Efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de la semilla de Persea americana frente a Sthaphylococcus epidermidis

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. IA. Y. TESIS I. O. Q. UI M. IC A. ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. RM. AC. “Efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de la semilla de Persea. DE. FA. americana frente a Sthaphylococcus epidermidis.”. CA. Autores: MARCOS RODRIGUEZ, Jesi Fiorela. IO. TE. MEREGILDO TORIBIO, Suli María. BI BL. Asesora: Dra. AYALA JARA, Carmen Isolina TRUJILLO-PERÚ 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIAS. A Dios. Q. UI M. IC A. Por ser mi fuente de luz y fortaleza; por derramar salud, bienestar y sabiduría en mi vida; por haber puesto en mi camino a aquellas personas que son mi soporte y compañía en todo momento. Y sobre todo por ser mi padre celestial que siempre cuida y guía mis pasos.. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. DE: JESI. A mis padres Luis y Rosmery A mi madre por sr mi modelo a seguir y ser quien día a día me apoya brindándome consejos, orientación y fuerza para afrontar los retos que se me han presentado a lo largo de la vida.. IO. TE. CA. Y a mi padre aun estando en el cielo, siempre ha estado en mi corazón guiándome e impulsándome a seguir a delante.. BI BL. DE: JESI. A mis Hermanas Alexandra y Akemy Por alegrarse con cada uno de mis triunfos y consolarme en mis tristezas, y porque siempre estuvieron conmigo cuando las necesitaba, gracias. .. DE: JESI. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mis padres, por su inmenso amor, comprensión y apoyo constante por ser tan maravillosos siempre y ser un ejemplo constante en mi vida. Porque sin ellos no estuviera en donde estoy, cumpliendo mis metas. Y sobre todo por darme la vida. Los Amo.. Q. UI M. IC A. DE: SULI. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. A mí querido hermano, por ser parte de mi vida, los consejos, sus orientaciones, su apoyo a diario, por su cariño y mucha paciencia por ser el impulso en mi carrera con su ejemplo, esfuerzo y perseverancia constante. Te adoro.. IO. TE. CA. DE. DE: SULI. BI BL. A Nino desde que decidimos emprender un camino juntos, lleno de alegrías, de tristezas, de aprendizajes, y sueños por cumplir. A tu lado soy felíz me enseñaste a amar, a luchar por lo que uno tanto quiere y anhela y también a ser agradecida por lo que uno recibe cada día. DE: SULI. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. UI M. Dra. Carmen Isolina Ayala Jara. IC A. A nuestra asesora y amiga:. O. Q. Por brindarnos su tiempo, apoyo incondicional, paciencia y. Y. BI. por guiarnos en el desarrollo de este trabajo de Tesis. AC. IA. y lograr conjuntamente la culminación del mismo,. FA. RM. además por promover el crecimiento de nuestra carrera. BI BL. IO. TE. CA. DE. profesional en el área de la investigación científica.. LAS AUTORAS. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. En cumplimiento de las normas dispuestas en el reglamento interno de la Facultad de. IC A. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo - La Libertad,. UI M. sometemos a vuestro elevado criterio el presente trabajo de investigación.. Q. “Efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de la semilla de Persea. Y. BI. O. americana frente a Sthaphylococcus epidermidis.”. IA. Se propicia esta oportunidad para manifestar el más profundo agradecimiento a nuestra. RM. AC. Alma Mater y a toda su plana docente, por su meritoria labor de educadores y por la. FA. formación a través de sus enseñanzas.. DE. De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboración de los señores miembros. BI BL. IO. TE. investigación científica.. CA. del jurado y dejamos a vuestro criterio, la calificación del presente trabajo de. Trujillo, Febrero del 2018. …………………………………... …………………………………... Marcos Rodríguez, Jesi Fiorela. Meregildo Toribio, Suli María. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. IC A. Dr. QF Abanto Zamora Francisco Moisés. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. (Presidente). (Miembro). BI BL. IO. TE. CA. DE. Dra. QF Ayala Jara, Carmen Isolina. Dr. QF Ericson Felix Castillo Saavedra (Miembro). v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente trabajo de investigación, estuvo orientado a determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración mínima bactericida (CMB) del extracto hidroetanólico de las semillas Persea americana “palta” frente a Staphylococcus. IC A. epidermidis procedente centro poblado del distrito de Moche, provincia de Trujillo.. UI M. El extracto hidroetanólico de las semillas Persea americana se obtuvo por macerado. O. Q. con constante agitación por 15 días. Asimismo presentó las siguientes características. Y. BI. organolépticas: color anaranjado oscuro, olor suigéneris, textura líquida, sabor amargo.. AC. IA. Luego se determinó la CMI por el método M27-A3 estandarizado por el Clinical and. RM. laboratory Standards institute (CLSI) adaptado a la investigación se utilizó diez. FA. concentraciones; y la CMB se realizó por el método de Dilución en agar utilizando la. DE. técnica de siembra en superficie en agar Muller-Hinton, se obtuvo un valor de 12.5 %,. BI BL. IO. TE. CA. para ambas determinaciones frente Staphylococcus epidermidis.. Palabras clave: Concentración Mínima Inhibitoria, Concentración Mínima Bactericida, Persea americana.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The present research work was aimed at determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal concentration (MBC) of the hydroethanolic. extract. of. the. Persea. americana. "avocado". seeds. against. IC A. Staphylococcus epidermidis; from the populated center of the district of Moche,. UI M. province of Trujillo.. O. Q. The hydroetanolic extract of Persea americana seeds was obtained by mashing with. Y. BI. constant agitation for 15 days. It also presented the following organoleptic. AC. IA. characteristics: dark orange color, suigéneris smell, liquid texture, bitter taste. Then the. RM. CMI was determined by the M27-A3 method standardized by the Clinical and. FA. Laboratory Standards Institute (CLSI), adapted to the research, ten concentrations were. DE. used; and the CMB was performed by the method of agar dilution using the technique. CA. of surface planting in Muller-Hinton agar, a value of 12.5% was obtained, for both. BI BL. IO. TE. determinations against Staphylococcus epidermidis.. Keywords: Minimum Inhibitory Concentration, Minimum Bactericidal Concentration, Persea americana.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE Pág. DEDICATORIAS…………………………………………………………………….….….…...i AGRADECIMIENTOS…………...………………………………………………………..…...iii PRESENTACIÓN…………………………………………………………………………....….iv. IC A. JURADO DICTAMINADOR……………………………………………………………...….....v. UI M. RESUMEN....................................................………………………....……….…….….….…....vi. Q. ABSTRACT.................................................................................................................................vii INTRODUCCIÓN………………………………………………..……….........................1. II.. MATERIAL Y MÉTODOS………………………………….………………..……….…8. III.. RESULTADOS………………………………………….………………..………….......16. IV.. DISCUSIÓN…………………….…………………..…………………………………...18. V.. CONCLUSIONES……………….…………………………………………...................21. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………….....…..............22. TE. BI BL. IO. ANEXOS. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. I.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.- INTRODUCCIÓN. El acné es uno de los desórdenes más comunes de la piel que produce un profundo impacto. psicológico.. Este. padecimiento. inflamatorio. crónico,. de. etiología. multifactorial, que afecta la unidad pilosebácea, está distribuido en forma limitada en áreas donde existen gran desarrollo de glándulas sebáceas como son: cara, tórax en cara. IC A. anterior y posterior y parte superior de brazos1, 2.. UI M. A nivel mundial, el acné afecta en 85% de adolescentes, si bien sólo en el 10% va a ser. BI. O. Q. de intensidad media y en el 1% muy importante y en algunas ocasiones desfigurante3.. Y. En el Perú, 20 % de las personas afectadas por acné sufre problemas psicológicos como. AC. IA. baja autoestima, situación que puede llevar a un cuadro de depresión y ansiedad y en. FA. RM. términos dermatológicos sus secuelas se manifiestan en cicatrices de diversa magnitud4.. DE. Existen muchos factores que han sido asociados al desarrollo del acné y son. CA. considerados como creencias o mitos, entre estos tenemos: higiene, dieta láctea,. IO. TE. chocolates, fibra, clima caluroso y el estrés5.. BI BL. La piel tiene miles de folículos pilosos microscópicos y en cada uno de ellos hay una glándula sebácea que produce una sustancia grasosa, sebo o aceite, ayuda a eliminar las células cutáneas viejas y mantiene la piel suave. Sin embargo, cuando las glándulas producen demasiado sebo, puede ser provocado por exceso de hormonas, los poros pueden resultar obstruidos. Se acumula suciedad, bacterias y células inflamatorias que posteriormente ocasionan una infección incluso la formación de una espinilla, barro, o grano5, 6.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fisiopatológicamente están involucrados cuatro factores: exceso de la producción de sebo, colonización bacteriana, inflamación y queratinización anormal. Las bacterias que probablemente contribuyen a la inflamación son Propionibacterium acnes y Staphylococcus epidermidis, que forma parte de la microbiota habitual de la piel. Estas bacterias requieren para su desarrollo triglicéridos que los obtienen de los lípidos de la membrana celular de los queratinocitos. Sin embargo, cuando existe un sobre. IC A. crecimiento de estas bacterias junto con los factores ya mencionados, se produce un. UI M. aumento de neutrófilos, linfocitos, células gigantes y otros mediadores de la inflamación. O. Q. que contribuyen a la formación de comedones, pápulas, pústulas, quistes y cicatrices6, 7.. IA. coagulasa negativos y el hongo Malassezia.. Y. BI. Los tres microorganismos asociados a acné son: Propionibacterium, Staphylococcus. AC. En los primeros años el principal microorganismo que coloniza la piel son:. RM. Staphylococcus epidermidis, durante años se completará el desarrollo de la microbiota. FA. habitual, con la colonización del Propionibacterium acnes y granulosum, llegando hasta. CA. DE. 107 microorganismo/cm2, que va a la baja en las personas adultas mayores. Sin. TE. embargo, cambios en la piel, como uso prolongado de antibióticos, permiten la. IO. supervivencia transitoria de ciertos microorganismos. Y en los paciente que tienen acné,. BI BL. existe colonización de Propionibacterium acnes y de Staphylococcus epidermidis en el 50% de los casos8.. Staphylococcus epidermidis es una bacteria gram positiva, coagulasa negativa, de forma esféricas, no móviles, no esporuladas, se disponen en racimos “como uvas”; mide aproximadamente 0,5 a 1,5 micrómetros de diámetro. Además es un anaerobio facultativo, que crece mejor en condiciones aeróbicas9, 10.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La familia Staphylococcaceae han desarrollado una rápida resistencia a los antibióticos posterior al descubrimiento de la penicilina, es así que en la actualidad menor del 10% de las cepas son sensibles a este antibiótico y en especial la resistencia de Staphylococcus epidermidis. Esta bacteria al ser Gram-positiva carece de una membrana exterior y las enzimas de inactivación de los antibióticos son típicamente secretadas por Staphylococcus epidermidis e interactúan con el antibiótico extracelularmente11, 12, 13.. IC A. La utilización de agentes antimicrobianos naturales, es una alternativa sobresaliente. UI M. para combatir microorganismos resistentes a antibióticos convencionales, debido a. O. Q. favorecen en el proceso de regeneración epitelial, funcionamiento de los órganos en. BI. general, aumentar las defensas del organismo y no presenta efectos secundarios en los. IA. Y. organismos tratados14, 15.. RM. AC. Las bacterias de la familia Staphylococcus spp. han desarrollado una rápida resistencia a. FA. los antibióticos posterior al descubrimiento de la penicilina, es así que en la actualidad. DE. menor del 10% de las cepas son sensibles a este antibiótico y en especial la resistencia. CA. de Staphylococcus epidermidis13.. TE. Staphylococcus epidermidis es una bacteria gram positiva, coagulasa negativa, de forma. BI BL. IO. esféricas, no móviles, no esporuladas, se disponen en racimos “como uvas”; mide aproximadamente 0,5 a 1,5 micrómetros de diámetro. Además es un anaerobio facultativo, que crece mejor en condiciones aeróbicas9, 10. Esta bacteria forma parte de la microbiota normal de la piel, y se lo aísla con frecuencia en la piel de axilas, cabeza y narinas. Al ser una bacteria Gram-positiva carece de una membrana exterior y las enzimas de inactivación de los antibióticos son típicamente secretadas por S. epidermidis e interactúan con el antibiótico extracelularmente11, 12.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Existe una gran variedad de antibióticos naturales que son obtenidos. de fuentes. naturales como los flavonoides, quinonas, taninos, esteroides entre otros, lo que ha posicionado a los producto naturales como una fuente de compuestos con potencial antimicrobiano comparable con la de antibióticos sintéticos16, 17, 18. Persea es el género nominal de la familia de las Lauráceas, que está formada por 52 géneros y cerca de 3.500 especies; esta es una de las familias más primitivas de las. IC A. dicotiledóneas.). Algunos representantes de esta familia se encuentran en bosques. UI M. pluviales de tierras bajas de todas las regiones tropicales y subtropicales de ambos. Q. hemisferios, pero los grandes centros de dispersión son el sudeste asiático y América. Y. BI. O. tropical18, 19.. AC. IA. Nuestro país tiene el privilegio de contar en su territorio con una diversidad de plantas. RM. medicinales, y entre ellas la familia de Lauráceas que comprende 16 géneros y 247. FA. especies. La especie Persea americana es originaria de América Central y del sur de. DE. México, y en la actualidad se establece desde Chile hasta los Estados Unidos de. CA. América. Es de tipo perenne, se lo puede cultivar desde el nivel del mar hasta los 3.000. TE. m de altitud, en un amplio rango de climas y de suelos, puede alcanzar alturas de hasta. BI BL. IO. 10 m, con un follaje verde y el fruto es una drupa que se caracteriza por tener un mesocarpio carnoso y oleaginoso20, 21. La semilla de la fruta inmadura fue encontrado que tienen propiedades antibacterianas y compuestos como los taninos, catequinas, flavonoides y compuestos polifenólicos a menudo se encuentran en los tejidos y las semillas de la fruto de aguacate26. La semilla posee menor porcentaje de lípidos que la pulpa, sin embargo presenta mayor cantidad de ácidos grasos poliinsaturados que el aceite de pulpa22, 23.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Referente al posible efecto antimicrobiano de las semillas de Persea americana algunos trabajos como Rengifo en el 2014, donde desarrollo un análisis fitoquímico en extracto etanólico de la semilla de palta Persea americana Mill. Var. Hass concluyen la presencia de flavonoides, quinonas, esteroides y triterpenos24. García en el 2012 se realizó un trabajo de investigación titulado de extracción y caracterización fisicoquímica de la fracción colorante de la semilla del aguacate (Persea. IC A. americana Miller), donde se encontró presencia de metabolitos secundarios con. UI M. actividad antimicrobiana como flavonoides, taninos y antiocianinas25.. O. Q. Raymond y Dykes en el 2010 realizaron extractos de epicarpio crudo y semilla en tres. Y. BI. variedades de aguacate: Persea Americana Mill. var. Hass, Persea Americana Mill. var.. AC. IA. Shepard, y Persea americana Mill. var Fuerte, los cuales fueron sometidos frente a. RM. bacterias como: Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus. FA. aureus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Citrobacter. DE. freundii, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium; asimismo concluyeron. CA. que todos los extractos etanólicos tanto del epicarpio crudo como semilla mostraron. TE. sensibilidad, mientras que los extractos acuosos fueron sensibles solo Listeria. BI BL. IO. monocytogenes y Staphylococcus epidermis26. Chávez, realizó en el 2011 un estudio referido a los residuos de aguacate (semilla y cáscara), donde se realizaron extracciones metanólica, acetónica y polifenólica, para evaluar su actividad antimicrobiana frente a Escherichia coli, Salmonella, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus. Reportó que en el extracto metanólico solo en el de semilla clasifico de resistente al crecimiento de las bacterias Escherichia coli, Salmonella y Listeria monocytogenes; mientras que los acetónicos no lograron clasificarse con resistentes y por último los extractos polifenólicos tanto de cáscara. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. como el de semilla obtuvieron halos de inhibición pequeños, clasificándose como susceptibles al crecimiento microbiano, todo ello basado en tablas NCCLS para enterobacteriaceae 27. En el 2012, Jiménez realizó una investigación sobre semillas Persea americana en extractos clorofórmico y etanólico donde se evaluó su actividad antibacteriana y antiprotozoaria donde se evaluó frente E. histolytica, G. lamblia y T. vaginalis M.. IC A. tuberculosis H37Rv, M. tuberculosis MDR. Asimismo observaron que ambos extractos. UI M. de semillas de P. americana mostraron actividad amebicida y giardicidal. Además. Q. el extracto clorofórmico inhibió el crecimiento de M. tuberculosis MDR que muestra. Y. BI. O. una MIC = 50 mg / ml28.. AC. IA. Este proyecto se justifica en base que la Persea americana es un fruto originario y. RM. abundante de nuestro país e incluso en nuestra región, por otro lado las investigaciones. FA. anteriormente mencionados que nos sirven como cimientos de información donde a la. DE. Persea americana se le atribuyen propiedades antibacterianas frente a diversas. CA. bacterias, asimismo actualmente existe un gran problema como es resistencia bacteriana. TE. de Staphylococcus epidermidis a algunos antibióticos existentes. Por lo tanto se busca. BI BL. IO. nuevas fuentes de principios activos, que tengan eficacia terapéutica y a los cuales los microorganismos no desarrollen mecanismos de resistencia, para contribuir con la salud pública.. Ante ello nos planteamos el siguiente problema: ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroetanólico de las semillas de Persea americana frente a Staphylococcus epidermidis?. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Postulándose la siguiente hipótesis: La semilla de Persea americana presenta efecto antibacteriano in vitro frente a Staphylococcus epidermidis.. Objetivos. IC A. Objetivo general:. UI M. Evaluar el efecto in vitro del extracto hidroetanólico de las semillas de Persea. O. Q. americana frente a Staphylococcus epidermidis.. BI. Objetivos específicos:. AC. semillas de Persea americana.. IA. Y.  Determinar características organolépticas del extracto hidroetanólico de las. FA. RM.  Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto hidroetanólico de. DE. las semillas de Persea americana frente a Staphylococcus epidermidis.. CA.  Determinar la concentración mínima bactericida del extracto hidroetanólico de. BI BL. IO. TE. las semillas de Persea americana frente a Staphylococcus epidermidis.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. – MATERIAL Y MÉTODO 2.1. MATERIAL 2.1.1 Material Microbiológico: a) Cepa bacteriana: Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. IC A. -. UI M. Proporcionada por el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de. O. Q. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. BI. b) Medios de cultivo:. IA. Y. - Agar Mueller-Hinton. AC. - Caldo Cerebro Corazón (BHI). RM. 2.1.2 Material botánico:. DE. FA.  Se recolectaron 500 g de semillas de la especie Persea americana. CA. provenientes del distrito de Moche, provincia de Trujillo.. TE. 2.1.3 Material farmacológico:. IO. - Clindamicina 600mg/4mL. BI BL. - Gentamicina 160mg/2mL 2.1.4 Material de laboratorio: Los de uso común en el Departamento de Farmacotecnia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica y en Laboratorios de la Facultad de Ciencias Biológicas, de la Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.4.1 Solventes: . Agua destilada estéril DROPAKSA. . Etanol 80° DROPAKSA 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Solución salina estéril. 2.1.4.2 Equipos de laboratorio:  Horno de esterilización  Estufa eléctrica MEMMERT TY U40  Rotavapor HEIDOLPH. IC A.  Balanza analítica OHAUS GA 200. UI M.  Congeladora COLDEX. Q.  Liofilizador LABCONCO. BI. O.  Incubadora BINDER. IA. Y.  Alcoholímetro. AC.  Autoclave. RM. 2.1.4.3 Otros: Algodón. . Asa bacteriológica. . Papel de filtro Whatman N°1. DE. CA. TE. Papel kraft. IO. . FA. . Pizeta de plástico. . Placas Petri estériles. . Caja de guantes estériles y mascarillas. . Tubos de 13x100 mm estériles. . Gradillas de tubos. . Placa de Elisa. . Tubo de MC Farland N°3. . Mechero de alcohol. BI BL. . 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Micropipeta de 1000 μL. . Puntas de micropipeta de 1000 μL y 200 μL. 2.2. MÉTODO. 2.2.1. Análisis Fitoquímico: 2.2.1.1. Recolección de la especie29: semillas. de. la. especie Persea americana ¨palta¨ fueron. recolectadas de. las. partes. aéreas. de. la. planta, procediendo. IC A. Las. UI M. posteriormente a su selección de estas entre los meses de julio y. O. Q. Agosto del 2017.. Y. BI. 2.2.1.2. Identificación taxonómica de la especie vegetal:. IA. Un ejemplar completo de la planta se llevó al Herbarium Truxillense. RM. AC. (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación y. FA. determinación taxonómica, ingresada con el código 59211. (Ver Anexo 1).. Selección: Los frutos de Persea americana fueron seleccionados. CA. a.. DE. 2.2.1.3. Preparación del material vegetal30. TE. según su estado de madurez y libre de sustancias extrañas.. BI BL. IO. Posteriormente se procedió a extraer las semillas donde descartó su tegumento o cualquier sustancia extraña que la envuelva e inmediatamente se dividió en fragmentos pequeños de la semilla. b. Secado: Luego se procedió a colocar los fragmentos en bolsas de papel Kraft con orificios, se llevó a la estufa a una temperatura de 40°C y se realizó la determinación del peso cada 24 horas hasta valores constantes.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c.. Pulverización: Después de obtener la muestra seca, se realizó la trituración de los fragmentos de semillas en un mortero, hasta obtener el tamaño de partículas adecuadas.. d. Tamizaje: El material triturado que se consiguió en la pulverización, se pasó a través de un set de tamices y se trabajó con partículas de tamaño de 0,5 mm. Almacenamiento: El polvo de semilla que se obtuvo, fue guardado en. IC A. e.. UI M. frascos de vidrio de color ámbar de boca ancha y en un lugar sin. Q. humedad y luz directa, hasta su utilización (Ver Anexo 2).. BI. O. 2.2.1.4. Preparación del Extracto Hidroetanólico de semillas de Persea. IA. Y. americana “palta”31. AC.  En un balón de 1L de capacidad, se agregaron 50 g de semillas de. RM. Persea americana “palta” previamente molida y tamizada. Luego se. FA. añadieron 250 mL de etanol al 80° y se realizó un macerado con agitación. DE. constante. por. 15. días.. Posteriormente. el. extracto. TE. CA. hidroetanólico se filtró con papel de filtro Whatman N°1, hasta que se. BI BL. IO. obtuvo un extracto purificado libre de partículas.  La solución resultante se evaporó en el Rotavapor a 37°C hasta obtener una consistencia semisólida que fué retirada con la cantidad de agua destilada necesaria que posteriormente se llevó a congelación a – 10 °C por 48 horas, para poder ser secada en el Liofilizador, el cual opera a – 40 °C y 5- 25 micrones de Hg. Finalmente, se pesó el extracto seco y se guardó en en frasco de vidrio de color ámbar estéril hasta su utilización en el ensayo antibacteriano (Ver Anexo 3). 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.1.5. Características organolépticas del extracto Hidroetanólico de las semillas de Persea americana “palta”32. Determinación del color: En un tubo de ensayo limpio y seco, se. UI M. . IC A. Los caracteres organolépticos incluyen: color, olor, sabor y textura.. O. Q. llenó hasta las tres cuartas partes con la muestra de ensayo y se. Y. BI. observó el color, transparencia, la presencia de partículas y la. AC. Determinación del olor: Se tomó una tira de papel secante de. RM. . IA. separación en capas.. FA. aproximadamente 1cm de ancho por 10 cm de largo y se introdujo en. DE. un extremo en la muestra de ensayo. Luego se procedió a oler y se. Determinación del sabor: Se extrajo una alícuota pequeña y se. TE. . CA. determinó si corresponde con la característica del producto.. BI BL. IO. saboreó la muestra.. . Determinación de textura: Se extrajo una alícuota y se percibió con el tacto la textura y consistencia.. 2.2.2 Ensayos microbiológicos33: 2.2.2.1. Preparación de la concentración: A partir del extracto hidroetanólico seco de las semillas de. Persea. americana, se pesarón por separado 5 g, se disolvió en 10 mL suero fisiológico, obteniéndose una concentración de 50% p/v. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2.2. Reactivación de los inóculos: La bacteria Staphylococcus epidermidis (ATCC12228), fue reactivado en caldo infusión cerebro corazón (BHI) y se llevó a incubar durante 18 horas a 35°C.. IC A. 2.2.2.3. Preparación y estandarización del inóculo. UI M. Con un asa bacteriológica se tomó de las colonias de S. epidermidis y se resuspendió en un tubo de 5mL de solución salina al 0,85% de NaCl. Se. BI. O. Q. agitó bien y se ajustó a 0,5 McFarland, añadiendo la cantidad necesaria de. Y. solución salina. Esta solución tiene una concentración aproximada de. AC. IA. 1x106 - 5x106 UFC/mL. Posteriormente se realizó una dilución 1:1000 con. RM. medio Solución salina fisiológica llegando a una concentración de 1x103 -. DE. tubos para el CMI.. FA. 5x103 UFC/mL. Esta última dilución es la que se utilizó para inocular a los. CA. 2.2.2.4. Determinación De La Concentración Mínima Inhibitoria. IO. TE. (CMI) 34, 35, 36:. BI BL. Para la determinación de la concentración mínima inhibitoria se realizó de acuerdo al método M27-A3 estandarizado por el Clinical and laboratory Standards institute (CLSI) para el estudio de la sensibilidad, adaptado de acuerdo al proyecto de investigación. En las diluciones del extracto hidroetanólico se preparó inicialmente a una concentración de 50% del extracto Hidroetanólico con caldo BHI, posteriormente se diluyeron de acuerdo a la siguiente cuadro.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 1. Preparación de las soluciones stock de extracto hidroetanólico.. 3. 6,25. 4. 0,5. 3,125. 5. BI. 0,5. 0,5. 2L e 4y e 4n d 4a :. 25. 0,5. 1,5. 6,25. 0,5. 6,25. 0,25. 1,563. 6. 6,25. 0,25. 1,75. 0,781. 7. 0,5. 0,5. 0,391. 8. 0,25. 0,75. 0,195. 9. 0,25. 1,75. 0,098. 10. 1. 1. 0,050. 11. O. Q. 25. UI M. 12,5. AC. 2. IC A. Al tubo Nº de Concentración Transferir agregar Concentración Tubo dilución (%) (mL) caldo resultante (%) Nº BHI (mL) 50 1 1 25 1 2. RM FA. BI BL. IO. TE. CA. DE. 0,781 7 B H 0,781 7I : 0,781 7 C a 0,010 10 l d o Cerebro Corazón. IA. Y. 0,75. Luego se vertió 100 μL de los tubos stock del extracto y de los controles positivo se utilizó clindamicina 600mg/4mL también negativo se utilizó gentamicina 160mg/2mL, a cada uno de los pocillos de la placa Elisa.. Posteriormente se agregó en cada pocillo 100 μL del inóculo. Luego se llevó a incubar a 35°C por 24 horas.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Al finalizar se observó los resultados comparando el control positivo que no presenta turbidez y el control negativo que si la presenta. La turbidez se usa como indicador del crecimiento de bacterias, debido a que esta directamente relacionada con el número de partículas, a mayor número de partículas mayor turbidez. El ensayo se realizó por triplicado. (Ver Anexo 4). IC A. Para la lectura se clasifico como: mayor turbidez (+++), menor turbidez. UI M. (++) y sin turbidez (0); además se consideró como CMI a la concentración. O. Q. menor del extracto hidroetanólico de Persea americana que inhibe el. Y. BI. desarrollo por completo.. AC. IA. 2.2.2.5. Determinación de la Concentración Mínima Bactericida. RM. (CMB)34, 37, 38:. FA. Para determinar la CMB se utilizó el método de dilución en agar que. DE. consistió en extraer 100 μL de la suspensión de los pocillos en los cuales. CA. no se observó desarrollo bacteriano y se sembró en placas con agar. IO. TE. Mueller Hinton. La placa se dividió en ocho sectores y se disemino en su. BI BL. respectivo sector cada alícuota empleando el asa bacteriológica. También se utilizó una placa control para las bacterias: Las placas de control y las placas experimentales se dejaron incubar durante 24 horas a 35°C. Luego se procedió con la lectura; se consideró CMB la placa que no hubo crecimiento. bacteriano. o. la. menor. concentración. de. extracto. hidroetanólico de la semilla de Persea americana, que eliminó el 99.9% del inóculo original. El experimento se realizó por triplicado. (Fig.15). 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.- RESULTADOS Tabla 1. Características organolépticas del extracto hidroetanólico de semilla del Persea americana “palta” Características Resultados. IC A. organolépticas. Anaranjado oscuro. Olor. Suigéneris. Sabor. Amargo. Textura. Líquida. Y. BI. O. Q. UI M. Color. AC. IA. Tabla 2. Evaluación de la concentración mínima inhibitoria (CMI). Lectura. Control negativo. +++. FA. +++ +++. 0,195. +++. 0,391. +++. 0,781. +++. 1,563. ++. 3,125. ++. 6,25. ++. 12,5. 0. 25,0. 0. Control positivo. 0. BI BL. IO. TE. 0,098. CA. DE. 0,050. RM. % del extracto hidroetanólico. Leyenda: 0: Sin turbidez ++: Menor turbidez +++: Mayor turbidez. Concentración mínima inhibitoria (CMI) = 12,5 % equivalente a 125 mg/ml. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Evaluación de la concentración mínima bactericida (CMB).. Lectura del Crecimiento bacteriano en placa UFC/ml % del extracto hidroetanólico. repeticiones. 25,0. 1. 0. 0. 2. 0,5 x 102. 0. 3. 0. 1 x 102. Control Positivo Clindamicina. UI M. IC A. 12,5. 0 0 0. BI. O. Q. N° de. AC. IA. Y. Leyenda: 0: No hubo crecimiento bacteriano.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. Concentración mínima bactericida (CMB) = 12,5 % equivalente a 125 mg/ml.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.- DISCUSIÓN. En este estudio se ha demostrado la capacidad antimicrobiana que presenta el extracto hidroetanólico de la semilla del Persea americana frente a cultivos de Staphylococcus. IC A. epidermidis.. UI M. Las plantas poseen un enorme y desconocido reservorio de sustancias derivadas de sus sistemas de defensa en contra de microorganismos, insectos y herbívoros. Los. O. Q. metabolitos secundarios responsables de las actividades tanto antibacteriana como. IA. Y. BI. antifúngicas son los flavonoides, fenoles, taninos, alcaloides y saponinas39.. AC. En la tabla 1 con respecto a las características organolépticas y fisicoquímicas, se. RM. muestran los resultados organolépticos hidroetanólico de la semilla del Persea. FA. americana. Presento coloración anaranjado oscuro atribuido a los carotenoides. DE. principalmente a la luteína un pigmento natura presente en la semilla de Persea. TE. CA. americana. El olor fue suigéneris a un extracto hidroetanólico. La textura fue líquida. Y. IO. el sabor amargo por la presencia de flavonoides y taninos, metabolitos que pertenecen a. BI BL. la familia de los compuestos fenólicos o polifenoles, cuya característica es la sensación amarga viene acompañada generalmente de astringencia y es difícil separar estas dos sensaciones25, 40. Los resultados demuestran en la tabla 2, el extracto hidroetanólico de la semilla del Persea. americana muestra actividad contra Staphylococcus epidermidis con una concentración mínima inhibitoria de 125 mg/ml que representa la acción bacteriostática debido a que se. inhibe el crecimiento bacteriano. Asimismo este resultado difiere al CMI de 0,354 mg/mL reportado por Chia y Dykes que trabajaron con el extracto acuoso del epicarpio de la 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Persea americana Mill. Var Hass, y se explicaría porque el epicarpio tiene una mayor concentración de metabolitos secundarios con actividad antimicrobiana como taninos, flavonoides, quinonas y terpenoides que son permiten un mayor efecto antibacteriano a menor concentraciones19, 26. Luego se procedió a encontrar la concentración mínima bactericida, en la tabla 3 se observa que el resultado es 125 mg/mL igual al CMI, es decir que puede capaz producir. IC A. la muerte del microorganismo, por consiguiente, un término de bacteriólisis que implica. UI M. no sólo la suspensión de crecimiento, sino la destrucción de la bacteria; esto se. O. Q. evidencia por la presencia de estructuras fenólicas que están compuestas por grupos. BI. hidroxilo (-OH) en el anillo siendo esta característica directamente relacionada con. AC. IA. Y. poder tóxico frente a microrganismos 41.. RM. El efecto antibacteriano de la semilla del Persea americana “palta” se debe a que. FA. poseen metabolitos secundarios como: los flavonoides, taninos, quinonas, terpenoides y. DE. esteroides según lo reportado por Rengifo y ratificado por García24, 25.. TE. CA. Los metabolitos secundarios como los compuestos flavonoides, quinonas y taninos. IO. pueden adjudicarle la actividad antibacteriana. Esto debido a que, los flavonoides por. BI BL. tener en su estructura química un número variable de grupos hidroxilo fenólicos son lipófilos, penetran fácilmente a través de la membrana celular bacteriana, se combinan y precipitan las proteínas protoplasmáticas desnaturalizándolas y actuando como venenos protoplasmáticos42, 43. Asimismo, los taninos su actividad puede deberse a la capacidad de dejar sin actividad las adhesinas microbianas, las enzimas microbianas extracelulares y proteínas transportadoras en la célula, estableciendo complejos con la pared celular. La propiedad de fijarse a estructuras de la pared celular explicaría porque en una bacteria Gram-positiva, que 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. presenta capa gruesa de peptidoglicano en su pared celular, la hace susceptible a sufrir inestabilidad con posible lisis celular44, 45.. De igual manera, las quinonas presentan un rango amplio de acción, actuando posiblemente sobre las adhesinas expuestas en la superficie de las bacterias, sobre los polipéptidos de la pared celular y sobre las enzimas unidas a membranas 43, 44.. IC A. Por último, los terpenoides tienen partición de forma activa, matando directamente al. UI M. microorganismo patógeno o restringiendo su invasión al resto de la planta. Su actividad. Q. consiste en la ruptura de membrana celular bacteriana mediante 3 probables vías:. BI. O. aumentando la permeabilidad de la membrana a iones pequeños, afectando la. Y. estabilidad estructural de la membrana y desequilibrando la formación de la bicapa. AC. IA. lipídica. Entonces se podría presumir que las bacterias Gram- positivas como. RM. Staphylococcus epidermidis presentarían actividad antibacteriana, debido a que. FA. presentan dos membranas lipídicas, las cuales la hace menos vulnerables a estos. BI BL. IO. TE. CA. DE. compuestos44, 46.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.- CONCLUSIONES. 1. Las características organolépticas obtenidas del extracto hidroetanólico de las semillas de Persea americana fue: color anaranjado oscuro, olor suigéneris, textura líquida y sabor amargo.. IC A. 2. La concentración mínima inhibitoria del extracto hidroetanólico de las semillas. UI M. de Persea americana fue 125 mg/mL frente a Staphylococcus epidermidis.. O. Q. 3. La concentración mínima bactericida del extracto hidroetanólico de las semillas. Y. BI. de Persea americana fue 125 mg/ml frente a Staphylococcus epidermidis, valor. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. coincidente con la CMI.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Hogail A. Knowledge beliefs and perceptions of young people towards acne vulgaris. Journal Medical [Internet]. 2003 [cited 1 janury 2018]; (24): 765-768. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12883611 2. Ayer J. Acne more than skin deep. Postgraduate Medical Journal [Internet]. [cited. 1. janury. 2018];. 82(970):500-506.. Available. from:. IC A. 2006. UI M. https://escholarship.org/uc/item/0t2870v9. Q. 3. Soto J, González M. Acné: etimologia. Introducción. Monografiás de. BI. O. Dermatología.1990; 3: 16-17.. [Citado. 1. enero. 2018].. Disponible. en:. AC. [Internet]. IA. Y. 4. Sociedad Peruana de Dermatología. Acné causa problemas psicológicos. RM. http://www.dermatologia.pe/web/file/publicaciones/4_bc51d4acf2559fd_v22_n2. FA. .pdf. DE. 5. Danby W. Diet and acne. Clin dermatol journal [Internet]. 2008 [cited 1 janury 2(1):. 1-2.. Available. from:. TE. CA. 2018];. IO. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3481796/. BI BL. 6. Kaminsky A. Acné: un enfoque global. Colegio Ibero- Latinoamericano de Dermatología: Buenos aires; 2007. 7. Oprica C, Zouboulis C, Katsambas A, Kligman A. Pathogenesis and Treatment of Acne and Rosacea. Germany: Springer; 2014. p. 459-464. 8. Jappe U. Pathological mechanisms of acne with special emphasis on Propionibacterium acnes and related therapy. Acta Dermatol Venereol. 2003; 83: 241-48. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 34. Malbrán C. Manual de Procedimientos para la Determinación de la Sensibilidad a los Antimicrobianos en bacterias aisladas de humanos. Servicios antimicrobianos. ANLIS. BnosAires.2001; pp. 35 35. Díaz D. Determinación de la CMI de propóleos cubanos a partir de dos técnicas diferentes. Apiciencia 2000; 10(2): 1-12 36. Villanueva G. Estudio antibacterial in vitro del extracto acuoso de Gentiana. IC A. bicolor Wedd “corpus-huay” [Tesis para optar Grado de Bachiller] Trujillo:. UI M. Universidad Nacional de Trujillo. 2000. Q. 37. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).Performance Standards for. BI. O. Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria that Grow Aerobically Approved. Y. Standard-Ninth Edition Wayne, PA: CLSI, 2012.. AC. IA. 38. Mercado P. Fisiología Genética Bacteriana. Guía de Práctica. 5a ed. Facultad de. RM. Ciencias Biológicas. Universidad Nacional de Trujillo. Perú 2006. Pp.: 35-36. FA. 39. Davicino R, Mattar M, Col. Actividad antimicrobiana y antifúngica de extractos. DE. de plantas usadas en medicina popular en argentina. Rev. Perú biología.. CA. [Internet]. 2007 [Citado 12 de enero del 2018]. 14(2). Disponible en:. IO. TE. http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-. BI BL. 99332007000300011&lng=es&nrm=iso>.ISSN 1727-9933 40. Calvo M. Carotenoides. Bioquímica de alimentos [Internet] [Citado 18 febrero 2018].. Disponible. en:. http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/pigmentos/carotenoides.html 41. Daoud Z. Efecto de concentraciones subinhibitorias de antimicrobianos sobre las interacciones fibronectina-Staphylococcus aureus. [Tesis para optar el grado de Doctor en Farmacia]. Madrid: Universidad Complutense de Madrid; 1995.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 42. Puupponen P, Col. Antimicrobial properties of phenolic compounds from berries Journal of Applied Microbiology. [Internet]. 2001 [cited 12 janury 2018]; 90(4): 494-507. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11309059 43. Cowan. M.. (1999). Plant. Products. as. antimicrobial. agents. Clinical. Microbiological Reviews. [Internet]. 1999 [cited 12 janury 2018]; 12(4): 564582. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10515903. IC A. 44. Sepúlveda G, Porta H. La participación de los metabolitos secundarios en la. UI M. defensa de las plantas. Rocha M. Redalyc [Internet] 2003 [citado 12 enero. Q. 2018]; 21(3): 355-363. Disponible en: http://www.redalyc.org/pdf/612.pdf. BI. O. 45. Akiyama H. Antibacterial action of several tannins against Staphylococcus. 48(4):. 487-591.. Available. from:. AC. 2018];. IA. Y. aureus Journal of Antimicrobial Chemotherapy. [Internet]. 2001 [cited 12 janury. RM. https://academic.oup.com/jac/article/48/4/487/700315. FA. 46. Araujo J, Salas R. Antimicrobiana de plantas. [Internet] 2012 [citado 1 enero. BI BL. IO. TE. CA. DE. 2018]; 1(12). Disponible en: http://www.seq.es/seq/0214-3429. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. ANEXOS. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 1. IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN TAXONÓMICA DEL MATERIAL BIOLÓGICO EN EL Herbarium Truxillense (HUT). BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Clase: Dicotyledoneae Sub Clase: Dipétala Orden: Ranales Familia: Lauraceae Género: Persea Nombre científico: Persea Americana Mill. Nombre vulgar: Palta. Fig. 1 Certificado botánico de la identificación y determinación taxonómica de la especie Persea americana Mill.”palta”.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 2. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. PREPARACIÓN DEL MATERIAL VEGETAL, SEMILLAS DE Persea americana Mill.”PALTA”. Fig. 2 Preparación de las semillas de Persea americana Mill.”palta” selección, extraer semilla, lavar y pesar.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fig. 3 Reducir en partículas, colocar en sobres y secado de semillas en la estufa a 40°C por 48 h.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Fig. 4 Tamizaje del polvo de las semillas de Persea americana Mill. “palta” a través de un tamiz (N° 0,5mm) y colocar en pomo ámbar previamente esterilizado.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 3. B. C. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. A. IC A. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LAS SEMILLAS DE Persea americana Mill. “PALTA”. BI BL. IO. TE. CA. Fig.5 A) Pesado del polvo de semillas de Persea americana Mill.”palta” B) Preparar 250ml de alcohol de 80°C C) Inicio del macerado.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. Fig.6 Filtración del extracto Hidroetanólico de las semillas de Persea americana Mill.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fig.7 Concentración del extracto hidroetanólico de las semillas de Persea americana Mill. con el equipo de rotavapor marca HEIDOLPH a 40°C.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. A. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. B. Fig.8 A) Se congeló durante 48 horas el extracto acuoso obtenido previamente de las semillas de Persea americana Mill. en la congeladora marca COLDEX B) Se llevó al equipo de Liofilizador marca LABCONCO. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 4. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ENSAYOS MICROBIOLOGICOS. BI BL. IO. TE. CA. Fig. 13 Se centrifugó previamente el extracto para una mayor homogenización para la Concentración inicial con la que se realizó la CMI; con un 5g/ml.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. C. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. B. BI BL. IO. 35.0°. D. Fig. 14 A) Soluciones del extracto B) Siembra en la placa Elisa C) Sellado de la placa Elisa D) Incubación. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 0,781%. 0,195%. 0,050%. 0,391%. BI. 1,563%. 0,098%. 12,5% %%. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. 6,25%. O. Q. UI M. IC A. 12,5% 3,125% 0,0490,049. BI BL. IO. 6.25% %%. Fig. 15 Lectura de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) en la placa de Elisa, después de incubar a 35° por 24 horas en la incubadora marca BINDER.. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 12,5 %. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. 25,0 %. Fig. 16 Determinación de la Concentración Mínima Bactericida (CMB) por el método de dilución en agar utilizando la técnica de siembra en superficie en agar Muller-Hinton.. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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