Efecto del extracto etanólico de Annona muricata a diferentes tiempos y concentraciones sobre el ciclo celular en Allium cepa
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(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DIRECTIVOS DE LA ESCUELA DE POSTGRADO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. RA DO. Dr. Federico Gonzales Veintimilla. PO. SG. DIRECTOR DE LA ESCUELA DE POSTGRADO. Dra. Lydia Edita Sánchez Arce. TE CA. DE. PROFESORA SECRETARIA DE LA ESCUELA DE POSTGRADO. Dr. Cesar Augusto Jara Campos. BI B. LI O. DIRECTOR DE LA SECCIÓN DE POSTGRADO EN CIENCIAS BIOLÓGICAS. II Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO Dando cumplimiento a las disposiciones legales vigentes contenidas en el. RA DO. Reglamento de Grados y Títulos de la Escuela de Postgrado de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra ilustre consideración el presente informe de Tesis intitulado: “Efecto del extracto etanólico de Annona muricata a diferentes tiempos y concentraciones sobre el ciclo celular en Allium cepa”, con el propósito de obtener el. PO. SG. Grado Académico de Doctor en Ciencias Ambientales.. Expreso a ustedes mi sincero agradecimiento por la revisión del presente. MARUJA ISABEL CHÁVEZ ALDAVE. BI B. LI O. TE CA. DE. informe.. III Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RA DO. JURADO DICTAMINADOR. ____________________________ Dr. José Mostacero León. SG. PRESIDENTE. PO. ____________________________ Dra. Rosa Ramírez Vargas. TE CA. DE. SECRETARIA. ____________________________ Dr. Freddy Rogger Mejía Coico. BI B. LI O. VOCAL. IV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios por haber puesto en mi camino. RA DO. a cada una de las personas que hicieron posible la realización de esta tesis doctoral, y por haberme dado todos. PO. necesaria para llevarla a buen término.. SG. los recursos materiales y la salud. A Juan Manuel, mi esposo y a. TE CA. DE. mis hijos Juan y José, por su paciencia, comprensión, amor y por su apoyo en todo momento. LI O. A Flor y Agustín mis padres, quienes me dieron vida, educación, apoyo y consejos. BI B. A Mariela mi hermana, por su gran apoyo en todo momento.. V Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. La presente tesis doctoral es fruto del apoyo y confianza que he recibido de muchas personas a las cuales les estoy sinceramente agradecida; y. RA DO. entre quienes destaco las siguientes: A mi esposo e hijos, quienes no solamente han sido testigos de todos los retos y alegrías que he vivido durante estos años, sino que su sacrificio,. SG. paciencia y ayuda invaluable me han permitido elaborar esta tesis doctoral. A mi jurado del Proyecto de Tesis Dra. Rosa Ramírez Vargas, Dra.. PO. Fátima Zavala De La Cruz y mi asesor Dr. Freddy Mejía Coico; a mis profesores Dr. José Mostacero León, Dr. Darío Medina Castro, Dr. Glicerio Torres Carranza y Dr. Sebastián Bustamante Edquen; por su excelente calidad. DE. humana y por haberme apoyado en todo momento durante mis estudios de postgrado en la Universidad Nacional de Trujillo. Además agradezco sus. TE CA. sabios consejos que fueron indispensables para la elaboración de esta tesis doctoral, la cual espero sea el inicio de muchos proyectos de cooperación e investigación conjunta durante los próximos años.. LI O. Igualmente al Blgo. Jordan De La Cruz Castillo, por el apoyo en la. ejecución de la investigación en laboratorio, sin el cual esta tesis doctoral no Natalia Sagástegui, mi. BI B. hubiera sido posible. Agradecimiento especial a. profesora de inglés y a todas y cada una de las personas que me apoyaron para llevar a cabo mis estudios de doctorado.. A cada uno de Ustedes, ¡MUCHAS GRACIAS!. VI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE GENERAL Pág.. DIRECTIVOS DE LA ESCUELA DE POSTGRADO. RA DO. II. PRESENTACIÓN JURADO DICTAMINADOR. SG. DEDICATORIA. PO. AGRADECIMIENTOS RESÚMEN. DE. ABSTRACT. TE CA. CONTENIDO. III. IV. V. VI. IX. X. VII. I. INTRODUCCIÓN. 01. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 09. LI O. 2.1.Material. 2.1.1. Material Biológico. BI B. 2.2.Métodos y Técnicas. 09 09 11. 2.2.1. Lugar de Ejecución. 11. 2.2.2. Obtención de los extractos etanólico mediante infusión. 11. 2.2.3. Obtención de las raicillas de A. cepa. 15. 2.2.4. Exposición de las raicillas. 17. 2.2.5. Obtención de preparados citológicos. 18. 2.2.6. 2.2.6. Análisis citológico y estadístico. 20 VII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 22. IV. DISCUSIÓN. 30. V. CONCLUSIONES. 33. VI. PROPUESTA. 34. RA DO. III. RESULTADOS. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 44. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. ANEXOS. 37. VIII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN La búsqueda de productos de especies vegetales con propiedades para detener el crecimiento acelerado de las diferentes fases del ciclo celular en casos oncogénicos despierta una gran expectativa e interés en las investigaciones actuales. Por ello el. RA DO. objetivo de la investigación fue determinar el efecto del extracto etanólico de Annona muricata “guanábana” a concentraciones de 25 µg/mL, 50 µg/mL y 100 µg/mL y a diferentes tiempos sobre el ciclo celular en meristemos radiculares de Allium cepa. SG. “cebolla” var. roja arequipeña. Se indujo el crecimiento de raicillas, a través de 12 tratamientos T1: 0 µg/mL a 6 horas, T2: 25 µg/mL a 6 horas, T3: 50 µg/mL a 6 horas,. PO. T4: 100 µg/mL a 6 horas, T5: 0 µg/mL a 12 horas, T6: 25 µg/mL a 12 horas, T7: 50 µg/mL a 12 horas, T8: 100 µg/mL a 12 horas, T9:0 µg/mL a 24 horas, T10: 25 µg/mL a. DE. 24 horas, T11: 50 µg/mL a 24 horas y finalmente T12: 100 µg/mL a 24 horas. Después de la exposición de las raicillas a los tratamientos, se realizó el montaje, coloración y. TE CA. posterior lectura microscópica. Los resultados obtenidos muestran que el extracto etanólico a la concentración de 100 µg/mL con valores de exposición de 24 horas, correspondiente al T12, es el que ocasiona una disminución del índice mitótico,. LI O. alcanzando valores de 7.52 % y un aumento en el índice profásico, 87.93 %; y una disminución del índice metafásico (5.98%), anafásico (4.43%) y telofásico (1.33%),. BI B. debido a la presencia de compuestos con capacidad oxidante en el extracto etanólico; lo que supone una futura alternativa de terapia neoplásica. Palabras Clave: Allium cepa, extracto etanólico, Índice mitótico, Índice de fases, Annona muricata.. IX Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The objective of this study was to determine the effects of an ethanolic extract of. RA DO. Annona muricata, or Guanábana, applied for various exposure periods in concentrations of 25 µg/mL, 50 µg/mL and 100 µg/mL on the cell cycle of root meristems of the Roja Arequipeña variety of onion, Allium cepa. The twelve. SG. treatments of ethanolic extract of Annona muricata used to induce growth in the onion roots were as follows: T1: 0 µg/mL for 6 hours, T2: 25 µg/mL for 6 hours, T3: 50. PO. µg/mL for 6 hours, T4: 100 µg/mL for 6 hours, T5: 0 µg/mL for 12 hours, T6: 25 µg/mL for 12 hours, T7: 50 µg/mL for 12 hours, T8: 100 µg/mL for 12 hours, T9:0. DE. µg/mL for 24 hours, T10: 25 µg/mL for 24 hours, T11: 50 µg/mL for 24 hours and finally T12: 100 µg/mL for 24 hours. After exposing the roots to the treatment, the cells. TE CA. were mounted on slides, stained, and examined microscopically. Results of microscope analysis demonstrates that treatment T12, an ethanolic extract of Annona muricata at a concentration of 100 µg/mL over a 24 hour exposure period, reduces the Mitotic index. LI O. by up to 7.52%, with a 87.93% increase in the Prophasic index, and 5.98, 4.43, and 1.33% reductions in the Metaphasic, Anaphasic, and Telophasic indices respectively,. BI B. strongly implying the presence of oxidizing compounds in the Annona muricata ethanolic extract, which may indicate potential as a future alternative to antineoplastic therapy.. Key words: Allium cepa, ethanolic extract, Mitotic index, Annona muricata. X Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN. Las plantas medicinales, desde su aparición en la tierra, siempre fueron usadas por el ser humano, como fuente de alimento y medicina, constituyendo un recurso de gran. RA DO. importancia para cubrir las necesidades terapéuticas. Su uso en salud es ampliamente conocido en múltiples culturas del mundo y ha sido transmitido a través de generaciones (Arber, 1970; Bermúdez et al., 2005; Medina, 2011; Ruenes, 2002).. SG. La OMS ha definido en 1978 a las Plantas Medicinales como: “cualquier planta. PO. que en uno o más de sus órganos contiene sustancias que pueden ser utilizadas con finalidad terapéutica o que son precursores para la síntesis químico-farmacéutica”. DE. (OMS, 2003). Es decir, es toda especie vegetal en la que todo o una parte de la misma está dotada de actividad farmacológica en su estado bruto o en forma de preparaciones. TE CA. vegetales. Estas a su vez pueden ser consideradas como un laboratorio biosintético no solo por los compuestos elaborados a partir de su metabolismo primario como hidratos de carbono, proteínas, ácidos nucleicos y grasas, sino también por una gran cantidad de sustancias químicas, procedentes del metabolismo secundario, como alcaloides,. LI O. polifenoles y terpenoides, entre los de mayor significancia terapéutica (Bruneton, 1991).. BI B. Estos metabolitos secundarios son, en la mayoría de los casos, responsables de las acciones farmacológicas que poseen las drogas vegetales, es decir se definen como los principios activos de las mismas (Bruneton, 2001).. Se podría decir que la medicina natural es la mejor para el ser humano, ya que el hombre llevó, lleva y llevará durante toda su existencia contacto directo con ella, a diferencia de los medicamentos convencionales o sintéticos, los cuales pueden tener 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. muchos efectos secundarios. Cabe mencionar que algunas plantas medicinales poseen muchos principios activos, en algunos casos 10, 20 o más, lo cual es beneficioso para la persona que desea un tratamiento eficaz, pero a la vez poco o nada rentable para las farmacéuticas a quienes no les resulta productivo agregar más de un principio activo a. RA DO. un medicamento, llevando a lo mucho entre 4 - 10 (cuando son vitaminas) (Mostacero et al., 2011).. SG. La OMS estima que un 80% de la población mundial utiliza la Medicina Tradicional por sí sola o en combinación con la Medicina Moderna, para el abordaje de. PO. sus problemas primarios de salud, ya sea dentro de las estrategias de cobertura sanitaria implementadas por los diferentes gobiernos, así como por propia utilización arraigada. DE. en costumbres ancestrales y culturales. Así, en América Latina por lo menos 390 millones de personas, incluidos unos 50 - 60 millones de origen indígena que sólo. TE CA. tienen acceso a las medicinas tradicionales y a las plantas medicinales, usan los medicamentos tradicionales para diversos problemas de salud, incluyendo el cáncer. El número de personas de América Latina que hacen uso de la medicina tradicional podría. LI O. ser más alto que el promedio mundial debido a la migración de la población con antepasados indígenas hacia las grandes ciudades modernas, donde se encuentran a. BI B. menudo tiendas de plantas medicinales y curanderos tradicionales cerca de los hospitales modernos; dicha aceptación de la medicina tradicional se centra básicamente en la percepción generalizada de la seguridad de las plantas medicinales, influyendo también su amplia distribución y la accesibilidad a las mismas (OMS, 2003; UICN, 1993).. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esto trae consigo en pleno siglo XXI la tendencia hacia un mayor consumo de frutas y hortalizas, motivado por una creciente preocupación hacia una dieta más equilibrada y una mayor conciencia de la importancia de los hábitos nutricionales, en los problemas de salud y longevidad de las personas; cabe mencionar que según la. RA DO. Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización para la Agricultura y la Alimentación de las Naciones Unidas (FAO) recomiendan la ingesta de un mínimo de 400 gramos diarios de frutas y verduras para prevenir enfermedades crónicas como cardiopatías, cáncer, diabetes o la obesidad, así como para prevenir y mitigar varias. SG. carencias de micronutrientes, sobre todo en los países menos desarrollados; por otro. PO. lado la OMS afirma que uno de los principales factores de riesgo de cáncer y enfermedades cardiovasculares es la dieta malsana (FAO, 2003; Herrera et al., 2009 ;. DE. OMS, 2004; OMS, 2011).. TE CA. En el mundo, el riesgo de padecer cualquier tipo de cáncer antes de los 75 años es del 18.7%, siendo los más frecuentes de pulmón, mama, colorrectal, estómago y próstata (OMS, 2008); de igual manera está plenamente demostrado que la alteración de. LI O. la proliferación celular es la causa principal de varios tipos de enfermedades neoplásicas. BI B. (Quires et al., 1996).. En plantas superiores los meristemos proliferan siguiendo una cinética en. equilibrio dinámico, lo que puede evaluarse a través de una serie de indicadores tales como: la población de células en división celular, la duración del ciclo celular, el índice mitótico, el índice de fases mitótico, entre otros (López, Fernández, 1965).. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los meristemos de Liliáceas, como “cebolla”, son frecuentemente utilizados para estudios de la dinámica celular porque constituyen un sistema in vitro ideal (Giménez et al., 1977); así como para estudiar los mecanismos regulatorios que afecten el ciclo celular; también se conoce como “Allium test” y se utiliza para determinar los efectos de. RA DO. diferentes xenobióticos o principios activos obtenidos de plantas y animales (Rosth, 1977).. SG. El consumo de frutas y verduras está asociado con una baja incidencia de ciertos tipos de enfermedades debido al efecto protector de compuestos presentes en estos. PO. alimentos de origen natural (Herrera et al., 2009). Lo expuesto anteriormente crea la necesidad de obtener información sobre los contenidos fitoquímicos y antioxidantes de. DE. ciertas especies vegetales como recursos promisorios para el bienestar mundial (Lako et. TE CA. al., 2007).. Entre los compuestos que pueden actuar como antioxidantes se encuentran vitaminas C y E, carotenoides, antocianinas, flavonoides y otros compuestos fenólicos Muchos de estos antioxidantes son. LI O. (Baskar et al., 2007; Contreras et al., 2010).. lipofílicos y particularmente importantes en la oxidación de lípidos en todos los. BI B. sistemas, así como otros radicales que son muy activos fisiológicamente (Karadag et al., 2009).. Perú es uno de los 12 países megadiversos del planeta; posee alrededor del 10% de especies de la flora mundial, con 25 000 especies, de las cuales, 30% son endémicas; así mismo ocupa el primer lugar con 128 especies domesticadas nativas, y en plantas comestibles con 787 especies; abarcando a su vez una amplia riqueza de las plantas 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. medicinales, enmarcada dentro de más de 4400 especies de usos conocidos por las poblaciones locales (Brack, 1999; Ferreyra, 1987; MINSA, 2008).. Desde la antigüedad tenemos el beneficio de contar con plantas medicinales para. RA DO. todo tipo de dolencias menores e incluso con poderes curativos para enfermedades crónicas. Tanto la costa, sierra y selva cuentan con gran diversidad de plantas que no solo son tradición sino que poco a poco la ciencia va aceptando sus bondades curativas;. SG. tal es el caso de la “guanábana” (Mostacero et al., 2011).. PO. Annona muricata Linn. “guanábana”, “chirimoya brasileña”, “masamba”, “corosol”, “soursop” o “graviola”; perteneciente a la Familia Annonaceae, género. DE. Annona, es un árbol pequeño de 6- 8 m. alto; hojas alternas, enteras y sin estípulas; flores trímeras con estambre en espiral; fruto semejante al de la “chirimoya”,. TE CA. asimétrico, ovoide, elipsoide o más o menos triangular, de 15- 35 cm de largo por 10-14 cm. diámetro, verde oscuro, con cáscara delgada provista de espinas suaves dirigidas hacia la base, con pulpa blanca y jugosa conteniendo semillas de color café oscuro. LI O. brillantes (Mostacero et al., 2009).. BI B. Originaria de América y África tropical, que debido a la llegada de los españoles a. América fue distribuida en los trópicos y hoy en día es posible encontrarla en el oeste de la India, en Norte y Suramérica, Islas del Pacífico y en el Sureste de Asia; tal es el caso que se han encontrado plantas al estado silvestre tanto en las Antillas como en diversos lugares de la Amazonía por lo que su centro de origen puede ser compartido por varios lugares, de allí que su fruto está representado al igual que la “chirimoya” en la cerámica. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. precolombina de la Costa peruana (Bradie, Schauss, 2010; Bicas et al., 201; Márquez, 2009; Mostacero et al., 2009).. Por las características mencionadas anteriormente la “guanábana” es una de las. RA DO. frutas exóticas más apreciadas por su agradable, aromática y jugosa pulpa; lo que la convierte en una fuente potencial para producir puré, jugo, mermelada, jalea, barras dulces y postres (Abbo et al., 2006). Además, uno de los intereses en esta fruta es la. SG. creciente demanda en el mundo por sabores exóticos, por lo cual es probable que sus. PO. usos se extiendan en el futuro (Pinto et al., 2005).. Desde el punto de vista alimentario, se ha determinado un gran número de. DE. componentes nutricionales en este fruto (Ojeda et al., 2007). Por otra parte, desde el punto de vista farmacológico la “guanábana” ha empezado a cobrar fuerza debido al. TE CA. hecho que tallo, hojas y semillas han sido usadas históricamente en medicina tradicional por los pueblos indígenas dadas sus capacidades antitumorales, parasiticidas y antidiarreicas, de allí que las hojas de guanábana son utilizadas tradicionalmente en Brasil. LI O. para problemas del hígado (Solís et al., 2010), también son usadas como supurativo (contra mucosidades, secreciones o flujos) y antipirético y contra la inflamación. BI B. (Bradie, Schauss, 2010; Gómez et al., 2010). Investigaciones recientes realizadas por Viera de Sousa et al (2010), confirman la capacidad antiinflamatoria del extracto. etanólico de las hojas de “guanábana” haciendo posible uso terapéutico, pero. recomendando la realización de estudios sobre los efectos secundarios que se pueden presentar. Respecto a las semillas de la “guanábana”, se encuentra que su aceite puede contener características fisicoquímicas que incrementan su utilización en la industria alimenticia, farmacéutica y cosmética (Solís et al., 2010).. Tradicionalmente estas 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. semillas se usan como insecticida, astringente y carnada de pesca (Bradie, Schauss, 2010). Finalmente los frutos de “guanábana” se usan en América del Sur para tratar gusanos y parásitos, para bajar la fiebre, incrementar la leche de las madres después del. RA DO. parto y como un astringente para diarrea y disentería (Álvarez, 2007).. El uso de plantas medicinales es resultado de la experiencia e íntimo contacto con la naturaleza que el hombre ha acumulado por generaciones, así como de la convivencia. SG. entre las culturas de diferentes pueblos. Este saber ha permitido que sobrevivan comunidades que habitan en lugares apartados, donde hay carencias de servicios. PO. médicos. En la actualidad existe un interés creciente en la medicina alternativa para la cura de diferentes enfermedades que afectan al ser humano, por lo que resulta esencial. DE. realizar investigaciones en especies vegetales promisorias para la cura de estas, como es el caso de Annona muricata. Ya que Si bien se han logrado grandes avances de la. TE CA. medicina científica, la cobertura de los programas de salud para el tratamiento del cáncer en el Perú es insuficiente, en especial en las zonas rurales que según cifras del INEI representan el 25% de la población total y si a esto le agregamos que el 25.8% se. LI O. encuentran en situación de pobreza y el 6% en pobreza extrema, es totalmente imposible que puedan asumir los distintos tipos de costos durante los períodos de. BI B. tratamiento y recuperación, costos personales que dependerán de varios factores, incluidos la extensión y el tipo del plan de tratamiento del cáncer y el alcance de cobertura del seguro en caso lo tuviera, costos que se estiman en algunos casos en S/. 90,000.00 y S/.250,000.00 en otros (INEI, 2009; OMS, 2015). Por ello es necesario valorar la medicina tradicional como coadyuvante para resolver este problema.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Según un artículo publicado en la página Web de la OMS, Temas de Salud-Cáncer (abril del 2008) se prevé que a nivel mundial, la mortalidad por cáncer aumentará un 45% entre 2007 y 2030 (pasará de 7,9 millones a 11,5 millones de defunciones). Se estima que durante el mismo período el número de casos nuevos de cáncer aumentará. RA DO. de 11,3 millones en 2007 - 15,5 millones en 2030 (OMS, 2011).. Por ello, conociendo que la cobertura de los programas de salud para el. SG. tratamiento del cáncer en el Perú es insuficiente y por otro lado teniendo conocimiento del uso empírico, bajo costo y fácil adquisición de Annona muricata L como medicina. PO. alternativa para el tratamiento de cáncer, y al no haber encontrado estudios previos en el Distrito y Provincia de Trujillo, Región La Libertad que afirman el poder. DE. anticancerígeno de esta especie, se plantea como objetivo de la presente investigación Determinar el efecto del extracto acuoso de Annona muricata a diferentes tiempos y. BI B. LI O. TE CA. concentraciones sobre el ciclo celular en Allium cepa.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 2. Material. RA DO. 2.1. Material Biológico. Hojas de Annona muricata “guanábana”, en excelente estado fitosanitario, fueron colectadas en el Jardín Botánico de la Facultad de. SG. Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo (Fig.1.) ubicada en el Distrito de Trujillo, Provincia de Trujillo, Departamento de La. DE. PO. Libertad 2014, entre enero del 2014 y marzo del 2015.. Igualmente los bulbos de Allium cepa “cebolla” (Fig.2.), fueron. TE CA. obtenidos en los diferentes centros de abastos de la ciudad de Trujillo: Mercado de la Unión, La Hermelinda, Mayorista y Tottus. Este material fue trasladado al Laboratorio de Botánica donde fue. LI O. seleccionado de forma tal que guardan uniformidad en tamaño, forma y peso, los que aproximadamente tienen forma ovalada, medianos y de 90. BI B. gramos.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. FIGURA 1: Hojas de Annona muricata “guanábana”, en excelente estado fitosanitario, colectadas del Jardín Botánico de la Universidad Nacional de Trujillo. FIGURA 2: Bulbos de Allium cepa “cebolla” en excelente estado de conservación fitosanitaria, obtenidos de Hipermercados Tottus.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.Métodos y Técnicas. 2.2.1. Lugar de Ejecución. La investigación se realizó en el Laboratorio de Botánica, ubicado en el. RA DO. Pabellón de Ciencias Biológicas “Pabellón Antonio Samanamud Romero” Laboratorio 209 de la Universidad Nacional de Trujillo.. SG. 2.2.2. Obtención de los extractos etanólico mediante infusión. PO. Para la obtención del extracto etanólico, se procedió a limpiar con papel secante las hojas de Annona muricata “guanábana” (Fig.3.); los que. BI B. LI O. TE CA. DE. posteriormente fueron colocadas en la estufa a 45°C por tres días (Fig.4.).. FIGURA 3: Selección y limpieza externa de las Hojas de Annona muricata “guanábana”.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. SG. RA DO. B. DE. PO. FIGURA 4: A) Hojas de Annona muricata “guanábana” Envueltas en papel crafk, posteriormente se colocaron B) en una estufa a 45°C por tres día.. Transcurrido ese tiempo se procedió a la molienda de las hojas crocantes,. TE CA. utilizando para el efecto un mortero (Fig.5 A.); obteniéndose finalmente un producto relativamente pulverizado (Fig.5 B.). El pulverizado obtenido se pesó para colocarlo inmediatamente dentro de. LI O. un matraz de vidrio que contenía 300 mL. de alcohol, para su maceración por tres horas (Fig.5 C y D.). Seguidamente este extracto se llevó a Sonicar. BI B. por 20 minutos a una temperatura constante de 45 °C. (Fig.5 E.). 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. E. LI O. TE CA. DE. PO. D. C. SG. RA DO. A. BI B. FIGURA 5: A) Molienda, B) y C) Pulverización de Hojas de Annona muricata “guanábana”. D) Maceración y E) Zonificación del extracto etanólico de las hojas de guanábana.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A continuación se filtró el extracto etanólico con papel filtro Whatman N°1; luego se agregó 1 mL del filtrado a una placa petri (previamente pesada) (Fig.6.) para colocarla nuevamente en la estufa por dos horas a. RA DO. 45°C. Transcurrido este tiempo, se pesó la placa petri con el extracto y mediante una fórmula matemática se obtuvo el peso de sólidos totales; determinando así las concentraciones de 0.0 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL,. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. y 100 µg/mL. (Fig.7.). FIGURA 6: Filtración del extracto etanólico de Hojas de Annona muricata “guanábana” con. papel filtro Whatman N° 1; posteriormente se agregó en una placa y se llevó a la estufa.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) SG. RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. PO. FIGURA 7: Obtención de las concentraciones del extracto etanólico de Hojas de Annona muricata “guanábana”.. TE CA. 2.2.3. Obtención de las raicillas de A. cepa. La obtención de las “raicillas” se realizó tomando 3 bulbos de. “cebolla”, a los cuales se les quitaron las catáfilas y raicillas secas (Fig.8. LI O. A.), y valiéndose de 4 “mondadientes” se las sostuvo equidistantemente de tal forma que el bulbo encajaba muy bien en la boca del vaso de polietileno. BI B. usado (Fig.8 B.) y asegurándose que el disco germinativo del bulbo de la “cebolla” tome contacto con líquido para la emisión de nuevas raicillas (Fig.8 C.). El vaso se llenó con 150mL. de agua de mesa “San Mateo”; la misma que fue renovada cada 24 horas, durante 3 días (72 horas) (Fig.5 D.) hasta que se obtuvieron raicillas de 2 - 3 cm. longitud.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. RA DO. B. PO. SG. C. F. DE. E. BI B. LI O. TE CA. D. FIGURA 8: A) Bulbos de Allium cepa “cebolla”, B) Colocación de mondadientes en los bulbos, C) pre-diseño de Allium cepa “cebolla”, esperando la obtención de raicillas, D) Cambio diario de agua de los bulbos, E) y F) Exposición de las concentraciones del extracto etanólico de Annona muricata “guanábana”, sobre el ciclo celular de Allium cepa “cebolla”.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.4. Exposición de las raicillas. Se evaluó el efecto de las concentraciones del extracto etanólico de Annona muricata “guanábana”, sobre el ciclo celular de Allium cepa. RA DO. (Fig.8 E y F.). poniendo las raicillas obtenidas a concentraciones de 0.0 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL, y 100 µg/mL durante 6, 12 y 24 horas. LI O. TE CA. DE. PO. SG. respectivamente (Fig.9.). BI B. FIGURA 9: DISEÑO EXPERIMENTAL: Evaluación del efecto de las concentraciones del extracto etanólico de Annona muricata “guanábana” a 0.0 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL, y 100 µg/mL durante 6, 12 y 24 horas sobre el ciclo celular de Allium cepa “cebolla”.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.5. Obtención de preparados citológicos. Finalizado. los. tratamientos,. las. raicillas. con. las. diferentes. concentraciones y tiempos indicados, se procedió a tomar las raicillas. RA DO. seccionadas debidamente con navajas “Schick” (Fig.10 A.), las raicillas fueron lavadas tres veces seguidas con agua destilada para colocarlas en la solución fijadora de Carnoy (Fig.10 B.) por espacio de 1 hora.. SG. Posteriormente se sacaron estas raicillas del fijador para ser lavadas nuevamente por tres veces consecutivas con agua destilada, para retirar de. PO. esta manera los restos del fijador. Se procedió a secarlas con papel toalla para eliminar los restos de agua en la superficie y así estar lista para. DE. depositarlas sobre una luna de reloj para su respectiva coloración de acuerdo. BI B. LI O. TE CA. a la técnica rápida de (Tijo, Levan, 1950).. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) TE CA. DE. PO. SG. RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI B. LI O. FIGURA 10: Técnica de coloración rápida de Tjio y Levan A) Disección de raicillas de cebolla, B) Raicillas de aproximadamente 1 cm colocadas en fijador Carnoy, C) Raicillas coloreadas con Orceina acética y HCl, D) Exposición de raicillas a la llama de un mechero, E) Ápices de raíces listas para ser cortadas, F) Ápices. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.6. Análisis citológico y estadístico. Los ápices de las raicillas así coloreados y tratados se colocaron entre. RA DO. láminas “porta” y “cubre” objetos para su aplastamiento o "squash" (Fig.10 C-H.); obteniéndose de esta manera preparados citológicos para observación al microscopio compuesto tanto con el objetivo de 40 aumentos como el. SG. objetivo de inmersión.. Posteriormente, se procedió a contar un total de 2000 células. PO. meristemáticas por cada uno de los diferentes tratamientos ensayados, y de. celular (Fig.11.).. DE. igual manera para los valores del índice mitótico y de las fases del ciclo. TE CA. Los bioensayos se realizaron en tres repeticiones y los datos obtenidos se expresaron en porcentaje y además fueron analizados estadísticamente utilizando el programa Statgraphics Centurión versión de prueba 5.1. para. BI B. LI O. Windows.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) SG. RA DO. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. FIGURA 11: Observación de preparados citológicos al microscopio compuesto contando aproximadamente un total de 2000 células meristemáticas por cada uno de los diferentes tratamientos ensayados.. FIGURA 12: El tratamiento 12 correspondiente a la concentración de 100 µg/mL y a un tiempo de exposición de 24 horas de Annona muricata “guanábana”, ocasiona una disminución del índice mitótico y un aumento en el índice profásico. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS En el presente trabajo, se determinó el efecto del extracto acuoso de Annona muricata “guanábana” a concentraciones de 0.0 µg/mL, 25 µg/mL, 50 µg/mL, y 100 µg/mL durante 6, 12 y 24 horas respectivamente sobre el ciclo celular en meristemos. RA DO. radiculares de Allium cepa “cebolla”, obteniéndose los siguientes resultados:. En la tabla 1, se observan los Promedios, en porcentajes, del Índice Mitótico e. SG. Índice de Fases; en el cual se aprecia una considerable disminución del IM a la concentración de 100 µg/mL durante un tiempo de exposición de 24 horas,. PO. correspondiente al tratamiento 12 (T12); de igual manera la presente tabla muestra un aumento notable del Índice Profásico así como una reducción abrupta de los demás. BI B. LI O. TE CA. tratamiento (T12).. DE. índice de fases (Metafásico, Anafásico y Telofásico), correspondientes al mismo. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 1: Promedios, en porcentajes, del Índice Mitótico e Índice de Fases (Índice Profásico, Metafásico, Anafásico y Telofásico) en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con extracto etanólico de Annona muricata a distintas concentraciones y tiempos.. INDICE MITÓTICO (%). PROFASE. T1. 23.70. 50.46. 17.10. 10.41. 30.03. T2. 18.78. 63.84. 17.75. 8.94. 9.15. T3. 12.07. 66.00. 17.06. 6.63. 8.31. T4. 14.77. 73.73. 14.20. 5.65. 6.41. T5. 20.02. 33.39. 18.27. 12.83. 35.84. T6. 10.85. 58.37. SG. INDICE DE FASES (%) METAFASE ANAFASE. TRATAMIENTOS. 17.37. 13.50. 11.09. T7. 8.33. 64.40. 17.21. 10.20. 8.20. T8. 9.07. 67.97. 17.38. 7.80. 6.52. T9. 20.35. 42.02. 14.16. 11.44. 30.72. 13.38. 78.58. 11.70. 5.98. 3.74. 9.18. 74.41. 16.70. 5.84. 2.72. 7.52. 87.93. 5.98. 4.43. 1.33. T11. RA DO. PO. DE. BI B. LI O. T12. TE CA. T10. TELOFASE. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la Tabla 2; se puede apreciar claramente un Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Mitótico; el mismo que nos muestra la presencia de diferencias significativas entre los tratamientos; cabe resaltar que dichos resultados fueron corroborados por la Prueba de Tukey en la Tabla 3, indicando como mejor tratamiento. RA DO. al T12, con una disminución del índice mitótico de 20.35% (T9 control) a 7.52%.(T12). Tabla 2. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Mitótico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con extracto etanólico de Annona muricata a distintas concentraciones y tiempos.. Gl. Cuadrado Medio. 989.412. 11. 89.9466. 19.11. 24. 1008.52. 35. Valor-P. 112.96. 0.0000. 0.79625. DE. Entre grupos Intra grupos Total (Corr.). Razón-F. SG. Suma de Cuadrados. PO. Fuente. TE CA. Tabla 3. Prueba de Tukey, para el Índice mitótico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa. Casos. Media. 12 7 8 11 6 3 10 4 2 5 9 1. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 7.51667 8.33333 9.06667 9.18333 10.85 12.0667 13.3833 14.7667 18.7833 20.0167 20.35 23.7. BI B. LI O. TRATAMIENTOS. Grupos Homogéneos X XX X X X XX XX X X XX X X. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En las tablas siguientes 4,6,8,10; se detalla minuciosamente la existencia de diferencias significativas entre los tratamientos a través de un Análisis de Varianza (ANOVA) tanto para el Índice Profásico (Tabla 4), Índice Metafásico (Tabla 6), Índice Anafásico (Tabla 8) e Índice Telofásico (Tabla 10).. RA DO. Finalmente las Tablas 5,7,9 y 11; nos muestra el tratamiento ideal para cada una de los Índices de fases mencionados anteriormente a través de la prueba Tukey, indicando como mejor tratamiento al T12, ya que en este se puede apreciar un cambio. SG. abrupto en cuanto a los valores en porcentajes en cada uno de los índices, con un aumento de 42.02% ( T9 control) a 87.93% (T12) en el Índice Profásico (Tabla 5), Así. PO. como con una disminución notable de 14.16% ( T9 control) a 5.98% (T12) en el Índice Metafásico; de 11.44% ( T9 control) a 4.43% (T12) en el Índice Anafásico así como de. DE. 30.72% ( T9 control) a 1.33% (T12) en el Índice Telofásico.. TE CA. Tabla 4. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Profásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con extracto etanólico de Annona muricata a distintas concentraciones y tiempos.. Suma de Cuadrados. LI O. Fuente. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. 543.8. 0.0000. 7917.61. 11. 719.782. Intra grupos. 31.7666. 24. 1.32361. Total (Corr.). 7949.37. 35. BI B. Entre grupos. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 5. Prueba de Tukey, para el Índice profásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Casos. Media. 5 9 1 6 2 7 3 8 4 11 10 12. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 33.3933 42.02 50.4567 58.3667 63.84 64.4 66.0033 67.9667 73.7333 74.4067 78.5833 87.9267. Grupos Homogéneos X X X X X XX X X X X X X. SG. RA DO. TRATAMIENTOS. DE. PO. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. TE CA. Tabla 6. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Metafásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con extracto etanólico de Annona muricata a distintas concentraciones y tiempos.. Suma de Cuadrados. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. Entre grupos. 412.793. 11. 37.5267. 39.75. 0.0000. Intra grupos. 22.6551. 24. 0.943964. 435.448. 35. BI B. LI O. Fuente. Total (Corr.). 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 7. Prueba de Tukey, para el Índice Metafásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Casos. Media. 12 10 9 4 11 3 1 7 6 8 2 5. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 5.97667 11.7033 14.16 14.2033 16.7 17.0567 17.1033 17.2067 17.37 17.38 17.7467 18.2733. Grupos Homogéneos X X X X X X X X X X X X. SG. RA DO. TRATAMIENTOS. DE. PO. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. TE CA. Tabla 8. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Anafásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con extracto etanólico de Annona muricata a distintas concentraciones y tiempos.. Suma de Cuadrados. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. Entre grupos. 302.982. 11. 27.5438. 28.54. 0.0000. Intra grupos. 23.1591. 24. 0.964964. Total (Corr.). 326.141. 35. BI B. LI O. Fuente. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 9. Prueba de Tukey, para el Índice Anafásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Casos. Media. 12 4 11 10 3 8 2 7 1 9 5 6. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 4.43333 5.65 5.83667 5.97667 6.62667 7.79667 8.93667 10.1967 10.41 11.4367 12.83 13.5. Grupos Homogéneos X XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX X. SG. RA DO. TRATAMIENTOS. PO. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. TE CA. DE. Tabla 10. Análisis de Varianza (ANOVA) para el Índice Telofásico, en células meristemáticas de raíces de Allium cepa, tratados con extracto etanólico de Annona muricata a distintas concentraciones y tiempos.. Suma de Cuadrados. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. Entre grupos. 4804.72. 11. 436.793. 128.35. 0. Intra grupos. 81.6781. 24. 3.40326. Total (Corr.). 4886.4. 35. BI B. LI O. Fuente. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 11. Prueba de Tukey, para el Índice Telofásico en células meristemáticas de raíces de Allium cepa.. Casos. Media. 12 11 10 4 8 7 3 2 6 1 9 5. 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3. 1.33 2.72333 3.73667 6.41 6.52333 8.2 8.31333 9.14667 11.0933 30.03 30.7167 35.8367. Grupos Homogéneos X X XX XX XX XX XX XX X X X X. SG. RA DO. TRATAMIENTOS. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. (P≤0,05). X indica una diferencia significativa.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN Luego de analizar los resultados obtenidos a partir de los diferentes tratamientos del extracto etanólico de Annona muricata “guanábana”, se observó una variación en los valores del índice mitótico (Im), el mismo que paso, desde 23.70 %, Control (T1),. RA DO. hasta 12.07 % (T3) al cabo de 6 horas; desde 20.02 %, Control (T5), hasta 8.33 (T7) al cabo de 12 horas y desde 20.35 %, Control (T9), hasta 7.42 (T12) al cabo de 24 horas; indicando en todo momento una disminución notable del Im, y a su vez vislumbrando. SG. la existencia de diferencias significativas; según el Análisis de Varianza (ANOVA) (Tabla 2), lo que nos estaría indicando que a diferentes concentraciones de extracto. PO. etanólico se generan distintas respuestas celulares; siendo el mejor tratamiento según la prueba de TUKEY (Tabla 3) el T12, esto debido probablemente a que a esta. DE. concentración el extracto acuoso contiene la cantidad suficiente de taninos, ácidos, ésteres triterpénicos, alcaloides, heterósidos de sitosterol y estigmasterol que estarían. TE CA. generando un efecto oxidativo, el mismo que afectaría la formación del complejo CdK1-ciclina B; que a su vez forma el Factor Promotor de la Mitosis (FPM); lo que traería como consecuencia el impedimento del normal paso celular de la fase G2, hacia. LI O. la mitosis (Shimotohno et al., 2003) ; disminuyendo de este modo el número de células en división; similares resultados se obtuvieron en ensayos con extractos etanólicos de. BI B. Glycine max “soja” (Díaz, 2011).. En relación al IP (Tabla 1 ), se observó que este se incrementa notablemente, tanto. a 6, 12 y 24 horas, por sobre sus respectivos controles, a su vez también se puede apreciar la existencia de diferencias significativas entre los tratamiento (Tabla 4); siendo el mejor tratamiento mediante la prueba de TUKEY (Tabla 5) el T12, correspondiente a 100 µg/mL y a un tiempo de exposición de 24 horas, alcanzando un valor máximo de 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 87.93 % en (T3), con respecto a su control. Lo que ratificaría en principio el efecto oxidativo de los compuestos presentes en dicho extracto que estarían afectando la formación del complejo Ciclina B- cdk1, responsable de activar a las proteínas del mantenimiento estructural cromosómico conocidas como condensinas, encargadas de. RA DO. llevar a cabo la polimerización de microtúbulos para la formación del huso mitótico, que de no formarse sería casi imposible la transición normal de las células desde la profase hacía la metafase (Jiménez, Merchant, 2003; Lodish et al., 2002; Paniagua et al., 2002 ). Lo que concuerda por lo descrito por diversos investigadores; quienes afirman. SG. que el tránsito de profase a metafase requiere de factores de transcripción y de. PO. traducción, esenciales para la realización de este proceso (Basto et al., 2000).. DE. La disminución del Índice Metafásico (IMet) (Tabla 1), se pudo observar en todos los tratamientos; apreciándose diferencias significativas entre los tratamientos (Tabla 6);. TE CA. siendo el mejor tratamiento el T12 (Tabla 7), el mismo que alcanzo valores de hasta 5.98 %, esto se debería a la inhibición del FPM, disminuyendo el ensamblaje del huso mitótico y dejando de inducir la polimerización de microtúbulos que se elaboran perpendicularmente al eje mayor del cromosoma y que se anclan por una de sus. LI O. extremidades en el cinetocoro; logrando alcanzar un menor número de células durante la metafase con respecto a los controles (Dulot et al., 1982); tal como lo experimentaron. BI B. Basto et al (2000), quienes afirmaron durante sus ensayos que en la metafase los cromosomas están sujetos por el centrómero a los microtúbulos del huso acromático, de tal forma que si este no se organiza los cromosomas pierden orientación y no migraran a los polos; a su vez estos mecanismos vienen siendo monitoreados usando una serie de inhibidores que mantienen los cromosomas en una fase determinada de la mitosis.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los Índices Anafásico (IA) y Telofásico (IT) (Tabla 1) de los tratamientos expuestos al extracto etanólico de “guanábana” también disminuyeron con respecto a sus controles de 6, 12 y 24 horas; así mismo tanto para el índice Anafásico (IA) e. RA DO. Índice Telofásico (IT) se observaron diferencias significativas (Tablas 8 y 10 ) respectivamente; siendo el mejor tratamiento para ambas el T12 (Tablas 9 y 11), con una disminución tal que alcanzó los 4.43 % en su Índice Anafásico y tan sólo un 1.33 % en su Índice Telofásico; dicha disminución, estaría ocurriendo debido a que el. PO. ende una disminución en anafase (León, 1964)... SG. aumento del número de células en profase genera una disminución en metafase y por. DE. Además la disminución del IA, se originaría debido a que la acción oxidativa de los compuestos presentes en el líquido de ensayo estarían inhibiendo la actividad. TE CA. catalítica de las cohesinas, las cuales a su vez se encargan de llevar a cabo el proceso de segregación de cromátidas hermanas; no permitiendo entonces, que las células transiten normalmente hacia anafase y consecuentemente hacia telofase; cabe mencionar que el bloqueo del inicio de algunas fases del ciclo celular, puede constituir una alternativa de. LI O. terapia neoplásica mediante productos naturales, siendo esta investigación un punto. BI B. base para investigaciones futuras en esta especie (León, 1964).. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES. El extracto etanólico de Annona muricata “guanábana”, a la concentración de 100 µg/mL y 24 horas de exposición ocasiona una disminución del Índice Mitótico; alcanzando valores de 7.52 %; un aumento. del Índice Profásico de 87.93 % en. RA DO. meristemos radiculares de Allium cepa var. roja arequipeña.. Igualmente el extracto etanólico de Annona muricata “guanábana”, a 100 µg/mL y a 24 horas de exposición produce una disminución del Índice Metafásico en 5.98%, del Anafásico en 4.43% y Telofásico del 1.33%, en meristemos radiculares de Allium. cepa. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. var. roja arequipeña con respecto al resto de tratamientos.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. PROPUESTA El descubrimiento tanto de fármacos de origen biológico (vegetales y animales), como los resultantes de la investigación química (descubrimiento, simulación y síntesis de muchos compuestos químicos) determinó el desarrollo y progreso de la medicina occidental, actualmente extendida en todo el mundo, con resultados muchas veces. RA DO. sorprendentes y rápidos en la cura y/o alivio de las diferentes enfermedades que atacan al hombre. Sin embargo este desarrollo de la medicina, hoy en día, es también motivo de múltiples preocupaciones debido a que muchas veces estos fármacos a la par de curar también ocasionan daños colaterales al organismo; daños que vienen siendo evaluados e. SG. investigados actualmente.. Frente a esta realidad el desarrollo y progreso de la medicina tradicional y. PO. especialmente la basada en las plantas, fue un tanto relegada al uso exclusivo de las poblaciones rurales y suburbanas donde la medicina occidental no llegó o llegó. DE. esporádicamente. Por tanto para este tipo de comunidades la fitoterapia se constituyó en la única alternativa de cura y/o alivio de sus enfermedades.. TE CA. Igualmente la práctica de la medicina tradicional y de la fitoterapia en particular, actualmente está siendo usada por más del 80% de la población mundial, sin que muchos de sus conocimientos, métodos y prácticas hayan sido validados aún por la. LI O. investigación científica.. Actualmente asistimos afortunadamente a una revalorización de la medicina. tradicional y el uso de las plantas medicinales específicamente en el mundo, debido a. BI B. que las investigaciones cada vez más frecuentes están determinando que el uso de las plantas medicinales sigue constituyéndose en verdaderas alternativas para la cura de las más diversas enfermedades que se conocen.. En tal sentido están cobrando gran interés las plantas medicinales con propiedades para detener enfermedades de las consideradas más graves para el hombre, como es el caso de los más variados tipos de cáncer, enfermedades cardiovasculares, diabetes y de las que aquejan de manera muy particular a diferentes órganos de nuestro. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. organismo (es muy conocido el uso de plantas medicinales indicadas para el corazón, hígado, riñones, cerebro, pulmones, etc.). Ahora bien las plantas medicinales con propiedades para detener o disminuir las diferentes fases del ciclo celular y por tanto el crecimiento acelerado de células cancerígenas están alcanzando gran interés por parte de los investigadores. Tal es el. RA DO. caso de las especies del género Annona representadas en el Perú por 19 especies de las cuales 4 son endémicas, y a las cuales se les atribuye efectos para disminuir el Índice Mitótico en sus diferentes fases y por tanto palear los efectos oncogénicos que sufren muchas personas. En este sentido es muy conocido el uso de la Annona muricata. SG. “guanábana” que ha sido investigada y que esta investigación ha determinado que disminuye el Índice Mitótico alcanzando un valor de 7,52%, un aumento del Índice Profásico de 87,93% en meristemos radicales de cebolla y a su vez se ha demostrado. PO. que el extracto etanolito a concentraciones de 100 µg./ml. Y a 24 horas de exposición disminuyen el Índice Metafásico en 5,98% del Anafásico en 4,43% y del Telofásico en. DE. 1,33% en meristemos radicales de cebolla.. Estos resultados son muy alentadores puesto que determinan que el uso de esta. TE CA. especie puede paliar los efectos de algunos tipos de cáncer.. Por ello nos permitimos proponer que las instituciones comprometidas con la salud deben apoyar y financiar investigaciones cada vez más orientadas a las plantas. LI O. medicinales, puesto que se está demostrando la efectividad que tienen muchas de ellas y en ocasiones con mejores resultados que los alcanzados por la medicina occidental.. BI B. Muy bien se haría en iniciar una línea de investigación de las 19 especies del. género Annona y particularmente de las 4 especies de Annona que son endémicas para el Perú: Annona asplundiana, A. dolychophylla, A. iquitensis y A. deminuta, en el sentido de que cualquier descubrimiento de propiedades medicamentosas de sus metabolitos secundarios se constituirían en un verdadero aporte del Perú a la medicina mundial con la consiguiente ganancia de divisas que implicaría su patente.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En forma inmediata los resultados de esta investigación podrían servir para recomendar que el uso de esta especie pueda formar parte del tratamiento de. BI B. LI O. TE CA. DE. PO. SG. RA DO. enfermedades oncogénicas como complemento a la medicina de uso actual.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Abbo, E., Olurin, T., Odeyemi, G. (2006). Studies on the storage stability of soursop (Annona muricata L.) juice. Afr J Biotechnol. 5: 108 - 112.. RA DO. Álvarez, P. (2007). Decisiones en reacciones adversas a medicamentos, intoxicaciones y respuestas inesperadas de productos naturales como problemas de salud pública. Rev. SG. Peru Med Exp Salud Pública. 24: 405 - 426.. Arber, A. (1970) Herbals, Their Origin and Evolution: A Chapter in the History of. PO. Botany, 1470-1670. 1953. Cambridge University Press, London. Hafner Press. New. DE. York.. Badrie, N., Schauss, A. (2010). Soursop (Annona muricata L.): composition, nutritional. TE CA. value, medicinal uses, and toxicology. pp 621 - 643.. Baskar, R., Rajeswari, V., Sathish-Kumar, T. (2007). In vitro antioxidant studies in. LI O. leaves of Annona species. Indian J Exp Biol. 45: 480 - 485.. BI B. Basto, R., Gomes, R., Karess. (2000). Rough Deal and Zw10 are required for the metaphase checkpoint in Drosophila. Nature Cell Biology. 2: 939-943.. Bermúdez, A., Oliveira, M., Velázquez, D. (2005). La Investigación Etnobotánica Sobre Plantas Medicinales: Una Revisión de sus Objetivos y Enfoques Actuales. Rev Cubana Farmacia; 30(8): 453-459.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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