Determinación de la concentración de cianidina 3 glucósido por cromatografía líquida de alta resolución en zea mays l “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria
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(2) M IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. O. Q. UI. AGRADECIMIENTO. A. Y. Agradecemos a nuestro asesor Mayar Ganoza Yupanqui, por ser más que un guía en la. AC I. realización de este trabajo de investigación, a los miembros del jurado, por su paciencia y. RM. apoyo incondicional y agradecemos infinitamente a nuestros familiares y amigos que nos. FA. brindaron su ayuda y comprensión en todo momento, sin ellos no hubiéramos alcanzado. BI BL IO. TE CA. DE. nuestra meta.. Inés y Elba. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) M IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. O. Q. UI. JURADO DICTAMINADOR (Presidente). (Miembro). DE. FA. RM. Prof. Yuri Curo Vallejos. AC I. A. Y. Prof. William Sagástegui Guarniz. (Miembro). BI BL IO. TE CA. Prof. Mayar Luis Ganoza Yupanqui. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. A. Página. Q. UI. M IC. RESUMEN……………………………………………………………………i. Y. BI. O. ABSTRACT………………………………………………………………… ii. RM. AC I. A. I. INTRODUCCIÓN……………………………………….……………….. 1. DE. FA. II. MATERIAL Y MÉTODOS……………………………………………...7. TE CA. III. RESULTADOS………………………………………………………….13. BI BL IO. IV. DISCUSIÓN……………………………………………………….…… 19. V. CONCLUSIONES………………………………………………………..23. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………....24. VII. ANEXOS………………………………………………………………...27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente trabajo de investigación titulado Determinación de la concentración de Cianidina 3-glucósido por cromatografía líquida de alta resolución en Zea mays L. “maíz. A. morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria, tiene por objetivo. M IC. cuantificar la concentración de Cianidina 3-glucósido tanto en grano como en coronta de 7. Q. UI. germoplasmas (12 muestras) de Zea mays L. “maíz morado”; como método de análisis se. BI. O. empleó la cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) en donde se utilizó un. Y. cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, con una columna ODS (C18) de 150 mm. AC I. A. x 4,6 mm d.i., como fase móvil una solución A (HCOOH/H2O/MeOH 1:4:5) y una. RM. solución B (HCOOH/H2O 1:9) leyéndose a 520 nm y corrido a una velocidad 1,2 mL/min.,. FA. obteniéndose una concentración de Cianidina 3-glucósido que varía entre 29,21 y 147,57. DE. mg/100g grano y entre 409,61 y 3083,82 mg/100g coronta de las muestras de Zea mays L.. TE CA. “maíz morado”, en el ANOVA se evaluó las muestras de los germoplasma con respecto a las muestras del germoplasma de Línea 9, evidenciándose que existe diferencia. BI BL IO. significativa entre las concentraciones de Cianidina 3-glucósdio de las diferentes muestras; al final del estudió se concluyó que entre las muestras de grano, Línea 9 presenta la mayor concentración, mientras que Sintético Amplio presenta la mayor concentración de Cianidina 3-glucósido entre las muestras de coronta.. Palabras claves: antocianinas, Cianidina 3-glucósido, cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. This research entitled determination of the concentration of cyanidin 3-glucoside by liquid chromatography high resolution in Zea mays L. "purple corn" from the National Institute. A. for Agricultural Innovation, has the main objetive of quantify the concentration of cyanidin. M IC. 3-glucoside in both grain and cobs of 7 germplasm (12 samples) of Zea mays L. "purple. UI. corn" as a method of analysis was used high pressure liquid chromatography (HPLC) using. O. Q. a gas chromatograph Agilent 1100 with diode array with an ODS column (C18) of 150 mm. Y. BI. x 4.6 mm id and solution as mobile phase A (HCOOH/H2O/MeOH 1:4:5) and a solution B. AC I. A. (HCOOH/H2O 1:9) reading at 520 nm and running at a speed of 1.2 mL / min., obtaining a. RM. concentration cyanidin 3-glucoside, which varies between 29.21 and 147.57 mg/100g grain. FA. and between 409.61 and 3083.82 mg/100g samples cob Zea mays L. "purple corn". In the. DE. ANOVA were evaluated germplasm samples compared to samples of germplasm Line 9. TE CA. and as a result there are significant differences between the concentrations of cyanidin 3glucósdio of different samples, at the end of the study concluded that the samples of grain,. BI BL IO. Line 9 has the highest concentration, while Synthetic Wide has the highest concentration of cyanidin 3-glucoside from cob samples. Keywords: anthocyanins, cyanidin 3-glucoside, high performance liquid chromatography (HPLC). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCION. Entre la gran variedad de pigmentos naturales, las antocianinas constituyen el grupo más conocido y estudiado, por lo que el conocimiento de sus propiedades, usos y posibles aplicaciones a la industria representa muchos años de. IC A. investigación en cuanto a su prevalencia, clasificación y biosíntesis 5.. UI M. Las antocianinas se encuentran clasificadas dentro de los compuestos fenólicos. O. Q. que comparten la ruta biosintética de los flavonoides y son responsables de la. BI. coloración rosada, violeta y azul de la mayoría de flores, frutos y hojas de las. IA. Y. angiospermas; además pueden estar presentes en otros tejidos de las plantas como. FA. RM. AC. tallo, bulbos, raíces así como en gimnospermas y algunas briofitas 2, 10.. DE. Las antocianinas están formadas por una aglicona (antocianidina) y uno o más. CA. azúcares que en muchos casos se encuentran acilados, son derivados del 2-. IO. TE. fenilbenzopirilio (catión flavilo) y su estabilidad del color depende de varios. BI BL. factores como la estructura y concentración de antocianinas, pH, temperatura y la presencia de agentes acomplejantes (fenoles e iones metálicos). Entre las 539 antocianinas que han sido identificadas, el 97% están glicosiladas y el 90% de ellas están basadas en seis antocianidinas tales como Pelargonidina (Pg), Cianidina (Ci), Peonidina (Pn), Delphinidina (Dp), Petunidina (Pt), y Malvidina (Mv) 5, 10, 3, 9.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El maíz morado es una variedad pigmentada de Zea mays L., cuyos granos y corontas presentan color morado, debiéndose su coloración principalmente a Cianidina 3-glucósido, la cual ha sido identificado como la antocianina mayoritaria en la coronta y grano (Styles y Ceska, 1972; Nakatani et al, 1979). Los derivados glucosilados de pelargonidina y peonidina han sido encontrados. UI M. IC A. también, así como sus derivados malónicos 4, 8.. Una de las técnicas usadas para la cuantificación de las antocianinas es el método. BI. O. Q. de pH diferencial el cual se basa en las transformaciones estructurales que sufren. Y. las antocianinas monoméricas con un cambio en el pH, hecho que se manifiesta. AC. IA. por los espectros de absorbancia notablemente diferentes que se obtienen, siendo. RM. la forma coloreada oxonio (catión flavilo) predominante a un pH de 1,0. FA. y la forma incolora hemicetal predominante a pH de 4,5; sin embargo la. DE. espectroscopia UV/Vis no se utilizó para la identificación de las antocianinas. CA. hasta la introducción de la tecnología de arreglo de diodos, la cual permitió la. TE. acumulación de bibliotecas de datos espectrales. Por todo esto uno de los. BI BL. IO. métodos más usados en el análisis de las antocianinas por su precisión es la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), que acoplada a detector UV/Vis con arreglo de diodos se convierte una herramienta útil para la identificación de los picos correspondientes a cada antocianina y que trabajando a una longitud de onda máxima de 520 nm evita la interferencia de otros flavonoides presentes en los extractos y simplifica los cromatogramas resultantes 2, 15.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Jing P. y Giusti M. 8 (2007), de la Universidad de Ohio, evaluaron los efectos de las condiciones de extracción incluyendo el tipo de disolvente, temperatura y tiempo de exposición sobre la cantidad de antocianinas obteniendo cerca de 940 mg por cada100 g de coronta utilizando agua como solvente y la metodología del. 1. (2009), de la Universidad Privada Antonio Guillermo. UI M. Balarezo C. y Silva K. IC A. pH diferencial antes descrita.. Urrelo (UPAGU), en convenio con el Instituto Nacional de Innovación Agraria. BI. O. Q. (INIA) realizaron un estudio sobre el diseño de una técnica para extraer las. Y. antocianinas del maíz morado cultivado en Cajamarca y encontraron 0,033908. AC. IA. mg/L y 0,00537 mg/L de antocianinas monoméricas promedio expresadas en. RM. Cianidina 3-glucósido en coronta y grano respectivamente, usando también el. 4. (2009), de la Universidad aNacional Mayor de San Marcos. TE. Gorriti et al.. CA. DE. FA. método de pH diferencial.. IO. (UNMSM), utilizando la metodología del pH diferencial, investigaron las. BI BL. condiciones óptimas de extracción de antocianinas de las corontas del maíz morado encontrando valores de hasta 4653,4 mg de antocianinas/ 100g muestra utilizando como solventes una solución hidroalcohólica.. Salinas Y. et al.. 13. (2005), de la Universidad Autónoma de Chapingo, en un. estudio de extracción y uso de pigmentos del grano de maíz morado como colorantes en yogur, evaluaron cuatro variedades de maíz morado mediante HPLC, siendo las variedades Peruano y Arrocillo las que presentaron mayor 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. rendimiento ya que se obtuvieron valores de 259,4 mg/100g y 250,8 mg/100g de grano respectivamente.. Cuevas M. 3 (2008), de la Universidad Nacional Mayor Simón de Cochabamba, realizó el análisis y caracterización de antocianinas por HPLC en diferentes variedades de maíz (Zea mays L.) boliviano e identificó dos antocianinas en. todas. las. variedades. de. maíz. morado. estudiadas. IC A. mayoritarias. UI M. independientemente de su origen: Cianidina 3-glucósido (42,5%), y Cianidina 3-. Q. (6’- malonil) - glucósido (30,7%). Los resultados concuerdan con los reportados. BI. O. por Fossen et al. (2001), quienes encontraron las mismas antocianinas en flores y. Y. hojas de maíz morado y señalan, al igual que De Pascual T. et al. (2002) y. AC. IA. Schwarz et al. (2003), a la Cianidina 3-glucósido como la antocianina mayoritaria. RM. en maíz morado, seguida por la Cianidina 3- (6’- malonil) - glucósido. En este. FA. estudio se evidenció además que existen diferencias en el perfil de antocianinas. DE. minoritarias entre especies de maíz; que si bien son mínimas, ocasionan una. TE. BI BL. IO. morado 12, 6.. CA. diferencia enorme en el color y pigmentación de las diferentes variedades de maíz. Moreno M. 11 (2010), realizó en la Universidad Nacional de Trujillo la validación de una metodología analítica para determinar Cianidina 3-glucósido en Zea mays L. “maíz morado” procedente de la región Cajamarca por cromatografía liquida de alta resolución HPLC encontrando que los parámetros evaluados de linealidad, límite de detección, límite de cuantificación, precisión del sistema, precisión del método, exactitud y robustez estuvieron dentro de los valores aceptados para una validación.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA), creado en julio de 1978, es una institución que interactúa en las áreas de la investigación científica, generando conocimientos y adaptando tecnologías como respuesta a las demandas del mercado, que son transferidos metodológica y sistemáticamente a los productores agrarios, a través de servicios tecnológicos y de extensión agraria. Una de las. IC A. funciones de dicha institución es generar, captar, adaptar, transferir y difundir. UI M. conocimientos científicos y tecnológicos sobre recursos genéticos, por tanto se. Q. encarga del mejoramiento genético de productos agrarios, en base a estas. BI. O. consideraciones se hace necesario realizar estudios de investigación para. Y. cuantificar las antocianinas, para lo cual se obtuvieron muestras de diferentes. AC. IA. germoplasmas de Zea mays L. proporcionadas por el INIA, con la finalidad de. RM. guiar la identificación de aquellas muestras con mayor cantidad y calidad de. FA. antocianinas, para proceder a su posterior cultivo y producción y mejorar de esta. DE. manera la rentabilidad y competitividad de los productores así como contribuir a. CA. la seguridad alimentaria y a la conservación y desarrollo sostenible de los recursos. BI BL. IO. TE. naturales del país 7.. Por lo expuesto anteriormente se plantea el siguiente problema:. ¿Cuál es la concentración de Cianidina 3-glucósido por cromatografía líquida de alta resolución en Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria?. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS. Objetivo General:. Determinar de la concentración de Cianidina 3-glucósido. por cromatografía. líquida de alta resolución en Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria.. UI M. IC A. Objetivos Específicos:. Q. 1. Determinar la concentración de Cianidina 3-glucósido en grano de Zea mays. BI. O. L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria por. IA. Y. cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).. AC. 2. Determinar la concentración de Cianidina 3-glucósido en coronta de Zea mays. RM. L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria por. FA. cromatografía liquida de alta resolución (HPLC).. DE. 3. Determinar si entre las concentraciones de Cianidina 3-glucósido de diferentes. CA. muestras de Zea mays L. “maíz morado” con respecto a la muestra Línea 9,. IO. TE. procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria, existe diferencia. BI BL. significativa, tanto en grano como en coronta.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y METODO. 2.1.MATERIAL 2.1.2. Material de Estudio Como material de estudio se utilizó 7 germoplasmas (grano y coronta) haciendo un total de 12 muestras de maíz morado (Zea. Sin fertilizar (Grano). 2.. Sin fertilizar (Coronta). 3.. Fertilizado (Grano). 4.. Fertilizado (Coronta). 5.. Sintético R (Coronta). 6.. Sintético R (grano). 7.. Sintético Amplio (coronta). 8.. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. 1.. DE. UI M. IC A. mays L.):. CA. Sintético Amplio (Grano). BI BL. IO. TE. 9.. Línea 9 (Grano). 10.. Línea 9 (Coronta). 11.. Cruce 1 (Grano). 12.. Cruce 2 (Grano). Los cuales fueron proporcionados por el Instituto Nacional de Innovación Agraria (INIA)- Baños del Inca - Cajamarca.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.3. Material de Laboratorio 2.1.3.1 Reactivos Acetonitrilo grado HPLC Acido fórmico GR 98-100% Agua destilada. IC A. Agua ultra pura. BI. 2.1.3.2.Material de Vidrio. O. Q. Metanol grado HPLC. UI M. Cianidina 3-glucósido (Polyphenol, Norway). IA. Y. Fiolas de 25, 50, 100, 500 y 1000 mL. AC. Matraces Erlenmeyer de 250 y 500 mL. RM. Pipetas graduadas de 1, 2, 5 y 10 mL. FA. Probetas de 25 y 100 mL. DE. Termómetro -10°C a 200°C. BI BL. IO. TE. CA. Vasos de precipitación de 50, 100, 500 y 1000 mL Viales ámbar de1,5 mL.. 2.1.3.3. Equipos Balanza Analítica Sertorius 2942,Sensibilidad 0,0001g Equipo de cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) Agilent 1100 series Filtro de vacío SANAILAB Micropipeta 100-1000 µL Eppendorf Micropipeta 20-200 µL Eppendorf 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Ultrapurificador de agua: Modelo: EASY PURE, Marca: BARNSTEAD 2.1.3.4.Otros . Cocinas eléctricas. . Computadora Pentium IV. . Filtros jeringa de Celulosa Regenerada de 0,2 µm. IC A. de poro, y 25 mm de diámetro Impresora HP 1020. . Jeringas descartables de 3 mL. . Membrana de Nylon de 47 mm de diámetro y 0,2. Y. µm de poro. BI. O. Q. UI M. . Memoria USB de 1 Gb. . Papel de filtro. MÉTODOS. DE. 2.2.. FA. RM. AC. IA. . TE. CA. 2.2.1. TOMA DE MUESTRA. BI BL. IO. Las muestras fueron proporcionadas por el Instituto Nacional de Innovación Agraria, cultivadas en la región Cajamarca, denominadas: Sin fertilizar (Grano), Sin fertilizar (Coronta), Fertilizado. (Grano),. Fertilizado. (Coronta),. Sintético. R. (Coronta), Sintético R (grano), Sintético Amplio (coronta), Sintético Amplio (Grano), Línea 9 (Grano), Línea 9 (Coronta) Cruce 1 (Grano), Cruce 2 (Grano).. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.2. PREPARACIÓN DE LOS ESTÁNDARES Se preparó una solución madre de Cianidina 3-glucósido (Polyphenols, Norway) de 1 mg/mL, de la cual se tomó 50, 100, 150, 200 y 250 µL y se les colocó a cada una de ellas en fiolas de 10 mL, llevándose a su respectivo aforo con agua destilada, de la cual se obtuvieron soluciones de 5, 10, 15, 20 y 25 µg/mL. IC A. respectivamente. De cada solución se tomó 3 mL y se filtró. UI M. haciendo uso de filtros jeringa de celulosa regenerada de 25 mm. O. Q. de diámetro y 0,2 µm de poro; colocándose en viales ámbar de. Y. BI. 1,5 mL 11.. AC. IA. 2.2.3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA. RM. Se pesó 5 g de grano de cada muestra (para el caso de la coronta. FA. fue de 0,2 g) y se colocó a cada una de ellas en su respectivo. DE. matraz Erlenmeyer de 250 mL, se agregó 100 mL de agua. CA. destilada, procediéndose a calentar a 70 °C por 1,5 horas,. IO. TE. posteriormente se dejó enfriar, se filtró y se colocó el producto. BI BL. filtrado en fiolas de 100 mL y se enrasó con agua destilada; de cada solución se tomó 3 mL y se filtró haciendo uso de filtros jeringa de celulosa regenerada de 25 mm de diámetro y 0,2 µm de poro; colocándose en viales ambar de 1,5 mL 11.. 2.2.4. DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACION DE CIANIDINA 3-GLUCÓSIDO ESTÁNDAR Preparados los estándares de 5, 10, 15, 20 y 25 µg/mL de Cianidina 3-glucósido, se los evaluó por triplicado empleándose 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, utilizando un detector UV-Visible con una columna Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente. IC A. lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de. UI M. una elución isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente. Q. una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8. BI. O. minutos; leyéndose a una longitud de onda de 520 nm, con una. Y. velocidad de flujo de 1,2 mL/min., se inyectó una muestra de 10. AC. IA. µL, a una temperatura de 30 °C. . Obtenidos los. los valores de las áreas de picos. RM. cromatogramas, se tomó. 11. FA. correspondientes a cada concentración de solución estándar de. DE. Cianidina 3-glucosido para formar el gráfico de dispersión. CA. utilizando el programa Microsoft Excel, obteniéndose. la. IO. TE. ecuación lineal.. BI BL. 2.2.5. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACION DE CIANIDINA 3-GLUCOSIDO EN EL GRANO y CORONTA DE Zea mays L. “MAIZ MORADO” Preparadas las muestras se procedió a analizarlas por triplicado mediante un cromatógrafo Agilent 1100 con arreglo de diodos, se. utilizó. un. detector. UV-Visible. con. una. columna. Octadecilsilano (C18) de 150 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior; como fase móvil se empleó una solución A. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (HCOOH/H2O/MeOH proporción 1:4:5) y una solución B (HCOOH/H2O proporción 1:9), con un tiempo de recorrido de 20 minutos, en una gradiente lineal de 10% de A hasta 73% de A por 10 minutos, seguida de una elusión isocrática (73% de A) por 2 minutos y finalmente una gradiente lineal de 73 % de A hasta 10% de A por 8 minutos; leyéndose a una longitud de. IC A. onda de 520 nm, con una velocidad de flujo de 1,2 mL/min., se 11. .. UI M. inyectó una muestra de 10 µL, a una temperatura de 30 °C. Q. Obtenidos los cromatogramas, se tomó los valores de las áreas. BI. O. de los picos correspondientes a Cianidina 3-glucósido y se. Y. procedió a resolver la ecuación de la recta para obtener la. RM. AC. IA. concentración de cada muestra.. DE. FA. 2.2.6. ANÁLISIS ESTADÍSTICO. CA. Mediante el análisis de varianza (ANOVA) de un factor se. TE. determinó si entre las concentraciones de Cianidina 3-glucósido. BI BL. IO. de diferentes muestras de Zea mays L. “maíz morado” con respecto a la muestra Línea 9, procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria, existe diferencia significativa, tanto en grano como en corontas 14.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. CUADRO Nº 1: Concentración de Cianidina 3-glucósido en grano de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación. UI M. IC A. Agraria, expresada en mg /100 g de muestra.. CONCENTRACIÓN. O. Q. MUESTRA. 48,36. Y. BI. SIN FERTILIZAR. 41,95. RM. AC. IA. FERTILIZADO. 95,63. FA. SINTETICO R. CA. DE. SINTETICO AMPLIO. LINEA 9. 147,57. CRUCE 1(S2-21-1 X S2-1). 74,31. CRUCE 2(S2-21-1 X S2-14-2). 29,21. TE IO BI BL. 89,25. Fuente: datos obtenidos del desarrollo de la ecuación de la recta con las áreas de los picos de los cromatogramas de las muestras.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 160. A UI. M. IC. 120. BI. O. Q. 100. AC IA. Y. 80 60. FA RM. mg/100g DE CIANIDINA 3 - GLUCÓSIDO. 140. 40. FERTILIZADO. SINTETICO R. SINTETICO AMPLIO. LINEA 9. CRUCE 1. CRUCE 2. MUESTRAS. BI B. LI O. 0 SIN FERTILIZAR. TE CA. DE. 20. GRAFICO Nº 1: Concentración de Cianidina 3-glucósido en grano de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria, expresada en mg /100 g de muestra.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CUADRO Nº 2: Concentración de Cianidina 3-glucósido en coronta de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria, expresada en mg / 100 g de muestra. CONCENTRACIÓN). SIN FERTILIZAR. 409,61. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. MUESTRA. 817,95. RM. AC. IA. FERTILIZADO. 1150,11. DE. FA. SINTETICO R. 3083,82. BI BL. IO. TE. CA. SINTETICO AMPLIO. LINEA 9. 1528,64. Fuente: datos obtenidos del desarrollo de la ecuación de la recta con las áreas de los picos de los cromatogramas de las muestras.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M. IC. A. 3000. O. Q. UI. 2500. Y. BI. 2000. AC IA. 1500 1000. FA RM. mg/100g DE CIANIDINA 3 - GLUCÓSIDO. 3500. FERTILIZADO. SINTETICO R. SINTETICO AMPLIO. LINEA 9. MUESTRAS. BI B. LI O. 0 SIN FERTILIZAR. TE CA. DE. 500. GRAFICO Nº 2: Concentración de Cianidina 3-glucósido en coronta de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria expresados en mg/ 100 g de muestra.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. F. Valor crítico para F. Probabilidad. p. Significancia. SINTETICO AMPLIO. 1359,008333. CRUCE 2. 22572,025080. SIN FERTILIZAR. 4681,855759. 7,708647. 0,00000273. FERTILIZADO. 5471,275674. 0,00000020. Si es significativo. CRUCE 1. 2369,053403. 0,00000106. Si es significativo. SINTETICO R. 1305,124807. 0,00000350. Si es significativo. O. Q. GRUPOS. FA RM. UI. M. IC. A. CUADRO Nº 3: Análisis de Varianza (ANOVA) de un factor de las muestras de grano de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria respecto a la muestra Línea 9. Si es significativo. 0,00000001. Si es significativo P <0,05. TE CA. DE. AC IA. Y. BI. 0,00000323. Si es significativo. BI B. LI O. Fuente: datos obtenidos del desarrollo de la ecuación de la recta con las áreas de los picos de los cromatogramas de las muestras.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Valor crítico para F. SINTETICO AMPLIO. 719,287918. SIN FERTILIZAR. 4926,375625. FERTILIZADO. 263,026165. SINTETICO R. 544,377903. Probabilidad. M. F. p. Significancia. Q. UI. GRUPOS. IC. A. CUADRO Nº 4: Análisis de Varianza (ANOVA) de un factor de las muestras de coronta de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria respecto a la muestra Línea 9. Si es significativo. FA RM. Y. AC IA. 7,708647. BI. O. 0,0000114 0,0000002. P<0,05. Si es significativo. 0,0000845. Si es significativo. 0,0000200. Si es significativo. BI B. LI O. TE CA. DE. Fuente: datos obtenidos del desarrollo de la ecuación de la recta con las áreas de los picos de los cromatogramas de las muestras.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSION. En el cuadro N°1 y gráfico N°1, se muestran las concentraciones de Cianidina 3glucósido en granos de maíz morado, en donde se evidencia que la muestra que presentó la mayor concentración fue Línea 9 con 147,57 mg por cada 100g de. IC A. muestra, mientras que Cruce 2 con 29,21 mg por cada 100g de muestra presentó. UI M. la menor concentración. Salinas Y. et al. (2005), evaluaron cuatro variedades de. O. y 250,8 mg por cada 100g de grano. BI. presentaron valores de 259,4. Q. maíz morado mediante HPLC, siendo las variedades Peruano y Arrocillo las que. Y. respectivamente, que en comparación con los datos obtenidos en las muestras de. RM. AC. IA. grano del presente estudio, representan valores superiores 13 ,6.. FA. En el cuadro N°2 y gráfico N°2, se muestran las concentraciones de Cianidina 3-. DE. glucósido en muestras de coronta de maíz morado, en donde se evidencia que la. TE. CA. muestra que presentó la mayor concentración fue Sintético Amplio con 3083,82. IO. mg por cada100g de muestra, mientras que sin fertilizar presentó la menor. BI BL. concentración con 409,61 por cada100g de muestra; que en comparación con el estudio de Jing P. y Giusti M. (2007), en el cual se evaluaron los efectos de las condiciones de extracción incluyendo el tipo de disolvente, temperatura y tiempo de exposición sobre la cantidad de antocianinas y donde se obtuvo cerca de 940 mg por 100 g de coronta empleando el método de pH diferencial y utilizando agua como solvente, la concentración obtenidas en dicho estudio constituyen una concentración similar e incluso menor que las concentraciones encontradas en esta investigación. En otro de los trabajos donde se cuantificó la concentración de 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. antocianinas realizado en la UNMSM por Gorriti et al. en el año 2009, los cuales investigaron las condiciones óptimas de extracción de antocianinas de las corontas del maíz morado también utilizando el método de pH diferencial, se encontraron valores de hasta 4653,4 mg de antocianinas/100 g. muestra. utilizando como solventes una solución hidroalcohólica, lo cual supera a la cantidad encontrada en el presente trabajo ya que se usó una metodología y. UI M. IC A. muestras diferentes 1, 4, 8, 9.. O. Q. Además de lo descrito del cuadro N° 1 y N° 2 se puede deducir que la muestra. BI. Línea 9 presentó la más alta concentración de Cianidina 3-glucósido en el caso del. IA. Y. grano y la muestra Sintético Amplio presentó la más alta concentración de. AC. Cianidina 3-glucósido en el caso de la coronta; así mismo la muestra Sintético R. FA. RM. presentó una de las concentraciones más altas tanto como para grano como para. DE. coronta. Sin embargo, si se toma en cuenta el valor total de Cianidina 3-glucósido. CA. obtenido por cada germoplasma, se puede deducir que Sintético Amplio presenta. TE. la mayor concentración de la antocianina de estudio en comparación con los. BI BL. IO. demás germoplasmas.. No existe un único método para el análisis de antocianinas mediante HPLC, por el contrario, hay una gran variedad de columnas y parámetros que se han utilizado en. la. caracterización. de. antocianinas. que. resulta. en separaciones. equivalentes. Algunos métodos específicos se describen en detalle en muchas investigaciones y hay algunos que describen tendencias generales sin embargo una alta proporción de los métodos tanto como para la identificación, cuantificación y aislamiento utilizan columnas de fase inversa, como la C18 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (Octadecilo silano) que se utilizó en este estudio . Además, los métodos de HPLC tienden a utilizar sistemas en gradiente de los solventes acetonitrilo - agua, controlando también la instrumentación, el pH de la fase móvil y la temperatura de la columna debido a la inestabilidad de las antocianinas; de esta manera el método escogido para la realización del estudio garantiza que la antocianina se mantiene en forma flavilo más estable reduciéndose así las colas en los picos del. IC A. cromatograma (en el medio ácido, el ión flavilo es de color rojo y da un máximo. UI M. de absorción alrededor de 520 nm, lo que evita la interferencia de otros. BI. O. Q. flavonoides que pueden estar presentes en el extracto de la planta).. IA. Y. En la cromatografía en fase reversa, el tiempo de retención disminuye con el. AC. aumento de la polaridad, que corresponde a un número creciente de grupos. RM. hidroxilo en el ión flavilo, por esto se justifica el orden decreciente de elución de. FA. Delfinidina, Cianidina, Petunidina, Pelargonidina, Peonidina y Malvidina, así. DE. como el hecho de que las antocianinas diglicosiladas. tienen el tiempo de. CA. retención más corto, seguido de antocianinas monoglicosiladas y por último las 2. . Tomando en cuenta estas consideraciones y los. IO. TE. antocianinas aciladas. BI BL. cromatogramas de los antecedentes considerados se identificó el pico de Cianidina 3-glucósido de los cromatogramas de la muestra en base al tiempo de retención de los picos de los estándares, para así poder cuantificar la antocianina en mención; así mismo se pudo identificar mas no cuantificar el pico el otro pigmento que le sigue en concentración que es la Cianidina 3- (6'-malonil) glucósido ya que no se contaba con su estándar.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los métodos más utilizados para comparaciones múltiples quedan comprendidos en la categoría general de análisis de la varianza, más conocido como ANOVA, el cual detecta diferencias entre medias poblacionales mediante comparación de varianzas, diferencia significativa que se determinó entre las concentraciones de muestra y coronta (Ver Anexo 4).. diferencia. IC A. En el análisis estadístico del cuadro N°3 se evidenció que existe. UI M. significativa entre el germoplasma madre con cada una de las muestras de grano ,. Q. ya que se obtuvieron valores de “F” mayores que el valor “F” crítico 7,708647 y. BI. O. valores de “p” menores que 0,05; mientras que en el análisis estadístico del. IA. Y. cuadro N° 4 se evidenció que existe diferencia significativa entre el germoplasma. AC. madre con cada una de las muestras de coronta ya que se obtuvieron valores de. RM. “F” mayor que el valor “F” crítico y valores de “p” menores que 0,05; lo que al. FA. final nos permitió deducir que aquellas muestras que obtuvieron una mayor. DE. concentración de Cianidina 3-glucósido, realmente constituyen un mejoramiento. IO. TE. CA. de su calidad, por lo menos en cuanto a coloración.. BI BL. Por todo esto la cuantificación de metabolitos secundarios en productos naturales mediante cromatografía liquida de alta resolución constituye una herramienta útil en el análisis de las variedades de maíz morado proporcionadas por el INIA, para de esta manera lograr su mejoramiento.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. 1. La concentración de Cianidina 3-glucósido por cada 100 g de grano de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria cuantificado por cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) fue de 48,36 mg para la muestra denominada Sin. IC A. Fertilizar, 41,95 mg para la muestra denominada Fertilizado, 95,63. UI M. mg para la muestra denominada Sintético R, 89,25 mg para la muestra denominada Sintético Amplio, 147,57 mg para la muestra. BI. O. Q. denominada Línea 9, 74,31mg para la muestra denominada Cruce 1. concentración de Cianidina 3-glucósido por cada 100 g de. RM. 2. La. AC. IA. Y. y 29,21 mg para la muestra denominada Cruce 2.. FA. coronta de Zea mays L. “maíz morado” procedente del Instituto. DE. Nacional de Innovación Agraria cuantificado por cromatografía. CA. liquida de alta resolución (HPLC) fue de 409,61 mg para la muestra. TE. denominada Sin Fertilizar, 817,95 mg para la muestra denominada. BI BL. IO. Fertilizado, 1150,11 mg para la muestra denominada Sintético R, 3083,82 mg para la muestra denominada Sintético Amplio y 1528,64 mg para la muestra denominada Línea 9.. 3. Existe diferencia significativa entre las concentraciones de Cianidina 3-glucósido de diferentes muestras de Zea mays L. “maíz morado” con respecto a la muestra Línea 9, procedente del Instituto Nacional de Innovación Agraria tanto en grano como en coronta. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. Balarezo C, Silva K. Diseño y estandarización de una técnica para la extracción de antocianinas del maíz morado en Cajamarca. Tesis (Químico Farmacéutico). Cajamarca, UPAGU.2009. 2. Cara R, Qingli W, and James E. Recent advances in anthocyanin analysis. IC A. and characterization. Curr Anal Chem. 4(2): 75–101, Abril 2008.. UI M. 3. Cuevas E, Antezana A y Winterhalter P. Análisis y caracterización de. O. Q. antocianinas en diferentes variedades de maíz (Zea mays L.) Boliviano.. Y. BI. Universidad Mayor San Simón Cochabamba. Bolivia 2008. Disponible en: [Fecha. IA. http://educon.javeriana.edu.co/lagrotech/images/elyana_cuevas.pdf. RM. AC. de acceso: 10 de Febrero del 2011].. FA. 4. Gorriti A. Extracción de antocianinas de las corontas de Zea mays L. “maíz. DE. morado”. Ciencia e Investigación; 12(2): 64-74, Abril 2009. Disponible en. CA. http://www.unmsm.edu.pe/farmacia/documentos/CIENCIA%20E%20INVE. IO. TE. S.%202009-2.pdf [Fecha de acceso: 03 Marzo 2011]. BI BL. 5. Gould K, Davies K., Winefiled C. Anthocyanins: Biosynthesis, Functions and Applications, Ed Springer, 1ra ed. 2009, USA. 6. Hiromitsu A, Noriko K., Yoshiaki K. Anthocyanins isolated from purple corn (Zea mays L.) Foods & Food Ingred J Jpn 199:41-45. Setiembre 2002. 7. Investigacion en recursos genéticos. Instituto Nacional de Innovacion Agraria (INIA). Disponible en: http://www.inia.gob.pe/genetica/default.asp. [Fecha de acceso: 02 Marzo 2011].. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 8. Jing P, Giusti M. Effects of extraction conditions on improving the yield and quality of an anthocyanin-rich purple corn (Zea mays L.) color extract. Journal of food science 72(7):363-368, Julio 2007. 9. Jing P, Noriega V, Schwartz S. Giusti M. Effects of growing conditions on purple corncob (Zea mays L.) Anthocyanins. J. Agric. Food Chem. 2007, 55, 8625–8629. Mayo 2007. IC A. 10. Qyvind M, Kenneth R. Flavonoids: Chemistry, Biochemistry and. UI M. Applications. Ed Taylor & Francis Group.1ra ed. 2006. USA.. O. Q. 11. Moreno Q. Validación de una metodología analítica para determinar. Y. BI. cianidina 3-glucósido en el maíz morado (Zea mays L.), procedente de la. AC. IA. región Cajamarca por cromatografía liquida de alta resolución (HPLC). Tesis. RM. (Doctorado). Escuela de Posgrado de la Universidad Nacional de Trujillo,. FA. 2010.. DE. 12. Pedreschi R, Cisneros L. Phenolic profiles of andean purple corn (Zea mays. CA. L.). Food Chemistry 100: 956–963. Octubre 2007.. IO. TE. 13. Salinas Y, Rubio D. Extracción y uso de pigmentos del grano de maíz (Zea. BI BL. mays L.). Trabajo de Investigación Chapingo,. México.. Universidad Autónoma Chapingo. 2005. Disponible. en. http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S000406222005000300011&script=sci_a rttext [Fecha de acceso: 02 Marzo 2011].. 14. Skoog D. Fundamentos de Química Analítica. Ed. Thompson. 8va ed. 2005. México. Pág 163-170.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 15. Wrolstad R. Handbook of food analytical chemistry pigments, colorants, flavors, components texture and bioactive food. Ed. John Wilcy & Sons.1ra. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ed. 2000.USA.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(33) BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Y. ANEXOS. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. VII.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 01. 5. M. 1. PROMEDIO ÁREA PICO (mUA*s). UI. CONCENTRACIÓN (ug/ml). 54,86547. 15. 164,10206. 20. 210,87417. 25. 269,68740. TE CA BI B. LI O. 4. 109,70430. DE. 2. 3. 10. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. NIVEL. IC. A. Linealidad de las concentraciones en µg/mL de Cianidina 3-glucósido. 5. Fuente: datos obtenidos del desarrollo de la ecuación de la recta con las áreas de los picos de los cromatogramas de las soluciones estándar.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 02. IC. A. Curva de calibración de estándar de Cianidina 3-glucósido. Q. UI. M. CURVA DE CALIBRACIÓN DE CIANIDINA 3GLUCÓSIDO. O. 300. BI. y = 10.616x + 2.6026 R² = 0.9991. Y AC IA FA RM. 200 150 100. DE. ÁREA PICO (mUA*s). 250. 0. 5. BI B. 0. LI O. TE CA. 50. 10. 15. 20. 25. 30. CONCENTRACIÓN (µg/mL). Fuente: datos obtenidos del desarrollo de la ecuación de la recta con las áreas de los picos de los cromatogramas de las soluciones estándar.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 03. ÁREA PICO (mUA*s). 1. 246,24533. 22,9505. 2,2951. 45,9010. 0,0459. 2. 266,12344. 24,8230. Q. 49,6460. 0,0496. 3. 265,47952. 24,7623. 2,4762. 49,5247. 0,0495. 4. 88,42519. 8,0843. 0,8084. 404,2134. 0,4042. CORONTA 5. 88,81002. 8,1205. 0,8121. 406,0259. 0,4060. 6. 91,48080. 8,3721. 0,8372. 418,6049. 0,4186. 7. 213,95663. 19,9090. 39,8180. 0,0398. 8. 236,05202. 21,9903. 2,1990. 43,9807. 0,0440. 9. 225,74318. FA RM. 1,9909. 21,0193. 2,1019. 42,0385. 0,0420. 10. 164,60892. 15,2606. 1,5261. 763,0290. 0,7630. CORONTA 11. 170,87111. 15,8505. 1,5850. 792,5231. 0,7925. 12. 193,32997. 17,9660. 1,7966. 898,3015. 0,8983. 13. 497,89362. 46,6551. 4,6655. 93,3103. 0,0933. 14. 513,16809. 48,0940. 4,8094. 96,1879. 0,0962. 15. 519,62769. 48,7024. 4,8702. 97,4049. 0,0974. 16. 249,05769. 23,2154. 2,3215. 1160,7719. 1,1608. CORONTA 17. 245,27858. 22,8595. 2,2859. 1142,9728. 1,1430. 18. 246,04810. 22,9319. 2,2932. 1146,5971. 1,1466. GRANO FERTILIZADO. GRANO SINTETICO R. IC. M. CANTIDAD ENCONTRADA g/100g. UI. CANTIDAD ENCONTRADA mg/100g. Y. BI. O. 2,4823. AC IA. DE. SIN FERTILIZAR. TE CA. GRANO. LI O. MUESTRA. CANTIDAD RECUPERADA mg/100g. A. Nº. CANTIDAD RECUPERADA ug/ml. BI B. Concentración de Cianidina 3-glucósido en grano y coronta de maíz morado. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. PROMEDIO DE CANTIDAD ENCONTRADA g/100g 0,0484. 0,4096. 0,0419. 0,8180. 0,0956. 1,1501.
(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 464,66736. 43,5253. 4,3525. 87,0506. 0,0871. 20. 489,86871. 45,8992. 4,5899. 91,7984. 0,0918. 21. 474,43921. 44,4458. 4,4446. 88,8916. 0,0889. 22. 636,29163. 59,6919. 5,9692. 2984,5942. 2,9846. CORONTA 23. 658,39105. 61,7736. 6,1774. 3088,6796. 3,0887. 24. 677,39313. 63,5635. 6,3564. 3178,1769. 3,1782. 25. 779,19391. 73,1529. 7,3153. 146,3058. 0,1463. 26. 793,30316. 74,4820. 7,4482. 148,9639. 0,1490. 27. 785,21863. 73,7204. 7,3720. 147,4408. 0,1474. 28. 322,28690. 30,1134. 3,0113. 1505,6721. 1,5057. CORONTA 29. 333,31216. 31,1520. 3,1152. 1557,5997. 1,5576. 30. 325,88876. 30,4527. 3,0453. 1522,6364. 1,5226. 31. 386,62692. 36,1741. 3,6174. 72,3482. 0,0723. 32. 394,55396. 36,9208. 3,6921. 73,8416. 0,0738. 33. 410,00464. 38,3762. 3,8376. 76,7525. 0,0768. 34. 155,86047. 14,4365. 1,4436. 28,8730. 0,0289. 35. 158,46115. 14,6815. 1,4681. 29,3630. 0,0294. 36. 158,55838. 14,6906. 1,4691. 29,3813. 0,0294. CRUCE 1(S2-21-1 X S2-1). CRUCE 2(S2-21-1X S2-142. GRANO. GRANO. IC. M. UI. Q O BI Y. AC IA. FA RM. LINEA 9. DE. GRANO. TE CA. SINTETICO AMPLIO. LI O. GRANO. A. 19. 0,0892. 3,0838. 0,1476. 1,5286. 0,0743. 0,0292. estándar.. BI B. Fuente: datos obtenidos del desarrollo de la ecuación de la recta con las áreas de los picos de los cromatogramas de las soluciones. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Q. UI. M. IC. ANÁLISIS ESTADÍSTICO. A. ANEXO 04. BI. O. Análisis de varianza (ANOVA) de grano – coronta:. GRANO 48.36 41.95 95.63 89.25 147.57 422.76. FV Grano-Coronta Error Experimental Total. GL 1 8. SC CM 4313034.87 4313034.87 4241118.98 530139.87. 9. 8554153.85. AC IA FA RM DE. TE CA. 7412.89. F 8.14. BI B. LI O. CORONTA 409.61 817.95 1150.11 3083.82 1528.64 6990.13. Y. Nº 1 2 3 4 5 Suma. p P = 0.0214 < 0.05 Significativo. 950461.54. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Análisis de varianza (Anova) de un factor Linea 9-Sin Fertilizar (grano). IC. A. RESUMEN Cuenta. Suma. Promedio. Varianza. 3. 0.145071682. 0.048357227. 4.52831E-06. LINEA 9 (GRANO). 3. 0.442710607. 0.147570202. 1.77894E-06. Grados de libertad. Promedio de los cuadrados 0.014764822. 0.014764822. 1. 1.26145E-05. 4. Total. 0.014777436. 5. DE. F. Probabilidad. Valor crítico para F. 4681.855759 2.73336E-07 7.708647421. 3.15363E-06. BI B. LI O. Entre grupos Dentro de los grupos. TE CA. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las Suma de variaciones cuadrados. FA RM. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. Grupos SIN FERTILIZAR (GRANO). 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Análisis de varianza (Anova) de un factor Linea 9-Fertilizado (grano) RESUMEN Cuenta. Suma. Promedio. Varianza. 3. 0.125837232. 0.041945744. 4.33839E-06. LINEA 9 (GRANO). 3. 0.442710607. 0.147570202. 1.77894E-06. Grados de libertad. Promedio de los cuadrados. Dentro de los grupos. 1.22347E-05. 4. Total. 0.016747024. 5. FA RM. DE. 1. 0.016734789. Valor crítico para F. 5471.275674. 2.00191E-07. 7.708647421. TE CA. 0.016734789. Probabilidad. 3.05866E-06. BI B. Entre grupos. F. LI O. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las Suma de variaciones cuadrados. AC IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Grupos FERTILIZADO (GRANO). 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IC. A. Análisis de varianza (Anova) de un factor Linea 9- Cruce 1 (grano). UI. M. RESUMEN Grupos. Cuenta. Suma. LINEA 9 (GRANO) CRUCE 1(S2-21-1 X S2-1) (GRANO). 3. 0.442710607. 0.147570202. 3. 0.222942298. 0.074314099. Dentro de los grupos. 1.35914E-05. Total. 0.008063276. Q O. BI. Y. AC IA. 1.77894E-06 5.01676E-06. FA RM DE. TE CA. 0.008049685. Varianza. 1 4. Promedio de los cuadrados. F. Probabilidad. 0.008049685. 2369.053403. 1.06606E-06. 3.39785E-06. BI B. Entre grupos. Grados de libertad. LI O. ANÁLISIS DE VARIANZA Suma de Origen de las variaciones cuadrados. Promedio. 5. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. Valor crítico para F 7.708647421.
(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IC. A. Análisis de varianza (Anova) de un factor Linea 9-Sintetico R (grano). 3. 0,442710607. 0,147570202. 0,004058397. 4,42123E-06 1,77894E-06. 1 4 5. FA RM. Promedio de los cuadrados 0,004045997 3,10008E-06. F. Probabilidad. Valor crítico para F. 1305,124807. 3,50455E-06. 7,708647422. BI B. LI O. Total. Grados de libertad. DE. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las Suma de variaciones cuadrados Entre grupos 0,004045997 Dentro de los grupos 1,24003E-05. UI. 0,095634363. Q. 0,28690309. O. 3. Varianza. BI. Promedio. Y. Suma. AC IA. Cuenta. TE CA. Grupos SINTETICO R (GRANO) LINEA 9 (GRANO). M. RESUMEN. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI Q. Promedio 0,147570202. Varianza 1,77894E-06. 3. 0,087617219. 0,02920574. 8,3122E-08. 0,021018943. BI. Y. AC IA. FA RM. Total. Grados de libertad. Promedio de los cuadrados 1 0,021015219 4 9,31029E-07. DE. Suma de cuadrados 0,021015219 3,72412E-06. F 22572,02508. Probabilidad 1,17729E-08. 5. BI B. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos. O. 3. Suma 0,442710607. TE CA. Cuenta. LI O. RESUMEN Grupos LINEA 9 (GRANO) CRUCE 2(S2-21-1X S214-2) (GRANO). M. IC. A. Análisis de varianza (Anova) Linea 9-Cruce 2 (grano). 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. Valor crítico para F 7,708647422.
(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IC. A. Análisis de varianza (Anova) Linea 9-Sintético Amplio (grano). Cuenta. Suma. Promedio. LINEA 9 (GRANO) SINTETICO AMPLIO (GRANO). 3. 0.442710607. 0.147570202. 1.77894E-06. 3. 0.267740671. 0.08924689. 5.73009E-06. ANÁLISIS DE VARIANZA Suma de Origen de las variaciones cuadrados. Grados de libertad. Varianza. Total. 0.005117431. F. 1. 0.005102413. 1359.008333. 4. 3.75451E-06. DE. 1.5018E-05. Promedio de los cuadrados. TE CA. Dentro de los grupos. LI O. 0.005102413. BI B. Entre grupos. FA RM. AC IA. Y. BI. Q. Grupos. O. UI. M. RESUMEN. 5. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. Valor crítico para Probabilidad F 3.23281E-06. 7.708647421.
(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IC. Promedio. Varianza. M. Suma. 3,083816896 1,528636052. 0,009386309 0,000701115. O. 9,251450688 4,585908157. BI. 3 3. Q. UI. Cuenta. 3,648056032. Grados de libertad. 5. FA RM. Total. 1 4. Promedio de los cuadrados 3,627881183 0,005043712. DE. Suma de cuadrados 3,627881183 0,020174848. F 719,2879184. Probabilidad 1,14903E-05. BI B. LI O. TE CA. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos. AC IA. Y. RESUMEN Grupos SINTETICO AMPLIO (CORONTA) LINEA 9 (CORONTA). A. Análisis de varianza (Anova) Linea 9-Sintetico amplio (coronta). 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. Valor crítico para F 7,708647421.
(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Análisis de varianza (Anova) Linea 9-Sin fertilizar (coronta). 1,528636052 0,000701115. 3 1,228844245. 0,409614748 6,14389E-05. IC. 3 4,585908157. A. Varianza. M. Promedio. UI. Suma. Q. Cuenta. 1,879838127. 4. 0,000381277. FA RM. AC IA. Promedio de los Valor crítico cuadrados F Probabilidad para F 1 1,878313019 4926,375625 2,46893E-07 7,708647421. 5. BI B. LI O. TE CA. Total. Grados de libertad. DE. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las Suma de variaciones cuadrados Entre grupos 1,878313019 Dentro de los grupos 0,001525107. Y. BI. O. RESUMEN Grupos LINEA 9 (CORONTA) SIN FERTILIZAR (CORONTA). 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IC. A. Análisis de varianza (Anova) Linea 9-Fertilizado (coronta). Grupos FERTILIZADO (CORONTA). Cuenta. Suma. Promedio. 3. 2.453853617. 0.817951206. LINEA 9 (CORONTA). 3. 4.585908157. 1.528636052 0.000701115. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las Suma de variaciones cuadrados. Grados de libertad. O. Q. Varianza. UI. M. RESUMEN. FA RM. AC IA. Y. BI. 0.0050596. 0.757609427. 1. 0.011521431. 4. Total. 0.769130858. F. Probabilidad. 0.757609427 263.0261657 8.45717E-05. TE CA. Entre grupos Dentro de los grupos. LI O. DE. Promedio de los cuadrados. 0.002880358. BI B. 5. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. Valor crítico para F 7.708647421.
(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Análisis de varianza (Anova) Linea 9-Sintético R (coronta). Suma. 3. 3.450341795. LINEA 9 (CORONTA). 3. 4.585908157. ANÁLISIS DE VARIANZA Origen de las Suma de variaciones cuadrados. Promedio. Varianza. 1.150113932. 8.84782E-05. AC IA. Cuenta. FA RM. Grupos SINTETICO R (CORONTA). Y. RESUMEN. 0.000701115. Grados de libertad. Promedio de los cuadrados. F. Probabilidad. Valor crítico para F. 1. 0.214918494. 544.3779037. 2.00009E-05. 7.708647421. 4. 0.000394797. Dentro de los grupos. 0.001579186. Total. 0.21649768. LI O. 0.214918494. BI B. Entre grupos. TE CA. DE. 1.528636052. 5. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 05 PROCEDIMIENTO. BI. O. Q. UI M. IC A. 1. Toma de muestra. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. 2. Preparación de los estándares. Estándar Cianidina 3-glucósido. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. 3. Preparación de la muestra. BI BL. IO. TE. CA. 4. Determinación de la curva de calibración y determinación de concentración de cianidina 3-glucósido en las muestras. Tiempo (min) 0-10. Fase A. Fase B. 10-73. 90-27. 10-12. 73. 27. 12-20. 73-10. 27-90. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(51) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ANEXO 06. Fuente: HANDBOOK OF FOOD ANALYTICAL CHEMISTRY (Página 29). 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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