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Efecto de los extractos de croton alnifolius (tunga) frente a las cepas de salmonella typhi y escherichia coli in vitro

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. UI M. IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. IA. Y. BI. O. Q. TRABAJO DE INVESTIGACION I. TE. AUTORES:. CA. DE. FA. RM. AC. EFECTO DE LOS EXTRACTOS de Croton alnifolius (TUNGA) FRENTE A LAS CEPAS DE Salmonella typhi Y Escherichia coli IN VITRO.. BI BL. IO. MORILLO RAMOS VICTORIA GIOVANNA VICUÑA VILLACORTA, KARLA YANNET. ASESORES: M.Sc. CASANOVA HERRERA, Hugo E Mblgo. ALAYO ESPINOZA, Gerardo. TRUJILLO – PERÚ 2011. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA A DIOS, por darnos la vida y regalarnos unas maravillosas familias. Por brindarnos. su. protección. y. darnos las fuerzas necesarias. IC A. para lograr concluir con este. O. Q. UI M. trabajo.. Y. BI. A NUESTROS PADRES,. IA. por darnos la oportunidad de. RM. AC. vivir y por haber estado siempre. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. con nosotras en todo momento, brindándonos todo su apoyo, comprensión y amor. Y por enseñarnos siempre a luchar por lo que se quiere con tenacidad y confianza en nosotras mismas, sin pasar por encima de los demás.. Giovanna y Karla. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS A nuestros jurados que participaron. leyendo,. opinando,. corrigiendo,. teniéndonos paciencia y dándonos. ánimo.. De. manera especial al Mg.. IC A. Prof. William Sagástegui más. presentación. en. la. de. este. Q. asesor. UI M. Guarniz, por ser como un. AC. IA. Y. BI. O. informe.. RM. A todas las personas que. FA. desinteresadamente brindaron. su. nos ayuda,. IO. TE. CA. DE. comprensión, y enseñanzas.. BI BL. A las personas que nos acompañaron. en. los. momentos de crisis y en los momentos de felicidad.. GIOVANNA Y KARLA iii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACION. Señores miembros del Jurado: Dando cumplimiento a lo establecido por el Reglamento de Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de. IC A. Trujillo, sometemos a vuestra consideración y elevado criterio Profesional el. UI M. presente informe de Investigación I titulado:. O. Q. “EFECTO DE LOS EXTRACTOS Croton alnifolius (TUNGA) FRENTE A LAS. propicia. esta. oportunidad. para. AC. Es. IA. Y. BI. CEPAS DE Salmonella typhi Y Escherichia coli IN VITRO”.. manifestar. nuestro. sincero. RM. reconocimiento a nuestra alma Máter y toda su plana Docente, que con su. FA. capacidad profesional, científica y sobre todo humana contribuyen al. CA. DE. cumplimiento de nuestra formación profesional.. TE. Dejamos a su consideración, Señores miembros del jurado, la. BI BL. IO. calificación del presente informe de Trabajo de Investigación Científica.. Trujillo, Mayo del 2011. Victoria Giovanna Morillo Ramos. Karla Yannet Vicuña Villacorta. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El estudio tuvo como objetivo “Determinar la actividad antibacteriana de los extractos de las hojas de Croton Alnifolius (Tunga) frente a cepas de Salmonella Typhi y Escherichia coli in vitro”. En esta investigación, se utilizó el método de difusión de Kirby Bauer. IC A. modificado, para lo cual se administró concentraciones de 8, 16, 24, y 32 µg en 10, 15,. UI M. 30 y 40 µl respectivamente, de los extractos hexánico, etanólico y acuoso de las hojas de Croton alnifolius (Tunga) a cepas de Salmonella Typhi y Escherichia coli, se. BI. O. Q. dejó en incubación por un periodo de 24 horas y se procedió luego a dar lectura.. Y. Las lecturas de los halos de inhibición demostraron que a partir de. AC. IA. concentraciones de 16 µg en 15 µl del extracto hexanólico de las hojas de Croton. RM. Alnifolius (Tunga), se obtuvo efecto antibacteriano eficaz, tanto para Salmonella. FA. Typhi como para Escherichia coli. Sin embargo; en los extractos etanólico y acuoso. DE. de las hojas de Croton Alnifolius (Tunga) solo obtuvo eficacia, la máxima. CA. concentración administrada de 32 µg en 40 µl, en ambas cepas.. IO. TE. De estos resultados se concluye lo siguiente:. BI BL. Que los extractos de Croton Alnifolius (Tunga) tienen actividad antibacteriana efectiva a la concentración de 32 µg en 40 µl frente a Salmonella Typhi y Escherichia coli in vitro.. Palabras clave: Crotón alnifolius, Tunga, Escherichia coli, Salmonella typhi.. v. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The study aimed to "Determine the antibacterial activity of extracts from the leaves of Croton Alnifolius (Tunga) against strains of Salmonella typhi and Escherichia coli in vitro. In this study, we used the diffusion method of Kirby Bauer amended, which was. IC A. given to concentrations of 8, 16, 24, and 32 µg in 10, 15, 30 and 40 µl respectively, of. UI M. the hexane, ethanol and aqueous the leaves of Croton alnifolius (Tunga) strains of. Q. Salmonella typhi and Escherichia coli, allowed to incubate for a period of 24 hours. BI. O. and then proceeded to read out.. IA. Y. The readings of the halos of inhibition showed that concentrations from 16 µg in. AC. 15 µl hexanol extract from the leaves of Croton Alnifolius (Tunga), effective. RM. antibacterial effect was observed for both Salmonella typhi and Escherichia coli.. FA. However, in ethanol and aqueous extracts of leaves of Croton Alnifolius (Tunga) only. DE. got effectiveness, the maximum concentration of 32 µg administered in 40 µl, in both. CA. strains.. IO. TE. From these results we conclude the following:. BI BL. That extracts from Croton Alnifolius (Tunga) have effective antibacterial activity concentration of 32 µg in 40 µl against Salmonella typhi and Escherichia coli in vitro.. Keywords: Croton alnifolius, Tunga, Escherichia coli, Salmonella typhi.. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE Página ii. AGRADECIMIENTOS………………………………………………. iii. PRESENTACION……………………………………………………. iv. IC A. DEDICATORIA………………………………………………………. Q. UI M. RESUMEN…………………………………………………………… v vi. BI. O. ABSTRACT…………………………………………………………... INTRODUCCION………………………………………………. 1. II. MATERIAL Y MÉTODO……………………………………….. 6. RM. AC. IA. Y. I. DE. FA. III RESULTADOS…………………………………………………. 11 15. CA. IV DISCUSION…………………………………………………….. IO. TE. V CONCLUSIONES……………………………………………… 21. BI BL. VI REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS…………………………. 22 VII ANEXOS………………………………………………………… 28. Vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCION. En el mundo son muchos los problemas de salud que aquejan a la población en general, en especial los relacionados a infecciones entéricas, que son los problemas sanitarios más relevantes en países en vías de desarrollo, donde la alta incidencia en la población general junto con sus elevados índices de morbi-mortalidad entre determinados grupos etarios como son niños y ancianos hace que este tipo de. IC A. patología constituya un motivo de especial interés tanto desde el punto de vista clínico como microbiológico. En la actualidad, las enfermedades infecciosas, como el tétanos. UI M. entre otras, a las cuales se consideró históricamente entre las principales causas de. O. Q. muerte en los niños, han sido reemplazadas por patologías gastrointestinales y. BI. malnutrición. Estas problemáticas han adquirido un renovado interés en nuestro país,. IA. Y. planteando la necesidad de trabajar desde diferentes ámbitos político-sanitarios a fin. AC. de controlar y solucionar una situación sanitaria alarmante, por la cantidad de muertes. RM. que ella implica y la responsabilidad que supone por parte de los organismos públicos. DE. FA. de salud 1, 2, 3, 4.. CA. En el Perú y en el mundo, de todos los microorganismos que podemos encontrar. TE. como causantes de problemas entéricos tenemos como la más común, a las cepas de. IO. Escherichia coli patógeno entérico, y en particular los enteropatógenos clásicos. mundo. y. BI BL. (EPEC), causantes de aproximadamente 630 millones de casos de diarrea en el aproximadamente. 775,000. a. más,. muertes. al. año. afectando. fundamentalmente a la población infantil de los países en vías de desarrollo. Este agente infeccioso puede tener dos mecanismos frecuentes: una por medio de una enterotoxina (no inflamatorio) y la otra por medio de una citotoxina, de forma invasiva (inflamatoria); siendo la principal fuente de infección la contaminación fecal de agua y alimentos, cuya dosis infectiva es de 108 UFC (unidades formadoras de colonias) 2, 5, 6.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Otro microorganismo es la Salmonella typhi que tiene un mecanismo penetrante y se aloja frecuentemente en el intestino delgado distal, además causa la fiebre tifoidea que es la enfermedad más grave causada por este género. Pero en sí como todo el género Salmonella está ampliamente distribuido en la naturaleza, tiene al hombre y a los animales como sus reservorios primarios, con una especificidad por los huéspedes humanos. Se puede suponer que todas las especies y cepas de Salmonella son patógenas para el hombre, y que los síndromes que la enfermedad origina se dividen. IC A. en varios tipos clínicos distintos; sin embargo para la contaminación con este género. UI M. implica contacto con una persona con infección aguda, un portador crónico (aves,. Q. mascotas) o comida y/o bebida contaminadas. En el año 2000 en EEUU la fiebre. BI. O. tifoidea implicó 21,6 millones de infecciones y 216.000 muertes, es por ello que este. Y. debe ser un tema tratado no solo por estos índices sino también porque es de mayor .. 2, 7, 8. AC. IA. preponderancia en población de recursos económicos bajos. RM. Esta compleja situación nos permite volver la vista a nuestros recursos naturales. FA. para buscar alternativas de solución ante este problema de salud de las personas más. DE. pobres, y que muchas veces utiliza plantas por sus virtudes terapéuticas, pero sin. CA. tener conocimiento de su modo de actuar, solo por buscar una cura a sus dolencias.. TE. Además actualmente y por si fuese poco la falta de medios económicos también se. BI BL. IO. suman los serios problemas de resistencia a los medicamentos antimicrobianos, lo cual se presenta con diversos microorganismos dentro de los cuales cabe destacar Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa, en especial en el ámbito hospitalario que requieren tratamientos alternativos más costosos y, muchas veces, de mayor toxicidad; existiendo así un gran interés en la investigación de sustancias antimicrobianas de plantas y prueba de ello es que diferentes compañías farmacéuticas centran sus esfuerzos en este campo. Por otro lado, la población está cada vez más interesada en este tipo de “terapias alternativas”, como lo demuestran las cifras crecientes del mercado de medicinas botánicas o herbales en. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. todo el mundo. En nuestro país las plantas medicinales son importantes dentro de la Medicina Folklórica, se las emplea diariamente y con gran éxito en numerosos campos de la misma 9, 10, 11. La OMS calcula que en todo el mundo, de la cuarta parte a la mitad de los productos farmacéuticos dispensados, tienen origen en plantas ya sea como extractos o como principios activos puros aislados de ellas o bien como fármacos semisintéticos.. IC A. A su vez, la OMS ha estimado que el 80% de los habitantes de los países en vías de desarrollo dependen de las plantas medicinales para satisfacer sus necesidades de. Q. UI M. atención primaria de salud 12,13, 14.. BI. O. En la Universidad Nacional de Trujillo existen trabajos sobre la actividad. Y. antibacterial de algunas plantas medicinales como Cajanus cajan “frejol mantecoso,”. AC. IA. Citrus limón (L.) “limonero”, Meyenii (walp) “matico, Salvia officinalis L. “salvia”,. RM. que demuestran un resultado positivo, así mismo, los usos empíricos practicados con. FA. Cheilanthes myriophylla (Desv.), conducen a la posibilidad que éstas ejercen efecto. DE. antibacteriano sobre ciertos microorganismos como Streptococcus pyogenes,. CA. Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis. Así mismo el año 2000, se. TE. realizó un estudio titulado: “Estudio Fitoquímico del Latex de Croton baillonianus var.. IO. pachyphyllus “cabe - cabe” y ensayo “in vitro” de la Actividad Antibacteriana”; donde. BI BL. se comprobó efecto antibacteriano contra las cepas de Escherichia. coli, Salmonella Thyphi y Pseudomona aeruginosa (Santos y Villanueva) 10, 13, 14,15. La especie Croton alnifolius se puede encontrar en África, Asia y además en América del Sur, y se extiende desde el noreste de Ecuador a través de la sierra peruana y las estribaciones adyacentes de Bolivia. Pertenece a la División de las Angiospermae, Clase de las Dycotyledoneas, Sub-clase de las Methachlamydeas, Orden de las Geraniales, Familia de la Euphorbiaceae (a la cual desde la antigüedad se han atribuido efectos curativos, algunas especies de esta familia son usadas para el. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. tratamiento de cáncer, tumores y verrugas desde el tiempo de Hipócrates como medicina popular por sus múltiples efectos); Género Croton L. y finalmente la especie es Croton alnifolius, según el sistema de clasificación propuesto por Adolfo Engler en la decimo segunda edición de su Syllabus Der Pflanzen Famillien publicado en dos tomos en el año 1954 y 1964 respectivamente 16, 17, 18. El género Croton, comprende más de 1 500 especies distribuidas en regiones. IC A. tropicales y subtropicales de todo el mundo, muchas de estas especies son utilizadas por la tradición popular para el tratamiento de numerosas enfermedades. Por ejemplo. UI M. un gran número de poblaciones indígenas, especialmente en Sudamérica utilizan el. O. Q. látex o infusiones de las hojas o corteza de diferentes especies de Croton para el. Y. BI. tratamiento de heridas, dolencias estomacales e inflamación.. AC. IA. En nuestro País, las plantas de este género, en especial Croton alnifolius L., crecen. RM. en terrenos arenosos, pendientes a laderas rocosas, secas, quebrada areno-rocosas;. FA. ubicadas entre 2000 a 2400 m.s.n.m en los departamentos de La libertad, Lima y. DE. Arequipa, y en Cajamarca, donde los pobladores de dicha zona la usan en el. CA. tratamiento empírico para solucionar problemas de salud como: enfermedades. TE. diarreicas agudas, bronquiales y como Leishmanicida sobre Leishmania peruviana 18.. BI BL. IO. La especie de Croton alnifolius, se encuentra en las alturas de la localidad de La Esperanza, Provincia de Santa Cruz, Departamento de Cajamarca, hasta ahora no ha sido estudiado y se considera que podría servir de mucha utilidad en el tratamiento de infecciones a nivel gastrointestinal, que contribuyan a solucionar estas patologías en esta localidad y departamento, donde estos problemas ocupan un tercer lugar dentro de las patologías más frecuentes; y según los resultados del Censo de Población y Vivienda del año 2007, en esta localidad solo el 38.6% de los pobladores de la provincia cuentan con seguro de salud, siendo la mayoría (29.2%) de tipo únicamente Seguro Integral de Salud (SIS), por lo que la mayoría de esta población, usa como. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. tratamiento tradicional para infecciones entéricas, la planta vulgarmente denominada “Tunga” (Croton Alnifolius) 19, 20 . Por tal motivo y considerando que, los productos naturales constituyen, en la mayoría de la población, una alternativa primaria para combatir diversas enfermedades infecciosas, se propuso realizar el presente trabajo de investigación para lo cual se plantearon los siguientes objetivos: Preparar extractos de las hojas de Croton Alnifolius “Tunga” utilizando solventes. IC A. . Q. Determinar el efecto antibacterial de los extractos de las hojas de Croton. O. . UI M. de polaridad creciente.. BI. Alnifolius “Tunga” frente a cepas de Salmonella Typhi y Escherichia coli in. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. vitro.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1. MATERIAL: 2.1.1 MATERIAL BOTÁNICO Se recolectó 2 Kg de Hojas de Croton alnifolius (Tunga) de las alturas de la localidad de La Esperanza Provincia de Santa Cruz, Departamento de Cajamarca.. IC A. Se seleccionó las hojas, eliminando todo elemento extraño, siendo tratadas. UI M. inmediatamente con una solución de alcohol 96º y enseguida se llevó a ventilación con la finalidad de evaporar el exceso de humedad; procediéndose a desecar a. O. Q. temperatura ambiente durante semanas. Luego se dividió en bolsas de papel. BI. periódico con un contenido de 10 gr de droga cada una para luego ser llevado a. RM. CLASIFICACION TAXONOMICA. AC. IA. Y. estufa a una Temperatura de 39ºC hasta obtener peso constante.. FA. Se procedió a la identificación y clasificación taxonómica de la especie. DE. recolectada en el Herbarium truxillense (HUT) “Flora Peruana”, de la Universidad. TE. CA. Nacional de Trujillo (ver Anexo 1). BI BL. IO. 2.1.2. MATERIAL MICROBIOLOGICO Cultivos puros de Salmonella Typhi y Escherichia coli enteropatógeno aislados de muestras fecales positivas a estos microorganismos y proporcionados por el Laboratorio de Bacteriología, del Departamento Académico de Microbiología y Parasitología, de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.3. MEDIOS DE LABORATORIO: 2.1.3.1 Material de vidrio: los de uso común. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.3.2. Medios de cultivo, soluciones y solventes - Agar nutritivo - Agar Muller Himton - Solución Salina Fisiológica 0.85% - Etanol 96° “Dropaksa” - Hexano “Dropaksa”. IC A. - Agua destilada. 2.1.3.3 Equipos e Instrumentos:. UI M. - Molino Eléctrico. O. Q. - Estufa Precisterm (Selecta). BI. - Refrigeradora Coldex.. IA. Y. - Autoclave “ Airshoft”. AC. - Horno “Mussaripari”.. RM. - Nefelómetro de Mc Farland (1,5x108 cél/mL). FA. - PHmetro digital “Cole Parmer”. DE. - Micropipeta de volumen variable “Jencons”. CA. - Estufa “Memmert. TE. - Estufa Precisterm (Selecta). BI BL. IO. - Balanza de dos platillos - Balanza Analítica. 2.1.3.4. Otros: algodón, Cocina Eléctrica (coldex), etc. 2.2. MÉTODO 2.2.1. OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS 21 Se procedió a la preparación de los extractos con solventes de polaridad creciente, hexano, etanol y acuoso, teniendo en cuenta el tamaño de partícula, que no sea tan grande ni tampoco tan pequeña. Los extractos se obtuvieron por. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. agitación, por maceración, calor y filtración en forma secuencial. Estos extractos sirvieron para el enfrentamiento con las cepas en estudio, como fueron la bacteria Gram negativa Salmonella typhi y la bacteria Escherichia coli que también es Gram negativa. Luego se tapó herméticamente y se conservó en refrigeración para su posterior evaluación en ensayos de difusión (ver Anexo Nº 2). FUNDAMENTO:. IC A. El método para la obtención de los extractos de plantas medicinales, consiste en. UI M. poner en contacto la droga con solventes de diferente polaridad, bajo. Q. determinadas condiciones, logrando solubilizar los metabolítos secundarios que. BI. O. esté presente.. IA. Y. Se fundamenta en los efectos de polaridad de los solventes, el pH y la. AC. temperatura del medio sobre la solubilidad de los metabolítos secundarios de las. RM. plantas medicinales; es decir que las fuerzas intermoleculares, además de afectar. FA. los puntos de ebullición y de fusión de las sustancias, determinan las propiedades. DE. de solubilidad de los compuestos orgánicos permitiendo la separación de los. TE. CA. metabolítos secundarios.. BI BL. IO. 2.2.2. ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS 2.2.2.1. ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA POR EL MÉTODO DE DIFUSIÓN DE KIRBY BAUER MODIFICADO23 Este método se fundamenta en la difusión de una muestra a través de una capa de agar solidificado, en una extensión tal que el crecimiento de microorganismos sensibles es inhibido alrededor de la zonas que contiene una concentración conocida del extracto de la especie en estudio Croton alnifolius (Tunga).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2.2. PREPARACIÓN DEL INÓCULO22 Se tomó tres a cuatro colonias del cultivo original de cada germen a ensayar con el asa bacteriológica y se suspendió en 5 mL de solución salina fisiológica al 0.85%.. Se dejó en reposo hasta alcanzar una densidad. bacteriana similar a la turbidez del tubo Nº 0,5 del Nefelómetro de Mc Farland (1,5x108 cél/mL).. IC A. 2.2.2.3. PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO22. UI M. En el caso de Salmonella Typhi y Escherichia coli se utilizó como. O. Q. medio de cultivo Agar Mueller Hinton. Se virtió 20 mL en cada una de las 24. BI. placas petri hasta obtener un grosor homogéneo de aproximadamente 4 mm de. IA. Y. espesor. Las placas fueron mantenidas a 37° en una estufa, durante 60 min,. RM. AC. con la finalidad de eliminar la humedad de la superficie.. FA. 2.2.2.4. SIEMBRA DE LAS PLACAS23. DE. Mediante una pipeta estéril, se vertió 2 mL del inóculo de Escherichia. CA. coli. y Salmonella Typhi, sobre la superficie de 12 placas (para cada una de. TE. las bacterias) con agar Mueller Hinton. Se realizó la siembra con el asa de. BI BL. IO. Digralski; se inclinó y eliminó el exceso con una micropipeta. Se dejó secar de 3 a 5 minutos antes de depositar el extracto de Croton alnifolius (Tunga). 2.2.2.5. APLICACIÓN DEL EXTRACTO22 En las placas sembradas, previamente se realizaron 4 pequeños hoyos de 6 mm., de diámetro en donde se vertió 10,15, 30 y 40 µL a concentraciones de 8, 16, 24 y 32 µg respectivamente del extracto hexánico, etanólico y acuoso de las hojas de la especie Croton alnifolius (Tunga). Una vez depositados los extractos, se procedió a sellar cada hoyo con agar.. A continuación, se deja 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. minutos a temperatura ambiente.. Finalmente, se coloca en incubación. aeróbica a 37° C durante 24 horas. Para Salmonella Typhi y Escherichia coli. se procedió de la misma. manera. Se realizaron cuatro ensayos por cada extracto en cada bacteria. 2.2.2.6. MEDIDA DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN22. IC A. Transcurridas 24 horas de la aplicación de los extractos, se midió el halo de inhibición de crecimiento de Salmonella Typhi y Escherichia coli, y. UI M. los resultados fueron expresados como diámetro (mm) de halo de inhibición. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. sacándose para cada una de las concentraciones una media aritmética.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. CUADRO Nº 1: Concentración en Porcentaje de Extracto Seco de Croton alnifolius (Tunga) en cada uno de los Solventes utilizados, expresados en gramos.. CONCENTRACIÓN (gr.%). Hexánico. 0.56. Etanólico. 0.78. Acuoso. 0.73. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. SOLVENTE. DE. CUADRO Nº 2: Diluciones de Extracto Seco de Croton. CA. alnifolius. (Tunga). de. dosis. de. BI BL. IO. TE. tratamiento (µg/µl) de cada uno de los. Microlitro (µl). Solventes.. CONCENTRACIÓN (µg/µl) SOLVENTE HEXÁNICO ETANÓLICO ACUOSO. 10. 8. 8. 8. 15. 16. 16. 16. 30. 24. 24. 24. 40. 32. 32. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO Nº 3: Diámetros promedios de los Halos de Inhibición del crecimiento bacteriano de Salmonella Typhi y Escherichia coli por el efecto Croton alnifolius (Tunga) a diferentes. IC A. de los Extractos. BI. O. Q. UI M. Concentraciones.. Y. MICROORGANISMO. DIÁMETRO (mm) EXTRACTO ETANÓLICO. AC. 8/10. 16/15. 24/30. 32/40. 8/10. 16/15. 24/30. 32/40. RM. Concentración (µg/µl). 8/10. 16/15. 24/30. 0. 9.5. 11.5. 12.75. 0. 0. 0. 12. 0. 0. 0. 7.25. 9. 9.75. 11.75. 0. 0. 0. 9.75. 0. 0. 0. 6.25. DE. FA. 32/40. Concentración (µg/µl). CA. Concentración (µg/µl). 10.75. BI BL. IO. TE. Salmonella typhi Escherichia coli. EXTRACTO ACUOSO. IA. EXTRACTO HEXÁNICO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FIGURA Nº 1: Diámetros promedios de los Halos de Inhibición del crecimiento bacteriano de Salmonella Typhi y Escherichia coli. Croton alnifolius (Tunga) a. IC A. efecto de los Extractos. por el. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. diferentes Concentraciones.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO Nº 4: Comparación de diámetros promedios de los Halos de Inhibición del crecimiento bacteriano de Salmonella Typhi y Escherichia coli por el efecto. del extracto hexánico de Croton alnifolius (Tunga) a diferentes Concentraciones. MICROORGANISMO. DIÁMETRO (mm) EXTRACTO HEXÁNICO. 9.5 9.75. UI M. 0 9. 24/30. 11.5 10.75. Q. 16/15. 32/40. 12.75 11.75. AC. IA. Y. BI. O. Salmonella typhi Escherichia coli. 8/10. IC A. Concentración (µg/µl). FIGURA Nº 2: Comparación de diámetros promedios de los Halos de. RM. Inhibición del crecimiento bacteriano de Salmonella. FA. Typhi y Escherichia coli. por el efecto del extracto. DE. hexánico de Croton alnifolius (Tunga) a diferentes. BI BL. IO. TE. CA. Concentraciones.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSION. En países tropicales como el nuestro, las condiciones geográficas y climáticas favorecen que se presente una alta diversidad de flora con actividad antimicrobiana, que conforma un material potencialmente eficiente en el manejo de problemas infecciosos, debiendo esta actividad terapéutica a compuestos químicos complejos llamados metabolitos secundarios. Estos metabolitos son sintetizados por las plantas y. IC A. no se conocen que cumplen funciones esenciales en ellas, ya que no intervienen en su metabolismo primario; sino que, ofrecen mecanismos de defensa o protección y por lo. UI M. general estos metabolitos secundarios pertenecen a una de estas categorías: fenoles,. O. Q. flavonoides, taninos, esteroides, quinonas, cardenóicos, esteroides, alcaloides, 17, 20. Y. BI. leucocianidinas, saponinas, aceites esenciales, gomas, resinas, etc.. AC. IA. El cuadro N° 1 muestra las concentraciones de extracto seco de las hojas de Croton. RM. alnifolius (Tunga) obtenidos en cada uno de los solventes utilizados y expresados en. FA. gramos por ciento; así se obtuvo para hexáno, etanol y agua, concentraciones de 0.56,. DE. 0.78, y 0.73 gramos por ciento para cada uno respectivamente. Por la diferencia de. CA. polaridades de los solventes se esperó extraer todos o de la gran mayoría de los El hexano, es un. TE. metabolitos secundarios de las hojas de la planta en estudio.. IO. solvente no polar y va extraer metabolitos secundarios no polares como esteroides de. BI BL. gran peso molecular, quinolonas, terpenoides, entre otros; mientras que el etanol, por ser un solvente semipolar, tiene la capacidad de extraer sustancias semipolares como alcaloides, esteroides, leucoantocianidinas, etc., y el agua, que por su menor peso molecular y mayor polaridad; extraerá metabolitos secundarios polares como los taninos, alcaloides pero como sal que son solubles en agua, glucósidos y otros. Esto se fundamenta no solo en los efectos de polaridad de los solventes; sino también, en el pH y la temperatura del medio sobre la solubilidad de los metabolitos secundarios de la especie Croton alnifolius (tunga); es decir que las fuerzas intermoleculares, además de afectar los puntos de ebullición y de fusión de las sustancias, determinan. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. las propiedades de solubilidad de los compuestos orgánicos en solventes de diferente polaridad permitiendo la separación de los metabolitos secundarios. La polaridad se encuentra muy relacionada con la solubilidad, es por ello que un compuesto que forma enlaces de hidrógeno con el agua tiende a ser más soluble en ella que uno que no los forma. Por tanto, el agua es un excelente disolvente de compuestos polares porque los solvata. Así también, el etanol forma puentes de hidrógeno y puede disolver compuestos polares en menor proporción; este, es mejor solvente que el hexano para. IC A. sustancias polares, ya que el hexano no puede disolver compuestos polares.. UI M. Dependiendo de la finalidad deseada, el solvente utilizado solubiliza, selectivamente o. O. Q. no, ciertas clases de compuestos 17, 24, 25.. BI. La eficiencia del proceso extractivo se ve facilitada por la secuencia del. IA. Y. procedimiento, donde no solo hubo un aumento de la temperatura que contribuyó al. AC. desplazamiento de la constante de equilibrio de saturación; sino que también, tuvo en. RM. cuenta el tamaño de la partícula; así, se obtiene una mayor área de contacto con el. FA. solvente, teniendo cuidado con no excederse en disminuir el tamaño porque la. DE. presencia de partículas muy finas dificulta el proceso de extracción, pues podría. CA. presentar compactación en el proceso de maceración, donde las partículas pasan al. TE. extracto. Además gracias a la agitación del proceso extractivo, nuevas cantidades del. BI BL. IO. solvente entran en contacto con el sólido, y un nuevo punto de equilibrio de saturación sea alcanzado. El movimiento del líquido desplaza el equilibrio en el sentido de la saturación del solvente, aumentando la eficacia del proceso extractivo de metabolitos secundarios 18, 24. Sin embargo fue necesario comprobar el uso tradicional de la planta, pero lo cual nos planteamos la siguiente interrogante: ¿Cuál es el efecto de estos extractos de. las hojas de Croton Alnifolius “Tunga” frente a microorganismos Gram negativos como Salmonella Typhi y Escherichia coli in Vitro?. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para resolver la interrogante anterior se realizaron diluciones del extracto seco llevándolas a concentraciones determinadas para luego realizar un estudio microbiológico para determinar efecto antibacterial, tanto con Salmonella Typhi como. con Escherichia coli in vitro. El cuadro Nº 2, contiene las diluciones de las concentraciones de los extractos secos del cuadro Nº 1, de las hojas de Croton alnifolius (tunga) en los diferentes volúmenes que se utilizaron, que fueron 10, 15, 30 y 40 microlitros (µl); estos tuvieron una concentración de 8, 16, 24, y 32 µg. IC A. respectivamente tanto para el extracto Hexánico como para los extractos Etanólico y. UI M. Acuoso, esto con fines de poder comparar entre los tres la mayor actividad. O. Q. antibacteriana positiva que puedan tener sobre cepas en estudio 18 (ver Anexo 4). Y. BI. En el cuadro Nº 3 y Figura Nº 1 se presentan los diámetros promedios de los halos de. IA. inhibición del crecimiento bacteriano, tanto del ensayo realizado para Salmonella. AC. typhi como el ensayo realizado para Escherichia coli, en las concentraciones antes. RM. mencionadas en el cuadro Nº 2, utilizando el método de difusión de Kirby Bauer. FA. modificado (ver Anexo 5). El resultado de estos ensayos microbiológicos fueron que. DE. de los extractos utilizados (hexánico, etanólico y acuoso), se encontró que el extracto. CA. Hexánico es el que posee más actividad antibacteriana, tal como se observa tanto en. IO. TE. el cuadro Nº 3 como en la figura Nº 1, obteniéndose efecto desde la concentración. BI BL. mínima para el caso de Escherichia coli y desde 16µg /15µl en el caso de Salmonella typhi, debido a que, como el hexano es un solvente no polar, llegaría a solubilizar metabolitos secundarios afines; ya que, ofrece la capacidad de formar enlaces de hidrógeno y de ceder un par de electrones; y, por poseer extremo lipofílico ayuda a la solvatación de sustratos orgánicos. El hexano además, disuelve las membranas vesiculares rompiendo las interacciones que mantienen atraídos a los principios activos 17, 26. La acción antibacteriana sobre Salmonella Typhi y Escherichia coli de los tres solventes a concentraciones de 32 µg/ 40 µl, se explica gracias a que la especie. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Croton alnifolius (Tunga) puede presentar metabolitos secundarios, tales como: flavonoides, esteroides, terpenos, alcaloides y saponinas, que tienen actividad antibacteriana, produciendo, posibles mecanismos de daño a la membrana celular bacteriana debido al incremento de su permeabilidad y la afectación de su estructura. Este daño se genera por la desestabilización de la capa bilipídica debido a la interacción de los terpenos posiblemente presentes en la muestra, con las moléculas. IC A. de la membrana 19, 25, 27. (Anexo 6) En el cuadro Nº 4 y Figura Nº 2 se puede observar la comparación de los. UI M. diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento bacteriano de. O. Q. Salmonella Typhi y Escherichia coli por el efecto del extracto hexánico de Croton. BI. alnifolius (Tunga) a diferentes concentraciones, donde la actividad antibacterial de. IA. Y. este extracto es mayor en Escherichia coli, donde se encontró efecto positivo a. AC. concentraciones mínimas de 8µg de extracto seco en 10 µl de dilución, esto puede ser. RM. porque Salmonella typhi a diferencia de Escherichia coli es un microorganismo. FA. enteropatógeno más enterotóxico y que ha desarrollado mayores mecanismos de. DE. defensa en su estructura, pero se observa también que el extracto hexánico puede. CA. producir un efecto antibacterial a concentraciones de 16 µg de extracto seco en 15 µl. TE. de dilución llegando a obtener una mayor inhibición bacterial que Escherichia coli a. BI BL. IO. 32 µg de extracto seco en 40 µl de dilución por un milímetro 2, 8. En 1999 el Departamento de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y la Facultad de Medicina de la Universidad de Ibadan, Nigeria, realizó un estudio sobre tres especie, entre ellas, una de las especies del género Croton; este estudio fue denominado “Antimicrobial potential of Spondias mombin, Croton zambesicus and Zygotritonia crocea” donde se realizaron extractos hexánico y acuoso de la corteza del tallo de Croton zambesicus y se demostró efectos antibacterianos de amplio espectro comparables a las de ampicilina y gentamicina en el caso del extracto hexánico 28.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El año 2010, el departamento de biotecnología de North Orissa University de la India, realizó un estudio denominado “Antibacterial activity of Croton roxburghii balak against the enteric pathogens” donde se realizaron dos tipos de extractos, acuoso y etanólico tanto de la corteza como de las hojas de Croton roxburghii que fueron probados contra patógenos entéricos causantes de la infección del tracto urinario (ITU), entre ellos se usó la bacteria Escherichia coli, obteniendo, que el extracto etanólico, tiene una actividad antibacteriana muy pronunciada en comparación con el. IC A. extracto acuoso 29.. UI M. Entre enero y marzo del 2011, el departamento de Biotecnología, Centro de. O. Q. Estudios Avanzados en Botánica de la Universidad de Madrás; realizó un estudio. BI. denominado “A Comparative Study on Antibacterial Activity of Common Weeds”,. IA. Y. donde se encontró que el extracto de la planta de solventes diferentes (metanol,. AC. acetona hexano y cloroformo ) de la especie Croton Sparsiflorus mostró actividad. RM. positiva, frente a todos los organismos analizados (Bacillus subtilis, Escherichia. FA. coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus. DE. aureus); excepto el extracto de hexano que no muestran actividad en cualquiera de. CA. las bacterias estudiados como Klebsiella pneumoniae y Staphylococcus aureus 30. IO. TE. pero si muestra actividad en el resto como Escherichia coli. BI BL. Estos antecedentes relacionados sobre los efectos antibacterianos de especies del género Croton, concuerdan con los resultados obtenidos en este estudio. Por lo que, se sustenta algunas bases científicas para el uso de esta planta como agente antiinfeccioso, en la medicina folklórica cuyos agentes causales son algunos de los agentes patógenos estudiados; pero, se deben seguir asiendo otros estudios de esta especie para poder recomendar su uso a la población 28 Por lo tanto, el trabajo expuesto logró sus objetivos, que fueron preparar extractos de las hojas de Croton Alnifolius “Tunga” utilizando solventes de polaridad creciente y. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. determinar la actividad antibacteriana, que en este caso fue positiva, de los extractos de las hojas de Croton Alnifolius “Tunga” frente a cepas de Salmonella Typhi y Escherichia coli in Vitro, encontrándose halos de mayor diámetro en el caso del extracto hexánico, hallándose también que este solvente no polar tuvo efecto a. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. concentraciones más bajas que los otros dos solventes utilizados.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. Del análisis de los resultados se concluye lo siguiente:. 1. Se obtuvo extractos con solventes de polaridad creciente bajo determinadas. IC A. condiciones, logrando solubilizar los diferentes metabolitos secundarios de las. UI M. hojas de Croton Alnifolius “Tunga”, con concentraciones de 0.56, 0.78 y 0.73 gr.% para el extracto hexánico, etanólico y acuoso respectivamente, de extracto. IA. Y. BI. O. Q. seco.. AC. 2. Los extractos de las hojas de Croton Alnifolius “Tunga”, si tienen efecto. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. antibacterial, frente a cepas de Salmonella Typhi y Escherichia coli in vitro.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. ANEXOS. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Anexo 1.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 2.. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Obtención de lo sextractos:. BI BL. IO. TE. CA. DE. Ensayos Microbiológicos:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 3. Desarrollo de los Resultados de la Tabla Nº1: Concentración en Porcentaje de Extracto Seco de Croton alnifolius (Tunga) en cada uno de los Solventes utilizados, expresados en gramos. Extracto Hexánico: Volumen (Vol): 0.1 ml. . Peso de Extracto seco: 0.008 gr. . Vol. Total: 7 ml.. UI M. IC A. . Q.  Entonces:. X=0.56 gr %. IA. Y. BI. O. 0.008 gr. -------- 0.1 ml x gr. -------- 7 ml. AC. Extracto Etanólico: Volumen (Vol): 0.1 ml. . Peso de Extracto seco: 0.015 gr. . Vol. Total: 5.2 ml.. DE. FA. RM. . IO. TE. CA.  Entonces: 0.015 gr. -------- 0.1 ml x gr. -------- 5.2 ml. BI BL. X=0.78 gr %. Extracto Acuoso: . Volumen (Vol): 0.1 ml. . Peso de Extracto seco: 0.008 gr. . Vol. Total: 9.1 ml.  Entonces: 0.008 gr. -------- 0.1 ml x gr. -------- 9.1 ml X=0.728 ≈ 0.73 gr %. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 4 Obtención de los resultados de las diluciones para las concentraciones. 1. Cantidad en 100 ml del Extracto Seco de Croton alnifolius (tunga) en cada uno de los solventes usados. Extracto Hexánico.. Extracto Acuoso.. Extracto Etanólico 0.015 gr. ------ 0.1ml. 0.008 gr. ------ 0.1ml. X gr. -------100ml. X gr. -------100ml. X gr. -------100ml. X=15gr.. X=8gr.. Q. UI M. X=8gr.. IC A. 0.008 gr. ------ 0.1ml. 8 µg/10µl. Y. . BI. O. 2. Concentraciones expresadas en gramos por ml para diluciones.. AC. IA. 8 µg E.S. --------- 10µl. RM. C1 µg E.S. -------- 10 000 µl (10 ml). 16 µg/15µl. DE. . 0.008 gr E.S. FA. C1= 8000 µg E.S. ≈ 8 mg E.S. ≈. CA. 16 µg E.S. --------- 15µl. TE. C2 µg E.S. -------- 10 000 µl (10 ml). 24 µg/30µl. BI BL. . 0.0107 gr E.S. IO. C2= 10666.7 µg E.S ≈ 10.7 mg E.S. ≈. 24 µg E.S. --------- 30µl C3 µg E.S. -------- 10 000 µl (10 ml) C3= 8000mg µg E.S. ≈ 8 mg E.S. ≈. . 0.008 gr E.S. 32 µg/40µl 32 µg E.S. --------- 40µl C4 µg E.S. -------- 10 000 µl (10 ml) C4= 8000mg µg E.S. ≈ 8 mg E.S. ≈. 0.008 µg E.S. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. C1= 16 000 µg E.S. ≈ 16 mg E.S. ≈. 0.016 gr E.S. C2= 21333.3 µg E.S ≈ 21.3 mg E.S. ≈. 0.021 gr E.S. 0.016 gr E.S. C4= 16 000 µg E.S. ≈ 16 mg E.S ≈. 0.016 µg E.S. UI M. C3= 16 000 µg E.S. ≈ 16 mg E.S. ≈. Q. 3. Diluciones .. O. Extracto Hexánico y Extracto Acuoso:. BI. . IC A. Nota: para el caso de la dilución del extracto etanólico se realizara en 20 ml.. Y. 100 ml -------- 8gr E.S.. IA. V1 ml --------- 0.008gr. E.S. 0.1 ml. AC. V2 ml --------- 0.011gr. E.S  0.14 ml. RM. V3 ml --------- 0.008gr. E.S  0.1 ml. Extracto Etanólico:. BI BL. . IO. TE. CA. DE. FA. V4 ml --------- 0.008gr. E.S  0.1 ml. 100 ml -------- 15 gr E.S. V1 ml --------- 0.016gr. E.S. 0.11 ml V2 ml --------- 0.021gr. E.S  0.14 ml V3 ml --------- 0.016gr. E.S  0.11 ml V4 ml --------- 0.016gr. E.S  0.11 ml. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 5.. Lectura de Halos de inhibición, actividad representados en milímetros.. HALOS DE INHIBICIÓN. ACTIVIDAD. < a 6 mm. negativo Intermedia o Moderada Positivo. IC A. 6 a 9 mm > a 9mm. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. Fuente: Revista Médica Vallejiana. Vol. 5 Nº 1. Autor: ESCOBAR, L. Artículo: “Efecto in vitro de diferentes concentraciones de extracto alcohólico de Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze, sobre la viabilidad de Corynebacterium diphtheriae”. 2008.. RM. CUADRO Nº 1A: Diámetros promedios de los halos de inhibición de crecimiento bacteriano de Salmonella typhi por. FA. efecto del extracto hexánico de las hojas de Crotón Diámetro (mm) Extracto Hexánico. TE. Nº de Placa. CA. DE. alnifolius (tunga) a diferentes concentraciones.. 24 µg/30µl. 32 µg/40µl. 0. 9. 11. 12. 2. 0. 9. 12. 13. 3. 0. 10. 11. 13. 4. 0. 10. 12. 13. Promedio. 0. 9.5. 11.5. 12.75. Negativo. Positivo. Positivo. Positivo. IO. 16 µg/15µl. BI BL. 1. Interpretación Actividad. 8 µg/10µl. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO Nº 2A: Diámetros promedios de los halos de inhibición de crecimiento bacteriano de Salmonella typhi por efecto del extracto etanólico de las hojas de Crotón alnifolius (tunga) a diferentes concentraciones. Diámetro (mm) Extracto Etanólico. Nº de Placa 8 µg/10µl. 16 µg/15µl. 24 µg/30µl. 32 µg/40µl. 0. 0. 0. 11. 2. 0. 0. 0. 12. 3. 0. 0. 0. 11. 4. 0. 0. 0. Promedio. 0. 0. 0. Interpretación. Negativo. Negativo. Negativo. IC A. 1. 12 Positivo. O. Q. UI M. 10. FA. RM. AC. IA. Y. BI. Actividad. CUADRO Nº 3A: Diámetros promedios de los halos de inhibición de. DE. crecimiento bacteriano de Salmonella typhi por. CA. efecto del extracto acuoso de las hojas de Crotón. BI BL. IO. TE. alnifolius (tunga) a diferentes concentraciones Diámetro (mm) Extracto Acuoso. Nº de Placa 8 µg/10µl. 16 µg/15µl. 24 µg/30µl. 32 µg/40µl. 1. 0. 0. 0. 8. 2. 0. 0. 0. 7. 3. 0. 0. 0. 7. 4. 0. 0. 0. 7. Promedio. 0. 0. 0. 7.25. Interpretación. Negativo. Negativo. Negativo. Intermedio. Actividad. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO Nº 1B: Diámetros promedios de los halos de inhibición de crecimiento bacteriano de Escherichia coli por efecto del extracto hexánico de las hojas de Crotón alnifolius (tunga) a diferentes concentraciones. Diámetro (mm) Extracto Hexánico 16 µg/15µl. 24 µg/30µl. 32 µg/40µl. 1. 9. 10. 11. 12. 2. 10. 11. 11. 11. 3. 9. 9. 11. 4. 8. 9. 10. 12. Promedio. 9. 9.75. 10.75. 11.75. Interpretación. Intermedio. Positivo. O. UI M. IC A. 8 µg/10µl. Q. Nº de Placa. Positivo. Y. BI. Positivo. 12. FA. RM. AC. IA. Actividad. DE. CUADRO Nº 2B: Diámetros promedios de los halos de inhibición de crecimiento bacteriano de Escherichia coli por. CA. efecto del extracto etanólico de las hojas de Crotón. IO. TE. alnifolius (tunga) a diferentes concentraciones.. BI BL. Diámetro (mm) Extracto Etanólico. Nº de Placa 8 µg/10µl. 16 µg/15µl. 24 µg/30µl. 32 µg/40µl. 1. 0. 0. 0. 10. 2. 0. 0. 0. 10. 3. 0. 0. 0. 09. 4. 0. 0. 0. 10. Promedio. 0. 0. 0. 9.75. Interpretación. Negativo. Negativo. Negativo. Positivo. Actividad. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO Nº 3B: Diámetros promedios de los halos de inhibición de crecimiento bacteriano de Escherichia coli por efecto del extracto acuoso de las hojas de Crotón alnifolius (tunga) a diferentes concentraciones Diámetro (mm) Extracto Acuoso 8 µg/10µl. 16. 24. µg/15µl. µg/30µl. 32 µg/40µl. IC A. Nº de Placa. 8. 0. 0. 0. 2. 0. 0. 0. 3. 0. 0. 0. 7. 4. 0. 0. 0. 7. Promedio. 0. 0. 0. 6.75. Interpretación. Negativo. Negativo. Negativo. Intermedio. Q O BI Y. IA. 5. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. Actividad. UI M. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 6. Observación de los halos de inhibición del crecimiento de Salmonella typhi por. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. efecto de los extractos de Croton alnifolius (Tunga). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Observación de los halos de inhibición del crecimiento de Escherichia coli por efecto. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. de los extractos de Croton alnifolius (Tunga). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 7.. CUADRO Nº 1: Comparación de promedios de la medida de los halos de inhibición de crecimiento de. Salmonella. typhi y Escherichia coli, expresados como diámetro (mm) de halo de inhibición en placas con solvente. IC A. hexánico a distintas concentraciones.. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. SOLVENTE HEXÁNICO Salmonella typhi Escherichia coli Diámetro (mm) Concentración (µg/µl) Concentración (µg/µl) 10ul 15ul 30ul 40ul 10ul 15ul 30ul 40ul PROMEDIO 0 9.5 11.5 12.75 9 9.75 10.75 11.75. FIGURA N° 1: Comparación de promedios de la medida de los halos. FA. de inhibición de crecimiento de Salmonella typhi y. DE. Escherichia coli, expresados como diámetro (mm) de halo de inhibición en placas con solvente hexánico. BI BL. IO. TE. CA. a distintas concentraciones.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO Nº 2: Comparación de promedios de la medida de los halos de inhibición de crecimiento de. Salmonella typhi y. Escherichia coli, expresados como diámetro (mm) de halo de inhibición en placas con solvente etanólico a distintas concentraciones. SOLVENTE ETANÓLICO Salmonella typhi Escherichia coli. Diámetro (mm). BI. O. Q. UI M. IC A. Concentración (µg/µl) Concentración (µg/µl) 8 /10 16/15 24 /30 32/40 8 /10 16/1l 24/30 32/40 9.75 12 Promedio 0 0 0 0 0 0. IA. Y. FIGURA N° 2: Comparación de promedios de la medida de los halos Salmonella typhi y. AC. de inhibición de crecimiento de. RM. Escherichia coli, expresados como diámetro (mm) de halo de inhibición en placas con solvente etanólico a. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. distintas concentraciones.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

Referencias

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