Crecimiento de Trichoderma sp utilizando como sustrato metamidofos en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. ÁT. IC A. Y. CO. M. UN IC AC IÓ. N. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. Crecimiento de Trichoderma sp. utilizando como sustrato metamidofos en condiciones de laboratorio.. TESIS. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. EC CI. O. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. DI R. Autor: Br. Alice Yessenia Barranzuela Mendocilla Asesor: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. TRUJILLO-PERU. 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL. M. UN IC AC IÓ. N. DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. CO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. RECTOR. DE. Dr. Rubén Vera Véliz. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. VICERRECTOR ACADÉMICO. Dr. Esteban Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONALDE BIÓLOGO-. CO. M. UN IC AC IÓ. N. MICROBIÓLOGO. Y. Dr. Marco Salazar Castillo. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. Dr. Enrique Padilla Sagastegui. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dra. Eva Villanueva Tarazona DIRECTORA DE LA E.A.P. DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC IÓ. N. DEL ASESOR. El que suscribe, Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg Profesor Asociado de La Universidad Nacional de Trujillo y asesor de la tesis titulada: Crecimiento de Trichoderma sp. utilizando como sustrato el metamidofos en condiciones de. M. laboratorio, certifica que esta investigación ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento. CO. establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo,. Y. estando en conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido. ÁT. IC A. redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. IN FO. RM. Trujillo, Marzo de 2016. DE. _______________________________. AS. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN IC AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. Cumpliendo con las disposiciones establecidas en el reglamento de Grados y Títulos de las Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio el presente informe de tesis titulada: Crecimiento de Trichoderma sp. utilizando como. CO. M. sustrato el metamidofos en condiciones de laboratorio, con el objetivo de obtener el. IC A. Y. Título Profesional de Biólogo-Microbiólogo.. RM. ÁT. Trujillo, febrero de 2016. IN FO. ______________________________________. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. Br. Alice Yessenia Barranzuela Mendocilla. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. M. ________________________________. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. PRESIDENTE. CO. Dr. Manuela Luján Velásquez. DE. _________________________________. SECRETARIO. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. Ms. C. Juan Hector Wilson Krugg. _________________________________. Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el. N. presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. CO. M. UN IC AC IÓ. aprobado por Unanimidad. Y. __________________________________. IC A. Dr. Manuela Luján Velásquez. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. AS. __________________________________. SECRETARIO. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. Ms. C. Juan Hector Wilson Krugg. __________________________________. Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA A mis padres William y Violeta por su gran apoyo, por sus valiosos consejos;. UN IC AC IÓ. N. me han dado todo lo que soy como persona, mis valores, mis principios, mi empeño, mi coraje para conseguir mis objetivos. Gracias por todo su amor.. CO. M. Este logro es de ustedes.. Y. A mis abuelos Cesar y Alicia que me apoyaron constantemente con sus. IC A. consejos, los que me inculcaron a ser mejor persona y por ser como mis. IN FO. RM. ÁT. segundos Padres. Gracias por todo su cariño.. A mis hermanos Anthony, gracias por brindarme tus conocimientos y por ser. DE. mi modelo a seguir y Adrián por el cual me esfuerzo para darle el mejor. SI ST. EM. AS. ejemplo posible.. A mi gran amigo y compañero Julio, quien estuvo apoyándome. EC CI. O. N. DE. incondicionalmente en todo momento, gracias por todo tu afecto y comprensión.. DI R. A mis amigos Lili, Kenet, Mayra; por su apoyo en el transcurso de este trabajo y a mis amigas Paola, Beatriz, Vania y Angie, con las cuales compartí grandes y valiosos momentos en la Universidad.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC IÓ. N. AGRADECIMIENTOS. A el Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg Profesor Asociado del Departamento de. M. Microbiología y Parasitología, de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad. Y. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. durante el desarrollo del presente trabajo de tesis.. CO. Nacional de Trujillo, por brindarme su amistad, su asesoría, consejos y valioso apoyo. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC IÓ. N. RESUMEN. Se determinó si Trichoderma sp. es capaz de utilizar como sustrato el metamidofos a tres concentraciones en condiciones de laboratorio. Para este. CO. M. ensayo se aisló Trichoderma sp. en tierras de cultivo de Zea mays proveniente de la Provincia de Virú; luego se realizaron evaluaciones del crecimiento en medio. Y. sólido y líquido de Trichoderma sp a tres concentraciones del insecticida-. IC A. acaricida metamidofos. En los resultados se observó que en medio sólido el. ÁT. crecimiento lineal de Trichoderma sp. en la concentración de 1200 ppm fue de. RM. 48%, mientras que en la concentración 1800 ppm y 2400 ppm presentaron un. IN FO. crecimiento de 45 % y 42 % respectivamente; esto nos muestra que el crecimiento de Trichoderma sp. fue inversamente proporcional proporcional a la. DE. concentración presente del insecticida-acaricida. Con respecto a los resultados del peso seco evaluado en las tres concentraciones se encontró que en las. AS. concentraciones de 1200 ppm presenta un crecimiento de 11% en las. EM. concentraciones de 1800ppm y 2400 ppm se observó un crecimiento en porcentaje. SI ST. de 8% y 4% respectivamente con una significancia de 0.001. Tomándolo así como un resultado valido por la prueba de Anova y post Anava. Se concluye que. DE. Trichoderma sp. presenta crecimiento al utilizar como sustrato el metamidofos a. DI R. EC CI. O. N. las concentraciones de 1200, 1800; 2400 ppm en condiciones de laboratorio.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. N. Pág.. UN IC AC IÓ. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO………...… ii AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS.……...…...... iii DE LA ASESOR……………………………………………………………….............. iv. CO. M. PRESENTACIÓN……………………………………………………………............... v. Y. MIEMBROS DEL JURADO………………………………………………………...... vi. IC A. APROBACIÓN……………………………………………………………...……….... vii. RM. ÁT. DEDICATORIA……………………………………………………………………..... viii. IN FO. AGRADECIMIENTOS……………………………………………………….............. ix RESUMEN………………………………………………………………………………x. DE. INTRODUCCIÓN……………………...……………………………………………......1. AS. MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS..……...……………………………...………..6. EM. 2,1 MATERIAL…………………………………………………………………….6. SI ST. 2.2. PROCEDIMIENTOS…………………………………………………………..6. DE. 2.2.1. Recolección de muestra de tierra de cultivo de Zea mays……………..6. EC CI. O. N. 2.2.2. Evaluación del efecto del insecticida metamidofos sobre Trichoderma sp………………………………………………………………………..6. DI R. 2.2.3. Evaluación del efecto de metamidofos a diferentes concentraciones sobre. 2.2.4.. el crecimiento de Trichoderma sp. en un sistema aireado…………....7 Análisis de Datos……………………………………………………..10. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS…………………………………………………………………..........11. N. DISCUSIÓN……………………………………………………………...…………....14. UN IC AC IÓ. CONCLUSIÓN……………………………………………………………………...…17 RECOMENDACIÓN……………………………………………………………….....18 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………………………...…...……….....19. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. ANEXOS………………………………………………………………………............24. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN. N. Las enfermedades constituyen uno de los elementos limitantes dentro de la producción. UN IC AC IÓ. de cualquier cultivo. Existen factores que influencian el desarrollo de estas enfermedades, estas no pueden ocurrir a menos que estén presentes los siguientes factores: una planta susceptible, un patógeno y un ambiente favorable.1 Así mismo estas enfermedades no ocurren si no hay un vector que las transmita, lo que es común en las enfermedades. CO. M. causadas por virus, las cuales pueden transmitirse por insectos; parásitos chupadores como trips, pulgones, chinches, moscas blancas, ácaros, o nematodos.2 Uno de estos. IC A. Y. parásitos son los ácaros, el daño que ocasionan generalmente se debe a la punción y succión que realizan para su alimentación. Solo de algunas especies del género. RM. ÁT. Brevipalpus se ha comprobado su capacidad como vectores de virus.3 Las plagas y las diversas enfermedades afectan a cultivos de alta importancia económica. IN FO. desmejorando la calidad y cantidad del producto además de incrementar los costos de producción por la necesidad de utilizar productos agroquímicos o semillas más resistentes. DE. a ciertos agentes patógenos.4 Contra estas enfermedades es necesario establecer un control. AS. con un manejo integrado de plagas de los cultivos con el fin de mantener la densidad de. EM. la población del cultivo por debajo del nivel en el que comienza a causar perjuicio. SI ST. económico, empleando métodos de control que consisten en sistemas naturales o artificiales que dan como resultado la prevención, represión o la exclusión de una plaga.5. DE. Entre los principales métodos de control tenemos el control químico que consiste en la. N. aplicación de productos sintéticos o químicos y cuyo uso se recomienda solo en casos. EC CI. O. donde la plaga o enfermedad ha alcanzado niveles de gravedad recomendándose en la actualidad que se utilice racionalmente a los plaguicidas y se busque su interacción. DI R. armoniosa con otros métodos de control como el físico y el biológico.6 El uso discriminado de químicos en la protección de los cultivos ha causado graves problemas en la salud humana, en el medio ambiente y la productividad de la agricultura. La multitud de problemas fitosanitarios se combaten desde hace siglos con insecticidas químicos. Mucho más todavía en la agricultura moderna, son tratados como la única solución para dichos problemas, causando efectos inmediatos para reducir. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. espectacularmente las poblaciones de insectos de manera efectiva y en el momento oportuno. Algunos de estos compuestos son muy resistentes, poco solubles en agua y muy tóxicos, además, cuando pierden su eficacia en la protección de cultivos, se reemplazan por otros más tóxicos, creando un mayor riesgo de salud de los cultivadores.. UN IC AC IÓ. N. Los plaguicidas pueden dejar residuos tóxicos, pueden destruir la fauna silvestre, ofrecer riesgos de intoxicación y efectos contaminantes en suelos y ecosistemas acuáticos, así como de consecuencias nocivas en la salud de las poblaciones afectadas.7,8. Dentro de los productos químicos que se utilizan para combatir a plagas están los. M. insecticidas-acaricidas, uno de los insecticidas de amplio uso en la agricultura peruana es. CO. el Monofos, que tiene como principio activo a metamidofos; es un insecticida-acaricida. Y. organofosforado con propiedad sistémica, su modo de acción en insectos y mamíferos es. IC A. por disminución de la actividad de la enzima acetilcolinesterasa, esta enzima es esencial. ÁT. para la normal transmisión de los impulsos nerviosos, es un buen veneno estomacal con. RM. acción adicional por contacto. Estudios detallados del metabolismo de metamidofos. IN FO. indican que el compuesto es rápidamente absorbido por las raíces y transportado con la corriente dentro de las plantas, hacia el follaje. El metamidofos, pertenece al grupo de los organofosforados, sus principales propiedades fisicoquímicas son: soluble en solventes. AS. DE. orgánicos como isopropano, dichloromethanoxano, tolueno y es soluble en agua.9,10. EM. En tanto en el control de plagas agrícolas, el insecticida-acaricida metamidofos tiene un amplio rango de patógenos como: Pseudoplusia includens (gusano medidor) en tomate,. SI ST. Myzus persicae (pulgón) en papa, Spodoptera eridania (gusano del fruto) en tomate, Tuta absoluta (polilla) tomate, Spodoptera frugiperda (cogollero) en maíz y en otros diferentes. DE. cultivos; como en el control de ectoparásitos del ganado y moscas de los establos por lo. N. que es considerado de amplio espectro. Es extremadamente tóxico para animales. EC CI. O. domésticos, aves, abejas, peces y organismos acuáticos.10, 11 Debido a su alta solubilidad y, su efecto adverso debido a sus residuos tóxicos existe una elevada probabilidad de. DI R. encontrarlo en el ambiente terrestre y acuático, impactando de manera significativa en la fauna silvestre en suelos y ecosistemas acuáticos ocasionando importantes efectos tóxicos en la biota animal.12, 13,14 El manejo de estos compuestos químicos lleva consigo unos riesgos de intoxicación que deben tener en cuenta las personas que los manipulan y aplican. La toxicidad se establece mediante ensayos en animales de experimentación y su expresión cuantitativa se 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. representa mediante la dosis letal media DL50, que corresponde a la cantidad de plaguicida necesario para causar la muerte al 50% de los individuos que componen el lote de ensayo. La DL50 se representa en miligramos de plaguicida por kilogramo de peso de animal tratado en el ensayo. Cuanto menor sea su valor, mayor será la toxicidad del. UN IC AC IÓ. N. compuesto.15. El género Trichoderma representa a un grupo de hongos filamentosos, estos se caracterizan por predominar en los ecosistemas terrestres (suelos agrícolas, pastizales,. M. bosques y desiertos) y acuáticos.16 Algunas especies son de vida libre en el suelo,. CO. oportunistas, simbiontes de plantas, y otras son micoparásitas. Además, pueden colonizar. Y. distintos ambientes, debido a su alta capacidad reproductiva.17 Los requerimientos. IC A. nutrimentales de estos hongos filamentosos son pocos, aunque su crecimiento es favorecido por la materia orgánica, y su humedad y temperatura óptimas de crecimiento. ÁT. se encuentran en un rango de 25 a 30 °C .18 Sin embargo, se pueden adaptar y sobrevivir. IN FO. RM. en condiciones extremas de temperatura, pH y salinidad.19 De manera particular, los hongos del género Trichoderma se pueden encontrar en la. DE. rizosfera, donde son capaces de competir por nutrimentos y espacio con otros microorganismos. Además, este grupo fúngico es importante para las plantas, al. AS. contribuir en el control de hongos fitopatógenos ya que poseen propiedades. EM. micoparasíticas y antibióticas, además se conoce que Trichoderma presenta otros. SI ST. mecanismos, cuya acción biorreguladora es de forma indirecta. Entre estos se pueden mencionar los que elicitan o inducen mecanismos de defensa fisiológicos y bioquímicos. DE. como es la activación en la planta de compuestos relacionados con la resistencia. N. (Inducción de Resistencia), con la detoxificación de toxinas excretadas por patógenos y. EC CI. O. la desactivación de enzimas de estos durante el proceso de infección; la solubilización de elementos nutritivos, que en su forma original no son accesibles para las plantas. Tienen. DI R. la capacidad, además, de crear un ambiente favorable al desarrollo radical lo que aumenta la tolerancia de la planta al estrés. Por lo que algunas especies han sido catalogadas como excelentes agentes de control biológico de hongos causantes de enfermedades para diferentes plantas hortícolas, por su gran tolerancia a condiciones ambientales extremas y diversidad de sustratos utilizables; de igual forma puede sobrevivir en medios con contenidos significativos de pesticidas y otros químicos.20, 21, 22, 23. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para remediar los problemas de contaminación por plaguicidas se han desarrollado técnicas de biorremediación mediante la selección y uso de microorganismos capaces de tolerar y degradar contaminantes. Los hongos no ligninolítico como Trichoderma sp. son. N. capaces de tolerar y degradar compuestos contaminantes como hidrocarburos y. UN IC AC IÓ. plaguicidas. El conocimiento de la capacidad de los microorganismos para degradar plaguicidas en campo ha permitido implementar sistemas de biorremediación in situ conocidos como biocamas. Estos sistemas están conformados por mezclas de residuos vegetales, turba o composta y suelo, y para su preparación se colocan a 60 cm de. M. profundidad con el fin de minimizar la contaminación por plaguicidas en zonas agrícolas. CO. o industriales. Para aumentar la capacidad y la velocidad de degradación de plaguicidas. Y. en las biocamas, se busca favorecer el desarrollo o la inoculación (bioaumentación) de. IC A. hongos ligninolíticos. El potencial de estos hongos puede ser inhibido por la rápida. ÁT. invasión y competencia de otros microorganismos presentes en los diferentes. IN FO. capaces de degradar plaguicidas.24, 25. RM. componentes de la mezcla. Una alternativa es la adición de suelo o microorganismos. Los microorganismos pueden transformar los contaminantes orgánicos en compuestos. DE. que presenten menor o mayor toxicidad, con respecto al compuesto original. En contraste,. AS. algunos microorganismos pueden degradar completamente los contaminantes orgánicos,. EM. lo que implica su completa mineralización hasta compuestos inocuos como agua y. SI ST. dióxido de carbono. Las especies de Trichoderma sp. pueden potencialmente contribuir en la degradación de compuestos orgánicos contaminantes depositados en el suelo. De. DE. manera específica, la forma en que un microorganismo interactúa con un contaminante. O. N. de naturaleza orgánica, es diferente a la de un contaminante de origen inorgánico.26. EC CI. Varias especies de Trichoderma son capaces de degradar plaguicidas, debido a su. DI R. actividad enzimática. Esta capacidad bioquímica permite vislumbrar el potencial de aplicación de Trichoderma en la biorremediación de sitios contaminados teniendo con ello una relevancia ecológica. No obstante, la respuesta de Trichoderma ante plaguicidas debe ser evaluada para conocer sus potencialidades y limitaciones en la degradación de este tipo de compuestos orgánicos.27 Como ejemplo, insecticidas como forato o carbofurano pueden estimular o inhibir el crecimiento de especies de Trichoderma. Más aún, T.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. viride contribuye en la degradación del herbicida triflurina en más del 90 % en aproximadamente 10 días.28 Gran parte de los plaguicidas organoclorados como el dieldrin y el endosulfán, el DDT. N. son persistentes en la naturaleza y presentan alta toxicidad. No obstante, se ha. UN IC AC IÓ. documentado que Trichoderma spp es capaz de degradar estos tres plaguicidas. Algunas especies del género Trichoderma spp pueden degradar pentacloronitrobenceno y pentaclorofenol, pero no degradan al hexaclorociclohexano. En este sentido, se ha demostrado que Trichoderma spp tiene la capacidad de degradar 2, 4,6- triclorofenol, 4,5-. M. dicloroguaiacol, 3, 4,5-tricloroguaiacol, tetracloroguaiacol y otros compuestos. CO. halogenados.25 Así, Trichoderma harzianum es capaz de utilizar el insecticida. Y. organofosforado clorpirifos como fuente de azufre y de fósforo (Omar, 1998) y también. ÁT. IC A. es capaz de degradar glifosato y ácido aminometil fosfórico.29, 30,31. RM. Conociendo que Trichoderma se utiliza como controlador biológico en diferentes tipos. IN FO. de cultivos donde también se aplica insecticidas-acaricidas como lo es metamidofos el cual presenta un alto poder residual tóxico en ecosistemas tanto terrestres como acuáticos, y sabiendo de la capacidad de Trichoderma sp. de tolerar y degradar otros compuestos. DE. orgánicos; por tal razón es que el presente trabajo tiene como objetivo evaluar el. AS. crecimiento de Trichoderma sp. utilizando como sustrato a metamidofos en las. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. concentraciones de 1200, 1800, 2400 ppm en condiciones de laboratorio.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y PROCEDIMIENTO. 2.1. Material de estudio:. N.  Cultivo puro de Trichoderma sp. aislado de tierras de cultivo de Zea mays de la. UN IC AC IÓ. Provincia de Virú. (Anexo 01)..  Insecticida MONOFOS®, cuyo principio activo es el metamidofos. (Anexo 02). M. 2.3. Procedimiento:. CO. 2.3.1. Recolección de muestra de tierra de cultivo de Zea mays.:. IC A. Y. Trichoderma sp. fue aislada de suelo agrícola húmeda, proveniente de la Provincia de Virú. Las muestras se transportaron en bolsas de polietileno. ÁT. al Laboratorio de Fitopatología de la Universidad Nacional de Trujillo. El. RM. procesamiento de las muestras se realizó homogenizando el suelo y. IN FO. tomando una submuestra de 10 gr, colocándola en 90 ml de agua destilada estéril, se hicieron 2 diluciones a partir de la muestra original. La siembra. DE. se hizo por superficie añadiendo 1mL de cada dilución en un medio de. AS. agar papa dextrosa. (Anexo 03).. SI ST. sp.. EM. 2.3.2. Evaluación del efecto del insecticida metamidofos sobre Trichoderma. DI R. EC CI. O. N. DE. 2.3.2.1.Preparación del medio control Agar Papa Dextrosa: Para la evaluación del control se preparó Agar Papa Dextrosa en 1 matraz conteniendo 70 mL de medio; el medio de cultivo se esterilizó en autoclave y se dejó enfriar, no se le agregó el insecticida, a fin de utilizarlo como control. Luego, el medio de cultivo se sirvió en 4 placas de Petri estériles. (Anexo 04) 2.3.2.2.Preparación del Agar mínimo de sales con metamidofos: Se preparó en tres matraces 70 mL de Agar mínimo de sales. El medio de cultivo se esterilizó en autoclave y se dejó enfriar hasta una temperatura aproximada de 45°C. Se le agregó a cada matraz metamidofos en cantidad suficiente para obtener concentraciones de 1200ppm, 1800ppm y 2400 ppm; una concentración por 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. matraz. (Anexo 05). Luego, el medio de cultivo de cada uno de los cuatro matraces se sirvió en placas de Petri estériles (4 placas para las concentraciones de 1200, 1800 y 2400 ppm. N. respectivamente).. UN IC AC IÓ. 2.3.2.3. Siembra e incubación:. A partir del cultivo puro de Trichoderma sp. se sembró por puntura en la parte central de las placas Petri conteniendo Agar. M. Mínimo de sales con el insecticida previamente preparadas en el. CO. paso anterior (cuatro placas para la concentración 1200ppm, 1800ppm y 2400ppm respectivamente incluidas las placas del. IC A. Y. control); las cuales se incubaron a temperatura ambiente hasta que el hongo cubra toda la superficie de la placa control. (Anexo 06). ÁT. 2.3.2.4. Lectura:. RM. A partir del primer día de siembra, y hasta el cuarto día, se midió. IN FO. el radio de crecimiento micelial en centímetros (cm.) del hongo en diferentes direcciones, obteniéndose un radio promedio de. DE. crecimiento por día por cada concentración del pesticida y el. AS. grupo control. (Anexo 07). Los resultados de crecimiento de. EM. Trichoderma sp. se expresaron en centímetros y en porcentaje de. por el grupo control (100%), de la siguiente manera: (Anexo 08). %𝐶 =. 𝑅𝑎𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 𝑥100 𝑅𝑎𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜. O. N. DE. SI ST. crecimiento (%C), teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado. DI R. EC CI. 2.3.3. Evaluación del efecto de metamidofos a diferentes concentraciones sobre el crecimiento de Trichoderma sp. en un sistema aireado: 2.3.3.1. Propagación de Trichoderma sp A partir del cultivo puro de Trichoderma sp, se realizó una siembra en frascos planos conteniendo Agar Papa Sacarosa (APS) con antibiótico (Doxiciclina). Se incubó a una temperatura de 25°C durante 7 días. (Anexo 10).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.3.2. Preparación del medio control: Para la evaluación del control se preparó Caldo Papa Dextrosa en 2 frascos de vidrio transparente conteniendo 300 mL del medio;. N. estos fueron esterilizados en autoclave y se dejaron enfriar, a fin. 2.3.3.3.. UN IC AC IÓ. de utilizarlo como controles.. Preparación del Caldo mínimo de sales con metamidofos:. M. Se preparó el medio mínimo de sales en tres frascos de vidrio. CO. transparentes conteniendo 300 mL del medio cada uno; estos fueron esterilizados en autoclave y se los dejó enfriar, se les. IC A. Y. agregó antibiótico para evitar la contaminación. Se agregó a cada frasco el metamidofos en cantidad suficiente para obtener las. ÁT. concentraciones 1200, 1800 y 2400 ppm respectivamente (una. IN FO. RM. concentración por frasco) (Anexo 11). 2.2.3.4. Preparación de la suspensión de conidias de Trichodermasp. Al cultivo en frasco plano se le agregó 50 ml Agua Destilada. DE. Estéril (ADE) y se agitó para obtener una suspensión de esporas. EM. AS. que fue utilizada en la producción de biomasa. (Anexo 12).. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. 2.2.3.5. Estandarización de la concentración de cultivo de Trichoderma sp: La suspensión de esporas fueron recepcionadas en un matraz, se realizaron dos diluciones, y utilizando la cámara de Neubauer se determinó la concentración de conidias, para así estandarizar a la concentración de 107esporas/mL de Trichoderma sp.(Anexo 13).. 2.2.3.6. Construcción del sistema aireado de agitación: Se utilizó una bureta de equipo de venoclisis, graduado de 100 ml, este fue perforado por los dos laterales en una línea recta, se unió las mangueras de 5 cm de largo aprox. en las perforaciones anteriormente realizadas a la bureta del equipo de venoclisis, se 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. colocó graduadores a cada una de las mangueras; se procedió a sellar para evitar las fugas de aire (Anexo 14); por otro lado se conectó los frascos con sulfato de cobre y cloruro de sodio al. UN IC AC IÓ. se conectó las bombas de aireación (Anexo 15).. N. inicio de la aireación, para evitar la contaminación; y por último. 2.2.3.7. Inoculación de Trichoderma sp. e instalación del sistema aireado de agitación:. M. Se inoculó 10 mL de la suspensión estandarizada de Trichoderma. CO. sp. Luego se conectó cada frasco al sistema aireado de agitación,. IC A. Y. incubándose a temperatura ambiente durante 8 días (Anexo 16).. ÁT. 2.2.3.8. Filtración y Secado:. RM. Culminado el tiempo de incubación se procedió a la filtración del. IN FO. contenido de cada uno de los frascos para lo cual se utilizó papel filtro previamente pesado y un equipo de filtración (Anexo 16), luego cada papel filtro con el micelio filtrado fue colocado en una. DE. placa de Petri previamente pesada y fue llevado a la estufa, en. SI ST. EM. AS. donde se dejó secar a 70°C durante 12 horas. (Anexo 17).. DI R. EC CI. O. N. DE. 2.2.3.9. Obtención de resultados: Después de las 12 horas en la estufa, se pesó en una balanza analítica el papel filtro con el micelio seco, se descontó el peso del papel filtro; obteniéndose el peso seco del micelio en el control y en cada concentración evaluada (Anexo 18), expresándose los resultados en gramos y porcentaje, teniendo en cuenta el peso seco del control (100 %).. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.4. Análisis de Datos La determinación del efecto del insecticida metamidofos sobre Trichoderma sp., se realizará analizando el porcentaje de. N. crecimiento de Trichoderma sp. en las diferentes concentraciones. UN IC AC IÓ. del insecticida, y los datos serán procesados en base a la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA) y POST. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. ANAVA, según el paquete estadístico SPSS v. 22 (Anexo 19).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. Los resultados del estudio del crecimiento de Trichoderma sp. utilizando como. N. sustrato el metamidofos a las concentraciones de 2400ppm, 1800ppm; 1200 ppm. UN IC AC IÓ. en condiciones de laboratorio mostraron que en los tres grupos tratados con metamidofos como sustrato presentaron crecimiento de Trichoderma sp.. M. En la Fig. 1. el crecimiento lineal en porcentaje más elevado de Trichoderma sp.. IC A. Y. CO. fue a 1200 ppm, con un 48%.. En la Fig. 2 se observa que el crecimiento de Trichoderma sp. fue mayor a la. RM. ÁT. concentración de 1200 ppm de metamidofos.. IN FO. En la Fig. 3 se observa que el porcentaje de peso seco más alto de Trichoderma sp.. DE. se obtuvo en la concentración de 1200ppm, con un 11%.. AS. En la Fig. 3 se presenta que los tres resultados del crecimiento de Trichoderma sp.. EM. en las concentraciones de 1200ppm, 1800ppm y 2400ppm de metamidofos son. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. estadísticamente iguales, con un porcentaje de 11% , 8% y 4 % respectivamente.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 120%. N. 100%. 60%. a. 48%. 45%. a. 20%. a. 0% 1200ppm. 1800ppm. IC A. 0ppm. a. Y. 0%. 2400ppm. Tratamiento con metamidofos. IN FO. RM. ÁT. control positivo. 42%. M. 40%. UN IC AC IÓ. 80%. CO. Porcenaje de Crecimento. 100%. Figura 1. Porcentaje de crecimiento lineal de Trichoderma sp. utilizando como sustrato. EM. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. (a): p>0,05. AS. DE. a metamidofos a concentraciones de 0ppm, de 1200ppm, 1800ppm, 2400ppm.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) CO. M. UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. b a. EM. d a. SI ST. c a. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. a a. DE. Figura 2. Crecimiento lineal de Trichoderma sp. utilizando como sustrato a. N. metamidofos en Agar Mínimo de Sales: a. 0 ppm de metamidofos ( agar papa. EC CI. O. sacarosa) ; b. 1200 ppm de metamidofos; c. 1800 ppm de metamidofos; d. 2400. DI R. ppm de metamidofos.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) a. UN IC AC IÓ. 120%. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100%. 80%. CO. M. 60% 40%. b 20%. IC A. 11% 0%. 0% 0ppm. 1200ppm. ÁT. control positivo. b. Y. Porcentaje de Crecimiento. 100%. b. 8% 1800ppm. 4% 2400ppm. IN FO. RM. Tratamiento con metamidofos. DE. Figura 3. Porcentaje en peso seco de Trichoderma sp utilizando como sustrato el. EM. (b): p> 0,05. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. (a): p>0,05. AS. metamidofos en concentraciones de 0ppm, 1200ppm, 1800ppm, 2400ppm.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. UN IC AC IÓ. N. IV.. La capacidad de producir diversos metabolitos y de adaptación a diversas condiciones. M. ambientales y sustratos, confiere a Trichoderma sp. la posibilidad de ser utilizado en la. CO. industria biotecnológica.32 Trichodema sp. es un hongo con el potencial de sintetizar y. Y. liberar enzimas como polisacarasas, celulasas, xilanasas y quitinasas, las cuales se han. IC A. aprovechado en procesos industriales.33,34 Con base en esta capacidad enzimática, las. ÁT. especies de Trichoderma pueden potencialmente contribuir en la degradación de compuestos orgánicos contaminantes depositados en el suelo. De manera específica, la. RM. forma en que un microorganismo interactúa con un contaminante de naturaleza orgánica,. IN FO. es diferente a la de un contaminante de origen inorgánico.35. DE. Los microorganismos pueden transformar los contaminantes orgánicos en compuestos. AS. que presenten menor o mayor toxicidad, con respecto al compuesto original. En contraste,. EM. algunos microorganismos pueden degradar completamente los contaminantes orgánicos,. SI ST. lo que implica su completa mineralización hasta compuestos inocuos como agua y dióxido de carbono.36 En el caso del género Trichoderma sp. este es capaz de tolerar y. DE. degradar sustratos muy complejos y emplearlos para su crecimiento gracias al gran complejo enzimático que posee; es por eso que el género Thichoderma puede tomar como. O. N. materia orgánica u otros elementos que le proporcionen una fuente de carbono, nitrógeno,. DI R. EC CI. azufre y fosforo como es el caso del acaricida metamidofos.. Al evaluar el crecimiento de Trichoderma sp; en un medio donde la única fuente de. carbono, nitrógeno azufre y fosforo es el metamidofos, se observó que en todas la concentraciones evaluadas el hongo presentó crecimiento, aunque este crecimiento varió según la concentración del acaricida (figura 2); comparando los resultados obtenidos en porcentajes (figura 1), se observó que el crecimiento en la concentración de 1200 ppm se presentó en un 48% el de 1800 ppm y 2400 ppm presentaron un crecimiento de 45% y 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 42% respectivamente respecto al control; esto nos muestra que el crecimiento de Trichoderma sp. fue inversamente proporcional a la concentración presente del acaricida, a menor sea la concentración de acaricida mayor será el crecimiento de Trichoderma sp.. N. pero con poca diferencia entre estos, las tres concentraciones están en una diferencia de. UN IC AC IÓ. 3% ; al realizar el análisis estadístico se encontró que tanto el control como todos los tratamientos con el acaricida son estadísticamente iguales presentando una diferencia significativa con un p>0.05; estos resultados coinciden con los resultados obtenidos por Omar, 1998 en donde se demostró que T. harzianum es capaz de utilizar el insecticida. M. organofosforado clorpirifos como fuente de fosforo y azufre como lo es en este caso. CO. metamidofos, también es capaz de degradar compuestos que contienen fosforo tales como. IC A. Y. glifosato y ácido aminometil fosfórico.37, 38. ÁT. Con respecto a los resultados del peso seco evaluado en las tres concentraciones se. RM. observa que el porcentaje de peso seco obtenido en las concentraciones de 1200 ppm,. IN FO. 1800 ppm y 2400 ppm presentó un crecimiento de 11%, 8% y 4% respectivamente (figura 3); en la concentración de 1200 ppm y 1800ppm, se observa una diferencia mínima entre. DE. sí, en cambio en la concentración de 2400ppm llega a ser a la mitad de la concentración de 1800ppm lo que significaría una degradación mínima si se llega aumentar la. AS. concentración de metamidofos esto serviría para investigaciones futuras en analizar con. EM. una concentración superior a 2400ppm para contrastar si es que a mayor concentración. SI ST. de este acaricida inhibiría el crecimiento de Trichoderma sp ; mientras que en el análisis estadístico se demuestra que en todos los tratamientos con metamidofos son. DE. estadísticamente iguales pero diferentes al control con una diferencia significativa con. N. p>0.01, lo que significa que esta prueba es más exacta que la del medio sólido, pero son. DI R. EC CI. O. bajo rendimiento en el crecimiento de Trichoderma sp. en medio líquido.. Al estimar los resultados del crecimiento en medio sólido como en medio liquido se aprecia una clara degradación de Trichoderma sp. demostrando así que Trichoderma puede utilizar a metamidofos como fuente de azufre y fosforo para su crecimiento sintetizando el azufre como se demostró en el estudio de Stamatiu (2013) que los 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. metabolitos de biodegradación de endosulfán por T.. harzianum son el sulfato de. endosulfán y el diol de endosulfán, que se generan por la acción de un sistema enzimático oxidativo. Lo anterior sugiere que la enzima hidrolítica sulfatasa de Trichoderma sp. es. UN IC AC IÓ. N. la responsable indirecta de la formación del diol de endosulfán. 39,40S. Por otro lado considerando que estas pruebas se realizaron en condiciones controladas, es necesario evaluar la respuesta de Trichoderma sp. en campo, debido a que los resultados obtenidos constituyen un aporte para el posible empleo de Trichoderma sp. en campos. CO. M. donde se aplica el acaricida metamidofos, Ya que Trichoderma ha constituido una buena alternativa para el ahorro de fertilizantes químicos y pesticidas. Este bioagente forma. Y. asociaciones con Micorrizas, aumentando de manera significativa la rizosfera del suelo,. IC A. permitiéndole a las plantas hacer una mayor extracción de nutrientes y con un alto grado. ÁT. de asimilación.41Este hongo posee enzimas tales como celulasas, hemicelulasas y. RM. xylanasas que ayudan a la degradación inicial del material vegetal y por último enzimas. DE. como son las de pesticidas 42.. IN FO. de mayor especialización que contribuyen a la simplificación de moléculas complejas. Es tal la importancia de este hongo para los agricultores ya que tiene muchas funciones. AS. beneficiosas que realiza este hongo en la agricultura. En el estudio de Parets (2002). EM. planteó que los microorganismos utilizados como biofertilizantes tienen un triple papel. SI ST. como suministradores de nutrientes, fitohormonas y antagonistas de hongos fitopatógenos. Dicho autor afirma que ha sido comprobado que el hongo antagonista. DE. Trichoderma harzianum Rifai, actúa como estimulador de crecimiento en múltiples. EC CI. O. N. cultivos conjuntamente con los hongos formadores de micorrizas arbusculares.43. Como sabemos existen diferentes modos de aplicación de Trichoderma así como las. DI R. múltiples ventajas que aporta el uso de este hongo, teniendo en cuenta las medidas que favorecen la acción eficiente del mismo para optimizar los beneficios que aporta la asociación planta- Trichoderma a los cultivos, el suelo y el ambiente de manera general.. Al mismo tiempo Trichoderma puede actuar como agente biodegradante de los agrotóxicos al degradar grupos de pesticidas de alta persistencia en el ambiente, sirviendo como agente descontaminante del suelo. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. CONCLUSIÓN. UN IC AC IÓ. N. Trichoderma sp. presentó crecimiento al utilizar como sustrato el metamidofos a. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. las concentraciones de 2400,1800; 1200 ppm en condiciones de laboratorio.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. RECOMENDACIÓN. N. Debido a que no existen investigaciones en donde nos permita conocer hasta que tipos de. UN IC AC IÓ. biomoleculas llega a degradar Trichoderma sp. utilizando el metamidofos; se recomienda realizar una prueba de Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC) para determinar. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. con exactitud la cantidad y los compuestos residuales.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. N. 1. Claudio Sandoval Briones. Manejo integrado de Enfermedades en cultivos. de Talca, Chile2004. 2. Sáenz. Díaz. M.. Principales. Insectos. y. UN IC AC IÓ. hidropónicos. Manual Técnico Facultad de Ciencias Agrarias Universidad. Hongos. Fitopatógenos. M. económicamente importantes desde 1970 hasta 1999 en Cuba. Fitosanidad. CO. 2003; 7(1): 55-59.. 3. Rodriguez I. Identificación de ácaros que afectan cultivos de naranja. IC A. Y. Valencia (Citrus Sinensis L.) En el nucleo Sur occidental de Colombia y establecimiento de dinámica de poblacion y fenologia de algunas especies. ÁT. de importancia económica. Linea proteccion de cultivos. Universidad. RM. Nacional de Colombia Sede Palmira. 2012; 22(1):. IN FO. 4. Centro de Educación y Tecnología Fundación para la Innovación Agraria. Manual de Producción y utilización de Trichoderma spp.; Santiago de Chile. DE. septiembre; 2004.. AS. 5. Andrea Brechelt. El manejo ecológico de plagas y enfermedades. Fundación. EM. Agricultura y Medio Ambiente (FAMA) República Dominicana. Primera Edición:. Abril. de. 2004. SI ST. http://www.rapal.org/articulos_files/Manejo_Ecologico_de_Plagas_A.Bret chel.pdf. DE. 6. Arning, I. Y A. Lizárraga Travaglini (edt.). Manejo Ecológico de Plagas –. DI R. EC CI. O. N. Una Propuesta para la Agricultura. Sostenible. RAAA, Lima, Perú, 1999.. 7. Molina G, Zaldúa S, González G, Sanfuentes E. Selección de hongos antagonistas para el control biológico de Botrytis cinerea en viveros forestales en Chile. Bosque [revista en Internet] 2006. [acceso 30 de diciembre. de. 2009];. 27(2):. [126-134].. URL:. http://www.scielo.cl/pdf/bosque/v27n2/art07.pdf. 8. Pino N, Hamleth V. Ethnobotany of Four Black Communities of the Municipality of Quibdo, Choco – Colombia [revista en Internet] 2004. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. [acceso. 30. de. diciembre. de. 2009];. 17(2):. [S61-S69].. URL:. http://www.lyonia.org/wview- Article.php?articleID=312. 9. Ficha Técnica de Monofos. Insecticida. concentrado emulsionante Marca por. Grupo. FMC.. Distribuido. por. Farmagro. UN IC AC IÓ. http://www.farmagro.com.pe/producto.php?id=61-monofos. S.A. N. Registrada. 10. Ficha Técnica de Curafos. Insecticida. concentrado emulsionante Distribuido. por. DROKASA.. http://www.drokasa.com.pe/une_agro/ficha_tecnica/INSECTICIDAS/351c. M. nica-CURAFOS%20600%20.pdf. CO. 11. Tazza, M., 2005, Plaguicidas Ia-Ib en el Perú. Campaña para la prohibición. Y. y restricción de los plaguicidas extremadamente y altamente peligrosos.. IC A. RAAA (Red de Acción en Alternativas al uso de Agroquímicos) (Ed.) Lima,. ÁT. Perú. 12 p.. RM. 12. Iannacone, J., Alvariño, L. & Caballero, C., 2002, Empleo del caracol de. IN FO. agua dulce Physa venustula como herramienta ecotoxicológica para la evaluación de riesgo ambiéntales por plaguicidas. Agric. Téc. (Chile), 62: 212-225.doi: 10.4067/S0365-28072002000200014.. DE. 13. Sinclair, C. J. & Boxall, A. B. A., 2002, Assessment of the environmental. AS. properties and effects of pesticide transformation products. Report. Cranfield. EM. Centre for EcoChemistry. Cranfield University, UK, 55p. SI ST. 14. Sánchez M., Sánchez C. Los plaguicidas. Adsorción y evolución en el suelo. Instituto De Recursos Naturales y Agrobiología. 1° Ed. 1984.. DE. 15. Zhang C., Druzhinina I., Kubick C.P. y Xu T. (2005). Trichoderma. DI R. EC CI. O. N. biodiversity in China: evidence for a north to southern distribution of species. in East Asia. FEMS Microbiol. Lett. 251, 251-257.. 16. Bissett J. (1991). A revision of the genus Trichoderma. III. Section Pachybasium. Can. J. Bot. 69, 2373-2417. 17. Papavizas G.C. (1985). Trichoderma and Gliocladium: biology, ecology and potential for biocontrol. Annu. Rev. Phytopathol. 23, 23-54 18. Widden P. y Scattolin V. (1988). Competitive interactions and ecological strategies of Trichoderma species colonizing spruce litter. Mycologia 80, 795-803. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 19. Score A.J. y Palfreyman J.W. (1994). Biological control of the dry rot fungus Serpula lacrymans by Trichoderma spp.: The effects of complex and synthetic media on interaction and hyphal extension rates. Int. Biodeterior.. N. Biodegrad. 33, 115-128.. UN IC AC IÓ. 20. Rosalba Argumedo-Delira1, Alejandro Alarcón, Ronald Ferrera-Cerrato Y Juan José Peña-Cabriales. El Género Fúngico Trichoderma Y Su Relación Con Contaminantes Orgánicos e Inorgánicos. Laboratorio de Microbiología Ambiental. Departamento de Biotecnología y Bioquímica. Centro de Investi-. CO. M. gación y de Estudios Avanzados. Km 9.6 Libramiento Norte, Carretera Irapuato-León, Guanajuato (Recibido agosto 2008, aceptado febrero 2009). Y. 21. Chávez M., Producción de Trichoderma sp. y Evaluacion de su efecto en. IC A. cultivo de crisantemo. Pontificia Universidad Javeriana Facultad de Ciencias. ÁT. Microbiologia Industrial- Microbiologia Agricola y Veterinaria. Bogota.. RM. D.C.2006. IN FO. 22. Infante D., Martínez B., González N., Reyes Y. Mecanismos De Acción De Trichoderma Frente A Hongos Fitopatógenos. Dpto. Fitopatología, Centro. DE. Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA). Apartado 10, San José de las Laja, La Habana, Cuba. Correo electrónico: [email protected], Dpto.. AS. Biología y Sanidad Vegetal, Universidad Agraria de La Habana “Fructuoso. EM. Rodríguez Pérez” (UNAH). San José de las Lajas, La Habana, Cuba.. SI ST. 23. Katina Stamatiu-Sánchez, Alejandro Alarcón, Ronald Ferrera-Cerrato, Cristian Nava-Díaz, Julio Sánchez-Escudero. Tolerancia de hongos. DE. filamentosos a endosulfán, clorpirifós y clorotalonil en condiciones in vitro.. DI R. EC CI. O. N. Rev. Int. Contam. Ambient vol.31 no.1 México feb. 2015. 24. Torstensson 2000, Castillo et al. 2008, Karanasios et al. 2010, Karanasios et al. 2012, Omirou et al. 2012, Urrutia et al. 2013. 25. Argumedo, Rosalba. (2009) El género fúngico Trichoderma y su relación con contaminantes orgánicos e inorgánicos. Rev. Int. Contam. Ambient, 25(4), 257-269. 26. Katina Stamatiu-Sánchez, Alejandro Alarcón, Ronald Ferrera-Cerrato, Cristian Nava-Díaz, Julio Sánchez-Escudero. Tolerancia de hongos filamentosos a endosulfán, clorpirifós y clorotalonil en condiciones in vitro. Rev. Int. Contam. Ambient vol.31 no.1 México feb. 2015 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. organophosphonate carbon-to-phosphorus bonds. Appl. Environ. Microbiol. 48, 549-552. 39. Stamatiu, Katina. (2013). Tolerancia y Biodegradación de Plaguicidas con. N. Hongos Filamentosos (Tesis presentada como requisito parcial para obtener. UN IC AC IÓ. el grado de doctor en ciencias). Institución de enseñanza e investigación en ciencias agrícolas Campus Montecillo, Montecillo, Texcoco, Estado de México.. Recuperado. a. partir. de. http://www.biblio.colpos.mx:8080/jspui/bitstream/handle/10521/2175/Stam. M. atiu_Sanchez_K_DC_Entomologia_Acarologia_2013.pdf?sequence=1. CO. 40. Valdés Ríos Edilberto L. Caracteres principales, ventajas y beneficios. Y. agrícolas que aporta el uso de Trichoderma como control biológico. Main. IC A. characters, advantages and benefits of agricultural use as biocontrol. ÁT. Trichoderma. Vol.2 No.1: 254 - 264, 2014 254. RM. 41. Andrade, C. (2012). Evaluación del efecto de la aplicación de Trichoderma. IN FO. harzianum y Trichoderma viride para el control de marchitez en Mora de Castilla (Rubus glaucus Benth) En el Cantón Pillarlo, provincia de Tungurahua. Tesis en opción al título de ingeniera agrónoma. Escuela. DE. Superior Politécnica de Chimborazo, Rio-bamba, Ecuador.. AS. 42. Marín, S. (2012).Trichoderma spp. Modos de acción, eficacia y usos en el. EM. cultivo del café. En: Federación Nacional de Cafeteros de Colombia. Boletín. SI ST. técnico Cenicafé N 38. 43. Parets, S. E. (2002). Evaluación agronómica de la coinoculación de. DE. micorrizas arbusculares, Rhizobium phaseoli y Trichoderma harzianum en. de Máster en Ciencias Agrícolas, Universidad Agraria de La Habana, Habana, Cuba.. DI R. EC CI. O. N. el cultivo de fríjol común (Phaseolus vulgaris L.). Tesis en opción al grado. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Y. CO. M. UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. ANEXOS. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) IC A. Y. CO. M. UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. Provincia de Virú.. RM. ÁT. Anexo 01. Trichoderma sp aislada de tierra de cultivo de Zea mays de la. Anexo 02. a. Insecticida MONOFOS®, cuyo principio activo es el metamidofos.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) a a. CO. M. UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. d a. DE. c a. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. b. DI R. EC CI. O. N. Anexo 3. Procesamiento de la muestra de tierra para el aislamiento de Trichoderma sp.: a. Pesado de la muestra homogenizada de suelo (10 gr); b. Diluciones a partir de la muestra original. c. Siembra por superficie a partir de las dos diluciones. d. Placas sembradas.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 04. Matraces con medios Agar Papa Dextrosa para el control y Agar mínimo de. DI R. EC CI. O. N. DE. sales, para las evaluaciones.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 05. Cálculos realizados para la determinación de las concentraciones utilizadas para MONOFOS® (Metamidofos), en los medios sólidos (AMS). Ejemplo: MONOFOS®- Metamidofos (1200ppm).. UN IC AC IÓ. N. Principio Activo: Metamidofos----------600g/L Dosis de campo de MONOFOS®: a) 400 mL. de producto----------200 L. de Agua. b) 600 mL. de producto----------200 L. de Agua.. CO. M. c) 800 mL. de producto----------200 L. de Agua.. Y. Trabajando con la primera dosis de campo, hacemos los cálculos de la cantidad del. ÁT. IC A. principio activo (Metamidofos) presente:. 1000 mL de producto. RM. 600 gr de P.A X. 400mL de producto. IN FO. X= 240 gr de P.A (metamidofos). AS. DE. Conversión a partes por millón (ppm): 240 𝑔𝑟. x. 1000 𝑚𝑔 1𝑔. = 1200𝑝𝑝𝑚. SI ST. EM. 200𝐿. Si se requiere preparar 70 mL. de medio de cultivo sólido (AMS), a la concentración de. 400 mL de metamidofos. 200000 mL de Agua. X mL de metamidofos X=. 70 mL de medio. 0,14ml de producto. DI R. EC CI. O. N. DE. 1200 ppm, se debe añadir esta cantidad de producto:. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. Anexo 06. Degradación de metamidofos por Trichoderma sp (Incubación a Tº ambiente por 4 días).. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 07. Resultado de la evaluación del crecimiento en cm (radio) de Trichoderma sp. utilizando como sustrato a metamidofos. DIAS. Repeticiones. Control (0ppm). 1200ppm. 1800ppm. 0.225. 0.163. R2. 0.5. 0.2. 0.26. 0.13. R3. 0.5. 0.2. 0.25. 0.16. R4. 0.56. 0.22. X. 0.52. 0.22. R1. 1.7. R2. 1.76. R3. 1.76. 0.22. 0.24. 0.17. 0.69. 0.69. 0.76. 0.68. 0.64. 0.78. 0.68. 0.68. 1.76. 0.78. 0.6. 0.6. 1.75. 0.77. 0.66. 0.65. 3.4. 1.56. 1.39. 1.35. 3.35. 1.53. 1.38. 1.26. R3. 3.2. 1.5. 1.34. 1.34. R4. 3.3. 1.5. 1.41. 1.31. X. 3.31. 1.52. 1.38. 1.32. R1. 4. 2.43. 1.9. 1.88. R2. 4.3. 2.38. 2. 1.8. R3. 4.5. 2.2. 1.96. 1.84. R4. 4.6. 2.1. 2.05. 1.8. X. 4.35. 2.30. 2.00. 1.83. EM. SI ST DE N. O EC CI DI R. 4. AS. R1 R2. Y. IC A ÁT. 0.74. DE. X. CO. 0.24. R4. 3. UN IC AC IÓ. 0.28. M. 0.52. RM. 2. R1. IN FO. 1. N. Radio (cm). 2400ppm. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 08. Promedio de los resultados de la evaluación del crecimiento en centímetros de Trichoderma sp. frente a concentraciones de control (0ppm), 1200ppm, 1800ppm y. UN IC AC IÓ. N. 2400ppm de metamidofos.. 0ppm 0,52 1,75 3,31. 1200ppm 0,22 0,77 1,52. 1800ppm 0,24 0,66 1,38. 2400ppm 0,17 0,65 1,32. 4. 4,35. 2,3. 2. 1,83. Y. CO. M. Dias 1 2 3. ÁT. IC A. Anexo 09. Análisis de Varianza y Post Anava del crecimiento lineal de Trichoderma sp. Mediante el paquete estadístico SPSS v. 22.. IN FO. Suma de. RM. ANOVA. cuadrados. cuadrática. 5,631. 3. 1,877. 14,864. 12. 1,239. 20,495. 15. DE. Entre grupos. gl. Dentro de grupos. Sig.. 1,515. ,261. DE. Subconjunto para alfa = 0.05 N. 1. 2400ppm. 4. 1,0275. 1800ppm. 4. 1,1000. 1200ppm. 4. 1,1925. 0ppm. 4. 2,4700. EC CI. O. N. Concentraciones de metamidofos. DI R. F. Post Anava Prueba de Tukeya. SI ST. EM. AS. Total. Media. Sig.. ,306. Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 4,000.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..