a diferentes niveles de concentración, realizando tres replicados como mínimo para cada nivel analizando las muestras según el método a validar y calculamos finalmente la el porcentaje recuperado. Las muestras se pesaron a tres niveles de concentración los cuales fueron: 80%, 100% y. IC. A. 120%, y tres determinaciones repetidas de cada concentración (6).. U. ÍM. Preparación de las muestras:. BI O. Q. Muestra 80%:. Y. Pesar un equivalente a 2 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y. IA. extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar. AC. el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de. FA R. M. agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, enrasar a volumen con agua destilada y. D. E. homogenizar. Se preparó por triplicado (6). BL. IO. TE. C A. Concentración final = 0,04 mg/mL. BI. Muestra al 100% Pesar un equivalente a 2,5 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, enrasar a volumen con agua. destilada y homogenizar. Se preparó por triplicado (6) Concentración final = 0,05 mg/mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Muestra al 120% Pesar un equivalente a 3 mg de enalapril maleato, pulverizar, homogenizar y extraer por separado en un volumen suficiente de agua, con agitación. Filtrar el residuo con papel filtro Whatman Nº 42, diluir el filtrado con 50 mL de agua destilada, agregar 1 mL de yodato de potasio 3,0 x 10-3 M y 1,5 mL de yoduro de potasio 5,0 x 10. -2. M, enrasar a volumen con agua destilada y. homogenizar. Se preparó por triplicado (6). U. ÍM. IC. A. Concentración final = 0,06 mg/mL. BI O. Q. 2.4.4. ENSAYO DE PRECISIÓN.. IA. Y. Se evaluó en términos de Repetibilidad y Precisión Intermedia.. M. AC. A. REPETIBILIDAD. FA R. A.1. Repetibilidad del Sistema. D. E. Se preparó 2 soluciones estándar de acuerdo al punto 2.4.1.1.a. y de. C A. acuerdo a las condiciones espectrofotométricas descritas en el punto. TE. 2.3.2.a, realizando 3 lecturas de cada una.. BI. BL. IO. A.2. Repetibilidad del Método. A partir de un pool hecho con las muestras a analizar, se prepararon 6 muestras individuales de concentración aproximada al 100%, procediendo a su preparación de acuerdo al punto 2.4.1.2.a. y de acuerdo a las condiciones espectrofotométricas descritas en el punto 2.3.2.a., realizando 3 lecturas de cada una.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. PRECISIÓN INTERMEDIA El análisis fue llevado a cabo por 2 analistas en días diferentes. Igual que en la repetibilidad partimos de un pool de las muestras a analizar y se realizaron 10 determinaciones individuales de concentración aproximada al 100%, procediendo a su preparación de acuerdo al punto 2.4.1.2.a. y de acuerdo a las condiciones espectrofotométricas descritas en el punto 3.2.1.1, realizando 3 lecturas de cada una.. Día 1. Día 2. Analista Y. Día 1. Día 2. Analista X. Día 1. Día 2. Día 1. Día 2. BI O. Q. U. Analista X. Instrumento A. ÍM. IC. A. Para éste análisis se llevó a cabo el siguiente esquema de trabajo:. Y. Instrumento B. FA R. M. AC. IA. Analista Y. D. E. 2.4.5. RANGO. C A. Cumplidas las especificaciones de Linealidad del sistema, Linealidad del. TE. Método, Precisión y la Exactitud, se estableció que el rango de este método. IO. analítico es de 80% a 120%, verificándose que el método analítico funciona. BL. correctamente cuando se aplican a muestras que contienen principio activo a. BI. concentraciones iguales a los extremos superior e inferior, así como dentro del intervalo de concentración definido.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4. ANALISIS DE DATOS 2.4.1. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Los datos obtenidos fueron sometidos a análisis estadístico considerando parámetros descriptivos: promedios, desviación estándar (DS), coeficiente de variación porcentual, coeficiente de regresión y coeficiente de determinación. Además se utilizaron pruebas inferenciales como: t-student. IC. A. y COCHRAN, todas con un nivel de significancia del 5% (α=0,05). (13). Q. U. ÍM. 2.4.1.1. EVALUACION ESTADÍSTICA DEL PARÁMETRO DE ESPECIFICIDAD. BI O. Se realizó el análisis de los componentes de interés tomando como. Y. referencia la concentración de cada uno de ellos en la muestra. IA. aplicando el método analítico correspondiente, los excipientes en. AC. conjunto pueden tomarse como placebo o matriz.. FA R. M. Para determinar el porcentaje de interferencia se obtuvo de las. D. E. siguientes maneras:. 𝑃𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 =. 𝐿𝑒𝑐𝐼𝑛𝑑𝑖𝑣𝑖𝑑𝑢𝑎𝑙 𝑥 100 𝐿𝑒𝑐𝑆𝑡. BI. BL. IO. TE. C A. Para muestras con ausencia de principio activo:. Para nuestras con presencia de principio activo: 𝑃𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑐𝑖𝑎 = |100 𝑥 (1 −. 𝐿𝑒𝑐𝐼𝑛𝑑𝑖𝑣𝑖𝑑𝑢𝑎𝑙 )| 𝐿𝑒𝑐𝑆𝑡. Donde: PInterferencia LecIndividual LecSt. : Porcentaje de interferencia : Lectura individual de muestra : Lectura del estándar. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.1.2. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DEL PARÁMETRO DE LINEALIDAD Se determina para ambos la curva de calibración que relaciona respuesta (área, altura, absorbancia, gastos, etc) con concentraciones o cantidad de analito. Se calculó la recta de regresión con el método de ajuste de los mínimos cuadrados o cálculos directos. Los datos obtenidos a partir de la mejor recta se utilizaron para estimar matemáticamente el grado de. IC. A. linealidad.. U. BI O. La recta de calibración es del tipo:. Q. la pendiente de la recta de regresión.. ÍM. Debe informarse el coeficiente de correlación, la ordenada al origen y. IA. Y. 𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎. AC. Donde:. C A. D. E. FA R. M. X: Concentración o cantidad del analito. Y: Absorbancia, área, gastos, etc. b: Valor de la pendiente a: Término independiente (intercepto, estimador de la ordenada de origen). BI. BL. IO. TE. 2.4.1.3. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DEL PARÁMETRO DE EXACTITUD La exactitud se expresa como el porcentaje de recuperación en la valoración de una cantidad conocida de analito añadida sobre la muestra. Para el cálculo del porcentaje de recuperación se realizó la siguiente expresión matemática:. 𝑃𝑟𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =. 𝐶𝐸𝑛𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑥 100 𝐶𝐴ñ𝑎𝑑𝑖𝑑𝑎. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.1.4. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DEL PARÁMETRO DE PRECISION Se expresó como el coeficiente de variación (dispersión de los datos respecto a la media) de una serie de medidas y se calculó por medio de la siguiente fórmula estadística:. 𝐶𝑉(%) =. 𝑆 𝑥 100 𝑥̅. ÍM. S = Desviación estándar.. IC. A. Donde:. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q. U. ̅ = Media aritmética de los resultados. 𝒙. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.2. ESPECIFICACIONES Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN. PARAMETRO. ESPECIFICACIÓN. ESPECIFICIDAD. . Interferencia no mayor a 2%. Q. Test de linealidad. BI O. LINEALIDAD. U. ÍM. y = bx + a. IC. A. “r”: mínimo 0,990. T de Student exp menor t tablas. . Porcentaje recuperado de 98 - 102% de lo declarado CV no mayor a 2% Test de G de Cochran exp menor G tablas Test de T de Student exp menor T tablas. M. FA R.   . E. C A TE IO BL BI. PRECISION. AC. . D. EXACTITUD. IA. Y.  DS de la pendiente (b) menor de 2%  t de Student exp mayor que t tablas Test de proporcionalidad. Repetibilidad  Repetibilidad del Sistema: DS no mayor a 2%  Repetibilidad del Método: DS no mayor a 2% Precisión intermedia  DS entre 2 analistas no mayor a 2% Reproducibilidad. The. . DS entre 2 Laboratorios no mayor a 4%. United States Pharmacopeial Convention. USP 32- NF 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. Ensayo de Especificidad de la técnica analítica de cuantificación de Enalapril 10mg tabletas recubiertas - Evaluación de principio activo.. Degradación ácida. ˂ 2%. 0,411. Degradación alcalina. ˂ 2%. 0,409. Oxidación. ˂ 2%. 0,410. 0.985. Termólisis. ˂ 2%. 0,408. 0.493. Fotólisis. ˂ 2%. 0,412. 1.477. IC ÍM. U. Q. Y. 1.231 0.738. 0,406. E. FA R. M. AC. Estándar. A. Absorbancia. IA. ESPECIFICIDAD. Porcentaje de interferencia. Especificación. BI O. TABLA 1:. RESULTADOS. Ensayo de Especificidad de la técnica analítica de cuantificación de Enalapril 10mg tabletas recubiertas - Evaluación de la forma farmacéutica.. BI. BL. IO. TE. C A. D. TABLA 2:. Especificación. Absorbancia. Porcentaje de interferencia. Termólisis. ˂ 2%. 0,414. 1.970. Fotólisis. ˂ 2%. 0,409. 0.738. ESPECIFICIDAD. Estándar. 0,406. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 3: Ensayo de Linealidad de la técnica analítica de cuantificación de Enalapril 10mg tabletas recubiertas – Linealidad del sistema. LINEALIDAD DEL SISTEMA. Valor Obtenido. Valor Aceptable. Resultado. Coeficiente de determinación (R2). 0,99567. ≥ 0,9900. Conforme. DS de la pendiente (b). 1,828 %. ˂ 2%. Conforme. Significación estadística de la Varianza S2 de la Pendiente (b). 48,4837. texp ˃ 2,16. Conforme. Test de Proporcionalidad Significación estadística del intercepto. IC. A. Para p=0,05. texp ˂ 2,16. 26,7421. ÍM. Test de Linealidad. No Conforme. Y. BI O. Q. U. Para p=0,05. Curva de Linealidad de sistema: Concentración de Enalapril (mg/mL.) vs. Absorbancia. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Grafico 1:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 4: Ensayo de Linealidad de la técnica analítica de cuantificación de Enalapril 10mg tabletas recubiertas – Linealidad de método.. LINEALIDAD DEL METODO. Valor Obtenido. Valor Aceptable. Resultado. Coeficiente de determinación (R2). 0,9945. ≥ 0,9900. Conforme. DS de la pendiente (b). 1,982 %. ˂2%. Conforme. Significación estadística de la Varianza S2 de la Pendiente (b). 54,7043. texp ˃ 2,16. Conforme. Test de Proporcionalidad Significación estadística del intercepto. IC. A. Para p=0,05. texp ˂ 2,16. 771,510. ÍM. Test de Linealidad. No Conforme. IA. Y. BI O. Q. U. Para p=0,05. Curva de Linealidad de método: Concentración de Enalapril (mg/mL.) vs. Absorbancia. FA R. M. AC. Grafico 2:. C A. D. E. Linealidad de Método. TE. 0.6000. IO. BL. 0.4000. BI. Absorbancia. 0.5000. 0.3000. 0.2000 0.1000 0.0000 0.000. 0.010. 0.020. 0.030. 0.040. Concentracion (mg/mL). 0.050. 0.060. 0.070 Series1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 5: Ensayo de Exactitud de la técnica analítica de cuantificación de Enalapril 10mg tabletas recubiertas.. PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN. Valor normal. Resultado. 99,91%. 98% a 102%. Conforme. Test G de COCHRAN. 0,784 ˂ 0,797. G exp ˂ G tablas. Test estadístico t de STUDENT. 0,741 ˂ 2,306. IC. ÍM. t exp ˂ t tabla. Conforme Conforme. AC. IA. Y. BI O. Q. U. Recuperación promedio. A. Valor obtenido. C A. D. E. FA R. M. TABLA 6: Ensayo de Precisión de la técnica analítica de cuantificación de Enalapril 10mg tabletas recubiertas.. Valor obtenido (CV). Valor Aceptable (CV). Resultado. Repetibilidad del Sistema. 0,632%. ˂ 2%. Conforme. Repetibilidad del método. 0,474%. ˂ 2%. Conforme. 0.59%. ˂ 2%. Conforme. BI. BL. IO. TE. PARAMETROS DE PRECISION. REPETIBILIDAD. PRECISIÓN INTERMEDIA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. DISCUSIÓN. La técnica analítica para la cuantificación de Enalapril maleato en tabletas recubiertas, por espectrofotometría UV/VIS, actualmente no figura en ninguna obra oficial, por lo tanto al no estar registrado o contemplado en alguna farmacopea, debe ser validado previamente a su uso en rutina (3, 8).. IC. A. La validación de un método analítico debe iniciarse con el análisis de la selectividad o. ÍM. especificidad, ya que éste parámetro demuestra que el método es capaz de discriminar. Q. U. entre el analito, sustancias de composición similar y otras sustancias que pueden estar. BI O. presentes en la muestra, como excipientes o productos de degradación. Los resultados. Y. están vinculados principalmente al origen de la muestra, su preparación y las. FA R. M. AC. IA. condiciones instrumentales (9, 14).. En las tablas 1 y 2 se observa los porcentajes de interferencias para las muestras. D. E. sometidas a estrés (degradación ácida, alcalina, oxidación, fotólisis y termólisis) donde. C A. se obtuvo para cada caso un valor menor del 2% de interferencia, con lo cual se. TE. evidencia que ni los excipientes de la formulación ni los posible productos de. IO. degradación interfieren en la degradación del principio activo, ya que no se detecta. BI. método.. BL. ninguna respuesta significativa, con estos resultados se demuestra la selectividad del. La guía ICH (International Conference on Harmonización) hace mención que una relación lineal debe ser evaluada en toda la gama del procedimiento analítico. Se puede demostrar directamente sobre la sustancia activa (por dilución de una solución madre estándar) o pesadas separada de mezclas sintéticas de los componentes del producto, utilizando el procedimiento propuesto. Este último aspecto puede ser estudiado durante la investigación de la gama. Linealidad debe evaluarse mediante. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. inspección visual de una trama de señales en función de la concentración de analito o contenido (15).. Dentro del rango establecido se recomienda analizar un mínimo de 5 concentraciones: 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, cada una por triplicado, con un total de 15 determinaciones.. Para. realizar. los. análisis. se. recomienda. hacer. pesadas. independientes, ya que así se elimina el posible error sistemático que se podría. U. ÍM. IC. A. arrastrar partiendo de una sola pesada y realizando diluciones (3, 9).. BI O. Q. Cabe mencionar que es recomendable usar pesadas independientes cuando la cantidad a pesar es confiable con respecto al equipo que se utilice, cuando las cantidades a. IA. Y. pesar son muy pequeñas se recomienda usar diluciones teniendo una solución patrón y. FA R. M. AC. de ella obtener las soluciones a las concentraciones que se deseen.. E. La Tabla 3 muestra los resultados para el parámetro de linealidad del sistema,. C A. D. obtenidos al evaluar estadísticamente las concentraciones analizadas: 80%, 90%,. TE. 100%, 110%, 110%, 120%. Así mismo, en la tabla 4, se presentan los parámetros de. IO. linealidad del método para las concentraciones: 80%, 90%, 100%, 110%, 110%,. BI. BL. 120%. Estos comportamientos se objetivizan en los gráficos 1 y 2.. En la tabla 3, se muestra el valor del coeficiente de determinación r2 de 0,995674, siendo el valor mínimo aceptable de 0,990; mientras que en la Tabla 4, el valor del coeficiente de determinación r2 fue 0,9945001. En ambos casos se demuestra que el método presenta una buena corrección entre las concentraciones y las respuestas, señalando que el sistema conserva la linealidad esperada. Para confirmar que dicha regresión es lineal, se aplicó el test de Student, cuyo valor t experimental fue mayor que el t tabla (54,7043 > 2,160) para linealidad del sistema y de igual manera para la. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. linealidad de método (48,4837 > 2,160), por lo que ambos casos la pendiente difiere significativamente de cero. En el test de proporcionalidad, el t experimental es mayor que el t tablas (26,7421 > 2,160) para la linealidad del sistema y de igual manera para la linealidad del método (771,510 > 2,160), lo que indica que el intercepto es estadísticamente diferente de cero (14, 16, 17, 18).. Otro de los parámetros evaluados es la exactitud, cuya finalidad es comprobar que el. A. método tiene la capacidad de revelar dentro de un límite aceptable la cantidad de. ÍM. IC. sustancia de interés que esté presente en la muestra, como se puede observar en la. U. tabla 5, el valor de los porcentajes promedio de muestra recuperada de Enalapril. BI O. Q. maleato fue de 99.91%, el cual está dentro de los límites de las especificaciones (98% - 102%) señalando la recuperación como satisfactoria; se debe tener en cuenta que la. IA. Y. recuperación esperada depende de la matriz de la muestra, del procedimiento de la. FA R. M. AC. preparación de la muestra y de la concentración del analito en la misma (9).. E. Al aplicar el test G de Cochran resultó que el G experimental es menor que G tablas. C A. D. (0,784 ˂ 0,797) lo cual significa que las varianzas de las tres concentraciones son. BL. IO. TE. equivalentes, es decir, que la variable concentración no influyó en los resultados.. BI. Para demostrar que no hay diferencia significativa entre la recuperación media y el 100% se aplicó un test estadístico denominado test de Student (Tabla 5), donde se muestra que el t experimental es menor que t tabla (0,741 ˂ 2,306) por lo que la exactitud es correcta según sus respectivas especificaciones. Este resultado nos condujo a considerar que los errores sistemáticos del método un fueron significativos, por lo que éste puede considerarse exacto (9, 17, 19).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los factores que pueden influir en un comportamiento de no exactitud son los errores sistemáticos como: la utilización de equipos de medición no adecuados, una calidad de reactivos incorrecta o no utilizar el método analítico apropiado, lo que hace que se obtengan valores superiores o inferiores al valor verdadero.. El parámetro de precisión, se evaluó en términos de repetibilidad y precisión. ÍM. IC. A. intermedia.. U. Con respecto al ensayo de repetibilidad, se evaluó a nivel de repetibilidad de sistema. BI O. Q. cuya finalidad es medir el grado de reproducibilidad que tiene el procedimiento bajo condiciones normales de operación y la repetibilidad del método que se hace con la. IA. Y. finalidad de medir el grado de reproducibilidad que tiene el procedimiento aplicado a. AC. la muestra y nos da un indicador de consistencia de los resultados. En la Tabla 6 se. M. observa resultados satisfactorios, pues el coeficiente de variación determinado fue de. FA R. 0,632%, para la repetibilidad del sistema y 0,474% para la repetibilidad del método, es. E. decir se obtienen valores por debajo del límite máximo especificado (2%). Se debe. C A. D. tener en cuenta que los resultados obtenidos para la repetibilidad del sistema dependen método depende del proceso de. TE. del equipo, mientras que la repetibilidad del. BI. BL. IO. preparación de la muestra (9, 18).. Para el ensayo de precisión intermedia, que expresa las variaciones intralaboratorio: diferentes días, diferentes analistas, diferentes equipos, etc. Como se muestra en la Tabla 6 el valor obtenido fue de 0,59% siendo el valor máximo 2%, según el resultado obtenido se observa que la técnica analítica aplicada es capaz de dar valores cercanos entres si cuando se aplican en similares condiciones operativas por los analistas en diferentes días.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La variabilidad del método puede deberse a errores aleatorios inherentes a todo método de ensayo. Los factores susceptibles a influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre controlados como el analista, el equipo instrumental, los. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q. U. ÍM. IC. A. reactivos, el tiempo, etc., es por ello la importancia de este ensayo (9, 14).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. . CONCLUSIONES. La técnica espectrofotométrica demuestra ser específica, lineal, exacta y precisa para la cuantificación de Enalapril maleato 10mg tabletas recubiertas, permitiendo obtener resultados confiables para su utilización en el control de calidad del. U. Los valores obtenidos de los parámetros de la validación (especificidad, linealidad,. Q. . ÍM. IC. A. producto.. BI O. exactitud y precisión) cumplen con los criterios establecidos por la Farmacopea. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. Americana.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Maslucán Angela. y Amaro Claudio. Estudio de Oferta y Demanda del Sector. A. Farmacéutico Peruano - PROMPEX. Industria Farmacéutica. Perú 2003.. ÍM. IC. 2. González George. Validación retrospectiva y control estadístico de procesos en. Q. U. la industria farmacéutica. [Unidad de Práctica para optar al Título de Químico. AC. IA. Y. BI O. Farmacéutico]. 2005 Universidad de Chile. Santiago, Chile.. FA R. M. 3. Romero Miguel. Desarrollo de nuevas metodologías analíticas en el control de calidad de la industria farmacéutica. [Tesis para optar el grado de doctor en. D. E. Ciencias Químicas]. Barcelona: Universidad Autónoma de Barcelona; 2001.. TE. C A. [Fecha de acceso 25 de marzo de 2012]Barcelona. Disponible en:. IO. http://www.tesisenxarxa.net/TDX/TDX_UAB/TESIS/AVALIABLE/TDX-. BI. BL. 0712102-102928//marglde9.pdf. 4. Dalmau Roch R, Suñe Negre JM, Cemeli Pons J. Control de calidad en la industria farmacéutica: Concepto de validación. Industria Farmacéutica. España 1989. Pp: 85-91.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 5. Morales Cesar. Desarrollo y Validación Prospectiva de una Técnica Analítica por Cromatografía Liquida de alta Performance (HPLC) para el Enalapril 10 mg tabletas recubiertas. [Tesis para optar el título profesional de Químico Farmacéutico]. 2004. Universidad Mayor de San Marcos. Lima, Perú.. 6. Nafisur Rahman y Manirul Haque. Optimized and Validated Spectrophotometric. IC. A. Methods for the Determination of Enalapril Maleate in Commercial Dosage. U. ÍM. Forms. Department of Chemistry, Aligarh Muslim University, Aligarh (U.P.). Y. BI O. Q. 202 002, India. 2008. AC. IA. 7. Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Analytical Procedures and. D. E. FA R. M. Methods Validation. [Guidance for Industry] August 2000.. C A. 8. García Encarnación . Optimización, validación y modelización de un proceso de. IO. TE. fabricación de comprimidos. Desarrollo de una aplicación interactiva. BL. multimedia. [Tesis para optar el grado de doctor]. 2001. Universidad de. BI. Barcelona. Barcelona, España.. 9. Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria. Validación de Métodos Analíticos. Sección Catalana de AEFI. Barcelona-2001.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 16. Castillo B, Gonzalez T. Protocolo de validación de métodos analíticos para la cuantificación de fármacos. Rev Cubana Farm 1996; 30(1):1-7. [Fecha de acceso 30. de. marzo. de. 2012]. Disponible. en:. http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S003475151996000100009&script=sci_art. 17. Montgomery D. Introducción al Control Estadístico de la Calidad 2° ed. México:. ÍM. IC. A. Grupo Editorial Iberoamericana; 1996. p 65-112. BI O. Q. U. 18. Salazar R. Cuantificación y Validación: Elementos básicos de la calidad y. IA. Y. productividad. Barcelona: Ramargraf S.A.; 2007. P 675-815. M. AC. 19. Díaz M, Hernández I, Martinez M, Licea V, Gómez L, Louro G, etc. Validación. FA R. de técnicas analíticas utilizadas en el control de calidad. Rev Cubana Farm. D. E. 1998;32(2):106-12 [Fecha de acceso 2 de abril 2012] Disponible en:. BI. BL. IO. TE. C A. http://bvs.sld.cu/revistas/far/vol32_2_98/far05298.pdf. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) BI O. Q. U. ÍM. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL. IO. TE. C A. D. E. FA R. M. AC. IA. Y. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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