Efecto del sobrenadante del cultivo de Bifidobacterium ani'znalis subsp Lactis sobre la supervivencia del Salmonella typhi
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(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO. IC AS. MICROBIÓLOGO.. Dr. ORLANDO VELÁSQUEZ BENÍTES. LO. G. Rector. O. Dra. VILMA MÉNDEZ GIL. CI A. S. BI. Vicerrectora Académica. Dr. SANTIAGO UCEDA DUCLOS. CI. EN. Secretario General. DE. Dr. JOSÉ MOSTACERO LEÓN. Dr. WILLIAM ZELADA ESTRAVER Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas. BI. BL. IO TE. CA. Decano de la Facultad De Ciencias Biológicas. Dra. BERTHA SORIANO BERNILLA Directora de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y Parasitología. ¡¡. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N.UEMBROSDELJURADO. ?'. IC AS. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. BI. O. LO. G. PRESIDENTE. S. 7. CI A. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz. VOCAL. BI. BL. IO TE. CA. DE. CI. EN. SECRETARIO. ¡¡¡. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR. El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la presente tesis titulada: Efecto del sobrenadante del cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis sobre la. IC AS. supervivencia de Salmonella typhi, declara que ésta ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido por la facultad de Ciencias Biológicas, estando en conformidad. LO. G. con su correspondiente proyecto y con las orientaciones brindadas al tesista. En cuanto. BI O. al informe éste ha sido revisado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. AS. Por lo tanto, autorizo al Bachiller JONATAN CRISTHIAN ABAD CASTILLO,. CI E. NC I. continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. ~. 7. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz ASESOR. BI B. LI. O. TE CA. DE. Abril de 2014. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros de jurado dictaminador, declaran que la. IC AS. presente tesis, ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. BI. .... O. LO. G. aprobado por UNAMIDAD.. S. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. CI. EN. CI A. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL. IO TE. CA. DE. 7 Dr. Luis Alberto Llenque Díaz. Ms. C. Aníbal Quintana Díaz. VOCAL. V. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A mi Dios,. AS. por aclarar mis ideas y estar en. IC. cada paso que doy cada día,. CI E. NC. IA. S. BI O. LO. G. fortaleciendo mis ideales.. A mis padres: José y María, Por el apoyo incondicional que me dieron y por siempre. TE. CA. DE. estar a mi lado.. IO. A mis amigos. BL. Por brindarme su apoyo en el. BI. desarrollo de este proyecto.. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. A mi Dios ya que me anima cada día a seguir confiando en su poder y gracias a. IC AS. Él puedo conseguir las metas que me trace en este mundo.. A mis padres, que día a día me dieron fortaleza, amor, comprensión y apoyo,. G. porque estuvieron siempre a mi lado y me enseñaron que no debo rendirme ante los. BI O. LO. tropiezos o equivocaciones y que puedo dar lo mejor.. A mi amigo, Dr. Luis Alberto Llenque Díaz, por su orientación, apoyo y consejo. NC I. AS. durante la realización de este proyecto.. A mis amigos, quienes me apoyaron y formamos una amistad muy bonita que. BI B. LI. O. TE CA. DE. CI E. durará para siempre, estuvieron conmigo en los buenos y malos momentos.. vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. Señores Miembros del jurado Examinador:. AS. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el reglamento de Grados. IC. y Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la. G. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra. LO. consideración y criterio el presente informe de la tesis: "Efecto del sobrenadante del. BI O. cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis sobre la supervivencia de. Trujillo, Abril del 2014. CA. DE. CI E. NC. IA. S. Salmonella typhi", con el cual pretendo obtener el título de Biólogo-Microbiólogo.. BI. BL. IO. TE. Br. J Jatan Cristhian Abad Castillo. viii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE Pág ¡¡. MIEMBROS DEL JURADO. ¡¡¡. DEL ASESOR. iv. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DETRUllLLO. IC. APROBACIÓN. G. DEDICATORIA. LO. AGRADECIMIENTOS. BI O. PRESENTACIÓN. S. INDICE. IA. RESUMEN. NC. ABSTRACT. CI E. INTRODUCCIÓN. vi vii viii ix X. xi 1 6. DE. OBJETIVOS. V. 6. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. 7. MATERIAL Y MÉTODOS. 8. 11. DISCUSIÓN. 12. CONCLUSIONES. 16. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 17. ANEXOS. 21. BI. BL. RESULTADOS. IO. TE. CA. OBJETIVO GENERAL. ix. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. En el presente trabajo se evaluó el efecto bactericida del sobrenadante del cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis sobre la supervivencia de Salmonella. AS. typhi, para lo cual se prepararon tres sistemas de evaluación, dos de ellos sirvieron de. control constituidos por caldo MRS pH 7 y caldo MRS pH 4, y un sistema problema. IC. constituido por el sobrenadante obtenido de B. animalis subsp. Lactis. Se colocó a cada. LO. G. sistema 1 mL del inóculo de 3 x 108 células/mL de S. typhi y se inc~bó a 37°C durante. BI O. 24 horas. A partir de la O hora y cada tres horas hasta completar las 24 horas se monitoreo la supervivencia de S. typhi, por el método de recuento en placa, mediante la. S. siembra por incorporación. Los resultados evidencian una disminución de las unidades. IA. formadoras de colonias (UFC/mL) de S. typhi hasta las 24 h de evaluación en. NC. condiciones de refrigeración. Entonces se concluye que el sobrenadante de B. animalis. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI E. subsp. Lactis sí afecta Út supervivencia de S. typhi en condiciones de refrigeración.. X. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. In this study we evaluated the bactericida! effect of the culture supematant of Bifidobacterium animalis subsp Lactis on the survival of Salmonella typhi.. Three. IC AS. systems for evaluation were prepared- two of which served as a control consisting of MRS broth pH 7 and MRS broth pH 4, and a problem system consisting of the. G. supematant obtained from B. animalis subsp. Lactis. lmL of the inoculum of 3 x 108. LO. cells 1 mL of S. typhi was added to each of the three systems, which were then incubated. BI O. at 37 oC for 24 hours. Starting at zero hours and then every three hours thereafter for a total of 24 hours, the survival of S. typhi was monitored by the plate count method, by. AS. measuring the planting and incorporating of the cells. The results show a decrease in. NC I. colony forming units (CFU 1 mL) of S. typhi after 24 hours of assessment under refrigeration. So it is concluded that B. animalis subsp Lactis does affect the survival of. BI B. LI. O. TE CA. DE. CI E. S. typhi in refrigerated conditions.. xi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. La palabra probiótico fue utilizada por primera vez por Lilley e Stillwdl en 1965 y hace referencia a una sustancia secretada por un microorganismo que estimulaba el crecimiento de otro. Más tarde en 1989, Fuller modificó el concepto por suplemento. AS. alimentario microbiano vivo que afecta benéficamente al hospedero por mejorar ·su. IC. balance microbiano intestinal. El balance microbiano y responsable del efecto protector. G. estudiado en muchos grupos del mundo entero es denominado: antagonismo bacteriano,. LO. interferencia bacteriana, efecto barrera, resistencia a la colonización o competencia. BI O. exclusiva. (I). S. Los microorganismos probióticos aparecen en el tracto gastrointestinal del hombre. NC. IA. desde etapas tempranas de la vida, pero al pasar el tiempo y debido a factores como la edad, la dieta, el ambiente, el estrés y la medicación descienden a cantidades que. CI E. pueden llegar a ser muy pequeñas, lo cual puede favorecer el crecimiento de bacterias. DE. patógenas. (2) Cuando se logra que los probióticos se conserven en número o vuelvan a alcanzar niveles importantes en el intestino, el huésped puede experimentar una serie de. CA. beneficios como el mejoramiento de la tolerancia a lactosa, acción contra bacterias. TE. patógenas y el mejoramiento de la respuesta inmune. (3) Gracias a su gran capacidad. IO. antagónica, de los probióticos, contra otros microorganismos, se usa con un marcado. BL. interés al ser utilizado como bioconservante natural. Es por eso, qué pueden incluirse en la preparación de una amplia gama de productos, incluyendo alimentos, medicamentos. BI. y suplementos dietéticos. (4,5). Con la denominación de "bacterias acido lácticas" se generaliza a un grupo de bacterias que fermentan azucares como glucosa y lactosa para producir ácido láctico.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dentro de este grupo se reconoce la existencia de microorganismos aerobios, anaerobios y anaerobios facultativos. (6,7) Las bacterias acido lácticas están presentes en la alimentación del hombre desde hace mucho tiempo y es posible encontrarlas en muchos productos de leche fermentada como yogurt, también se encuentran en quesos frescos, en diferentes carnes y sus productos y en algunas hortalizas.. (S). La actividad. AS. antimicrobiana de las bacterias acido lácticas ha sido atribuida a la acumulación de los. IC. productos finales de los procesos de fermentación, como ácido láctico, dióxido de. LO. G. carbono, peróxido de hidrogeno, o bacteriocinas. (6). Los ácidos orgánicos mayoritarios (láctico y acético) generados como. BI O. consecuencia del metabolismo fermentativo de las hexosas. se han considerado los. S. principales responsables del efecto inhibidor de cepas del género Bifidobacterium frente. IA. a patógenos gastrointestinales, como Helicobacter pylori y S. entérica. Los ácidos. NC. grasos de cadena corta (acético, propiónico y butírico) generados a partir del. CI E. metabolismo de polisacáridos no digeribles en la parte alta del tracto gastrointestinal (prebióticos) por este grupo bacteriano también contribuyen a la reducción del pH en el 11 12. < , ). CA. DE. colon, inhibiendo así su colonización por bacterias patógenas.. Las bacterias acido tácticas comprenden un número elevado de Gram positivas,. TE. cuya característica común es la producción de ácido lácticos a partir de los. IO. carbohidratos. El grupo de bacterias acido Iácticas, es el grupo de bacterias más. BL. abundante y difundido en la naturaleza, debido a la capacidad que poseen de crecer en. BI. una variedad de sustratos. Dentro de las bacterias lácticas, el grupo Bifidobacterium, es. el más importante y heterogéneo, sobrevive en pequeñas concentraciones de oxígeno,. son tolerantes a la presencia de carbono, nitritos, humo y concentraciones de sal relativamente altas y toleran valores de pH bajos. 04) Se han demostrado que las. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. bacterias acido lácticas provocan la inhibición de microorganismos, con esto contribuyen a controlar organismos que son potencialmente patógenos, como algunas especies de salmonella, staphylococcus y Iisteria, que pueden dañar la salud. (15-17). El género Bifidobacterium constituye uno de los más recientes grupos de bacterias. AS. reconocidas como acido lácticas. Son semejantes a los lactobacilos en sus propiedades. IC. culturales, exigencias nutritivas, en la coloración Gram. Según el Manual Bergey (1994). LO. G. estas bacterias son inmóviles, gran positivas, no esporuladas, tienen forma de bastones curvos, caracterizado por una fuerte bifurcación en forma de Y. Además, las. BI O. bifidobacterias fermentan azúcares con la producción principalmente de ácido acético y. S. ácido láctico. No producen gas carbónico. Crecen a una temperatura óptima de 37-41°C. IA. y generalmente no crecen a 45°C. El pH inicial óptimo es de 6 a 7 y, por deb~o de 4.5 y. CI E. NC. ·generalmente por encima de 8.5 no hay crecimiento. (2,18). Las bacterias del género Bifidobacterium bajan el pH intestinal mediante la. DE. producción de ácidos con lo cual impide el desarrollo de bacterias patógenas. (1 O). CA. Ciertas bifidobacterias son capaces de ejercer in vitro efectos antagónicos ·frente a importantes patógenos gastrointestinales pertenecientes a diversos géneros entre ellos,. TE. Salmonella sp. (11).S. typhi es una bacteria inmóvil, gram negativa, especifica de. IO. huésped, sin capsula ni esporulada. (11) El crecimiento de BAL en medios aerobios. BL. · conduce a la formación de varios metabolitos del oxígeno como: peróxido de hidrógeno, aniones superóxido y radicales libres, que poseen un efecto bacteriostático y bactericida. BI. ~. frente a la flora láctica y no láctica. El peróxido de hidrógeno (H202) funciona como un. oxidante produciendo radicales libres que atacan los componentes celulares esenciales, lípidos, proteínas y DNA. La acumulación del H202 en los medios de cultivo, se de_bE,&. ,,,~;..... /;~~~~~:~_c:ios:;(~;;~\ · "iJ...:~hJ n~ • .;:--,.. "/cro '\\'· !. ~~ ~ ~. ,z( 1' 1. 3. '\. /. ~~í( e:.·/ \,\ \'1. i. ·-·. -'!... 1;. '\"~'¡:¡, \\\i. ·, ..,, ·:.. l·. ... •. 1. ~~- ·"'l.. '\~\<) · ~ cfj;'Y ·\·1?..V'(~::~c\o ..;§ ¡ \~ '('_,._~~~"';}'. .~~~~. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma .... _______....,...licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. que las BAL, en general no poseen catalasa. El peróxido de hidrógeno ha sido estudiado más ampliamente en leche cruda, donde se genera el sistema antimicrobiano "lactoperoxidasa", sin embargo a pesar de su potencial en la preservación, es reconocida la poca viabilidad de este compuesto en los alimentos, ya que puede tener efectos perjudiciales en su calidad organoléptica causando rancidez de las grasas y reacciones. IC. AS. de decoloración y enverdecimiento. (14,21). LO. G. Los ácidos orgánicos mayoritarios (láctico y acético) generados como consecuencia del metabolismo fermentativo de las hexosas se han considerado los. BI O. principales responsables del efecto inhibidor de cepas del género Bifidobacterium frente. S. a patógenos gastrointestinales, como Helicobacter pylori y S. entérica. Los ácidos. IA. grasos de cadena corta (acético, propiónico y butírico) generados a partir del. EN C. metabolismo de polisacáridos no digeribles en la parte alta del tracto gastrointestinal (prebióticos) por este grupo bacteriano también contribuyen a la reducción del pH en el. DE. CI. colon, inhibiendo así su colonización por bacterias patógenas. (21). CA. En los últimos años se han identificado y caracterizado diversos péptidos antimicrobianos denominados bacteriocinas los cuales en su mayoría son producidos. TE. por bacterias ácidolácticas. Los beneficios de las bacteriocinas, en salud humana y. IO. animal, son muy bien documentados. Presentan varias características y ventajas que las. BL. hacen particularmente atractivas: un espectro de inhibición específico, un sistema de. BI. autorregulación, estabilidad y procesos de producción costo - efectivo y el consumo en forma segura por los humanos por muchos siglos. (22). 4. ------···-UNfi/ER~DAD NACIO~.AL DE TRUJIU.O. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia Bibllotec~ Commons de Ciencias Bic!ogieas 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El término "bacteriocina" fue propuesto por primera vez por Jacob y colaboradores en 1953 para referirse a las sustancias proteicas con actividad antimicrobiana de origen bacteriano. Las bacteriocinas de bacterias ácido lácticas son un grupo heterogéneo de sustancias antimicrobianas de origen peptídico, la mayoría no han . sido bien caracterizadas aún. Por tanto, no se puede establecer propiedades en común,. AS. sin embargo las propiedades que principalmente se tienen en cuenta son las siguientes:. IC. naturaleza, tamaño molecular, composición aminoacídica y estructura química,. LO. G. termorresistencia y estabilidad frente a pH. Aunque por definición las bacteriocinas son sustancias de naturaleza proteica, se han descrito algunas que presentan en su molécula. S. BI O. componentes glucocídicos y/o lipídicos, además de una fracción proteica. (21,23). IA. Las bacteriocinas producidas por las bacterias ácido lácticas se caracterizan por. EN C. ser generalmente estables a valores de pH ácidos o próximos a la neutralidad, lo que indica laadaptación de estas sustancias a condiciones ambientales de los sustratos en los. CI. que se desarrollan las bacterias productoras. Debido a su naturaleza peptídica, las. DE. bacteriocinas pueden ser degradadas por enzimas digestivas, resultando inocuas para el. CA. hombre y su microbiota intestinal. Además, sus propiedades .fisicoquímicas les dan resistencia a tratamientos térmicos y debido a su pequeño tamaño pueden difundir con. IO. TE. relativa facilidad en los alimentos. (23). BL. El modo de acción de las bacteriocinas de bacterias lácticas es la formación de. BI. poros en hi membrana Citoplasmática de las células sensibles. Este proceso induce la disipación de la fuerza motriz protónica. La formación de poros y la eliminación de la fuerza motriz protónica (fuente de energía celular) promueven la salida rápida de metabolitos de pequeño tamaño, como aminoácidos y nucleótidos, interrumpiendo los. S. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. procesos de biosíntesis de la célula. Además de la formación de poros, para ciertas bacteriocinas se ha descrito la lisis celular como modo de acción secundario. (15,25). WSTIFICACION. AS. Existen publicaciones científicas de investigaciones locales y nacionales sobre la. IC. capacidad bactericida de las bacterias probióticas sobre agentes patógenos presentes en. LO. G. alimentos, pero no sobre el sobrenadante producto del crecimiento de estas bacterias. Entonces evaluar el sobrenadante obtenido durante las incubaciones del cultivo de. BI O. Bifidobacterium animalis subsp Lactis podría resultar ser efectivo y ser utilizado como. S. conservante de los alimentos que son almacenados en condiciones de refrigeración,. IA. como una medida preventiva para controlar el crecimiento de microorganismos. EN C. contaminantes y evitar la propagación de patógenos. En tal sentido, se pretende demostrar el efecto del sobrenadante del cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. DE. CI. Lactis sobre. la supervivencia de Salmonella typhi, en condiciones de refrigeración.. CA. OBJETIVOS. IO. TE. OBJETIVO GENERAL. BL. l. Determinar el efecto del sobrenadante del cultivo de Bifidobacterium animalis. BI. subsp. Lactis sobre la supervivencia de Salmonella typhi, en condiciones de. refrigeración.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. l. Determinar estadísticamente si hay o no diferencia significativa entre el efecto del sobrenadante de B. animalis subsp. Lactis con el medio MRS a pH 7.0. AS. respecto a la supervivencia de Salmonella typhi en condiciones de refrigeración.. IC. 2. Determinar estadísticamente si hay o no diferencia significativa entre el efecto. G. del sobrenadante de B. animalis subsp. Lactis con el medio MRS a pH 4. BI. BL. IO. TE CA. DE. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. respecto a la supervivencia de Salmonella typhi en condiciones de refrigeración.. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS. Material de estudio Cultivo puro de Salmonella typhi, que será proporcionado por el laboratorio de Microbiología de Alimentos, Departamento de Microbiología y Parasitología,. Cultivo liofilizado de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis, comercializado. IC. -. AS. Universidad Nacional de Trujillo.. Sobrenadante obtenido de B. animalis subsp. Lactis en medio Man Rogosa. LO. -. G. por la empresa Sacco, S.A Italia.. BI O. Sharpe (MRS).. AS. Procedimiento:. CI. A. Reactivación. EN. Se pesó 0.1 g del cultivo liofilizado de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis y. CI. · se colocó en 4 ml de medio liquido MRS; luego se incubó en una jarra con tapa. DE. hermética, en condiciones de microaerobiosis a 37°C durante 72 h.. TE C. A. B. Obtención de biomasa de Bifidohacterium animalis subsp. Lactis.. Posteriormente del paso anterior, el cultivo fue cosechado y colocado en un. IO. matraz conteniendo 28 ml de caldo MRS y se incubó en condiciones de microaerobiosis. BL. a 37°C durante 72 h. Finalmente, se cosechó toda la biomasa mediante centrifugación a. BI. 4000 rpm durante 15 min.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..
(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. C. Obtención del sobrenadante del cultivo de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis. La biornasa obtenida se inoculó en 100 rnL de caldo MRS, y se incubó por 15 h a 37°C en rnicroaerobiosis. Terminado el periodo de incubación, se centrifugó el caldo a 4000 rprn durante 15 rnin. Luego se filtró el sobrenadante por el método de filtración de. AS. membrana empleando una membrana filtrante bacteriológica (0.45 urn de diámetro).. IC. D. Reactivación y estandarización delinóculo de Salmonella typhi.. LO. G. A partir del cultivo puro, conservado en congelación, se sacó una azada y se sembró en 3 rnL de caldo nutritivo, y se incubó a 37°C durante 24 h, en condiciones de. BI O. aerobiosis. Luego se preparó una suspensión bacteriana en solución salina fisiológica. AS. estéril (SSFE) a una turbidez equivalente al tubo N° 1 del nefelórnetro de Maé Farland. CI. (3xl08 células/rnL), que fue considerado corno inóculo.. EN. E. Evaluación del sobrenadante del cultivo de Bifidobacterium animalis subsp.. CI. Lactis sobre la supervivencia de Salmonella typhi.. DE. Se preparó tres sistemas de evaluación:. TE CA. Sistema 1: 9 rnL Caldo MRS a pH 7 Sistema 2: 9 rnL Caldo MRS a pH 4. IO. Sistema 3: 9 rnL del sobrenadante obtenido de B. anirnalis subsp. Lactis.. BL. Luego se agregó 1 rnL de inóculo de Salmonella typhi, a cada sistema y se incubó a. BI. condiciones de refrigeración durante 24 h.. A la O h, se extrajo 0.5 rnL del sistema de evaluación, se hicieron diluciones en SSFE,. y se sembró 1 rnL en placas, mediante la técnica de incorporación en agar nutritivo; luego, se incubó a 37°C durante.24 h. Se trabajó con las tres últimas diluciones.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Cada sistema se evaluó cada tres horas hasta completar las 24 h. Finalmente, se realizó el recuento de colonias y se expresó en UFC/mL.. Presentación de resultados y análisis de datos. AS. El crecimiento promedio (UFC/ml) de Salmonella typhi en placa, durante las 24. IC. h de la incubación, en cada uno de los sistemas de ensayo, se registró y se presenta en. LO. G. tablas y figuras.. BI O. Tratamiento estadístico de los resultados. S. Los datos obtenidos de los recuentos (UFC/mL) fueron sometidos a la prueba. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN C. IA. estadística análisis de varianza.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. En la figura 1, se puede observar que la supervivencia de S. typhi evaluada en el sobrenadante del cultivo de B. animalis subsp. Lactis con pH 4 disminuyó en seis. AS. logaritmos en relación al recuento inicial, al igual que en caldo MRS a pH 4, por lo que. IC. no hay diferencia significativa entre estos dos medios. Pero al evaluar la supervivencia. G. de S. typhi en caldo MRS, en esta solo disminuye dos logaritmos, por lo tanto aquí si. NC. IA. S. BI O. LO. hay diferencia significativa.. CI E. -.-MRS pH7 -MRSpH4. CA. DE. .,_L,~SOBR. o. 10. 15. 20. 25. 30. Horas. IO. TE. 5. pH 4. BI. BL. Figura 1: Curvas de supervivencia de S. typhi en caldo MRS pH 7, en caldo MRS pH 4, y en sobrenadante de cultivo de B. animalis subsp. Lactis.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. Los probióticos son microorganismos vivos con gran capacidad antagónica contra otros microorganismos, es por esto el marcado interés para ser utilizado como bioconservantes naturales, disminuyendo en parte el uso de conservantes químicos en. IC AS. alimentos. Los mecanismos de defensa de bacterias probióticas en contra de diversos tipos de microorgfinismos patógenos que atacan a individuos, aún sigue siendo un tema. G. muy complejo, lo cual ha motivado que el mundo científico se interese por conocer con. LO. mayor detalle el modo de acción de las bacterias acido lácticas y de sus metabolitos y col. cepas de B.. BI O. sobre los microorganismos patógenos. <13' 26) Según Gutiérrez. animalis son consideradas probióticas. La producción de numerosas sustancias. S. microbianas específicas como ácido láctico y bacteriocinas, entre otras les confiere su 10 13. < '. ). CI EN. CI A. capacidad bactericida; sobre diferentes cepas de bacterias gran negativas.. Los resultados obtenidos en este trabajo determinaron que los productos. DE. metabólicos de B. animalis subsp. Lactis presentaron actividad antagónica "in vitro" contra S. typhi. Es probable que esta actividad se deba a la producción de sustancias. CA. bactericidas específicas contra gram negativas, las cuales solubilizan el lipopolisacárido. TE. y destruyen la membrana citoplasmática vaciando su contenido celular, de esta manera. O. generan inhibición parcial o total de estos microorganismos.0 5) Al evaluar los productos. BL I. metabólicos de B. animalis subsp. Lactis se observa disminuciones logarítmicas. BI. significativas de la población de S. typhi en los diferentes medios evaluados. El. descenso de la población microbiana de S. typhi durante el proceso podría estar. relacionado a la acidez del medio, ya que al evaluar la disminución de la población en el sobrenadante y en el caldo MRS a pH 4 no presenta una diferencia significativa. (p > 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Durante. la. producción. de. probióticos. o alimentos. funcionales. con. bifidobacterias, la viabilidad de las bacterias se ve afectada por la acidez del medio de cultivo. (IS) El sobrenadante y el caldo MRS a pH 4 presentaron actividad de inhibición frente a S. typhi indicando que la acción inhibitoria podría ser debida a los ácidos. IC AS. orgánicos producidos por B. animalis. Los ácidos orgánicos mayoritarios generados como consecuencia del metabolismo fermentativo de las hexosas (láctico y acético) se. LO. G. han considerado los principales responsables del efecto inhibidor de cepas del genero 9 (l ). BI O. Bifidobacterium frente a patógenos gastrointestinales como Salmonella.. S. Se obtuvo una disminución en los recuentos de S. typhi inoculado en el sobrenadante el. CI A. cual contiene los productos metabólicos de B. animalis subsp. Lactis, entre ellos las bacteriocinas. Esto pone en evidencia que las bacteriocinas que estaban en el. CI EN. sobrenadante como producto de B. animalis subsp. Lactis podrían tener bajo efecto inhibitorio sobre el crecimiento de S. typhi:' Algunos autores han considerado que el. DE. espectro de inhibición de estas proteínas· es reducido, generalmente sobre. CA. microorganismos relacionados taxonómicamente, de forma que presentan actividad bactericida solamente frente a cepas sensibles.. 7. (1 ). García y col. afirman que la. TE. susceptibilidad de las bacterias gram negativas a las bacteriocinas producidas por las. IO. bacterias lácticas es mucho más limitada. La producción de bacteriocinas con un. BI BL. espectro de inhibición relativamente amplio, es propia de bacterias de origen. alimentario incluidas las de la carne y sus derivados. (l 7,27). Según trabajos previos .Reddy et al., 1984; Abdel-Bar; Harris y Rill,. 1987 se demostró que a un pH 5.5, se presenta un mejor nivel de inhibición de los productos. 13,. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. metabólicos de B. animalis, aunque a pHs de 3.5 y 4.5 también se encontró actividad bactericida lo que concuerda con el resultado, mostrado en la figura 1 de resultados, que se obtuvo del caldo MRS a pH 4 y del sobrenadante. 06) En donde no se encontró diferencia significativa entre los resultados obtenidos. Por su parte, Larrea y col. encontraron que B. animalis presenta actividad antimicrobiana frente a S. typhi,. IC. AS. utilizando la técnica de difusión en pocillos que solo obtiene resultados cualitativos.. LO. G. El análisis de los resultados, en el sobrenadante obtenido de B. animalis subsp. Lactis, señaló que las colonias de S. typhi fueron disminuyendo por la presencia de los. BI. O. diferentes componentes que se encuentran en el sobrenadante; al utilizar las pruebas de. S. ensayo se logró determinar que el sobrenadante de esta bifidobacteria tiene efecto. NC IA. bactericida contra S. typhi. Se puede observar en la Figura 1, como va disminuyendo. CI E. logarítmicamente el crecimiento de S. typhi frente a este sobrenadante.. DE. Al respecto de algunos trabajos se encontraron que la eficacia de las. CA. bacteriocinas sobre un microorganismo depende del número de microorganismos existentes a inhibir y de la concentración de la bacteriocina. Además, no siempre unas. TE. buenas condiciones de crecimiento del microorganismo significan . una buena. BI BL IO. producción de bacteriocinas; así mismo, no siempre una bacteriocina es activa in vitro.. CI?). Estas pueden haber sido las razones por las cuales no se pudo determinar la acción. de bacteriocinas en presencia de S. typhi.. El análisis estadístico de los recuentos promedios de las colonias sobrevivientes de S. typhi sembrado en caldo MRS y en el sobrenadante del cultivo de B. animalis. 14 UNIVERSIDMl NA~NAL DE TRUJIU.O. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis. 8iblicleca de Ciencias Biologleas.
(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. subsp. Laciis con pH 4; obteniéndose resultados que confirman que el sobrenadante está ejerciendo un efecto bactericida contra S. typhi y nos muestra que existe diferencia significativa al comparar los resultados de estos medios. De igual forma, el análisis estadístico hecho a los recuentos promedios de las colonias sobrevivientes de S. typhi sembrado en caldo MRS a pH 4 y en el sobrenadante del cultivo de B. animalis subsp.. IC AS. Lactis, con pH 4; obteniéndose resultados que nos muestran que no existe diferencia. LO. G. significativa al comparar los. resultados de estos medios.. Las· condiciones de microaerobiosis son necesarios para que B. animalis subsp.. BI O. Lactis pueda reactivarse ya que es una bacteria que crece en estas condiciones, por ello. Se incubó en una jarra con tapa hermética, adicionando un sobre de alkaletzer en. CI A. 7 (IS-! ). S. se adecuó un medios en el cual se pueda generar estas condiciones de microaerobiosis.. CI EN. un tubo de ensayo con agua, y se colocó una vela prendida, para así generar un medio de microaerobiosis.. DE. La conservación de los alimentos y la prevención de la ocurrencia de. CA. Enfermedades de Transmisión Alimentaria (ETA), han motivado que el mundo industrial y el científico se interesen por conocer con mayor detalle el modo de acción. TE. de las bacterias acido lácticas y de algunos de sus metabolitos sobre los. IO. microorganismos patógenos. El presente trabajo confirma la utilidad de las bacterias. BI BL. acido lácticas en el control de bacterias entéricas como S. typhi y sirve de base para continuar con otros estudios a fin de evaluar su acción frente a otros microorganismos patógenos. <20). 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. l.. El sobrenadante de B. animalis subsp. Lactis afecta la supervivencia de S. typhi. 2.. IC AS. en condiciones de refrigeración hasta por 24 h de incubación.. Existe diferencia significativa entre el efecto del sobrenadante de B. animalis. LO. G. subsp. Lactis con el medio MRS pH 7 respecto a la supervivencia de Salmonella. No existe diferencia significativa entre el efecto del sobrenadante de B. animalis. S. 3.. BI O. typhi en las condiciones de ensayo.. CI A. subsp. Lactis con el medio MRS a pH 4 respecto a la supervivencia de. BI BL. IO. TE CA. DE. CI EN. Salmonella typhi en las condiciones de ensayo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. l.. Gutierrez-Ramirez L, Gómez-Espina A, Arias-Jaramillo L, Tangarife-PatiñaB. Evaluación de la viabilidad de una capa prebiótica nativa de Lactobacillus casei. AS. en queso crema. Redalyc. 2007; 4 (2): 37-42.. Martins A, Martins F, Gomes D, Elian S, Vieira A, Teixeira M, Cara D, Nardi R,. IC. 2.. LO. G. Nicoli J. Evaluation of in vitro antagonism and of in vivo immune modulation. BI O. and protection against pathogenic experimental challenge of two probiotic strains. CI AS. of Bifidobacterium animalis var. Lactis. Arch Microbio!. 2010;192(12): 995-1003. Bustamante P, Mayorga L, Ramirez H, Martinez P, Barranco E, Azaola A.. 3.. EN. Evaluación microbiológica de compuestos con actividad prebiótioa. Rev.. DE. CI. Mexicana de Ciencias Farmaceuticas 2006. 37(002): 5-10. 4.. Cástulo 1, Del campo M, Gómez H, Alaníz de la O R. Bacterias ácido lácticas con. CA. capacidad antagónica y actividad bacteriocinogénica aisladas de quesos frescos.. Amores R, Calvo A, Maestre J.R, Martínez-Hernández D. Probióticos. Rev.Esp.. BL. 5.. IO. TE. Redalyc.2008; 6(5): 1-17.. BI. Quimioterapia.2004; 17(2): 131-139.. 6.. González Martínez B, Jiménez Salas Z, Heredia Rojas N, Villarreal Treviño L, García Díaz G, Gómez Treviño M. Efecto de microorganismos prebióticos sobre. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. el crecimiento de Salmonella enteriditis var typhimurium.Redalyc.2006; 9(4):365374 ... Ferreira Barbosa F, Marcal da Silva A, Duarte R, Nicoli J. Perfil de susceptibilidad. de. antimicrobiana. de. Bifidobacterium. Morales Ll. Sobrevivencia de microorganismos. G. M~. Corrales A, Henderson. e. LO. 8.. Bb12. IC. Bifidobacterium longum Bb46. Redalyc.2001; 1(2):1519-5228.. bifidum. AS. 7.. probióticos Lactobacillus acidophilus y bifidobacterium lactis en helado batido.. Veiga P, Ann C, Beal C, Michaud M, Delaney M, Dubois A, et al.. CI AS. 9.. BI O. Redalyc.2007;34(2): 2-5. Bifidobacterium animalis subs.. Lactis fermented. milk product reduces. inflammation by alteringa niche for editogenic microbes.PNAS.2010;107(42):. CI. Organización Mundial de Gastroenterología. Guías Prácticas: Prebióticos y. DE. 10.. EN. 18132-18137.. 11.. TE. CA. prebióticos 2008. España. Organización Mundial de Gastroenterología. 2008.. Castellanos A, Murguia M. evaluación de un probiótico para el control de. BL. IO. salmonella en pollos de engorda en Yucatán. Redalyc.1999;30(3): 243-248. BI. 12.. Esterso E, Paiba J, Mesquita A. Organic acids and/or compound with defined Microorganisms to control salmonella enteric Serovar enteritidis experimental infection in Chickens. Revista Brasileira de Ciencia Avícola. 2007; 9 (1 ): 69-73. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesi.
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(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 19.. Sanz Y, Collado M, Da1mau J. Contribución de la microbiota intestinal y del género «Bifidobacterium» a los mecanismos de defensa del huésped· frente a patógenos gastrointestinales. Instituto de Agroquímica y Tecnología de los Alimentos (CSIC). Unidad de Nutrición y Metabolopatías. Hospital Infantil «La. Larrea H, Flores M, Huapaya J. evaluación de la actividad antimicrobiana de. G. 20.. IC AS. Fe». Valencia. Acta Pediatra Esp. 2006; 64: 74-78. Lee J, O'Sullivan D. Genomic lnsights into Bifidobacteria. Microbiology And. Coventry M, Gordon J, Alexander M, Hickey M, Wan J.A food-grade process for. EN. 22.. CI A. S. Molecular Biology. 2010; 74(3): 378-416. BI. 21.. O. LO. bacterias acido lácticas. Parte l. Redalyc. 2007. CI. isolation and partial purification of Bacteriocins of lactic acid bacteria that uses. DE. Diatomite calcium silicate. Applied and Environmental Microbiology. 1996;. 23.. TE CA. 62(5): 1764-1769. De Vuyst L. Leroy F. Bacteriocins from Lactic Acid Bacteria: Production,. O. Purification, and Food Applications. J Mol Microbio! Biotechnol 2007;13:194-. BI B. LI. 199. 24.. Monroy-Dosta M, Castro-Barrera T, Femández-Perrino F, Mayorga-Reyes L.. Bacteriocinas producidas por bacterias prebióticas. 2009. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
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(33) BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI B. LI. O. TE CA. DE. CI. EN. CI A. S. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla l. Recuento promedio de las colonias de S. typhi para realizar la curva de. Caldo MRS pH 4. 3,2E+07. CaldoMRS H7 3,7E+08. 3. 1,7E+07. 2,6E+08. 1,9E+07. 6. 3,1E+06. 1,3E+08. 1,6E+07. 9. 1,1E+06. l,IE+08. IC. supervivencia.. 12. 3,1E+05. 7,2E+07. 15. 3,6E+04. 5,8E+07. 18. 1,4E+04. 1,3E+07. 2,8E+04. 21. 6,0E+02. 5,0E+06. 4,3E+03. 24. l,OE+02. AS. G. 5,7E+05. LO. O. 2,4E+06. 5,2E+07. 4,0E+06. BI. S. o. IA. Sobrenadan te. 3,8E+05. 2,0E+02. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN C. Horas. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.
(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2. Análisis de varianza de los recuentos promedios de las colonias de S. typhi en caldo MRS a pH 7 y sobrenadante de cultivo de B. animalis subsp. lactis.. Error Experimental. Total. GL. 2. 24. 26. se. 6,7E+16. 1,28405E+17. CM. 3,3E+16. 5,4E+15. F. 6,25. p. 0,00655. IC AS. Sistemas. AS. BI O. LO. G. 2,0E+17. Tabla 3. Análisis de varianza de los recuento promedios de las colonias de S. typhi en. CI. Sistemas. EN. CI. caldo MRS a pH 4 y sobrenadante de cultivo de B. anima/is subsp. lactis. Error Experimental. Total. 16. 17 3,4E+15. 1. se. 1,4E+13. 3,3E+15. CM. 1,4E+13. 2,1E+14. CA 0,07. 0,80197. BI. BL. IO. TE. F p. DE. GL. 24 UNIVER~DAO NACIONAL DE TRUJIU.O. B!hlloteca do Ciencias Biologicas. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tes.
(36) BI O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Figura 2: Reactivación del cultivo de B. animalis subsp. Lactis en condiciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. de microaerobiosis.. Figura 3: Cultivo puro de Salmonella tiphy.. 25Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tes.
(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. .. '.. ·.--. ,,. . \l·. ~. •. :''. '~. .,. ·-. IC AS. ¡' '~ :-. ¡-. ;,. L.. 1 .•. LO. G. ...1·:;:.·... Salmonella tiphy a las. BI O. Figura 4: Recuento en placa de las unidades formadoras de colonia de O horas sembrado en Sobrenadante de. i ,:. i ':. •:. DE. CI. EN. CI. AS. Bifidobacterium animalis subsp. Lactis, a las 24 horas de incubación.. CA. ._,. /. ,,.. ' --¡--. 1 !~. !1. .·.. ·.. !Jt·· '. BI. BL. IO. TE. :·. .,/. Figura 5: Recuento en placa de las unidades formadoras de colonia de Salmonella tiphy a las 9 horas sembrado en Sobrenadante de Bifidobacterium animalis subsp. Lactis, a las 24 horas de incubación.. 26Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta te.
(38) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI AS. BI O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta te.
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