P r e p a n c i h de Raterla1 MUóico c a c caitribraióna la docenoia de la

Texto completo

(1)

..

c

. *

*

P r e p a n c i h de Raterla1 MUó$ico c a c caitribraión a

la

docenoia de

la

O.A.M. I.

(2)

JIumEZm:

31 u t e r i a l Mol6gico resulta de g n n importancia tanto en dwetb?ia cam0

en

investigación.

Para l a elaboración de t a l material, existen

una

serie de etaaas, que a l final dan como resultado una s e r l e de venaraclanes f l j a s - T a l e s etapas SOD:

1.

n j a c i ó n .

2. Inclusión.

?.

Microtanfa.

4.

Tinción.

5.

Deshidratacl6n.

6.

Aclaranlento.

7.

Montaje.

1.

La

fljación es

un

-roceso usado para D r w w a r l a

muerte

de l a s c h u l a s , con e l

fln

de cawervar l o aejor oosible l a s caractedsticas morfoi6gicas.

Los

fljadoras actúan

sobre

e l urotaplasu de l a s cdlulas, l o transforman

en

geles insolubies uara

lograr

producir l a s -noms nodificaciaies tanto

en

l a estructura cmo en l a f o i u de l a s propias cÓlulas. Para poder

resultar

UM buena substancia fijadora. es necesario que presenta l a s siguientes

ow-

lidades :

A) Rapides de nenetracibn, necesaria para lograr l a fijación de l a s cÓ- lulaa de l a s %mas

externa

e interna

en

e1 menor tierno posible.

B)

h n l d e a de a o c i h , que consiste en cceguiar a i coloide celular en mi

tierno tan

a

f l n de nue no came alteraciaies

en

l a s oamctedsticas norioiógícas.

(3)

D)

Los

f i j o d a e s deben de ser substancias que no interilemn de alguna manera en l a s etapas posterlaes.

Lns fijadores s a i substancias quhlcas de composicikr variable,

p

qua

pueden ser de

un solo

t h o o bien

estar

foxmado de

la

mmia

de varías

sub2

tandas.

En

tdcnioas vegetales, e l fijador

d s

usado es e l que se prepara a base de alcohol, como e l F.A.A.

F6rnaila del P.A.A.

Alcohol de 9 6 0 5O ail. Acid0 acdtico glacial

---

5

d.

Formo1 canerclal ( a l 40%)

---

10

rl.

Agua destilada

---

75

d.

Este fijador omsenta una efectiva aocibn endureoedoni y e l mmterial ve-

getal se mede conservar

nor

un tiempo indetedando.

2. La iaclusi&, cuando es necesaria. es otra de

lea

etapas que tienen

la

finalidad de cmservar a

b s

estructuras en estudio, dentro de

una

subs_

tsncia pldstioa y de esta manera se puede manipular vara

la

realizacibn de 10s C h S .

3.

La

ndcrotcda, consiste

en

cortar

en diferentes pianos a1 tejido que se encuentra o no Incluido. E l material se seociaia aediante

un

aparato de- nominado nicr6tano. qua n r q o m i a i a cortes cuyo

grosor

se nide en micras; l o s micrótmos que d s se van a elpiear

am

los siguientes:

A) PILcldtuno de rotación. Posee una cucMlla Innbrll y horlsmtal, iden- tras que

la

e a t w t u r a norfo1ógio.a incluida se f l j a a una qlanta

mó-

v i l

vertical, quedando en nosic%& perpendicular a l a c u c h i l l q de

rg

n e n que a l mworsq hacia arrlba o hacia a b a j o nasa 701. e l

borde

de e l l a . Esto se logra aocimando oor r o t a d &

una

man3rei.a.

E 3

bl6que de

inolu-

(4)

B)

Mlcrbtomo

de caigelamiento. bmsb de

una

7htiM alimntada

par

M

agente congelante y una navaja que se OTO horismtalnente y que se acerca a l material por seacionar un nlbsro de d o r a s regulado p n un cslibrador.

b s

saocion*s que se logran son do

5

a 50 nioras.

Ir

es- tructura norfoidgica so

monta

en

la

niatina con una solución a?roDiada, como \u?de ser l a de a d c a r a l

5 6 .

E l agente congelante so hace

cir-

cular desde 01 cillndro nus l o contime hasta l a -.latins, donde qri- moro enfrfa y d e s d s congqla a la estructura y a l a a o l u c i h que l a rodea, forundo

un

bloque de hielo.

4.

ia

tinción as ia otaaa ocnsistento ea exaltar l a s estrücturas ids

iu

portantes de l o s t e j i d w vegetales, a través de l a s Irmiedades de

los

colo-

rantes.

5.

La

deshidrataci6n consiste en elindnar e l agua que se encuentra en

k s

oÓlulas: dicha etapa se wede efectuar con

la

ayuda de substancias de2 hfdratentes, kl os e l caso del alcohol.

La

etapa consiste, on

hacer

pasar loa cortes a t r d s de alcoholes de diferente canoentraci6n y mediante un tiempo detendnado cada uno de ellos: se debede iniciar con los do ienor cmcontracibn

hasta

l l e g a r a l alcohol absoluto.

Para canrobar s i

01

t e j i i o se .rncumt a

a

- w f r c t o estado do deshidra- t e o i h , debe do -.onem* una wque-8 gata

d-

x i l o l : s i 1 4 mezcla se torna de color 1-choso, se indica niie o1 tejido se encuentra aún hidratado y

?or

l o tanto debo de iniciarse do nunva cuenta l a etana de deshidrht~cibn.

6.

g i aoiaradento es l a * t a w siguimnte, y -onsiste en aiicicnar d i o l a los cortes ?are obt-nor una imagen de mayor .irocisión.

7.

E l montaje es l a Ú l t i m a etma a desrrrollar, se e f s c t b con l a f i n a l l -

dad de lograr de que l a s estructuras morfológícas so conserven durante

un

(5)

i1

...___I..

. .

.*

81

montaje ?enmne&b, necesita

un

m d i o de nontaje que no se evanore p

que conserve a l u t e r i a l biol6glco en caidiciaies adecuadas

mra

an

obser- r a c i h durante mcho t i e w o . Estos tmdlw, deben seoar y dejar sellada l a prepamcida. dos nsdiw muy buenos son l a resina sintdtica y e l bálsamo de

(6)

-

.

t

QuE€?mi:

-

Prenaraoibn

,

tinct& y montaje de estructuras anatdaicas y

morfol6ghas en diferentes ejemiares vegetales.

-

Elaboracih de material visual.

J”IFTCACIQt :

Contribuir en

el

acervo de material diddctico destinado a

la

docencia.

Laboratorio de dorrencia de Bíoiogía

rli

la

U.A.M. I.

1.

ReoopiLci6n MbliográPica de diferentes tdcnicas emleadas

en

la

elaboración de material bioibgico.

2. Entrenamiento en e l uso del equipo empleado

en

dichos tdcnioas.

3.

Elaboraolón de colorantes.

4.

Preparacibn, tincidn y montaje de una gran diversidad de estructuras existentes en l a s diferentes espeoies vegetales.

5.

Etiquetado y registro de l a s greaarsoiaies.

6.

Arreglo de l a s ereparacinies ?ara l a elaboraci6n 39 uterial

(7)

..

I

.

1-5 horas a l a aemna.

3

de Octubre de

1980.

30

de Abril de 1901.

#,

Maria sugenla b a i l s Ortega.

(8)

r

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*.

37

I_ [I-

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P

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f-

U N I V E R S I D A D A U T O N O M A M E T R O P O L I T A N A

I Z T A P A L A P A

P R E P A R A C I O N M A T E R I A L B I O L O G I C 0

C O M O

L A D O C E N C I A

/

D E L A U N I V E R S I D A D A U T O N O M A M E T R O P O -

L I

T A K A I Z T A P A L A P A

+Jo&4eets:

/

P A T R I C I A O R D O m Z CAMACHO

J O S E FERNANDO MARTINEZ HERNANDEZ

(9)

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.-.-

P I c

-

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I i c I c i

-

R E P O R T E F I N A L D E S E R V I C I O S O C I A L

TITULO :

Preparación de material b i o l b g i c o como contribución

a l a docencia de l a Universidad Autbnoma Netropolitaaa Iztapalapa.

NOKBRES MATRICUIAS:

P a t r i c i a Ordbñez Camacho 76319230

José Fernando Martinez Hernández

76318879

B i b l . Maria E u k e a i l e Ortega.

ASESOR :

B i b l . Abraham Kobelkorsky Díaz.

FECHA DE IRICIO:

--

30 de Octubre de 1980.

--

FECHA

DE TERMINACION:

(10)

C..

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.

C.

-*

r .

L

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L

(11)

7 , , ,

.

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L

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L

t-L_

1-

L

r

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L

2. Técnica para t a l l o s , hojas, r a í c e s y embriones (Safranina-Ver

2 1

de rápido)

_ _

_

_

_ _ _

_

_ -

- -

_ _ _

_ -

- - - -

bcida-

_

_ _ _ _

-

_ _

-

_ _ _ _ _ _

_

_ _ _ _ _ _

_

_ _ -

_

_

26

a l c o h b l i c a a l

1%

1

_ _

-

_ _ _ _ _

- -

_ _

_

_ _

-

_

- - -

_ _

---

3.

T é c i i c a para granos de polen ( v i o l e t a c r i s t a l - h i c s i n a

24

4.

Técnica para embriones y t a l l o

( A z u l

de Toluidina

111.

Anatomía

v e g e t a l d e s c r i p t i v a .

IV. i n t e r p r e t a c i ó n de preparaciones f i j a s

_ _ _ _

_

_

_ _ _

_

_ _

_

60

(12)

Conclusione 8

Apéndice

- -

Bibliografía

82

84

(13)

c

Preparación de material b i o l ó g i c o como contribu

-

ción a l a docencia de l a Universidad Autónoma Metro- politana Iztapalapa.

-

preparación, tinción y montaje de t e j i d o s y órga- nos en diversos ejemplares vegetales.

(14)

-

5 -

E l m a t e r i a l b i o l ó g i c o r e s u l t a de gran importancia tanto en docencia

como en l a i n v e s t i g a c i ó n .

Para l a elaboracibn de t a l m a t e r i a l , existen una serie de etapas,

que

a l

f i n a l dan como resultado una s e r i e de preparaciones en forma

per

manente; t a l e s etapas son :

1. F i j a c i ó n .

2 .

inclusión.

3.

Microtomla.

4.

Tincibn.

5.

Deshidratación

6.

Aclaramiento

7.

Montaje.

1.

FIJACIOTI.

F i j a r c o n s i s t e en matar l o

más

rápidamente p o s i b l e a una c é l u l a ,

con e l f i n de que

sus

c a r a c t e r í s t i c a s morfolágicas no cambien y de que

no aparezcan o t r a s d i f e r e n c i a s . Para

lograr

e s t e proceso se

u t i l i z a n

unas substancias denominadas f i j a d o r e s ;

los

f i j a d o r e s que mejor actúan

son

los

que penetran rápidamente y producen

las

menores modificaciones

(15)

- 6 -

La accibn de

los

f i j a d o r e s e s transformar e l c o l o i d e protopasmático

en g e l e s i n s o l u b l e s e i r r e v e r s i b l e s , actúan s o l i d i f i c a n d o e l protopias

ma

por medio de coagulación

o

de precipitación.

Los

resultados de l a

f i j a c i 6 n serán menores cuando

más

v i s c o s o sean

los

c o l o l d e s protoplag

máticos, e s d e c i r , entre más denso e s un c o l o i d e mejor se conserva.

Los

f i j a d o r e s

son

substancias químicas orgánicas

o

inorgánicas que

pueden s e r de

un

solo

t i p o

o

bien e s t a r formadas por l a mezcla de va

-

r i a s substancias.

Para poder r e s u l t a r una buena substancia f i j a d o r a , e s necesario

que presente l a s s i g u i e n t e s cualidades:

A. Rapidez de penetración, necesaria para l o g r a r l a f i j a c i ó n de l a s c é l u l a s de l a s zonas exteana e interna en e l menor tiempo posi

-

b l e .

B.

Rapidez de accibn, que consiste en coagular a l c o l o i d e c e l u l a r

en un tiempo t a l a f i n de que

n o

cause a l t e r a c i o n e s en l a s ea

-

r a c t e r í s t i c a s morfoibgicas.

C. pH (gradiente de oxidorreduccibn). De preferencia, usar

un

f i -

jador que presente

un

pH ácido, ya que o f r e c e buen-os r e s u l t a

-

dos.

D.

Los

f i j a d o r e s deben de s e r substancias que no i n t e r f i e r a n de a l -

guna manera

en

l a s etapas p o s t e r i o r e s a e s t a metodología.

Para poder r e a l i z a r una p e r f e c t a f i j a c i b n , e s necesario tomar en

cuenta l o s , s i g u i e n t e s r e q u i s i t o s :

(16)

crk:

"

.

7

- 7 -

der de más de

un

centímetro cuadrado, para que

los

f i j a d o r e s

10-

gren penetrar y actuar en un tiempo muy reducido.

B.

La

e l e c c i ó n d e l f i j a d o r determinará que

los

resultados sean

o no

p o s i t i v o s .

C. E l volumen d e l f i j a d o r debe de s e r por l o menos 50 veces mayor que e l volumen de l a pieza.

D.

E l m a t e r i a l que se va a f i j a r debe permanecer e l tiempo adecua-

do. Prolongar e s t e tiempo causará endurecimiento mayores y , a

-

demás, puede i n f l u i r en e l proceso de

l a

microtomfa y de l a

t i n

cibn.

E.

La

temperatura debe de s e r l a d e l medio ambiente.

F. E l r e c i p i e n t e que contenga a l f i j a d o r debe e s t a r perfectamente

cerrado, debido a que e l f i j a d o r e s v o l á t i l y a s í se e v i t a r í a

d i s m i n u i r

su

concentración.

G. Una vez terminado e l periodo de f i j a c i ó n hay que eliminar e l

exceso de f i j a d o r con agua c o r r i e n t e o d e s t i l a d a , para impedir

que e l f i j a d o r impregnado en e l t e j i d o s i g a actuando.

Para l a r e a l i z a c i b n de l a s preparaciones d e f i n i t i v a s , se debe de

f i j a r antes de hacer

los

c o r t e s , para e v i t a r que

los

t e j i d o s se

con

-

traigan.

En

técnicas v e g e t a l e s i e l f i j a d o r

más

usado e s

e l

que se p r e

para a base de alcohol, t a l e s e l caso d e l F.A.A.

(formol-aceto-a1coho.R).

Fórmula d e l F.A.A.

Alcohol de 96'

- - -

-

- - -

50

ml.

Acid0 a c é t i c o g l a c i a l

---

5

ml.

Formo1 comercial ( a l 40%)

---

10 m l .

35

m l .

(17)

-

a -

Este

f i j a d o r t i e n e una e f e c t i v a a c c i ó n endurecedora y e l m a t e r i a l

ve

g e t a l se puede conservar p o r un tiempo indeterminado.

2. INCLUSION.

la

inclusidn e s o t r a de l a s etapas que tienen l a f i n a l i d a d de con-

s e r v a r l a s p i e z a s por e s t u d i a r en e l i n t e r i o r de alguna substancia '1

que penetre hasta

l o más

i n t e r n o de l a s estructuras celulares. De

es-

t e modo

se

obtienen bloques f á c i l e s de manejar, dentro de l o s cuales

estan

los

t e j i d o s orientados en e l plano deseado.

Una

vez

i n c l u i d o s ,

los

t e j i d o s adquieren una consistencia t a l que

se

puedan c o r t a r

en

secciones sumamente delgadas

sin

m o d i f i c a r l a

forma

y l a estructura d e l t e j i d o .

La

i n c l u s i ó n se puede r e a l i z a r en parafina, g e l a t i n a , c e l o i d i n a ,

cubos de h i e l o y muchos

otros

medios.

3.

MICROYOMU.

La

microtomla c o n s i s t e en c o r t a r en d i f e r e n t e s planos a

los

t e j i d o s

y órganos que s e encuentran o

no

i n c l u i d o s ;

a l ser

cortados, e s necesz

r i o

que conserven

l o s

s u f i c i e n t e s d e t a l l e s para BU e s t u d i o microsc6pi-

co

y

más

tarde

su

i d e n t i f i c a c i h . E l m a t e r i a l se secciona mediante un

aparato denominado microtomo, que proporciona c o r t e s cuyo g r o s o r se

mide en micras.

Existen v a r i o s t i p b s de microtomos y e n t r e

los

más

usados se encueg

t r a n :

a. Microtomo de

mano.

b. Microtomo de mesa.

(18)

-

9 -

d. Microtomo de r o t a c i b n . e. Microtomo de congelamiento.

a. Microtomo de mano.

Consiste en una p l a t i n a m e t á l i c a

o

de v i d r i o , con una cavidad cen

-

tral. La p l a t i n a e s t á firmemente montada sobre un c i l i n d r o hueco, den-

t r o d e l c u a l hay un c i l i n d r o ~ 6 l i d o que puede moverse por

un

mecanis

-

mo de t o r n i l l o que hace s a l i r a l o b j e t o sobre l a p l a t i n a .

Los

c o r t e s se hacen psando sobre la p l a t i n a e l borde a f i l a d o de

una

nE

v a j a de mano.

b.

ES

banco de l a

Microtomo de mesa.

semejante a l a n t e r i o r ,

sólo

d i f i e r e en que pueden a j u s t a r s e a

un

o a

una

mesa, de manera que s e obtiene

un

mejor c o n t r o l manual

navaja.

Algunos m a t e s i a l e s , como es e l c a s o de las r a í c e s y t a l l o s , fácilmeg

te pueden c o r t a r s e en delgadas s e c c i o n e s colocaltdo un fragmento en e l

c i l i n d r o d e l microtomo. Pero hay o t r o s materiales, como 'las h o j a s de

UH á r b o l o

los

p é t a l o s de una f l o r , son muy delgados y

n o

s e podrían

c o r t a r directamente, en e s t o s c a s o s s e hace

un

c l i a d r o de zanahoria,

s e c o r t a

a

la m i t a d , se c o l o c a

la

h o j a e n t r e la hendidura y se

f i j a

en e l hueco d e l microtomo, haciéndose

los

c o r t e s .

c. Microtomo

&

En e s t e t i p o de en la p l a t i n a y

la

d e s l i zamient o.

(19)

-

10

-

l a que permanece f i j a y e l t e j i d o

es

e l que se hace pasar por

su

borde

para e f e c t u a r

los

c o r t e s que se logran de

5

a 50 micras. Este aparato

se acciona en sentido h o r i z o n t a l y

no

a t r a v é s de engranes o placas,

como en e l caso d e l microtomo de rotacibn.

d.

Microtorno

&

rotacibn.

Posee una c u c h i l l a inmbvil y h o r i z o n t a l , mientras que e l t e j i d o

io

c l u i d o se f i j a a una p l a t i n a móvil v e r t i c a l , quedando en p o s i c i ó n per

-

pendicular a l a c u c h i l l a , de manera que a l moverse hacia a r r i b a

o

ha-

c i a a b a j o pasa p o r e l borde de e l l a . Esto se l o g r a accionando por

ro-

t a c i ó n una manivela. E l bloque de inclusibn avanza autodticamente h&

c i a l a c u c h i l l a , después de cada c o r t e , por medio de

un

mecanismo p r e

viamente ajustado, que p o r l o g e n e r a l comprende c o r t e s de

1

a

25

m i

-

cras.

e. Microtorno

be

congelamiento.

E l microtomo de congelamiento consta de

una

p l a t i n a alimentada por

un agente congelante ( C O Z ) y una navaja que se mueve horizontalmente,

ésta

se acerca a l m a t e r i a l por seccionar mediante l a acción de una

manivela. E l agente congelante se hace c i r c u l a r desde e l c i l i n d r o que

l o contiene hasta l a p l a t i n a , donde primero se e n f r í a y después con

-

g e l a e l m a t e r i a l a l c u a l previamente se l e ha colocado agua hasta

fog

mar

un

bloque de h i e l o . Dicho bloque asciende en

forma

automática a l

accionar l a c u c h i l l a y de e s t a

manera

se hacen

los

c o r t e s y se recogen

con p i n c e l e s f i n o s y más tarde se colocan en un recipiemte con agua.

E l número de micras e s regulado por

un

c a l i b r a d o r y l a s secciones es-

(20)

. -

6 E

e

U ma I m m 1 1

-

11

-

4.

TINCION.

La

t i n c i ó n

e s

la

etapa consistente en e x a l t a r l a s estructuras

más

Importantes de

los

t e j i d o s v e g e t a l e s a t r a v é s de l a s propiedades de

los

colorantes.

Existen dos t e o r í a s para e x p l i c a r

la

coloración, una de c a r a c t e r

f í s i c o y

de demostrar cómo penetran

los

c o l o r a n t e s y cómo se f i j a n .

La

penetra-

c i ó n d e l colorante e s aceptada como un fenómeno osmótico,

pero

su

f i -

j a c i ó n , según

l a

t e o r í a f í s i c a , se debe a fenómenos de adsorcibn (ad- s o r c i ó n e s l a propiedad de

los

cuerpos s ó l i d o s de a t r a e r hacia e l l o s

p a r t í c u l a s minÚsculas d e l m a t e r i a l l i q u i d o que

les

rodea; e s t a s p a r t í -

c u l a s pueden s e r compuestos

o

iones).

Ln

t e o r í a química atribuye e s t e proceso a l a

unión

e n t r e l a s moléculas d e l colorante con

los

elemen-

t o s constituyentes d e l t e j i d o . E l p r i n c i p i o base de e s t a t e o r í a con-

s i s t e

en

que c i e r t a s r e g i o n e s c e l u l a r e s t i e n e n

un

pB a l c a l i n o y se

tifien con

los

c o l o r a n t e s básicos. Una t e r c e r t e o r í a u n i f i c a a l a s an-

t e r i o r e s y e x p l i c a que

los

fenómenos de t i n c i ó n se deben a procesos

f í s i c o s g químicos que interactúan durante e s t e proceso.

o t r a de c a r a c t e r quimico.

Las

dos

se

enfrentan a l problema

A s í mismo,

los

c o l o r a n t e s

se

c l a s i f i c a n en ácidos, básicos, anfb-

t e r o s y neutros.

Un

colorante á c i d o e s aquel

en

e l que l a propiedad de t e ñ i r r e s i d e ea

e l anión (Valencia negativa).

Un

colorante b á s i c o e s e l que t i e n e l a propiedad de c o l o r e a r con e l

grupo c a t i d n (Valencia p o s i t i v a ) . Ambos c o l o r a n t e s preservan su natu-

(21)

-

12

-

la c o l o r a c i ó n .

Los

c o l o r a n t e s a n f ó t e r o s son

los

que, de acuerdo con e l pH s e com-

portan como a n i b n i c o s o c a t i b n i c o s ; e s t e pH c r i t i c o r e c i b e e l nombre de punto i s o e l é c t r j co.

Un c o l o r a n t e neutro generalmente e s t á formado de un

solo

compuesto

derivado de o t r o á c i d o

o

b á s i c o en e l cual t a n t o

la

p a r t e a n i ó n i c a co- mo la c a t i ó n i c a son c o l o r a n t e s .

Los

c o l o r a n t e s

son

c a t - i o n e s a b a j o de

su

punto i s o e l é t r i c o y a n i o -

su

punto i s o e l é c t r i c o , de modo que e l

pH

de

la

s o l u c i ó n

n e s sobre

que contengan

a

los

c o l o r a n t e s e s muy importante, pues determina si

obra

o no

sobre las p a r t e s c e l u l a r e s como á c i d o

o

como base.

Por o t r o l a d o , e x i s t e n una s e r i e de f a c t o r e s que i n t e r v i e n e n fueg temente en la t i n c i ó o , e n t r e e s t o s f a c t o r e s s e pueden mencionar

los

s i g u i e n t e s :

A.

B.

C. D. E.

F.

Pureza de

los

c o l o r a n t e s .

Concentración d e l c olornnte. pH de la solucidn d e l c o l o r a n t e . Temperatura d e l medio ambiente. S u b s t a n c i a s a d i c i o n a l e s .

Tiempo de c o l o r a c i ó n .

51 DESHIDRATACION.

La

deshidratación c o n s i s t e en e l i m i n a r e l agua que s e encuentra

(22)

-

13

-

L..

--

c i a s deshidratantes, t a l e s e l caso d e l a l c o h o l en d i f e r e n t e s concen

-

.-"

b traciones.

-

La

etapa c o n s i s t e , en hacer pasar

los

c o r t e s obtenidos con a n t e r i o -

r i d a d , a t r a v é s de a l c o h o l e s de d i f e r e n t e s concentraciones y durante

determinado tiempo en cada

uno

de e l l o s ; se debe i n i c i a r con

los

de

menor c o n c e n t r a c i h ( en e s t e e s t u d i o se i n i c i b l a deshidratación con

a l c o h o l d e l 60%), hasta l l e g a r a i a l c o b o i absoluto.

Para comprobar s i e l t e j i d o se encuentra en p e r f e c t o estado de d e s

hidratacibn, debe de ponerse sobre un p o r t a o b j e t o s , e l c o r t e con una

pequeña g o t a de a l c o h o l absoluto y posteriormente una gota de x i l o l ;

s i l a mezcla se torna de c o l o r lechoso, e s t o i n d i c a que e l t e j i d o aún

se encuentra hidratado y debe i n i c i a r s e nuevamente l a deshidratacibn.

Se puede e v i t a r una mala deshidratación haciendo pasar a l t e j i d o a

t r a v é s de

3

cambios de

5

minutos en cada uno de

los

a l c o h o l e s gradua-

l e s ( e s t e tiempo puede v a r i a r según e l t e j i d o u órgano a t r a t a r ) .

6.

ACURAMIENTO.

E l aclaramiento e s l a etapa s i g u i e n t e , y c o n s i s t e en a d i c i o n a r x i -

l o 1

a

los

c o r t e s de e s t a manera puede conseguir una i d g e n de

más

c l a -

r i d a d y precisión.

7.

MONTAJE.

(23)

nalidad de l o g r a r que l o s t e j i d o s se conserven durante un tiempo inde-

f i n i d o y de e s t a forma e v i t a r que se destruyan.

E l montaje permanente n e c e s i t a de un medio

que

reuna

l o s

s i g u i e n t e s

r e q u i s i t o s :

A.

No

se

evapore.

B.

Conserve a l m a t e r i a l b i o l ó g i c o en condiciones adecuadas para l a

observación durante mucho tiempo.

C. Debe de tener e l mismo fndice de r e f r a c c i b n que

e l

o b j e t o monta-

do, e s t e í n d i c e e s de aproximadamente

1.54

para l a s c é l u l a s y t e j i d o s que han s i d o f i j a d o s y aclarados.

Los

medios de montaje deben de secar y d e j a r bastante bien s e l l a d a

l a preparación; unos medios de montaje bastante buenos son l a re-

s i n t é t i c a y e l bálsamo de Canadá.

A l

S i n a l , cuando l a s preparaciones se han secado a l a temperatura

ambiente durante v a r i o s d í a s ; se procede a l i m p i a r l a s

con

sumo

cuida-

do y posteriormente se r e a l i z a e l etiquetado. E l etiquetado c o n s i s t e

en c o l o c a r

un

papel engomado sobre

uno

de l o s extremos de l a prepara-

cibn.

Entre

los

datos que debe presentar dicha e t i q u e t a , se encuentran:

a. Tipo de c o r t e realizado.

b.

M a t e r i a l b i o l b g i c o u t i l i z a d o .

C. Técnica de t i a c i b n empleada.

d. Fecha de r e a l i z a c i ó n .

(24)

-

15

-

Ejemplo : Corte t r a i s v e r s a l de t a l l o de

Psilotum.

Técnica : Safranlna-Verde rápido.

16-Febrero-1980.

P a t r i c i a Ordóiiez C. y José Fernando Martinez.

(25)

En

e s t a parte, se aprendió a manejar e l material b i o l ó g i c o y a e l %

borar l a s preparaciones f i j a s que fueran necesarias para l a s labores

de docencia.

Para e l l o , fue necesario tomar en cuenta e l s i g u i e n t e material, ya

que de alguna manera u o t r a , se u t i l i z b en cada

una

de l a s téanicas:

1. M a t e r i a l b i o l ó g i c o .

2 . M a t e r i a l de l a b o r a t o r i o .

Agujas de disección.

Charola.

Navajas.

Me

c he Po.

Pinzas.

T i j e r a s .

Espatula.

P i n c e l e s d e l c e r o y doble cero.

Cinta adhesiva.

Etiquetas.

Papel f i l t r o .

IBmpara de alcohol.

Cajas de preparacibn.

3. Equipo.

-

Balanza.

(26)

-

17

-

-

Fotomicroscopio.

-

Microscopio de disección.

-

Microscopio bptico.

-

Microtomo de congelamiento.

-

R e l o j con segundero.

-

Tanques de COZ

.

4.

C r i s t a l e r í a .

-

Cajas de P e t r i .

-

Cubreobjetos.

-

Embudos.

-

Frascos.

-

Frascos g o t e r o s para colorantes.

-

Goteros.

-

Pipetas.

-

Portaobjetos.

-

Probetas.

-

Vasos de precipitados.

5.

Fi

jadores.

-

Fluido de ñavashin

(Craf).

-

F.A.A. (Formo-aceto-alcohol).

6.

colorantes.

-

Azul de Toluidina a l c o h 6 l i c a a i

1

%.

-

Fucsina á c i d a a l

1%

en Boiucibn a l c o h ó l i c a a l

96%.

-

Safranina "0" acuosa a l

1%.

-

Verde rápido.

(27)

-

18

-

7.

Deshidra tan tes.

-

Acetona.

-

Acetoma-xilol.

-

Alcohol e t i l i c o a l 60%.

-

Alcohol e t i l i c o a i 70%.

-

Alcohol e t i l i c o a i 80%.

-

Alcohol e t i l i c o a i 90%.

-

Alcohol e t i l i c o a i

96%.

-

Alcohol absoluto.

-

Alcohol a b s o l u t o - x i l o l .

8.

Aclarador

.

-

x i l o l .

9.

Medios de montaje.

-

Bálsamo de Canadá.

-

Resina s i n t é t i c a . 10. Otras substancias.

-

HC1 concentrado.

-

S u l f a t o f e r r o s o .

(28)

-

19

-

Dentro de l a s t é c n i c a s que se s i g u i e r o n en e l presente S e r v i c i o so

c i a 1 se encuentran l a s s i g u i e n t e s :

1.

Técnica para epidermis v e g e t a l e s ( Safranina irO'l acuosa a l

1%).

2. Técnica para

t a l l o s ,

hojas, r a í c e s y embriones (Safranina-Verde

rápido).

3.

Técnica para granos de polen ( V i o l e t a cristal-Fucsina ácida).

4.

Técnica para embriones y t a l l o

(Azul

de Toluidina a l c o h ó l i c a a l

1%).

1.

Técnica

E

epidermis v e g e t a l e s (Safranina ltpl acuosa

&

s).

A.

Cortar c u a d r i t o s de hoja de

1

x 1

cm.

B.

Hervir

en

4

m l . de solución acuosa a l

7.5%

de S u l f a t o cúprico

(Cu SO4

-

5

H20) durante 1 a 2 minukos.

C. Agregar

8

m l . de H C l concentrado y de nueva cuenta h e r v i r durante 1

6

2 minutoe.

D.

Vaciar en una c a j a de P e t r i y tender a separar l a epidermis

con

l a ayuda de un pincel.

Es

importante qnikar

los

r e s t o s

d e l mesófilo.

E. Lavar l a epidermis con agua destilada.

F.

Teñir con Safranina "0" acuosa a l

1%

durante 10 minutos en

una p a r r i l l a t i b i a a 60 OC o toda l a noche a temperatura am-

biente.

G. Lavar con agua d e s t i l a d a .

H. üeshidratar con acetona a t r a v é s de 2

6

3

cambios durante

5

(29)

-

20

-

J.

A c l a r a r con x i l o l (2

6

3

cambios).

K. Montar en resina s i n t é t i c a .

Es

recomendable que :

A I h e r v i r

los

cuadritos de l a s hojas con

los

d i f e r e n t e s r e a c t i v o s ,

se haga durante 1

minuto

cuando l a s hojas presenten una c o i s i s

-

t e n c i a suave y durante 2 minutos o

más

cuando l a consistencia

sea un poco más dura.

A l separar

los

r e s t o s d e l mesbfilo, es necesario h a c e r l o

con

mu

-

cho cuidado, ya que e s indispensable obtener una p e r f e t a observa-

c i ó n

de

los

complejos estomiticos.

U r i a vez que se ha quitado e l mes6fil0, se hacen observaciones a l

microscopio ó p t i c o , para seleccionar aquella cara de l a hoja que

presente la mayor cantidad de estomas.

La

t i n c i ó n

con

Safranina ‘10‘1 acuosa a l 1% presenta e x c e l e n t e s re-

sultados a l dejarse d i c h o colorante durante toda l a noche a tea-

peratura ambiente.

técnica se a p l i c ó a l s i g u i e n t e m a t e r i a l :

a. Epidermisbde Dianthus ( c l a v e l ) .

b. Epidermis de Gladiolus ( g l a d i o l a ) .

C. Epidermis de

Sedum

(conchita).

d. Epidermis de

Yucca.

(30)

2 .

-

21

-

Técnica

para

t a l l o s , r a í c e s embriones (Safraaina-Verde

--

rá-

pido).

A.

B.

C. D. E.

F.

G.

H.

I.

J.

Cortar t r o z o s pequeños de m a t e r i a l que se va a t e ñ i r de aproxina-

damente

1

por lado y f i j a r en F.A.A. por l o menos durante

48

horas, teniendo cuidado de que e l f i j a d o r cubra perfectamente a l

material.

Lavar

con

agua c o r r i e n t e durante una hora aproximadamente.

Cortar

con

microtomo de congelamiento y r e c o g e r

los

c o r t e s en

una c a j a de P e t r i con agua d e s t i l a d a , u t i l i z a n d o

un

pincel.

Teñir con Safranina ''0" a l 1% durante 10 minutos.

Lavar con agua destilada.

Deshidratar con a l c o h o l e s graduales

(60°, 70°, 80°, 9

0

'

y

)

'

6

9

haciendo

3

cambios en cada a l c o h o l y

5

minutos

e n

cada cambio.

T e ñ i r con Verde r á p i d o a l c o h ó l i c o durante 30 a 60 segundos.

Lavar con a l o h o l absoluto

(3

a

4

cambios). A c l a r a r con x i l o l

(3

cambios).

Montar en r e s i n a s i n t é t i c a

o

bálsamo de Canadá.

Como

recomendaciones, se pueden mencionar l a s s i g u i e n t e s :

-

E l lavado d e l m a t e r i a l s e r e a l i z a en

un

f r a s c o

l o

bastante grande a l que se

coloca

una gasa

l a

c u a l e s sujetada por una l i g a en l a boca de

dicho f r a s c o $ inmediatamente se hace c i r c u l a r libremente e l chorro de

agua c o r r i e n t e , l a cual quita e l exceso de f i j a d o r y de e s t a manera

(31)

-

r.

-

22

-

I

-

Los

c o r t e s en e l microtomo de congelamiento, se r e a l i z a r o n por

l o

general de 20 a 40 micras. A q u í se toma muy en cuenta l a posición de

los

trozos

d e l material, e s d e c i r , deben de s e r coloados sobre

l a p l a t i n a en una posición :Lo más v e r t i c a l posible (para c o r t e s transversales), ya que s i

no

se hace de e s t e modo, entonces

los

c o r t e s tienden a s a l i r sesgados y por

l o

tanto ya no s i r v e n para

los

propósitos perseguidos.

-

También e s necesario mantener e l f l u i d o de congelamiento en forma constante,

con

e l f i n de e v i t a r

un

proceso de descongeiamiento a

los

cubos de h i e l o .

-

Se r e a l i z a una mayor cantidad de c o r t e s posibles, ya que de e s t a manera se t i e n e l a oportunidad de escoger

los

más

completos y en

una mayor proporción.

-

En l o r e f e r e n t e a l a

t i n c i ó n corí

Safraaina acuosa a l

l%,

se obtie-

nen e x c e l e n t e s resultados,

a 1

d e j a r

los

c o r t e s durante toda l a

no-

che a temperatura ambiente.

-

Todos

los

c o r t e s se tifíeron en

conjunto,

usando para e l l o l a s ca

-

j a s de P e t r i ; con

un

g o t e r o se r e t i r a e l sobrante de cada substan-

c i a y se agrega l a s i g u i e n t e , cuidando de no sacar

l o s

c o r t e s

con

e l

mismo.

-

E l lavado con agua d e s t i l a d a se hace cuantas veces sea necesario, ya

és-

que e l propósito e s e l de q u i t a r e l exceso de colorante, cuando

t e e s acuoso.

(32)

-

23

-

c e s a r i o deshidratar nuevamente con la a d i c i ó n de a l c o h o l a b s o l u t o v a r i o s cambios, y posteriormente x i l o l .

-

Es

importante que

los

cambios de a l c o h o l a b s o l u t o y de x i l o l , así

como e l montaje se r e a l i c e n e n forma r á p i d a , ya que l a s prepara

-

c i o n e s pueden hidratarse fácilmente s i no se toma en cuenta esta

medida. También. se recomienda que las cajas de P e t r i que conten-

gan

l o s

c o r t e s , se mantengan tapadas para e v i t a r h i d r a t a c i o n e s durante e l montaje.

-

Otro d e t a l l e de importancia, e s que s i se d e j a n

los

c o r t e s

en

xi-

lo1

durante mucho tiempo, e s t o s tienden a endurecerse y arrugar

-

se siendo d i f í c i l su manipulación.

La a p l i c a c i ó n de la t é c n i c a , se e f e c t u ó en e l m a t e r i a l que

a:

continuación se menciona:

a.

T a l l o modificado de Casuarina.

b.

T a l l o de Cyperaceae.

c. T a l l o de Equisetum.

d. T a l l o de Lycopodium.

e. T a l l o de Psilotum con sinangios. f. T a l l o de Sechium (chayote).

g. Hoja de

Ficus

e l a s t i c a (hule).

h. Hoja de

m.

i. R a í z de Gramineae (monocotiledónea).

j. R a í z secundaria de Vicia faba (haba).

k.

Embriones de

Vicia

faba (haba).

*

'

En este c a s o se u t i l i z ó Craf como f i j a d o r ya que e s recomendable u s a r un f i j a d o r suave para t e j i d o s embrionarios, a s € también se de-

(33)

L

-

24

-

pl c L

-

L I

En todos

los

casos se h i c i e r o n c o r t e s t r a n s v e r s a l e s excepto ea

l o s embriones de haba que fueron longitudinales.

3.

Técnica para granos de polen ( V i o l e t a cristal-Fucsina

ácida).

A. Poner e l polen sobre un portaobjetos.

B.

Agregar una gota de a l c o h o l e t í l i c o a i 70%.

C. Dejar evaporar a l a i r e .

D. Agraegar una gota de a l c o h o l e t í l i c o a i 90% y c a l e n t a r sobre

una lámpara de a l c o h o l para f i j a r e l m a t e r i a l a l portaobjetos.

E. Teñir durante un tiempo de 1 a

5

minutos:

-

Una gota de a l c o h o l e t f l i c o a l

96%.

-

Una gota de v i o l e t a c r i s t a l a l 1%

en

solución a l c o h ó l i c a .

-

Una gota de Fucsina ácida de 1% en solución a l c o h ó l i c a .

F.

Lavar con a l c o h o l e t i l i c o d e l

96%

G. Deshidratar con a l c o h o l e t f l i c o absoluto

(3

cambios de

5

m i -

nutos cada uno).

H.

A c l a r a r con

x i l o l :

3

cambios.

I. Montar en r e s i n a s i n t é t i c a

o

bálsamo de Canadá.

J.

Secar en e s t u f a t i b i a .

Se recomienda que:

-

A 1 c o l o c a r l a gota de a l c o h o l e t i l i c o d e l

96’

y f i j a r e l %

t e r i a l en e l p o r t a o b j e t o s a l a flama de una lámpara de a l c o -

(34)

._

c

I

-

25

-

.

hacer rápidamente, ya que

s i

se deja bastante tiempo, entonces se

quema e l material.

Antes de t e ñ i r ,

se

n e c e s i t a d e j a r e n f r i a r todo e l portaobjetos, ya

que de e s t e modo se e v i t a l a e f e r v e s c e n c i a d e l polen y además se

presenta una f á c i l manipulación de l a preparación.

E l tiempo de

t i n c i ó n

para

los

granos de polen en

los

d i f e r e n t e s e-

jemplares v e g e t a l e s o s c i l a e n t r e l y 2

minutos.

S i se d e j a t e ñ i r

más

de

este

tiempo, entonces e l m a t e r i a l se s o b r e

tiiPe y por l o tanto ya

no

presenta s e r v i c i o a los f i n e s a l c u a l se

destine.

E l lavado

con

a l c o h o l e t f l i c o de

96'

se hace tantas v e c e s

como

sea

necesario, ya que e l p r o p ó s i t o e s de q u i t a r e l exceso de

los

colo-

rante

s.

Otra recomendación, e s e v i t a r l a mezcla de granos de polem de

los

d i f e r e n t e s ejemplares.

La

presente técnica de t i n c i ó n , se l l e v ó a cabo en e l s i g u i e n t e mate- c

I r i a l :

I

a. Granos de polen de Antherrhinum ( p e r r i t o s ) .

b.

Granos de polen de Gladiolus ( g l a d i o l a ) .

I

c

I C. Granos de polen de L i l i u m (azucena).

(35)

-

26

-

4.

Técnica

para

embriones

-

t a l l o ( A z u l

--

de Toluidina a l c o h d l i c a

-

a i s ) . A. Lavar en agua c o r r i e n t e durante 1 hora aproximadamente.

B.

Cortar en microtomo de congelamiento y obtener

los

c o r t e s en una

c a j a de P e t r i conteniendo agua destilada.

C. Deshidratar con a l c o h o l e s graduales

(60°,

70°,

80°, 90' y 96O),

se r e a l i z a n

3

cambios durante un tiempo de

5

minutos en cada

uno.

D.

Teñir con a z u l de t o l u i d i n a a l c o b 6 l i c a a l 1% durante 20 minutos

o

toda l a noche a temperatura ambiente.

E. Lavar con a l c o h o l absoluto.

F.

Aclarar con

x i l o l :

3

cambios.

G. Montar en r e s i n a s i n t é t i c a .

La t4cnica se a p l i c d a l s i g u i e n t e material:

a. hibriones de V i c i a faba (haba).

b. T a l l o joven.de Quercus SE.

--

Los embriones de V i c i a faba (haba se f i j a r o n con Craf y

los

c o r t e s

se efectuaron a un

grosor

de 25 micras y en

un

plano longitudinal.

La t i n c i ó n a base de

A z u l

de Toluidina a l c o h ó l i c a a l 1% presenta exce-

l e n t e s resultados a l dejarse durante toda l a noche a temperatura am

-

biente.

Para l o s t a l l o s jóvenes de guercus S E . se deja en S u l f a t o f e r r o s o

durante

n i n i f e r a s ,

los

c o r t e s se r e a l i z a r o n a 20 micras en plano transversal.

(36)

-

27

-

A . Descripcibn de t e j i d o s .

1. KERISTEMOS

Los

meristemos son t e j i d o s embrionario5 que se conservan como t a l

hasta

e l

estado adulto d e l v e g e t a l , su función e s p e r m i t i r e l desarro-

llo

y crecimiento de éste. Son t e j i d o s que se caracterizan por poseer

pocos rasgos de d i f e r e n c i a c i b n en sus c é l u l a s ,

las

cuales mantienea

su

capacidad p r o l i f e r a t i v a y a

su

vez conservan

su

carácter embrio

-

nario.

Las c é l u l a s meristemáticas generalmente tienen una pared delgada, son de forma

d s

isodiamétrica que l a de

los

t e j i d o s maduros y

más

r i c a s en protoplasma. Normalmente

los

protoplastos de

los

meristemos

estan deeprovistos de material de reserva y c r i s t a l e s .

La

presencia

de vacuolas en

los

meristemos e s frecuente, así entre mayor e s e l

tamaño de

la

c é l u l a mayor e s l a presencia de vacuolas.

E l proceso de crecimiento y e s p e c i a l i z a c i b n anatómica y funcional

que r e a l i z a n l a s c é l u l a s de

los

meristemos produce l a d i f e r e a c i a c i h

que da como resultado l a formación de t e j i d o s adultos ya e s p e c i a l i z a -

dos.

.

Los

meristemos pueden c l a s i f i c a r s e según

:

(37)

-

28

-

En

e l

primer caso s e suelen c l a s i f i c a r en t r e s t i p o s :

a )

b)

C )

Meristemos a p i c a l e s .

Los

c u a l e s se encuentran en

los

ápices

de las

r a í c e s

y

de

los

t a l l o s p r i n c i p a l e s

y

l a t e r a l e s .

Meristemos i n t e r c a l a r e s .

Los

c u a l e s

se

encuentran e n t r e

los

t e j i d o s maduros, por

ejemplo

en

l a base de l o s entrenudos de

las gramheas.

Meristemos l a t e r a l e s .

Que suelen colocarse alrededor d e l órgano e n que

se em

cuentran, como por ejemplo, e l

cambium

vascular

y

e l f e l ó -

geno.

Según

su

origen

los

meristemos s e c l a s i f i c a n e n :

a )

Meristemos primarios.

Son a q u e l l o s cuyas c é l u l a s derivan directamente de

las

c é l u l a s embrionarias

y que

conservan

t a l e s t r u c t u r a embrio-

naria.

En

los

meristemos primarios

se

distinguen diversas

regiones con d i f e r e n t e s n i v e l e s de diferenciación.

A s í

pues,

encontramos que en

los

meristemos a p i c a l e s primarios s e

d i f e r n c i a n

dos

zonas

: una

promeristemática (zona externa)

que consta de c é l u l a s i n i c i a l e s a p i c a l e s

y

o t r a zona que

es

l a

meristemática (zona i a t e r n a ) que e s t a c o n s t i t u i d a por

t r e s meristemos

:

h

Protodermis: de

l a

c u a l s e d e s a r r o l l a e l t e j i d o e p i -

dkrmico d e l vegetal.(ver

Fig. 1).

-

Procámbium: de é s t e derivan

los

t e j i d o s vascuales

(38)

-

29

-

primarios (xilema y floema primarios).

-

Meristem0 fundamental: de 6 1 se d e s a r r o l l a n

los

t e j i -

dos fundamentales de l a planta, como

son

e l pardnquima, esclerknquima, médula y

cg

lénquimi. (Ver Fig. 1).

b) Meristemos secundarios.

Son

a q u e l l o s que

se

d e s a r r o l l a n a p a r t i r de t e j i d o s

a-

d u l t o s ya d i f e r e n c i a d o s y en

los

cuales no s e distinguen

morfológicamente d i s t i n t o s estadlos.

E l crecimiento que presentan e s t o s meristemos se l e llama

crecimiento secundario, e l c u a l se va

a

c a r a c t e r i z a r p o r

ser un crecimiento en espesor que sufre dicho v e g e t a l .

Los

meristemos secundarios son:

-

Cambium vascular.

-

Felbgeno.

Ambos meristemos son considerados como meristemos l a t e r a -

l e s .

E l cambium vascular se d i c e que adopta l a estructura

de cordones l o n g i t u d i n a l e s o de c i l i n d r o hueco.

Como e s b i e n sabido en monocotiledbneas e l procdmbium e s

e l que s e d i f e r e n c i a y da o r i g e n a

los

t e j i d o s vasculares

primarios.

En d i c o t i l e d b n e a s y gimnospermas una porción d e l procam-

bium conserva su capacidad meristemática y por

l o

tanto

(39)

L .

r I"

-

30

-

-

c

L

r

.-

c

L

r

L

c

L

....

secundari

o.

E l cambium e s t a formado por dos t i p o s de c é l u l a s :

1.

~ é i .

i n i c i a l e s fusiformes.

Son c é l u l a s l a r g a s y con extremos aguzados.

2. Céi. i n i c i a l e s radiales.

Células

más

pequeñas que l a s a n t e r i o r e s y

c a s i iaodiamétricas.

E l feiógeno e s más s e n c i l l o que e l cambium vascular pues t i e n e solamente un t i p o de c é l u l a a i n i c i a l e s . E l pro

toplasma de l a s c é l u l a s d e l felbgeao presenta vacuolas de

(40)

~.

..

..

"

-

31

-

.."

i

P-

._

2.

EPIDERMIS

La epidermis es l a capa de c é l u l a s más externas que recubren to- do e l cuerpo de l a planta. En

e l

caso de l a r a í z suele denominarsele

rizodermis, debido

a

que t i e n e d i f e r e n t e origen,

f u n c i ó n

y estructura.

La

función

primordial de

l a

epidermis e s l a de actuar como una estruc

-

tura

que permita l a transpiracibn, da protección mecánica, permite e l

intercambio gaseoso a t r a v é s de

los

estomas y también actúa como una

zona de almacenaje de agua y productos metabólicos.

Las

c é l u l a s epidérmicas tienen generalmente forma tabular, es d e c i r ,

son angostas en d i r e c c i ó n normal a l a s u p e r f i c i e d e l brgano.

La

farma

de e s t a s c é l u l a s e s t a relacionada con l a

forma

d e l órgano v e g e t a l

bre e l que se hallan.

so-

Las c é l u l a s epidérmicas contienen 'protoplastos vivos, suelen

ser

vacuoladas y presentan leucoplastos.

Los

p l a s t i d i o s que presentan l a s

c é l u l a s epidérmicas no se hallan definitivamente d i f e r e n c i a d o s como

c l o r o p l a s t os.

Algunos helechos, plantas acuáticas y c i e r t a s plantas vascukares supe-

riores

t e r r e s t r e s contienen protoplastos bien d e f i n i d o s e n l a epidermis.

En

los

p l a s t i d i o s de l a epidermis se ha encontrado almidón y en

e l

jugo c e l u l a r se ha v i s t o l a presencia de antocianinas.

Las

paredes de l a s c é l u l a s epidérmicas tienen

un

grosor variable,

l a s hay desde l a s que poseen una pared delgada hasta o t r a s con paredes

sumamente gruesas, e incluso pueden e s t a r l i g n i f i c a d a s como

en

e l caso

(41)

-

32

-

n í

feras.

En l a s paredes e s común encontrar punteaduras primarias y plasmo

-

demos.

En l a s paredes s u p e r f i c i a l e s de l a s c é l u l a s epidérmicas e x i s t e

una sustancia l i p í d i c a , l a cutiira. Esta substancia se encuentra de=-

tro

de l a pared c e l u l a r . A

su

v e z é s t a forma l a capa denominada

cu

-

t í c u l a , l a que suele encontrarse en l a s u p e r f i c i e externa de l a pa-

red c e l u l a r . Esta capa t i e n e

un

grosor muy v a r i a b l e en l a s plantas,

generalmente e l

grosor

depende de l a s condiciones que prevalezcan

en

los

s i t i o s ocupados por

los

v e g e t a l e s y de

otros

f a c t o r e s descono

c i d o s que i n f l u y e n en e s t a forma, por e l l o l a s u p e r f i c i e de l a

c u t í -

cula puede s e r l i s a , rugosa y arrugada

o

surcada.(Ver Fig.

8, 9,

12 y

Dentro de l a s c é l u l a s que constituyen e l t e j i d o epidérmico se

en

-

13)

cuentran 2

a ) Estomas.

En l a epidermis e x i s t e n discontinuidades

o

pequeñas aperturas

que son

los

estomas ( d e l g r i e g o estoma

-

boca; estructuras a t r a v é s

de l a s cuales

se

efectúa e l intercambio gaseoso).

Estan formados por

dos

c é l u l a s oclusivas que forman

un

poro y dos o

más

c é l u l a s adyacentes

a

l a s loclusivas a

l a s

cuales se l e s denomina

c é l u l a s anexas

o

acompañantes ( l a s cuales pueden e s t a r presentes

o

no).

Así pues a l

conjunto

antes r e f e r i d o suele dársele e l nombre de

p l e

j o

estomático.

com-

Los

estomas se encuentran sobre todo en l a s partes aéreas de l a planta,

su

presencia e s mayor en l a s hojas (principalmente en e l en

-

vés), aunque también suele encontrarseles en t a l l o s normales y

r i z o

-

(42)

-

33

-

zomas. Estan ausentes en r a í c e s y en plantas p a r á s i t a s

sin

c l o r o f i l a .

Las

c é l u l a s estomáticas generalmente tienen forma arrifíonada, a excepcidn de las gramheas y ciperáceas. E l tamaño de

la

apertura va-

r i a según

los

cambios de turgencia que ocurran en l a s células.

Se distinguen s e i s t i p o s de complejos estomáticos ea dicotiledbneas,

e s t a c l a s i f i c a c i ó n toma

en

cuenta l a d i s p o s i c i ó n que t i e n e a l a s c é l u l a s

epidérmicas con r e s p e c t o a lau c é l u l a s estomáticas:

1)

Tipo anomocítico:

no

estan presentes c é l u l a s acompafíantes

o

ane-

xas.

(Ver

Fig.

6).

2) Tipo a n i s o c i t i c o : l a s c é l u l a s estomáticas

u

o c l u s i v a s estan

ro-

deadas por t r e s c é l u l a s acompañantes, una mucho más pequeña que l a s o t r a s dos.

(Ver

Fig.

4).

3)

Tipo p a r a c i t i c o : con una

o

más

c é l u l a s anexas a cada lado d e l e s

toma

o

posición p a r a l e l a a l e j e longitudinal.

4)

Tipo d i a c f t i c o : en e l que cada estoma e s t a rodeado por dos célu- l a s acompafíantes cuya pared común forma

un

ángulo r e c t o con e l

e j e l o n g i t u d i n a l d e l estoma. (Ver Fig. 2).

5 )

Tipo a c t i n o c i t i c o : e l estoma e s t a rodeado por una corona de célu-

las

anexas dispuestas radialmente.

6)

Tipo c i c l o c i t i c o : t i e n e más de t r e s c é l u l a s acompañantes.

Las

paredes a n t i c l i n a l e s

son

más c o r t a s que l a s p e r i c l l n a l e s .

En

l a s monocotileddneas l a s c é l u l a s e s t o d & i c a s ~ 8on alargadas

en

(43)

cc

.

' !

-

34

-

pared e s f i n a , mientras que l a parte media e s angosta y de pared

gruesa).

En

l a s monocotiledóneas se sistinguen

4

t i p o s de complejos estomá- t i c o s :

1)

Tipo I : donde

las

c é l u l a s estomáticas estan rodeadas por

4

a

6

c é l u l a s anexas.

2 ) Tipo 11:

las

c é l u l a s estomáticas también estan rodeadas por

4

a

6

c é l u l a s anexas, donde 2 son redondas y menores que l a s o t r a s y situadas en

los

extremos de l a s estomáticas.

3)

Tipo 111: l a s c é l u l a s estan acompañadas por 2 c é l u l a s l a t e r a -

les

anexas a cada lado d e l estoma.

4)

Tipo I V : l a s c é l u l a s estomáticas no estan asociadas a ninguna

c é l u l a acompañante.

b) Derivados epidérmicos.

Los

derivados epidérmicos unicelulares como p l u r i c e l u l a r e s reciben

e l

nombre de tricomas. Estos se suelen encontrar en d i f e r e n t e s partes

d e l vegetal.

Se pueden d i s t i n g u i r morfol6gicamente d i v e r s o s t i p o s de tricomas:

1)

Pelos

simples.

Pueden

ser

unicelulares y p l u r i c e l u l a r e s , ambos pueden

ser

ramificados, en e l caso de

los

p e l o s p l u r i c e l u l a r e s l a r a m i f i -

cación suele

ser

dendroide ( e s d e c i r muy ramificado).

Los

p e l o s pluriceluaares constan de un pie i i t r o d u c i d o

en

l a

(44)

-

35

-

2 )

Pelos

escamosos y peltados.

Son

las

escamas l a s cuales estan constituidas por

un

pie

un

pequeflp pedúnculo y una cabeza

o

s u p e r f i c i e en forma de disco.

Algunos de e s t o s t i p o s de tricomas

son

s é s i l e s en t a l caso se

l e s llama escamas

e n

o t r o s casos

son

pedunculados y se l e s de

-

nomina peltados.

3)

Pelos

glandulares.

Generalmente constan de

un

pedúnculo y de una cabeza uni o

p l u r i c e l u l a r .

La

cabeza e s l a estructura secretora.

4)

Pelos

radicales.

Son

elongaciones tubulares de l a s c é l u l a s epidérmicas de l a

r a í z . Generalmente e s t o s poseen grandes vacuolas y tienen mem-

Figure

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