• No se han encontrado resultados

Concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida In vitro del extracto etanólico de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2020

Share "Concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida In vitro del extracto etanólico de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615"

Copied!
39
0
0

Texto completo

(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. UI. M. IC. A. ESCUELA DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. BI. O Q. TESIS II. IA. Y. “Concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida In vitro del. FA R. M. AC. extracto etanólico de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615.”. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:. :. IO TE. Autores. CA. DE. BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. NEIRA CASANA, Carlos Ivan. Asesor. BI. BL. PEREDA PEÑA, Enrique Adrian. :. Mg. RENGIFO PENADILLOS, Róger Antonio Asesora. :. Dra. LUJÁN VELÁSQUEZ, Manuela Natividad TRUJILLO – PERÚ. 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A ti, amado Dios, que siempre nos escuchas y nos guías en las circunstancias adversa, en nuestros laberintos y nuestros aciertos, te damos gracias por permitirnos ver realizado un paso más de este sueño, perpetuado en éstas hojas hermosas, que han servido para. IC. A. exteriorizar nuestros conocimientos, pensamientos, emociones, y sentimientos.. UI. M. A mis padres, Dora y Adriano, por su. BI. en mi vida.. O Q. confianza apoyo y amor, siendo un ejemplo. IA. Y. A mis hermanas Charito, Maqueli y estelita. Con amor, Adrian. FA R. M. AC. por su apoyo en toda mi vida.. DE. A mis queridos padres, Rosa y Luis, pilares. CA. fundamentales en mi vida, mis hermanos Pablo,. IO TE. Ricardo, Noelia y a Sandra el amor de mi vida, por su. BL. sacrifico y apoyo incondicional, su amor, comprensión. BI. y ejemplo de lucha.. A todos ustedes, con amor Carlos. Dedicado a la familia Tapia Aguilar por ser un apoyo incondicional en mi formación profesional. In memorian al señor AntonioMorillo Cholan. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A nuestros maestros que, influyeron con sus lecciones, enseñanzas y experiencias en formarnos como personas de bien y prepararnos para los retos que pone la vida, a cada. IC. A. uno de ellos les dedicamos estas páginas de nuestra tesis. UI. M. Agradeciendo en especial a nuestro asesor Mg. Roger Rengifo Penadillos, por ser una. O Q. persona íntegra, con valores, y respeto hacia los demás; por habernos brindado la. Y. BI. oportunidad de realizar esta tesis bajo su dirección y depositar en nosotros su confianza. IA. desde el primer día. Por guiarnos a lo largo de todo este periodo no solo académicamente. FA R. M. AC. sino personalmente.. DE. A nuestra asesora Dra. Manuela Natividad lujan Velásquez por su asesoría en la tesis, por. CA. apoyarnos y brindarnos su tiempo incondicional y aconsejarnos en cada paso que damos. BI. BL. IO TE. académica y personalmente.. Los Autores. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores miembros del Jurado Dictaminador:. IC. A. De conformidad con las Disposiciones Legales y vigentes del Reglamento de Grados y. UI. M. Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad nacional de Trujillo,. BI. O Q. sometemos a vuestro elevado criterio el presente informe intitulado:. IA. Y. “Concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida In vitro del. AC. extracto etanólico de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC. DE. FA R. M. 19615.”. CA. Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva. BI. BL. IO TE. calificación del presente informe.. -----------------------------. ----------------------------------. Neira Casana Carlos Ivan. Pereda Peña Enrique Adrian. Trujillo, Septiembre 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. A. Dra. González Siccha Anabel Doris. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. PRESIDENTE. MIEMBRO. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. Dr. Ybañez Julca Roberto Osmundo. Mg. Rengifo Penadillos Roger Antonio. MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El objetivo del presente trabajo de investigación, es determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración mínima bactericida (CMB) del extracto etanólico de las hojas Piper acutifolium “matico” frente a Streptococcus pyogenes ATCC 19615. La concentración mínima inhibitoria (CMI) se evaluó mediante el método de macrodilucion en. M IC. A. medio BHI (Brain Heart Infusion) y la concentración minina bactericida (CMB) por medio de. UI. dilución en agar utilizando la técnica de sembrado en superficie agar Mueller-Hinton. En el. O. Q. resultado obtenido para CMI se observó que a medida que aumenta la concentración aumenta el. BI. grado de inhibición y para CMB disminuye el número de colonias; esto se debe a los flavonoides. A. Y. presentes en las hojas de Piper acutifolium. Se concluye La concentración mínima inhibitoria. AC I. (CMI) del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes. RM. ATCC 19615 in vitro fue 0,66 mg/mL y la concentración mínima bactericida (CMB) del extracto. FA. etanólico de las hojas de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615 in vitro. BI BL IO. TE CA. DE. fue 1 mg/mL.. Palabras claves: Piper acutifolium, Streptococcus pyogenes, concentración mínima inhibitoria, concentración mínima bactericida.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The aim of this research was to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal concentration (MBC) of the ethanolic extract of the leaves Piper acutifolium "matico" against Streptococcus pyogenes ATCC 19615. The minimum inhibitory concentration (MIC) it was evaluated by means of the macrodilution method in BHI medium. M IC. A. (Brain Heart Infusion) and the bactericidal minin concentration (CMB) by agar dilution using. UI. the Mueller-Hinton agar surface technique. In the result obtained for CMI it was observed that. O. Q. as the concentration increases the degree of inhibition increases and for CMB the number of. BI. colonies decreases; this is due to the flavonoids present in the leaves of Piper acutifolium. The. A. Y. minimum inhibitory concentration (MIC) of the ethanolic extract of the leaves of Piper. AC I. acutifolium on Streptococcus pyogenes ATCC 19615 in vitro was 0.66 mg / mL and the. RM. minimum bactericidal concentration (CMB) of the ethanolic extract of the leaves of Piper. BI BL IO. TE CA. DE. FA. acutifolium on Streptococcus pyogenes, ATCC 19615 in vitro was 1 mg / mL.. Key words: Piper acutifolium, Streptococcus pyogenes, minimum inhibitory concentration, minimum bactericidal concentration.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. Resumen……………………………………………………………………………i. M. IC. A. Abstract…………………………………………………………………………….ii. Introducción…………………………………………………………………1. II.. Material y método…………………………………………………….….......5. III.. Resultados……………………………………………………………………11. IV.. Discusión…………………………………………………………………….13. V.. Conclusiones………………………………………………………...………16. VI.. Referencias Bibliográficas………………………………………………......17. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. I.. Anexos…………………………………………………………………………….21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCION. La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha estimado que más del 80% de la población mundial utiliza la medicina tradicional para satisfacer sus necesidades de atención primaria de salud y que gran parte de los tratamientos tradicionales implican el uso de extractos de plantas o sus principios activos 1,2.. IC. A. El avance de la Fitoterapia como disciplina médica es cada vez mayor, esto se evidencia en. UI. M. que las plantas medicinales representan casi el 25% del total de las prescripciones médicas en. O Q. países industrializados; en los países en desarrollo la participación de las plantas medicinales. Y. BI. alcanza el 80% 3,4.. AC. IA. Numerosas especies del género Piper tienen una gran popularidad en los sistemas de la. M. medicina tradicional Ayurvedica de la India. En las islas del Pacífico a partir de las raíces de. FA R. P.methysticum, arbusto conocido como kava, se prepara una bebida refrescante, que es. DE. consumida habitualmente como tranquilizante para combatir la ansiedad 5,6.. IO TE. CA. La medicina tradicional atribuye propiedades variadas a las hojas de Piper acutifolium. Las hojas en decocción se usan como cicatrizante en el tratamiento de hemorragias, en lavados. BL. antisépticos sobre heridas y en infusión para evacuar cálculos biliares, para aliviar o curar. BI. enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio, expectorante y antitusígeno), en dolencias gastrointestinales (“empacho”, diarreas agudas o crónicas) y tópicamente en infusión de las hojas para hacer gárgaras7. La especie Piper acutifolium (matico), es una planta delgada erecta de 4 m de alto, tallos verdes, glabros, los nudos hinchados, hojas con corto peciolo, la superficie escabrosa, aovada, de 15 x 9 cm oblicuamente redondeadas en la base, largamente atenuada en el ápice, glabra; nervadura secundaria mayor, levantada desde la mitad inferior de la vena medial, flores. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. aclamídeas, inflorescencia en espiga apretados o amentos, erecta, hasta 4 mm de grosor y 18 cm de largo, curvada, blanca8. Las hojas, tallos, y raíces: tradicionalmente se utiliza en afecciones respiratorias, contusiones, luxaciones, trastornos digestivos, antidiabético; como antiinflamatorio ocular y bucal, piel y mucosas, cicatrizante, antiulceroso, también usado en descensos, hemorragias, presentan actividad antifúngica, antioxidante y leishmanicida. Los flavonoides son la categoría de mayor. M. IC. A. distribución biológica y estos son considerados como potentes agentes antioxidantes 9,10.. O Q. UI. En el Perú, desde tiempos ancestrales, las hojas de diversas especies del género Piper se usan. BI. en infusión para tratar tanto malestares estomacales como úlceras estomacales 11. En las. Y. comunidades asháninca, de Bajo Quimiriki y Yanesha usan el matico (Piper adumcun) para. AC. IA. tratar una diversidad de enfermedades, incluyendo la cicatrización de heridas, las úlceras y el. FA R. M. dolor estomacal 12,13.. DE. Las infecciones respiratorias agudas (IRAS) se definen como aquellas infecciones del aparato. CA. respiratorio, causadas tanto por virus como por bacterias, que tienen una evolución menor a. IO TE. 15 días y que se manifiestan con síntomas relacionados con el aparato respiratorio tales como tos, rinorrea, obstrucción nasal, odinofagia, disfonía o dificultad respiratoria, acompañados o. BI. BL. no de fiebre; siendo la infección respiratoria aguda la primera causa de morbimortalidad en nuestro medio; como también de consulta a los servicios de salud y de internación en menores de cinco años. Dentro de éstas, la faringoamigdalitis aguda ocupa un lugar importante 16. La faringoamigdalitis aguda (FA) se define como un proceso agudo febril, con inflamación de las mucosas del área faringoamigdalar, con presencia de eritema, edema, exudados y úlceras o vesículas. El principal agente bacteriano involucrado en la etiología de la FA es el Streptococcus pyogenes (estreptococo beta-hemolítico del grupo A de Lancefield o EBHGA), que es responsable de 15% a 30% de las FA en niños y de 5% a 15% de los casos en adultos, 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. y constituye la principal causa de FA en la cual los antibióticos están definitivamente indicados 15. Los métodos cuantitativos son aquellos procedimientos que permiten determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración bactericida mínima (CBM). Se define CIM como la mínima concentración de antibiótico que en un período de tiempo predeterminado, es capaz de inhibir el crecimiento in vitro de un inóculo bacteriano. IC. A. previamente estandarizado (concentración conocida de gérmenes). Se define como CBM la. UI. M. mínima concentración de un antibiótico que en un período de tiempo predeterminado, es capaz. O Q. de inducir la eliminación in vitro del 99,9% de una población bacteriana previamente. AC. Ante lo cual se plantea el siguiente problema:. IA. Y. BI. estandarizada17.. FA R. M. ¿Cuál es la concentración minima inhibitoria y concentración minima bactericida In vitro del. DE. extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC. BL BI. Implícita.. IO TE. La hipótesis propuesta:. CA. 19615?. El objetivo general es: . Determinar la concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida In vitro del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Objetivos específicos: . Determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) In vitro del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615.. . Determinar la concentración mínima bactericida (CMB) In vitro del extracto etanólico de. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. las hojas de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. 2.1. MATERIALES. 2.1.1. Material biológico. MATERIAL Y MÉTODO.  Cepa de Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, que fue obtenido de la compañía. M IC. A. Remel.. UI.  1 kg de las hojas de Piper acutifolium obtenidos en la localidad de Coina, Distrito. O. Solvente:. BI. 2.1.2. Q. de Usquil, Provincia de Otuzco, Región La Libertad.. A. Y.  Agua destilada. RM. Medios de cultivo:. DE.  Agar Mueller – Hinton. FA. 2.1.3. AC I.  Etanol 96 % GL. TE CA.  Caldo Brain Heart Infusion – (BHI)  Agar Soja tripticasa – (TSA) Fármacos. BI BL IO. 2.1.4.  Suero fisiológico 0,9 %  Solución inyectable de Ciprofloxacino 200mg/100mL. Especificaciones: Laboratorio: Amanta Healthcare Limite Forma farmacéutica: solución inyectable Fecha de fabricación: noviembre 2016 Fecha de vencimiento: noviembre 2019 Número de lote: 12110090. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.5. Material de laboratorio - Material de vidrio De uso común en el Laboratorio de Química-física de la facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo.. A. De uso común en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Microbiología. UI. Equipos. Q. -. M IC. y Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo. BI. O.  Incubadora. (Precisión-Scientificco). Y.  Estufa. (Memmert).  Autoclave. (Raypa). -. Otros:. DE. FA.  Refrigeradora. (Indurama). RM. AC I. A.  Equipo Soxlet.(Pyrex). TE CA.  Micropipeta.(Brand). BI BL IO.  Balanza analítica.(Sartorious)  Cocina. (Lizet)  Calculadora. (Casio)  Cámara digital.(Sony)  Tubos de ensayo para macrodilución. (Pyrex). 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2. MÉTODO. 2.2.1. Recolección de la muestra. Las hojas de Piper acutifolium se recolectaron en la localidad de Coina, distrito de Usquil,. A. provincia de Otuzco, Región la Libertad.7° 48' 55.6" Latitud Sur, 78° 25' 0.5" Longitud. UI. Selección de la muestra. BI. O. Q. 2.3. M IC. Oeste, Altitud 3040 msnm, para su uso correspondiente.. Y. El material adquirido fue transportado al laboratorio de Fisicoquímica de la Facultad de. AC I. A. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se eliminó las. FA. Identificación Taxómica de la especie. DE. 2.4. RM. sustancias extrañas presentes en el material vegetal.. TE CA. Un ejemplar de la planta fue llevado al Herbarium Truxillense (HUT) para su identificación taxonómica según el sistema filogenético de la especie y fue depositada en el herbario con el. 2.5. BI BL IO. código: 59208. (ANEXO 1).. Lavado de la droga18.. Luego de la separación de las sustancias extrañas, se procedió a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y después con agua destilada. 2.6. Secado. Después de lavar la muestra se procedió a secar en un tiempo total comprendido entre 1 – 2 semanas, hasta que la humedad final de la muestra no varíe en más 5%- 10%. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7. Molienda. Obtenida la muestra seca se procedió a moler utilizando un mortero, posteriormente con un tamiz N0 0,75 se obtuvieron partículas de tamaño uniforme, almacenándose en un frasco de vidrio que fue forrado con papel aluminio. Obtención del extracto etanólico por el Método de Soxhlet. M IC. A. 2.8. UI. Se realizó una extracción continua tipo Soxhlet en un recipiente de 250 ml de capacidad, marca. O. Q. Pyrex. Se usó un cartucho de papel filtro con 20 g de la especie desecada, y cantidad suficiente. BI. de arena, y 250 ml de etanol de 96OGL como disolvente. La temperatura se controló con una. A. Y. manta eléctrica y se agregó esferas de ebullición al matraz. Hasta agotamiento de la muestra.. AC I. El extracto se mantuvo a temperatura ambiente durante una hora aproximadamente. El extracto. RM. etanólico obtenido se concentró a un cuarto de su volumen en un baño maría a 50 ° C, luego se. FA. colocó en una estufa a 50° C hasta que el peso no varía en más de 0, 2g, obteniéndose 220 mg. TE CA. Obtención de la cepa microbiana. BI BL IO. 2.9. DE. de extracto seco.. La cepa microbiana estándarStreptococcus Pyogenes ATCC 19615, fue obtenida de la compañía Remel. (Anexo 05) 2.10. Efecto antibacteriano del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium (Matico) frente a Streptococcus Pyogenes ATCC 19615. 2.10.1.. Reactivación de la Cepa ATCC 1961519,20.. Para este estudio se utilizó cultivo liofilizado de la cepa de Streptococcus pyogenes ATCC 19615. Sembrando el cultivo liofilizado en un tubo con 5 mL de Caldo Brain Heart Infusion 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (BHI) o Infusión Cerebro Corazón, luego se incubó a 37°C por 24 – 48 horas en condiciones de microaerofilia. Posteriormente se eligió una colonia joven compatible con Streptococcus pyogenes para realizar coloración gram. La cepa se mantuvo en caldo Brain Heart Infusion (BHI) y en Agar Soja Tripticasa (TSA), hasta su posterior utilización. Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI). 2.11.1. Estandarización del inóculo de Streptococcus pyogenes ATCC 19615. Q. UI. M IC. A. 2.11. BI. O. Las cepas de Streptococcus pyogenes ATCC 19615 mantenidos en Caldo Brain Heart. Y. Infusion (BHI) se sombraron en Agar Soja Tripticasa (TSA), y se incubaron bajo. AC I. A. condiciones de microanaerobiosis a 37oC durante 24 horas, con el fin de obtener colonias. RM. jóvenes.. FA. Pasado las 24 horas cada colonia de Streptococcus pyogenes ATCC 19615 se colocaron en. DE. Caldo Brain Heart Infusion (BHI) y obtuvimos suspensiones con una turbidez semejante al. Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI). BI BL IO. 2.12. TE CA. tubo número 0,5 del Nefelómetro de Mac Farland (1,5x 108 bact./mL) .. Se determinó mediante el Método de macrodilución en caldo. Se prepararon los tubos con un volumen final de 5 mL de caldo BHI a los que se les adicionó el volumen necesario del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium hasta alcanzar diluciones seriadas de 0,22 mg / mL, 0,44 mg / mL y 0,66 mg / mL 0,88 mg / mL y 1 mg / mL . A cada uno de los tubos de ensayo se les adicionó una alícuota de 20 μL de la suspensión bacteriana a una concentración de (1,5x 108 bact./mL). Se llevó a incubación a 37°C por 48 horas mediante microaerofilia. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A partir de los tubos que no presentaron desarrollo visible. Se consideró como CMI aquel tubo de menor concentración. Además utilizamos tubos para el control positivo al que se le adicionó 5 ug de Ciprofloxacino y para el control negativo que se le adicionó etanol 96 % GL. Se realizaron ocho repeticiones. Determinación de la concentración mínima bactericida (CMB). A. 2.13. M IC. Se siguió el mismo procedimiento del CMI, a partir de los tubos que no presentaron. Q. UI. desarrollo visible y turbidez; se sembró mediante siembra en superficie 0,1 mL en agar. BI. O. Müller Hinton e incubó a 37 °C por 24 a 48 horas en microaerofilia. Se tomó en cuenta la. Y. densidad microbiana en unidades formadoras de colonias (UFC) del inóculo inicial para el. AC I. A. ensayo de CIM, el punto final de la CMB será la concentración del antimicrobiano para que el. RM. inóculo inicial se reduzca en un 99,9 %. La CMB se define como la concentración más baja. DE. Evaluación Estadística. TE CA. 2.14. FA. demostrando destrucción de la población en 99,9% o más.. Todos los datos fueron expresados mediante el análisis de varianza (ANOVA). Se consideró. BI BL IO. un valor de p<0,005 para establecer significancia estadística.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. IC A. Tabla 1. Concentración mínima inhibitoria (CMI) de las hojas de Piper acutifolium frente a S. pyogenes.. CONCENTRACIÓN. O. Q. UI M. MUESTRAS Y CONTROL. BI. Extracto Etanolico de las hojas de Piper. AC. IA. Y. acutifolium.. M. Control positivo(Ciprofloxacino). FA R. Control negativo (Alcohol). 0,22 mg / mL 0,44 mg / mL 0,66 mg / mL 0,88 mg / mL 1 mg / mL 5 ug / mL 96%. CMI (turbidez). +++ ++ + 0 0 0 +++. DE. Fuente: Datos obtenidos durante la investigación.. IO TE. 0: Sin turbidez. CA. Leyenda:. BL. +: Menor turbidez. BI. ++: Mediana turbidez +++: Mayor turbidez Escala de Likert ( ): 0: Sin turbidez; 1: Menor turbidez; 2: Mediana turbidez; 3: Mayor turbidez (Anexo 10). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. Tabla 2.Concentración mínima bactericida (CMB) de las hojas de Piper acutifolium frente a S. pyogenes.. CONCENTRACIÓN. Y. BI. O. Q. MUESTRAS Y CONTROL. AC. IA. Extracto Etanolico de las hojas de Piper. FA R. M. acutifolium.. DE. Control positivo(Ciprofloxacino). 96%. IO TE. CA. Control negativo (Alcohol). 0,22 mg / mL 0,44 mg / mL 0,66 mg / mL 0,88 mg / mL 1 mg / mL 5 ug / mL. BI. Leyenda:. BL. Fuente: Datos obtenidos durante la investigación.. UFC: Unidad Formadora de Colonia ----: Fuera del parámetro (30-300UFC). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. CMB (recuento de UFC). ------375 148 32 5 -----.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. En este estudio se ha demostrado la capacidad del efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de las hojas de la Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes. El matico (Piper acutifolium) abre posibilidades en el campo de la fitoterapia e investigación. A. clínica, siendo una nueva alternativa natural, de bajo costo y con efecto bactericida para el. M. IC. tratamiento de la faringitis estreptocócica. De esta manera aprovechamos que el Perú. O Q. UI. teniendo extraordinaria variedad de recursos naturales y vivos que pueden ser económica y. BI. científicamente beneficiosos.. IA. Y. En la tabla 1 con respecto a la Concentración mínima inhibitoria (CMI), el extracto etanólico. AC. de las hojas de la Piper Acutifolium muestra actividad frente a Streptococcus pyogenes desde. FA R. M. la concentración de 0,66mg/mL debido a que desde este valor se empieza a notar la. DE. disminución de la turbidez del inoculo S. pyogenes en el medio de caldo infusión cerebro corazón (BHI), mediante una dilución en solución salina, esta solución tiene una. IO TE. CA. concentración aproximada de 1x106 – 5x106 UFC/mL. De esta manera se comparó con el. BL. tubo No 5 de McFarland. (Anexo 3).. BI. Benites A. evalúo el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólio de Piper aduncum (matico) sobre Streptococcus pyogenes Grupo A. Preparó un extracto etanólico de Piper aduncum en cinco concentraciones de: 5%, 25%, 50%, 75% y 100%; además utilizó como control Penicilina de 10uL. El concluye que al evaluar la concentración mínima inhibitorio, se determinó que todas las concentraciones inhibieron el crecimiento de Streptococcus pyogenes14.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Al comparar con el presente estudio se demostró que las concentraciones obtenidas del extracto etanólico de Piper acutifolium, generaron un efecto positivo en cuanto a la concentración mínima inhibitoria, desde la concentración de 0,66mg/mL. Al analizar el efecto de las concentraciones sobre el crecimiento bacteriano, se observa que existe diferencia estadística significativa (F0 es mayor que el F) entre los resultados de las diferentes concentraciones del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium. (Anexo. M. IC. A. 08). O Q. UI. En la Tabla 2. Se muestra la inhibición del crecimiento bacteriano por las diferentes. BI. concentraciones del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium; observándose que. Y. la concentración de 1 mg / ml impide la formación del mayor número de unidades. AC. IA. formadoras de colonias, lográndose un porcentaje de inhibición >99 %. Se puede decir que. M. a medida que aumenta la concentración del extracto disminuye el recuento de unidades. FA R. formadoras de colonias, esta inhibición del crecimiento del Streptococcus pyognes se. DE. debería a la presencia de los metabolitos (Flavonoides en gran cantidad) presentes en el. IO TE. CA. extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium. Tello Z. evaluó la actividad antimicrobiana de aceites esenciales de las hojas de Aniba. BI. BL. rosaeodora, Piper aduncum y Citrus medica frente a cepas in vitro de Staphylococus aureus, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus cereus. Cuyos volúmenes utilizados fueron de 50 µl, 25 µl, 12,5 µl, 6,25 µl y 3,50 µl para cada tratamiento, con una concentración de 45 ,11 mg/ml, 22,55 mg/ml, 11,27 mg/ml, 5,64 mg/ml y 3,15 mg/ml de aceite esencial de Piper aduncum. La concentración máxima bactericida (CBM) no se calculó ya que la sensibilidad de las cepas a los aceites esenciales fue reducida 20.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Al comparar con el presente estudio se demostró que las concentraciones obtenidas del extracto etanólico de Piper acutifolium, generaron un efecto positivo desde la concentración de 1 mg/mL en cuanto a la concentración mínima bactericida. Al comparar los resultados obtenidos en la tabla 2. Se aprecia que existe una diferencia estadísticamente significativa (F0 es mayor que F) en el recuento de unidades formadoras de. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. IC. A. colonias. (Anexo 09). 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. . CONCLUSIONES. La concentración mínima inhibitoria (CMI) del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes ATCC 19615 in vitro fue 0,66 mg/mL. . La concentración mínima bactericida (CMB) del extracto etanólico de las hojas. IC. A. de Piper acutifolium sobre Streptococcus pyogenes, ATCC 19615 in vitro fue 1. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI. O Q. UI. M. mg/mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.. Kirtikar K; Basu B. Indian Medicinal Plants. [Internet] 1993; [Fecha de acceso: 25 de febrero. del. 2018].. 3. (5):. en:. M IC. A. https://http://riull.ull.es/xmlui/handle/915/44.. Jacobson M; Crosby D. Naturally Ocurring Insecticides (Marcel Dekker), Pure Appl.. UI. 2.. Disponible. 2130.. O. Q. Chem. [Internet] 2005; [Fecha de acceso: 11 de mayo del 2018]. 77 (1):25–. BI. 40.Disponible en: http://http://citeseerx.ist.psu.edu/viewdoc/download. pdf.. Y. Obregón L. Fitoterapia: Importancia de su desarrollo al servicio de salud FITO. Ciencia. A. 3.. en:. http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/ciencia/. RM. Disponible. AC I. e Investigación. [Internet] 2009; [Fecha de acceso: 11 de mayo del 2018]. 12(1): 41-47.. Machado L. Materias primas vegetales para la industria de fitofármacos FITO. Ciencia. DE. 4.. FA. 07v12n1.pdf.. v12_n1/pdf/a. en:. http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/cie. BI BL IO. 47.Disponible. TE CA. e Investigación. [Internet] 2009; [Fecha de acceso: 11 de mayo del 2018]. 12(1): 41-. ncia/v12_n1/pdf/a07v121.pdf. 5.. Kirtikar K ; Basu B. Indian Medicinal Plants. [Internet] 1933; [Fecha de acceso: 14 de julio del 2018]. 2 (5): 2128-2132. Disponible en: https://http://riull.ull.es/xmlui/ handle/915/44.. 6.. Council of Scientific and Industrial Research, New Delhi.The Wealth of India. Raw Materials. [Internet]. 1969; [Fecha de acceso: 11 de mayo del 2018]. 8(5): 83-. 87.Disponible en: https://http://riull.ull.es/xmlui/handle/915/44.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 7.. Horna G, Silva M, Vicente W y Tamariz J. Concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida de ciprofloxacina en bacterias uropatógenas aisladas en el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas. [Internet] 2005; [Fecha de acceso:. 23. de. junio. del. 2018].. 16(1):. 39-44.. Disponible. en:http://www.scielo.org.pe/pdf/ rmh/v16n1/v16n1ao6.pdf. Paulina Fernanda Cruz Ati. Elaboración y control de calidad del gel antimicótico de. A. 8.. M IC. Manzanilla (Matricaria Chamomilla), Matico (Aristiguietia Glutinosa) y Marco. Q. UI. (Ambrosia Arborescens) Para NEO- FÀRMACO. Facultad de Farmacia y Bioquímica.. BI. O. Escuela Superior Politécnica del Chimborazo. Ecuador. [Internet] 2009. [01 de julio del Disponible. en:. Y. 2018].. Flores E, Jimenez A, Ravelo A, Bourdy G, Gimenez A. Estudio Fitoquimico de catorce. RM. 9.. AC I. A. http://dspace.espoch.edu.ec/bitstream/123456789/218/1/56T00192.pdf.. FA. especiales del Genero Piper con actividad antifúngica y/o Leishmanicida in vitro.. DE. Biofarbo. [Internet] 2000; Fecha de acceso: 01 de julio del 2018]. 8(8):9-16.[Disponible. TE CA. en: http://.ops.org.bo/textocompleto/rnbiofa20000802.pdf. 10. Flores N, Jimenez I, Gimenez A, Ruiz G, Gutierrez D, Genevieve B, and Isabel L,. BI BL IO. Bazzocch. Benzoic Acid Derivatives from Piper Species and Their Antiparasitic Activity.. American. Chemical. Society. and. American. Society. of. PharmacognosyPublished. [Internet] 2008; [Fecha de acceso: 01 de julio del 2018]. 71(9): 1538-1543. Disponible en: htt:// scihub.io/10.1021/np800104p. 11. Brack A. Diccionario enciclopédico de plantas útiles del Perú. Cusco: Centro de Estudios Regionales Andinos “Bartolomé de las Casas”. Rev. Perú. med. exp. salud publica . [Internet] 2013; [Fecha de acceso: 14 de mayo del 2018]. 30(4): 609. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Disponible. en:http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1726463420130. 00400011&script=sci. 12. Luziatelli G, Sørensen M, Theilade I, Mølgaard P. Asháninka medicinal plants: a case study from the native community of Bajo Quimiriki, Junín, Peru. J Ethnobiol Ethnomed. [Internet] 2010; [Fecha de acceso: 14 de mayo del 2018]. 6(21): 2,3. Disponible. M IC. A. en:https://ethnobiomed.biomedcentral.com/articles/10.1186/1746-4269-6-1. UI. 13. Valadeau C, Castillo J, Sauvain M, Lores A, Bourdy G. The rainbow hurts my skin:. O. Q. medicinal concepts and plant uses among the Yanesha (Amuesha), an Amazonian. BI. Peruvian ethnic group. J Ethnopharmacol. [Internet] 2010; [23 de junio del 2018]. en:https://www.journals.elsevier.com/journal-of-. Y. Disponible. A. 127(1):175-92.. AC I. ethnopharmacology. RM. 14. Benites A. Efecto bactericida in vitro de Piper aduncum sobre Streptococcus. DE. FA. pyogenes. [Internet] 2017. [Fecha de acceso: 01 de julio del 2018]. Disponible en: http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/9372/BenitesRodriguez_A.pdf?. TE CA. sequence=1&isAllowed=y.. BI BL IO. 15. Ministerio de Salud de la Nación. Abordaje Integral de las Infecciones Respiratorias Agudas. Guía para el Equipo de Salud. Dirección de Epidemiología- Ministerio Argentina. GUIAS-MED_Abordaje IRA_int_2ºed.indd. [Internet] 2011. [Fecha de acceso: 11 de julio del 2018]. Disponible en: http://www.msal.gov.ar/images/stories/ epidemiologia/pdf/enf-resp-guia.pdf. 16. Taroco R, Seija V y Vignoli R. Métodos de estudio de sensibilidad antibiótica. [Internet] 2008; [Fecha de acceso: 11 de julio del 2018]. 2(36): 663,664. Disponible en: http://higiene.edu.uy/cefa/2008/BacteCEFA36.pdf. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 17. Ruiz J. Actividad Antifungica In Vitro y Concentración Mínima Inhibitoria mediante Microdilución de ocho plantas medicinales.Facultad de Farmacia y Bioquímica UNMSM. Lima. [Internet] 2013; [Fecha de acceso: 23 de juniodel 2018]. Disponible en: http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/cybertesis/2590/1/Ruiz_qj.pdf. 18. Collins, C. Métodos Microbiológico. España, ED. Acribia S.A; p. 203, 374-376. 1989.. M IC. A. 19. Clinical Laboratory Standard Institute. 2013. Performance Standards for Antimicrobial. UI. Susceptibility Testing; Twenty third Information Supplement. CLSI (Clinical and. BI. O. Q. Laboratory Standards Institute); M100-S23. Vol 33 (1).. Y. 20. Tello Z. Actividad Antimicrobiana in vitro de aceites esenciales de las hojas de Aniba. AC I. A. rosaeodora, Piper aduncum, y Citrus medica frente a cepas de Staphylococus aureus,. del. 2018].. en:. http://repositorio.unapiquitos.. BI BL IO. TE CA. DE. edu.pe/handle/UNAP/4769. Disponible. FA. setiembre. RM. Pseudomonas aeruginosa y Bacillus cereus. [Internet] 2013; [Fecha de acceso: 25 de. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ANEXO 01. Figura 1: Identificación taxonómica según el sistema filogenético de la especie Piper acutifolium. En el Herbarium Truxillense (HUT).. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°2. Concentración del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium “matico” en mg de extracto seco /ml 34,677g. Peso del vaso luego del secado:. 34,897g. Cantidad de extracto seco obtenida:. 0,22 g de Extracto seco.. Volumen agregado de extracto a la placa:. 10 ml. 1 ml. A. X. Y. 10 ml. AC I. 0,22 g de Extracto seco. BI. O. Q. UI. M IC. A. Vaso vacío:. FA. RM. X = 0,022 g/ml de Extracto seco. DE. 0,022 g/ml = 22 mg/ml de Extracto seco. TE CA. 1000 µL. 22 mg de Extracto seco. BI BL IO. Volumen. Extracto etanolico seco. 10 µL. 0,22 mg de Extracto seco. 20 µL. 0,44 mg de Extracto seco. 30 µL. 0,66 mg de Extracto seco. 40uL. 0,88 mg de Extracto seco. 50uL. 1 mg de Extracto seco. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ANEXO 03. Figura 2. Concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico a 10uL (0,22 mg / mL), 20uL (0,44 mg / mL), 30uL (0,66 mg / mL), 40uL (0,88 mg / mL) y 50uL (1 mg / mL) frente a S. pyogenes.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ANEXO 04. 40uL. 30uL. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. 50uL. Figura 3. Concentración mínima bactericida de extracto etanólico a 30uL (0,66 mg / mL), 40uL (0,88 mg / mL) y 50uL (1 mg / mL) frente a S. pyogenes. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 05. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. CERTIFICADO DE CALIDAD DE LA CEPA Streptococcus pyogenesATCC 19615. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 06 Tabla 1: Manual de procedimientos para la prueba de sensibilidad Antimicrobiana por el método de disco difusión. Ministerio de Salud del Perú- Instituto Nacional De. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Salud.2002.. QUINOLONA: Ciprofloxacino 200 mg / 100 mL (Solución inyectable ). 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ANEXO 07. BI BL IO. TE CA. DE. FA. Figura 1: Dilución de la cepa Streptococcus pyogenes ATCC 19615.. Figura 2: Cultivo de la Cepa en agar Mueller Hinton- Sangre: verificación del crecimiento de la cepa 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ANEXO 08. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Concentración Mínima inhibitoria Concentración de extracto. ΣYi. Inhibición. Yi prom. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 0.22 mg/mL. 3. 3. 3. 2. 3. 3. 3. 3. 23.00 2.875. 0.44 mg/mL. 2. 2. 3. 3. 2. 2. 2. 2. 18.00. 2.25. 0.66 mg/mL. 1. 2. 1. 2. 1. 1. 1. 1. 10.00. 1.25. 0.88 mg/mL. 0. 1. 0. 0. 0. 0. 0. 1. 2.00. 0.25. 1 mg/mL. 0. 1. 0. 0. 0. 1. 1. 0. 3.00. 0.375. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. 1. DE. Análisis de varianza para los resultados de inhibición. Suma de cuadrados. Grados de Libertad. Cuadrado medio. Fo. F (tabla). Inhibición. 114.80. 4. 28.70. 15.41. 3.5. Error. 65.20. 35. 1.86. Total. 180.00. 39. 30.56. BI BL IO. TE CA. Fuente de Variación. Interpretación: Puesto que el valor de Fo es mayor que el F (tabla); se rechaza la hipótesis nula, Ho y se concluye que las medias de los tratamientos difieren; esto es que; las concentraciones de extracto afectan significativamente la inhibición.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 09. Concentración Mínima Bactericida. 3 383 148 31. 4 374 149 33. 1498.00 593.00 129.00. 187.25 74.125 16.125. Y. BI. O. Q. UI. 0.66 mg/ml 0.88 mg/ml 1 mg/ml. 2 373 153 35. M IC. 1 368 143 30. Yi prom. A. ΣYi. Concentración de extracto. Inhibición. 317108.80. Error. 130797.20. DE. TE CA. 447906.00. Cuadrado medio. Fo. F (tabla). 4. 79277.20. 11.52. 5. 59. 35. 6884.06. 39. 86161.26. BI BL IO. Total. Grados de Libertad. RM. Suma de cuadrados. FA. Fuente de Variación. AC I. A. Análisis de varianza para los resultados de inhibición.. Interpretación: Puesto que el valor de Fo es mayor que el F (tabla); se rechaza la hipótesis nula, Ho y se concluye que las medias de los tratamientos difieren; esto es que; las concentraciones de extracto afectan significativamente la inhibición.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40)

Referencias

Documento similar