Acción del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de capsicum pubescens procedente de la localidad de Coina, distrito de Usquil departamento de La Libertad, sobre el radical libre 2,2 difenil 1 picrilhidrazilo

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. UI M. IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. O. Q. TESIS I. RM. AC. IA. Y. BI. “ACCIÓN DEL EXTRACTO ACETATO ETÍLICO DEL FRUTO LIOFILIZADO DE Capsicum pubescens PROCEDENTE DE LA LOCALIDAD DE COINA, DISTRITO DE USQUIL DEPARTAMENTO DE LA LIBERTAD, SOBRE EL RADICAL LIBRE 2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZILO”. DE. FA. Autores:. CA. BARRIENTOS CORDOVA JONATHAN JAIR. Asesor:. BI BL. IO. TE. BAZAN SALINAS SERGIO ANDRES. Mg. Q.F. RENGIFO PENADILLOS ROGER ANTONIO Coasesor: ING. SANCHEZ GONZALEZ JESUS ALEXANDER. TRUJILLO- PERU 2015 a. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores Miembros del Jurado:. IC A. Dando cumplimiento a las disposiciones establecidas en el reglamento de Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a consideración y elevado criterio científico el presente informe de trabajo de investigación intitulado:. IA. Y. BI. O. Q. UI M. “ACCIÓN DEL EXTRACTO ACETATO ETÍLICO DEL FRUTO LIOFILIZADO DE Capsicum pubescens PROCEDENTE DE LA LOCALIDAD DE COINA, DISTRITO DE USQUIL - DEPARTAMENTO DE LA LIBERTAD, SOBRE EL RADICAL LIBRE 2,2-DIFENIL-1-PICRILHIDRAZILO”. FA. RM. AC. Es propicia la oportunidad para manifestar mi sincero agradecimiento a los docentes de la Facultad de Farmacia y Bioquímica, quienes en su labor de educadores nos han orientado durante mi formación profesional.. BI BL. IO. TE. CA. DE. En consecuencia, Señores Miembros del Jurado sometemos el presente trabajo para su respectiva evaluación y veredicto, esperando sea de interés y gran utilidad para la facultad y la sociedad.. Trujillo, agosto de 2015. ___________________________. _________________________. Barrientos Córdova, Jonathan Jair. Bazán Salinas, Sergio Andrés b. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO EVALUADOR. Mg. Quispe Díaz Iván. IC A. _________________. Y. BI. O. Q. UI M. Presidente. FA. RM. AC. IA. Mg. Villarreal La Torre Víctor. DE. _________________. BI BL. IO. TE. CA. Miembro. Mg. Rengifo Penadillos Roger. _________________ Miembro. c. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Por la vida. Por demostrarnos día a día el inmenso amor que siente por nosotros, por permitirnos sentirlo en cada momento de nuestra vida. Y por enseñarnos que sostenidos de Su mano nada es imposible.. AC. IA. A nuestros padres. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. Por sus incansables esfuerzos que nos permitieron poder cumplir el sueño de estudiar en la UNT, por sus consejos, ánimos, guía, apoyo, cariño y amor incondicional.. Jonathan y Sergio. d. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS A nuestro asesor Roger Rengifo Penadillos. UI M. IC A. Por su paciencia y experiencia vertida en nosotros. Por siempre estar dispuesto a aconsejarnos y apoyarnos desinteresadamente brindado las facilidades y recursos necesarios para la culminación exitosa de este trabajo.. Q. A nuestro coasesor Jesús Alexander Sánchez González. RM. AC. IA. Y. BI. O. Por su tiempo y experiencia vertida en nosotros, brindando el asesoramiento, las facilidades y recursos necesarios para la realización exitosa del liofilizado de nuestra muestra.. FA. A la M.Sc. Marilú Soto Vásquez. BI BL. IO. TE. CA. DE. Por su tiempo y experiencia vertida en nosotros, brindado las facilidades y recursos necesarios para la realización exitosa de la Prueba de la Gota realizada en este trabajo. A todos nuestros amigos Que estuvieron apoyándonos durante culminación del trabajo de investigación.. el inicio y. Jonathan y Sergio. e. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. Página. i. ABSTRACT. ii. IC A. RESUMEN. INTRODUCCION. II.. MATERIAL Y METODO. III.. RESULTADOS. IV.. DISCUSION. V.. CONCLUSIONES. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. 7. Y IA AC RM FA DE. CA. 12. 17. 21. 22. TE. 28. BI BL. IO. ANEXOS. BI. O. Q. UI M. I.. f. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. La finalidad de presente estudio es determinar la acción in vitro del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens procedente de la localidad de Coina, distrito de Usquil - departamento de La Libertad, sobre el radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH*). Primero se logró identificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens mediante la marcha fitoquímica, siendo estos. IC A. flavonoides, antocianinas, alcaloides, fenoles y esteroides. Después, a partir del. UI M. extracto acetato etílico se prepararon soluciones de 7,5; 15 y 30 % v/v usando etanol de 96º G.L como diluyente, de cada solución se midió 1 mL mezclándose nm.. Los. metabolitos. secundarios. presentes. BI. 515. O. Q. con 1 mL de DPPH*, de estos sistemas se realizó la lectura de la absorbancia a en. las. diferentes. Y. concentraciones del extracto del fruto liofilizado de Capsicum pubescens,. IA. reaccionan con el DPPH*, de tal manera que disminuye la absorbancia del. AC. reactivo, el porcentaje de captación de DPPH* aumenta a medida que se. RM. incrementa la concentración y tiempo, mostrando mayor acción a la. FA. concentración de 30% v/v, debido a que en este extracto hay mayor. CA. DE. concentración de capsaicinoides.. TE. Palabras claves: Capsicum pubescens, DPPH*, reacción de óxido-reducción,. BI BL. IO. metabolito secundario.. i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRAC. The purpose of this study is to determine the in vitro action of the ethyl acetate extract of freeze-dried fruit of Capsicum pubescens from the town of Coina, Usquil district - department of La Libertad, on free radical 2,2-diphenyl-1picrilhidrazilo (DPPH*). First was identified secondary metabolites present in the ethyl acetate extract lyophilized fruit of Capsicum pubescens by phytochemical action, being these flavonoids, anthocyanins, alkaloids, phenols and steroids.. IC A. Then, from the ethyl acetate extract 7.5 solutions were prepared; 15 to 30 % v/v. UI M. using ethanol as a diluent 96° GL, each solution was measured 1 mL mixed with. Q. 1 mL of DPPH*, these systems read the absorbance at 515 nm was performed.. O. Secondary metabolites present in different concentrations of the extract. BI. lyophilized fruit of Capsicum pubescens, react with DPPH*, so that reduces the. IA. Y. absorbance of the reagent, the percentage uptake of DPPH* increases as the. AC. concentration increases and time showing further action to concentration of 30 %. RM. v/v, because in this extract is more concentrated capsaicinoid.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. Keywords: Capsicum pubescens, DPPH*, redox reaction, secondary metabolite.. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTODUCCION. El rocoto (Capsicum pubescens) es originario Perú y Bolivia, pero se cultiva en diversos países. Además de dar sabor a las comidas, tiene cualidades nutritivas por su contenido de vitaminas A y C. Los componentes que determinan el valor nutricional del rocoto se dividen en dos grupos. En uno engloba a aquellos que fijan su valor biológico, sabor específico, color y uso como condimento. A este grupo pertenecen las vitaminas, la capsaicina, los pigmentos y varios aceites volátiles. En el otro grupo enmarca a los azúcares, la fibra, la. IC A. 1,2.. UI M. proteína, los minerales y a cierto tipo de ácidos orgánicos. Uno de los principales atributos de la calidad en los frutos del género de aminas que. surgen. de. vainillinamina. conocidas como. IA. Y. capsaicinoides3,4.. la. BI. grupo. O. Q. Capsicum, además del color, el sabor y el aroma es el picor, originado por un. AC. Los capsaicinoides, entre los que destacan capsaicina, dihidrocapsaicina,. RM. nordihidrocapsaicina y homocapsaicina causan picor en el fruto del rocoto. FA. (Capsicum pubescens). Estos componentes se usan en la industria alimentaria cómo sustancia vegetal aromática que se usa para dar sabor a los alimentos, y. DE. en la farmacéutica por su variada actividad biológica 5.. CA. Las diferentes especies de Capsicum pueden variar, entre otras. TE. características en grado de picor, lo que se relaciona con su capacidad de. IO. acumular Capsaicinoides. La acumulación de capsaicinoides en los frutos de. BI BL. rocoto está relacionada con la edad y el estado de desarrollo del fruto. Empiezan a acumularse en el fruto en las primeras etapas de desarrollo, y alcanza su máxima concentración en las etapas finales. Otro factor que influye es el contenido de carotenoides del fruto 6,4. Se conocen más de 20 capsaicinoides diferentes cuya estructura química consiste en un núcleo fenólico unido mediante un enlace amida a un ácido graso. La capsaicina [(E) -N-(4-hidroxi -3-metoxibenci l)-8-metil-6-noneamida] y la dihidrocapsaicina (su análogo 6,7-dihidro) representan más del 90 % del contenido total de los capsaicinoides en los capsicum. La capsaicina, es el compuesto más picante del grupo de los capsaicinoides. La capsaicina pura, es. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. un compuesto cristalino, ceroso, hidrofóbico e incoloro. Es poco soluble en agua, pero muy soluble en grasas, aceites y alcohol. Entre otros capsaicinoides menores se encuentra a la nordihidrocapsaicina, a la homocapsaicina y a la homodihidrocapsaicina3, 10. Se ha comprobado que la capsaicina es una molécula con distintas actividades biológicas y farmacológicas, como la estimulación del sistema cardiovascular,. la analgésica, antiinflamatoria, lacrimógena, bactericida,. antiparasitaria y antifúngica, de igual manera tiene aplicaciones en industrias. IC A. como alimentos, cosméticos, fármacos, entre otras 7.. UI M. Los capsaicinoides también se conocen por presentar unas marcadas. Q. propiedades antimicrobianas y anti-fúngicas; los extractos obtenidos a partir de. BI. O. chiles picantes inhibían el desarrollo de determinados patógenos como Bacilluscereus, Bacillussubtilis, Clostridium sporogenes, Clostridium tetani y. IA. Y. Streptococcus pyogenes. Se ha encontrado que capsaicina también inhibe el. AC. crecimiento y desarrollo de Escherichia coli, Pseudomonas solanacearum y. RM. Bacillussubtilis. También presentan propiedades anti-bacterianas contra. FA. Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeroginosa y Helicobacter pylory13.. DE. Independientemente de su función en la naturaleza, los capsaicinoides tienen diversas aplicaciones en la industria alimentaria y farmacéutica. Los. CA. capsaicinoides con aceite de oliva se consideran un condimento importante en. TE. la dieta mediterránea, Por otro lado, estudios clínicos han mostrado la eficacia. IO. de la capsaicina como un potente analgésico natural (calmante para reducir el. BI BL. dolor de la artritis). El uso regular de 3 a 4 veces al día del fitofármaco sobre la piel, permite un acumulo de la capsaicina, coadyuvando a liberar las sustancias tóxicas que se generan por algún malestar o enfermedad y ayuda a disminuir el dolor 3. Los capsaicinoides están destinados fundamentalmente a la Industria farmacéutica. La capsaicina es ligeramente soluble en agua, soluble en grasas, alcohol etílico, alcohol metílico, éter, benceno, cloroformo, acetona, acetato de etilo, tetracloruro de carbono, aceites y álcalis calientes. Es insoluble en agua fría. Al extraerla y someter a un proceso de cristalización se pueden obtener cinco compuestos capsaicinoides distintos, entre los cuales se encuentran:. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. capsaicina en un 69%, dihidrocapsaicina en un 22%, y tres compuestos minoritarios que son la nordihidrocapsaicina en un 7%, la homocapsaicina en un 1% y la homodihidrocapsaicina en un 1%. De éstos la capsaicina y la dihidrocapsaicina son los responsables del 90% del sabor picante. 6,12.. López F, Lobato C, Gómez A, Gómez A, Romero N. y Escobar A. en su trabajo. de. investigación. intitulado:. Extracción. y. cuantificación. espectrofotométrica de capsaicina a partir de chile habanero, emplearon el método Soxhlet utilizando como solvente acetato de etilo, permitiendo una mayor. IC A. extracción de oleorresina 18,49%, obteniendo 311 mg/mL de capsaicinoides a. UI M. partir 30 g de Capsicum annuum L secado 9.. Q. Giraldo F, Gil M, Alzate L, Restrepo A, Millan L. y Col. en su trabajo de. O. investigación intitulado: Comparación de métodos de extracción de oleorresina. BI. de paprika (Capsicum annuum L.) convencionales con una tecnología amigable. IA. Y. al medio ambiente. Encontraron como resultado que la extracción de la. AC. oleorresina de páprika llevada a cabo mediante Soxhlet con los solventes. RM. orgánicos muestran diferencias estadísticas entre los rendimientos y grados de. FA. color, siendo el éter de petróleo y el hexano los solventes con rendimientos más bajos y sin diferencias estadísticas (p>0.05) entre ellos, mientras que para el. DE. acetato de etilo se obtuvo el mayor rendimiento, 16,08%. El solvente acetato de. CA. etilo muestra el mayor rendimiento y grados de color, siendo el más. TE. recomendado para el uso en la industria alimentaria por presentar una mayor. IO. polaridad comparado con el hexano 4.. BI BL. A partir del rocoto, es posible obtener una oleorresina que se puede definir como un extracto graso de viscosidad media, intenso color rojo y con un aroma propio del pimiento. Esta oleorresina está compuesta por dos fracciones, la fracción saponificable contiene grasas, ceras, fosfátidos y esteróles, mientras que en la insaponificable se encuentran carbohidratos, pigmentos y los capsaicinoides. De este último grupo de compuestos, la capsaicina es el compuesto principal, incluyéndose además otros análogos estructurales de la misma 9.. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Colmenero R, Garamillo M, Dorantes L. en su trabajo de investigación intitulado: “Actividad antioxidante de extractos de chiles verdes (capsicum annuum)”. En donde compararon la actividad antioxidante del extracto de tres tipos de capsicum annuum, de sus fracciones concluyen que la mezcla de los compuestos en el extracto puede presentar un efecto sinergista para aumentar la actividad antioxidante del extracto 14. Pérez M, Ávila R, Dorantes L, Navarro A, Padilla A. y col. en su trabajo de investigación intitulado: Evaluación de la actividad antioxidante del Chile. IC A. Jalapeño Rojo (Capsicum annum). Concluyeron que el extracto alcohólico y. UI M. oleoso de Capsicum annum poseen actividad antioxidante estadísticamente. Q. igual15.. O. La capacidad antioxidante se ha relacionado con la posible prevención de. BI. enfermedades cardiovasculares, algunos cánceres, cataratas e incluso. IA. Y. disfunción cerebral e inmune. La potencia antioxidante de estas sustancias está. AC. profundamente relacionada con su estructura, su concentración y las clases de. RM. compuestos presentes en los alimentos como es el caso del rocoto, ya que existe. FA. la posibilidad de sinergismo o antagonismo entre los diferentes componentes. Estos compuestos, al presentarse en concentraciones relativamente bajas en. DE. relación con las células, son capaces de evitar o disminuir la oxidación de esta,. CA. por lo que combaten así el estrés oxidativo que se da en determinadas. TE. circunstancias en el organismo provocado por una disminución de las sustancias. BI BL. endógenos 9.. IO. antioxidantes del mismo o un aumento de la síntesis de los radicales reactivos. Un antioxidante es una sustancia capaz de reducir al radical libre y evitar la acción oxidante de estos mediante la liberación de electrones en nuestra sangre, los que son captados por aquellos. El problema para la salud se produce cuando nuestro organismo tiene que soportar un exceso de radicales libres durante años, producidos mayormente por contaminantes externos. 16,17.. Los antioxidantes tienen una gran importancia para la salud debido a varias razones, los antioxidantes de la dieta se puede absorber fácilmente ejerciendo de este modo, efecto beneficioso. Así los compuestos fenólicos y los capsaicinoides presentes en los frutos del genero campsicum, ejercen un efecto. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. protector sobre las células en situaciones de exceso de producción de especies reactivas 18,19. La cinética de reacción o cinética química es una rama de la química física que estudia la velocidad la que ocurren los cambios químicos, permitiendo a la vez crear modelos para las etapas intermedias en las cuales los reactivos se convierten en otros compuestos químicos; es por tanto un poderoso instrumento para dilucidar los mecanismos por los que se efectúan las reacciones químicas25. La velocidad de reacción se expresa como el cambio en la concentración de. IC A. los reactivos o de los productos con el tiempo. La cual recibe influencia de la. UI M. concentración de reactivos, productos v otras especies químicas que pueden. Q. estar presentes, así mismo, de factores como pH, disolvente, presión y. BI. O. temperatura25, 26.. Y. Una reacción de orden cero, es aquella en la que la velocidad de la reacción. IA. es independiente de la concentración del reactivo. Una reacción de primer orden. AC. es aquella en la que la rapidez de la reacción depende solo de la concentración. RM. del reactivo, elevado a la primera potencia25, 26.. FA. Una medición de importancia práctica en el estudio de la cinética es la vida. DE. media o semivida de una reacción, la cual se define como el tiempo que. CA. transcurre para que la concentración del reactivo disminuya a la mitad de su valor. TE. original. Por lo tanto la vida media de una reacción de primer orden es. IO. independiente de la concentración inicial25, 26.. BI BL. Los objetivos de la cinética química al determinar experimentalmente datos que ayuden a describir las características de la reacción como: el orden de la reacción, la constante de velocidad y el tiempo de vida media, para luego aplicarlos en una síntesis óptima de sustancias; producción de preparados más estables; para establecer la dosis y el intervalo en que debe ser aplicado determinado medicamento; en la mejor comprensión de la cinética de distribución y eliminación de un fármaco y el funcionamiento de los organismos biológicos27.. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PROBLEMA ¿Cuál es la acción del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens procedente de la localidad de Coina, distrito de Usquil - departamento de La Libertad, sobre el radical libre 2,2-difenil-1picrilhidrazilo (DPPH*)?. HIPOTESIS. Q. UI M. IC A. Implícito. BI. O. OBJETIVOS. Determinar la acción del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de. RM. . AC. IA. Y.  OBJETIVO GENERAL. Capsicum pubescens procedente de la localidad de Coina, distrito de. FA. Usquil - departamento de La Libertad, sobre el radical libre 2,2-difenil-. CA. DE. 1-picrilhidrazilo (DPPH*). Identificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto. BI BL. . IO. TE.  OBJETIVOS ESPECIFICOS. acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens. . Determinar el porcentaje de reducción de DPPH* con las diferentes concentraciones de del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens.. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.2 MATERIAL. 2.1.1 Material de estudio . 1.5 Kg de frutos de Capsicum pubescens. 2.1.2 Material de vidrio Los de uso común en laboratorio. UI M. IC A. . 2.1.3 Equipos. Balanza analítica Sartorius BP301S. . Liofilizador LABCONCO 195 (A65412906). . Espectrofotómetro Jenway 6105. IA. Y. BI. O. Q. . AC. 2.1.4 Reactivos. Acetato de etilo Q.P. Sigma. . Agua destilada. . Etanol 96° G.L. Alkofarma. . Ácido acético glacial 99.8% de pureza Sigma. . Ácido clorhídrico 37% de pureza Sigma. . Ácido sulfúrico 98% de pureza Sigma. FA. DE. CA. TE. Anhídrido acético 98% de pureza Sigma. BI BL. IO. . RM. . . Cloruro férrico hexahidratado 97% de pureza Sigma. . Cloruro de sodio 99.5% de pureza Sigma. . Hidróxido de sodio 98% de pureza Sigma. . Magnesio metálico Sigma. . Gelatina de piel porcina. . Tolueno 99.5% de pureza Sigma. . 2,2-difenil -1-picrilhidracilo (DPPH*) Sigma. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2 MÉTODOS. 2.2.1 RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA Los frutos maduros de Capsicum pubescens se recolectaron en la localidad de Coina (800 msnm), en el Distrito de Usquil de la provincia de Otuzco, Latitud: 7° 48’ 17’’, Longitud: 78° 21’ 43’’, durante el mes de abril del 2015 y posteriormente fueron llevados al herbario Truxillenses de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación taxonómica en donde fue almacenada con el. UI M. IC A. código 58038.. Q. 2.2.2 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA. O. Las muestras de Capsicum pubescens se lavaron con agua. BI. destilada, cortándose por la mitad retirándose el pedúnculo y. IA. Y. realizándose cortes del pericarpio en trozos de 5 cm de largo y 0,5. AC. cm de ancho. Las muestras fueron depositadas en bandejas de. RM. aluminio en finas capas y congelándose a -22°C durante 48 horas. FA. antes de su liofilización, a 0,22 mbar y a -55°C en el condensador durante 24 horas. Al finalizar el tiempo de liofilizado, se guardaron. CA. DE. protegiéndolas de la luz y de la humedad hasta su uso 3, 10,11.. TE. 2.2.3 EXTRACCIÓN DE OLEORRESINAS POR SOXHLET. IO. Se utilizó una muestra de Capsicum pubescens liofilizada durante. BI BL. un tiempo de extracción de 6 horas. La relación muestra solvente fue de 20 g/ 200mL y las muestra fueron protegidas de la luz durante todo el tiempo de la extracción, se utilizó como solvente acetato de etilo. El solvente residual fue retirado por calentamiento a 40 °C durante 10 horas. Las muestras fueron colocadas después en un desecador hasta alcanzar un peso constate. 8. 4,9.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.4 MARCHA FITOQUÍMICA Para la preparación de los 4 tipos de extracto (hexánico, metanólico, acuoso-ácido y acuoso) se pesó 2 g de la droga y se colocaron respectivamente en 4 balones de 250 mL con 20 mL de cada uno de los solventes, posteriormente se sometió al proceso de extracción por reflujo usando un baño maría durante 10 minutos, filtrándose posteriormente los extractos. A cada extracto se le realizo las pruebas de identificación de fitoconstituyentes. IC A. respectivos. 20,21.. UI M. 2.2.5 ACCIÓN DEL EXTRACTO DE CAPSAICINOIDES SOBRE EL. Q. DPPH*. O. El radical 2,2-difenil -1-picrilhidracilo (DPPH*) se reduce en. BI. presencia de antioxidantes manifestándose un cambio de color (de. IA. Y. morado a amarillo) en la solución. Para preparación del reactivo, se. AC. pesó 0,6 mg de 2,2 – difenil – picrihidrazilo (DPPH*) y se disolvió. RM. en etanol 96° G.L. y se aforo a una concentración de 0.012 mg/mL. FA. con una molaridad de 3,043 x 10-5. A partir del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens se midió 0,75;. DE. 1,5 y 3,0 por separado y se diluyo con etanol 96° G.L. a 10 mL. CA. obteniéndose concentraciones 7,5; 15 y 30 % v/v respectivamente.. TE. Se medió 0,25 mL de cada una de las soluciones diluidas del. IO. extracto por separado y se le adiciono 2,5 mL de la solución 2,2-. BI BL. difenil -1-picrilhidracilo (DPPH*). Luego se procedió a realizar las lecturas de las absorbancias a 515 nm, desde 0 hasta 3600 segundos 3,23.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.6 DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE REDUCIÓN DEL DPPH*: Una vez obtenidas las lecturas de las absorbancias, se procedió a evaluar el porcentaje de reducción del DPPH* por el extracto, de acuerdo a la siguiente ecuación 20. 𝐴 − 𝐴1 × 100 𝐴. IC A. % 𝐷𝐸 𝑅𝐸𝐷𝑈𝐶𝐼Ó𝑁 =. A: Absorbancia del control. Q. UI M. A1: Absorbancia del sistema. BI. O. 2.2.7 DETERMINACIÓN DEL ORDEN DE REACCIÓN. Y. Se procedió a determinar la cinética de reacción de óxido-reducción. AC. IA. del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de capsicum. FA. RM. pubescens, aplicando las ecuaciones de la cinética química: Orden cero:. CA. DE. [𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ] = [𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ]0 − 𝑘𝑡. 𝐿𝑛[𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ] = 𝑘𝑡 [𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ]. BI BL. IO. TE. Primer orden:. Segundo orden: 1 1 = 𝑘𝑡 + [𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ] [𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ]0 A partir de las cuales se calculó la constante de velocidad (k) y el tiempo de vida media (t1/2); teniendo en cuenta las absorbancias de las muestras se halló el equivalente a las concentraciones inicial y remanente del DPPH* con la siguiente fórmula 28:. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. [𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ] = 𝐴𝑡 − 𝐴∞ [𝐷𝑃𝑃𝐻 ∗ ]0 = 𝐴0 − 𝐴∞ Donde: [DPPH*]: Concentración Remanente del DPPH* [DPPH*]0: Concentración Inicial del DPPH* Absorbancia al Tiempo t. A∞:. Absorbancia al Tiempo Infinito. A0:. Absorbancia a Tiempo cero. IC A. At :. UI M. 2.2.8 ANÁLISIS DE DATOS. O. Q. Se realizó el análisis gráfico y numérico (análisis de regresión lineal).. BI. Se realizó la prueba estadística de ANOVA para hallar la diferencia. Y. significativa del porcentaje de reducción a diferentes concentraciones. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. del extracto.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. TABLA 1. Identificación cualitativa de los fitoconstituyentes del extracto acuoso del fruto liofilizado de Capsicum pubescens. REACCION/. COLORACION PRECIPITADO RESUTADO. PRUEBA Espuma. -. -. Taninos. Gelatina. -. -. Flavonoides. Shinoda. Rojo. Antocianinas. Rosenhein. Marrón. Negativo (-) Negativo (-). -. Positivo (+). -. Positivo (+). Y. BI. O. Q. UI M. Saponinas. IC A. METABOLITO. RM. AC. IA. Fuente: Investigadores. FA. TABLA 2. Identificación cualitativa de los fitoconstituyentes del extracto acuoso. TE. REACCION/ PRUEBA. IO. METABOLITO. CA. DE. ácido del fruto liofilizado de Capsicum pubescens. Draggendorff. -. Naranja. Positivo (+). Mayer. -. Blanco. Positivo (+). Wagner. -. Marrón claro. Positivo (+). BI BL. Alcaloides. COLORACION PRECIPITADO RESUTADO. Fuente: Investigadores. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 3. Identificación cualitativa de los fitoconstituyentes del extracto hexánico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens. REACCION/. COLORACION PRECIPITADO RESUTADO. PRUEBA Lieberman -. Esteroides. Burchard. Verde. -. Positivo (+). -. -. Negativo (-). Bortranger. Quinonas. O. Q. UI M. Fuente: Investigadores. IC A. METABOLITO. BI. TABLA 4. Identificación cualitativa de los fitoconstituyentes del extracto. PRUEBA. RM. REACCION/. COLORACION PRECIPITADO RESUTADO. FA. METABOLITO. AC. IA. Y. metanólico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens. Shinoda. Rojo. -. Positivo (+). Taninos. Gelatina. -. -. Negativo (-). Verde. -. Positivo (+). Verde oscuro. -. Positivo (+). Draggendorff. -. Naranja. Positivo (+). Mayer. -. Blanco. Positivo (+). Wagner. -. Marrón claro. Positivo (+). TE. CA. DE. Flavonoides. IO. Lieberman -. BI BL. Esteroides. Fenoles. Alcaloides. Burchard. Tricloruro férrico. Fuente: Investigadores. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 5. Determinación del porcentaje promedio de reducción del DPPH* con extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens procedente de la localidad de Coina, distrito de Usquil - departamento de La Libertad.. 15%. % Reducción. % Reducción. 0. 17.6349. 15.9751. 19.4617. 10. 34.5756. 34.85477. 66.8050. 20. 39.5445. 45.64315. 72.4066. 44.0994. 51.65975. 72.6141. 48.4472. 57.05394. 74.0664. 50. 54.2443. 60.37344. 76.1411. 60. 59.42029. 63.90041. 78.8382. 30%. UI M. Q. O BI. % Reducción. DE. FA. RM. AC. IA. Y. Tiempo (min). IC A. 7,5%. BI BL. Concentración. IO. 40. TE. CA. 30. Fuente: Investigadores. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PORCENTAJE DE REDUCIÓN 90. IC. A. 80. UI. M. 70. Q O BI Y. 50. 30%. AC IA. % Reducción. 60. 40. 7.5%. FA RM. 30. 15%. DE. 20. 0 10. 20. Fuente: Investigadores. 30. 40. 50. 60. 70. min. BI B. LI O. 0. TE CA. 10. FIGURA 1. Determinación del porcentaje de reducción del DPPH* con extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens procedente de la localidad de Coina, distrito de Usquil - departamento de La Libertad.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ORDEN DE REACCIÓN: 1 0 10. 20. 30. 40. 50. 60. IC. A. 0. UI Q AC IA. Y. BI. O. -1. FA RM. -1.5. -2. y = -0.052x + 0.0821 R² = 0.9898. DE. Ln(Abst-Abs∞/Abs0-Abs∞). M. -0.5. LI O. TE CA. -2.5. Fuente: Investigadores. min. BI B. -3. FIGURA 2. Determinación del orden de reacción del DPPH* con extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a 15% v/v, procedente de la localidad de Coina, distrito de Usquil - departamento de La Libertad.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. En la presente investigación se utilizaron muestras de frutos de Capsicum pubescens (rocoto), procedente de la localidad de Coina, distrito de Usquil departamento de La Libertad, en estado de madurez, en la actualidad existen pocos antecedentes del estudio del fruto de esta planta donde generalmente se encuentren documentos sobre su descripción fitoquímica. En la determinación de metabolitos secundarios de capsicum pubescens. IC A. (Rocoto) se utilizó la marcha fitoquímica Prueba de la Gota de Olga Lock, con. UI M. algunas modificaciones, la cual consiste en poner en contacto la droga con solventes de diferente polaridad, bajo determinadas condiciones, logrando. Q. solubilizar los metabolitos secundarios que estén presentes, es decir que las. BI. O. fuerzas intermoleculares, además de afectar los puntos de ebullición y de fusión. Y. de las sustancias, determinan las propiedades de solubilidad de los compuestos. AC. IA. orgánicos permitiendo la separación de los metabolitos secundarios 21,30.. RM. La extracción es la separación de un componente del seno de una mezcla. Los compuestos hidrofóbicos o apolares pueden ser aislados por extracción de. FA. acuerdo a su solubilidad y afinidad química en solventes no polares, así como. DE. los compuestos de carácter polar serán extraídos en solventes polares. La. CA. eficiencia de la extracción dependen de la naturaleza química de los. TE. componentes y de la forma en que estén asociados con otros componentes de. IO. la célula (interacción hidrofóbica, fuerzas de Van der Waals, puentes de. BI BL. hidrogeno, interacciones electrostáticas e hidrofóbicas) 30,31. La identificación de metabolitos secundarios presentes en el fruto liofilizado de capsicum pusbenses se dio mediante reacciones de coloración y precipitación; y para ello, se utilizaron los siguientes solventes: hexano, etanol de 96° y agua destilada. En la Tabla 1, se presentan las reacciones de coloración y precipitación realizadas en el extracto acuoso, las cuales indicaron la presencia de Flavonoides y antocianinas. La reacción de Shinoda permite la identificación de flavonoides dependiendo de la coloración: naranja con las flavonas, rojo cereza. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. con los flavonoles, y violeta con las flavanonas. En la reacción se obtuvo una coloración roja, confirmándonos la presencia de flavonoles en la muestra. La presencia de leucoantocianidinas fue determinada al obtener una coloración marrón tras someter la muestra al reactivo de Rosenheim. Las reacciones de coloración y precipitación mostradas en la Tabla 2 indicaron la presencia de alcaloides. Para su identificación se realizaron tres tipos de reacciones dándonos en todas ellas un resultado positivo. La reacción de Dragendorff generó un precipitado color naranja; la reacción de Mayer, un. IC A. precipitado color blanquecino, y; la reacción de Wagner, un precipitado color. UI M. marrón claro.. Q. En la Tabla 3 se muestran las reacciones de coloración y precipitación. O. realizadas en el extracto hexánico; las cuales indicaron la presencia de. BI. esteroides. Se utilizó la reacción de Lieberman-Bouchardat en donde se observó. IA. Y. la aparición de color verde dando resultado positivo a la presencia de esteroides.. AC. Las reacciones de coloración y precipitación presentadas en la Tabla 4. RM. indicaron la presencia de flavonoides, esteroles, fenoles y alcaloides. En la. FA. reacción de Shinoda se obtuvo una coloración roja, confirmándonos la presencia. DE. de flavonoles en la muestra. En la reacción de Lieberman-Bouchardat se pudo observar la aparición de color verde dando resultado positivo a la presencia de. CA. esteroides. Se enfrentó el extracto con la solución de cloruro férrico obteniéndose. TE. una coloración azul verdosa, indicando la presencia de compuestos fenólicos,. IO. esta coloración corresponde a la presencia de derivados de catecoles (taninos. BI BL. condensados). Para la identificación de alcaloides se realizaron tres tipos de reacciones dándonos en todas ellas un resultado positivo. La reacción de Dragendorff generó un precipitado color naranja; la reacción de Mayer, un precipitado color blanquecino, y; la reacción de Wagner, un precipitado color marrón claro. Inicialmente, es necesario investigar in vitro las propiedades antioxidantes de cualquier producto natural antes de considerarlo una sustancia antioxidante. Se ha evaluado actividad antioxidante de diversas muestras de Capsicum annum. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mediante métodos indirectos que son los más utilizados para cuantificar la acción reductora de radicales libres, utilizando radicales coloreados y estables 14, 15, 21. Los radicales libres en la mayor parte de los casos, son especies altamente reactivas que tienen un tiempo de vida media corto, y que se combinan para generar moléculas más estables. Los radicales libres se representan colocando un punto o un asterisco sobre el símbolo del átomo que contiene al electrón desapareado 29. En la Tabla 5 y Figura 1, se observa que a medida que se incrementa la. IC A. concentración de la muestra (7,5; 15 y 30 % v/v), el porcentaje de reducción del. UI M. DPPH* por el extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens. Q. a tiempo “0” a “60” minutos, van aumentando, de tal manera que se registraron. IA. Y. BI. hasta un máximo de 78,84% a los “60” minutos.. O. valores que van desde 17,63% hasta un 19,46% a tiempo “0”, y de un 59,42%. AC. Al realizar el análisis estadístico ANOVA de un factor (anexos, cuadros 2, 4. RM. y 6) se puede asegurar que existe diferencia significativa con un nivel de. FA. confianza del 95% (p < 0,05) entre los promedios del porcentaje de reducción del DPPH* por las diferentes concentraciones del extracto acetato etílico del fruto. DE. liofilizado de Capsicum pubescens a los tiempo 0 y 60 minutos.. CA. Para medir el porcentaje de reducción de cada una de las concentraciones. TE. del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens, se ha. IO. utilizado el método espectrofotométrico del DPPH* basado en la estabilidad del. BI BL. radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH*), la cual se distribuye a una deslocalización del electrón desapareado, esta deslocalización también le otorga un color violeta, caracterizada por una banda de absorción en solución etanólica de 515 nm. Cuando un radical gana un electrón, se dice que se reduce. Como se puede anticipar, las reacciones de oxidación y de reducción son muy importantes, ya que en un solo proceso se puede combinar la química de los radicales libres con la química iónica. Los antioxidantes son sustancias que en concentraciones normales poseen una afinidad mayor que cualquier otra molécula para interaccionar con un radical. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. libre, ya que al presentarse en bajas concentraciones en comparación con el sustrato oxidable, pueden prevenir o retardar la destrucción oxidativa del mismo 32. El orden de reacción especifica la dependencia empírica de la rapidez con las concentraciones. Puede ser cero, un número entero o un número fraccionario. Se puede usar la ley de la velocidad para determinar las concentraciones de los reactivos en cualquier momento durante el curso de la reacción Para hacerlo, es necesario integrar la expresión de la ley de la. IC A. velocidad 28.. UI M. En la Figura 2 se ilustra el comportamiento lineal cuando se relaciona el. Q. Ln[DPPH*rem]/[DPPH*] vs el tiempo, aplicándose las ecuaciones de los diferentes. O. órdenes de reacción para la reacción deóxido-reducción entre DPPH* con el. BI. extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a la. IA. Y. concentración de la muestra de 15% v/v, se encontró que la reacción se adecúa. AC. mejor a una cinética de primer orden, esta elección se hace en función del. RM. máximo valor de los coeficientes de correlación lineal (R2) de las líneas de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. tendencia.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. 1. Los metabolitos secundarios presentes en el extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens son: flavonoides, antocianinas, alcaloides, fenoles y esteroides. 2. El extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens, reduce al radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH*); existiendo una. IC A. relación directa entre la concentración del extracto y el porcentaje de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. reducción.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. Alcántar S. 2007. Efecto de la radiación solar en la germinación y desarrollo de chile manzano (Capsicum pubescens). Tesis para obtener el grado de Especialidad en Ingeniería de invernaderos. Universidad Autónoma de Querétaro. México. pp. 8, 11- 12 [acceso 05 de febrero 2015] Disponible en: http://ri.uaq.mx/bitstream/123456789/2144/1/RI001646.pdf 2. Martínez F, Narváez R. 2013. Utilización de 3 variedades de pimiento. IC A. (Capsicum annuum var. Annuum, Capsicum sinense, Capsicum baccatum. UI M. L) y 3 variedades de ají (Capsicum frutescen, Capsicum pubescens,. Q. Capsicum chinense), fresco y deshidratado para la elaboración de queso. O. fresco prensado. Tesis para obtener el grado de Ingeniero en desarrollo. BI. integral Agropecuario. Universidad Politécnica Estatal del Carchi. Ecuador.. IA. Y. p. 24, 12 [acceso 05 de febrero 2015] Disponible en:. AC. http://181.198.77.140:8080/bitstream/123456789/20/1/068%20UTILIZACI%. RM. C3%93N%20DE%203%20VARIEDADES%20DE%20PIMIENTO%20(%20. FA. CAPSICUM%20ANNUUM%20VAR,%20ANNUUNM,%20CAPSICUM%20SI NENSE,%20CAPSICUM%20BACCATUM%20L%20)%20Y%203%20VARI. DE. EDA%20-%20MARTINEZ%20FUERTES%20FERNANDA-. TE. CA. NARVAEZ%20JARAMILLO%20RUTH.pdf. IO. 3. Molina D. 2009. Contenido de compuestos Fitoquímicos y su relación con la. BI BL. capacidad antioxidante de extractos de pimientos (Capsicum annuum L.) Cultivados en el noreste de México. Tesis para obtener el grado de Maestro en Bioceánicas. Universidad de Sonora. pp. 16-22, 28, 32, 38 [acceso 05 de febrero 2015], Disponible en: http://www.posQradoenbiociencias.uson.mx/produccion/docs/Tesis%20Quij ada.pdf 4. Giraldo F, Gil M, Alzate L, Restrepo A, Millan L. y Col. 2009. Comparación de métodos de extracción de oleorresina de paprika (Capsicum annuum L.) convencionales con una tecnología amigable al medio ambiente.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 30. Carranza D. 2000. “Determinación de Metabolitos secundarios del Tallo de Croton Alnifolius L. (Tunga)”. Universidad Nacional de Trujillo. Perú. pp: 2231. 31. Gennota Y. 2001. “Fundamentación de Reacciones de Coloración y Precipitación en la identificación de Metabolitos Secundarios de Plantas Medicinales”. Universidad Nacional de Trujillo. Perú. pp: 41-46. 32. Pérez, V. 2008. Evaluación de la actividad antioxidante de plantas de tomillo.. IC A. Universidad Politécnica de Cartagena. Colombia. p: 20-21 [acceso 10 de. UI M. agosto 2015]. Disponible en:. http://repositorio.bib.upct.es/dspace/bitstream/10317/159/2/proyecto%20del. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. %20tomillo-def.pdf. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 1: Cálculo del porcentaje de reducción del DPPH* por el extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 7.5% Tiempo (min). Promedio. % Reducción. Promedio. 0.39. 0.43. 0.371. 0.397. 19.0871. 10.7884. 23.0290. 17.6349. 10. 0.313. 0.318. 0.314. 0.315. 34.9896. 33.9545. 34.7826. 34.5756. 20. 0.29. 0.289. 0.294. 0.291. 39.7516. 39.9586. 38.9234. 39.5445. 30. 0.268. 0.264. 0.275. 0.269. 44.3064. 45.1346. 42.8571. 44.0994. 40. 0.244. 0.252. 0.248. 0.248. 49.2754. 47.6190. 48.4472. 48.4472. 50. 0.216. 0.223. 0.221. 0.22. 55.0725. 53.6232. 54.0373. 54.2443. 60. 0.194. 0.198. 0.193. 0.195. 59.6273. 59.8344. 59.4203. 58.7992. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. IC A. 0. UI M. Absorbancia. DE. FA. Grafica 1: Absorbancia del DPPH vs tiempo del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 7.5%. CA. Absorbancia vs Tiempo 0.45. TE. 0.4. IO. 0.35. BI BL. 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0. 10. 20. 30. 40. 50. 60. 70. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Muestras. Suma. Promedio. Varianza. 0. 3. 52.90456. 17.63485. 39.04031. 10. 3. 103.7267. 34.57557. 0.300057. 20. 3. 118.6335. 39.54451. 0.300057. 30. 3. 132.2981. 44.09938. 1.328824. 40. 3. 145.3416. 48.4472. 0.685845. 50. 3. 162.7329. 54.24431. 0.557249. 60. 3. 178.2609. 59.42029. 0.300057. Dentro de los grupos. 11.40216641. Total. 3202.490106. 6. 531.848. 653.0226. 2.59E-16. 2.847726. 14. 0.81444. 20. H0 Ha. BI BL. IO. TE. CA. Probabilidad. AC. 3191.087939. F. Valor crítico para F. RM. Entre grupos. Grados Promedio de de los libertad cuadrados. FA. Suma de cuadrados. DE. Origen de las variaciones. IA. Y. BI. O. Q. IC A. Tiempo. UI M. Cuadro 2: Anova del porcentaje de reducción del DPPH* frente al extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 7.5%. Criterio. Los promedios de las concentraciones son iguales Los promedios de las concentraciones son diferentes Fexperimental > Ftabular. Rechazar H0. 653.0225564>2.847726 Conclusión. Existe diferencia significativa con un nivel de 0,05 entre los promedios de las concentraciones. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 3: Cálculo del porcentaje de reducción del DPPH* por el extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 15% Tiempo (min). Absorbancia. Promedio. % Reducción. Promedio. 0.394. 0.415. 0.406. 0.405. 18.2573. 13.9004. 15.7676. 15.9751. 10. 0.314. 0.307. 0.321. 0.314. 34.8548. 36.3071. 33.4025. 34.8548. 20. 0.271. 0.254. 0.261. 0.262. 43.7759. 47.3029. 45.8506. 45.6432. 30. 0.235. 0.228. 0.236. 0.233. 51.2448. 52.6971. 40. 0.213. 0.202. 0.206. 0.207. 55.8091. 58.0913. 50. 0.195. 0.185. 0.193. 0.191. 59.5436. 60. 0.179. 0.173. 0.17. 0.174. 62.8631. IC A. 0. 51.6598. 57.2614. 57.0539. 61.6183. 59.9585. 60.3734. 64.1079. 64.7303. 63.9004. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. 51.0373. DE. FA. Grafica 2: Absorbancia del DPPH vs tiempo del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 15%. CA. Absorbancia vs Tiempo. TE. 0.45. IO. 0.4. BI BL. 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0. 10. 20. 30. 40. 50. 60. 70. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Muestras. Suma. Promedio. Varianza. 0. 3. 47.92531. 15.9751. 4.77781. 10. 3. 104.5643. 34.85477. 2.109123. 20. 3. 136.9295. 45.64315. 3.142164. 30. 3. 154.9793. 51.65975. 0.817823. 40. 3. 171.1618. 57.05394. 1.334343. 50. 3. 181.1203. 60.37344. 1.205213. 60. 3. 191.7012. 63.90041. 0.90391. 5097.38862. Dentro de los grupos. 28.5807751. Total. 5125.9694. F. Probabilidad. Valor crítico para F. 849.5648. 416.1506. 5.97E-15. 2.847726. AC. Entre grupos. Grados Promedio de de los libertad cuadrados 6. RM. Suma de cuadrados. FA. Origen de las variaciones. IA. Y. BI. O. Q. IC A. Tiempo. UI M. Cuadro 4: Anova del porcentaje de reducción del DPPH* frente al extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 15%. 2.041484. 20. BI BL. H0. IO. TE. CA. DE. 14. Ha. Criterio. Los promedios de las concentraciones son iguales Los promedios de las concentraciones son diferentes Fexperimental > Ftabular. Rechazar H0. 416.150602>2.847726 Conclusión. Existe diferencia significativa con un nivel de 0,05 entre los promedios de las concentraciones. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 5: Cálculo del porcentaje de reducción del DPPH* por el extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 30% Tiempo (min). Absorbancias. Promedio. %Reducción. Promedio. 0.382. 0.396. 0.386. 0.388. 20.7039. 17.8054. 19.8758. 19.4617. 10. 0.186. 0.143. 0.151. 0.16. 61.4108. 70.3320. 68.6722. 66.8050. 20. 0.129. 0.136. 0.134. 0.133. 73.2365. 71.7842. 72.1992. 72.4066. 30. 0.135. 0.132. 0.129. 0.132. 71.9917. 72.6141. 73.2365. 72.6141. 40. 0.128. 0.115. 0.132. 0.125. 73.4440. 76.1411. 72.6141. 74.0664. 50. 0.109. 0.122. 0.114. 0.115. 77.3859. 74.6888. 76.3485. 76.1411. 60. 0.101. 0.109. 0.096. 0.102. 79.0456. 77.3859. 80.0830. 78.8382. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. 0. RM. AC. Grafica 3: Absorbancia del DPPH vs tiempo del extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 30%. FA. Absorbancia vs Tiempo. DE. 0.45. CA. 0.4. TE. 0.35. BI BL. IO. 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0. 10. 20. 30. 40. 50. 60. 70. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 6: ANOVA del porcentaje de reducción del DPPH* frente al extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens a una concentración de 30% Muestras. Suma. Promedio. Varianza. 0. 3. 58.38509. 19.4617. 2.228995. 10. 3. 200.4149. 66.80498. 22.51166. 20. 3. 217.2199. 72.40664. 0.559563. 30. 3. 217.8423. 72.61411. 0.38739. 40. 3. 222.1992. 74.06639. 50. 3. 228.4232. 76.14108. 1.850863. 60. 3. 236.5145. 78.83817. 1.850863. IC A. Tiempo. Y. BI. O. Q. UI M. 3.400424. Suma de cuadrados. Grados Promedio de de los libertad cuadrados. Entre grupos. 8266.829329. Dentro de los grupos. 139.2021487. Total. 8406.031478. F. Probabilidad. Valor crítico para F. 138.5702. 1.19E-11. 2.847726. 1377.805. FA. 6. RM. AC. IA. Origen de las variaciones. 9.943011. 20. H0. BI BL. IO. TE. CA. DE. 14. Ha Criterio. Los promedios de las concentraciones son iguales Los promedios de las concentraciones son diferentes Fexperimental > Ftabular. Rechazar H0. 138.5701917>2.847726 Conclusión. Existe diferencia significativa con un nivel de 0,05 entre los promedios de las concentraciones. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IDENTIFICACIÓN TAXONÓMICA DE LA PLANTA EN EL HERBARIO. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. TRUXILLENSES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Liofilizador LABCONCO. . Liofilizado de las muestras congeladas de Capsicum pubescens. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. . 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Muestra liofilizada y triturada de Capsicum pubescens. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. . BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. 1. EXTRACCIÓN SOXHLET. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. MARCHA FITOQUÍMICA Preparación de extractos. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. . BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. 2.1 Lieberman – bouchardat: Esteroides. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. 2.2 Flavonoides: Shinoda. BI BL. IO. TE. CA. DE. 2.3 Fenoles: Tricloruro férrico. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Y. Wagner. Dragendorff. RM. AC. IA. Mayer. BI. O. Q. UI M. IC A. 2.4 Alcaloides:. Extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens. BI BL. IO. TE. CA. . DE. FA. 3. ACCIÓN DEL EXTRACTO DE CAPSAICINOIDES SOBRE EL DPPH*. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Obtención de las concentraciones de 7,5; 15 y 30 % v/v a partir del. AC. Preparación del reactivo DPPH*. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. . IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. extracto acetato etílico del fruto liofilizado de Capsicum pubescens.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(51) AC. Realización de lecturas de las absorbancias a 515 nm,. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. . IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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