Efecto de calophyllum brasiliense en la memoria espacial y la lipoperoxidación de membranas neuronales en rattus norvegicus var albinus ooforectomizadas
88
0
0
Texto completo
(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A ti, querido Dios, que nunca nos has abandonado, que siempre nos escuchas y nos guías en las. IC A. circunstancias adversas y en la benevolencia, en nuestros laberintos y nuestros. UI M. aciertos, te damos gracias por darnos la placidez de ver realizado un sueño,. Q. perpetuado en éstas hojas hermosas, que han servido para exteriorizar nuestros. Y. BI. O. pensamientos, emociones, y sentimientos.. AC. IA. Gracias por darnos la fortaleza para seguir adelante y no permitir que desmayemos. RM. en los problemas que se presentaban, enseñándonos a encarar las adversidades sin. DE. FA. perder nunca la dignidad ni desfallecer en el intento.. CA. Gracias Dios padre, por tu existencia espiritual que vive en nosotros. TE. permanentemente cómo refugio, sombra y cobijo de mi soledad.. BI BL. IO. Con gran amor hacia ti padre Jehová te dedicamos esta tesis, tus hijos Kiara y Carlos.. Jehová es mi pastor, Salmos 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Muchas gracias queridos padres por ser un excelente ejemplo de sacrificio y esfuerzo para mí. Gracias a mi papá José por enseñarme a nunca rendirme ante los problemas, por darme ejemplos de perseverancia y constancia, por aconsejarme y corregirme cuando estaba equivocado, gracias mamá Nelda por enseñarme que el amor es la fuerza más grande que existe y que Dios es el. IC A. único que puede darnos la solución a cualquier problema, ustedes son los seres a. UI M. quienes más valoro y amo en el mundo.. IA. Y. BI. O. Q. Con amor, su hijo Carlos. AC. Estaré eternamente agradecido a mis primos Jorge y Allison,. BI BL. IO. TE. CA. DE. preocupación y cariño hacia mi persona.. FA. RM. por el gran apoyo incondicional que recibí desde el inicio, por su. Gracias a esas personas importantes en mi vida, que siempre estuvieron listas para. brindarme toda su ayuda, ahora me toca regresar un poquito de todo lo inmenso que me han otorgado. Con todo mi cariño está tesis se las dedico a ustedes.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. A mis padres Rosa y Jorge, ejemplo siempre. O. Q. de ilusión y lucha. A mi hermana Estefani, por su apoyo. Con amor, su hija Kiara. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. y entusiasmo.. TE. A todas aquellas personas y amigos. BI BL. IO. que de alguna forma han contribuido a que esta tesis llegue a buen término. Ellos han sido cómplices del esfuerzo, de las alegrías y también de los malos momentos que conllevan esta tesis.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A mis maestros que en este andar por la vida, influyeron con sus lecciones y experiencias en formarme como una persona de bien y preparada para los retos que pone la vida, a. IC A. todos y cada uno de ellos les dedico cada una de estas páginas de mi tesis. UI M. Un especial agradecimiento a nuestro asesor Dr. Roberto Ybañez Julca, por su apoyo y. O. Q. por despertar en nosotros el entusiasmo en la investigación, por habernos brindado la. BI. oportunidad de realizar esta tesis bajo su dirección y depositar en nosotros su confianza. IA. Y. desde el primer día. Por guiarnos a lo largo de todo este periodo no solo académicamente. RM. AC. sino también personalmente.. DE. FA. Al Dr. Iván Quispe por su asesoría en la tesis, por apoyarnos, por su amistad y por ese. TE. CA. conocimiento transmitido durante las horas de clase y a lo largo de la carrera.. IO. Al Dr. Roger Rengifo por su apoyo ofrecido en esta tesis, por su tiempo compartido y por. BI BL. impulsar el desarrollo de nuestra formación espiritual y profesional. Los Autores. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores miembros del Jurado Dictaminador:. De conformidad con las Disposiciones Legales y vigentes del Reglamento de Grados y. IC A. Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad nacional de. O. Q. UI M. Trujillo, sometemos a vuestro elevado criterio el presente informe intitulado:. Y. BI. “Efecto de Calophyllum brasiliense en la memoria espacial y la. AC. IA. lipoperoxidación de membranas neuronales en Rattus norvegicus var albinus. DE. FA. RM. ooforectomizadas’’. CA. Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva. BI BL. IO. TE. calificación del presente informe.. Trujillo, Marzo 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICATMINADOR. IC A. Msc. Roger Rengifo Penadillos. Y. BI. O. Q. UI M. PRESIDENTE. MIEMBRO. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Dr. Ivan Quispe Díaz. Dr. Roberto Ybañez Julca. MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. Resumen…………………………………………………………………………..…i. UI M. IC A. Abstract……………………………………………………………………………...ii. Introducción……………………………………………………………….…3. II.. Material y método…………………………………………………….….....18. III.. Resultados…………………………………………………………………..35. IV.. Discusión……………………………………………………………………41. V.. Conclusiones………………………………………………………...……...49. VI.. Recomendaciones…………………………………………………………..50. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. I.. VII. Referencias Bibliográficas……………………………………………….....51. Anexos………………………………………………………………………….….63. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. En el presente trabajo de investigación se determinó el efecto del extracto acuoso de las hojas de Calophyllum brasiliense en la memoria espacial y la lipoperoxidación de membranas neuronales en Rattus norvegicus var albinus ooforectomizadas. Se. IC A. utilizaron treinta especímenes hembras, de tres meses y medio de edad, con un peso entre 150 – 250g, veinticuatro de ellas. UI M. fueron previamente ooforectomizadas y. Q. distribuidas en grupos blanco, control, patrón, problema 1 y problema 2. Al grupo. BI. O. control se le administró vía oral (V.O) NaCl 9º/oo, el grupo patrón recibió valerato de. IA. Y. estradiol en dosis de 200 µg/Kg/día de una solución acuosa de 0,250 %P/V V.O y a los. AC. grupos problemas 1 y 2, se les administró extracto acuoso de las hojas de Calophyllum. RM. brasiliense en dosis de 0,5 g /kg/día y 2,0 g /kg/día respectivamente, a todos los grupos. FA. se les administro por un espacio de 8 semanas. La memoria espacial fue evaluada. DE. mediante la técnica Laberinto Acuático de Morris. Para determinar la lipoperoxidación. CA. en membranas neuronales se utilizó la técnica del ácido tiobarbitúrico (TBARS) a 532. IO. TE. nm. Se concluye que el extracto acuoso de las hojas de Calophyllum brasiliense a dosis. BI BL. de 0,5 y 2,0 g/kg/día presentan efecto antioxidante expresado en la disminución de los niveles de malondialdehído; siendo la dosis de 0,5 g/kg/día con mejor efecto protector (p ≤ 0.05).. Palabras claves: Calophyllum brasiliense, ooforectomía, lipoperoxidación.. i1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT In this research the effect of the aqueous extract from the leaves of Calophyllum brasiliense in spatial memory and neuronal membrane lipid peroxidation in Rattus norvegicus var albinus oophorectomized is determined. Thirty specimens females, the three and a half months of age, weighing between 150 - 250g, twenty-four of them were. IC A. previously oophorectomized and distributed in white groups control, problem 1 and. UI M. problem 2. The group control was administered via oral (V.O) NaCl 9 ° / oo, the pattern. O. Q. group received estradiol valerate in doses of 200 µg/Kg/day of an aqueous solution of. BI. 0.250 %w/v V.O and groups problems 1 and 2, were administered aqueous extract. IA. Y. leaves Calophyllum brasiliense at doses of 0.5 g/kg/day and 2.0 g/kg/day respectively,. AC. all groups were administered for a period of 8 weeks. Spatial memory was assessed. FA. RM. using Morris water maze technique. To determine lipoperoxidation in neuronal. DE. membranes technique thiobarbituric acid (TBARS) at 532 nm was used. It is concluded. CA. that the aqueous extract from the leaves of Calophyllum brasiliense at doses of 0.5 and. TE. 2,0 g/kg/day has antioxidant effect expressed in decreased levels of malondialdehyde;. BI BL. IO. being the dose of 0.5 g/kg/day with better protective effect (p ≤ 0.05).. Key words: Calophyllum brasiliense, oophorectomy, lipid peroxidation.. ii2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. El interés de la humanidad por entender el proceso del envejecimiento data desde la época griega. Así Aristóteles ya indicaba que: “Las incapacidades que aparecen al envejecer no se deben a un trastorno de la mente sino a su. IC A. vehículo como ocurre con las enfermedades’’ 1.. UI M. Aunque el máximo número de años que los seres humanos pueden vivir no se ha incrementado significativamente, la esperanza media de vida sí, sobre todo. BI. O. Q. desde el comienzo del siglo pasado. En el reporte de 1990 presentado en. Y. Ginebra por la Organización mundial de la Salud (OMS), la esperanza de vida. AC. IA. media en el Perú era de 69 años para los hombres y 73 para las mujeres. En el. RM. 2012 aumento a 79 años para ambos sexos 1, 2.. FA. En las últimas décadas del siglo XX, los científicos han tomado interés en. DE. hallar porqué envejecemos y el modo de evitarlo. Es por ello que actualmente. TE. CA. se han publicado varias teorías que tratan de explicar el proceso del. IO. envejecimiento y sus consecuencias (enfermedades neurodegenerativas). Hoy. BI BL. en día la teoría con mayor aceptación es la propuesta por Harmanm en 1956, supone que el envejecimiento se debe principalmente a daños producidos de forma continua sobre las células por los radicales libres procedentes de diferentes reacciones Shigenaga M, Hagen T, Ames B, 1994 3 postula que el daño sostenido, infligido por la exposición ininterrumpida por oxidantes, es el punto fundamental detrás de la perdida de la función celular y de su vitalidad. El organismo contrapone la acción de antioxidantes para desintoxicar. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. rápidamente los reactivos intermedios o reparar el daño de las estructuras biológicas resultantes 1, 4. Los radicales libres son moléculas que contienen un electrón no apareado, esta característica los hace sumamente reactivos y capaces de dañar a otras moléculas transformándolas a su vez en moléculas muy reactivas, iniciándose. BI. O. Q. sobre células y tejidos vivientes 5, 6.. de agresión indiscriminada. UI M. receptores específicos, tienen una capacidad. IC A. así una reacción en cadena. Debido a que estas especies reactivas no poseen. Y. En el cuerpo humano, los radicales libres más comunes son el superóxido y el. AC. IA. peróxido de hidrógeno que, en su mayoría, suelen ser derivados del oxígeno,. RM. conocidos como especies reactivas de oxigeno (ROS), debido a que se. FA. generan normalmente durante la respiración celular, aunque pueden provenir. DE. de ácidos grasos poliinsaturados, de compuestos de sulfihidrilo y de otros. TE. CA. compuestos capaces de transferir electrones 7.. IO. Los complejos I y III de la cadena de transporte de electrones son los. BI BL. principales generadores del radical superóxido. Recientemente se ha demostrado que este radical proveniente del complejo I es liberado dentro de la matriz mitocondrial ya que no se han detectado niveles de éste en mitocondrias intactas y, por tanto, los producidos en el complejo III son vertidos al citosol. Se ha estimado que una célula del cuerpo produce alrededor de unas 1010 moléculas de anión superóxido por día. Sin embargo, el 99% de las moléculas que se producen se dismutan hacia peróxido de hidrógeno 8, 9, 10, 11, 12, 13. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las especies reactivas se forman como productos del metabolismo de los radicales libres, y aunque no todas son radicales libres, son moléculas oxidantes que se transforman fácilmente en radicales libres lo que les confiere la característica de ser compuestos muy dañinos para las células. Las principales especies reactivas incluyen a las de oxígeno (ROS), las especies. IC A. reactivas de hierro (RIS), las especies reactivas de cobre (RCS), así como a. UI M. las especies reactivas de nitrógeno (RNS) 5.. O. Q. Un antioxidante es la sustancia capaz de retrasar o de inhibir la oxidación de. BI. un sustrato oxidable cuando se encuentra presente en concentraciones bajas,. IA. Y. en relación con las de este último. Así, los antioxidantes protegen a los. excesivas.. RM. oxidaciones. Las. defensas. antioxidantes. no. son. FA. causan. AC. sistemas biológicos frente a los efectos perniciosos de las reacciones que. DE. homogéneas, varían según el tejido, atendiendo al tipo de célula que lo. CA. constituye, estado fisiológico o requerimientos especiales 14.. TE. Si bien la totalidad de las células aeróbicas son susceptibles de sufrir los. BI BL. IO. efectos del estrés oxidativo, el cerebro de los mamíferos es todavía más vulnerable a la acción nociva de los ROS. Una de las razones es su alto consumo de oxígeno. A lo largo de la vida, se van acumulando en el cerebro “insultos’’ o agresiones causadas por los radicales libres contra sus células nobles, las neuronas. Algunas de esas agresiones son voluntarias, y por lo tanto, evitables. Pero otras llegan con la edad, y son inevitables 15. Dado que las membranas biológicas están constituidas por fosfoglicéridos que contienen ácidos grasos esterificados, son más sensibles a la oxidación 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que los ácidos grasos saturados, este proceso de oxidación es conocido como lipoperoxidación lipídica, además produce adicionalmente muchos aldehídos dañinos, particularmente malondialdehído (MAD) y 4 hidroxinonenal (4HNE). El MDA es un metabolito mayor del ácido araquidónico y 4-HNE es el más toxico aldehído conocido. Estos a su vez pueden reaccionar con otras. IC A. moléculas generando productos secundarios que, pueden causar daños a otras. UI M. macromoléculas, como el ADN y las proteínas 16, 17, 18, 19, 20.. O. Q. El malondialdehído es un producto final que se genera tras la oxidación de las. BI. membranas biológicas. Este compuesto es el más común de los conocidos. IA. Y. como lipoperóxidos, y tradicionalmente ha sido utilizado como biomarcador. AC. de estrés oxidativo en plasma y tejidos porque se valora fácilmente mediante. RM. su reacción con el ácido tiobarbitúrico (TBARS) para formar un compuesto. DE. FA. que presenta absorbancia a una longitud de onda característica 21, 22, 23, 24, 25.. CA. A raíz del espectacular aumento de la esperanza de vida media conseguidos. TE. en muy pocos años y que se sitúa alrededor de los 79 años para la mujer. BI BL. IO. peruana, es cuando nos damos cuenta de los efectos negativos de la falta hormonal sobre el organismo en los años postmenopáusicos, puesto que la edad de aparición de la menopausia no ha variado en el último siglo, presentándose aproximadamente a los 50 años, aunque se puede presentar antes de los 40 en el 8% de las mujeres, denominada menopausia prematura. Esto hace que la mujer pase un tercio de su vida (25 o 30 años), en déficit hormonal 2, 26.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La menopausia es un proceso de cambios hormonales que afectan distintos sistemas y órganos. Cabe resaltar que estos procesos no siempre se presentan de la misma forma, en todas las mujeres, algunos cambios son fisiológicos (oleadas de calor y resequedad vaginal) o psicológicos (problemas de concentración, cambios bruscos del estado de ánimo) 27, 28.. IC A. Durante la etapa perimenopáusica, el cuerpo y metabolismo de una mujer. UI M. cambia de forma importante, y los mecanismos que regulan el estrés. O. Q. oxidativo no son la excepción. En los últimos años se han realizado estudios. BI. que ligan esta disminución en los niveles de estrógenos, con cambios en el. IA. Y. comportamiento oxidativo/antioxidante de la mujer, sin embargo, el. AC. panorama aún no está claro. En estudios con animales se han evidenciado. FA. RM. estos cambios; Strehlow y col., mostraron una disminución de la superóxido. DE. dismutasa extracelular (SODec) y la superóxido dismutasa mitocondrial. CA. (MnSOD), y un aumento de producción de radicales libres en ratas, asociado. TE. a niveles decrecientes de estrógenos, luego de ser ooforectomizadas 29.. BI BL. IO. Hasta ahora, no existe evidencia de un deterioro cognitivo sustancial durante la transición menopáusica. Sin embargo, muchas mujeres experimentan dificultades cognitivas en asociación con los síntomas vasomotores, los trastornos del sueño y los cambios en el estado de ánimo. La mujer peruana refiere presentar los siguientes síntomas asociados a la menopausia: Bochornos (35,3%), cefalea (24%), dolor osteomuscular (17,3%), irritabilidad (14,5%), depresión (8,5%) 30, 31, 32.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En los últimos años se ha acumulado amplia evidencia que demuestra que los esteroides sexuales son importantes no sólo en la maduración, desarrollo y establecimiento de la función reproductiva en la mujer, sino también en funciones tan importantes como el mantenimiento de la función cognitiva, habilidades motrices, conducta afectiva, orientación espacial, estabilidad. IC A. emocional y tolerancia al dolor, entre otras funciones 33.. UI M. El conocimiento actual, que se ha obtenido principalmente en modelos. O. Q. experimentales de roedores o primates, demuestra que desde el período. BI. embrionario los esteroides sexuales tienen una influencia importante en la. IA. Y. citoarquitectura del sistema nervioso central (SNC) y en la diferenciación. AC. funcional de las áreas cerebrales, induciendo procesos de crecimiento,. FA. RM. diferenciación neuronal y formación de conexiones sinápticas e iniciando la. DE. expresión de sus receptores específicos, esenciales en la vida adulta. Además. CA. se ha demostrado que participan activamente en la bioquímica cerebral,. TE. regulando la expresión de prácticamente todos los neurotransmisores y 34. .. BI BL. IO. neuromoduladores. Durante el proceso de envejecimiento en la mujer, sobre todo en la etapa postmenopáusica, se advierte la perdida de los esteroides sexuales lo que en parte, puede explicar el deterioro cognitivo y la neurodegeneración. En estas etapas, aumenta la incidencia de ciertas enfermedades como Alzhéimer y Parkinson con deficiencias mentales, ya que se ha demostrado que los estrógenos son primordiales en el mantenimiento de funciones cognitivas, cuyo sustrato neuronal, se ubica en áreas cerebrales como la corteza y el. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. hipocampo. Se conoce que no hay diferencia alguna entre los niveles de estradiol en aquellas mujeres a las que se les ha provocado la menopausia por tratamiento quirúrgico y aquellas que en forma natural han evolucionado con el paso del tiempo a su etapa de menopausia 35, 36. El efecto de los esteroides sexuales, en especial de los estrógenos, se ejerce. IC A. principalmente por medio de receptores específicos, es decir, por mecanismos. UI M. genómicos, que se han identificado con mucha certeza en distintas regiones. O. Q. de la corteza cerebral; no existe una región cerebral que no tenga receptores. BI. estrogénicos tipo alfa o beta, estos receptores se localizan preferentemente en. IA. Y. la amígdala e hipocampo, reguladores de funciones cognitivas, y en el sistema. AC. límbico. A nivel del SNC los estrógenos tienen efectos proliferativos,. FA. RM. neuroprotectores, neuro-reparadores y participan en la plasticidad del circuito. DE. neuronal, la bioquímica cerebral y la regulación inmunológica. Sin embargo,. CA. pueden actuar a través de una vía no genómica, lo que explica el rápido efecto. TE. de los estrógenos después de su administración y su participación en la. BI BL. IO. plasticidad y la reparación neuronal 37, 38, 39, 40, 41, 42. En cuanto a la evidencia experimental disponible, en un trabajo clásico de Brinton demostró que el agregado de estrógenos conjugados de equino en dosis de 1pg/ml al cultivo de neuronas de roedores por nueve días incrementa el número de prolongaciones dendríticas, que es un marcador del efecto proliferativo de los estrógenos 43.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gould describió lo mismo en una publicación de 1990: la adición de estrógenos a un cultivo neuronal aumentó en forma significativa las prolongaciones, especialmente en el área C1 del hipocampo. En el estudio de Brinton se demostró que los estrógenos también aumentan en forma significativa la longitud de los axones, que constituyen los nervios centrales o. IC A. periféricos que se benefician con la administración de estas hormonas 43, 44.. UI M. El circuito neuronal es el elemento más importante para la adecuada función. O. Q. cognoscitiva del ser humano y se ha demostrado que la administración de. BI. estrógenos mejora este circuito. En un estudio reciente, del año 2004, se. IA. Y. ratificó el efecto positivo que tienen los estrógenos en la formación de nuevas. AC. espinas dendríticas en las neuronas del hipocampo: cuando al medio de. FA. RM. cultivo se adicionó letrozole, un inhibidor de la aromatasa que disminuye las. DE. concentraciones de estradiol sintetizado por la propia neurona, disminuyó. CA. también la formación de nuevas dendritas 45.. TE. Cada neurona que se pierde, supone una pequeña merma en las funciones. BI BL. IO. cognitivas (del conocimiento), intelectuales, sensitivas o motoras de la persona. Se estima que un adulto pierde cada día unas mil neuronas, y que nunca serán reemplazadas. Esa es una cantidad normal, que entra dentro de los límites fisiológicos, y relativamente pequeña comparada con la cantidad de neuronas que forman el cerebro (1011 - 1012 células nerviosas) 15, 46.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Antes se pensaba que las neuronas tenían sólo una vida y no podían aumentar en número, como ocurre en la mayor parte de las células del cuerpo, por ejemplo en la piel, para curar una herida. Se pensaba que cuando una neurona degenera o queda dañada, no había reemplazo para ella; sin embargo, en un estudio en cultivos de neuronas de ratas la administración de estrógenos se. IC A. asoció a aparición de nuevas neuronas; éstas no tuvieron una vida prolongada. UI M. y desaparecieron rápidamente, pero se demostró la alta capacidad. Q. regenerativa que inducen los estrógenos, al menos en animales de. BI. O. experimentación 47.. IA. Y. Thomas demostró que el beta-mieloide, uno de los elementos característicos. AC. de la enfermedad de Alzheimer, está involucrado en la destrucción neuronal. RM. mientras que la adición de 17-beta estradiol incrementa significativamente la. DE. FA. sobrevida de estas células 48.. CA. También ha sido posible observar que los esteroides gonadales tienen. TE. influencia en la regulación serotoninérgica del eje hipotálamo-pituito-adrenal. BI BL. IO. (HPA), alterando la función de los receptores 5-HT1a y 5-HT2 en la corteza y el. hipocampo,. dando. como. resultado. la. disminución. de. la. monoaminooxidasa. La noradrenalina (NA) se aumenta a través de su recambio, por lo tanto, al disminuir la recaptura de NA, como efecto paralelo se disminuye la sensibilidad de los receptores de Dopamina2. Los estrógenos en condiciones normales inducen la renovación y crecimiento de las dendritas y las sinapsis en las neuronas del hipocampo. Esto sugiere que los esteroides. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. gonadales modulan la actividad neural relacionada con el estrés. A mayor estradiol mayor inhibición del eje y su reactividad al estrés 49. Otros autores han observado el mismo efecto neuroprotector de los estrógenos contra la excitotoxicidad por glutamato causado por un aumento excesivo del calcio intracelular, disminuyendo los niveles de glutamato. Con. IC A. relación a estos hallazgos, se han propuesto diversos efectos neuroprotectores. UI M. de los estrógenos a nivel cerebral: favorecen el crecimiento de dendritas,. O. Q. promueven la sinaptogénesis, aumentan la concentración de colina acetil. BI. transferasa en las neuronas colinérgicas, incrementan la expresión de. IA. Y. neurotrofinas, activan el mecanismo de procesamiento no amiloidogénico de. AC. la proteína precursora de amiloide (aumenta la actividad de la α-secretasa),. FA. RM. protegen del daño y muerte celular inducidos por estrés oxidativo. Es por ello. DE. que se está estudiando el efecto antioxidante del estrógeno y a la vez la. CA. búsqueda de nuevas moléculas con capacidad antioxidante 50, 51, 52.. TE. El estrógeno natural más potente en seres humanos es el 17 β-estradiol,. BI BL. IO. seguido por la estrona y el estriol. Cada una de esas moléculas es un esteroide de 18 carbonos, que contiene un anillo fenólico A (un anillo aromático con un grupo hidroxilo en el carbono 3), y un grupo b-hidroxilo o cetona en la posición 17 del anillo D. El anillo fenólico A es la principal característica estructural, de la cual depende la unión selectiva y de alta afinidad a receptores de estrógenos 53, 54. Los estrógenos per se, son antioxidantes, ya que poseen un anillo fenol, el cual puede actuar como un barredor de radicales libres y, a la vez, le permite 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. donar un átomo H+. Esta propiedad le posibilita al estrógeno intervenir en diferentes etapas de la oxidación lipídica. Estudios in vitro han evidenciado la capacidad antioxidativa de los estrógenos, al disminuir la oxidación de LDL y el CuSO4, e inclusive se ha mostrado una disminución de lesiones inducidas por radicales libres en cadenas de ADN. Se ha evidenciado que los diferentes. IC A. estrógenos y sus metabolitos poseen distintas capacidades antioxidativas 55.. UI M. En un estudio comparativo in vitro entre algunos tipos de estrógenos, se logró. O. Q. clasificar la capacidad antioxidativa de mayor a menor, así: estradiol >. BI. estrona > equilin > estriol. Los metabolitos estrogénicos, catecolestrógenos y. IA. Y. metoxiestrógenos, además de funcionar como barredores de radicales libres,. AC. también lograron reducir y mantener reducidas las moléculas de Fe y Cu, lo. FA. RM. cual previene que estas moléculas actúen como oxidantes 55.. DE. Otro estudio ha evidenciado que el estradiol es igual de efectivo que la. CA. vitamina E, en prevenir la oxidación de LDL, e igual o más efectivo que las. IO. TE. enzimas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT) 55.. BI BL. El uso de las plantas medicinales data desde los albores de la humanidad. En el Perú, en 1937, el doctor Carlos Gutiérrez Noriega (1906-1948) inició el estudio racional de las plantas con la hoja de coca y el cactus San Pedro. A partir de 1955 se comenzó a evaluar los efectos farmacológicos de otras plantas. Nuestro país tiene una gran diversidad biológica por el número de especies, recursos genéticos y variedad de ecosistemas 56.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las plantas medicinales juegan hoy en día un rol importante en las sociedades culturales y en el cuidado de la salud de la población urbana y rural a nivel mundial. La mayoría de las investigaciones han sido enfocadas hacia la capacidad antioxidante de los compuestos polifenólicos. Los mecanismos antioxidantes de los polifenoles incluyen atrapamiento de radicales libres y. IC A. quelación de iones metálicos de transición 57.. UI M. El género Calophyllum tiene alrededor de 200 especies, con una distribución. O. Q. pantropical; muchas especies con propiedades medicinales. De algunas. BI. plantas del género Calophyllum existen reportes sobre compuestos tipo triterpenos,. biflavonoides,. Y. esteroides,. piranocumarinas. y. IA. xantonas,. RM. AC. benzopiranos 58.. FA. Calophyllum brasiliense es un árbol que crece en diferentes países,. DE. incluyendo el Perú y alcanza hasta 40m.de altura. Las hojas y la corteza de. CA. esta planta vienen siendo utilizadas por la población, en afecciones de tipo. TE. viral y tumoral. Se distribuye desde el sudeste de México, Centroamérica,. BI BL. IO. hasta América del Sur en Perú y Brasil. También, en las Antillas desde Cuba y Jamaica hasta Trinidad e Indias Occidentales. Como podemos ver, está altamente distribuida en América, la obtención de la misma es bastante asequible en las zonas donde crece, siendo en el Perú, la selva baja. Por su fácil acceso y bajo costo es preferido por la población rural, en reemplazo de los medicamentos convencionales 59. Calophyllum brasiliense, comúnmente llamado “Lagarto Caspi” es una especie herbaria que crece en el Perú, principalmente en los departamentos de 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Madre de Dios, Ucayali y Loreto, entre los 0 y 500 msnm; crece en clima muy húmedo con temperatura media de 25 grados centígrados, de allí la importancia de estudiar esta planta, debido a que se encuentra distribuida en el territorio nacional 59. Muy pocos estudios han sido realizados para conocer las bondades que posee. IC A. Calophyllum brasiliense, planta que posee una composición física y química. UI M. tal que permite atribuirle muchas propiedades beneficiosas, entre ellas está la. BI. O. Q. actividad antioxidante que posee para quien la utilice correctamente 59.. Y. Calophyllum brasiliense, es una planta empleada en la medicina popular para. AC. IA. el tratamiento de varias enfermedades, a la cual se han realizado diferentes. RM. estudios fitoquímicos y farmacológicos; además, es la especie más conocida y. FA. empleada como producto maderable por las constructoras, para pisos e. DE. inmobiliarias. Las hojas, los tallos y las raíces de Calophyllum brasiliense se. CA. emplean para el tratamiento del reumatismo, hemorragias, úlceras,. TE. inflamaciones y se ha confirmado su actividad biológica en reportes con. BI BL. IO. actividad analgésica, antiviral, antifúngica, citotóxica, antiulcerogénico, antitumoral, antibacteriana, moluscicida 58. Se ha reportado efecto antioxidante del extracto metanólico de Calophyllum brasiliense, evidenciado por su capacidad citoprotectora contra la apoptosis inducida, o que indicaría que la actividad citotóxica es selectiva y está dirigida contra células tumorales 60.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Respecto a la actividad antioxidante, solo un reporte sobre Calophyllum brasiliense de los extractos acuoso, metanólico y etanólico fueron determinados con 110,56; 99,17 y 99,57 % de inhibición, respectivamente, a una concentración de 100 mg/mL, mediante el método de captación de radicales libres DPPH 58.. IC A. Es por ello que el presente trabajo no solo pretende demostrar el efecto. UI M. antioxidante del extracto de las hojas de Calophyllum brasiliense, sino la. O. Q. posibilidad de su utilización en la prevención de las enfermedades ya. BI. mencionadas anteriormente, producidas por radicales libres, contribuyendo de. AC. IA. Y. esta manera como una nueva alternativa para la población.. RM. De acuerdo a lo expuesto anteriormente, se planteó el siguiente problema:. FA. ¿Cuál es el efecto de Calophyllum brasiliense en la memoria espacial y la. DE. lipoperoxidación de membranas neuronales en Rattus norvegicus var albinus. TE. CA. ooforectomizadas?. BI BL. IO. En el estudio se planteó la siguiente hipótesis: Calophyllum brasiliense tiene efecto antioxidante expresado en la disminución de niveles de malondialdehído en membranas neuronales y en la mejora de los parámetros de la memoria espacial en Rattus norvegicus var albinus ooforectomizadas.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS Objetivo Generales Determinar el efecto de Calophyllum brasiliense en la memoria espacial y la lipoperoxidación de membranas neuronales en Rattus. IC A. norvegicus var albinus ooforectomizadas.. UI M. Objetivos Específicos. Q. Determinar el efecto de Calophyllum brasiliense en dosis de 0,5. BI. O. g/Kg/día y 2,0 g/Kg/día en la niveles de malondialdehído de. IA. Y. membranas neuronales de Rattus norvegicus var albinus. AC. ooforectomizadas. . RM. Determinar el efecto de Calophyllum brasiliense en dosis de 0,5. FA. g/Kg/día y 2,0 g/Kg/día en la mejora de la memoria espacial. DE. medido a través del tiempo de latencia de escape, tiempo de. CA. permanencia y número de cruzamientos según el Laberinto. IO. TE. Acuático de Morris en Rattus norvegicus var albinus. BI BL. ooforectomizadas.. Determinar la relación entre el efecto de Calophyllum brasiliense en la lipoperoxidación de membranas neuronales y los parámetros de memoria espacial de Rattus norvegicus var Albinus ooforectomizadas.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y METODO. 2.1 Material 2.1.1 Material biológico - Material Animal 30 especímenes de Rattus norvegicus var albinus con las. IC A. siguientes características:. UI M. Hembras de 2 meses y medio de edad, con peso corporal entre 200-. Q. 250 g, que se adquirieron en el Bioterio del Instituto Nacional de. BI. O. Salud - Lima.. IA. Y. Fueron alojados en el Bioterio de la Facultad de Farmacia y. AC. Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, a una. RM. temperatura de 22-27° C, con ciclos de luz/oscuridad de 12/12. DE. FA. horas y alimentación con dieta estándar y agua ad libitum.. CA. - Material Vegetal. IO. TE. Se emplearon 10 kg de hojas de Calophyllum brasiliense con las. BI BL. siguientes características: Secas y aptas para el consumo humano, que se adquirieron del departamento de Loreto y luego fueron identificadas en el Herbario Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.2 Material químico Ácido Tiobarbitúrico, solución 0,67% Ácido Tricloroacético 10%. Agua destilada. Agua bidestilada.. IC A. Malondialdehído (1, 1, 3, 3-tetraetoxipropano).. UI M. N-butanol-piridina (15:1 v/v).. BI. O. Q. Solución Buffer fosfato 20mM pH 7,4.. Material de vidrio. AC. -. IA. Y. 2.1.3 Material de laboratorio. Equipos. FA. -. RM. De uso común en el Laboratorio de Farmacología.. DE. Aparato Laberinto Acuático de Morris.. CA. Balanza analítica RADWAG.. IO. TE. Centrifuga refrigerada SIGMA.. BI BL. Congeladora de tecnopor.. Espectrofotómetro THERMOSCIENTIFIC. pHmetro JENWAY 3510. Termostato THERMOSTAT PLUS.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.4 Otros Algodón. Alimentos para ratas. Cámara digital. Catgut crómico 5,0.. IC A. Gradilla. UI M. Guantes.. Q. Guardapolvos.. BI. O. Jeringas descartables.. Y. Ketamina en ampolla.. RM. Memoria USB 4 GB.. AC. IA. Mascarilla.. DE. Papel Kraft.. FA. Papel filtro Wattman Nº 01.. CA. Progynova 1 mg.. IO. TE. Solución salina 0,9%.. BI BL. Sonda nasogástrica n° 4. Útiles y materiales de oficina. Yodo Povidona.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2 Método 2.2.1 Diseño experimental 61 Se realizó un estudio experimental in vivo siguiendo el diseño clásico o con prueba-post prueba y grupo control.. X1. A. A’. IC A. X2. UI M. B X3. O. X4. D’ E’. AC. IA. Y. X5. BI. D E. C’. Q. C. B’. Grupos. FA. -. RM. Leyenda:. DE. A: Grupo blanco no ooforectomizadas. CA. B: Grupo control ooforectomizadas. IO. TE. C: Grupo patrón ooforectomizadas. BI BL. D: Grupo problema 1 ooforectomizadas E: Grupo problema 2 ooforectomizadas. -. Estimulo X1: Placebo (suero fisiológico 0,9%) por 8 semanas X2: Placebo (suero fisiológico 0,9%) por 8 semanas X3: Fármaco Progynova a dosis de 200ug/Kg/día por 8 semanas X4: Calophyllum brasiliense a dosis de 0,5 g/Kg/día por 8 semanas X5: Calophyllum brasiliense a dosis de 2 g/Kg/día por 8 semanas. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2 Recolección, selección, secado y molienda de las hojas de Calophyllum brasiliense (ANEXO 01) - Recolección y selección de las hojas de Calophyllum brasiliense Se adquirió 10 Kg de hojas de Calophyllum brasiliense, obtenidas del departamento de Loreto, posteriormente fueron llevados al laboratorio,. IC A. se seleccionaron los que se encontraban en mejor estado, descartándose. UI M. los que presentaban signos de alteración o deterioro, como picaduras,. Q. oscurecimiento o rupturas y se lavaron con agua corriente.. BI. O. - Secado y molienda de las hojas de Calophyllum brasiliense. IA. Y. Las hojas de Calophyllum brasiliense fueron llevadas a estufa a una. las. hojas. RM. Posteriormente. AC. temperatura de 40 °C durante 24 horas, para ser desecadas. de. Calophyllum. brasiliense. fueron. DE. FA. pulverizadas con uso de un molino mecánico hasta obtener polvo fino.. CA. 2.2.3 Preparación del extracto seco de las hojas de Calophyllum. IO. TE. brasiliense 62 (ANEXO 02). BI BL. Se pesó 20 g de polvo de hojas de Calophyllum brasiliense, luego se colocó en un balón de fondo redondo, añadiéndose 100 mL de agua destilada, haciéndose hervir por espacio de 10 minutos después de la primera ebullición. Posteriormente se filtró y se obtuvo una solución y un marco. Luego se midió 1 mL de la solución en una luna reloj tarada previamente, se evaporo el solvente de la solución en una estufa a 103°C durante 3 horas hasta obtener el extracto seco. Por diferencia de pesos se obtuvo la cantidad de solidos totales contenidos en 1 mL de la. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. solución. Luego se almaceno en frascos herméticos para evitar hidratación del producto seco.. 2.2.4 Preparación, dosificación y administración del extracto acuoso de las hojas de Calophyllum brasiliense 63, 64, 65. IC A. - Preparación del extracto acuoso de las hojas de Calophyllum. UI M. brasiliense a partir del extracto seco. Q. Para la preparación del extracto acuoso de acuoso de las hojas de. BI. O. Calophyllum brasiliense a una concentración de 0,025 g/mL, se. IA. Y. disolvió 2,5 g de polvo de extracto seco de hojas de Calophyllum. AC. brasiliense en agua destilada en una fiola de 100 mL, luego se. RM. almacenaron en frasco ámbar hasta su posterior uso.. FA. Para la preparación del extracto acuoso de acuoso de las hojas de. DE. Calophyllum brasiliense a una concentración de 0,1 g/mL, se disolvió. CA. 10 g de polvo de extracto seco de hojas de Calophyllum brasiliense en. IO. TE. agua destilada en una fiola de 100 mL, luego se almacenaron en frasco. BI BL. ámbar hasta su posterior uso. - Dosificación y administración del extracto acuoso de las hojas de Calophyllum brasiliense (ANEXO 03) Las dosis utilizadas fueron de 0,5 g/kg/día y 2 g/Kg/día considerando que se prepararon soluciones a concentraciones de 0,025 g/mL y 0,1 g/mL respectivamente. La administración fue por vía oral, durante 8 semanas entre las 14:00 – 15:00 horas, utilizando sondas nasogástricas N° 4.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.5 Dosificación y administración de Valerato de Estradiol 65, 66 Se administró Progynova (Valerato de Estradiol) por vía oral a dosis de 200 µg/Kg/día preparando una solución a concentración de 0,01 mg/mL, posterior a la ooforectomía, durante 8 semanas al grupo patrón.. UI M. Selección de los especímenes (ANEXO 04). IC A. 2.2.6 Selección, preparación y distribución de los especímenes. Q. Se escogió 30 especímenes hembras de 2 meses de edad, aparentemente. BI. O. sanas, con peso corporal entre 200-250 g, que se adquirieron en el. IA. Y. Bioterio del Instituto Nacional de Salud – Lima.. AC. Preparación de los especímenes. RM. Los especímenes fueron alojados en el Bioterio de la Facultad de. FA. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, se. DE. colocaron en jaulas metálicas, manteniéndolas en condiciones de. CA. laboratorio sometidas a las mismas características ambientales de. IO. TE. temperatura, iluminación, alimentación con dieta estándar y agua ad. BI BL. libitum y cuidado. Posteriormente se realizó la ooforectomía a todos los especímenes excepto al grupo blanco y luego se colocaron en jaulas asépticas, dejando un tiempo de 2 semanas para su recuperación, post cirugía.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.7 Producción de lipoperoxidación en membranas neuronales de Rattus norvegicus var albinus 67, 68, 69, 70 Se basa en la extirpación bilateral de los ovarios de los especímenes, originando una disminución en la producción de estrógenos endógenos, con la consecuente inducción del estrés oxidativo, aumentando la. UI M. IC A. cantidad de radicales libres a nivel de las membranas neuronales.. Q. - Realización de la ooforectomía (ANEXO 05). BI. O. Los especímenes de 2 meses y medio de edad, se anestesiaron con. IA. Y. ketamina 100 mg/Kg vía intra-peritoneal, y luego se procedió con. AC. una incisión en la línea media dorsal de la piel, 3 cm de largo,. RM. aproximadamente a medio camino entre el centro de la espalda y la. FA. base de la cola, las incisiones de los músculos se hicieron. DE. bilateralmente. Después se accedió a la cavidad peritoneal, se. CA. encontró el ovario rodeado por una variable cantidad de grasa.. IO. TE. Después se encontró la conexión entre la trompa de Falopio y el. BI BL. cuerno uterino y el ovario se extirpó. Luego se realizó la sutura correspondiente catgut individuales sobre la piel, y se incluyeron en los experimentos luego de 2 semanas, para una mejor sintomatología de la menopausia.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.8 Distribución de los especímenes (ANEXO 06) Los especímenes se distribuyeron en grupos de 5, de manera aleatoria y según el esquema siguiente:. GRUPO BLANCO. IC A. Integrado por 6 Rattus norvegicus var albinus hembras no. UI M. ooforectomizadas que consumieron una dieta normal balanceada, a los. Q. cuales se les administro por vía oral 1mL de agua destilada por un. IA. Y. BI. O. espacio de 8 semanas al término de los cuales fueron sacrificadas.. por. 6. Rattus. RM. Integrado. AC. GRUPO CONTROL. norvegicus. var. albinus. hembras. FA. ooforectomizadas que consumieron su dieta normal balanceada, a los. DE. cuales se les administro por vía oral 1mL de agua destilada por un. IO. TE. CA. espacio de 8 semanas al término de los cuales fueron sacrificadas.. BI BL. GRUPO PATRON Integrado. por. 6. Rattus. norvegicus. var. albinus. hembras. ooforectomizadas que consumieron una dieta normal balanceada, a los cuales se les administro por vía oral tabletas de Progynova (estrógenos conjugados) en dosis de 200 µg/Kg/día de una solución acuosa de 0.250 P/V por un espacio de 8 semanas, al término de los cuales fueron sacrificadas.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. GRUPO EXPERIMENTAL Integrado por 12 Rattus norvegicus var albinus hembras que estarán divididos en 2 sub-grupos:. Sub-grupo 1: El grupo de 6 Rattus norvegicus var albinus. IC A. hembras ooforectomizadas que consumieron cebada y maíz se. UI M. les administro extracto acuoso de las hojas de Calophyllum. Q. brasiliense 0,5 g/Kg/día por vía oral, durante 8 semanas como. Y. BI. O. tratamiento.. AC. IA. Sub-grupo 2: El grupo de 6 Rattus norvegicus va. albinus. RM. hembras ooforectomizadas que consumen cebada y maíz se les. FA. administrara extracto acuoso de las hojas de Calophyllum. DE. brasiliense 2,0 g/Kg/día por vía oral, durante 8 semanas como. IO. TE. CA. tratamiento.. BI BL. 2.2.9 Análisis de la memoria espacial usando el laberinto acuático de Morris (LAM) 71, 72, 73, 74 (ANEXO 07) El Laberinto Acuático de Morris es un modelo ampliamente usado en neurofarmacología y permite estudiar diferentes tipos de memoria de manera exacta y reproducible, y debido a que el presente trabajo desea estudiar la memoria espacial se realizó el siguiente esquema:. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Aparato El laberinto acuático de Morris consta de una piscina circular de 120 cm de diámetro y 56 cm de altura, que se llena de agua a una temperatura que oscila entre 18 y 27 º C, además de estar dividida imaginariamente en cuatro cuadrantes, en donde se sumerge en la. IC A. zona media de una de las cuadrante (cuadrante noreste) una. UI M. plataforma de 19 cm de altura y 12 cm de diámetro; la cual es la. Q. única forma de escape. Además todo el interior de esta piscina es. BI. O. pintado de un color negro para disminuir la visibilidad a la. IA. Y. plataforma y con dos dibujos (sol y luna) a cada uno de los lados. AC. que colinda con el cuadrante noreste donde se encuentra la. . FA. plataforma.. RM. plataforma, que servirá de referencia de donde se localiza la. DE. Condiciones de experimentación. CA. Se realizó en un ambiente donde no había ruido ni otras señales. IO. TE. que generen inatención o desorientación del sujeto experimental.. BI BL. El experimentador se situó lejos y, de aproximarse, lo hacía en continuo movimiento para evitar convertirse en un falso punto de referencia. Se evitó la hipotermia después del ensayo.. . Procedimiento Una semana antes de acabar con la administración de los tratamientos a los diferentes grupos de estudio se procedió a evaluar la memoria espacial a través del laberinto acuático de Morris.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El sistema de trabajo consta de 5 días en los cuales los 4 primeros son de la fase de adquisición y el último es la prueba de retención.. − Fase adquisición: En esta fase la piscina tuvo las claves que se encontrarán en las paredes cerca del cuadrante noreste y además. IC A. se encontrará presente la plataforma. Este fase se iniciará de la. Q. UI M. siguiente manera:. BI. O. a) Se colocó al espécimen con el hocico hacia las paredes de. IA. Y. la piscina, se le deja en el agua en un cuadrante diferente. AC. cada día, menos el cuadrante noreste, para permitir. RM. aprender la tarea de encontrar la plataforma usando las. FA. claves visuales y no vías directas; después se le dejó nadar. CA. DE. libremente durante 120 segundos.. BI BL. IO. TE. b) Después de ese tiempo, sino logró encontrar la plataforma, el experimentador coloca al espécimen en la plataforma 15 segundos, y luego lo retira y seca con una toalla para que se recupere 5 min. continuando con otro ensayo más (hasta 2 ensayos cada uno de 120 segundos) hasta que encuentre la plataforma, pero si el espécimen encontrará la plataforma antes de ese tiempo en uno de los ensayos, se dará por terminada el ensayo del día.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c) Se registró el tiempo que el espécimen logró encontrar la plataforma sumergida en cada uno de los tres ensayos (tiempo de latencia de escape), considerándose como cero segundos los ensayos restantes si el espécimen logrará alcanzar la plataforma antes de 120 segundos en. UI M. IC A. algunos de los ensayos.. Q. − Prueba de retención: En esta prueba la piscina tuvo las claves. BI. O. (sol y luna) que se encuentran en las paredes cerca del cuadrante. IA. Y. noreste y la plataforma no se colocó. Esta prueba se inició de la. RM. AC. siguiente manera:. FA. a) Se dejó nadar a los especímenes durante 60 segundos,. DE. siendo el único ensayo, y se registró el tiempo que el. BI BL. IO. TE. CA. espécimen permanece en el cuadrante noreste donde estuvo la plataforma (tiempo de permanencia) y el número de veces que cruza por el lugar de donde estuvo la plataforma (número de cruzamientos).. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.10 Recolección de la muestra biológica 75, 76 (ANEXO 10) Los especímenes fueron anestesiados por vía intra-peritoneal con ketamina 120 mg/kg. Después se decapitaron, y rápidamente se realizó lo siguiente: Se colocó la cabeza en papel o toalla doblada y utilizando el bisturí #. IC A. 11, se hizo una incisión en el medio, cerca del hueso nasal y corriendo. UI M. en dirección caudal hasta el hueso occipital. Asegurándonos de cortar. BI. O. sutura en la superficie dorsal del cráneo.. Q. por completo a través del músculo cutáneo, y exponer los puntos de. IA. Y. Se cortó las placas del cráneo con tijeras de estuche de disección y. AC. sosteniendo firmemente la cabeza con las manos sobre la mesa se. RM. ingresó la parte baja de la tijera en el agujero occipital y se cortará a. FA. través de la placa occipital, y luego a lo largo de la línea media de la. DE. sutura de las placas parietales hasta la parte frontal.. CA. Se retiró con una espátula y con ayuda de una cuchara de plástico el. IO. TE. cerebro y se colocó en solución de líquido cefalorraquídeo helado.. BI BL. Los cerebros se pesaron y se conservaron a -70°C hasta su análisis.. 2.2.11 Preparación de la muestra neuronal 75, 76 Las muestras neuronales se homogenizaron en 10 vol. (W: v), de 20 mM de tampón fosfato de potasio helada (pH 7.4), que contiene 140 mM KCl, con ayuda de un mortero. El homogeneizado se centrifugo a 1700 × g durante 10 min a 4 ° C, el sedimento se descartó y el sobrenadante, es una suspensión en donde se. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. conserva orgánulos, como las mitocondrias, se separó y se utilizó para los ensayos. Las mezclas se incubaron a baño maría a 37°C y en oscuridad por 60 minutos, luego se adiciono 0.02 ml de ácido tricloroacético al 10%, a cada uno de los tubos de ensayo y se centrifugo a 960xg durante 10. UI M. IC A. minutos a 4°C.. Q. 2.2.12 Determinación de la lipoperoxidación en membranas neuronales de. BI. O. Rattus norvegicus var albinus 75, 77, 78, 79 (ANEXO 11). IA. Y. Se realizó la medición con el método espectrofotométrico de sustancias. AC. reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS), el cual se basa en la reacción. RM. del malondialdehído (MDA) con el ácido 2-tiobarbitúrico (TBA) para. FA. formar aductos cromógenos y fluorescentes de MDA-TBA muy. DE. estables que se cuantifica por espectrofotometría.. CA. Para cada tubo de ensayo se midió 1 ml de fracción soluble obtenida en. IO. TE. el paso anterior y se mezcló con ácido tiobarbitúrico al 0,67%.. BI BL. Esta mezcla se colocó a temperatura de ebullición, en un baño de agua a una temperatura entre 95°C-100°C durante 30-60 minutos. Pasado este tiempo se enfrió las muestras en hielo por 15 minutos. Se realizó una extracción en frío de los aductos con una mezcla de 2,5 ml de n-butanol-piridina (15:1 v/v) con el fin de separar la fase orgánica que se recogió y 0,5 ml de agua destilada.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se centrifugó a 960xg durante 10 minutos a 4°C, los sobrenadantes de cada uno de los tubos de ensayo se recogieron en otros tubos de ensayo vacíos. Se realizó la lectura de las absorbancias a 532 nm.. 2.2.13 Realización de la curva de calibración 80. IC A. 2.2.13.1 Solución estándar de MDA. UI M. Se preparó una solución de 1, 1, 3,3, tetraetoxipropano a una. Q. concentración de 40 mmol de MDA/mL. Esta solución fue empleada. IA. Y. BI. O. para la preparación de los estándares de la curva de calibración.. AC. 2.2.13.2 Curva de Calibración (ANEXO 12). RM. Para cada determinación se realizó una curva de calibración con. FA. estándares de MDA a una concentración de 0.8 a 16 mmoles/mL.. DE. Cada punto de la curva se midió por triplicado y el promedio de estos. CA. valores fue utilizado para graficar la curva de calibración. Las. IO. TE. cantidades de los estándares fueron empleadas para la realización de. BI BL. la curba de calibración.. 2.2.14 Análisis estadístico 74 Se usó el programa de Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) ver. 19.0, todos los datos obtenidos fueron expresados como la media ± desviación estándar y sometida al análisis de varianza (ANOVA) para determinar si hay diferencia entre los niveles de concentración de MDA, tiempo de latencia de escape, tiempo de. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. permanencia y número de cruzamientos y la comparación de medias a los diferentes grupos de estudio se empleó la prueba de Duncan se consideró un valor de p<0.05 para establecer significancia estadística. Para determinar si el efecto es real y si este alcanza el efecto de los estrógenos naturales, se utilizó la prueba de Tukey con un valor de. UI M. IC A. significancia del 95% (p<0.05).. Q. 2.2.15 Ética en investigación 65, 81. BI. O. La primera condición cuando se trabajó con animales de laboratorios es. IA. Y. el respeto por la vida, el dolor o el sufrimiento, pues gracias a ellos se. AC. realizó esta investigación con un propósito científico.. RM. Todos los procedimientos realizados se hicieron para minimizar. FA. cualquier dolor o angustia que dichos animales puedan sufrir, es por. DE. ello que se refinaron los procedimientos para conseguir que estos no. CA. causen sufrimiento. Se puede decir que esta investigación en animales. IO. TE. es éticamente aceptable, debido a que se siguió el principio de las tres R. BI BL. de la experimentación humanizada para con animales, propuesta por Willian Russell (zoólogo y psicólogo) y Rex Burch (microbiólogo) en 1959.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Tabla N° 01: Comparación del efecto entre diferentes grupos control, blanco, problema 1, problema 2 y patrón según niveles de malondialdehído en homogenizado de muestras. ANOVA. Media. Q. gl. F. Sig.. 81,652. ,000. O. Suma de. UI M. IC A. neuronales en Rattus norvegicus var albinus analizados mediante la prueba ANOVA. cuadrática. 29,992. 4. 7,498. Intra-grupos. 2,296. 25. Total. 32,287. AC. IA. Inter-grupos. RM. Y. BI. cuadrados. ,092. TE. CA. DE. FA. 29. IO. LEYENDA:. gl: Grados de libertad. -. p: Probabilidad. -. p< 0.05: Significativo. -. p> 0.05: No significativo. BI BL. -. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 02: Comparación del efecto en la concentración de malondialdehído (nM/mL) en homogenizado de muestras neuronales en Rattus norvegicus var albinus entre grupos analizados, mediante pruebas de Tukey y Duncan.. MDA N. Subconjunto para alfa = 0.05 1. 6. ,590330. 3. 4. UI M. PROBLEMA 1. 2. IC A. GRUPO. BLANCO 6 ,986172 ,986172 PATRON 6 1,122673 PROBLEMA 2 6 1,486628 CONTROL 6 3,436048 Sig. ,204 ,065 1,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. AC. IA. Y. BI. O. Q. Tukey HSDa. MDA. N. Subconjunto para alfa = 0.05. TE. CA. GRUPO. DE. FA. RM. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6.000.. 6. 2. 3. 4. ,590330. IO. PROBLEMA 1. 1. BI BL. BLANCO 6 ,986172 Duncan PATRON 6 1,122673 1,122673 1,486628 PROBLEMA 2 6 CONTROL 6 3,436048 Sig. 1,000 ,450 ,052 1,000 Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos a. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 6.000.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(45) AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. µmol MDA/g de tejido. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FA. RM. GRUPOS DE ESTUDIO. DE. Figura N°1: Efecto de Calophyllum brasiliense en la producción de malondialdehído. BI BL. LEYENDA:. IO. TE. CA. en membranas neuronales de Rattus norvegicus var albinus ooforectomizadas.. PROBLEMA 01: Dosis de Calophyllum brasiliense de 0,5 g/kg/día. PROBLEMA 02: Dosis de Calophyllum brasiliense de 2,0 g/kg/día. : p< 0.05 versus patrón (progynova). : p< 0.05 versus blanco (a favor de problema 1).. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. seg. CA. Figura N°2: Efecto de Calophyllum brasiliense en el tiempo de latencia de escape de. BI BL. LEYENDA:. IO. TE. Rattus norvegicus var albinus ooforectomizadas según Test de Morris.. PROBLEMA 01: Dosis de Calophyllum brasiliense de 0,5 g/kg/día. PROBLEMA 02: Dosis de Calophyllum brasiliense de 2,0 g/kg/día. : p< 0.05 versus patrón (progynova).. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
Documento similar