“Efecto del quitosano sobre la germinación, crecimiento, esporulación y capacidad antagónica de Trichoderma asperellum

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. IC AS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. DE. CI. EN CI. Efecto del quitosano sobre la germinación, crecimiento, esporulación y capacidad antagónica de Trichoderma asperellum. TESIS. TE CA. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. BI BL I. O. Autores: Br SANTOS MONTERO WENDY YAJHAYRA Br. FLORES HERRERA MARLI MADALI. Asesor: Ms. C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG TRUJILLO – PERÚ 2017 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. EN CI. AS. BI. O. LO. DR. ORLANDO GONZALES NIEVES RECTOR DE LA UNIVERSIDAD DE TRUJILLO. DR. ESTEBAN ALEJANDRO ILICH ZERPA SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. DR. RUBÉN VERA VÉLIZ VICERRECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EN CI. AS. BI. O. LO. G. DR. FREDDY MEJIA COICO DECANO DE LA FACULTAD CIENCIAS BIOLOGICAS. O. TE CA. DE. CI. DR. WILLIAM ELMER ZELADA ESTRAVER SECRETARIO DE LA FACULTAD CIENCIAS BIOLOGICAS. BI BL I. DRA. BERTHA SORIANO BERNILLA DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. IC AS. El que suscribe, Ms. C. Juan Hector Wilson Krugg, asesor de la tesis titulada: “Efecto del quitosano sobre la germinación, crecimiento, esporulación y. LO. G. capacidad antagónica de Trichoderma asperellum”. BI. O. CERTIFICA:. Que ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido de la Facultad. AS. de Ciencias Biológicas de Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad. EN CI. con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado acogiendo las observaciones, sugerencias alcanzadas.. CI. Por lo tanto, autorizo a Marli Madalí Flores Herrera y Wendy Yajhayra Santos. TE CA. DE. Montero continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. BI BL I. O. Trujillo, Enero del 2018. _______________________________. Ms. C. Juan Hector Wilson Krugg ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. PRESENTACIÓN. G. Señores Miembros del Jurado:. LO. En cumplimiento con las disposiciones establecida en el Reglamento de. O. Grados y Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. BI. Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de. EN CI. AS. Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:. “Efecto del quitosano sobre la germinación, crecimiento, esporulación y capacidad antagónica de Trichoderma asperellum, con el objetivo de obtener. DE. CI. el Título Profesional de Biólogo - Microbiólogo.. O. TE CA. Trujillo, Enero del 2018. BI BL I. Br. Marli Madali Flores Herrera. Br. Wendy Yajhayra Santos Montero. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. MIEMBROS DEL JURADO. Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido. G. ejecutada en concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional. AS. BI. O. LO. de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. EN CI. ______________________________ Dra. Manuela N. Luján Velásquez. DE. CI. PRESIDENTE. Ms.C. Juan H. Wilson Krugg SECRETARIO. BI BL I. O. TE CA. ______________________________. ______________________________ Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran. germinación,. crecimiento,. esporulación. y. capacidad. IC AS. que el presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del quitosano sobre la antagónica. de. LO. AS. BI. O. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD. G. Trichoderma asperellum.” Ha cumplido con los requisitos formales y. EN CI. _____________________________. ________________________ Ms.C. Juan H. Wilson Krugg SECRETARIO. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. Dra. Manuela N. Luján Velásquez PRESIDENTE. _____________________________ Ms. C. Eduardo Muñóz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. importante de nuestra formación profesional.. IC AS. A Dios por darnos la vida y permitirnos haber llegado a este momento tan. O. LO. G. Por forjar nuestro camino y darnos la fortaleza para salir adelante. BI. A nuestros padres, por ser el pilar más importante en nuestra vida,. AS. por el amor, confianza y apoyo incondicional en todo momento para. EN CI. lograr nuestros objetivos y sentirnos bendecidas por tenerlos, siendo. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. nuestra fuerza y guía que conducen el camino.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. AGRADECIMIENTOS. Nuestro más profundo agradecimiento a nuestro asesor y amigo Juan. H. Wilson Krugg que sin su ayuda y conocimientos no hubiese sido posible. LO. G. realizar este proyecto. Gracias por su amistad, por la confianza brindada, sus enseñanzas y por sus consejos que nos permitieron crecer como. BI. O. profesionales.. AS. A los profesores de la Escuela Académica Profesional de. EN CI. Microbiología y Parasitología, por su dedicación, por transmitirnos y enseñarnos cuán valiosa es nuestra profesión.. CI. Y a todas aquellas personas que con su ayuda han colaborado en la. DE. realización del presente trabajo, en especial a Noemí León por la orientación continua de la misma, pero sobre todo por la motivación y el apoyo recibido. BI BL I. O. TE CA. a lo largo de estos meses.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. IC AS. Se determinó el efecto de diferentes concentraciones de quitosano, sobre la germinación, crecimiento, esporulación y la capacidad antagónica de Trichoderma. G. asperellum. Para esto se trabajó con tres concentraciones de quitosano (105, 210. LO. y 280 ppm), además de un control (0 ppm).. O. El efecto del quitosano sobre la germinación de esporas de T.asperellum se. BI. evaluó en tubos de ensayo conteniendo una solución doble concentrada de 6. AS. quitosano, a la cual se le adicionó 2 mL de una suspensión de esporas (6 x 10. EN CI. esp/mL) para las diferentes concentraciones del biofungicida en acción, la lectura se realizó a las 24 horas, mediante recuento (40X) en cámara de Neubauer. Para el porcentaje de crecimiento se incorporó quitosano en agar sabouraud. CI. y se sirvió en placas de Petri, así como también se preparó una placa control sin la. DE. presencia del biofungicida, se sembró por puntura en la parte central de las placas. TE CA. de Petri de acuerdo a su correspondiente concentración, incubándose a 25 ºC durante 5 días.. El efecto del quitosano sobre la esporulación de T. asperellum se realizó a. O. partir de las placas de crecimiento vegetativo cortándose dos cuadrados de agar. BI BL I. de 1 cm por lado de cada placa y transfiriéndose individualmente a tubos de ensayo conteniendo 10 ml de agua destilada más Tween 80 al 0,01% para luego agitar hasta el desprendimiento de las esporas. La lectura se realizó mediante recuento (40X) en cámara de Neubauer.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para la evaluación del efecto del quitosano sobre la capacidad antagónica de T. asperellum se empleó la técnica de cultivo dual. A un extremo de la placa de Petri se sembró por puntura micelio de Rhizotocnia solani y en el extremo opuesto. IC AS. micelio del hongo antagonista, proveniente del enfrentamiento con las diferentes concentraciones de quitosano en la prueba de crecimiento, incubándose a 25 °C. G. por 5 días.. LO. Los resultados demuestran que el quitosano disminuye hasta un 0 % la. O. germinación de T.asperellum. Asimismo redujo la esporulación de T. asperellum a. BI. un 7%. En relación al crecimiento radial se encontró que el quitosano no redujo. EN CI. presentó un grado de antagonismo tipo 1.. AS. el crecimiento de T.asperellum. En cuanto a la capacidad antagónica T. asperellum. Se concluye que la germinación y la esporulación de Trichoderma asperellum disminuyen de modo significativo a medida que aumentan las concentraciones de. CI. quitosano (105, 210 y 280 ppm) sin embargo no disminuye de modo significativo. TE CA. DE. el crecimiento y la capacidad antagónica de Trichoderma asperellum .. BI BL I. O. Palabras clave: Trichoderma asperellum, Quitosano, Capacidad antagónica.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ............... ……ii. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ....................... iii DEL ASESOR ........................................................................................................ iv. G. PRESENTACIÓN .................................................................................................... v. LO. MIEMBROS DEL JURADO .................................................................................... vi. O. APROBACIÓN ...................................................................................................... vii. BI. DEDICATORIA ..................................................................................................... viii. AS. AGRADECIMIENTOS ............................................................................................ ix. EN CI. RESUMEN .............................................................................................................. x ÍNDICE .................................................................................................................. xii INTRODUCCIÓN ........................................................................................01. II.. MATERIAL Y MÉTODOS ...........................................................................08. III.. RESULTADOS ...........................................................................................16. IV.. DISCUSIÓN ................................................................................................24. V.. CONCLUSIONES .......................................................................................29. VI.. RECOMENDACIONES ...............................................................................30. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÀFICAS ..........................................................39. O. TE CA. DE. CI. I.. BI BL I. ANEXOS………………………………………………………………………………… 39. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCIÓN. Uno de los aspectos importantes en la producción agrícola es el control de. IC AS. enfermedades y con ello la aplicación de medidas fitosanitarias que minimicen las pérdidas económicas ocasionadas1. En la actualidad se lucha por el alcance de una. G. agricultura sostenible, la cual presupone la utilización óptima de diversos métodos. LO. de control de organismos fitopatógenos, técnicamente efectivos, económicamente. BI. O. viables y compatibles con el ambiente.2. El control químico se mantiene, desde hace aproximadamente siete décadas,. AS. como el método principal de control de plagas (artrópodos, malezas y patógenos)3.. EN CI. En todo este tiempo se han acumulado suficientes evidencias de los riesgos que presenta el uso de plaguicidas para el ambiente y la salud, riesgos que además. CI. comprometen la sostenibilidad de los sistemas agrícolas3.. DE. El control químico se emplea para reducir las poblaciones de especies de. TE CA. plagas que se elevan a niveles peligrosos cuando las presiones ambientales son inadecuadas. Cuando se utilizan productos químicos, el daño de la plaga debe ser lo suficientemente grande como para cubrir no sólo el coste del tratamiento. O. plaguicida, sino también los posibles efectos deletéreos tales como la influencia. BI BL I. nociva de la sustancia química en el ecosistema4. El uso excesivo de agroquímicos en la agricultura para controlar la enfermedad ha provocado, acumulación de residuos en el ambiente, destrucción de la flora y fauna silvestre benéfica e intoxicaciones, así como también, enfermedades en el hombre. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta situación crea la necesidad de buscar medidas alternas que permitan reducir los daños causados por la enfermedad y disminuir el uso de fungicidas, por lo que la tendencia actual se dirige a la búsqueda de compuestos con poder. IC AS. biofungicida que son biodegradables y no contaminantes6, siendo una alternativa viable el uso de productos orgánicos como el quitosano6,7.. LO. G. El quitosano, es un polímero que se obtiene a partir de la transformación química de la quitina contenida en el exoesqueleto de crustáceos8, está conformado. BI. O. por unidades de D-glucosamina y N-acetil-D-glucosamina. Su actividad sobre hongos se manifiesta con reducción del crecimiento micelial y germinación del. AS. hongo9. Asimismo, este compuesto derivado de la quitina, además de la propiedad. EN CI. mencionada, incrementa los mecanismos de defensa en los vegetales y plantas10,11,12; generando así un doble efecto en su aplicación13.. CI. En cuanto a la actividad antifúngica, se ha informado de que el quitosano. DE. puede reducir la infección de Fusarium oxysporum f. sp. apii en el apio e inhibe la propagación de Sphaerotheca pannosa var. Rosae, Peronospora sparsa y Botrytis. TE CA. cinerea sobre rosas14,15,16. El tratamiento de las plantas de tomate con solución de quitosano redujo el crecimiento micelial, la producción esporádica, la liberación de. O. zoosporas y la germinación de quistes de Phytophthora infestans lo que resultó en. BI BL I. una protección significativa de la enfermedad17. Además, el tratamiento de semillas con quitosano podría reducir el Colletotrichum sp.18. Se sugiere que el quitosano forma una película permeable en la interfase19 y tiene dos funciones: interferencia directa del crecimiento fúngico y activación de varios procesos de defensa. Estos. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mecanismos de defensa incluyen la acumulación de quitinasas, la síntesis de inhibidores de proteinasas, la lignificación y la inducción de la síntesis callosa 20.. IC AS. El control biológico se define como una práctica agrícola en constante crecimiento que busca la destrucción total o parcial de patógenos e insectos plaga frecuentemente mediante el uso de sus enemigos naturales. 21 Las diferentes. LO. G. tácticas de control utilizadas deben armonizar entre sí, por lo que resulta importante evaluar y seleccionar agroquímicos que sean compatibles con los organismos. BI. O. benéficos, entre los cuales se encuentra Trichoderma spp22.. AS. El género Trichoderma es un grupo de hongos aislados del suelo que se. EN CI. reproducen asexualmente. Además, es un hongo filamentoso anamórfico, heterótrofo, aerobio facultativo, con una pared celular compuesta de quitina, de rápido crecimiento. De conidióforo hialino muy ramificado no verticilado, fiálides. CI. individuales o en grupos, conidios hialinos de una célula, ovoides, nacidos en. DE. pequeños racimos terminales. Muchas cepas crecen eficientemente en medios sólidos o líquidos y en un amplio rango de temperaturas, además son relativamente. TE CA. tolerantes a humedades bajas y tienden a crecer en suelos ácidos. 23 Este género reúne gran cantidad de especies encontradas en casi todos los. BI BL I. O. tipos de suelos y en materia orgánica en descomposición, especialmente madera y hojarasca, las cuales poseen una gran importancia desde el punto de vista económico ya que son capaces de producir enzimas de interés industrial 24 y sustancias con actividad antimicrobiana25, pueden ser utilizadas como agentes. biocontroladores de enfermedades en plantas con variados mecanismos de acción.26,27,28 Son productores activos de productos metabolitos (por ejemplo,. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. micotoxinas, peptaiboles, pironas, etc.) y enzimas hidrolíticas (por ejemplo, quitinasas, glucanasas y proteasas) con un papel clave en mycoparasitismo y. IC AS. biocontrol de hongos patógenos29. Aunque el control biológico no pretende reemplazar completamente los sistemas de control químico, puede ser utilizado junto con otras técnicas como parte. LO. G. de un sistema integrado de control y ha de ser puesto en práctica integrándolo con los métodos y con las estrategias de producción existentes actualmente. El control. BI. O. biológico depende de un funcionamiento efectivo del microorganismo antagonista. AS. apropiado para cada ecosistema particular planta-patógeno30.. EN CI. Estudios realizados prueban el efecto del quitosano en cuatro aislados de Trichoderma spp. Se identificaron como T. pseudokoningii FLM16, T. citrinoviride FLM17, T. harzianum EZG47 y T. koningiopsis VSL185. Las diferentes cepas de. CI. Trichoderma spp presentaron diferencias en su tolerancia al quitosano. El quitosano. DE. redujo el crecimiento radial de Trichoderma spp. T. koningiopsis VSL185 fue el más tolerante al quitosano, se logró aislar en todos los medios de cultivo modificados. TE CA. con quitosano (0,5-2,0 mg ml-1). Asimismo, la concentración inhibitoria mínima (MIC) y la Concentración Fúngica Mínima (MFC) fueron determinadas mostrando. O. que T. Koningiopsis VSL185 muestra una mayor tolerancia al quitosano con un. BI BL I. valor de MIC> 2000 mg ml-1. En otros aislados de Trichoderma, los valores de MIC fueron alrededor de 10 mg ml-1.31 Asimismo, Chittenden y Singh llevaron a cabo ensayos in vitro para evaluar el. control de dos hongos fitopatógenos Leptographium procerum y Sphaeropsis sapinea mediante combinación de quitosano o quitosano oligómero y una cepa. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. albina de Trichoderma harzianum. La germinación de esporas y el crecimiento de hifas de los hongos de ensayo se evaluaron en medios modificados con quitosano o quitosano oligómero con y sin T. harzianum utilizando simultáneamente. IC AS. inoculación con hongo de prueba 1, 2 o 3 días después de la preinfección con hongo de ensayo.32 No hubo crecimiento micelial de los hongos de prueba,. G. independientemente de las concentraciones de quitosano utilizadas cuando L.. LO. procerum y S. sapinea se inocularon simultáneamente con T. harzianum.32.. BI. O. Sin embargo, la respuesta de quitosano o de oligómero de quitosano en los hongos de ensayo era aparente cuando T. harzianum no era simultáneamente. AS. inoculado con hongo de ensayo, pero introducido posteriormente. Hubo una mayor. EN CI. reducción del crecimiento a (0,075-0,1% v / v) de quitosano, y el oligómero de quitosano en general fue más eficaz que el quitosano solución acuosa. El quitosano. CI. solo fue capaz de restringir o retrasar la germinación de esporas, pero la. DE. combinación de quitosano y T. harzianum inhibió la germinación de esporas y por lo tanto la formación de colonias de hongos de prueba independientemente del. TE CA. tiempo32.. Sánchez-Domínguez evaluó la capacidad in vitro del quitosano de bajo y. O. medio peso molecular (QBPM, QMPM) a cinco concentraciones (0,5, 1,0, 1,5, 2,0. BI BL I. y 2,5% p/v) y alto peso molecular (QAPM) en cuatro concentraciones (0,5, 1,0, 1,5 y 2,0% p/v) para inhibir el hongo Alternaria alternata. El QMPM a la concentración de 2.5%, inhibió el crecimiento del micelio de A. alternata en un 50,6%, mientras que, a las concentraciones de 0,5, 1,0 y 1,5% en sus tres pesos moleculares. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. promovió el crecimiento del micelio. La esporulación fue afectada a concentración de 2,5% por el QBPM y el QMPM.33. IC AS. El porcentaje de germinación de esporas no fue afectado por las concentraciones, pero sí por los pesos moleculares. Se observó una relación inversa entre la germinación y el peso molecular. El peso seco del micelio fue. LO. G. inhibido con todas las concentraciones y tipos de quitosano evaluados. La observación de hifas a través del Microscopio Electrónico de Barrido mostró. BI. O. diversos daños como hinchazón, depresiones, y distorsiones por efecto de las. AS. actividades agrícolas extensivas y el quitosano.33. EN CI. La compatibilidad de Trichoderma asperellum, con fungicidas orgánicos es objeto de estudio debido a la interrogante que surge sobre su posible inhibición, hecho que limitaría la combinación de los métodos químicos y biológicos. Estos métodos. CI. integrados prometen ventajas, tales como reducción del uso de fungicidas, menor. DE. incidencia de patógenos, en especial los de difícil control; mayores rendimientos en los cultivos y la disminución de los riesgos que estos agroquímicos representan para la. TE CA. salud humana y los ecosistemas agrícolas31. Asimismo, los estudios enfocados a la aplicabilidad del quitosano en áreas como la agricultura para el control de organismos. O. fitopatógenos se han incrementado, debido principalmente a las continuas restricciones. BI BL I. en el uso de otros agentes químicos contaminantes tales como fungicidas y pesticidas. El quitosano constituye enemigo de muchos agentes causales de enfermedades y plagas vegetales. Además, favorecen el crecimiento y desarrollo de microorganismos beneficiosos que establecen relaciones simbióticas con las plantas, tales como las micorrizas o especies del género Rhizobium.32. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A su vez, incrementan la población y la actividad microbiana en el suelo, lo que mejora la disposición de nutrientes y sus propiedades. Como reguladores del crecimiento, aceleran la germinación de las semillas, el vigor de las plantas, y el rendimiento. IC AS. agrícola. Por tanto, por su gran potencial de aplicación en la agricultura, se augura que se utilizarán con una mayor extensión, principalmente como sustitutos de los actuales. G. plaguicidas químicos o como reguladores del crecimiento de las plantas.32. LO. Por lo expuesto, el presente trabajo de investigación tiene como objetivo evaluar el. O. efecto del Quitosano sobre la germinación, el crecimiento, esporulación y capacidad. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. EN CI. AS. BI. antagonica de Trichoderma asperellum, en condiciones de laboratorio.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 2.1. MATERIALES DE ESTUDIO. IC AS. Cultivos puro de Trichoderma asperellum proporcionado por la cátedra de Fitopatología del Departamento de Microbiología y. G. Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo.. LO. Cultivo puro de Rhizoctonia solani, proporcionado por la cátedra. O. de Fitopatología del Departamento de Microbiología y Parasitología.. BI. Universidad Nacional de Trujillo.. 2.2. PROCEDIMIENTO. EN CI. AS. Quitosano con el nombre comercial de BioGMoss. CI. 2.2.1. Evaluación del efecto del quitosano sobre Trichoderma asperellum 2.2.1.1. Evaluación del efecto del Quitosano sobre la germinación de. DE. esporas de Trichoderma asperellum.. TE CA. 2.2.1.1.1. Reactivación del cultivo de Trichoderma asperellum y obtención de cultivo monospórico.. Para la reactivación de T. asperellum, se sembró micelio del. O. hongo en frascos planos con agar sabouraud inclinado, posteriormente. BI BL I. fueron incubados a 25ºC durante 7 días Realizándose el conteo de esporas de cada dilución en cámara de Neubauer para determinar en cuál de ellas existía una distribución de esporas adecuada que facilite su conteo. Se trabajó con la dilución 10-1, obteniéndose una concentración de 6 x 106 esporas/mL.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.1.2. Preparación de las soluciones doble concentradas de. IC AS. Quitosano.. Se realizaron diferentes diluciones del biofungicida, hasta. G. alcanzar concentraciones de 210, 420 y 560 ppm a partir de su muestra. LO. original.. O. 2.2.1.1.3. Preparación de inóculo de esporas. BI. El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de agua. AS. destilada estéril a cada frasco plano. con agar. sabouraud que. EN CI. contenía a Trichoderma asperellum, luego se agitó moderadamente con el fin de liberar las esporas del hongo. Seguidamente la solución resultante fue colocada en un matraz estéril, donde se determinó la. CI. concentración de esporas mediante recuento. en Cámara de. TE CA. mL.. DE. Neubauer que fue estandarizada a una concentración de 6 x 10 6 esp/. 2.2.1.1.4. Inoculación e Incubación para la evaluación de la. O. germinación. Se. colocó 2 mL. de cada dilución del fungicida doble. BI BL I. concentrado en frascos pequeños de vidrio estériles a los cuales se les agregó 2 mL de la suspensión de esporas obtenida previamente con lo cual se obtuvo una dilución de 1 x 106 esp/ mL y concentraciones. finales de 105, 210 y 280 ppm del biofungicida Quitosano. Se preparó también una suspensión de esporas control (0 ppm), agregándole 2 mL. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de suspensión de esporas en 2 mL. de. caldo papa estéril,. posteriormente cada frasco se incubó a una temperatura de 25ºC como promedio durante 24 horas.. IC AS. 2.2.1.1.5. Lectura de resultados. Se agregó gotas de azul de lactofenol en cada uno de los frascos. a 40x en Cámara de. LO. se realizó el recuento en el microscopio. G. (de cada concentración del fungicida y el control), luego se observó y. O. Neubauer. Se contaron tanto esporas germinadas, como no. BI. germinadas para cada concentración del fungicida evaluado,. AS. incluyendo el control, con el fin de determinar el porcentaje de. EN CI. germinación de las 4 repeticiones realizadas. 2.2.1.2. Evaluación del efecto del Quitosano sobre el crecimiento de. CI. Trichoderma asperellum.. 2.2.1.2.1. Preparación del medio de cultivo. DE. Se preparó Agar Sabouraud para ser mezclado con el. TE CA. biofungicida quitosano, el cual fue vertido en cuatro matraces rotulados, conteniendo cada uno de ellos 100 ml de medio. El medio de cultivo fue esterilizado en autoclave y se dejó enfriar hasta una. BI BL I. O. temperatura aproximada de 50°C. Estando aún fundido el medio, se procedió a realizar la. respectiva mezcla con el químico, de tal manera que a tres de los cuatro matraces se le adicionó el químico hasta obtener una concentración de 105, 210 y 280 ppm.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El matraz restante, conteniendo medio de cultivo, fue utilizado como testigo, por ello no se le adicionó sustancia alguna. Luego el medio de cultivo de cada matraz fue servido en placas de Petri. IC AS. estériles (cuatro placas para cada concentración, incluido el control).. G. 2.2.1.2.2. Siembra e incubación.. LO. A partir de cultivo puro de T.asperellum se sembró por puntura. O. en la parte central de las placas de Petri preparadas en el paso. EN CI. AS. incubaron a 25°C por 5 días.. BI. anterior (4 placas por concentración incluida el control). Las cuales se. 2.2.1.2.3. Lectura de resultados. Se. CI. A partir del segundo día hasta el sexto día de siembra. realizó la medición del radio del crecimiento miceliar en milímetros. DE. (mm) durante 120 horas, midiéndose. la colonia en diferentes. TE CA. direcciones, obteniéndose un radio promedio de crecimiento por día por cada concentración de quitosano y el grupo control. Los resultados de crecimiento de T asperellum se expresaron en milímetros (mm) y en. BI BL I. O. porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la siguiente manera:. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.3. Evaluación del efecto del Quitosano sobre la Esporulación. 2.2.1.3.1. Preparación del medio diluyente. IC AS. de Trichoderma asperellum.. G. En tubos de vidrio estériles se añadió 10 ml de agua destilada,. LO. fue esterilizada en autoclave y se dejó enfriar hasta una temperatura. O. aproximada de 27 °C.. BI. 2.2.1.3.2. Preparación de las suspensiones. AS. A partir de la evaluación de crecimiento vegetativo, se cortaron dos cuadrados de agar de 1 cm por lado cada placa y se transfirió. EN CI. individualmente a los tubos de vidrio estériles con 10 ml de agua. DE. de las esporas.. CI. destilada más Tween 80 al 0,01% para agitar hasta el desprendimiento. 2.2.1.3.3. Lectura de los resultados. TE CA. Después de realizar diluciones en serie, se procedió a colocar una. gota de cada suspensión de esporas de las diferentes concentraciones. O. del biofungicida y del control en una lámina portaobjeto respectivamente. BI BL I. para observar en el microscopio 40 X, la presencia de esporas y hacer el conteo respectivo en la Cámara de Neubauer, considerándose como 100% a la concentración de esporas obtenidas en el control.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.4. Evaluación de la capacidad antagónica de Trichoderma asperellum con Rhizoctonia solani 2.2.1.4.1. Efecto antagónico de Trichoderma asperellum sobre. IC AS. Rhizoctonia solani. La prueba de enfrentamiento se realizó empleando la técnica de. G. cultivo dual. Para ello se utilizaron placas de Petri con 15 mL de agar. LO. sabouraud. En un extremo del medio se sembró por puntura micelio del. O. hongo fitopatógeno (Rhizoctonia solani) y en el extremo opuesto micelio. BI. del hongo antagonista (Trichoderma asperellum), proveniente del. AS. tratamiento con quitosano Como control se colocó un cultivo de. EN CI. Trichoderma asperellum procedente de un cultivo sin quitosano y Rhizoctonia solani al otro extremo con la presencia de Trichoderma asperellum. Posteriormente los cultivos se incubaron a 25 ºC hasta el. CI. contacto del hongo antagonista y patógeno. Se realizó de manera. DE. similar por cada placa en donde se evidenció crecimiento de. TE CA. Trichoderma asperellum en las tres concentraciones del quitosano.. BI BL I. O. 2.2.1.4.2. Lectura de los Resultados. Se tomó como índice de antagonismo la invasión del antagonista. sobre la superficie del micelio patógeno tomando en cuenta la escala mostrada en la tabla 1.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1. Escala de evaluación del antagonismo in vitro, tomando en cuenta la invasión de la superficie, colonización y esporulación. IC AS. de Trichoderma asperellum sobre Rhizoctonia solani según. LO. G. Bell et al33. DESCRIPCIÓN. BI. O. ESCALA. AS. Trichoderma sobrecrece completamente al patógeno y cubre totalmente la superficie del medio.. 2. Trichoderma sobrecrece las dos terceras partes de la superficie del medio.. 3. Trichoderma y el patógeno colonizan cada uno aproximadamente la mitad. EN CI. 1. CI. de la superficie y ningún organismo parece dominar al otro. El patógeno sobrecrece las dos terceras partes de la superficie del medio. DE. 4. 5. TE CA. y parece resistir a la invasión por Trichoderma. El patógeno sobrecrece completamente a Trichoderma y ocupa la superficie. BI BL I. O. total del medio.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.4.3. Análisis de datos La determinación de la compatibilidad de Trichoderma asperellum, con el Quitosano, se realizó analizando el porcentaje de germinación,. IC AS. porcentaje de crecimiento y el porcentaje de esporulación de T. asperellum., en las diferentes concentraciones de quitosano, y. (ANOVA),. para. determinar. si. existe. LO. Unidireccional. G. procesando los datos en bases la prueba de Análisis de Varianza diferencia. O. significativa entre los diferentes tratamientos empleados. Asimismo, el. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. EN CI. AS. BI. antagonismo se evaluó mediante la escala de Bell34. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. III. RESULTADOS. En la Figura 1. se observa que las tres concentraciones del Quitosano disminuyen la. G. germinación de esporas de Trichoderma asperellum, mientras que en la Figura 2 se. LO. presenta la observación microscópica de las esporas germinadas y no germinadas. BI. O. de Trichoderma asperellum.. AS. En la Figura 3. se observa que el porcentaje de crecimiento de Trichoderma. EN CI. asperellum no se ve disminuido por el quitosano mientras que en la Figura 4, se presenta el crecimiento radial de Trichoderma asperellum frente a las diferentes. CI. concentraciones de quitosano.. DE. En la Figura 5. se observa que el porcentaje de esporulación de Trichoderma. TE CA. asperellum se ve disminuido a medida que aumenta la concentración de quitosano.. En las Figura 6 y 7 se observa que el quitosano no disminuye la capacidad. O. antagónica de Trichoderma asperellum frente a Rhizoctonia solani, presentando. BI BL I. actividad antagónica de grado 1 en todos los tratamientos según la Escala de Bell et al.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI. a: p<0.05 Si existe diferencia significativa b: p>0.05 No existe diferencia. DE. significativa; a≠b. TE CA. Fig. 1. Porcentaje de germinación de Trichoderma asperellum a diferentes quitosano en condiciones de laboratorio.. BI BL I. O. concentraciones (ppm) de. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) CI. EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 2. Observación microscópica (40x) de esporas germinadas de Trichoderma asperellum. DE. frente a diferentes concentraciones de Quitosano: A) 0 ppm; B) 105 ppm; C) 210 ppm. BI BL I. O. TE CA. y D) 280 ppm, incubadas a temperatura ambiente.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) DE. CI. EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TE CA. a: p>0.05 No existe diferencia significativa. Fig. 3. Porcentaje de crecimiento de Trichoderma asperellum a diferentes concentraciones. BI BL I. O. (ppm) de quitosano, en condiciones de laboratorio.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) DE. CI. EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TE CA. Fig.4. Crecimiento radial de Trichoderma asperellum a la concentración de: A) 0 ppm; B). BI BL I. O. 105 ppm; C) 210 ppm y D) 280 ppm de Quitosano en condiciones de laboratorio.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) TE CA. DE. CI. EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. a: p<0.05 Si existe diferencia significativa. O. Fig. 5. Porcentaje de Esporulación de Trichoderma asperellum a diferentes. BI BL I. concentraciones (ppm) de quitosano, en condiciones de laboratorio a 25 °C.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) BI BL I. O. TE CA. DE. CI. EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 6. Cultivo dual de Trichoderma asperellum proveniente de tratamiento con Quitosano A) 0 ppm, B) 105 ppm, C) 210 ppm y D) 280 ppm frente a Rhizoctonia solani.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) BI BL I. O. TE CA. DE. CI. EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 7. Vista posterior del Cultivo dual de Trichoderma asperellum y Rhizoctonia solani a la concentración: A) 0 ppm; B) 105 ppm y C) 210 ppm D) 280 ppm de quitosano en condiciones de laboratorio.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV. DISCUSIÓN. IC AS. El uso de diferentes hongos como agentes de control biológico dentro de un programa de manejo integrado, busca que los beneficios de cada organismo en. G. particular no interfieran con otros factores. En el presente estudio se determinó el. LO. efecto del quitosano sobre la germinación de Trichoderma asperellum frente a las. O. diferentes concentraciones de quitosano donde el análisis de varianza determinó. BI. diferencias significativas (p < 0.05) entre el número de esporas germinadas y las. AS. diferentes concentraciones de Quitosano (ver Anexo 1) concluyéndose que el. EN CI. quitosano causa inhibición de la germinación de T. asperellum (Fig. 1). Estudios realizados por Boucias et al. establecen una probable explicación. CI. para la inhibición de la germinación de esporas (Fig. 2); ellos demostraron que el. DE. tratamiento de las esporas de los hongos con productos agroquímicos, tanto iónicos como moleculares, pueden neutralizar la carga electrostática de la superficie y/o. TE CA. remover la capa mucosa que recubre la espora, afectando así el proceso de reconocimiento de sustrato y la transducción de las señales de iniciación de la. O. germinación35.. BI BL I. Los autores St. Leger y Coopery al han demostrado también el papel que. cumple la eliminación de esta capa en el reconocimiento del sustrato y sobre la transducción de la señal que desencadena la formación del tubo germinal.36,. 37. Ghini y Kimati informaron que las moléculas de algunos químicos difunden al citoplasma donde se unen receptores específicos que afectan a la permeabilidad. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de membrana y la síntesis enzimática, por consiguiente, se ven afectados los procesos metabólicos38.. IC AS. El quitosano actúa principalmente en las etapas iniciales de crecimiento, retardando la germinación de esporas, puesto que el efecto inhibitorio se hace más modesto una vez que el hongo entra en la etapa de crecimiento apical 39. En la. LO. G. Figura 3, se muestran los resultados de crecimiento micelial de T. asperellum durante 120 h de incubación a 25 °C, encontrándose que, en comparación con el. BI. O. control, los tratamientos con quitosano no influyeron en el crecimiento de T. asperellum, pues estadísticamente se encontró (p>0.05) que no existe diferencia. EN CI. AS. significativa para las concentraciones de 105 a 280 ppm (ver Anexo 2 y 3). A los 5 días de incubación T. asperellum cubrió completamente las placas con medio Agar Sabouraud, con las concentraciones del Quitosano (Fig. 4), incluida la. CI. placa control. Esto implica que el principio activo evaluado no afecta de forma. DE. significativa los procesos que ocurren en la pared celular durante el desarrollo del hongo, así como no produciría cambios en la actividad metabólica a nivel vesicular. TE CA. pues T. asperellum por lo tanto tendría la energía suficiente para efectuar su crecimiento20, debido a que durante el crecimiento del hongo presenta un mayor. BI BL I. O. número de mecanismos que le permiten resistir el efecto de este biofungicida.2 La esporulación constituye otra fase importante del desarrollo fúngico. En esta. investigación el porcentaje de esporulación de T. asperellum fue diferente para las tres concentraciones evaluadas 105 ppm, 210 ppm y 280 ppm. Según la Figura 5 el. análisis. de. varianza. mostró. interacciones. significativas. para. dichas. concentraciones (p < 0.05) a las 24 h. Todas las concentraciones de quitosano. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. presentaron porcentajes de esporulación inferiores a los del control, que presentó el 100%.. IC AS. La concentración de 280 ppm fue la que presentó el menor porcentaje de esporulación con 7%. Existen diversas investigaciones relacionadas con la reducción del porcentaje de esporulación en hongos fitopatógenos, pero pocas. LO. G. referencias que evidencian la disminución del porcentaje de esporulación en pruebas con controladores biológicos. Hernández-Lauzardo et al40 encontraron una. BI. O. tendencia similar que refleja que mayores concentraciones de quitosano de bajo. AS. peso molecular generan mayores reducciones en la esporulación de Rhizhopus. EN CI. stolonifer.. En otro estudio se encontró que el quitosano a concentraciones menores del 1% afecta la esporulación de Botritis cinerea y Penicillium expansum al punto de. CI. disminuir considerablemente la cantidad de conidios. Una investigación mostró que. DE. el quitosano no tuvo efectos negativos cuando se agregó en concentraciones de 0,5 y 1 mg ml-1 al medio de cultivo para Beauveria. bassiana, Metarhizium robertsii. TE CA. Bisch, y Paecilomyces fumosoroseus, Pero a 2 mg ml-1 inhibieron ligeramente el crecimiento, aumentando la esporulación que podría ser importante para aumentar. O. la producción de unidades infecciosas para el control de plagas. Ghaouth et al. Y. BI BL I. Bhaskara Reddi et al41. Indican que posiblemente la inhibición de la esporulación se debe al estrés del hongo causado por el Quitosano por altas dosis. En la figura 6 y 7 se muestran los aislamientos de T. asperellum evaluados en. la prueba de antagonismo (0 ppm, 105 ppm, 210 ppm y 280 ppm), que se ubicaron en la categoría I de la escala de Bell et al. T. asperellum cubrió completamente al. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. patógeno Rhizotocnia solani (ver Anexo 5). Arzate et al describen luego de evaluar aislamientos nativos de Trichoderma que los cultivos con clases de antagonismo 1. IC AS. y 2 presentan perspectivas para ser utilizados en campo.39 Los autores Infante et al sostienen que el género Trichoderma es un agente de control biológico muy eficiente puesto que presenta una alta velocidad de. LO. G. crecimiento, abundante esporulación y una amplia gama de sustratos donde puede crecer debido a la riqueza de enzimas que posee. Las especies de Trichoderma resultados. satisfactorios. en. O. presentan. las. pruebas. de. BI. regularmente. AS. Antagonismo.42,43. EN CI. Se ha observado en experimentos realizados por Bell et al., quienes hallaron que un 65% de las cepas de este hongo se ubicaron en la clase I al evaluarse contra R. solani G-2 y un 85% se ubicó en la clase II al evaluarse contra el mismo hongo. DE. CI. R. solani AG-3.21. Los resultados obtenidos, están dados porque Trichoderma durante su. TE CA. crecimiento micelial y germinación presenta características antibióticas y enzimáticas que determinan su capacidad biótica y antagónica, además son fácilmente cultivables en media Agar sabouaud y la gran mayoría tienen rápido. BI BL I. O. crecimiento debido a que son competidoras por fuentes nutritivas20. Esto corrobora lo informado por Zunino, quien indica que existe diferencias significativas en la tasa de crecimiento individual entre las cepas de Trichoderma spp. Aisladas y comerciales.18 Las. especies. de. Trichoderma. crecen. quimiotrópicamente. hacia. el. hospedante, se adhieren a las hifas del mismo, se enrollan en ellas frecuentemente. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. y las penetran en ocasiones. La degradación de las paredes celulares del hospedante se observa en los estados tardíos del proceso parasítico44, que conlleva al debilitamiento casi total del fitopatógeno. Cuando la respuesta de. IC AS. reconocimiento es positiva, las hifas de Trichoderma se adhieren a las del hospedante mediante la formación de estructuras parecidas a ganchos y. G. apresorios, se enrollan alrededor de estas, todo esto está mediado por procesos. LO. enzimáticos. Por otra parte, una disminución de la velocidad de colonización de. O. Trichoderma spp., podría resultar en una situación desfavorable para el. BI. antagonista, favoreciendo la ocurrencia de la enfermedad, al disminuir su capacidad. AS. antagonista.45. EN CI. Según Martínez B, 46 la adherencia de las hifas de Trichoderma ocurre gracias a la asociación de un azúcar de la pared del antagonista con una lectina presente. CI. en la pared del patógeno. Además se conoce que ocurre la producción de enzimas. DE. líticas extracelulares, fundamentalmente quitinasas, glucanasas y proteasas, que degradan las paredes celulares del hospedante y posibilitan la penetración de las. TE CA. hifas del antagonista.47. Teniendo en cuenta las perspectivas de la agricultura a mundial de obtener. O. productos más sanos y disminuir el impacto sobre el medio ambiente, se deben. BI BL I. realizar las pruebas de compatibilidad de productos químicos y biológicos, lo que resulta de gran importancia para el manejo eficaz de un sistema agrícola.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V. CONCLUSIONES. IC AS. - El Quitosano disminuye significativamente la germinación y esporulación de Trichoderma asperellum a medida que aumenta la concentración 105, 210 y 280. G. ppm.. LO. - El quitosano no disminuye siginificativamente el crecimiento y la capacidad. O. antagónica de Trichoderma asperellum a medida que aumenta la concentración. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. EN CI. AS. BI. 105, 210 y 280 ppm.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. Evaluar en condiciones de campo el efecto del quitosano sobre Trichoderma. LO. -. G. IC AS. RECOMENDACIONES. O. asperellum debido a una serie de factores que influyen en el establecimiento. Al estimar el efecto del Quitosano, determinar si este, está actuando como. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. EN CI. fungicida o fungistático.. AS. -. BI. del hongo.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII.. 1.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Fernández E , Murguido C , Candanedo E: «Manejo integrado de plagas»,. IC AS. Primer Seminario de Refrescamiento del Curso Internacional de Papa para. Alumnos de América Latina y El Caribe, IAC-Holanda y MINAGRI,19 de. LO. 2.. G. febrero al 1 de marzo, La Habana, 1996. Tovar J. Evaluación de la capacidad antagonista in vivo de aislamientos de. BI. O. Trichoderma spp frente al hongo Fitopatógeno Rizoctonia solani. Enero 2008.. Oerke, E. Crop losses to pests. Journal of Agricultural Science. 2005; 1(1): 1-. EN CI. 3.. AS. Bogotá.. 13.. Stern V M, Smith RF, Van den Bosch R, Hagen KS. The integration of. CI. 4.. DE. chemical and biological control of the spotted alfalfa aphid. The integrated control concept. Hilgardia. 1959; 29(2): 81-101. Marin D, Romero R, Gusman M, Sutton T. Plant Disease, 87, 2008 (2003). 6.. Sánchez D, Bautista B, Castillo O, Anales de Biología, 29, 23 (2007).. 7.. Kean T, Thanou M. Biodegradation, biodistribution and toxicity of chitosan.. BI BL I. O. TE CA. 5.. Advanced Drug Delivery Reviews.2010; 62(1), 3-11.. 8.. Aider, M. Chitosan application for active bio-based films production and potential in the food industry: Review. LWT - Food Science and Technology.2010; 43(6): 837-842.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 21. TÉLLEZ-JURADO, A.; CRUZ, R. M. G.; FLORES, M. Y.; ASAFF, T. A.; ARANACUENCA, A. Mecanismos de acción y respuesta en la relación de hongos entomopatógenos e insectos. Revista mexicana de micología, v. 30,. IC AS. p. 73-80, 2009.. 22. Muiño, Berta Lina; Sáenz, Mercedes; Stefanova, Marusia; Porras, Ángela;. LO. G. Díaz, Isabel Compatibilidad de Trichoderma spp. con plaguicidas y fertilizantes en el cultivo del tabaco Fitosanidad, vol. 5, núm. 2, junio, 2001,. BI. O. pp. 3-9 Instituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal La Habana, Cuba. AS. 23. Michel Aceves A.; Otero Sánchez M.; Martínez Rojero R.; Ariza Flores R.;. EN CI. Barrios Ayala A. y Rebolledo Martínez A. Control biológico in vitro de enfermedades fungosas en tomate Lycopersicum esculentum Mill. Guerrero, México. Revista, Avances en Investigación Agropecuaria.2008; 12(3): 55-68. DE. CI. pp.. 24. Kubicek C, Bölzlbauer U, Kovacs W, Mach R, Kuhls K, Lieckfeldt E, Börner. TE CA. T, Sameuls G . Cellulase formation by species of Trichoderma sect. Longibrachiatum and of Hypocrea spp. with anamorphs referable to Trichoderma sect. Longibrachiatum. Fungal Genet. Biol.1996; 20 (1): 105-. BI BL I. O. 114. 25. Vizcaíno J, Sanz L, Basilio A, Vicente F, Gutiérrez S, Hermosa M, Monte E Screening of antimicrobial activities in Trichoderma isolates representing three Trichoderma sections. Mycol. Res.2005; 109(1): 1397-1406. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 46. .Martínez. B,. Fernández. L,. Solano. T.. Antagonismo. de. cepas. de Trichoderma frente a hongos fitopatógenos de la caña de azúcar, tomate. IC AS. y tabaco. Cultivos Tropicales. 1994;15(3):54. 47. Haram S, Schickler HL, Chet I. Molecular mechanisms of lictin enzymes. involved in the biocontrol activity of Trichoderma harzianum. Microbiology.. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. EN CI. AS. BI. O. LO. G. 1996;142:2321-2331.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) EN CI. AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL I. O. TE CA. DE. CI. ANEXOS. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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