Efecto in vitro del extracto del fruto de Bunchosia armeniaca sobre Staphylococcus aureus

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. AC I. A. TESIS I. RM. Efecto in vitro del extracto del fruto de Bunchosia armeniaca sobre. FA. Staphylococcus aureus. DE. AUTORES:. TE CA. MEDINA ESPINOZA, Tania Magaly. BI BL IO. VILLANUEVA SEDANO, Lucy Carmen. ASESOR:. DR. CASTILLO SAAVEDRA, Ericson Felix. Trujillo - Perú 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A mi madre Guadalupe Por su amor, dedicación, coraje y valentía, por creer en mí en todo momento, aconsejándome y un. ejemplo. de. vida. A. siendo. M IC. apoyándome,. A. Y. A mis abuelitos Rosa y Manuel. BI. O. Q. UI. motivándome a crecer cada día más.. AC I. Por el apoyo, cariño y consejos que me brindan y por. TE CA. DE. FA. del progreso.. RM. preocuparse siempre por mi señalándome el camino. BI BL IO. A mis hermanos Erick y Alonsso Por todo el cariño de amistad y hermandad que existen en nosotros, virtudes que nos enseñan a trabajar en grupo en los diferentes ámbitos de nuestra vida.. Tania. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mi madre Yolanda Por haberme apoyado en todo momento, por sus consejos, sus valores por la motivación constante que me ha permitido ser una persona de bien, pero. M IC. A. más que nada, por su amor.. Q. UI. A mi padre Pedro. BI. O. Por los ejemplos de perseverancia y constancia que. A. Y. lo caracterizan y que me ha infundado siempre, por. DE. FA. RM. AC I. el valor mostrado para salir adelante y por su amor.. TE CA. A mis hermanos Lina y Robert. BI BL IO. Por todo el apoyo y amor que existen en nosotros, virtudes que nos enseñan a trabajar en grupo en los diferentes ámbitos de nuestra vida.. Lucy. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A Dios Por habernos acompañado y guiado a lo lardo de nuestra carrera, por ser nuestra fortaleza en los momentos de debilidad y brindarnos una vida llena de. UI. M IC. A. aprendizajes, experiencias y sobre todo felicidad.. O. Q. Al Dr. Casanova por creer en nosotras, y habernos. Y. BI. brindado la oportunidad de desarrollar nuestra tesis. AC I. A. profesional en las instalaciones del Laboratorio de la. RM. Municipalidad por todo el apoyo y facilidades que nos. FA. fueron otorgadas; por darnos la oportunidad de crecer. BI BL IO. TE CA. DE. profesionalmente y aprender cosas nuevas.. A nuestro docente y asesor, Dr Ericson Castillo por ser un excelente profesional, por sembrar en nosotros el amor a nuestra profesión, por confiar en nuestras capacidades y por acompañarnos y guiarnos durante todo el proceso de este trabajo de investigación.. Tania y Lucy. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores Miembros del Jurado Dictaminador Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de grados y títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, nos es grato someter. A. a vuestra consideración y elevado criterio profesional, el informe de Tesis I titulado. M IC. “Efecto in vitro del extracto del fruto de Bunchosia armeniaca sobre Staphylococcus. Q. UI. aureus”. BI. O. Dejamos a vuestra consideración señores Miembros del Jurado, a respectiva calificación. Trujillo, junio del 2017. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. del presente informe.. Medina Espinoza Tania Magaly. Villanueva Sedano Lucy Carmen. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. Dra. Carmen Marín Tello. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Presidente. RM. Dr. Francisco Abanto Zamora. BI BL IO. TE CA. DE. FA. Miembro. Dr. Ericson Castillo Saavedra Miembro. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto in vitro del extracto de Bunchosia armeniaca sobre cepas de Staphylococcus aureus. La cepa utilizada fue reactivada en caldo BHI y se incubó durante 18 horas a 37 °C. Luego se tomó una asada de la bacteria y se ajustó con solución fisiológica al patrón de turbidez de Mac Farland N° 0,5 (108 UFC/mL); para la. M IC. A. realización del ensayo se procedió a determinar la concentración mínima bactericida (CMB) y. UI. la concentración mínima inhibitoria (CMI). Los resultados obtenidos muestran una. O. Q. concentración mínima bactericida a una concentración del extracto al 40% en la cual se. BI. evidenció un halo promedio de 12,3 mm de diámetro y se evidenció un mayor efecto inhibitorio. A. Y. a dicha concentración del extracto de Bunchosia armeniaca sobre cepas de Staphylococcus. AC I. aureus, por presentar una menor turbidez del medio que contenía una concentración de 0,25. FA. RM. mg/mL.. BI BL IO. TE CA. DE. Palabras clave: Bunchosia armeniaca, Staphylococcus aureus, extracto, efecto, in vitro.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The present research aimed to evaluate the in vitro effect of Bunchosia armeniaca extract on Staphylococcus aureus strains. The strain was reactivated in BHI broth and incubated for 18 hours at 37 ° C. A loop of the bacteria was then taken and adjusted with the physiological solution to the turbidity pattern of Mac Farland No. 0.5 (108 UFC/ml); the minimum bactericidal. M IC. A. concentration (MBC) and the minimum inhibitory concentration (MIC) were determined for the. UI. test. The results obtained show a minimum bactericidal concentration at a concentration of the. O. Q. extract at 40% in which an average halo of 12.3 mm in diameter was evidenced and a greater. BI. inhibitory effect to that concentration of the extract of Bunchosia armeniaca on strains of. A. Y. Staphylococcus aureus, because of a lower turbidity of the medium containing a concentration. RM. AC I. of 0.25 mg / mL. BI BL IO. TE CA. DE. FA. Key words: Bunchosia armeniaca, Staphylococcus aureus, extract, effect, in vitro. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. RESUMEN ............................................................................................................................ vi. M IC. A. ABSTRACT ......................................................................................................................... vii. UI. I. INTRODUCCIÓN .............................................................................................................. 1. BI. O. Q. II.- MATERIALES Y MÉTODO ........................................................................................... 8. A. Y. III. RESULTADOS .............................................................................................................. 12. RM. AC I. IV. DISCUSIÓN ................................................................................................................... 15. FA. V. CONCLUSIONES ........................................................................................................... 19. TE CA. DE. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................... 20. BI BL IO. ANEXOS .............................................................................................................................. 24. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN En los últimos años, las enfermedades infecciosas de etiología bacteriana son una de las mayores causas de muerte a nivel mundial. La resistencia a antibióticos, inicialmente relacionada a países en vía de desarrollo, hoy en día, se ha convertido en un problema de salud pública en muchas partes del mundo. Las consecuencias de estas infecciones son. M IC. A. alteraciones en la respuesta al tratamiento, períodos más largos de infectividad y rotación a. UI. drogas de segunda o tercera línea, que son más caras y más tóxicas. Esto genera una difícil. O. Q. visualización económica relacionada a los costos con el incremento de morbilidad y. Y. BI. mortalidad de los pacientes 1,2,3,4.. AC I. A. Las infecciones cutáneas bacterianas constituyen un amplio grupo de cuadros clínicos. RM. de diversa etiología, patogenia y pronóstico, localizados en la epidermis, dermis, tejido. FA. celular subcutáneo, incluyendo entre ellas a los que afectan los distintos anexos cutáneos.. DE. Son afecciones relativamente frecuentes en la práctica clínica, representan el 17% de todas. TE CA. las consultas pediátricas, afectando a pacientes de todas las edades, en especial niños y pacientes con factores de riesgo asociados. La severidad de cuadro varía ampliamente desde. BI BL IO. una simple erupción cutánea superficial como el impétigo hasta infecciones profundas y necrotizantes que demandan tratamiento quirúrgico. Los clásicos hallazgos de eritema, dolor y calor a la palpación, asociados frecuentemente a síntomas sistémicos son claves para el diagnóstico clínico, siendo difícil establecer el diagnóstico etiológico 5. Staphylococcus aureus es una de las bacterias que con más frecuencia causa infecciones en todas las edades. En niños, la tasa de infección por este patógeno es aproximadamente de 30 casos por cada 100.000 habitantes. Coloniza la piel y/o fosas nasales 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de las personas sanas y produce una amplia gama de infecciones, desde las más leves como las infecciones superficiales de piel y tejidos blandos, hasta las más graves como neumonía o sepsis. S. aureus pertenece al género Staphylococcus, de la familia Micrococcaceae. Es un coco gram positivo, no móvil, aerobio y anaerobio facultativo, no formador de esporas y generalmente sin cápsula. El nombre del género fue designado por Ognston en 1883 y deriva. A. del griego “sthapyle” (racimo de uvas) por la forma que adoptan las bacterias en las tinciones.. M IC. Es característica la pigmentación dorada de las colonias (aureus, en latín -oro), debido a la. Q. UI. producción de carotenoides durante su crecimiento, crece bien en medios no selectivos. S.. BI. O. aureus es un patógeno con gran capacidad de adquirir diferentes mecanismos de resistencia. A. Y. a antibióticos, como se ha puesto de manifiesto a lo largo de la historia 6.. AC I. Uno de los principales problemas asociados con estas enfermedades es la aparición de. RM. resistencia a los antibióticos de uso común, debido a su abuso e inadecuada utilización,. DE. FA. generando microorganismos multirresistentes causando importantes repercusiones tanto en. TE CA. los pacientes como en los sistemas de salud, así como aparición de brotes epidémicos, elevación en la morbi-mortalidad y en los costos debido al proceso continuo de la resistencia. BI BL IO. bacteriana, que inició con la resistencia a penicilina por S. aureus 7. En los últimos años se ha observado un aumento de la resistencia a múltiples antibióticos, siendo el S. aureus resistente a la metilciclina favorecido principalmente por el uso indiscriminado de antibióticos. Provoca así la diseminación de cepas de S. aureus en los hospitales de todo el mundo, lo que conlleva a uno de los mayores retos terapéuticos en la actualidad para la medicina. S. aureus es uno de los microorganismos que se aísla con mayor frecuencia en las infecciones hospitalarias y comunitarias, además es uno de los patógenos nosocomiales de mayor importancia 7. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Este panorama, ha hecho indispensable, la búsqueda de nuevos agentes antimicrobianos, y las plantas medicinales, constituye la principal fuente para encontrar estos compuestos. Esto debido a que los metabolitos secundarios de las plantas, al ser producto de la selección natural a lo largo de la evolución de las especies, presentan novedosas estructuras químicas, que difícilmente podrían haber sido el resultado de un razonamiento humano por. A. muy creativo que fuere, y sin duda, tienen una gran afinidad por la diana a la cual están. M IC. dirigidos, en contraposición de la menor afinidad que muestran sus contrapartes obtenidos. Q. UI. por la síntesis química. Sin duda, los metabolitos secundarios de las plantas constituyen gran. BI. O. parte del arsenal terapéutico disponible 8,9.. A. Y. Existen diversas familias de plantas, dentro de estas se encuentran la familia. AC I. Malpighiaceae. El género Bunchosia contiene alrededor de 75 especies, todas ellas nativas. RM. de América. En Brasil se encuentra predominantemente en Amazonia, Mata Atlántica y. FA. Pantanal. Bunchosia armeniaca (B. armeniaca) es una planta nativa de los Andes, conocida. TE CA. DE. como "cafezinho", "ciruela" o "falso- Guaraná”. En medicina tradicional, esta planta se ha utilizado en enfermedades endocrinas, infecciosas, inflamatorias, trastornos nutricionales y. BI BL IO. tratamientos de trastornos metabólicos, así como también algún tipo de tratamiento del cáncer 10.. Bunchosia armeniaca en su gama nativa, se encuentra en altitudes de 0 a 2400 m.s.n.m. Se desarrolla a pleno sol en suelos húmedos, fértiles, ricos en materia orgánica con un rango de pH de 6-7,6. Tolera la sombra parcial y es bastante tolerante al frío pero tolerante a la congelación a -2ºC. La pulpa de fruta es dulce y cremosa, es mayormente consumida en fresco y también se utiliza para jaleas, mermeladas, o conservas y bebidas de sabor. La fruta se puede refrigerar y la pulpa se puede congelar 11. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta planta es un arbusto perenne y resistente, llega a medir hasta 5 m de altura, con múltiples troncos. Las hojas son simples, opuestas, ovales u oblongas, de hasta 17 cm de largo y 10 cm de ancho con margen. Las flores son en su mayoría bisexuales, de 12-15 mm de diámetro con 5 pétalos, y el androceo es típicamente con flecos o lacerado. El gineceo consiste en un solo compuesto de pistilo de casi siempre 3, carpelos, 3 estilos de distintos y. A. un ovario superior con 3 lóbulos, cada uno con un solo óvulo pendular y axilar. Los frutos. M IC. en racimos, son bayas indehiscentes, de 2,5 cm de largo, ovoide, elipsoide u obovada, con 2. Q. UI. o 3 juntos de una sola semilla incrustadas en la pulpa, esta pulpa de color rojo o rojo. BI. O. anaranjado 11,12.. A. Y. Aunque la familia Malpighiaceae tiene un gran número de especies, alrededor de 1300,. AC I. sólo el 2% de estos fueron estudiados bajo el aspecto químico. Las especies más estudiadas. RM. de este género son Malpighiae, Marginata y Malpighia glabra (acerola), que fueron. DE. FA. identificados como glicósidos de quercetina, y algunos flavonoides a los que se le han asignado diversos efectos biológicos. Otras especies Banisteropsis caapi, conocido como. .. BI BL IO. 13. TE CA. "cipós da Amazonia", contiene alcaloides β-carbolina que exhiben propiedades alucinógenas. El creciente uso indiscriminado de medicamentos antibacterianos se refleja en el aumento de la resistencia bacteriana hospitalaria contra los medicamentos tradicionales. Este hecho ha llevado a los investigadores a la búsqueda de nuevos compuestos o sustancias con propiedades antibacterianas, incluidas los productos de origen natural 12. Un estudio realizado por Queiroz en el 2013 ha informado de una excelente actividad antibacteriana contra Staphylococcus aureus (S. aureus) y actividad moderada contra. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Escherichia coli (E. coli ) y Pseudomonas aeruginosa ( P. aeruginosa ) en hojas de B. armeniaca. Además, esta planta demostró un efecto antiinflamatorio 13. Por otro lado, en la investigación realizada por Ralalage en el 2016 titulado “Compuestos Bioactivos y Actividad Antioxidante de Bunchosia armeniaca”, se analizó para investigar su disponibilidad fitoquímica utilizando gas espectrofotómetro cromatográfico de. M IC. A. masas. El análisis reveló la presencia de muchos compuestos fenólicos, alcaloides,. UI. importantes ácidos grasos y además de algunos componentes biológicamente activos; el. O. Q. contenido de fenoles totales ha mostrado su profunda posibilidad de actividad captadora de. BI. radicales libres. Por lo tanto, a través de análisis in vitro, el fruto de B. armeniaca puede ser. AC I. A. Y. postulada como una fuente importante de compuestos bioactivos 10.. RM. El extracto etanólico de B. armeniaca contiene mezclas de flavonoides, que son los. FA. principales compuestos que están presentes en este extracto, muestra una acción. DE. antibacteriana contra bacterias gram positivas y negativas. Por otra parte, esta especie. TE CA. muestra una importante acción antiinflamatoria mediante la inhibición de los leucocitos. Estos resultados confirman el uso tradicional de esta planta y mostraron que la mezcla de. BI BL IO. flavonoides es el principal responsable de los efectos antibacterianos y antiinflamatorios atribuidos a Bunchosia armeniaca 13. Los estudios muestran que B. armeniaca tiene efectos antibacterianos y antiinflamatorios significativos y que este se debe, al menos en parte, a la presencia de rutina, isoquercetrina y afzelina en grandes cantidades. Por lo tanto, estos compuestos son potenciales para el desarrollo futuro de intervenciones en el tratamiento de pacientes con trastornos infecciosos e inflamatorios 13.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cada día se hace más difícil el tratamiento antimicrobiano por la capacidad de dicho microrganismo de crear resistencia, tal fenómeno ha sido considerado emergente en todo el mundo. Los fármacos disponibles actualmente, tienen una toxicidad importante, producen recurrencia o causan resistencia, razón por la cual se está procurando descubrir nuevos agentes antimicrobianos más potentes, pero sobre todo seguros 14.. M IC. A. La actividad antibacteriana puede evaluarse con dos métodos básicos: la difusión del. UI. disco y la Concentración mínima inhibitoria (CMI). El método por difusión del disco es. O. Q. cualitativo y permite observar el diámetro del halo de inhibición de crecimiento de las. BI. bacterias en estudio sembradas en el agar con diluciones seriadas. Las bacterias no crecen en. A. Y. la zona de inhibición del agar, donde difunde el antibiótico o el extracto impregnado en el. AC I. disco de papel. Los antibióticos naturales de Bunchosia armeniaca podrían explicar su. RM. actividad antibacteriana. Con el segundo método, se puede evaluar el rango de concentración. DE. FA. para inhibir el crecimiento microbiano que consiste en establecer la menor concentración de un antibiótico capaz de inhibir visiblemente el crecimiento de un microorganismo, esto se. TE CA. puede realizar mediante varias técnicas, una de ellas es la técnica de dilución de agar 15.. BI BL IO. En la actualidad se observa un considerable aumento de resistencia de los microorganismos a múltiples antibióticos, entre ellos el S. aureus es uno de los microorganismos que se aísla con mayor frecuencia en las infecciones hospitalarias y comunitarias, además es uno de los patógenos nosocomiales de mayor importancia. Estos acontecimientos, ha llevado a los profesionales de salud a la búsqueda de nuevos agentes antimicrobianos, y las plantas medicinales, constituye la principal fuente para encontrar estos compuestos. Dentro de la cuales se encuentran las de la familia. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Malpighiaceae que predomina en América y dentro de ellas el género Bunchosia de las cuales estudios realizados indican la presencia de mezclas de flavonoides, la presencia de rutina, isoquercetrina y afzelina en grandes cantidades, a los que se le atribuye sus efectos antibacteriano y antiinflamatorio. En base a esto se busca comprobar el efecto in vitro de todos estos componentes en un extracto etanólico de Bunchosia armeniaca presente en. A. nuestra región por el método de maceración frente al microorganismo, para el desarrollo. M IC. futuro de nuevas formas farmacéuticas que contribuyan en el tratamiento de pacientes con. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. trastornos infecciosos.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.- MATERIALES Y MÉTODO 1. MATERIALES 1.1. Material Biológico:  Material vegetal: 1 kg de fruto de Bunchosia armeniaca recolectadas del distrito de. M IC. A. Simbal. Provincia de Trujillo. Región La Libertad. O. Q. UI.  Material microbiológico: cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923. BI. 2. MÉTODO. AC I. A. Y. 2.1. Recolección de la muestra. RM. Se recolectó 1kg de fruto de Bunchosia armeniaca en forma aleatoria del distrito de Simbal. FA. provincia de Trujillo, departamento de La Libertad, durante el mes de marzo.. TE CA. DE. 2.2. Identificación taxonómica. La especie de Bunchosia armeniaca fue llevada al Herbarium Truxillense de la Universidad. BI BL IO. Nacional de Trujillo, donde se identificó taxonómicamente con el código 59027. 2.3. Preparación del extracto 16,17 Se obtuvo el extracto por maceración de 7 días usando 200 g de fruto fresco y como solvente 500 mL de etanol de 70° GL. Pasado el tiempo de maceración el extracto fue filtrado sobre papel Whatman N°1 y guardado en un frasco de color ámbar y puesto en refrigeración a 10°C; el fruto remanente fue triturado y macerado por 12 horas con el mismo menstruo para. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. agotar la extracción, finalmente el extracto fue reunido y completado a volumen constante de 500 mL en matraz aforado con el solvente. 2.4. Determinación de la concentración mínima bactericida (CMB) 4 Se realizó empleando el método de difusión en discos según Kirby- Bauer. A. Preparación de la muestra. M IC. . Q. UI. Se prepararon tres concentraciones del extracto de Bunchosia armeniaca al 20%, 30% y. BI. O. 40%, se tomaron estas concentraciones en base a previos estudios realizados sobre el mismo. Y. microorganismo en estudio, pero con extractos etanólicos de otras especies las cuales. RM. Reactivación de las cepas. FA. . AC I. A. indicaron mayor efecto antimicrobiano a dichas concentraciones18,19.. DE. El microorganismo fue reactivado en caldo Müller- Hinton y se incubó durante 18 horas a. TE CA. 37°C, luego se tomó una asada del microorganismo y se ajustó con solución salina. . BI BL IO. fisiológica al patrón de turbidez de Mac Farland N° 0,5 (108 UFC/mL) Sembrado. Se colocó en placas Petri 20 mL de agar Müller- Hinton, solidificado el agar, se sembró el microorganismo en la superficie de este, y se hisopó uniformemente, girando cada placa 30 grados por 10 veces aproximadamente. Las placas recién sembradas se colocaron en una estufa a 37°C de temperatura durante 10 minutos.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Aplicación de los discos. Sobre la placa sembrada, se colocó en la superficie del agar inoculado los discos de papel de filtro (6mm de diámetro) previamente impregnados con 0,1 mL de las concentraciones del extracto de Bunchosia armeniaca antes mencionadas y del control negativo (agua estéril). También se colocó el disco estándar de antibiótico de referencia para este. M IC. A. microorganismo en particular (ciprofloxacino 5mg).. Q. UI. Posteriormente, los medios de cultivos inoculados se incubaron a 37°C durante 24 horas,. BI. O. realizándose las lecturas de los halos de inhibición a las 24 horas. Toda la prueba se realizó. A. Y. por tres veces; dichos halos se midieron con ayuda de una regla milimetrada.. RM. AC I. 2.5. Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI). DE. Preparación de la muestra. TE CA. . FA. Método de dilución en caldo Müller Hinton 20. Se prepararon las soluciones al 20%, 30% y 40% del extracto de Bunchosia armeniaca. BI BL IO. disuelta en solución fisiológica estéril, a partir de estas soluciones se prepararon por cada una de ellas por triplicado una batería de tubos de ensayo con soluciones al 0,05mg/mL, 0,075 mg/mL; 0,1mg/mL; 0,25mg/mL, 0,5 mg/mL, 0,75 mg/mL, 1 mg/mL completando a 10 mL con solución fisiológica estéril como solvente.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Preparación de la suspensión del inóculo. El microorganismo fue reactivado en caldo BHI y se incubó durante 18 horas a 37°C, luego se tomó una asada del microorganismo y se ajustó con solución salina fisiológica al patrón de turbidez de Mac Farland N° 0,5 (108 UFC/mL) Enfrentamiento con el microorganismo. M IC. A. . UI. Se utilizaron tubos de ensayo, en los cuales se colocaron 1mL del caldo BHI, luego se. O. Q. añadió 0,1 mL de cada una de las concentraciones de las diluciones del extracto preparadas. AC I. A. de la bacteria y se incubó a 37°C por 24 horas.. Y. BI. anteriormente, posterior a esto en cada tubo de ensayo se colocó 0,1 mL de la suspensión. RM. Después de 24 horas de incubación, los tubos de ensayo se examinaron visualmente y se. FA. consideró la concentración mínima inhibitoria a la menor concentración de la dilución del. DE. extracto a la cual el microorganismo ensayo no presente desarrollo visible.. TE CA. Se empleó como patrón al ciprofloxacino y al agua estéril.. BI BL IO. 2.1 Análisis estadístico 20. Los resultados obtenidos se analizaron aplicando la prueba de ANOVA para hallar la diferencia significativa de la concentración mínima bactericida a diferentes concentraciones del extracto.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A. III. RESULTADOS. M IC. Tabla 1: Análisis de varianza (ANOVA) de la concentración mínima bactericida de. 24.88888889. Dentro de los grupos. 6. 6. FA. DE. 30.88888889. 1. 8. TE CA. Total. Promedio de F Probabilidad Valor los crítico para cuadrados F 12.44444444 12.44444444 0.007329037 5.14325285. A. Entre grupos. Grados de libertad 2. AC I. Suma de cuadrados. RM. Origen de las variaciones. Y. BI. O. Q. UI. Bunchosia armeniaca, sobre Staphylococcus aureus (p<0,05). BI BL IO. Fuente: los investigadores. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Q. UI. M IC. Gráfico Nº 1: Promedio de los halos de inhibición de los extractos de Bunchosia armeniaca. BI. O. 35.0. Y. 30.0. A AC I. 20.0. 15.0. FA. 10.0 8.3. TE CA. 0.0. 30%. 0 40%. Ciprofloxacino. Agua esteril. BI BL IO. 20%. 12.3. 9.7. DE. 5.0. 34.0. RM. Diametro (mm). 25.0. Fuente: datos tomados de la tabla 4 (ANEXOS). 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2: Evaluación de la concentración mínima inhibitoria de Bunchosia armeniaca, ciprofloxacino y agua estéril sobre Staphylococcus aureus. 5%. 7,50%. 10%. 25%. 50%. 75%. 100%. Serie Nº 1. ++. ++. +++. +. 0. 0. 0. Serie Nº 2. +++. ++. +. +. 0. 0. 0. Serie Nº 3. +++. +++. ++. ++. +. 0. 0. Serie Nº 1. +++. +++. ++. +. O. 0. 0. 0. Serie Nº 2. +++. +++. Y. ++. +. 0. 0. Serie Nº 3. +++. +++. ++. +. 0. 0. 0. Serie Nº 1. ++. ++. +. 0. 0. 0. 0. +. +. -. 0. 0. 0. 0. Serie Nº 3. ++. +. +. 0. 0. 0. 0. Ciprofloxacino 5 mg. Serie Nº 1. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. Agua estéril. Serie Nº 1. +++. +++. +++. +++. +++. +++. +++. A. ++. AC I. FA. DE. Serie Nº 2. BI BL IO. 40%. TE CA. 30%. M IC. UI. BI. Q. 20%. A. SERIE. RM. Concentración de extracto Bunchosia armeniaca. Fuente: los investigadores Leyenda: +++: mayor turbidez ++: turbidez intermedia +: menor turbidez 0: sin turbidez. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN Para determinar el efecto antimicrobiano in vitro de la especie en estudio, se empleó el método de difusión en agar con discos impregnados, basado en el trabajo de Kirby Bauer, el cual es uno de los métodos que el Comité Nacional de Estándares para Laboratorios Clínicos de los Estados Unidos de Norteamérica (NCCLS) recomienda para determinar la sensibilidad antimicrobiana.. M IC. A. El método se basa en la relación entre la concentración de la sustancia necesaria para inhibir una. UI. cepa bacteriana y el halo de inhibición de crecimiento en la superficie de una placa de agar con. O. Q. un medio de cultivo adecuado y sembrado homogéneamente con la bacteria a ensayar, sobre la. BI. cual se ha depositado un disco de papel filtro de 6 mm de diámetro impregnado con una cantidad. AC I. A. Y. conocida de la sustancia 20.. RM. En la tabla 1 se muestra el análisis estadístico de ANOVA de las mediciones de los halos de. FA. inhibición del extracto de Bunchosia armeniaca sobre Staphylococcus aureus, en el que se. DE. determinó un valor critico de 5,1432 y una variación entre los tres grupos de 12,44, lo que nos. TE CA. permite analizar que en el resultado de nuestra prueba existe una diferencia significativa, es decir, que las diferentes concentraciones del extracto han generado diferentes halos de. BI BL IO. inhibición promedio (p<0,05).. En el Gráfico 1 se observa que la concentración al 40% del extracto es más eficiente en relación a las concentraciones de 30% y 20%, esto debido a la mayor presencia de metabolitos como los compuestos flavonoides, rutina, isoquercetina y afzelina presentes en el fruto, al que se les atribuye esta acción antibacteriana 13. Los flavonoides son estructuras fenólicas que contienen un solo grupo carbonilo, tiene la capacidad de generar complejos con proteínas extracelulares y proteínas solubles, así como una 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. actividad sobre la pared celular, actuando posiblemente sobre las adhesinas expuestas en la superficie de las bacterias, sobre los polipéptidos de la pared celular y sobre enzimas unidas a las membranas, esto explicaría el mecanismo de acción de varios de sus efectos farmacológicos. Otros estudios previos muestran que la actividad antibacterial de los flavonoides es principalmente debido al daño del DNA causado en la bacteria. Este efecto se ve que ocurren. A. por diferentes vías de mecanismos de acción como: complejo con la células de la pared de la. M IC. bacteria y la disminución con el crecimiento del microbio, inhibiendo la actividad de DNA. Q. UI. topoisomerasa II (DNA girasa), e inhibiendo la proteína FtsZ, la tubulina análoga bacterial, la. BI. O. cual interviene en la división celular de la bacteria 21,22,23,24,25.. A. Y. En la gráfica se puede apreciar que existe mayor inhibición bacteriana conforme aumenta la. AC I. concentración, lo cual se evidenció también en el trabajo realizado por Mayta y Sacsaquispe. RM. donde reportaron que el extracto etanólico de propóleo al 30% tuvo una mayor actividad. FA. antimicrobiana in vitro que el EEP (extracto etanólico de propóleo) al 10% frente al S. aureus. TE CA. DE. (ATCC 25923) 18.. Al determinar la concentración mínima inhibitoria con el método de dilución en caldo, se. BI BL IO. observa en la tabla 2 que el extracto de Bunchosia armeniaca presenta mayor efecto inhibitorio sobre Staphylococcus aureus a la concentración de 0,25mg/mL en el extracto al 40% por no presentar turbidez del medio que contenía la cepa de Staphylococcus aureus, mientras que respecto a las concentraciones del 20% y 30% presentaron el mayor efecto inhibitorio a la concentración de 0,5 mg/mL. La CMI en tubo (dilución en caldo, se considera como el parámetro fundamental para comprobar la sensibilidad de una bacteria frente a un antibacteriano), es la técnica más confiable para determinar las propiedades antimicrobianas de una sustancia. Al someter las tres concentraciones del extracto se pudo establecer que todos 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. presentaron actividad frente a S. aureus. De acuerdo con lo escrito por Avellaneda, una cepa bacteriana es muy sensible cuando la sustancia evaluada presenta una CMI inferior a 12,5 mg/mL, de mediana sensibilidad entre 12,5 y 50 mg/mL y de baja sensibilidad cuando la CMI está entre 50 a 100 mg/mL 26,27. Según esta escala Staphylococcus aureus exhibió alta sensibilidad frente al extracto de. M IC. A. Bunchosia armeniaca, los resultados presentan semejanza con el trabajo realizado por Cruz y. UI. Rodríguez, en el que informaron que S. aureus presentó mayor sensibilidad frente a los extractos. O. Q. etanólicos de Bidens pilosa y Lantana cámara, mientras que ante Schinus molle y Silybum. Y. BI. marianum, sensibilidad intermedia 28.. AC I. A. En un estudio realizado con otras especies vegetales, se determinó que en la técnica de CMI en. RM. tubo, el S. aureus fue inhibido por los extractos alcohólicos de las hojas de Austroeupatorium. FA. inulaefolium, 50mg/mL y Ludwigia polygonoides, 25mg/mL 29.. DE. De acuerdo a los resultados, también se podría decir que se evidenció un mayor efecto. TE CA. inhibitorio cuando se aumentó la concentración del extracto en las diluciones, esto nos hace. BI BL IO. inferir que si aumentáramos el volumen del extracto podría ser mejor la acción, a su vez este efecto antibacteriano se le atribuye exclusivamente a los metabolitos presentes en el extracto etanólico de Bunchosia armeniaca preparado, respaldado por el trabajo “Actividad antibacteriana in vitro del extracto etanólico de propóleo sobre una cepa clínica de Staphylococcus aureus” realizado por Barrios y col, en el cual se prepararon extractos al 20% y 40% de propóleo utilizando como solvente etanol al 96% y empleando este mismo como control negativo, evidenciándose la actividad antibacteriana con los extracto etanólico de propóleo mientras que en los discos solo con etanol al 96% no mostró efecto alguno 30.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Sin embargo; el solvente etanol utilizado también presenta efecto bactericida, debido a que los alcoholes son bactericidas de potencia intermedia y dentro de su espectro se encuentra el Staphylococcus aureus y cuyo mecanismo de acción es la destrucción de la membrana celular y desnaturalización de las proteínas. Su eficacia está basada en la presencia de agua, ello se debe a que estos compuestos acuosos penetran mejor en las células y bacterias permitiendo así daño. A. a la membrana y rápida desnaturalización de las proteínas, con la consiguiente interferencia con. M IC. el metabolismo y lisis celular.31 No obstante; las concentraciones más efectivas son las que. Q. UI. oscilan entre el 60% y 80% en agua destilada, siendo la preparación más efectiva al 70% y. BI. O. concentraciones por debajo del 50% no causan ningún efecto 32.. A. Y. Teniendo en cuenta esto nos muestra que el efecto bactericida del extracto etanólico de. AC I. Bunchosia armeniaca sobre Staphylococcus aureus sería atribuido netamente a los metabolitos. RM. presentes en el fruto de la planta, pues las concentraciones empleadas fueron menores a dichos. BI BL IO. TE CA. DE. FA. rangos antes mencionados.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES. 1. El extracto del fruto de Bunchosia armeniaca. tiene efecto in vitro sobre Staphylococcus aureus 2. Se determinó que la concentración mínima bactericida del extracto fruto de Bunchosia. M IC. A. armeniaca sobre Staphylococcus aureus fue al 40%. UI. 3. Se determinó que la concentración mínima inhibitoria del extracto fruto de Bunchosia. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. armeniaca sobre Staphylococcus aureus es de 0,25mg/mL.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Guzmán M, Kouri G, Peregrino J. Enfermedades virales emergentes. Rev Cubana Med. Trop 2001;53(1): 5-15 2. Lebeque Y, Morris H, Calas N. Infecciones Nosocomiales: incidencia de la Pseudomona aeruginosa. Rev Cubana Med. 2006:45(1). M IC. A. 3. Garcia P. Bacterial resistence to microbial agents. Rev Chil Infect 2003; 20(1): S11-S23. UI. 4. Soto M. Cuantificación de glicoalcaloides esteroidales totales de las hojas de Solanum. O. Q. multifidum Lm y su efecto antimicrobiano in vitro frente a Staphylococcus aereus,. A. Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2012.. Y. BI. Escherichia coli y Candida albicans [Tesis]. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo.. AC I. 5. Saldaña L, Sáenz E. Infecciones Cutáneas Bacterianas. Dermatología Peruana 2006;. RM. 16(1). DE. FA. 6. Barrios M. Características epidemiológicas, clínicas y microbiológicas de las. TE CA. Infecciones por Staphylococcus aureus adquirido en la Comunidad en Pediatría. [Tesis Doctoral]. Madrid: Universidad Complutense de Madrid. Facultad de Medicina; 2012.. BI BL IO. 7. Cervantes E, García R, Salazar P. Características generales del Sthaphylococcus aureus. Revista Latinoamericana de Patología Clínica 2014; 61(1): 28-40 8. Avendaño M. Los productos naturales en la búsqueda de nuevos fármacos. Una visión en conjunto. Real Academia Nacional de Farmacia 2011;7(1): 1-26 9. Harvey A. Natural products in drug Discovery. Drug Discov. Today 2008; 13: 894-901 10. Ralalage U, Shanika G. Bioactive compounds and antioxidant activity of Bunchosia armeniaca. World Journal Of Pharmacy And Pharmaceutical Sciences. 2016; 5(10): 1237- 1247 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 11. Vargas W. Guía Ilustrada de las Montañas del Quindio y los Andes Centrales. Editorial Universidad de Caldas: Colombia. (2002). Pp:406 12. Lim T. Edible Medicinal and Non- Medicinal Plants. Spriger Science: London. (2012) pp: 150-152 13. Queiroz G, Heller M, Arrunda F, Nascimiento M, Micke G, Dalmarco E et al.. A. Antibacterial and Anti-Inflammatory activities of Bunchosia armeniaca (Cav.) DC.. M IC. (Malpighiaceae). Record of Natural products 2015; 9(3): 419-431. Q. UI. 14. Adrianzer J, Chiroque. Efecto in vitro de Vaccinium corymbosum L. sobre Escherichia. BI. O. coli. [Tesis]. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Farmacia y. Y. Bioquímica; 2015.. AC I. A. 15. Pasco G, Sanchez, F. Efecto antibacteriano In Vitro de miel de abejas (Apis mellifera). RM. en cepas de Streptococcus mutans [Tesis]. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo.. FA. Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2010.. DE. 16. Zari G,Boncun B, Ruiz G, Venegas E, Soto M, Cuellar A, Cosavalente K. Guía de. TE CA. Prácticas de Farmacognosia II. Universidad Nacional de Trujillo-Facultad de Farmacia y Bioquímica 2014.. BI BL IO. 17. Cosavalente K. Relación entre el contenido de antocianinas totales y su capacidad antioxidante in vitro de extractos diferentes grados etanólico del fruto de Vaccinium corymbosum. Informe de prácticas pre profesionales para optar el título profesional de Químico Farmacéutico.2015. 18. Mayta F, Sacsaquispe S. Evaluación in vitro del efecto antibacteriano del extracto etanólico de propóleo de Oxapampa - Perú sobre cultivos de Streptococcus mutans (ATCC 25175) y Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Rev Estomatol Herediana. 2010; 20(1). 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 19. Barrios C, Pacheco N, Corrales F, Moreno F. Actividad antibacteriana in vitro del extracto etanólico de propóleo sobre una cepa clínica de Staphylococcus aureus. Gaceta de ciencias veterinarias. 2005;11(1). 20. Adrianzen J, Chiroque J. Efecto in vitro del zumo de Vaccinium corymbosum L. SOBRE Escherichia coli. [Tesis I]. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de. A. Farmacia y Bioquímica. 2017.. M IC. 21. Peña B, Morejón Z, García A, Morón F. Estandarización y Tamizaje fotoquímica de. Q. UI. extractos de frutos de Punica granatum L. Rev. Cubana Plant Med. 2008; 13(4).. BI. O. 22. Kilani M, Sghaier B, Limem I, Bouhlel J, Boubaker W, Bhouri I et al. In vitro evaluation. Y. of antibacterial, antioxidant, cytotoxic and apoptotic activities of the tubers infusion and. AC I. A. extracts of Cyperus rotundus, Bioresource. Technol.2008; 99: 9004-9008.. RM. 23. Urgaonkar S, La Pierre H ,Meir I, Lund H, Chaudhuri D, Shaw J. Synthesis of. FA. antimicrobial natural products targeting FtsZ: (+/-)-Dichamanetin and (+/-)-2 hydroxy-. DE. 5'-benzylisouvarinol-B. Org. Lett. 2005; 7(25): 5609-5612.. TE CA. 24. Cushnie T, Lamb A. Antimicrobial activity of flavonoids. Int. J. Antimicrob. Ag. 2005; 26(5), 343-356.. BI BL IO. 25. Vollmerw. The prokaryotic cytoskeleton: a putative target for inhibitors and antibiotics, Appl. Microbiol. Biot.2006; 73(1), 37-47. 26. Struthers K, Westran R. Bacteriología clínica. Ed. Masson S. A.2005 p.192 27. Avellaneda S, Rojas N, Cuéllar A, Fonseca, R. 2005. Actividad antibacteriana de Diphysa minutifolia Rose. Revist Cubana de Plant Med. 10(2):42-47. 28. Cruz A, Rodríguez N. Evaluación in vitro del efecto antibacteriano de los extractos de Bidens pilosa, Lantana cámara, Schinus molle y Silybum marianum. Rev. U.D.CA Act. & Div. Cient. 2010;13 (2): 117-124 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 29. Álvarez M, Izasa M, Echeverry H. Efecto antibacteriano in vitro de Austorcupatorium inulaefolium HBK (salvia amarga) y Ludwigia polygonoides HBK (clavo de laguana). Biosalud. 2005; 14:46-55. 30. Barrios C, Pacheco N, Corrales F, Moreno F. Actividad antibacteriana in vitro del extracto etanólico de propóleo sobre una cepa clínica de Staphylococcus aureus. Gaceta. A. de Ciencias Veterinarias. 2005; 11(1): 31-36.. M IC. 31. Sánchez L, Sáenz E. Antisépticos y Desinfectantes. Dermatología Peruana. 2005;. Q. UI. 15(2):86. BI. O. 32. Vignoli R. Esterilización, desinfección y antisepsia. Bacteriología y Virología. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. Médica.2008 p.620. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXOS Tabla 3: Análisis de varianza de un solo factor Cuenta. Suma. Promedio. Varianza. 0.2. 3. 25. 8.333333333. 0.333333333. 0.3. 3. 29. 9.666666667. 0.333333333. 0.4. 3. 37. 12.33333333. 2.333333333. UI. M IC. A. Grupos. BI. O. Q. Fuente: los investigadores. Ciprofloxacino (5 mg). Agua estéril. 10.0. 14.0. 34.0. 0. FA. 11.0. 34.0. 0. 30%. Placa Nº 1. 8.0. Placa Nº 2. 8.0. Placa Nº 3. 9.0. Promedio. RM. 20%. TE CA. 40%. Placa. 8.3. AC I. A. Y. Tabla 4: Promedio de los halos de inhibición. DE. 9.0. 10.0. 12.0. 9.7. 12.3. BI BL IO. Fuente: los investigadores. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Identificación Taxonómica en el Herbarium truxillense. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. O. Q. UI. M IC. A. Preparación del Extracto. Extracción de la pulpa del fruto. Maceración del Fruto de Bunchosia armeniaca. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. Fruto de Bunchosia armeniaca. Filtración del extacto de Bunchosia armeniaca. P. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. O. Q. UI. M IC. A. Preparación del Tubo de Mc Farland. Cepas de Staphylococcus aureus 25923. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. Preparación del material. Dilución de las cepas Staphylococcus aureus. Tubo Mc Farland 0.5 (108 UFC/mL). Comparación de turbidez. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. O. Q. UI. M IC. A. Concentración Mínima Bactericida (CMB). Preparación del Agar. Y. Preparación de las placas con el agar. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Müller Hinton. Siembra de las placas con las cepas de Staphylococcus aureus. Inserción de las láminas de celulosa impregnadas con el extracto. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Placas Petri listas para llevar a estufa. Efecto bactericida a la concentración de 30 %. BI BL IO. TE CA. Efecto bactericida a la concentración de 20 %. Efecto bactericida de Ciprofloxacino de 5 mg. Efecto bactericida a la concentración de 40 % 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Concentración Mínima Inhibitoria. BI BL IO. TE CA. DE. FA. Preparación del caldo BHI y del material a esterilizar. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Tubos listos para llevar a estufa. Análisis de los tubos de ensayo a las diferentes concentraciones del extracto de Bunchosia armeniaca. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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