Frecuencia de betalactamasas de espectro extendido y carbapenemasas en Escherichia coli y Klebsiella sp aisladas de urocultivos en hospitales de la ciudad de Trujillo, La Libertad, 2012

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(1)DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE. M UN. IC. AC IÓ. N. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. CO. Dr. Orlando Velásquez Benites. RM ÁT. IC. A. Y. RECTOR. IN FO. Dr. Santiago Uceda Castillo. Dr. Hermes Escalante Añorga. DE. SI. ST. EM. AS. DE. SECRETARIO GENERAL. DI. RE CC IO. N. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. César Jara Campos SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. M UN. IC. ______________________________. CO. Ms.C. Pedro Alvarado Salinas. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. PRESIDENTE. DE. ______________________________. SECRETARIO. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. Dr. Pedro Mercado Martínez. ______________________________ Ms.C. Anibal Quintana Díaz VOCAL. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la tesis: Frecuencia de. AC IÓ. N. betalactamasas de espectro extendido y carbapenemasas en Escherichia. IC. coli y Klebsiella sp. aisladas de urocultivos en hospitales de la ciudad de. M UN. Trujillo, La Libertad, 2012 ; certifica que ésta ha sido desarrollada de. CO. conformidad con los objetivos propuestos en su proyecto, y que el informe ha. A. Y. sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias alcanzadas.. _________________________________. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. Trujillo, 16 de Julio de 2013.. SI. Dr. Pedro Mercado Martínez. DE. Profesor Principal a D. E. DI. RE CC IO. N. Departamento de Microbiología y Parasitología. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. N. Los docentes que suscriben, miembros del jurado examinador, declaran que el. AC IÓ. presente informe científico tipo tesis ha cumplido con los requisitos formales y. CO. M UN. IC. fundamentos, siendo aprobado por UNANIMIDAD.. A. Y. ______________________________. RM ÁT. IC. Ms.C. Pedro Alvarado Salinas. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. EM. ______________________________. SECRETARIO. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Dr. Pedro Mercado Martínez. ______________________________ Ms.C. Anibal Quintana Díaz VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A:. AC IÓ. N. DIOS. IC. Porque sin Él, nada es posible, por colocarme en. M UN. el mejor camino, iluminando cada paso de mi vida y a la VIRGEN, por ser mi consuelo y. CO. fortaleza en los momentos de debilidad.. IC. A. Y. A mi amado hijo:. RM ÁT. RODRIGO ALONSO. Por ser la luz y la fuerza que me impulsa a ser. ...Te amo hijo. AS. DE. IN FO. cada día mejor.. EM. A mis queridos padres:. SI. ST. MANUEL Y FANNY. DE. Gracias por ser el regalo más precioso que he recibido de la. N. vida, por todo su inmenso amor, por ser mi inspiración,. RE CC IO. fortaleza y motivación. Gracias por su incesante lucha en esta vida por darme. DI. siempre lo mejor, por sus sabios consejos y enseñanzas. Por estar junto a mí y servirme de guía en los momentos más. difíciles y por sus palabras de aliento para salir adelante en todo momento… ¡LOS AMO!. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A las mejores hermanas del mundo: KRISTHY Y STEPHANNY. AC IÓ. N. Por ser más que eso, por ser mis mejores amigas, por su constante apoyo, confianza, fe y optimismo a. M UN. IC. través de estos años en la realización de mis ideales,. CO. y por incentivarme a seguir adelante de manera. IC. A. Y. firme y constante. …Las adoro.. RM ÁT. A mi amor:. IN FO. MILAGROS MARITZA ARMAS YSLA. DE. Por sus consejos, su preocupación y por el apoyo. AS. incondicional tanto en lo personal como en lo. conmigo en las buenas y en las malas…Te amo. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. profesional, por comprenderme y estar siempre. A la memoria de mis abuelos: GONZALO, JOSE Y MARGARITA. Que no alcanzaron a ver los resultados de lo que sembraron, y porque a pesar de los años y la distancia, seguirán viviendo en mis pensamientos.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. AC IÓ. N. A mi asesor Dr. Pedro Mercado Martínez por su apoyo en la elaboración de la presente tesis. A él mi más sincero reconocimiento, por sus consejos y por. M UN. IC. contribuir con mi crecimiento profesional.. Al Microbiólogo Percy Asmat Marrufo, por el apoyo incondicional. Y. CO. brindado para la elaboración de esta tesis.. IC. A. Al Laboratorio de Referencia Regional en Salud Pública, por las. RM ÁT. facilidades brindadas para que la presente tesis se realice en sus instalaciones,. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. así como por los materiales proporcionados.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de Grados y. AC IÓ. N. Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración y criterio la presente Tesis titulada: “Frecuencia de betalactamasas de. M UN. IC. espectro extendido y carbapenemasas en Escherichia coli y Klebsiella. CO. sp. aisladas de urocultivos en hospitales de la ciudad de Trujillo, La. Trujillo, 18 de Julio del 2013.. ________________________________ Br. MANUEL ALONSO PINEDA BAZÁN. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. optar el Título Profesional de Biólogo-Microbiólogo.. Y. Libertad, 2012”, con lo cual, pretendo cumplir con uno de los requisitos para. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN El surgimiento de enterobacterias resistentes a los antibióticos representa un gran. AC IÓ. N. problema actualmente, siendo las cepas productoras de betalactamasas de espectro. extendido (BLEE) y carbapenemasas un ejemplo de este fenómeno. A fin de. M UN. IC. determinar la frecuencia de producción de betalactamasas de espectro extendido y carbapenemasas en cultivos de Escherichia coli y Klebsiella sp. aislados de. CO. urocultivos en hospitales de la Ciudad de Trujillo-2012, se analizaron 40 cultivos. A. Y. distribuidos en especies de E. coli y Klebsiella sp. Para la detección de BLEE se. RM ÁT. IC. utilizó como método preliminar el de Kirby-Baüer, adicionalmente se utilizó la prueba confirmatoria como sinergia del doble disco. Del total de cultivos estudiados,. IN FO. solo 3 cultivos (7.5%) fueron productores de BLEE, siendo Klebsiella sp. (15%) el microorganismo con mayor producción de esta enzima, resultado estadísticamente no. AS. EM. betalactamasas es baja.. DE. significativo, esto implica que la frecuencia de producción de este tipo de. ST. Para la detección de carbapenemasas se utilizó como método preliminar el de Kirby-. SI. Baüer y como prueba confirmatoria el método de Hodge Modificado, con el cual no. RE CC IO. N. DE. se confirmó la presencia de carbapenemasas en todos los cultivos estudiados.. Palabras clave: Escherichia coli, Klebsiella sp. , betalactamasa de espectro. DI. extendido, carbapenemasas.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE Páginas. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE. AC IÓ. N. OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO…...ii. IC. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR…………………………………..iii. M UN. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR…………………………………………….....….iv. Y. CO. APROBACIÓN…………………………………………….....……………………...v. IC. A. DEDICATORIA………………………………………………………………..…....vi. RM ÁT. AGRADECIMIENTO………………………………………………….……..…....viii. IN FO. PRESENTACIÓN……………………………………………………………….......ix. DE. RESUMEN……………………………………………………………………..….....x. EM. AS. INDICE...……………………………………………………………………..…..... xi INTRODUCCIÓN………………………………………………………...….. 1. II.. MATERIAL Y MÉTODOS…………………………...…………………..….11. III.. RESULTADOS………………………………………………………….....…16. IV.. DISCUSIÓN………………………………………………………………..…18. V.. CONCLUSIONES………………………………………………………….....23. VI.. RECOMENDACIONES………………………………………………......….24. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. I.. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………..25. VIII.. ANEXOS…………………………………………………………………..….31. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN. Las enterobacterias constituyen el grupo más grande y heterogéneo de bacilos. AC IÓ. N. gran negativos de gran importancia en la patología infecciosa, estando implicados en. diferentes síndromes clínicos1,2, constituyen una amplia familia de bacilos aerobios y. M UN. IC. anaerobios facultativos, que no forman esporas, no producen oxidasas pero reducen los nitratos a nitritos. Tienen requerimientos nutricionales relativamente simples,. CO. fermentan azúcares con diversos productos finales y pueden presentar movilidad. IC. A. Y. gracias a que en algunos casos cuentan con flagelación peritrica3, 4.. RM ÁT. Son organismos ubicuos que yacen en el suelo, el agua, y la vegetación; conforman el componente mayoritario de la flora normal intestinal pero son poco. IN FO. frecuentes en otros sitios del organismo; algunos se asocian siempre con enfermedad. DE. mientras que otros como Escherichia coli y Klebsiella pneumoniae forman parte de. AS. la flora comensal y pueden causar infecciones oportunistas en determinadas. EM. circunstancias. El género Escherichia puede infectar sistema nervioso central, tracto. ST. respiratorio bajo, torrente sanguíneo, tracto gastrointestinal y tracto urinario;. SI. mientras que el género Klebsiella puede infectar tracto respiratorio bajo, torrente. N. DE. sanguíneo y tracto urinario 5.. RE CC IO. Escherichia coli y Klebsiella sp son importantes como causa de infección. intrahospitalaria y adquirida en la comunidad. La colonización del tracto. DI. gastrointestinal y/o de la orofaringe en pacientes hospitalizados es un mecanismo de infección por enterobacterias; también se transmiten a través de las manos del personal de salud y superficies húmedas5.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El descubrimiento de los antibióticos y su aplicación en la práctica médica han sido unos de los principales avances en la historia de la medicina 6, se define a los antibióticos como sustancias químicas sintetizadas por microorganismos que poseen. diversas de compuestos, a menudo se clasifican. AC IÓ. N. acción antimicrobiana. Aunque los antibióticos están constituidos por clases muy según su origen, efecto. M UN. IC. antimicrobiano, espectro de actividad y mecanismo de acción3.. CO. Los antibióticos betalactámicos constituyen el principal grupo de antibióticos y. Y. son los más utilizados para el tratamiento de las infecciones humanas. Esta familia de. IC. A. antibióticos viene definida químicamente por la presencia de un anillo betalactámico. RM ÁT. en su estructura, originándose cinco grandes grupos: penicilinas, cefalosporinas,. IN FO. carbapenemes, monobactames e inhibidores de las betalactamasas2. Un anillo betalactámico es un heterociclo de cuatro átomos, que tiene un con relación al nitrógeno de la lactama, éste es esencial para la. DE. oxígeno en posición. EM. AS. actuación de estos antimicrobianos; sin embargo, aislado carece de actividad. ST. antimicrobiana, por lo que necesita ser activado por otros radicales para unirse a las. SI. dianas donde ejerce su acción. La naturaleza de los radicales esenciales que se unen. DE. al anillo betalactámico, definen los diferentes grupos o clases de antibióticos. RE CC IO. N. betalactámicos, de allí se deduce que el número de familias, grupos y tipos de betalactámicos es muy numeroso 7.. DI. La similitud estereoquímica del anillo betalactámico con el dipéptido d-. alanina-d-alanina,. que. enlaza. las. cadenas. de. N-acetilmurámico. y. N-. acetilglucosamina del peptidoglicano 8, les permite interaccionar con diversas proteínas enzimáticas con actividad de transpeptidasas y carboxipeptidasas situadas. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en la superficie de la membrana plasmática bacteriana, moléculas encargadas de modelar la configuración definitiva de la capa del peptidoglucano, además de guiar su reorganización durante la división de las bacterias. A estas proteínas de membrana. AC IÓ. N. las conocemos genéricamente como proteínas fijadoras de penicilina (PBP) 9. La. IC. actividad antibacteriana de los betalactámicos está en relación con su capacidad para. M UN. interferir, de forma competitiva, en la actividad de las PBPs. El bloqueo de las PBPs permite la actuación de enzimas hidrolíticas (autolisinas endógenas), y como. Y. CO. consecuencia se produciría la lisis9. En presencia del antibiótico, las transpeptidasas. IC. A. hidrolizan el enlace amida del anillo betalactámico y se forma un éster estable entre. RM ÁT. el compuesto hidrolizado y un grupo hidroxilo de la serina del sitio activo de la enzima. Con ello se inhibe la transpeptidación, se desestabiliza la pared celular y. IN FO. finalmente se produce la lisis mediada por autolisinas8.. DE. Las bacterias a lo largo del tiempo han producido una amplia variedad de. AS. mecanismos de resistencia, con el fin de contrarrestar el efecto de los antibióticos. La. EM. resistencia bacteriana puede definirse como la capacidad de un microorganismo para. SI. ST. crecer en presencia de un antimicrobiano a dosis terapéuticas8 ; esta emerge. DE. principalmente debido a la presión selectiva generada por los antibióticos usados; los. N. cuales separan subpoblaciones bacterianas que esconden ventajosas mutaciones de. RE CC IO. resistencia o determinantes móviles de resistencia adquirida tales como plásmidos o transposones. La diseminación de la resistencia sobreviene como consecuencia de la. DI. difusión de clones o determinantes genéticos móviles, los cuales están directamente favorecidos por la homogeneidad e intensidad de la exposición en determinada población de pacientes10.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La resistencia que desarrollan las bacterias frente a los betalactámicos se deben al menos a tres mecanismos, que son independientes entre sí pero que pueden actuar sinérgicamente: alteración de las enzimas diana (PBPs), alteración de la. AC IÓ. N. membrana externa y producción de enzimas inactivantes (betalactamasas) 6. Las. IC. PBPs son necesarias para que la bacteria forme su pared celular, y los antibióticos. M UN. betalactámicos se fijan en estas enzimas impidiéndolo. Si la bacteria modifica sus. CO. PBPs de modo que no fijen antibiótico, se hará resistente; otros mecanismos serían la. Y. hiperproducción o la adquisición de PBPs resistentes. La modificación de la. IC. A. membrana externa, cuando es el único mecanismo implicado no suele ser importante,. RM ÁT. pero sí cuando se asocia a la producción de betalactamasas, siendo especialmente decisiva en los gram negativos, pues los betalactámicos entran a través de las. IN FO. porinas, que al modificarse o desaparecer pueden causar resistencia 6,11.. DE. La producción de enzimas inactivantes es sin duda el mecanismo más. AS. importante de resistencia a los betalactámicos ya que la adquisición de. EM. betalactamasas (plasmídicas o cromosómicas), es la causa más frecuente de. ST. resistencias. Las betalactamasas plasmídicas de gram negativos producen alto nivel. SI. de resistencia y están muy extendidas sobre todo entre las enterobacterias, algunas. DE. son de espectro ampliado y confieren resistencia a la práctica totalidad de los. RE CC IO. N. antibióticos betalactámicos11. Es importante recordar que antes de que la penicilina se usara en la práctica. DI. clínica, ya había pruebas de la producción de una betalactamasa por bacterias. El reporte clásico de Abraham describe la enzima (betalactamasa) bacteriana producida por una E. coli y su capacidad para inactivar la penicilina12. Asimismo, en 1942 se describió por primera vez la resistencia enzimática de S. aureus a la penicilina, a. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. estas enzimas se las denominaron penicilinasas. La evolución de este tipo de betalactamasas ocurrió rápidamente, su mecanismo de diseminación fue clonal, con genes que producían una betalactamasa inducible tipo A secretada extracelularmente. AC IÓ. N. en grandes cantidades13.. IC. En ausencia de nuevos antibióticos, se desarrolló una metodología para. M UN. vigilar y prevenir infecciones nosocomiales, con lo que se controló parcialmente el. CO. problema. La introducción de la ampicilina y la primera generación de cefalosporinas. Y. en 1960, medicamentos activos contra bacterias gran negativas, provocó en bacterias. IC. A. como S. aureus la producción de nuevas betalactamasas. En 1963 en una E. coli. denominada. TEM-1. Esta. betalactamasa. fue. diseminándose. IN FO. betalactamasa. RM ÁT. aislada de la orina de una niña en Atenas fue identificado un nuevo tipo de. mundialmente a través de plásmidos denominados transposones que afectaron a. DE. muchas especies bacterianas, incluyendo aquellas con resistencia intrínseca a los. AS. betalactámicos por medio de la producción de betalactamasas cromosómicas14.. EM. Las betalactamasas mediadas por plásmidos producen resistencia total a. SI. ST. penicilinas y moderada a cefalosporinas de primera generación. A partir de 1978, con. DE. la introducción de nuevas cefalosporinas, como cefoxitina, cefotaxima, ceftriaxona,. N. ceftazidima, y combinaciones de amoxicilina-clavulanato, ticarcilinaclavulanato,. RE CC IO. ampicilina-sulbactam e imipenem-cilastatina, aparecieron nuevas betalactamasas producidas por bacterias nosocomiales13,15. El primer problema se inició con la. DI. sobreproducción de betalactamasas cromosómicas específicas para una especie, por K. oxytoca en 1978, las características de esta bacteria fueron resistencia a cefuroxima, ceftriaxona y aztreonam, así como sensibilidad a cefoxitina y ceftazidima16.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El año 1983 marca el inicio de la aparición de las betalactamasas de espectro extendido (BLEE); es cuando ocurren mutaciones en la estructura genética de los genes responsables de la producción de betalactamasas mediadas por los plásmidos. AC IÓ. N. TEM, SHV y OXA17. El problema comienza con una K. pneumoniae productora de. IC. una betalactamasa mutante denominada SHV-2 con resistencia a la cefotaxima. La. M UN. mutación es similar a la ocurrida en betalactamasas tipo SHV, con sustitución de. CO. serina por glicina en la posición 23816,18. La resistencia alta a la cefotaxima provocada por una mutación única sugiere que el uso indiscriminado de cefotaxima. IC. A. Y. provocó la presión selectiva necesaria para su surgimiento17. Las BLEE son enzimas. RM ÁT. capaces de hidrolizar las cefalosporinas de segunda y tercera generación y los monobactámicos19, pero son susceptibles a los inhibidores de betalactamasas como. a. estos. compuestos. cuando. hay. hiperproducción. de. estas. DE. resistencia. IN FO. clavulanato, sulbactam, tazobactam y cefamicinas. Sin embargo, puede existir. AS. betalactamasas20.. EM. Un año previo a la aparición de las BLEE surgen las carbapenemasas, que. ST. pueden hidrolizar el imipenem21. El reporte original proviene de Londres, en donde. SI. se encontró una S. marcescens productora de esta nueva betalactamasa12. Estas. DE. enzimas además de degradar carbapenemes, están capacitadas para hidrolizar casi. RE CC IO. N. todos los betalactámicos, representando la familia más versátil de las betalactamasas con un espectro de hidrólisis de betalactámicos tan amplio que hasta el día de hoy no. DI. ha sido igualado por otras enzimas21.22. Se han descrito dos tipos de carbapenemasas con base en estudios moleculares. Las primeras son enzimas que poseen un residuo de serina en su sitio activo, razón por la cual se han denominado carbapenemasas tipo serina. El segundo grupo son enzimas que en su sitio activo requieren de. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cationes divalentes, usualmente zinc, como cofactor para su actividad enzimática; éstas últimas son las denominadas metalobetalactamasas23,24. Como es evidente, la evolución histórica de las betalactamasas está. AC IÓ. N. íntimamente ligada al uso clínico de los antibióticos betalactámicos. La presión. IC. selectiva de betalactamasas, desde el año en que empezó el uso clínico de la. M UN. penicilina, ha provocado la aparición de diferentes tipos de betalactamasas, así como de diversas mutaciones de las betalactamasas originales en bacterias responsables de. Y. CO. infecciones nosocomiales graves12.. IC. A. En el Perú, se tienen reportes locales sobre el avance de la resistencia a los. RM ÁT. antibacterianos en varios hospitales y clínicas en Lima, Arequipa y Cajamarca. En año 2006, Zavala E. realizó un trabajo cuantitativo descriptivo en el que determinó. IN FO. que el 81.89% de las enterobacterias estudiadas fueron productoras de BLEE y al. DE. evaluar la multirresistencia antibiótica determinó que el grupo productor de BLEE. AS. poseía una mayor multirresistencia (12.9%) que el grupo no productor de BLEE. EM. (3.96%). Abanto L., en el 2009, evaluó la producción de betalactamasas de espectro. ST. extendido (BLEE) en 50 cultivos de Escherichia coli aislados de urocultivos y. SI. determinó que la frecuencia de producción de estas enzimas fue de un 44%. En un. DE. estudio realizado el mismo año por Rivera M. et al, se evaluó a 45 cultivos de. RE CC IO. N. enterobacterias de importancia clínica, de los cuales doce presentaron resistencia por BLEE a cefalosporinas de tercera generación y/o monobactámicos, cuatro E. coli y. DI. cuatro E. cloacae fueron los más relevantes. Si bien las carbapenemasas no se han extendido a todo el mundo como las. BLEE, hoy en día el aumento en el uso de carbapenemes está llevando a una presión selectiva donde la resistencia mediada por estas enzimas es cada vez más frecuente 12.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Bratu et al en New York en el 2001, realizaron un estudio en el que evaluaron 602 aislados de K. pneumoniae, de los cuales un 3.3% eran productores de carbapenemasas. El problema ha comenzado a tener prevalencias alarmantes, es así. AC IÓ. N. que, en el año 2009 un estudio de vigilancia realizado por Yang et al en 14 hospitales. IC. de China, reportó un 32,6% de enterobacterias productoras de carbapenemasas. En. M UN. agosto de 2010 se informó sobre la emergencia de un mecanismo de resistencia en. CO. enterobacterias causante de brotes y relacionado a un aumento en la morbilidad y. Y. mortalidad intrahospitalaria en India, Pakistán e Inglaterra. Posteriormente se. A. notificaron casos en otros países de Europa, Japón, Australia, Canadá y los Estados. RM ÁT. IC. Unidos de América. Este mecanismo, por su origen geográfico, se le denominó “New. IN FO. Delhi metalobetalactamasa” 23.. Hoy en día, la resistencia antimicrobiana ha emergido como un asunto de. DE. salud pública importante, puesto que continúa en firme aumento a pesar de la. AS. introducción de nuevos antibióticos, y es la causa de un alto índice de mortalidad que. EM. puede avanzar a mayores consecuencias, de seguir en la misma línea respecto del. SI. ST. abuso de los antibióticos, además del daño económico que representa para la. DE. población. La evolución de las bacterias a través del tiempo ha permitido que se. N. produzca una multitud de especies diferentes y, a la vez, ha generado una diversidad. RE CC IO. de mecanismos de resistencia, que combaten los retos con los antibióticos. Como resultado de esto, incluso las bacterias que nunca han estado expuestas a antibióticos. DI. comerciales están en capacidad de producir genes de resistencia a medicamentos29. Dado el anterior escenario, no sólo hay una cantidad de especies patógenas que son potencialmente resistentes a los antibióticos, sino que los medios utilizados para causar dicha resistencia son muy variados. Cada patógeno puede requerir una 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. estrategia compensatoria específica cuando emergen cepas resistentes en un ambiente clínico30. Por ello son de especial interés los mecanismos responsables de la resistencia de Klebsiella pneumoniae y de Escherichia coli a carbapenemes y. AC IÓ. N. cefalosporinas de amplio espectro, sobre todo debido a betalactamasas de espectro. IC. extendido y carbapenemasas, que han surgido con el uso indiscriminado de estos. M UN. medicamentos. La tendencia actual en todo el mundo es la realización de estudios de. CO. vigilancia epidemiológica para tratar de establecer e identificar patógenos. Y. prevalentes y así desarrollar estrategias de control y prevención encaminadas a. IC. A. ayudar al médico a supervisar más de cerca la terapia antibiótica o a seleccionar una. puede. controlar. progresivamente. la. RM ÁT. terapia alterna para el adecuado manejo de infecciones. Una terapéutica correcta resistencia. bacteriana,. sobre. todo. DE. emergentes productoras de BLEE.. IN FO. intrahospitalaria, y con ello en un futuro se podría aspirar a la erradicación de cepas. AS. Por lo que, en este estudio se intenta determinar ¿Cuál es la frecuencia de. EM. producción de betalactamasas de espectro extendido y carbapenemasas en cultivos de. SI. ST. Escherichia coli y Klebsiella sp. aislados de urocultivos en hospitales de la Ciudad. DE. de Trujillo-2012?. RE CC IO. N. Los objetivos del estudio fueron:. Objetivo General:. DI. Determinar la frecuencia de producción de betalactamasas de espectro extendido y carbapenemasas en E. coli y Klebsiella sp. aisladas de urocultivos provenientes de. hospitales de la ciudad de Trujillo - La libertad, durante el periodo comprendido entre Julio y Setiembre del 2012.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Objetivos específicos: Determinar el porcentaje de betalactamasas de espectro extendido en E. coli y. N. Klebsiella sp aisladas de urocultivos provenientes de Hospitales de la ciudad de. AC IÓ. Trujillo - La libertad, durante el periodo comprendido entre Julio y Setiembre del. IC. 2012.. M UN. Determinar el porcentaje de carbapenemasas en E. coli y Klebsiella sp aisladas de. CO. urocultivos provenientes de Hospitales de la ciudad de Trujillo- La libertad,. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. durante el periodo comprendido entre Julio y Setiembre del 2012.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1. Material de estudio. AC IÓ. N. 2.1.1. Material Biológico. 40 Cultivos de Escherichia coli y Klebsiella sp aislados de urocultivos obtenidos en. Métodos. CO. 2.2.. M UN. IC. hospitales de la Ciudad de Trujillo, en el periodo de Julio a Noviembre del 2012.. A. Y. 2.2.1. Procedimento. RM ÁT. IC. 2.2.1.1. Recolección de la muestra. IN FO. Para la realización de este estudio se recogieron un total de 40 cultivos, de las especies E. coli y Klebsiella sp., en los servicios de Microbiología. DE. Clínica de los Hospitales Regional y Belén de la Ciudad de Trujillo en el. AS. periodo comprendido entre Julio a Noviembre del 2012, y que formaron. SI. ST. laboratorios.. EM. parte del conjunto de muestras que se procesan diariamente en estos. DE. Este proceso de recolección se realizó de forma aleatoria. Cada semana, al. RE CC IO. N. azar, se seleccionó una colonia con morfología compatible a E. coli o. DI. Klebsiella sp, crecida en Agar McConkey y no identificada previamente. Posteriormente,. cada. enterobacteria. procedimientos. habituales. de. cada. fue centro. identificada hospitalario. según. los. (métodos. automatizados). Finalmente fueron sembradas en tubos de vidrio (13 x 100 mm) con Agar Tripticasa Soya.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.2. Transporte de la muestra. Las muestras recolectadas durante cada semana, fueron colocadas en cajas. AC IÓ. N. térmicas convenientemente acondicionadas para evitar la ruptura de los tubos y transportadas al Laboratorio de Referencia Regional en Salud. M UN. IC. Pública para su procesamiento.. CO. 2.2.1.3. Determinación de cultivos productores de betalactamasas de espectro. Y. extendido (BLEE). IC. A. Para investigar la producción de betalactamasa de espectro extendido se. RM ÁT. evaluaron los 40 cultivos de Escherichia coli y Klebsiella sp. mediante el. IN FO. siguiente método:. DE. 2.2.1.3.1. Test de Tamizaje: Método de disco difusión (Kirby–Bauer). AS. A partir de un cultivo puro de Escherichia coli o Klebsiella sp, incubado por. EM. l8 a 24 horas se realizó una suspensión en solución salina fisiológica. SI. ST. ajustada al tubo 0.5 de la escala de Mac Farland. Dentro de los 15 minutos. DE. siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo, se sumergió un hisopo estéril. RE CC IO. N. en la suspensión y se rotó varias veces presionando firmemente sobre la pared del tubo, por encima del nivel del líquido, para remover el exceso de. DI. inóculo. Luego se inoculó la superficie seca de la placa con agar Mueller Hinton, estriando con el hisopo en tres direcciones para asegurar una distribución uniforme del inóculo y se dejó secar durante 5 minutos. Se colocaron los discos con antibiótico con carga estándar de 30 μg de. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ceftazidima (CAZ), Cefotaxima (CTX), Ceftriaxona (CRO) y Aztreonam (ATM). Las placas se incubaron a 35 °C por 18 horas. Se utilizaron como criterios de sospecha los diámetros de inhibición: CAZ ≤. AC IÓ. N. 22 mm, CTX ≤ 27mm, CRO ≤ 25 mm, ATM ≤ 27mm. A los cultivos que. IC. presentaron halos de inhibición, para al menos uno de estos antibióticos,. M UN. iguales o inferiores a los diámetros referidos, se les realizó un test. CO. confirmatorio de la presencia de betalactamasas de espectro extendido 31.. Y. 2.2.1.3.2. Test confirmatorio BLEE - Método de Jarlier (Comité de. RM ÁT. IC. A. Antibiograma de la Sociedad Francesa de Microbiología) Se utilizaron los discos habituales de Ceftazidima (30 μg), Cefotaxima (30. DE. Clavulánico (20/10 μg).. IN FO. μg), Aztreonam (30 μg) y Ceftriaxona (30 μg) y Amoxicilina/Acido. AS. Se realizó una suspensión del cultivo sospechoso, en solución salina. EM. fisiológica ajustada al tubo 0.5 de la escala de Mac Farland. Con un hisopo. ST. estéril, se inoculó la suspensión sobre la superficie de la placa con agar. SI. Muller Hinton y se dejó secar 5 minutos. Luego se colocó un disco de. DE. Amoxicilina/Ácido Clavulánico en el centro de la placa y alrededor, a 30. RE CC IO. N. mm de distancia, los discos de Ceftazidima, Aztreonam, Cefotaxima y. DI. Ceftriaxona. Las placas se incubaron a 35ºC por 18 horas.. Una imagen de sinergia entre el disco Amoxicilina/Ácido Clavulánico y los discos de Ceftazidima y/o Aztreonam y/o Cefotaxima y/o Ceftriaxona, se le consideró al test como positivo 31.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.4. Determinación de cultivos productores de carbapenemasas. Para investigar la producción de carbapenemasas se evaluaron los 40. Test de Tamizaje para detección de carbapenemasas.. IC. 2.2.1.4.1.. AC IÓ. N. cultivos de Escherichia coli y Klebsiella sp. mediante el siguiente método.. M UN. Se realizó por el método de disco difusión en Agar Mueller Hinton mediante. CO. la técnica de Kirby – Bauer: A partir de un cultivo puro de Escherichia coli. Y. o Klebsiella sp, incubado por 24 horas, se realizó una suspensión. IC. A. equivalente al tubo 0,5 de la escala de Mc Farland y se inoculó la superficie. RM ÁT. de la placa de agar Mueller Hinton. Se dejó secar unos minutos y se. IN FO. colocaron los discos de antibiótico con carga estándar de 10 µg de Imipenem (IMI). Las placas se incubaron a 35ºC por 18 horas.. DE. Se utilizó como criterio de sospecha el diámetro de inhibición: Imipenem ≤. EM. AS. 22 mm. Los cultivos sospechosos fueron sometidos a un test confirmatorio. ST. de la presencia carbapenemasas31. Test confirmatorio para carbapenemasas – Método de Hogde. DE. SI. 2.2.1.4.2.. RE CC IO. N. Modificado. Se prepararó una suspensión de E. coli ATCC 25922 ajustada a 0.5 de la. DI. escala de Mc Farland. Luego se realizó una dilución 1:10, agregando 0.5 ml de la suspensión en 4.5 ml de solución salina fisiológica 0.85%. Con un hisopo estéril se extendió la dilución 1:10 de E. coli ATCC 25922 sobre la superficie de una placa con agar Muller Hinton y se dejó secar 5 minutos.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Luego se colocó un disco de imipenem, con carga estándar de 10 ug, en el centro de la placa. En línea recta, se estrió el microorganismo de prueba desde el borde del. AC IÓ. N. disco hasta el borde de la placa. Cuatro organismos fueron evaluados en la. IC. misma placa.. M UN. Las placas se incubaron de la noche a la mañana a 35 ± 2 °C y a temperatura. CO. ambiente durante 24 horas.. Y. Una prueba positiva mostró crecimiento del E. coli ATCC 25922 a lo largo. IC. A. de la línea de crecimiento del microorganismo hacia el disco de. RM ÁT. carbapenem, dentro de la zona de inhibición; mientras que una prueba negativa no muestra crecimiento del E. coli ATCC 25922 a lo largo de la. DE. IN FO. línea de crecimiento del microorganismo 32.. EM. AS. 2.2.1.5. Presentación y Análisis de datos. ST. Los datos se presentan en gráficos y tablas, según el porcentaje de cultivos. SI. que produzcan betalactamasas de espectro extendido y carbapenemasas,. N. DE. indicando también los cultivos que no presenten dichas enzimas.. RE CC IO. Los datos que se obtengan serán sometidos a modelos estadísticos, tales como la Prueba Z y Prueba de Chi-Cuadrado (X2) de Pearson, con un nivel. DI. de significancia de 95% (α= 0.05).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. N. En la Tabla 01 se observa que Escherichia coli no presenta betalactamasas de. AC IÓ. espectro extendido (BLEE) ni carbapenemasas y Klebsiella sp solo presenta BLEE. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. en 15%, estadísticamente no significativo.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA 01: Frecuencia de 40 cultivos de Escherichia coli y Klebsiella sp. productores. de. betalactamasas. de. espectro. extendido. (BLEE). y. Cultivos Examinados. Carbapenemasas (+). 20. 0. 0. Klebsiella sp.. 20. 3. 15. TOTAL. 40. 3. 7.5. RM ÁT. IC. E. coli. n. %. CO. %. 0. 0. 0. 0. 0. 0. Y. n. M UN. BLEE (+). A. Microorganismo. IC. RESULTADOS. AC IÓ. N. carbapenemasas aislados de urocultivos en hospitales de la ciudad de Trujillo.. IN FO. BLEE: Betalactamasas de espectro extendido. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. Prueba Z: no hay diferencia significativa para Klebsiella sp. (p > 0,05). 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. En los últimos años, el problema de la resistencia a los antimicrobianos se ha. N. analizado con mayor interés en muchos países. Es un problema grave, de alcance. AC IÓ. mundial que va en aumento. Los mecanismos de resistencia bacteriana son cada vez. IC. más complejos y variados, dando como resultado el surgimiento de nueva resistencia. M UN. antibiótica3.. CO. En la práctica clínica el manejo de las infecciones del tracto urinario (ITU) no. A. Y. siempre es el adecuado 33, debido a ello, uno de los grandes problemas que se. RM ÁT. IC. enfrenta en la actualidad es la creciente emergencia de resistencia de los gérmenes a los antibióticos convencionales, especialmente Escherichia coli y Klebsiella sp., que. IN FO. son los principales microorganismos causantes de las ITU (90%) 34.. DE. En el presente estudio el porcentaje de enterobacterias productoras de BLEE, fue. AS. del 7.5 % (tabla 01), este porcentaje se asemeja a los resultados obtenidos por. EM. Sánchez, quien reporta un 8,7%, mientras que Loayza, obtuvo un porcentaje de. ST. 5,4%. Si bien en el Perú se han realizado pocos estudios sobre la presencia de esta. SI. enzima, en Lima se notifica su presencia entre un 2,9% y 44,4% para E. coli y K.. RE CC IO. N. DE. pneumoniae 26.. En la Tabla 01 se presenta. la frecuencia de producción de BLEE y. Carbapenemasas halladas por especie. Del total de cultivos, Klebsiella sp. con un. DI. 15%, fue el microorganismo en el que con más frecuencia se encontró la producción de BLEE, mientras que en E. coli no se detectó la presencia de esta enzima. Estos resultados reflejan la alta prevalencia mundial del género Klebsiella en esta forma de resistencia y se asemeja al estudio realizado por Hernández, el cual reporta a K. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. pneumoniae como el microorganismo en el que con más frecuencia se han venido describiendo BLEE. Ello, probablemente, está relacionado con el hecho de que esta especie forma parte de la flora normal, sobrevive durante bastante tiempo sobre la. AC IÓ. N. piel y los fomites y adquiere con cierta facilidad plásmidos conjugativos. Esta última. IC. posibilidad añade mayor gravedad al problema, pues la diseminación del. M UN. correspondiente elemento móvil favorece la aparición de brotes nosocomiales, determinando la emergencia en los últimos años de patógenos resistentes frente a los. Y. CO. que nos hemos quedado prácticamente sin posibilidades terapéuticas37.. IC. A. Las bacterias son particularmente eficientes en potenciar los efectos de la. RM ÁT. resistencia, no sólo por su habilidad de multiplicarse rápidamente; sino también, por. IN FO. su capacidad de transferir genes de resistencia a otras cepas o especies. Bacterias resistentes son capaces de diseminarse fácilmente entre la población, y. DE. particularmente, en ambiente donde el uso masivo de antimicrobianos y la presencia. AS. de pacientes debilitados (hospitales), hacen que la diseminación sea un fenómeno. EM. común20.. SI. ST. En el presente trabajo ninguna cepa presentó resistencia a carbapenemes. DE. (imipenem) lo que coincide con lo descrito por Valverde en el 2004 en donde. N. determino que el 100% de las cepas estudiadas fue sensible a ertapenem. Hernández. RE CC IO. en un estudio multicéntrico realizado en España determinó que todas las cepas de enterobacterias estudiadas fueron sensibles a imipenem. Otro estudio realizado por. DI. Betriu y cols, realizado en 70 aislados de enterobacterias, concluye que ertapenem presenta una excelente actividad en contra de las enterobacterias. En 1990 estudios realizados por Jacoby y cols en cepas de E.coli portadoras de BLEE obtienen que los carbapenemes son los antibióticos más activos frente a estas cepas. Otro estudio. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. realizado en Corea en cepas aisladas de orina no encuentran ninguna cepa resistente a imipenem41.. AC IÓ. N. Los carbapenemes se caracterizan por poseer un anillo βetalactámico que resulta esencial para su actividad antibacteriana y las diferencias que existen en las cadenas. IC. laterales de las moléculas básicas influyen en las propiedades farmacológicas y en el. M UN. espectro que determinan la sensibilidad o resistencia a la inactivación por las. CO. βetalactamasas42; la evolución de las bacterias ha generado la modificación en la. Y. cadena aminoacidica de las betalactamasas que les permite modificar su perfil de. IC. A. sustrato mejorando su capacidad de hidrólisis frente a los betalactámicos. Los. RM ÁT. cultivos analizados en el presente estudio fueron sensibles al imipenem, lo que indica. IN FO. que estas cepas aun no son capaces de alterar las cadenas laterales e hidrolizar el anillo betalactámico, por lo que podemos decir que los carbapenemes continúan. DE. siendo los antimicrobianos que aún conservan casi total actividad sobre cepas BLEE. EM. AS. positivas42.. ST. La aparición de enterobacterias resistentes a carbapenemes constituiría un serio. SI. problema de salud pública que afectaría a todo tipo de instituciones y a la comunidad. DE. en general. La rápida diseminación de estas enzimas de resistencia podría limitar. RE CC IO. N. gravemente la elección de antibióticos y constituiría una amenaza de aparición de. DI. infecciones con enterobacterias multirresistentes21.. Las enzimas carbapenemasas pueden ser confundidas con BLEEs, dado que. también confieren resistencia a cefalosporinas y son parcialmente inhibidas por ácido clavulánico y tazobactam. Este efecto de “enmascaramiento” probablemente haya contribuido a la diseminación de cepas productoras de carbapenemasas, dado que al. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ser los carbapenemes la primera línea de antibióticos para combatir las cepas productoras de BLEE, muchas de estas pueden haber sido enfrentadas a carbapenemes con el consiguiente fallo terapéutico 37. Por lo tanto es necesario. AC IÓ. N. conocer nuestra realidad local para tomar las medidas adecuadas y estar alertas ante. IC. la inminente llegada de las carbapenemasas, por lo que el conocimiento. M UN. epidemiológico y la caracterización de la resistencia se ha convertido en una necesidad imperiosa que es aun más importante al considerar la necesidad de definir. Y. CO. terapias empíricas en hospitales21.. IC. A. La producción de la enzima betalactamasa es el mecanismo de resistencia más. RM ÁT. común a los antibióticos; virtualmente toda bacteria tiene la capacidad de sintetizar. IN FO. esta enzima, la pueden poseer en forma nativa (cromosomal), o adquirir la capacidad de hacerlo por transferencia del ADN desde otros microorganismos (mediación por. DE. plásmidos). La importancia de determinar la cantidad de betalactamasa producida por. AS. un microorganismo pasa por el hecho de que una hiperproducción de la enzima. EM. podría ser causa de resistencia frente a inhibidores como el ácido clavulánico,. SI. ST. sulbactam, entre otros; aunque un alto número de bacterias producen la enzima en. DE. grandes cantidades de forma inducida o constitutivamente; de tal manera que este. RE CC IO. N. fenómeno inactivaría a todo antibiótico betalactámico 36.. El progreso en la investigación de estas enzimas puede contribuir no sólo al buen. DI. aprovechamiento de los betalactámicos en el tratamiento de infecciones, sino también, en limitar el fenómeno de la resistencia mediada por ellas 26; considerando. los resultados hallados en el presente trabajo, es necesario que se realicen estudios que permitan elaborar cuadros de evolución de las enzimas bacterianas, ya que los. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. patrones de resistencia han venido cambiando con mucha celeridad, sobre todo en infecciones urinarias donde los pacientes están más expuestos a los antibióticos; por ello, el tratamiento adecuado y oportuno de las mismas, tendrá un impacto. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. importante en los índices de salud26.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. CONCLUSIONES. La frecuencia de producción de betalactamasa de espectro extendido por. AC IÓ. N. Escherichia coli es negativa.. M UN. IC. La frecuencia de producción de betalactamasa de espectro extendido por. CO. Klebsiella sp no es significativa.. A. Y. La producción de carbapenemasas por Escherichia coli y Klebsiella sp es. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. negativa.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. RECOMENDACIONES. Proveer información que se pueda utilizar en la formulación de protocolos de. N. vigilancia epidemiológica para resistencia antimicrobiana dentro de las. AC IÓ. instituciones, con el fin de concientizar al personal hospitalario para que. M UN. IC. colaboren a disminuir la resistencia antimicrobiana dentro de la comunidad.. CO. Establecer un nexo estrecho con los demás laboratorios o con cualquier otra. Y. institución que funja como laboratorio de referencia, en donde se evalúen con. IC. A. otras metodologías, cepas que presenten comportamientos anormales frente a. IN FO. RM ÁT. antibióticos claves como imipenem, para su confirmación.. Incentivar la continuación de investigaciones que reporten la evolución de. DE. betalactamasas de espectro extendido y carbapenemasas en nuestro medio,. AS. región, país, así como con otras especies bacterianas, con la finalidad de. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. mejorar las condiciones de diagnóstico y tratamiento.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Rodés J, Carné X, Trilla A. Manual de terapeútica médica. Barcelona: Masson. 2002.. AC IÓ. N. Rivera M, Rodríguez C, Huayán G y Mercado P. Susceptibilidad a betalactámicos y resistencia por betalactamasas de espectro extendido (BLEE) en Enterobacteriaceae. IC. aisladas de reservorios ambientales de un hospital general en Cajamarca, Perú. Rev. M UN. Med Hered 2011; 22(2): 69-75.. CO. 2. Hernández E. Escherichia Coli productores de BLEE aislados de urocultivo:. A. Y. Implicaciones en el diagnóstico y tratamiento de la Infección Urinaria. [Tesis. RM ÁT. IC. Doctoral]. Universidad Complutense de Madrid. España, 2009. 3. Nájera M. Determinación de ß-Lactamasas de amplio espectro (BLEA) y ß-. IN FO. Lactamasas de espectro extendido (BLEE) en Enterobacterias provenientes de la Unidad Periférica del Instituto Guatemalteco de Seguridad social de la Zona 11.. DE. [Tesis Pre Grado]. Universidad de San Carlos de Guatemala. Guatemala, 2005.. EM. AS. 4. Madigan M, Martinko J y Parker J. Brock. Biología de los Microorganismos. 10° ed.,. ST. Editorial Pearson, Madrid, España. 2004.. SI. 5. Bueno G. Factores asociados a la infección por Escherichia coli y Klebsiella sp. DE. productoras de betalactamasas de espectro extendido en pacientes hospitalizados del. RE CC IO. N. Hospital Nacional Daniel Alcides Carrión – Callao: Setiembre 2008-Diciembre 2009. [Tesis Pre Grado]. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Perú 2010.. DI. 6. Bretón J. Vigilancia de la resistencia bacteriana en pediatría y su relación con el uso de antibióticos por medio del análisis de series temporales. [Tesis doctoral]. Universidad de Valencia. España, 2004.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. http://new.paho.org/hq/dmdocuments/2010/alertas_epi_2010_02_julio_carbapenemas as.pdf. N. 23. Suarez C, Kattan J, Guzmán A y Villegas M. Mecanismos de resistencia a. AC IÓ. carbapenems en P. aeruginosa, Acinetobacter y Enterobacteriaceae y estrategias para. IC. su prevención y control. Infectio 2006; 10(2): 85-93.. M UN. 24. Díaz J. Detección de metalobetalactamasas (MBLs) en Pseudomonas aeruginosa. CO. resistentes a los carbapenemas en un Hospital Nacional, en los meses de enero a. Y. octubre del año 2008. Tesis para optar el grado académico de Magister en. IC. A. Microbiología. Universidad NacioXnal Mayor de San Marcos. Perú, 2008.. RM ÁT. 25. Zavala E. Correlación entre producción de betalactamasas de espectro extendido en urocultivos y la multirresistencia antibiótica en el H.C.F.A.P. Julio 2005 - Diciembre. DE. Interna USMP. Disponible en:. IN FO. 2006. Tesis para optar el grado de Maestro en Medicina con mención en Medicina. AS. http://www.medicina.usmp.edu.pe/academico/postgrado/publicaciones/tesis/maestria/. EM. art_1_resumen.php. ST. 26. Rivera M, Rodríguez C y Huayán G. Pseudomonas aeruginosa productora de. DE. SI. betalactamasa clásica y de espectro extendido en reservorios de un servicio de. N. neonatología. Rev Peru Med Exp Salud Pública 2008; 25(2): 250-52.. RE CC IO. 27. Bratu S, Landman D, Haag R, Recco R, Eramo A et al. Rapid spread of carbapenemresistant Klebsiella pneumonia in New York City: a new threat to our antibiotic. DI. armamentarium. Arch Intern Med 2005; 165: 1430-1435.. 28. Yang Q, Wang H, Sun H, Chen H y Xu Y. Phenotypic and Genotypic Characterization of Enterobacteriaceae with decreased susceptibility to carbapenems:. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(42) IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. ANEXOS. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..