Efecto del fungicida Fitoklin sobre la germinación y el crecimiento de Trichoderma viride en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Y PARASITOLOGÍA. Efecto del fungicida Fitoklin sobre la germinación y el. SI ST. EM. AS. DE. crecimiento de Trichoderma viride en condiciones de laboratorio TESIS. DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. AUTOR: Br. SALVATIERRA ESPINOLA WALDO FRANZ. DI. RE. CC. IO. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. TRUJILLO – PERU. 2015. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGOMICROBIÓLOGO. M. Dr. Orlando Gonzales Nieves. ÁT. IC. A. Y. CO. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IN FO. RM. Dr. Rubén Vera Veliz. VICE-RECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. SI ST. EM. AS. DE. TRUJILLO. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. NACIONAL DE TRUJILLO. DI. RE. CC. IO. N. DE. VICE-RECTOR DE INVESTIGACION DE LA UNIVERSIDAD. Dr. Esteban Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL. UN IC. AC IÓ. N. TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. CO. M. Dr. José Mostacero León. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. Dr. William Zelada Estraver. Dra. Bertha Soriano Bernilla. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. MICROBIOLOGÌA Y PARASITOLOGÍA. DI. RE. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ASESOR. El que suscribe: Ms.C. Miguel Angel Muñoz Ríos asesor de la presente. N. fungicida Fitoklin sobre la germinación y el. UN IC. crecimiento de Trichoderma viride en condiciones de laboratorio”.. AC IÓ. tesis titulada: “Efecto del. CO. M. CERTIFICA:. Y. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. IC. A. correspondiente proyecto de tesis y teniendo en cuenta las orientaciones. ÁT. pertinentes.. RM. Que, el informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas. Por ello, autorizo al Bachiller Waldo Salvatierra. Espinola. para. continuar. IN FO. Franz. con. los. procedimientos. DE. correspondientes según sus fines.. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Trujillo, Diciembre del 2015. DI. RE. ----------------------------------------Ms.C Miguel Angel Muñoz Ríos Asesor. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de Grados y. AC IÓ. N. Títulos de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de. UN IC. Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado criterio la presente tesis. M. titulada: “Efecto del fungicida Fitoklin sobre la germinación y el crecimiento de. CO. Trichoderma viride en condiciones de laboratorio”, con la cual pretendo obtener. IC. A. Y. mi título profesional de Biólogo- Microbiólogo.. ÁT. Teniendo conciencia que el presente trabajo, puede adolecer de deficiencias en. IN FO. RM. construcción teórica y redacción, por lo cual pido al jurado las disculpas de caso y. EM. AS. DE. califiquen conforme sea su esclarecido criterio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Trujillo, Diciembre del 2015. Br. Waldo Franz Salvatierra Espinola. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. --------------------------------------------. CO. M. Ms.C. Juan Wilson Krugg. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. PRESIDENTE. DE. --------------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Dra. Manuela Luján Velásquez. -----------------------------------------------Ms.C. Miguel Muñoz Ríos VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaran que el presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del. fungicida Fitoklin sobre la en condiciones de. AC IÓ. N. germinación y el crecimiento de Trichoderma viride. laboratorio”, ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. CO. M. UN IC. APROBADA por UNANIMIDAD.. Y. --------------------------------------------. IC. A. Ms.C. Juan Wilson Krugg. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. EM. --------------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Dra. Manuela Luján Velásquez. -----------------------------------------------Ms.C. Miguel Muñoz Ríos VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AC IÓ. N. Dedico esta tesis a Dios en reconocimiento de su gloria, misericordia, poder, y la. UN IC. fortaleza porque me permitió culminar con. M. esta etapa en mi vida, porque a través de la. CO. microbiología aprendí de su grandeza y. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. dominio.. A mis padres Marcela Espinola Otiniano y Julio Salvatierra Valverde y mis hermanos. AS. que mediante su amor, comprensión,. EM. dedicación y sobre todo su apoyo he. mi. abuelita. Irma. Otiniano. RE. A. CC. IO. N. DE. SI ST. podido culminar con esta meta en mi vida.. DI. Sifuentes porque siempre me dio las fuerzas para seguir.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. En primer lugar agradezco infinitamente a Dios, por todas aquellas experiencias. AC IÓ. N. vividas que me han permitido ser mejor persona y porque me ha dado sabiduría y. UN IC. todo lo necesario para el desarrollo de la presente Tesis. Para Él es toda la gloria y. CO. M. adoración.. Y. Al Ms.C. C Miguel Angel Muñoz Ríos, Profesor Auxiliar D.E. del Departamento. IC. A. de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo, por. ÁT. otorgarme el asesoramiento en la realización de la presente Tesis y su apoyo. IN FO. RM. incondicional para la realización de este trabajo.. AS. DE. A mis padres y hermanos por su apoyo incondicional durante todos estos años.. SI ST. DE. este tiempo.. EM. A mi novia Claudia Falla Chafloque por su apoyo, amor y amistad durante todo. IO. N. A mis amigos y compañeros en la carrera de Microbiología y Parasitología; Merly. DI. RE. CC. Yaury Avalos, Raúl Castro Angulo por su amistad y apoyo.. A la empresa Solagro S.A.C por el apoyo brindado para la ejecución de esta tesis.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se determinó el efecto del. fungicida Fitoklin sobre la germinación y el. AC IÓ. N. crecimiento de Trichoderma viride en condiciones de laboratorio, Para lo cual se. cada uno, luego. UN IC. preparó y esterilizó Agar Sabouraud cuatro matraces conteniendo 200 mL de medio a tres de los matraces se les adicionó Fitoklin en cantidad. CO. M. suficiente para obtener una concentración final de 262.5, 350 y 437.5 ppm,. Y. respectivamente y al medio contenido en el matraz restante no se le agregó el. A. fungicida, para utilizarlo como control. Paralelo a esto se realizó un suspensión de. ÁT. IC. esporas de T. viride 2x108 esp/ml y también se preparó concentraciones del fungicida. RM. doble concentrado (525; 700; 875 ppm respectivamente), sacando de cada una de. IN FO. ellas 2 ml en un tubo de ensayo donde previamente se le agregó 2 ml de la. DE. suspensión de esporas. De cada suspensión de esporas en las diferentes. AS. concentraciones del fungicida y el control se inoculó 15 ul en cuatro puntos. EM. equidistantes sobre la superficie de las placas de Petri preparadas posteriormente y. SI ST. se incubó a 25°C, la lectura se realizó a las 15 horas. Para el porcentaje de crecimiento se incorporó el fungicida en Agar Sabouraud, y se sirvió en placas. DE. Petri, así como también placas control, se sembró por puntura en la parte central placas de Petri de acuerdo a su correspondiente concentración del. IO. N. de las. CC. fungicida, incubándose a temperatura ambiental durante 4 días. Se encontró que. DI. RE. el fungicida Fitoklin si bien no inhibe la germinación de T. viride, si disminuye el crecimiento de T. viride.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO Pág. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo .................................... ii. AC IÓ. N. Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas………………………. Asesor............................................................................................................ UN IC. Presentación................................................................................................... M. Miembros del Jurado ..................................................................................... CO. Aprobación……………………………………………………………….... Y. Dedicatoria..................................................................................................... IC. A. Agradecimientos............................................................................................ RM. ÁT. Resumen........................................................................................................ IN FO. Contenido………………………………………………………………….. iv v vi vii viii. ix x xi 1. MATERIAL Y MÉTODOS .......................................................................... 6. 1. Material de estudio................................................................................ 6. 2. Procedimiento........................................................................................ 6. EM. AS. DE. INTRODUCCIÓN......................................................................................... SI ST. 2.1 Reactivación del cultivo de Trichoderma viride………………... 6. 2.2.1 Preparación de las soluciones doble concentradas. CC. IO. N. viride ………………………………………………………………. RE. 6. fungicida Fitoklin sobre T.. DE. 2.2 Evaluación del efecto del. DI. iii. 2.2.2. de Fitoklin……………………………………. 6. Preparación del medio para germinación….... 7. 2.2.3 Reactivación del cultivo de Trichoderma viride y. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. obtención de cultivos monospóricos………………. 7 7. 2.2.5 Inoculación e incubación………………........ 8. 2.2.6 Lectura……………………………………... 8. AC IÓ. N. 2.2.4 Preparación del inóculo de esporas……........ UN IC. 2.3 Evaluación del efecto de Fitoklin sobre el crecimiento de T. viride.. 9 9. CO. M. 2.3.1 Preparación del medio de cultivo…………. 9. Y. 2.3.2 Siembra e incubación…………………….. 9. IC. A. 2.3.3 Lectura………………………………….. 10. RM. ÁT. 2.4 Análisis de datos…………………………………………. 11. IN FO. RESULTADOS............................................................................................ DE. Fig. 1. Porcentaje de germinación de Trichoderma viride frente a diferentes. AS. concentraciones (ppm) del fungicida Fitoklin a las 15 horas de 12. EM. incubación……………………………………………………………. SI ST. Fig. 2. Observación microscópica (40x) de conidias germinadas de Trichoderma viride frente a diferentes concentraciones del fungicida. DE. Fitoklin (ppm)………………………………………………………………. 13. DI. RE. CC. IO. N. Fig. 3. Porcentaje promedio de crecimiento de Trichoderma viride frente a diferentes concentraciones (ppm) del fungicida Fitoklin, en condiciones. de. laboratorio. y. a. los. 4. días. de. incubación…………………………………………………………….. 14. Fig.4. Crecimiento lineal de Trichoderma viride frente a diferentes concentraciones del fungicida Fitoklin, en condiciones de laboratorio. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 15. DISCUSIÓN..................................................................................................... 16. UN IC. AC IÓ. N. y a los 4 días de incubación ………………………………………….. 20. CO. M. CONCLUSIONES........................................................................................... 21. IC. A. Y. RECOMENDACIÓN………………………………………………………... 22. RM. ÁT. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.............................................................. 26. DE. IN FO. ANEXOS……………………………………………………………….......... AS. Anexo 1. Observación microscópica y macroscópica de Trichoderma viride.. EM. Anexo 2. Soluciones doble concentrada del fungicida Fitoklin.. SI ST. Anexo 3. Placas Petri conteniendo azul de lactofenol y laminilla en los puntos donde se sembró la suspensión después de las 15 horas de. DE. incubación.. CC. IO. N. Anexo 4. Porcentaje de germinación de Trichoderma viride frente a las diferentes concentraciones del fungicida Fitoklin.. DI. RE. Anexo 5. Porcentaje promedio de crecimiento de Trichoderma viride frente a las diferentes concentraciones del fungicida Fitoklin a los cuatro días de incubación. Anexo 6. Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) a 0 ppm. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. del fungicida Fitoklin, después de 4 días de evaluación. Anexo 7. Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) luego de ser sometido a la concentración de 262.5 ppm del fungicida. AC IÓ. N. Fitoklin, después de 4 días de evaluación.. UN IC. Anexo 8. Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) luego. de ser sometido a la concentración de 350 ppm del fungicida. CO. M. Fitoklin, después de 4 días de evaluación.. Y. Anexo 9. Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) luego. IC. A. de ser sometido a la concentración de 437.5 ppm del fungicida. ÁT. Fitoklin, después de 4 días de evaluación.. RM. Anexo 10. Análisis de varianza (ANOVA) del porcentaje de crecimiento de. IN FO. Trichoderma viride frente a las diferentes concentraciones del. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. fungicida Fitoklin, utilizando el método HSD de Tukey.. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. N. Las enfermedades producidas por microorganismos fitopatógenos,. AC IÓ. tales como bacterias, nematodos u hongos, constituyen la mayor causa de. UN IC. pérdida en la producción agrícola, tanto en cosecha como en postcosecha siendo los hongos uno de los principales grupos que originan mayores. Y. CO. M. pérdidas agrícolas1.. IC. A. Para controlar estos problemas, en la actualidad se viene utilizando el. ÁT. manejo integrado de plagas (MIP), el cual busca la utilización de un. RM. conjunto de métodos de control, culturales, biológicos y químicos con el. IN FO. propósito de controlar las plagas y minimizar los efectos indeseables en el. AS. DE. ambiente2.. nemáticidas,. EM. Entre los controladores químicos se encuentran los. SI ST. fungicidas, insecticidas, bactericidas y herbicidas3 teniéndose entre ellos al. DE. Fitoklin cuyo principio activo es el metalaxil, el cual es un fungicida con. N. acción sistémica indicado para la prevención y el control de enfermedades. DI. RE. CC. IO. fungosas en cultivos de papa y tomate (hielo, rancha), zapallo, lechuga, vid, brócoli y coliflor (mildiu), palto (pudrición radicular). Así mismo protege frutas (sandía, melón y pepino), productos agrícolas y semillas, de infecciones fungosas en tratamientos de post-cosecha durante su almacenamiento y transporte4,5.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En las últimas décadas se vienen utilizando controladores biológicos (organismos o sus productos) como una alternativa al uso de controladores químicos, ya que estos tienen un impacto negativo en el medio ambiente, los. AC IÓ. N. primeros deben tener la misma efectividad que los químicos sin sus efectos. UN IC. negativos, aumentando el rendimiento de los cultivos y protegiéndolos de ciertos microorganismos fitopatógenos6, 7. CO. M. Las hongos más utilizados como controladores biológicos son. Y. Beauveria, Verticillum, Metarhizium, y Trichoderma, siendo el hongo. IC. A. antagonista por excelencia Trichoderma, el cual es un hongo imperfecto. ÁT. que presenta conidióforos ramificados en forma piramidal o cónica dando. RM. origen a fiálides con extremos ahusados, desde donde se desprenden esporas. IN FO. circulares hialinas. Existen especies de Trichoderma, como T. viride, T.. DE. harzianum, T. aureoviride, T. virens, T. atroviride, T. hamatum, T. koningii;. AS. de las cuales la primera es la más estudiada entre numerosos agentes de. EM. control biológico, por ser fácilmente adaptables a las condiciones climáticas. SI ST. y ser factibles de aislar, propagar y evaluar in vitro2, 8, 9.. DE. Al utilizar métodos de control en forma conjunta. (químicos y. DI. RE. CC. IO. N. biológicos) se busca que al ser aplicados a un mismo sustrato, muestren compatibilidad, es decir que ninguno de ellos minimice o inhiba al otro. Cuando uno de ellos afecta al otro se dice que son incompatibles y por lo tanto no deben aplicarse juntos10.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La compatibilidad entre los controladores biológicos con los químicos empleados en la agricultura, se ha venido estudiando desde inicios , así, se han realizado estudios de compatibilidad entre. bassiana. con. diversos. insecticidas,. como. Carbaril11,. AC IÓ. Beauveria. 10. N. del siglo XXI. UN IC. Fenvalerate12, Abamectina13, Triflumurón14, encontrando compatibilidad entre estos. Así mismo Castiglioni, Djair y Batis15 estudiaron la. CO. M. compatibilidad in vitro de B.bassiana y Metarhizium anisopliae con. Y. Nimkol-L®, detallando que el efecto de este insecticida a diferentes. IC. A. concentraciones varia en el crecimiento vegetativo, la conidiogénesis y la. RM. ÁT. germinación de los conidios de estos hongos entomopatógenos.. IN FO. De la misma manera, Vásquez, Saldarriaga y Pineda16 evaluaron la. DE. compatibilidad de B. bassiana con el insecticida Fenoxicarb encontrando. AS. que a diferentes concentraciones de este insecticida, no se inhibía la. EM. germinación conidial ni el crecimiento micelial del hongo. También,. SI ST. Goswami, et al17. Estudiaron la acción del aceite natural de mostaza sobre, Paecilomyces lilacinus y Trichoderma viride, y encontraron existía. DI. RE. CC. IO. N. DE. compatibilidad entre ellos.. En relación a la incompatibilidad se ha encontrado que los hongos. entomopatógenos Metarhizium anisopliae y Lecanicillium lecanii presentan una completa inhibición en su germinación y crecimiento frente a los funguicidas Dithane 80 WP, Ridomil MZ 88 WP, Daconil 82.5 WG, Kocide 77WP y Tiovit 80 WG18.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En otra investigación, Sánchez19, determinó el efecto de diferentes concentraciones de metribuzina sobre el crecimiento y germinación de Trichoderma viride, en condiciones de laboratorio, obteniendo como. AC IÓ. N. resultado la disminución progresiva de la velocidad de crecimiento y. UN IC. consecuentemente el porcentaje de crecimiento. CO. M. En la actualidad se utiliza muchos compuestos químicos como. Y. insecticidas, fungicidas, bactericidas, herbicidas y rodenticidas. Si bien el. IC. A. propósito del uso de plaguicidas es matar organismos no deseados, como. ÁT. aquellos que destruyen cultivos y transmiten enfermedades, muchas veces. RM. estos afectan a los controladores biológicos, por lo que se hace necesario. DE. IN FO. estudiar la compatibilidad entre los controladores biológicos y los químicos.. AS. Debido a que no es posible dar conclusiones específicas acerca de la. EM. compatibilidad de todos los agroquímicos con los diferentes hongos. SI ST. controladores, es crucial que el agricultor conozca de los impactos adversos que estos químicos puedan tener sobre la eficacia de los controladores. Aún. DE. más, es necesario obtener información sobre la compatibilidad de cepas. DI. RE. CC. IO. N. específicas de hongos con los agroquímicos usados en un determinado agroecosistema. Esto permitirá a los agricultores seleccionar los componentes apropiados y planear los tratamientos fúngicos o químicos adecuados para minimizar cualquier efecto nocivo en la eficacia del controlador.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Es así, que un número considerable de investigaciones se han enfocado en la influencia de varios agroquímicos en la germinación y el. AC IÓ. N. crecimiento de hongos controladores in vitro.. Por tal razón, el presente trabajo de investigación tiene como objetivo. UN IC. determinar el efecto del fungicida Fitoklin sobre la germinación y el. M. crecimiento de Trichoderma viride en condiciones de laboratorio, a fin de. CO. conocer si existe alguna incompatibilidad entre T. viride y Fitoklin ya que. A. Y. de darse dicha incompatibilidad sería muy importante un cambio inmediato. ÁT. IC. en las medidas de control que se dan en las empresas agrícolas, como las de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. La Libertad donde se efectúan este tipo de control.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. 1. Material de Estudio. AC IÓ. N. 1.1 Material biológico. Cultivo puro de Trichoderma viride proporcionado por la empresa. UN IC. SOLAGRO S.A.C. Trujillo.. M. 1.2 Material no biológico. CO. Fungicida Fitoklin, cuyo principio activo es Metalaxil.. A. Y. 2. Procedimiento. ÁT. IC. 2.1 Reactivación del cultivo de Trichoderma viride.. RM. A partir de una placa de cultivo madre de T. viride proporcionado. IN FO. por la empresa SOLAGRO S.A.C, se realizó siembras por estrías. AS. Sabouraud.. DE. y agotamiento en tres placas por cada siembra de Agar. EM. 2.2. Evaluación del efecto del fungicida Fitoklin sobre T. viride. SI ST. 2.2.1 Preparación de las soluciones doble concentradas de. DI. RE. CC. IO. N. DE. Fitoklin La presentación del Fitoklin es un producto en polvo, por. lo cual pesamos 0.15; 0.20 y 0.25 g de Fitoklin para agregarle a tres botellas que contienen 100 ml de agua destilada estéril cada uno, con la finalidad de obtener soluciones al doble concentración como son 525, 700 y 875 ppm y al cuarto matraz no se le agregó el fungicida para usarlo de testigo (0 ppm).. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.2 Preparación del medio para germinación Se preparó Agar Sabouraud en cuatro. matraces. conteniendo 200 mL de medio cada uno. El medio de cultivo se. AC IÓ. N. esterilizó en autoclave a 121ºC con 15 lb de presión y se dejó. UN IC. enfriar hasta una temperatura aproximada de 50 °C. Estando aún fundido el medio, a tres de los matraces se les adicionó Fitoklin. CO. M. en cantidad suficiente para obtener una concentración final de. Y. 262.5, 350 y 437.5 ppm, respectivamente.. IC. A. Al medio contenido en el matraz restante no se le agregó el. ÁT. fungicida, a fin de utilizarlo como control.. RM. Luego, el medio de cultivo de cada uno de los cuatro matraces. IN FO. se procedió a servir en placas de Petri estériles (3 placas por. AS. DE. cada concentración, incluyendo el control).. EM. 2.2.3 Reactivación del cultivo de Trichoderma viride y obtención. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. de cultivos monospóricos. Para la reactivación de T. viride, a partir del cultivo puro, se. procedió a resembrar en frascos planos de vidrio con Agar Sabouraud inclinado y luego fue incubado a 25°C durante 5 días, posteriormente se cosecharon las esporas con 5 mL de agua destilada estéril y se estandarizó a una concentración de 3 x 102 esp/mL mediante recuento en cámara de Neubauer y se sembró por superficie en placas de Petri conteniendo Agar Sabouraud, y se incubaron a 25°C por 2 días. Luego a partir de una colonia. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. desarrollada se procedió a resembrar en 5 tubos conteniendo Agar Sabouraud inclinado incubándose a 25°C por 5 días.. AC IÓ. N. 2.2.4 Preparación del inóculo de esporas. UN IC. A partir de uno de los cultivos monospóricos se sembró en frascos planos de vidrio conteniendo Agar Sabouraud. CO. M. inclinado y se incubó a 25°C por 5 días. El inóculo de esporas. Y. se obtuvo agregando 5 mL de agua destilada estéril a cada. IC. A. frasco plano de vidrio agitándolo moderadamente a fin de. ÁT. liberar las esporas del hongo. La suspensión resultante se. RM. colocó en un matraz estéril determinándose la concentración de. IN FO. esporas mediante recuento en cámara de Neubauer, se diluyó en. EM. AS. esp/mL.. DE. agua estéril a fin de obtener una concentración final de 2 x 108. SI ST. 2.2.5 Inoculación e incubación. DI. RE. CC. IO. N. DE. Se colocó 2 mL de cada dilución de Fitoklin doble. concentrado en tubos de ensayo estériles, a los cuales se les agregó 2mL de la suspensión de esporas obtenida previamente, con lo cual se obtuvo una dilución de 1x108 esp/mL y concentraciones finales de Fitoklin de 262.5, 350 y 437.5 ppm. Se preparó. también. una suspensión de esporas. control,. agregándole 2 mL de la suspensión de esporas en 2mL de agua destilada estéril.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. De. cada. suspensión. de. esporas. en. las. diferentes. concentraciones del fungicida y el control se inoculó 15 ul en cuatro puntos equidistantes. sobre la superficie de. las placas de petri. AC IÓ. N. previamente preparadas en el paso 2.2.2, posteriormente se incubó a. UN IC. 25°C evaluándose a las 15 horas. 2.2.6 Lectura. CO. M. Luego del periodo de incubación se inoculó 15 ul de azul. Y. de lactofenol, y se colocó sobre ellos una laminilla estéril, en cada. IC. A. uno de los cuatro puntos equidistantes de cada placa, esto se repitió. ÁT. para cada tratamiento incluyendo el control, luego se observó y se. RM. realizó el recuento en el microscopio a 40x hasta contar 100. IN FO. esporas (número de esporas germinadas y número de esporas no. DE. germinadas). Los resultados se expresaron como porcentaje. AS. promedio de germinación el cual fue obtenido comparando el. EM. número de esporas germinadas en las placas con las diferentes. DE. SI ST. concentraciones del fungicida en relación a las del grupo control.. DI. RE. CC. IO. N. 2.3 Evaluación del efecto de Fitoklin sobre el crecimiento de T. viride. 2.3.1 Preparación del medio de cultivo El medio de cultivo será preparado de manera similar que el paso 2.2.2. 2.3.2 Siembra e incubación. Se procedió de manera similar que en el paso 2.2.3 a diferencia de que solo se sembró una placa luego se incubó a 25°C por 3 días. A. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. partir de una de las colonias desarrolladas se resembró por puntura en la parte central de las placas previamente preparadas en el paso 2.2.2 las cuales se incubó a 25°C por cinco días.. N. Lectura. AC IÓ. 2.3.3. UN IC. A partir del primer día de siembra, y hasta el cuarto día, se midió el radio de crecimiento micelial en centímetros (cm.) del. CO. M. hongo en diferentes direcciones, obteniendo un radio promedio de. Y. crecimiento por día por cada concentración del fungicida y el grupo. IC. A. control. Los resultados de crecimiento de T. viride se expresaron en. ÁT. milímetros y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en. IN FO. AS. DE. siguiente manera:. RM. cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la. EM. 2.4 Análisis de datos. SI ST. La determinación del fungicida Fitoklin sobre T. viride. se realizó. DE. analizando el porcentaje de germinación y el porcentaje de crecimiento de. fungicida, procesando los datos en base a la prueba de Análisis de Varianza Univariante , según el paquete estadístico SPSS v. 1. DI. RE. CC. IO. N. Trichoderma viride, en las diferentes concentraciones de dicho. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Se encontró que las tres concentraciones del fungicida Fitoklin no tienen. UN IC. AC IÓ. N. efecto sobre la germinación de Trichoderma viride (Figura 1 y 2).. Se encontró que el menor porcentaje de crecimiento de Trichoderma. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. viride fue a 437.5 ppm (Figura 3 y 4). 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. a. a. a. 100. 100. 100. 100. AC IÓ. N. 100. a. a. a. a. a. 60. b. CO. M. 40. UN IC. 80. 0. 0. 262.5. IC. A. Y. 20. 350. 437.5. ÁT. Porcentaje de Germinación (%) de T. viride. 120. DE. IN FO. RM. Concentración (ppm) de fitoklin. concentraciones (ppm) del fungicida Fitoklin a las 15 horas. EM. diferentes. AS. Fig.1. Porcentaje promedio de germinación de Trichoderma viride frente a. SI ST. de incubación.. DI. RE. CC. IO. N. DE. a: p > 0.05 No existe diferencia significativa. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) a.Control. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. b.262.5ppm m. d.437.5ppm. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. c.350ppm. DI. RE. CC. IO. N. Fig.2. Observación microscópica (40x) de conidias germinadas de Trichoderma viride frente a diferentes concentraciones del fungicida Fitoklin (ppm) a las 15 horas de incubación.. a. Control. b. 262.5 ppm. c. 350 ppm. Espora germinada (. d. 437.5 ppm. ). 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. 120.00. Porcentaje de crecimiento (%) de T. viride. a 100.00. CO. M. 100.00. Y. 80.00. 58.28. b. b. ÁT. 60.00. IC. A. b. RM. 48.56. IN FO. 40.00. 45.78. 0.00. 262.5. 350. 437.5. EM. 0. AS. DE. 20.00. DE. SI ST. Concentración (ppm) de fitoklin. diferentes concentraciones (ppm) del fungicida Fitoklin a los 4 días de incubación. a: p < 0.05 Sí existe diferencia significativa. DI. RE. CC. IO. N. Fig.3. Porcentaje de crecimiento lineal de Trichoderma viride frente a. b: p > 0.05 No existe diferencia significativa. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) 350 ppm. 262.5 ppm. 437.5 ppm. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. 0 ppm. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Fig.4. Crecimiento lineal de Trichoderma viride frente a diferentes. DI. RE. CC. IO. N. concentraciones del fungicida Fitoklin a los 4 días de incubación.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. En relación al efecto de las diferentes concentraciones del. AC IÓ. N. fungicida Fitoklin sobre la germinación de Trichoderma viride (Figuras 1), se. UN IC. observa que las concentraciones utilizadas no inhiben la germinación de este hongo, lo cual probablemente se deba a que al ocurrir la germinación de las. CO. M. esporas existe una fase inicial de hinchamiento provocada por la hidratación llamado hinchamiento hidrostático seguido de otro que depende de la actividad. IC. A. Y. metabólica, hinchamiento metabólico20. En muchas ocasiones durante el. ÁT. hinchamiento hidrostático no solo ingresa agua sino además otras sustancias. RM. presentes en el medio externo, lo cual no ocurrió con el Fitoklin disuelto en. IN FO. agua, ya que dicho fungicida no tuvo ningún efecto sobre la germinación de T.. AS. DE. viride... EM. El fungicida Fitoklin no ingresó a la espora quizá, debido a. SI ST. que en algunos casos la pared de las esporas de algunos hongos suelen ser más gruesas, evitando que ciertas sustancias del medio externo puedan penetrar o en. DE. su defecto que mínimas concentraciones lo hagan; actuando como barrera. IO. N. mecanica21. Otra seria la constitución o estructura de la membrana. DI. RE. CC. citoplasmática cuya propiedad de selectividad y permeabilidad, confiere protección frente a sustancias toxicas o nocivas. Actúa como un sensor de señales externas, permitiendo a la célula alterar su comportamiento en respuesta a estímulos de su entorno22.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Así también cabe resaltar que el porcentaje de germinación de T. viride obtenido en todas las concentraciones de Fitoklin evaluadas, es concordante a lo recomendado por el SENASA (2001)23, el cual señala que un. AC IÓ. N. biopreparado para ser usado como controlador biológico debe tener como. UN IC. característica un porcentaje de germinación de conidias igual o mayor al 90% a las 18 horas de incubación, ocurriendo así con el porcentaje de germinación. Y. CO. M. hallado en todas las concentraciones evaluadas.. IC. A. En las figuras 3 y 4 se observa que las diferentes. ÁT. concentraciones del fungicida Fitoklin disminuyen el crecimiento de T. viride,. RM. dicha disminución del crecimiento de T. viride frente al Fitoklin se debe a que. IN FO. dicho fungicida interfiere con la síntesis de proteínas mediante la inhibición de la. AS. DE. síntesis del RNA ribosomal5, por lo cual el crecimiento se ve afectado.. EM. En relación al efecto de las diferentes concentraciones de. SI ST. Fitoklin sobre el crecimiento de T. viride, se observa que existe diferencias significativas entre todas las concentraciones. (Figuras 3). Se aprecia que a. DE. medida que aumenta la concentración del fungicida disminuye el crecimiento de. IO. N. T. viride, lo cual quizá se deba a que la acción de toda sustancia tóxica depende de. CC. la concentración del producto, es decir a mayor concentración mayor efecto. DI. RE. negativo del tóxico sobre un microorganismo24.. Cabe resaltar que si bien no fue objetivo del trabajo se observó que al parecer con el transcurrir de los días el fungicida Fitoklin. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. disminuía su efecto negativo sobre T. viride, lo cual probablemente se deba a que los efectos de varios agroquímicos sobre el crecimiento micelial disminuyen con el transcurrir de los días, esto se debe a que muchos de éstos presentan. AC IÓ. N. compuestos volátiles (hidrógeno, oxígeno, flúor, cloro bromo, azufre o. UN IC. nitrógeno)25,tal como es el caso del fungicida Fitoklin que químicamente es una. CO. M. fenilamida.. Estudios de compatibilidad también mencionan que ciertos. A. Y. agroquímicos son compatibles con Trichoderma viride, por ejemplo; Muiño. ÁT. IC. y col26, también reportan que Trichoderma spp, son compatibles con zineb,. RM. mancozeb y thiram, además de reportar que dicho hongo es compatible con. IN FO. oxicloruro de cobre, metalaxyl, dimethomorph, trifluralin, napropamida y. AS. DE. dimetoato.. EM. Durán y col27 observaron una marcada inhibición del crecimiento. SI ST. micelial de Trichoderma frente al fungicida fludioxonil + metalaxil, a una dosis letal media inferior a la recomendada para campo. Sin embargo, en prueba in. DE. vitro los fungicidas oxicloruro de cobre, metalaxil y dimetomorf fueron. IO. N. compatibles con diferentes especies de Trichoderma, mientras zineb, mancozeb. DI. RE. CC. y tiram mostraron ligera toxicidad y benomil se comportó como tóxico.. Keller y col28 observaron que un tercio de los fungicidas que evaluaron “in vitro” inhibían completamente el crecimiento micelial de Beauveria brongniartii y el resto, reducían la germinación de las conidias. A pesar de la. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. naturaleza altamente inhibitoria de estos fungicidas “in vitro”, el crecimiento del hongo en granos de cebada en suelos asperjados con tales fungicidas fue menos inhibido, y los autores concluyeron que la mayoría de los fungicidas evaluados no. Trabajos. también. realizados. UN IC. AC IÓ. N. tendrían un efecto negativo sobre B. brongniartii al aplicarlos al suelo.. por. Valdez. y Velásquez29. CO. M. encontraron compatibilidad entre Trichoderma viride y los agroquímicos. IC. A. Y. captam y carbotiram.. ÁT. Los resultados obtenidos en el presente trabajo son válidos sólo en. RM. condiciones de laboratorio, haciéndose necesario un posterior estudio en campo. IN FO. para poder corroborar dichos resultados; así como también sería conveniente. DE. evaluar la persistencia del Fitoklin en los suelos de cultivo de la región La. AS. Libertad ya que según Bordjiba y col30,este puede variar dependiendo de. EM. diversos factores como pH, temperatura y tipo de suelo, y de esta manera. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. programar mejor las aplicaciones de ambos controladores.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. El fungicida Fitoklin en las concentraciones de 262.5, 350 y 437.5 ppm no. UN IC. AC IÓ. N. disminuye la germinación de Trichoderma viride.. El fungicida Fitoklin en las concentraciones de 262.5, 350 y 437.5. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. disminuye el crecimiento de Trichoderma viride.. ppm. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIÓN. Es recomendable realizar estudios en campo para evaluar el. AC IÓ. N. efecto real que ejercen este fungicida sobre Trichoderma viride y hasta qué punto. UN IC. las concentraciones de Fitoklin que manejan los agricultores en campo son compatibles con la aplicación de Trichoderma viride para así poder programar. CO. M. mejor la aplicación de ambos controladores dentro de un plan de manejo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. integrado.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1.. Romero FR. Manejo Integrado de Plagas. México: Ed. Universidad. AC IÓ. N. Autónoma de Chapingo. 2004.. cepas. de. Trichoderma. para. su. UN IC. Rey M, Delgado – Jarana J, Rincón A, Limon C, Benítez T. Mejora de. 2.. empleo. como. CO. M. RevIberoamMicol2000; 17: S31-S36.. biofungicidas.. Agrios G. Fitopatología. 2ª ed. México: Ed. Uteha; 1995. 4.. University Cornell. Extension Toxicology Network.1993 [En línea] acceso de. Marzo. del. 2011]. New. York. -. USA.. Disponible. en. ÁT. [8. IC. A. Y. 3.. RM. http://pmep.cce.cornell.edu/ profiles/extoxnet/pyrethrins-ziram Senasa. Ficha técnica Fitoklin. [En línea] acceso [9de Marzo del 2015] Disponible. en:. http://. http://www.tqc.com.pe/wp-. DE. Perú.. IN FO. 5.. AS. content/uploads/2011/11/ficha_fitoklin.pdf. Rodríguez L, Arredondo H. Teoría y Aplicación del Control Biológico.. EM. 6.. SI ST. Sociedad Mexicana de Control Biológico. México. 2007. 7.. Gromovykh T, Tulpanova V, Shmarlovskaya S, Gromovykh V, Makhova. DE. H. Strains of Trichoderma Benefit for Biological Control Seedlings. IO. N. Pathogens. MBAO 1999: 38-69.. DI. RE. CC. 8.. Howell, C. Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases: The history and evolution of current concepts. Plant Disease 2003; 87 (1): 4-10.. 9.. Alexopoulos C. Introducción a la Micología. 3ra ed. Edit. Universitaria. Buenos Aires – Argentina 1979.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10. Jum Kim J, Chin Kim K. Compatibility the entomopathogenic fungus Lecanicillium attenuatum and pesticides to control Cotton Aphid, Aphis Gossypii. Int. J. Indus. Entomol 2007; 14 (2): 143 – 146.. AC IÓ. N. 11. Bielza P. Compatibilidad activa de plaguicidas y fauna auxiliar. Revista. UN IC. Especial 2007; 200: 1 - 6.. 12. Inclán DJ, Alvarado E, Williams RN. Evaluación de cuatro insecticidas para. el. control. de. tecla,. Strymon. megarus. (godart). CO. M. naturales. Y. (Lepidoptera:Llycaenidae), en el cultivo de piña. Tierra Tropical 2007; 3. IC. A. (2): 199-210.. ÁT. 13. Storch RH, Dill JF. Beauveria bassiana for Control of Colorado Potato. RM. Beetle (Coleoptera: Chrysomelidae) in Maine. MA1.S TechnicalBulletin. IN FO. 1987;128:1–8.. DE. 14. Frankliniella occidentalis (Thysanoptera: Thripidae) en cultivos de. AS. espárragos. Revista Colombiana de Entomología 2009; 35 (1): 12-17.. EM. 15. Castiglioni E, Vendramim JD, Alves SB. Compatibilidad de Beauveria. SI ST. bassiana y Metarhizium anisopliaecon Nimkol-L® para el combate de Heterotermes tenuis. Manejo Integrado de Plagas y Agroecología 2003;. DE. 69: 38-44.. DI. RE. CC. IO. N. 16. Vásquez C, Saldarriaga Y, Pineda F. Compatibilidad de Beauveria bassiana con fenoxicarb. Manejo Integrado de Plagas y Agroecología 2006; 78: 80-85.. 17. Goswami BK, Pandey RK, Rathour KS, Bhattacharya Ch, Singh L. Integrated application of some compatible biocontrol agents along with mustard oil seed cake and furadan on Meloidogyne incognita infecting. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tomato plants. J Zhejiang Univ Science B 2006; 7(11): 873-875. 18. Olán JFH, Cortez HM. Efecto de tres fungicidas sobre siete aislamientos. AC IÓ. Integrado de Plagas y Agroecología (Costa Rica) 2003; 69: 21-26.. N. del entomopatógeno Lecanicillium (= Verticillium) lecanii. Manejo. UN IC. 19. Sánchez, 2006. Efecto de diferentes concentraciones de metribuzina sobre la germinación y crecimiento de Trichoderma viridae (Persoon, frieds) en. CO. M. condiciones de laboratorio.. Y. 20. Griffin D. Fungal physiology. 2nd ed. USA.Wiley science paperback. IC. A. series; 1993. ÁT. 21. Pontón J. La Pared Celular de los Hongos y el Mecanismo de acción de la. RM. anidulafungina. Rev Iberoam Micol 2008; 25: 78-82. IN FO. 22. Lodish H. y col. Biología Celular y Molecular. Buenos Aires. 5a ed: Ed.. DE. Médica Panamericana; 2005.. AS. 23. SENASA. Manual de Procedimientos para Verificación de Calidad de. EM. Agentes Biológicos para el Control de Plagas Agrícolas, producidos por. SI ST. laboratorios en convenio con el SENASA. Directiva General N° 24/2001SENASA-DGSV-PNCB. Lima. Perú; 2001. DE. 24. Repetto M., Repetto G. Toxicología Fundamental 4º ed. ED. Diaz de. IO. N. Santos; 2009.. DI. RE. CC. 25. Griffin, D.H. 1994. Fungal Physiology. 2nd ed. Wiley-Liss, New York, USA.. 26. Muiño, B.; E. Botta; E. Pérez; D. Moreno; E. Fernández: Uso de Trichoderma como alternativa al bromuro de metilo en los cultivos protegidos, Fitosanidad 10 (2): ,179- , 180, Cuba, 2006.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 27. Durán E, De Romero Y, Romero M, Ramallo J. Sensibilidad in vitro de cepas de Trichoderma aisladas de semillas de soja frente al fungicida MAXIM® XL. Boletín Micológico. 2007; 22:51-54.. AC IÓ. N. 28. Keller, S., B. Pärli, M. Lujan, y C. Schweizer. 1993. Der Einfluß von. UN IC. Fungiziden auf den insektenpathogenen Pilz Beauveria brongniartii (Sacc.) Petch. Anzeiger für Schädlingskunde Pflanzenschutz und Umweltschutz. CO. M. 66: 108-114.. Y. 29. Valdéz L.; R. Velázquez. Evaluación in vitro de la resistencia innata del. IC. A. Microbial Funqui (Trichoderma viride) hacia fungicidas de uso agrícola.. Disponible. en:. http://www.dcb.rsip.ipn.mx/encuentro/. RM. México.. ÁT. SinQuímica S.A. de C.V. [En línea] acceso [25 de Noviembre del 2011].. IN FO. resumenes/vegetal/carteles/Velazquez%20Robledo%20Rocio.pdf. DE. 30. Bordjiba, O.; O. Steiman y M. Kadri.. Removal of herbicides from liquid. AS. media by fungi isolated from a contaminated soil. J.Environ. Qual. 30:418-. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. 426; 2001.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ANEXOS. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. b. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. a. microscópica (40x).. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Anexo 1. Trichoderma viride: a) Observación de cultivo puro y b) Observación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC I. O. N. DE. SI. Anexo 2: Soluciones doble concentrada del fungicida Fitoklin. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) c. 437.5 ppm. CO. b. 350 ppm. d. Control. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. a. 262.5 ppm. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. SI. Anexo 3: Placas Petri conteniendo azul de lactofenol y laminilla en los puntos donde se sembró la suspensión después de las 15 horas de. c. 437.5 ppm. CC I. b. 350 ppm. d. Control. DI. RE. a. 262.5 ppm. O. N. incubación.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. Y. CO. Anexo 4: Porcentaje de germinación de Trichoderma viride frente a las diferentes concentraciones del fungicida Fitoklin.. 100 100 100 100. RM ÁT. 100 100 100 100. 3. 100 100 100 100. IN FO. 2. Promedio 100 100 100 100. % 100 100 100 100. DI. RE. CC I. O. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. 0 PPM 262.5 PPM 350 PPM 437.5 PPM. 1. IC. TRATAMIENTO ENSAYOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 5: Porcentaje de crecimiento de Trichoderma viride frente a las diferentes concentraciones del fungicida Fitoklin a los cuatro días. A. Y. CO. de incubación.. TRATAMIENTO / %. RM ÁT. IC. ENSAYO. 47.012. 100. 56.994. 48.944. 48.944. 100. 3. 56.0278. 47.656. 44.436. 100. 4. 56.672. 49.91. 44.436. 100. 5. 48.622. 44.114. 100. 48.56. 45.78. DE. 2. EM. DE. SI. 60.858 58.28. DI. RE. CC I. O. N. PROMEDIO. TESTIGO. 47.656. AS. 60.8578. 437.5 PPM. ST. 1. 350 PPM. IN FO. 262.5 PPM. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. 100.

(46) M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM ÁT. IC. A. Y. CO. Anexo 6: Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) a 0 ppm del fungicida Fitoklin, después de 4 días de evaluación.. ENSAYO 0 PPM / mm E1 E2 E3. E4. E5. Promedio. 12.45. 12.13. 12.84. 13. 13.18. 12.72. 2. 15.10. 14.65. 16.22. 14.93. 16.47. 15.47. 3. 24.75. 23.875. 24. 23.875 22.625. 23.82. 4. 39.875. 38.75. 38.875. 39. 37.625. DI. RE. CC I. O. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. 1. IN FO. DIAS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. 38.82.

(47) M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM ÁT. IC. A. Y. CO. Anexo 7: Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) luego de ser sometido a la concentración de 262.5 ppm del fungicida Fitoklin, después de 4 días de evaluación.. 6.45. 2. 9.94. 3. 14.875. EM. ST. 23.625. E5. Promedio. 7.17. 6.75. 6.50. 6.73. 11.33. 11.54. 10.90. 10.72. 10.88. 14.875. 14.25. 14.375. 15.25. 14.72. 22.125. 21.75. 22. 23.625. 22.62. DI. RE. CC I. O. N. DE. SI. 4. E4. 6.82. AS. 1. IN FO. ENSAYO 262.5 PPM / mm E1 E2 E3. DE. DIAS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) CO. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. Anexo 8: Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) luego de ser sometido a la concentración de 350 ppm del fungicida Fitoklin, después de 4 días de evaluación.. ENSAYO 350 PPM / mm E1 E2 E3. DE. DIAS. 4.60. 5.64. 5.84. 5.26. 9.85. 8.65. 9.24. 9.40. 8.99. 11.375. 12.625. 11.625. 11.875 11.625. 11.82. 18.50. 19. 18.50. 19.375 18.875. 18.85. EM ST DE. DI. RE. CC I. O. N. 4. SI. 3. Promedio. 5. 7.82. 2. E5. 5.21. AS. 1. E4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. Anexo 9: Crecimiento lineal promedio de Trichoderma viride (mm) luego de ser sometido a la concentración de 437.5 ppm del fungicida Fitoklin, después de 4 días de evaluación.. ENSAYO 437.5 PPM / mm E1 E2 E3 3.41. 2. 7.72. 3. 11.25. ST. EM. AS. 1. DE. DIAS. 18.25. E5. Promedio. 4.22. 4.4. 4.12. 4.52. 4.13. 8.43. 8.51. 8.12. 8.94. 8.34. 11.625. 11. 10.625. 10. 10.9. 19. 17.25. 17.25. 17.125. 17.77. DI. RE. CC I. O. N. DE. SI. 4. E4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 10: Análisis de varianza (ANOVA) del porcentaje de crecimiento de Trichoderma viride frente a las diferentes concentraciones del. AC IÓ. N. fungicida Fitoklin, utilizando el método DHS de Tukey.. UN IC. Análisis de varianza univariante. Factores inter-sujetos. 4. 1,00. 4. 2,00. 4. 3,00. 4. 4,00. 4. CO. 437,50. Y. 4. A. 350,00. IC. 4. DE. Días. 262,50. ÁT. (ppm). 4. RM. Fitoklin. ,00. IN FO. Concentración. M. N. Pruebas de los efectos inter-sujetos. AS. Variable dependiente: Crecimiento lineal Suma de. gl. Media. EM. Origen. SI ST. cuadrados tipo. Modelo corregido. F. Sig.. cuadrática. III. 1053,311a. 6. 175,552. 19,859. ,000. 3359,362. 1. 3359,362. 380,020. ,000. 385,613. 3. 128,538. 14,541. ,001. 667,698. 3. 222,566. 25,177. ,000. Error. 79,560. 9. 8,840. Total. 4492,232. 16. Total corregida. 1132,871. 15. DE. Intersección. RE. CC. IO. dias. N. cc. DI. a. R cuadrado = ,930 (R cuadrado corregida = ,883). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Pruebas post hoc Subconjuntos homogéneos Crecimiento lineal. N. AC IÓ. Concentración. N. DHS de Tukey Subconjunto. Fitoklin. 1. 2. 10,2850. 350,00. 4. 11,2300. 262,50. 4. 13,7375. ,00. 4. M. 4. CO. 437,50. UN IC. (ppm). 22,7075 ,404. 1,000. Y. Sig.. A. Se muestran las medias de los grupos de. IC. subconjuntos homogéneos.. ÁT. Basadas en las medias observadas.. RM. El término de error es la media a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 4,000. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. b. Alfa = 0,05.. IN FO. cuadrática(Error) = 8,840.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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