Evaluación de la calidad espermática en reproductores de Oreochromis niloticus, Tilapia Roja, YY y XY

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EN CI A. S. BI. OL. OG. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. TE CA. DE. CI. “Evaluación de la calidad espermática en reproductores de Oreochromis niloticus, Tilapia Roja, YY y XY” TESIS. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE. IO. BIÓLOGO. BI BL. Autor: Br. Salirrosas Fernández, Remigio David Asesor: Dra. Zulita Adriana Prieto Lara TRUJILLO - PERU. 2015 i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. OG. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. BI. OL. RECTOR. EN CI A. S. Dr. Rubén Vera Véliz. CI. VICE-RECTOR ACADÉMICO. DE. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. BI BL. IO. TE CA. VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓN. Dr. Steban Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OG. DR. JOSÉ MOSTACERO LEÓN. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EN CI A. S. BI. OL. Decanato de la Facultad de Ciencias Biológicos. DR. WILLIAM ZELADA ESTRAVER. TE CA. DE. CI. Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas. DR. FREDDY PELAEZ PELÁEZ. BI BL. IO. Director de la Escuela Académico Profesional de Ciencias biológicas. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. IC AS. Señores Miembros del Jurado:. OG. En el cumplimiento con la disposición vigente parar el grado de título de la facultad de ciencias biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra. OL. consideración la presente tesis titulada: Evaluación de la calidad espermática en. EN CI A. S. BI. reproductores de Oreochromis niloticus “Tilapia Roja” YY y XY. DE. CI. Espero que la presente sea de vuestra aprobación.. BI BL. IO. TE CA. Trujillo, Diciembre de 2015. Br. Salirrosas Fernández, Remigio David. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. IC AS. El que suscribe Dra. Prieto Lara, Zulita Adriana, profesora principal a dedicación exclusiva, de la Facultad de Ciencias Biológicas, del departamento académico. calidad espermática en reproductores. de Oreochromis niloticus “Tilapia. YY y XY; deja constancia qua la presente ha sido desarrollado de. OL. Roja”. OG. profesional de Ciencias Biológicas, profesora asesora de la tesis: Evaluación de la. BI. conformidad con los criterios y disposiciones propuestos por la Universidad Nacional. S. de Trujillo, tomando en cuenta las orientaciones brindadas al investigador y. DE. CI. EN CI A. acogiendo las sugerencias pertinentes.. BI BL. IO. TE CA. Dra. Prieto Lara, Zulita Adriana. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OL. OG. IC AS. MIEMBROS DEL JURADO. --------------------------------------------. CI. EN CI A. S. PRESIDENTE. BI. Dra. Zulita Adriana Prieto Lara. DE. -------------------------------------------Dr. Danilo Gastañadui Rosas. BI BL. IO. TE CA. SECRETARIO. -----------------------------------------------Mg. Carlos Quijano Jara VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. IC AS. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y. OL. OG. fundamentales, siendo aprobado por unanimidad.. BI. -------------------------------------------Dra. Zulita Adriana Prieto Lara. CI. EN CI A. S. PRESIDENTE. DE. --------------------------------------------. SECRETARIO. BI BL. IO. TE CA. Dr. Danilo Gastañadui Rosas. -----------------------------------------------Mg. Carlos Quijano Jara VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. DEDICATORIA. A DIOS por siempre estar a mi lado en los momentos más difíciles brindándome su. OG. bendición.. A mi madre Hilda, por ser el pilar más importante y por demostrarme siempre su. OL. cariño y apoyo incondicional. A mi padre Pedro quien con su consejo ha sabido. S. que siempre han estado a mi lado. EN CI A. A mis hermanos Luis, Julio y Susana. BI. guiarme para culminar mi carrera profesional.. brindándome su apoyo, por todo este arduo comino y compartir con migo momentos alegrías y fracasos. Y ser las personas más importantes en mi vida.. CI. A todos los profesores de la facultad de ciencias bilógicas por sus enseñanzas y la. DE. paciencia en toda mi formación académica. Brindándome todo el conocimiento. TE CA. necesario para poder ser un mejor profesional y mejor persona. A mis amigos que siempre estuvieron a mi lado brindándome su apoyo en los. IO. buenos y malos momentos.. FINANCIACION. BI BL. La tesis fue financiada por CANON MINERO del proyecto: “Mejoramiento Genético de tilapia (PIC04/UNT-Primera convocatoria).. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. AGRADECIMIENTO. A DIOS porque sin su ayuda no hubiera podido realizar la presente tesis, dándome. OG. la fuerza necesaria para ir logrando pasó a paso la culminación de mi carrera.. A mis padres por su infinito apoyo, que a pesar que hubo momentos muy difíciles. OL. donde parecía que se perdía todo siempre estuvieron a mi lado apoyándome en. BI. todo momento.. EN CI A. S. A mis hermanos por estar siempre a mi lado dándome su apoyo y confianza en mí, siempre apoyándome en los malos y buenos momentos. A mi asesora, la Dra. Prieto Lara, Zulita Adriana, mi más amplio agradecimiento por. CI. su paciencia ante mi inconsistencia, por su valiosa dirección y apoyo para seguir. DE. este camino de tesis y llegar a la conclusión del mismo. A todos mis compañeros y amigos, estén en donde estén, y sin excepción tanto de. TE CA. mi promoción como de otras promociones, ya que con ellos he compartido aulas y laboratorios e incontables horas de trabajo y buenos y malos ratos, por el respaldo. BI BL. IO. y su amistad.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE Paginas. IC AS. Autoridades de la Facultad de la Universidad Nacional de Trujillo……………….…….……..i Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas………………………………....…...…….ii. OG. Presentación…………………………………………………………………………….….……….ii. OL. Del Asesor………………………………………………………………………………….……….iv. BI. Miembros del Jurado……………………………………………………………………………….v. S. Aprobación…………………………………………………………………………………….……vi. EN CI A. Dedicatoria…………………………………………………………………….……….…vii Agradecimiento………………………………………………………….…….…...…....viii. CI. Índice………………………………………………………………………….….………..ix. DE. Lista de tablas………………………………………………………….……………….…xi. TE CA. Lista de figuras……………………………………………………………..……..……..xii Resumen…………………………………………………………….…………………..xiii. IO. Abstract…………………………………………………………………………………...xiv. BI BL. INTRODUCCION………………………………………………………………………….1. MATERIALES Y METODOS…………………………………………………………….4 RESULTADOS……………………………………………………………..……………10. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Volumen………………………………………………….…………………………..10. IC AS. Movilidad………………………………….………….………………………………10 Motilidad……………………………………………….……………………………..11. OG. Viabilidad……………………………………………..………………….…………..11. OL. Concentración de espermatozoos………………….………………….………….12. BI. Correlación entre parámetros de calidad espermática…………………………12. S. Evaluación de la morfología espermática……………………………………….12. EN CI A. DISCUSION………………………………………………………………………………29 CONCLUSIONES………………………………………………………………………..32. CI. BIBLOGRAFIA…………………………..………………………………………………33. BI BL. IO. TE CA. DE. ANEXOS………………………………………………………………………………….38. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. LISTA DE TABLAS. OG. Tabla 1. Evaluación del volumen de semen de Oreochromis niloticus YY y XY.. Tabla 2. Evaluación de la movilidad espermática de Oreochromis niloticus XY y. BI. OL. YY.. S. Tabla 3. Evaluación de motilidad espermática (minutos) de individuos Orechromis. EN CI A. niloticus XY y Oreochromis niloticus YY, activado con agua dulce y agua destilada.. CI. Tabla 4. Evaluación del porcentaje de viabilidad de espermatozoides con el test. DE. Eosina en individuos Oreochromis niloticus XY y O. niloticus.. TE CA. Tabla 5. Correlación entre parámetros de calidad de espermatozoides de. IO. Oreochromis niloticus XY.. BI BL. Tabla 6. Correlación entre parámetros de calidad de espermatozoides de Oreochromis niloticus YY.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. LISTA DE FIGURAS. Figura 1: Comparación de volúmenes de esperma (ml) de individuos Orechromis. OG. niloticus YY y Oreochromis niloticus XY. p>0.05.. OL. Figura 2: Porcentaje de la movilidad espermática de Oreochromis niloticus en las. BI. categorías: movimiento progresivo lineal rápido (MPLR), movimiento. EN CI A. S. progresivo lento (MPL), movimiento in situ (MIS) e inmóviles (I).. Figura 3: Comparación de motilidad espermática (minutos) de individuos. CI. Oreochromis niloticus XY y Oreochromis YY. (A): activado con agua. TE CA. DE. dulce para cultivo de peces y (B) agua destilada.. Figura 4: Viabilidad; espermatozoides de Oreochromis niloticus, evaluado por test de Eosina, observados en Microscopio óptico 100x, filtro 6. Los. IO. espermios no coloreados son considerados como vivos y los espermios. BI BL. coloreados son considerados como muerto. Figura 5: Comparación de viabilidad de espermatozoides vivos activado con agua destilada Orechromis niloticus XY y Oreochromis niloticus YY, xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Figura 6: Concentración de espermatozoides activos y diluidos en una. cámara de. Neubauer observados al microscopio óptico 40X. (A) Oreochromis niloticus XY. IC AS. y (B), Oreochromis niloticus YY. OG. Figura 7: Concentración espermatozoides de Oreochromis niloticus YY y. BI. OL. Oreochromis niloticus XY.. Figura 8: Espermatozoides de Oreochromis niloticus, evaluado con coloreado con naranja. EN CI A. S. de acridina, observados en Microscopio Olympus BX51 de fluorescencia 100x, filtro 2. A. espermatozoides con doble cola. B. espermatozoide normal.. Oreochromis niloticus con dos flagelos, evaluado con. CI. Figura 9: Espermatozoide de. TE CA. DE. coloreado con Giemsa, observados en Microscopio óptico 100X.. Figura 10: Partes de un espermatozoide de Oreochromis niloticus, coloreado con eosina,. BI BL. IO. observados con microscopio óptico 100X. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. IC AS. El objetivo del presente trabajo fue determinar la calidad espermática de reproductores de Oreochromis niloticus, “tilapia Roja, de machos YY y XY a través de la evaluación del volumen, movilidad, motilidad, viabilidad, morfología y. OG. concentración de espermatozoides. El promedio de volumen de esperma (ml) para. OL. los machos XY y YY fue de 0.22±0.17 y 0.38±0.34 respectivamente, concentración. BI. espermática (x109 espermatozoides/ml) para los machos XY y YY fue de 1.7484 y 4.2446 respectivamente y la viabilidad (% de espermatozoides vivos) para los. EN CI A. S. machos XY y YY fue de 71.45±38.91 y 91.79±3.97.Para evaluar la motilidad (% espermatozoides) de los machos XY y YY, los espermas no fueron activados con agua dulce. y se obtuvo como resultado un mayor porcentaje en la categoría. CI. inmóviles 96.57±3.96 y 90.68±9.88 respectivamente. La movilidad (minutos) para los machos XY y YY, los espermas fueron evaluados con agua destilada con un. DE. promedio de 21.9±14.14 y 36.3±26.51 respectivamente y para agua dulce fue de. TE CA. 32.6±18.06 y 54.7±30.42 respectivamente. La morfología de las células. BI BL. IO. espermáticas se obtuvo más del 90% de espermatozoides normales.. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. IC AS. The aim of this study is to determine quality of sperm of broodstock Oreochromis niloticus, "Red tilapia, YY and XY males through volume assessment, mobility, motility, viability, and morphology and sperm concentration. The average. OG. sperm volume (ml) for XY and YY males was 0.22 ± 0.17 and 0.38 ± 0.34. OL. respectively, sperm concentration (x109 sperm / ml) for XY and YY males was. BI. 1.7484 and 4.2446 respectively, and viability ( % of live sperm) for XY and YY males was 71.45 ± 38.91 and 91.79 ± 3.97. For evaluate motility (% spermatozoa) XY and. EN CI A. S. YY males, the sperm were not activated with fresh water and obtained as a result the highest percentage in the category immobile 96.57 ± 3.96 and 90.68 ± 9.88 respectively. Mobility (minutes) for the XY and YY male sperm were evaluated with. CI. distilled water with an average of 21.9 ± 36.3 ± 14.14 and 26.51 respectively and fresh water was 32.6 ± 54.7 ± 18.06 and 30.42 respectively. The morphology of the. BI BL. IO. TE CA. DE. sperm cells obtained more than 90% of normal sperm.. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN Oreochromis niloticus es una especie bisexual, que al ser criados de manera. IC AS. comercial, los desoves no controlados pueden llegar a altas densidades incontroladas para un buen manejo en el crecimiento, generada por el crecimiento. OG. asincrónico por la coexistencia de poblaciones de peces de distintas edades, competencia por territorio y alimento. Por ello, la preferencia del cultivo de progenies. OL. monosexos machos, obtenidos por el cruce de Oreochromis niloticus por. BI. Oreochromis aurea (Pruginin et al., 1976), poblaciones con alto porcentaje de. S. machos por reversión sexual a machos inducida por andrógenos (Hiott y Phelps,. EN CI A. 1993, Vera y Mair, 1994, Gale et al., 1999), o monosexos masculinos obtenidos por hibridación de Oreochromis niloticus supermachos YY con hembras XX (Scott et. CI. al., 1989).. Para el manejo reproductivo de tilapia, es importante la selección de machos. DE. con las mejores habilidades reproductivas para garantizar la reproducción efectiva.. TE CA. Entre las características reproductivas para la selección de reproductores machos es fundamental la evaluación de la calidad espermática. En Orechromis niloticus se han realizado estimaciones del volumen de semen, concentración, movilidad,. IO. motilidad y viabilidad de espermatozoides (Rurangwa et al., 2004, Gennotte et al.,. BI BL. 2012). Estimaciones que son propios de un stock poblacional que depende de las características genéticas y condiciones del ambiente en un momento dado.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se han demostrado la variación de la capacidad espermática de los peces por efectos de tamaño del cuerpo, cambios estacionales que causan variaciones de. IC AS. temperatura del agua, horas de luminosidad, nutrición, salinidad, pH del agua, inducción hormonal de espermiación (Rurangwa, 2004, Butts et al., 2010, Bobe y Labbé 2010, Vuthiphandchai et al., 2009) y disfunciones reproductivas cuando son. OG. mantenidos en cautiverio (Zohar y col., 2001). Sobre la calidad espermática en O.. OL. niloticus se reporta los estudios de Gennotte et al., 2012 en la demuestran que los. BI. machos revertidos XX, machos YY y machos XY tienen la misma calidad de. S. esperma.. distinguen. por. sus. EN CI A. O. niloticus incluye variaciones por la genética de los linajes que se características. morfológicas,. reproductivas. y. calidad. espermática, linajes con mayor distribución en diferentes países lo constituyen: O.. CI. niloticus gris, O. niloticus roja, O. niloticus plateada obtenidas en diferentes centros. DE. de producción por mejora genética y que al ser introducidos en diferentes países con variaciones climáticas se producen interacciones genéticos ambientales, y. TE CA. sumado a las hibridaciones locales requieren mayores investigaciones sobre la calidad espermática como un marcador adicional para la selección de reproductores. IO. y determinar la estabilidad genética de la habilidad reproductiva de los machos.. BI BL. Estudios sobre la morfología de espermatozoides de los teleósteos refieren. la conformación de tres partes principales: cabeza, parte media y flagelo, como la citada en Alcolapia grahami una especie de los cíclidos (Papah et al., 2013), espermatozoides que se distinguen por la ausencia de acrosoma como la reportada para O. niloticus (Ramírez et al., 2011). La característica importante de la pieza 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. intermedia es la presencia de mitocondrias que estaría asociado al movimiento flagelar del espermatozoide, que permanecen en su mayoría inmóviles hasta el. IC AS. contacto acuoso producida por la liberación de los espermatozoides al medio acuícola (Musa, 2010).. OG. En la Universidad Nacional de Trujillo existe un plantel de reproductores de O. niloticus tilapia roja procedente de Til Aqua, Holanda, machos YY y machos XY. OL. que se realizan cruzamientos con individuos locales con la finalidad de obtener. BI. mejoras en la tasa de crecimiento y para lo cual es importante la evaluación de la. S. capacidad espermática de los individuos para la selección de reproductores, motivo objetivo determinar la calidad. EN CI A. por el cual la presente tesis plantea como. espermática de reproductores de Oreochromis niloticus, “tilapia Roja, de machos YY y XY a través de la evaluación del volumen, movilidad, motilidad, viabilidad,. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. morfología y concentración de espermatozoides.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS Ubicación geográfica. IC AS. La investigación se llevó a cabo en la Estación de Mejoramiento Genético de. OG. Tilapia (EMGT), ubicada en el Universidad Nacional De Trujillo. OL. Material biológico. Se seleccionara diez ejemplares machos en edad reproductiva de Tilapia. BI. Roja (Oreochromis niloticus) YY y diez machos en edad reproductiva de. EN CI A. S. Tilapia Roja (Oreochromis niloticus) XY obtenidos de EMGT. Los reproductores de un peso promedio de 398.9571 gr para O. niloticus YY y de 614.9286 gr para O. niloticus XY. Fueron mantenidos a una temperatura 24. TE CA. Diseño experimental. DE. CI. ºC±2.. Obtención de semen según Renán y col. (1991) La obtención del semen se realizó mediante extrusión o masaje en dirección. IO. cráneo-caudal sobre la región abdominal.. BI BL. Los parámetros movilidad, viabilidad, morfología y concentración de espermatozoides se evaluaron según Bastardo y col. (2004) con unas modificaciones y para el grado de motilidad según Sánchez y Billard (1977).. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. a) Volumen: Para determinar el volumen se evaluó a 10 machos de O. niloticus YY con. IC AS. un peso promedio de 398.95714 gr. y 10 machos O. niloticus XY con un peso promedio de 614.928557. El semen fue colectado con una jeringa graduada. OG. (1ml) y conservados a temperatura ambiente (23ºC aproximadamente).. OL. b) Movilidad:. BI. La movilidad espermática se evaluó colocando en una lámina portaobjeto 0,05 μl de la muestra, y sobre ella se colocara una laminilla de 22 x 22 mm.. EN CI A. S. Se utilizó microscopio con lente de 100 X, eligiendo de 8 a 10 campos, prefiriendo la parte central de la lámina, nunca los bordes y una vez obtenido el campo se defino las categorías de movimiento contando los. CI. espermatozoides que las presentaron hasta llegar a contar 100. Los. categorías:. DE. resultados se presentaran en porcentaje. El movimiento se clasificó en 4. TE CA.  movimiento progresivo lineal rápido;  movimiento progresivo lento;  movimiento in situ;. BI BL. IO.  e inmóviles.. %𝑀𝑜𝑣𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 =. #𝐸𝑠𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑖𝑑𝑒𝑠 𝑚𝑜𝑣𝑖𝑙𝑒𝑠 × 100 #𝐸𝑠𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑖𝑑𝑒𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠. c) Motilidad:. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La motilidad espermática fue activada después de activar la muestra con agua de cultivo (Temperatura a 24ºC y oxigeno de 4.77 mg l-1) y agua. IC AS. destilada. La motilidad fue evaluada sobre un portaobjetos bajo un microscopio compuesto con un aumento de 100X. El grado de motilidad fue estimado usando una escala de unidad arbitraria de 0 a 5 propuesta por. BI. OL. niloticus y los 10 machos XY Oreochromis niloticus.. OG. Sanchez-Rodriguez y Billard (1977) a los 10 machos YY Oreochromis. EN CI A. S. Tabla 1: índice numérico para la evaluación de la motilidad espermática Índice. Características de motilidad. 5. La mayoría de los espermatozoides muestra movimiento rápido, es imposible seguir la trayectoria de cualquier espermatozoide. Muchos espermatozoides se mueven rápidamente mientras que algunos. CI. 4. se mueven lentamente.. Tres clases de espermatozoides pueden ser encontrados en números. DE. 3. equivalentes: espermatozoides con movimiento rápido, espermatozoides 2. TE CA. con movimiento lento o vibratorio, y aquellos que permanecen inmóviles. Muchos espermatozoides tienen vibración están inmóviles, mientras que algunos presentan movimiento hacia delante. Muchos espermatozoides son inmóviles y algunos presentan vibración. IO. 1. BI BL. lateral.. d) Viabilidad: 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La viabilidad se determinó contando los espermatozoos inmóviles, observándose cuantos estaban vivos y muertos. La coloración que se empleó 0,05 μl de semen sobre una lámina. IC AS. fue el Test de Eosina. Se mezcló. portaobjeto con un volumen igual de solución de Eosina Y al 5%, se cubrió el preparado con una laminilla y se esperara de uno a dos minutos para luego. OG. observar al microscopio con 100 X. Se contaran los espermatozoos no. OL. coloreados como vivos y los coloreados como muertos, hasta un total de 100. BI. células. Más del 50% de espermatozoos no coloreados serán considerados. #𝐸𝑠𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑖𝑑𝑒𝑠 𝑣𝑖𝑣𝑜𝑠 × 100 #𝐸𝑠𝑝𝑒𝑟𝑚𝑎𝑡𝑜𝑧𝑜𝑖𝑑𝑒𝑠 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠. CI. %𝑉𝑖𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 =. EN CI A. S. como normales.. DE. e) Concentración de espermatozoos:. TE CA. La concentración de espermatozoos se determinó utilizando el método de recuentos de las células sanguíneas. Las células espermáticas se inmovilizaran utilizando un líquido diluyente compuesto por bicarbonato de. IO. sodio (5 g), formol (1ml) y agua destilada (100 mL).. BI BL. Se realizó la dilución de acuerdo a la cantidad de espermatozoos observados en el examen preliminar. La dilución empleada será 1:50 (20 μL de semen y 980 μL de diluyente), luego se llenaron las dos cámaras del Hematimetro de Neuvauer (0.05 μL por cámara). Se cubrió con una laminilla y se dejara reposar durante 5 minutos. Se observara en un microscopio con aumento de 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100X.Para determinar la concentración (mL) se dividió la cantidad de. Cuadro 1: Dilución y factores de corrección utilizados.. OG. 2 1 0,4 5. OL. Factores 10 4 5 2 2 0,8 25 10. BI. se multiplicó. EN CI A. S. Dilución 1:10 1:20 1:50 No. de cuadrados contados El resultado obtenido por 1.000.000. IC AS. espermatozoos por los factores de corrección que se indican en el cuadro 1.. f) Morfología:. CI. La morfología se determinó por la diferencial de los tipos de espermatozoides. DE. normales y anormales. El estudio citomorfológico se realizó con un objetivo de 100X y se observaran por lo menos 100 espermatozoos en un extendido. TE CA. coloreado con Giemsa. Los espermatozoos se agruparan de la siguiente manera:. a. Espermatozoos normales.. IO. b. Defectos de la cabeza: cabezas pequeñas, cabezas amorfas, cabezas. BI BL. alargadas, forma de pera (en inglés, tapering).. c. Defectos de cola.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Una muestra de semen se considera con morfología normal cuando se encontró más de 30% de formas normales y anormales cuando se encontrara. IC AS. menos de 30% de formas normales.. Análisis estadístico. OG. Para los resultados se utilizó valores promedios, desviación estándar con una. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. EN CI A. S. BI. OL. prueba de comparaciones de t-student con un nivel de significancia de α=0.05. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. IC AS. Volumen de semen Se evaluaron 14 individuos de O. niloticus XY tuvieron un peso promedio de 614.929g. y el volumen de semen que se registró estuvo en un rango de. OG. cero a 0.56 ml con un promedio de 0.22 ± 0.17 ml y de los 14 individuos de. OL. O. niloticus YY con el peso promedio de 398.957g se obtuvo volúmenes de. BI. semen, en el rango de 0.08ml y 1,4ml, con promedio de 0.38±0.34 ml, se observó mayor volumen seminal en los machos YY comparado con el XY sin. EN CI A. S. diferencias significativas (tc=1.573, p>0.05), con 88.03 % de coeficiente de variación para YY y 79.93% para XY (Figura 1, Tabla 1).. CI. Movilidad de espermas. DE. La movilidad espermática evaluada en espermatozoides sin el contacto acuoso de 10 machos de O. niloticus XY y 10 machos O. niloticus YY,. TE CA. presentó un promedio de 0.43±0.72 espermatozoides para la categoría movimiento progresivo lineal rápido (MPLR) en machos XY y para O. niloticus YY fue 3.36±5.27 espermatozoides con diferencias significativas entre sí. IO. (tc=2.059, p<0.05). El número de espermatozoides con movimiento. BI BL. progresivo lento (MPL) fue menor en los machos XY comparado con el MPL en machos YY (0.48±0.99 y 1.11±1.29, respectivamente) sin diferencia significativa (tc=1.43, p>0.05). Espermatozoides en la categoría de movimiento in situ (MIS) se reporta un valor promedio de 2.50±3.2 espermatozoides par O. niloticus XY y para O niloticus YY, 4.73±4.55, sin 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. diferencia significativas (tc=0.145, p>0.05) y en la categoría inmóviles (I) 96.57±3.96 espermatozoides para O. niloticus XY y para O. niloticus YY fue. IC AS. de 90.68±9.88 (tc=1.50, p>0.05) (Figura 2, tabla 2).. Motilidad:. OG. Se evaluó la muestra de semen de cada individuo agregando agua dulce. OL. para cultivo apta para tilapia y agua destilada. En la figura 3 y tabla 3 se. BI. muestra que en agua dulce los espermatozoides tienen un tiempo de motilidad mayor que los espermatozoides activados con agua destilada. En. EN CI A. S. promedio 32.6±18.06 minutos para O. niloticus XY y en O. niloticus YY fue de 54.7±30.42 minutos en espermatozoides activados con agua dulce y en la activación con agua destilada fue de 21.9±14.14 minutos para O. niloticus. Viabilidad:. DE. CI. XY y O. niloticus YY fue de 36.3±26.51 minutos.. TE CA. La viabilidad espermática evaluada con el test de Eosina, se encontró que los promedios de los espermatozoides de O. niloticus XY vivos son de 71.45±38.91% y para O. niloticus YY el promedio de los espermatozoides. IO. vivos fue de 91.79±3.97% sin diferencias significativas (tc=1.9455, p>0.05).. BI BL. (Figuras 4 y 5 y tabla 4). Se reporta más del 50% de espermatozoides son vivos tanto para machos XY como para machos YY, dentro del rango normal.. Concentración de espermatozoides: 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La concentración de espermatozoides de O. niloticus XY fue de 1.7484 x109 espermatozoides/ ml y la concentración de los espermatozoides de O.. Correlación entre parámetros de calidad espermática. IC AS. niloticus YY fue 4.2446 x109 espermatozoides/ ml (Figuras 6 y 7).. OG. Se estimó los coeficientes de correlación de los parámetros de calidad. OL. espermática y no presentaron asociación del peso de los individuos con los parámetros de volumen seminal, viabilidad de esperma y concentración de. BI. esperma tanto en O. niloticus XY como en los .O. niloticus YY. Sólo en los. EN CI A. S. machos XY presentaron correlación positiva significativa entre volumen seminal y viabilidad de esperma, volumen seminal y concentración de esperma así como correlación positiva significativa entre concentración y. CI. viabilidad de esperma.. DE. Evaluación de la morfología espermática Se evaluó la morfología espermática en muestras coloreadas con Giemsa,. TE CA. se encontró que los promedios de los espermatozoides normales para O. niloticus YY son de 99.7054 y de los defectos de la cabeza y de la cola es de. IO. 0.0714 y 0.2232 respectivamente, y para O. niloticus XY los espermatozoides. BI BL. normales fue de 78.2411 y de los defectos de la cabeza y de la cola es de 0.2232 y 07.2410 respectivamente (Figuras 8; 9 y 10).. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. DE. Figura 1: Comparación de volúmenes de esperma (ml) de individuos Orechromis niloticus YY y Oreochromis niloticus XY. p>0.05.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. O. niloticus XY. 14. O. niloticus YY. 14. CI. n. X. SD. CV (%). 0.22. 0.18. 79.93. 0.38. 0.34. 88.03. DE. Machos. EN CI A. S. Tabla 1: Evaluación del volumen de semen de Oreochromis niloticus YY y XY. BI BL. IO. TE CA. n: Número de individuos ;X : Promedio (ml) ; SD: Desviación estándar (ml), CV: coeficiente de variación; p>0.05.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Porcentaje de la movilidad espermática de Oreochromis niloticus. OG. 120. OL. 80 60 40. BI. Porcentaje. 100. YY XY. LR. EN CI A. 0. S. 20. L. IS. I. 3.357142857. 1.107142857. 4.732142857. 90.67853571. 0.428571429. 0.482142857. 2.5. 96.57142857. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. Figura 2: Porcentaje de la movilidad espermática de Oreochromis niloticus en las categorías: movimiento progresivo lineal rápido (MPLR), movimiento progresivo lento (MPL), movimiento in situ (MIS) e inmóviles (I).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2: Evaluación de la movilidad espermática de Oreochromis niloticus XY y. XY. 0.43b. 0.48 ns. YY. 3.38a. 1.11 ns. MIS. I. 2.50 ns. 96.57d. 4.73 ns. 90.68c. BI. MLP. S. MPLR. EN CI A. Machos. OL. YY.. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. MPLR: movimiento progresivo lineal rápido; MLP: movimiento progresivo lento; MIS: movimiento in situ; I: inmóviles. a, b, c y d: Diferencias significativas entre machos YY y XY p<0.05. ns sin diferencias significativas p>0.05.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. OG OL. 60 50. BI. 40. S. 30. EN CI A. Tiempo Tiempo (minutos). 70. 20. Tilapia XY. Macho XY. Macho YY. DE. 30 20. Tratamiento. CI. 40. TE CA. Tiempo Tiempo (minutos). 50. Tilapia YY. 10. 0. IO. B. Tilapia XY. Macho XY. Tilapia YY. Macho YY. Tratamiento. BI BL. Figura 3: Comparación de motilidad espermática (minutos) de individuos Oreochromis niloticus XY y Oreochromis YY. (A): activado con agua dulce para cultivo de peces y (B) agua destilada.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. Dulce. XY. 10. YY. 10. XY. 18.06. 32.6 ns 54.7 ns. 30.42. 10. 21.9 ns. 14.14. 10. 36.3 ns. 26.51. CI. YY. SD. EN CI A. Destilada. X. BI. Machos. S. Agua. OL. Tabla 3: Evaluación de motilidad espermática (minutos) de individuos Orechromis niloticus XY y Oreochromis niloticus YY, activado con agua dulce y agua destilada,. BI BL. IO. TE CA. DE. n: Número de individuos ; X: Promedios ; SD: Desviación estándar; ns sin diferencias significativas p>0.05.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) DE. CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. Figura 4: Viabilidad; espermatozoides de Oreochromis niloticus, evaluado por test de Eosina, observados en Microscopio óptico 100x, filtro 6. Los espermios no coloreados son considerados como vivos y los espermios coloreados son considerados como muerto. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) DE. CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. Figura 5: Comparación de viabilidad de espermatozoides vivos activado con agua destilada Orechromis niloticus XY y Oreochromis niloticus YY,. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. n. X. O. niloticus XY. 14. 91.79. 3.97 ns. O. niloticus YY. 14. 38.91 ns. BI. Machos. S. OL. OG. Tabla 4: Evaluación del porcentaje de viabilidad de espermatozoides con el test Eosina en individuos Oreochromis niloticus XY y O. niloticus YY.. EN CI A. 71.45. SD. n: Número de individuos ; X: Promedios ; SD: Desviación estándar;. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. ns sin diferencias significativas p>0.05.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TE CA. DE. CI. A. BI BL. IO. B. Figura 6: Concentración de espermatozoides activos y diluidos en una cámara de Neubauer observados al microscopio óptico 40X. (A) Oreochromis niloticus XY y (B), Oreochromis niloticus YY. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) DE. CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. Figura 7: Concentración espermatozoides de Oreochromis niloticus YY y Oreochromis niloticus XY.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de. calidad. de. BI. Tabla 5. Correlación entre parámetros espermatozoides de Oreochromis niloticus XY. S. EN CI A. -. 0.038. -. 0.137. 0.648*. -. 0.716*. 0.645*. DE. Peso Volumen de semen Viabilidad de esperma Concentración de esperma. Peso. CI. Parámetros. Volumen Viabilidad de de Concentración semen esperma de esperma. -. TE CA. 0.338. BI BL. IO. *Diferencias significativas p<0.05. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OL. Tabla 6. Correlación entre parámetros de calidad de espermatozoides de Oreochromis niloticus YY. BI. Viabilidad de esperma. S. Concentración de esperma. EN CI A. -. 0.231. -. 0.003. 0.107. -. 0.131. 0.093. 0.323. -. BI BL. IO. TE CA. DE. Peso Volumen de semen Viabilidad de esperma Concentración esperma. Volumen de semen. CI. Parámetros. Peso. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TE CA. B. DE. CI. EN CI A. S. A. BI BL. IO. Figura 8: Espermatozoides de Oreochromis niloticus, evaluado con coloreado con naranja de acridina, observados en Microscopio Olympus BX51 de fluorescencia 100x, filtro 2. A. espermatozoides con doble cola. B. espermatozoide normal.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) DE. CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. Figura 9: Espermatozoide de Oreochromis niloticus con dos flagelos, evaluado con coloreado con Giemsa, observados en Microscopio óptico 100X.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PIEZA MEDIA. EN CI A. S. BI. CABEZA. DE. CI. COLA. BI BL. IO. TE CA. Figura 10: Partes de un espermatozoide de Oreochromis niloticus, coloreado con eosina, observados con microscopio óptico 100X.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSION Los reproductores machos de Oreochromis niloticus YY presentaron un volumen. IC AS. mayor que los reproductores O. niloticus XY, sin embargo por el alto grado de variación el análisis estadístico reflejó ausencia de diferencias significativas, aun. OG. cuando el peso de los individuos los machos XY tuvieron un peso significativamente mayor, comparado con el peso de los machos YY. De acuerdo a los resultados no. OL. existe correlación significativa del peso con respecto al volumen seminal, por. BI. consiguiente para asegurar la efectividad en la reproducción y teniendo en cuenta. S. la proporción de un macho con 2 a 4 hembras, no es suficiente considerar el peso. EN CI A. y tamaño del reproductor sino también es indispensable la evaluación de la cantidad y calidad espermática. El valor promedio registrado en el presente trabajo para los machos XY, estuvo en el rango de los reportes para O. niloticus XY, 0.4 ml (Matavelli. CI. et al., 2007), 0.19 ml (Bombardelli et al., 2010) y 0.30 ± 0.34 ml (Sanches et al.,. DE. 2011) y el valor promedio de los machos YY en los reproductores estudiados fue. TE CA. mayor con los reportes mencionados. En el presente trabajo se ha considerado el estudio de la forma de movilidad de los espermatozoides en muestras de semen sin exposición al medio acuoso, en la que. IO. permite clasificar y cuantificar la forma de movimiento que tienen los. BI BL. espermatozoides, parámetro importante como indicadores de funcionalidad normal de los espermatozoides. Ya que de acuerdo a las evaluaciones en otras especies dan cuenta del grado de desplazamiento de los espermatozoides y la capacidad fecundante (Bastardo et al., 2004).. El porcentaje superior al 90% de. espermatozoides inmóviles de los espermas se demostró tanto para machos XY 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. como para YY que es concordante por el tipo de fecundación externa de los peces de tilapia. Del porcentaje 9% que presentan movimiento sin la inducción de. IC AS. activación, presentaron en mayor porcentaje el tipo de movimiento rápido los espermatozoides de los machos YY comparada con los espermas de machos XY. Estudios del tipo de movimiento flagelar en muestras de semen sin la inducción de. OG. actividad no se reportan en O. niloticus.. OL. Los espermatozoides al estar en contacto con un medio acuoso son activados de. BI. manera inmediata concordante con lo reportado por Valdebenito et al., 2000 y el. S. parámetro de estudio lo constituye la motilidad de los espermatozoides. La motilidad. EN CI A. de los espermatozoides activados con agua dulce para el cultivo de tilapia tuvo un porcentaje de activación del 100% con una. duración de 55’10” para los. espermatozoides de O. niloticus YY en ventaja a los espermatozoides de O. niloticus. CI. XY y con agua destilada un tiempo menor comparado con la activación con agua. DE. dulce tanto para los machos XY como para los YY. Valores de motilidad que fueron superiores a lo reportado por Gennotte et al., 2012, para machos XX, XY y YY, para. TE CA. los YY reportaron 24’32”.. La concentración de espermatozoides obtenidos tanto para machos XY como para. IO. machos YY estuvieron en el rango similar a los reportados para O. niloticus. BI BL. (Gennotte, et al., 2012), 3.08 a 2.19 × 109 células ml-1 (Bombardelli et al., 2010) ,2.63× 109 células ml-1(Mataveli et al., 2007) y 0.52 0.42 x 1010 ml-1 (Sanches et al., 2011). La tilapia se caracteriza por la baja concentración de espermatozoides (Gennottea, et al., 2012) comparados con trucha arco iris Oncorhynchus mykiis (Piñeros y col., 1991), el capitán de la sabana Eremophilus mutisii (Montejo y col., 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2002), Brycon amazonicus (Cruz et al., 2006) producen una mayor concentración de espermatozoides.. IC AS. La viabilidad se obtuvo como resultado en el caso de los espermatozoides vivos un porcentaje de 91.79% para O. niloticus YY y para O. niloticus XY fue de 71.45%,. OG. demostrando que más del 70% de espermatozoides son vivos por consiguiente se considera normal, según Bastardo y col. (2004) para tilapia considera como normal. OL. cuando la viabilidad de los espermatozoides supera el 50%. En otra especies como. BI. el capitán de la sabana Eremophilus mutisii superior al 79% (Montejo y col., 2002),. EN CI A. S. trucha arco iris Oncorhynchus mykiis mayor al 70% (Bastardo y col., 2004). La morfología de las células espermáticas se obtuvo 99.71% de espermatozoides normales para O. niloticus YY y para O. niloticus XY fue de 78.24% de. CI. espermatozoides normales y según Bastardo et al., (2004) se considera normales si es mayor del 30% y anormales menos del 30%. Las anormalidades más notables. DE. fueron espermatozoides con doble cola y cabeza larga.. TE CA. El trabajo aporta un nuevo parámetro de evaluación en tilapia que es la movilidad de espermatozoides y no es necesaria la aplicación de hormonas para la inducción. BI BL. IO. de espermiación, como la recomendada por Mira et al., (2010).. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES 1. Se demostró mejor calidad espermática en los machos O. niloticus YY que. IC AS. en los machos O. niloticus XY del plantel experimental de tilapia de la. OG. Universidad Nacional de Trujillo.. 2. Se registró mayores valores en los parámetros cantidad de semen,. OL. concentración de espermatozoides, viabilidad, movilidad y motilidad, y menor. BI. porcentaje de espermatozoides alterados en los machos O. niloticus YY. EN CI A. S. comparado con los machos O. niloticus XY.. 3. La calidad espermática tanto para los machos YY como para los machos XY. CI. analizaos están dentro de los rangos normales.. 4. Se reporta el parámetro de movilidad de espermatozoides como un. DE. parámetro adicional para el estudio en tilapia.. TE CA. 5. El peso de los individuos no están asociados a los parámetros de calidad. BI BL. IO. espermática.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. BIBLIOGRAFÍA Bombardelli, R., A.,Hayashi, C.,Natali, M., R., M.,Sanches, E., A.,Piana, P.,. OG. A.(2010). Níveis de energia digestível sobre os desempenhos reprodutivo e zootécnico e a deposição de lipídios nos hepatócitos de machos de tilápia-do-. BI. OL. nilo. Rev. Bras. Zootec.39 (5):941-949. Sociedade Brasileira de Zootecnia.. S. Bastardo, H.,Guedez, C. (2004)León, M. Características del semen de trucha. CI. Rev. Zootecnia Trop. 23 (3).. EN CI A. arcoiris de diferentes edades, bajo condiciones de cultivo en Mérida, Venezuela.. DE. Bobe, J., Labbé, C., (2010). Egg and sperm quality in ﬁsh. Gen. Comp.. TE CA. Endocrinol. 165,535–548.. Cruz-Casallas, E., Velasco-Santamaría M., Medina-Robles, M. (2006).. IO. Determinación del espermatocrito y efecto del volumen de la dosis seminante. BI BL. sobre la fertilidad en yamú (Brycon amazonicus). Rev Col Cienc Pec 19(2): 140145.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Gale, W., L., Fitzpatrick, M., S., Lucero, M., Contreras-Sanchez, W., M., Schreck,C., B. (1999). Masculinization of Nile tilapia žOreochromis niloticus/ by. IC AS. immersion in androgens. Aquaculture 178: 349–357. Gennottea,V., E. Franc,E., Rougeota,C., Ponthierc,J., Deleuzec, S., Mélarda, C.. BI. OL. (Oreochromis niloticus). Theriogenology 78:210–217.. OG. (2012). Sperm quality analysis in XX, XY and YY males of the Niletilapia. S. Hiott, A., E., Phelps, R., P. (1993). Effects of initial age and size on sex reversal. EN CI A. of Oreochromis niloticus fry using methyltestosterone. Aquaculture 112 (4): 301-. CI. 308.. Mataveli, M., Moraes, G., V., Streit Jr., D., P., Vargas, L., D., Sakaguti, E.,. DE. S.,Toninat, J., C.,Barbosa, R., C., Merlini, L. (2007). Avaliação Da Qualidade Do. TE CA. Sêmen De Tilápia-Do-Nilo (Oreochromis niloticus), Linhagem Chitralada, Suplementada Com Diferentes Concentrações De Vitamina C. B. Inst. Pesca,. BI BL. IO. São Paulo, 33(1): 1 – 7.. Montejo, J., Rosado, R., Gonzales, A. (2002). Evaluación del semen de capitán de la sabana Eremophilus mutisii (Pisces: trihomycteridae). Rev. Asoc. Colomb. Ictiol. 5: 41-47.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Musa, N. (2010). Sperm Activation in Nile Tilapia Oreochromis Niloticus and the Effects of Environmentally Relevant Pollutants on Sperm Fitness. University Of. IC AS. Stirling. Institute of Aquaculture. Tesis.. Johannsson, OE., Bergman, HL., Laurent, P., Chevalier, C.,. OL. Maina, JN.,. OG. Papah,MB., Kisia,SM., Ojoo,RO., Makanya, AN.,madera, CM., Kavembe, GD.,. Bianchini, A., Bianchini, LF., Onyango, DW. (2013). Morphological evaluation. Piñeros-piñeros,. R.,. &. EN CI A. S. the edge. Tissue and Cell 45 (6): 371–382.. BI. of spermatogenesis in Lake Magadi tilapia (Alcolapia grahami): A fish living on. cala-cala,. P.. (1991).. Motolidad,. Morfología,. CI. Concentración y Número de Espermatozoides en Reproductores de Trucha Arco. DE. Iris Oncorhynchus mykiis (Pisces: Salmonidae). Acad.colomb. cienc. 18(68): 75-. TE CA. 81.. Pruginin, Y., Rothbard, S., Wohlfarth, G., Halevy, A., Moav, R., Hulata, G. (1975). All-male broods of Tilapia nilotica × T. aurea hybrids. Aquaculture 6(1):11–21.. IO. Ramirez, J., Medina, V., Cruz, P. (2011). Variación estacional de las. BI BL. características seminales del bagre rayado Pseudoplatystoma metaense (Telostei, pimelodidae). Rev. MVZ Córdoba 16(1): 2336-2348.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(52) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Rurangwa, E., Kime, E., Ollevier, F., Nash, J. (2004) .The measurement of sperm motility and factors affecting sperm quality in cultured fish. Aquaculture 234: 1–. IC AS. 28.. OG. Sanches, E., A., Marcos, R., M., Baggio, D., M., Tessaro, L., Balen, R., E.,. OL. Bombardelli, R., A. (2011). Estimativa da concentração espermática do sêmen. S. BI. de peixe pelo método de espermatócrito. Rev. Bras. Zootec. 40(6): 1163-1167.. EN CI A. Sanchez-Rodriguez, M., Billard, R. (1977). Conservation De La Motilité Et Du Pouvoir Fécondant Du Sperme De Truite Arc En Ciel Maintenu A Des Températures Voisines De 0 ° C. Bulletin Francais de Pisciculture, (265):143-. DE. CI. 152.. TE CA. Scott, A., G., Penman, D., J., Beardmore, J., A., Skibinski D., O., F. (1989). The ‘YY’ supermale in Oreochromis niloticus (L.) and its potential in aquaculture.. BI BL. IO. Aquaculture, 78: 237-251.. Zohar, Y., Mylonas, C. (2001) Endocrine manipulations of spawning incultured fish: from hormones to genes.Aquaculture.197, 99-136.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(53) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Valdebenito, I., Fletcher, C.,Vera, V., Fernández, J. (2009). Factores fisicoquímicos que regulan la motilidad espermática en peces: aspectos básicos. IC AS. y aplicados. Una revisión. Arch Med Vet 41, 97-106.. OG. Vera C., E., M. y Mair, G., C.(1994). Conditions for effective androgen sex. BI. OL. reversal in Oreochromis niloticus (L.). Aquaculture 122, 237-248.. S. Vuthiphandchai, V.,Thadsri, I.,Nimrat, S. (2009). Almacenamiento refrigerado de. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. EN CI A. caminar bagre (Clarias macrocephalus) el semen. Acuicultura 296, 58-64.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(54) CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. DE. ANEXOS. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(55) EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. Anexo 1: Estación de Mejoramiento Genético de Tilapia, en la Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 2: Piscina de los machos de Oreochromis niloticus para la evaluación de la calidad espermática. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(56) DE. CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. Anexo 3: Obtención del machos de Oreochromis niloticus para la recolección del esperma.. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(57) EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. TE CA. DE. CI. Anexo 4: machos de Oreochromis niloticus YY “Tilapia Roja” para la recolección del esperma. Anexo 5: machos de Oreochromis niloticus XY “ Tilpaia Roja” para la recolección del esperma. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(58) TE CA. DE. CI. EN CI A. S. BI. OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI BL. IO. Anexo 7: Recolección del esperma de Oreochromis niloticus por extrusión o masaje en dirección cráneo-caudal sobre la región abdominal.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(59) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. BI. OL. OG. IC AS. B. EN CI A. S. Anexo 8: A. Solución de Eosina al 5%; B. Espermatozoides de Oreochromis niloticus, evaluado por test de Eosina, observados en Microscopio Olypicus BX41 con cámara 100x, filtro 6. Los espermios no coloreados son considerados como vivos y los espermios coloreados son considerados como muerto. CI. .. B. BI BL. IO. TE CA. DE. A. Figura 9: A. cámara de Neubauer; B. Espermatozoides de Oreochromis niloticus, evaluado utilizando la cámara de Neubauer, observados en Microscopio Olypicus BX41 con cámara 40x.. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(60) OL. OG. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. DE. CI. EN CI A. S. BI. A. BI BL. IO. TE CA. Figura 10: A. Giemsa B. Espermatozoides de Oreochromis niloticus, evaluado con coloreado con Giemsa, observados en Microscopio Olypicus BX51 de fluorescencia 100x, filtro 6.. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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