Efecto de la concentración del aceite esencial de Ocimum basilicum sobre el crecimiento de Fusarium sp, in vitro

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. AS. BI O. LO. G. IC. AS. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS. CI. "Efecto de la concentración del aceite esencial de Ocimum basilicum. EN. sobre el crecimiento de Fusarium sp, in vitro". CI. TESIS. BIÓLOGO. AUTOR:. Br. BILLY JEAN RAMOS SEGURA ASESOR: Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. PARA OBTENER EL TITULO DE. TRUJILLO – PERU 2019. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. LO. Dr. ORLANDO MOISÉS GONZALES NIEVES. EN. CI. AS. BI O. Rector de la Universidad Nacional de Trujillo.. CI. Dr. RUBÉN CÉSAR VERA VELIZ. CA. DE. Vice – rector Académico de la Universidad Nacional de Trujillo.. TE. Dr. WEYDER PORTOCARRERO CÁRDENAS. BI. BL. IO. Vice – rector de Investigación de la Universidad Nacional de Trujillo.. Dr. STEBAN ILICH ZERPA Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. BI O. Dr. FREDDY ROGGER MEJIA COICO. CI. EN. CI. AS. Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas.. DE. DR. WILLIAN ZELADA ESTRAVER. BI. BL. IO. TE. CA. Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas.. DR. FREDDY PELAEZ PELAEZ Director de la Escuela Académico Profesional de Ciencias Biológicas. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DEDICATORIA. Esta tesis, la dedico a mi madre Antonia Elena Segura Mauricio, por ser esa persona. IC. incondicional que estuvo siempre a mi lado brindándome su mano amiga y dándome a cada. G. instante una palabra de aliento para llegar a culminar mi profesión, pero sobre todo por haber. LO. creído en mí a pesar de todos los obstáculos.. BI O. A mi padre Luis Alberto Ramos Soriano, por ser un ejemplo a seguir, ser la fortaleza en mis debilidades, la alegría en mis tristezas y mi motor para no desfallecer ante las múltiples. AS. adversidades que me pone la vida.. DE. CI. EN. CI. A mi hermanita Marielena Hillary Ramos Segura por ser mi motivó para seguir adelante.. BI. BL. IO. TE. CA. Billy Jean Ramos Segura. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AGRADECIMIENTO. G. IC. Quiero expresar mi gratitud a Dios, quien con su bendición llena siempre mi vida.. LO. Mi profundo agradecimiento, a mis abuelos por estar siempre presentes.. BI O. De igual manera mis agradecimientos a mi estimado asesor, Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo, quien con la enseñanza de sus valiosos conocimientos hicieron que pueda crecer día. AS. a día como profesional, gracias por su paciencia, dedicación, apoyo incondicional y amistad.. Finalmente, quiero expresar mi más grande y sincero agradecimiento al Dr. Federico. CI. Gonzales Veintimilla por su infinito apoyo de manera incondicional durante el trayecto de mi. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. profesional como ser humano.. EN. carrera, quien con su dirección, conocimiento y enseñanza colaboró con mi formación tanto. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. Dra. Marlene Rene Rodríguez Espejo. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Ms. Abhel Arthur Calderón Peña. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. AS. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento. IC. de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a. G. vuestra consideración y claro discernimiento la tesis titulada: “Efecto. LO. de la concentración del aceite esencial de Ocimum basilicum sobre el. BI O. crecimiento de Fusarium sp, in vitro”.. AS. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u. TE. CA. DE. Trujillo, enero de 2019.. CI. EN. sometemos a vuestro dictamen.. CI. omisiones cometidos en la elaboración del informe de tesis, nos. BI. BL. IO. Br. BILLY JEAN RAMOS SEGURA. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. IC. AS. El que suscribe, profesor asesor de tesis:. G. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo, asesor de la tesis titulada: “Efecto. LO. de la concentración del aceite esencial de Ocimum basilicum sobre el. BI O. crecimiento de Fusarium sp, in vitro”. AS. CERTIFICA. CI. Que la presente tesis ha sido desarrollada con conformidad al. EN. respectivo proyecto y las orientaciones brindadas a la tesista.. CI. En lo referente al informe final, ha sido revisado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo a la. CA. correspondiente.. DE. Bachiller Billy Jean Ramos Segura, continuar con el trámite. BI. BL. IO. TE. Trujillo, enero de 2019.. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo ASESOR. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. AS. Los suscritos, miembros del Jurado declaran que la presente Tesis ha. IC. sido ejecutada en concordancia con las Normas de la Escuela. LO. AS. BI O. Biológicas - Universidad Nacional de Trujillo.. G. Académico Profesional de Ciencias Biológicas, Facultad de Ciencias. CI. Dra. Marlene Rene Rodríguez Espejo. CA. DE. CI. EN. PRESIDENTE. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. Ms. Abhel Arthur Calderón Peña. Dr. Marco Leoncio Salazar Castillo VOCAL. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. AS. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo…………………...…………...ii Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas………………………...……...iii. CI. AS. BI O. LO. G. IC. Dedicatoria………………………….…………………………..……….............…iv Agradecimiento…………………………………………………………...….……..v Miembros del Jurado……………………………...………………………...……...vi Presentación…………………………………………………………………...…..vii Del Asesor ………………….……………………………………………………viii Aprobación………………………………………………………………………....ix Índice…..…………………………………………………………………..……......x Resumen………….………………………………………………………………...xi Abstract …………...…………………………………………………...………….xii Introducción…………………………………………………………………….…...1. DE. Procesamiento ……………………….………………………………….…….7 Obtención del aceite esencial de Ocimum basilicum L............................7 Preparación de las concentraciones del aceite esencial……………..…….8 Obtención de Fusarium sp…..……………………………….……...….8 Efecto de la concentración del aceite esencial de hojas de albahaca sobre. CA. 2.4. 2.4.1. 2.4.2. 2.4.3. 2.4.4.. CI. EN. Material y Métodos……………………………...………………………………..…6 2.1. Lugar de ejecución ...................………..………………………..….…..6 2.2. Colección del material biológico…………….……………..………......6 3.3. Selección del material biológico ………….…………………….……..7. BI. BL. IO. TE. el crecimiento de Fusarium sp………………………..………………..…....9 2.5 Diseño experimental ……………………………………….………….…11 2.6. Análisis de datos……………...………………………………………….11 Resultados…………………………………..……………………………………..12 Discusion………………………………………………………………………......16 Conclusion………………………………..………………………………………..19 Referencias Bibliograficas………………………….……………………………..20 Anexo…………………………………………………………………….………..25. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. El presente trabajo de tesis tuvo como propósito evaluar el efecto del aceite esencial de. AS. Ocimum basilicum L. “albahaca” sobre el crecimiento de Fusarium sp in vitro. Para la cual,. IC. se preparó Agar Sabouraud conteniendo concentraciones de dicho aceite esencial de 0.5, 2.0,. G. 5.0, 10.0, 20.0 y 50 µL/mL, respectivamente y además del control (0 µL/mL). Sobre dicho. LO. medio se sembró por puntura central un fragmento de micelio de Fusarium sp, proveniente. BI O. de un cultivo monospórico, se incubó a 25 °C hasta 13 días y las lecturas del crecimiento micelial se realizaron midiendo el diámetro de la colonia, en milímetros. Se encontró que el. AS. aceite esencial de albahaca, en la concentración de 0,5 µL/mL, produce un crecimiento micelial del 85,71% , corresponde a una inhibición del crecimiento del 14,29% y desde la. CI. concentración de 2 µL/mL no permite el crecimiento de Fusarium sp, es decir es inhibido el. EN. 100% y se concluye que concentraciones ≥2.0 µL/mL del aceite esencial de Ocimum. DE. CI. basilicum L. “Albahaca” afectan el 100% el crecimiento de Fusarium sp in vitro.. BI. BL. IO. TE. CA. Palabras clave: Ocimum basilicum, aceite esencial, Fusarium sp, crecimiento.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT The purpose of this thesis was to evaluate the effect of the essential oil of Ocimum basilicum. AS. L. "basil" on the growth of Fusarium sp in vitro. For which, Sabouraud Agar was prepared. IC. containing concentrations of said essential oil of 0,5; 2,0; 5,0; 10,0; 20,0 and 50,0 μL / mL,. G. respectively and in addition to the control (0,0 μL / mL). A fragment of mycelium of Fusarium. LO. sp from a monosporic culture was seeded on said medium by central puncture, incubated at. BI O. 25° C for up to 13 days and mycelial growth readings were made by measuring the diameter of the colony, in millimeters. It was found that the essential oil of basil, in the concentration of 0,5 μL / mL, produces a mycelial growth of 85,71%, corresponds to a growth inhibition of. AS. 14.29% and from the concentration of 2,0 μL / mL does not allow the growth of Fusarium sp,. CI. that is, it is 100% inhibited and it is concluded that concentrations ≥2,0 μL / mL of the essential. CI. EN. oil of Ocimum basilicum L. "basil" affect 100% the growth of Fusarium sp in vitro.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Key words: Ocimum basilicum, essential oil, Fusarium sp, growth. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCIÓN En las últimas décadas, el aumento de la resistencia antifúngica y el decremento de la disponibilidad económica para adquirir medicamentos, han promovido investigaciones en búsqueda de compuestos fitoquímicos como una alternativa al tratamiento contra las 1-3. . Cabe destacar que dicha búsqueda alcanza a productos de origen. AS. distintas micosis. natural vegetal, que sean seguros, no tóxicos, eficaces y de bajo costo; así, los aceites. G. IC. esenciales y en este caso el de albahaca sería una excelente alternativa a investigar.. LO. En Perú, se han evaluado los efectos de plantas provenientes del nororiente, como Cassia reticulata, Ilex guayusa Loes, Piper lineatum y Terminalia catappa4; encontrando que. BI O. extractos de estas plantas presentaron actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus, S. epidermidis, Escherichia coli, Candida albicans y Microsporum canis. En Brasil y Colombia, se realizaron estudios en plantas en los cuales encontraron que diversos. CI. AS. extractos inhibieron el desarrollo de hongos, en los que se incluye a M. canis 5, 6.. Su nombre genérico de albahaca deriva de la palabra griega ókimon que se traduce como. EN. oloroso, por la fragancia de sus hojas y el nombre específico de basilicòn, que significa real, ya que en la India es considerada una planta sagrada 7. Su introducción en Europa se. CI. debe, primero a los griegos (hace más de 2.000 años) y sucesivamente a los romanos. 8, 9. .. En Egipto fue utilizada como uno de los componentes del bálsamo usado para la. DE. momificación. Para los romanos, además de ser el símbolo de los enamorados, era uno de. CA. los olores usados en la cocina10.. Ocimum basilicum L. “albahaca” es una planta originaria de Persia y Asia Menor.. TE. Proveniente de Arabia, India e Irán. 11, 12. . O. basilicum conocida como albahaca es una. planta que pertenece a la familia de las Lamiaceae, tiene amplios y variados usos debido a. IO. sus múltiples propiedades; se cultiva en un gran número de países por sus cualidades. BL. medicinales, aromáticas, ornamentales y melíferas 5. Es una especie de plantas medicinales. aromáticas que contiene aceites esenciales, sobre todo de eugenol, de amplio uso en la. BI. medicina 11, 13.. Los aceites esenciales son mezclas complejas que se derivan de metabolitos secundarios extraídos de las plantas de la parte área, hojas, semillas, flores y raíces; los aceites esenciales en lugar de los extractos de plantas han tenido mayor uso en el tratamiento de patologías infecciosas. 15. . El aceite de albahaca tiene varios compuestos químicos que. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. incluyen α-pineno, canfeno, β-pineno, mirceno, limoneno, cis-ocimeno, alcanfor, linalool, metil-chavicol, γ-terpineol, citronelol, geraniol, metil-cinamato y eugenol. 15. . Presenta. principios activos ricos en estragol o metilchavicol (65 – 85%), linalol (hasta un 75 % en algunos quimiotipos), cineol, eugenol (20%), acetato de linalilo, saponósidos; flavonoides:. AS. qercitrósido, kenferol y esculósido, y ácido cafeico.. Se ha encontrado que del aceite esencial extraído de la parte aérea de la albahaca se han. IC. identificado 15 compuesto que representan el 79.2 % de los aceites totales identificados.. G. Los principales compuestos expresados en %, son linalol (29.7), éster del ácido metil. LO. cinámico (21.5), ciclohexano (4.0) entre otros, con una significativa actividad antifúngica. BI O. contra hongos fitopatógenos 16.. Generalmente, los aceites esenciales son mezclas complejas de hasta más de 100 componentes (metabolitos secundarios) que pueden ser compuestos alifáticos de bajo peso. AS. molecular (alcanos, alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres y ácidos), monoterpenos, sesquiterpenos y fenilpropanos. Estos metabolitos secundarios cubren un amplio espectro. CI. de efectos farmacológicos mostrando diversas propiedades biológicas, como propiedades 17. . Otras actividades biológicas. EN. antiinflamatorias, antioxidantes, y anticancerígenos. también se reportan como biocidas en contra de una amplia gama de microorganismos. CI. como bacterias, hongos, virus, protozoarios insectos y plantas 18.. DE. La utilización de los aceites esenciales surge como una alternativa al control de plagas y enfermedades pues su aplicación a nivel de laboratorio está demostrando eficiencia en el. CA. control de agentes fitopatógenos, creando la posibilidad de contar con estos productos que. TE. garantizan inocuidad en el ambiente y libres de residuos contaminantes 17.. La marchitez por Fusarium es causada por el hongo F. oxysporum transmitido por el suelo.. IO. Es una de las enfermedades más destructivas del banano en todo el mundo. Su nueva Raza. BL. 4 Tropical (Foc R4T) ha causado graves pérdidas en el Sudeste Asiático, afectando negativamente la subsistencia de los pequeños productores. Recientemente, se ha extendido. BI. a África (Mozambique) y al Medio Oriente, causando preocupaciones de su posible propagación al subcontinente indio y América Latina con repercusiones graves para los pequeños productores, los trabajadores y la cadena de valor del banano. La enfermedad puede propagarse a través de materiales vegetales y esporas y de partículas del suelo infestadas adheridas a herramientas agrícolas, zapatos, vehículos y cualquier otro medio. El riego y el drenaje de agua, en particular las inundaciones, juegan un papel crítico en la propagación 19 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fusarium es el hongo fitopatógeno de mayor dispersión mundial, recientemente se ha identificado en cultivos de piña en Costa Rica, aunque aún no se determinado la especie específica que ataca a este cultivo. Tiene alta incidencia en las plantaciones y a nivel mundial existen especies muy agresivas para la piña, como es el caso de F. guttiforme en. AS. Brasil, que provocó el cierre de plantaciones20.. IC. Fusarium es un hongo filamentoso del Phylum Ascomycota, Clase Ascomycetes, Orden. G. Hypocreales, Familia Nectriaceae; es un hongo saprofito, capaz de ingresar a la planta aún. LO. en ausencia de heridas. Este hongo se caracteriza por producir tres tipos de esporas: las microconidias, macroconidias y clamidosporas, estas últimas tienen paredes muy gruesas,. BI O. lo cual las hace muy resistentes a condiciones ambientales desfavorables, y a la ausencia de hospedantes 20.. AS. El género Fusarium se encuentra dentro de la división Ascomycota, clase Euascomyctes, orden Hypocreales y familia Hypocreaceae. La fase sexual o perfecta (también llamada. EN. CI. teleomórfo) se encuentra en los géneros Albonectria, Gibberella y Haematonectria 21.. La presencia de la enfermedad en campo se relaciona con condiciones que ocasionan. CI. problemas en la raíz, ya sea por hipoxia o anoxia o daño mecánico ocasionado al sistema radical. Las condiciones climáticas necesarias para que se desarrolle esta enfermedad son:. DE. temperatura entre 23 y 28°C, mucha lluvia y alta humedad relativa 20.. CA. Diferentes autores han informado la potencialidad del uso de aceites esenciales en el control de especies de Fusarium. Así, Udomsilp et al.. 22. reportaron que el aceite de Cassia (1%). TE. generó una completa inhibición de F. monoliforme Sheldon y F. proliferatum (Matsush). Por su parte, Barrera y García. 23. informaron resultados similares sobre Fusarium sp., con. IO. el aceite de Thymus vulgaris. Wogiatzi et al.. 24. reportaron que el aceite de Origanum. BL. vulgare L. “orégano” inhibió a F. oxysporum f. sp. lycopersici.. BI. En el aceite esencial de albahaca diferentes autores han identificado como componente principal al metilchavicol (52,40%). 25. y 63,32%) 26, y adicionalmente discriminaron la. presencia del linalol (20,10% y 7,96%) y alcanfor (0,60% y 0,94%) y humuleno (1,10% y 2,04%). También han identificado en el aceite esencial de hojas de albahaca “de clavo” o africana (Ocimum gratissimum L.) 27, los siguientes monoterpenos: cis-ocimeno (7,47%), alcanfor (0,95%), β-pineno (1,10%), de sesquiterpenos como el β-bisaboleno (0,73%) y el germacreno D (4,25%) respectivamente. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En Turquía, en las partes aéreas de los cultivos de O. basilicum 28, se ha reportado en el aceite esencial, como componente mayoritario, la presencia de metileugenol (78,02%), aunque también informaron el humuleno (0,12%), el elemeno (0,24%), eucaliptol (0,001%), linalol (0,003%), cis-β-ocimeno (0,007%), α-pineno (0,002%) y mirceno. AS. (0,006%). Los mismos autores, en hojas de la misma especie de planta recolectada en el. mismo distrito y 4 años después, encontraron que los componentes mayoritarios fueron el. IC. estragol (52,60%) y el limoneno (13,64%). Destacando que también identifcaron al β-. También se ha encontrado, que en las partes aéreas. 29. LO. G. pineno, mirceno, cis-β-ocimeno, linalol y el humuleno.. de Ocimum basilicum, (en cultivos. BI O. egipcios) que los principales terpenos presentes son linalool (44.18%), cineol (13.65%), eugenol (8,59%), isocaryophyllene (3,10%), metil cinamato (4,26%) y a-cubebeno. AS. (4,97%).. La actividad antifúngica de extractos de plantas usadas en medicina popular contra diversos. CI. hongos, que causan infecciones frecuentes en humanos, animales y plantas ha sido. EN. ampliamente estudiada, debido a los efectos adversos de algunas de las drogas sintéticas antifúngicas utilizadas actualmente, que muchas veces son poco efectivas e inducen. CI. frecuentemente resistencia; también debido a los elevados costos de los tratamientos antimicóticos, numerosos investigadores han encaminado sus trabajos hacia la búsqueda y. DE. aplicación de nuevos compuestos biológicamente activos que exhiban efectos secundarios. CA. mínimos.. Las investigaciones a partir de extractos de plantas, ya sean de raíces, hojas, frutos o. TE. cáscaras, se ha intensificado y hay quienes opinan que la utilización de estos extractos, ejercen acciones más beneficiosas sobre el organismo humano, animal o de las mismas. IO. plantas que la exhibida por un compuesto aislado. Los productos generales, por lo general,. BL. producen menos reacciones secundarias indeseables y la acción curativa deseada se puede. BI. lograr, al estar varios principios activos presentes.. Se considera que de manera natural los aceites esenciales juegan un papel importante en los mecanismos de defensa de la planta en contra de microrganismos fitopatógenos, algunos tienen efecto antifúngico; reducen el crecimiento de las hifas, induce la lisis provocando la evacuación citoplasmática del hongo e involucra cambios en la composición de la célula, ruptura de la membrana plasmática, desorganización estructural de la mitocondria e interferencia de las reacciones enzimáticas de la membrana mitocondrial. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Además de que los aceites esenciales son compuestos naturales y por consecuencia son biodegradables, no son residuales y no afectan al ambiente. De ahí la importancia del uso de los aceites para el control de enfermedades fúngicas.. El presente trabajo de investigación busca evaluar el efecto de la concentración del aceite. AS. esencial de Ocimum basilicum sobre el crecimiento de Fusarium sp, in vitro, a fin de determinar la concentración más adecuada de aceite esencial de O. basilicum para el control. IC. del crecimiento micelial de Fusarium sp. in vitro, con la finalidad de reducir los daños. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. G. económicos generados por este hongo en los distintos cultivos donde ataca.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIAL Y METODO 2.1 Lugar de Ejecución: Este trabajo de investigación se realizó en el laboratorio de Tecnología Enzimática y Productos Naturales, Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal de la. IC. AS. Universidad Nacional de Trujillo.. G. 2.2 Colección de material biológico:. LO. El material biológico, para este trabajo fueron hojas de O. basilicum “albahaca” las que se colectaron de cultivos agrícolas ubicados en Pedregal (Anexo 1), distrito de Simbal,. BI O. localizado a 8°00’30.4” latitud Sur y a 78°49’39.0” Oeste, Provincia de Trujillo; éstas fueron colocadas en cajas de cartón para su traslado al laboratorio de Tecnología. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. Enzimática y Productos Naturales.. Fig 1. Foto satelital de tierras de cultivo de albahaca en Pedregal, Distrito de Simbal. Provincia de Trujillo, Libertad-Perú. Fuente: Google maps.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3 Selección de Material Biológico: El material biológico colectado fue debidamente clasificado, seleccionándose las que estuvieron aparentemente sanas y completas. Una muestra de las plantas de Ocimum basilicum L. fue llevada al Herbarium Truxilense (HUT) de la Universidad Nacional. IC. especie (Anexo 2). Código de identificación taxonómica N° 59594.. AS. de Trujillo para su identificación taxonómica según el sistema filogenético de la. G. 2.4 Procesamiento:. LO. 2.4.1 Obtención del aceite esencial de O. basilicum “albahaca”. BI O. La obtención del aceite esencial de O. basilicum se realizó en un equipo de destilación por arrastre de vapor de agua 30, en el laboratorio de Farmacognosia,. AS. Departamento Académico de Farmacotecnia – Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional de Trujillo. Para ello se verificó que en la. CI. cámara generadora de vapores contenga agua en cantidad suficiente para la. EN. extracción respectiva, se cargó la cámara de extracción de aceites esenciales con. CI. la planta completa de albahaca, previamente seleccionada, equivalente a. DE. aproximadamente a un peso de 5 Kg, se colocó la tapa de dicho equipo, se cerró herméticamente y se conectó a la energía eléctrica hasta ebullición; se. CA. hidrodestilaron los aceites esenciales por 20 min y se colocó en una pera de separación. Se repitió este procedimiento hasta extraer los aceites esenciales de. TE. un peso total de plantas de 20 kg. Se mezclaron los hidrolatos separados en cada. BI. BL. IO. proceso de extracción, se eliminó el exceso de agua y finalmente se deshidrato con sulfato de sodio anhidro, obteniendo un volumen total de 6 mL de dicho aceite esencial crudo, el cual fue colocado en un frasco de color ámbar previa rotulado y se conservó en refrigeración a 4°C hasta el momento de su uso.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4.2 Preparación de las concentraciones del aceite esencial de O. basilicum “albahaca” Se prepararon diferentes concentraciones (V/V) del aceite esencial de O. basilicum con una solución de tween 80 al 0,1% en viales de 2 mL. En la tabla 1 se observan las concentraciones del aceite esencial de O. basilicum. AS. “albahaca” preparadas para esta investigación. IC. Tabla 1. Concentraciones de aceite esencial de hojas de O. basilicum. LO. G. “albahaca” para evaluar el crecimiento de Fusarium sp in vitro.. Concentración A.E. (µL.mL-1). Control T1. BI O. Tratamiento. 0,5 2,0. T3. 5,0. CI. AS. T2. 10,0. T5. 20,0. T6. 50,0. EN. T4. CA. DE. CI. 0,0. 2.4.3 Obtención de Fusarium sp.. TE. El cultivo de Fusarium sp, fue donado por el laboratorio de tecnología. BI. BL. IO. Enzimática y Productos Naturales, Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal; el cual fue aislado de un trabajo previo a partir plantas de arveja con pudrición radicular de cultivos de Pedregal- distrito de Simbal;. cuyo aislamiento se desarrolló siguiendo la metodología de Castaño et al. (1998). 31. , se sembraron segmentos de tejido afectados en placas Petri. conteniendo agar PDA (papa- dextrosa-agar) + antibiótico y luego se incubaron a 25,0±1,0°C, hasta observar el crecimiento micelial y esporulación característico de Fusarium y se identificó el género mediante claves taxonómicas especializadas de hongos 32-35.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4.4 Efecto de la concentración del aceite esencial de hojas de O. basilicum “albahaca” sobre el crecimiento de Fusarium sp.. El efecto de la concentración del aceite esencial de hojas O. basilicum “albahaca” sobre el crecimiento de Fusarium sp. se determinó mediante el. AS. crecimiento micelial in vitro de dicho fitopatógeno en medio de cultivo agar Sabouraud con las concentraciones de 0,5; 2,0; 5,0; 10,0; 20,0 y 50,0 µL.mL-. en una solución de tween 80 al 0,1%. Como testigo control de crecimiento. LO. G. se utilizó la misma solución de tween 80 al 0,1%.. IC. 1. En cada placa Petri se sembró un fragmento de micelio del fitopatógeno a. BI O. partir de un cultivo monospórico, se incubaron durante 13 días, el crecimiento micelial fue registrado y medido en milímetros (mm), a. AS. temperatura promedio de 25,0 ±1,0°C.. Se determinó el porcentaje de crecimiento micelial respecto al testigo. CI. EN. CI. absoluto sin tratamiento, utilizando la relación 36:. Dónde:. 𝐷𝑀𝐶𝑇. PC = 𝐷𝑀𝐶𝐴 x 100. DE. PC = Porcentaje de crecimiento DMCT= Diámetro de la colonia creciendo con tratamiento.. TE. CA. DMCA = Diámetro de la colonia creciendo sin tratamiento.. realizaron 2 repeticiones y cada uno de los tratamientos y control por triplicado.. BI. BL. IO. Para garantizar la confiabilidad y reproducibilidad de los resultados se. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Diagrama de flujo de la extracción del aceite esencial de albahaca por el método de arrastre de vapor de agua. IC. AS. Materia Prima Ocimum basilicum. AS. PLANTA ENTERA. BI O. LO. G. SELECCIÓN. EN. CI. EXTRACCIÓN. DECANTACIÓN Y SECADO (Hidrolato-Aceite esencial + agua). ENVASADO Y ALMACENAMIENTO (AE-Aceite Esencia crudo). BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. CONDENSACIÓN. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.5. Diseño experimental.. Bioensayos. Por un estímulo creciente en un intervalo de tiempo. Cada placa contuvo diferentes concentraciones del aceite esencial de O. basilicum. AS. “albahaca” en relación al medio de cultivo, en relación V/V, tal como se expresa en la Tabla. IC. 2.. G. Tabla 2. Diseño de investigación, respecto a los tratamientos del aceite esencial de O.. LO. basilicum “albahaca” expresados en concentración V/V (µL/mL) y el probable. BI O. crecimiento micelial de Fusarium sp.. Testigo / Tratamiento. Concentración (µL/mL). Crecimiento micelial ( % ). [1]. Testigo. 0. 100 %. [2]. Tratamiento (T1). 0,5. A%. [3]. Tratamiento (T2). [4]. Tratamiento (T3). [5]. CI. AS. Nº. B%. 5,0. C%. Tratamiento (T4). 10,0. D%. [6]. Tratamiento (T5). 20,0. E%. [7]. Tratamiento (T6). 50,0. F%. CA. DE. CI. EN. 2,0. IO. TE. Donde: T=100 ≥ A ≥ B ≥ C ≥ D ≥ E ≥F. BL. 2.6. Análisis Estadístico Se realizó un análisis estadístico simple. Se aplicó un análisis de varianza (ANAVA) para. BI. determinar si existen o no diferencias significativas entre las concentraciones aplicadas en esta investigación, utilizando el programa estadístico Statgraphics Centurion versión de prueba 15.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III. RESULTADOS En la Figura 1, se observa que en la concentración de 0.5 µL/mL el crecimiento de Fusarium sp. es del 85.73% respecto al control (0,0 µL/mL) y luego a partir de la concentración de 2,0. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. G. IC. AS. hasta la de 50,0 µL/mL ensayados dicho crecimiento es cero.. BI. Fig 2. Efecto de la concentración (µL/mL) del aceite esencial de Ocimum bacilicum L. sobre el crecimiento (%) de Fusarium sp. a los 13 días de incubación a temperatura ambiente (25±1°C).. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) EN. LO. CI. AS. BI O. Control (0,0 µL/mL). G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (2,0 µL/mL). (5,0 µL/mL). (20,0 µL/mL). (50,0 µL/mL). BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. (0,5 µL/mL). (10,0 µL/mL). Fig 3. Observación del crecimiento micelial de Fusarium sp en los diferentes tratamientos (concentraciones V/V - µL/mL) con el aceite esencial de Ocimum basilicum L. “albahaca” y en el control (sin aceite esencial) a los 13 días de incubación.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La tabla 3 se muestra el ANOVA que descompone la varianza del crecimiento de Fusarium sp en dos componentes: uno componente entre-grupos y otro componente dentro-de-grupos. La razón-F, es igual a 41.9107 y el valor-P de la prueba-F es menor que 0.05, lo que demuestra que existe una diferencia estadísticamente significativa entre la media de crecimiento de Fusarium sp entre el control y el tratamiento con la concentración del aceite esencial de O.. IC. AS. basilicum “albahaca” de 0,5 µl/mL, con un nivel del 95.0% de confianza.. G. Tabla 3. ANOVA para determinar diferencias significativas entre el crecimiento de Fusarium. LO. sp en el control y el tratamiento con aceite esencial de O. basilicum “albahaca” de. BI O. 0,5 µl/mL, con un nivel del 95.0% de confianza a los 13 días de evaluación.. Suma de Cuadrados. Gl. Cuadrado Medio. Razón-F. Valor-P. Entre grupos. 1.17397. 1. 1.17397. 41.91. 0.0230. Intra grupos. 0.0560225. 2. 0.0280113. CI. 1.22999. 3. CI. EN. Total. AS. Fuente. La tabla 4 muestra la Prueba de Múltiples Rangos de Tukey la cual indica que existe una. DE. diferencia estadísticamente significativa entre la media de crecimiento de Fusarium sp entre el control y el tratamiento con la concentración del aceite esencial de O. basilicum “albahaca”. CA. de 0,5 µl/mL.. Tabla 4. Pruebas de Múltiple Rangos (Tukey HSD) para Crecimiento de Fusarium sp en el. TE. control y el tratamiento con aceite esencial de O. basilicum “albahaca” de 0,5. BI. BL. IO. µl/mL.. Grupo. Casos. Media. Grupos Homogéneos. 0.5 uL/mL. 2. 6.5000. X. Control. 2. 7.5835. X. Contraste. Sig.. Diferencia. +/- Límites. 0.5 ul/mL – Control. *. -1.0835. 0.720116. * indica una diferencia significativa. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La figura 4 muestra el efecto de la concentración (V/V - µL/mL) del aceite esencial de Ocimum basilicum L. ensayados en diferentes tratamientos e incluido el control (sin aceite esencial), sobre el crecimiento micelial (cm) de Fusarium sp. y la tasa de crecimiento (cm.día-1) desde el día 4 al 13 de incubación a temperatura ambiente (25±1°C), donde se observa un crecimiento. AS. micelial máximo de 75,83 y de 65,00 mm para el control y concentración de 0,5 µL/mL. (tratamiento 1) respectivamente; las concentraciones siguientes ensayadas no presentaron. TE. CA. DE. CI. EN. CI. Crecimiento (cm). AS. BI O. LO. G. para el control, tratamiento 1 y los tratamientos 2-6 respectivamente. IC. crecimiento (0,00mm). Las tasas de crecimiento corresponde al 0,628; 0,611 y 0,00 cm.día-1. sobre el crecimiento micelial (cm) de Fusarium sp. y la tasa de crecimiento (cm.día-1), desde el día 4 hasta el 13 de incubación a 25±1°C.. BI. BL. IO. Fig 4. Efecto del aceite esencial de Ocimum basilicum L. en los diferentes tratamientos. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV. DISCUSIÓN La extracción del aceite esencial de Ocimum basilicum “albahaca” en la presente investigación fue muy baja, ya que se utilizó 20 kg y se obtuvo un volumen de 6 mL lo que significa una. AS. recuperación de aceites esenciales aproximadamente del 0.03% obtenido por destilación por. arrastre de vapor. Es importante indicar, que si bien es cierto no fue el objetivo del trabajo. IC. evaluar el rendimiento de extracción del aceite esencial de albahaca, sin embargo, se puede. G. indicar que, en el presente estudio, éste fue de aproximadamente 0,03%, por debajo de los. LO. obtenidos de plantas en otros suelos, cuyo rendimiento oscila entre 0,04 y 0,7% 37, 38.. BI O. Por otro lado, en la presente investigación, no se investigó la composición del aceite esencial de albahaca en un cultivo de esta zona (Pedregal-Simbal-Trujillo), sin embargo, con los resultados revisados en las referencias bibliográficas con respecto a la identidad y cantidad de. AS. algunos de los componentes del aceite esencial en la especie vegetal en estudio, se observa. CI. diferencia entre ellas, que se debe principalmente a factores genéticos y ambientales, estatus. EN. nutricional de las plantas.. En las Figuras 2 y 3, se observa que, el mayor crecimiento de Fusarium sp. fue, por su puesto,. CI. en el control, donde no contiene el aceite esencial de albahaca, solo contenía la solución de tween 80 al 0,1%, utilizada para preparar las concentraciones de dicho aceite esencial,. DE. mostrando un crecimiento máximo 75.83mm, el que equivale al 100% de crecimiento micelial radial. En relación a las diferentes concentraciones del aceite esencial de O. basilicum. CA. “albahaca” utilizado para evaluar su efecto sobre el crecimiento de Fusarium sp, se muestra que a la concentración de 0,5 µL.mL-1 (500ppm) el crecimiento del fitopatógeno en estudio. TE. fue de 65.00mm, que corresponde al 85.73% respecto al control y en los tratamientos con concentraciones de 2,0; 5,0; 10,0; 20,0 y 50,0 µL.mL-1 respectivamente no se observó. BL. IO. crecimiento alguno.. El resultado encontrado en el presente trabajo de investigación, es mucho mejor que los. BI. reportados por otros autores, donde muestran valores del aceite esencial de hojas de O. basilicum, con actividad inhibitoria contra el crecimiento micelial de C. gloeosporioides fue la concentración de 10 uL/mL (10,000ppm) la que presentó el mayor porcentaje de índice antifúngico, con una inhibición de 100%. 38. ; Por otro lado, se ha encontrado que el aceite. esencial de orégano silvestre en el medio nutritivo generó una respuesta negativa en el crecimiento micelial del fitopatógeno, F. oxysporum, a partir de la concentración de. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100µL.mL-1, sin embargo las concentraciones de 300 y 400 µL.mL-1 de aceite esencial mostraron un claro efecto fungistático 39. También, el presente resultado obtenido a la concentración de 2,0 µL.L-1 de inhibición completa (100%) del crecimiento de Fusarium sp es semejante a los reportados en la. AS. evaluación de la actividad fungicida del aceite esencial extraído de cáscara de naranja sobre. F. oxysporum y Absidia sp que está alrededor de 1,0 µL.L-1, por lo que sería importante evaluar. IC. el efecto de las concentraciones entre 0,5 y 2,0 µL.L-1, a fin de optimizar la concentración más. G. adecuada como fungicida; y es mejor respecto al reportado del aceite esencial de eucalipto, ya. LO. que éste inhibió completamente el crecimiento de F. oxysporum a la concentración de 3000. BI O. ppm (3,0 µL.L-1) 40.. Teniendo en cuenta la gran cantidad de componentes presentes en el aceite esencial de albahaca, es probable que su actividad antifúngica no tenga un mecanismo específico 41. Por. AS. ello, el efecto inhibidor de este aceite esencial generalmente es atribuido al componente o mezcla de componentes que lo conforman 42. Además, estos componentes presentan carácter. EN. CI. lipofílico e hidrofóbico que son importantes debido a la polaridad que estos poseen.. Otros estudios realizados también confirman que los componentes encontrados en el aceite. CI. esencial albahaca pertenecen a los monoterpenos y estos pueden afectar a otros sitios y los mecanismos probables de actividad antifúngica tenemos a la inhibición de la formación de la. DE. pared celular fúngica, el cuál al inhibirse la síntesis de los β-glucanos, se interrumpirá la integridad de la pared celular. Otro mecanismo es la interrupción de la membrana celular que,. CA. al inhibirse la biosíntesis del ergosterol, la integridad de la membrana celular se interrumpirá. TE. y esta se volverá permeable 43.. También está la disfunción de las mitocondrias fúngicas que al inhibirse el transporte de. IO. electrones mitocondriales se reducirá el potencial de la membrana mitocondrial, lo cual lleva. BL. a una reducción en la producción de ATP y posteriormente a la muerte celular 44. Otro posible mecanismo esta la inhibición de la división celular que puede ocurrir a través de la inhibición. BI. de la polimerización de los microtúbulos, y por consecuencia, inhibe la formación del huso mitótico. Finalmente, tenemos a la inhibición de la síntesis de ARN /ADN o síntesis de proteínas que, al ingresar los componentes a la célula, a través de un transporte activo en ATPasas e interfiere con el ARN, esto puede provocar una síntesis defectuosa en el ARN e inhibir la transcripción del ADN.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Estudios realizados en la composición química y la actividad antifúngica del aceite esencial de O. basilicum L. obtuvieron una completa inhibición en el crecimiento de A. flavus en la concentración de 1000 ppm, mientras que en la producción de la Aflotoxina B1 de A. flavus, la inhibición se dio en las concentraciones de 500,750 y 1000 ppm 45.. AS. También se encontró que en estudios con en el aceite de albahaca reportaron que este actúa como un agente fungistático contra F. verticillioides en la concentración de 2000 ppm, y como (31). . Otros estudios encontraron que el. IC. agente fungicida en una concentración de 3000 ppm. G. aceite esencial de albahaca afectaba significativamente el crecimiento de F. verticillioides. LO. después de 7 días de incubación en concentraciones inferiores a 2.7 µL/mL 46.. BI O. Finalmente, se puede observar en la figura 4 que el aceite esencial de O. basilicum “albahaca” presentó una total inhibición del crecimiento micelial a la concentración de 2,0; 5,0; 10,0; 20,0 y 50,0 µL/mL, siendo sus tasas de crecimiento de 0,000 cm.día-1, comparada con el control. AS. (sin aceite esencial) y la concentración aceite esencial de albahaca de 0,5 µL/mL de 0,628 y 0,611cm.día-1, respectivamente. La tasa de crecimiento para este aceite esencial frente a. CI. Fusarium sp disminuyó de 0,017 cm.día-1 al incrementar la concentración de 0,0 a 0,5 µL/mL.. EN. y luego al incrementar la concentración a 2,0 µL/mL disminuyó 0,628 cm.día -1, es decir el crecimiento fue de 0,0 cm.día-1. Lo mismo se observó al seguir incrementado la concentración. CI. del aceite esencial de albahaca hata los 50,0 µL/mL. Es importante valorar la tasa de crecimiento micelial para poder comparar el efecto inhibitorio entre las concentraciones a. BI. BL. IO. TE. CA. DE. estudiar.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V. CONSLUSIONES. El aceite esencial de Ocimum basilicum L. “albahaca” afecta completamente el crecimiento. IC. AS. micelial de Fusarium sp desde la concentración de 2 µL/mL hasta los 50.0 µL/mL.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. permite un crecimiento micelial del 85,7% respecto al control.. G. La concentración del aceite esencial de Ocimum basilicum L. “albahaca” de 0.5 µL/mL. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.. Domingo D, López-Brea M. Plantas con acción antimicrobiana. Rev. Esp. Quimioterapia. 2003; 16: 385-393.. Abad M, Ansuategui M, Bermejo P. Active antifungal substances from natural sources.. AS. 2.. Guerra L. Evaluación de la actividad antimicrobiana y antioxidante de aceites esenciales. G. 3.. IC. ARKIVOC; 2007. 7: 116-145.. LO. de plantas usadas en medicina tradicional. Tesis de Maestría. México: Universidad. 4.. BI O. Autónoma de Nuevo León. 2011. 118 p.. Ruiz J, Roque M. Actividad antimicrobiana de cuatro plantas de nororiente peruano.. Lizcano A, Vergara J. Evaluación de la actividad antimicrobiana de los extractos. CI. 5.. AS. Ciencia e Investigación. 2009. 12: 41-47.. etanólicos y aceites esenciales de las especies vegetales Valeriana pilosa, Hesperomeles. EN. ferruginea, Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata frente a microorganismos patógenos. Tesis de Grado. Bogotá, Colombia: Pontificia Universidad Javeriana. 2009.. Rodríguez D, Kozusny-Andreani D. Utilização de extratos de plantas medicinais e óleo. DE. 6.. CI. 131 p.. de Eucaliptus no controle in vitro de Microsporum canis. Rev Cub Plantas Med. 2010.. Contreras-Valenzuela A., Gómez-Vargas C. de J. Evaluación de tres variedades de. TE. 7.. CA. 15: 119-125.. albahaca y dos dosis de fertilización en producción hidropónica y en suelo. Zamorano,. BL. IO. Honduras. 2008. Pp. 26.. 8.. López-Díaz, E. Albahaca (Ocimum basilicum). 2009. Disponible en: http://www.. BI. visionchamanica.com/Plantas/Albahaca.htm. 9.. Elicriso, Lenguaje de las flores y de las plantas. Albahaca. 2010. Disponible en: http://www.elicriso.it/es/plantas_aromaticas/albahaca/. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10. López-Belchí, M. D. Toxicidad volátil de monoterpenoides y mecanismos bioquímicos en insectos plaga del arroz almacenado. Tesis Doctoral. Universidad de Murcia, España. 2008. Pp. 246.. 11. Sam O, De la Luz M, Barroso L. Caracterización anatómica de las hojas de la albahaca. AS. blanca Ocimum basilicum L. Cultivos Tropicales. 2002; 23(2): 39-42.. IC. 12. Deroide, P. Los elixires florales europeos. Guía Práctica. Capítulo 6. Ediciones Obelisco.. LO. G. 2006.. 13. Garcia A, Vizoso A, Ramos A, Piloto J. Estudio toxicogenético de un extracto fluido de. BI O. Ocimum basilicum L. (albahaca blanca). Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Departamento de Investigaciones Microbiologicas. Revista Cubana de. AS. Planta Medicinal 2000; 5(3):78-83.. 14. Hernandez G. Composición y actividad antibacteriana del aceite esencial de Lippia. EN. CI. graveolens H. B. K. [Tesis de Maestría]. México: UAAAN-UL. 2007.. 15. Esoteric Oils. The world of fine and pure essential oils. 2018. Disponible en:. CI. http://www.essentialoils.co.za/essential-oils/basil.htm.. DE. 16. Zhang J.W., Li S.K., Wu W.J.. The main chemical composition and in vitro antifungal activity of the essential oils of Ocimum basilicum Linn. var. pilosum (Willd.) Benth.. CA. Molecules. 2009. 14:273-8.. TE. 17. Garcia, R. Especies y subspecies de Erwinia en actividad biocontroladora de hongos de suelo sobre microorganismos fitopatógenos. Tesis para optar al grado de Biólogo.. BL. IO. Universidad del Azuay, Cuenca, Ecuador. 2000.. 18. Kalemba D., Kunicka A. Antibacterial and antifungical properties of essential oils.. BI. Current Medicinal Chemistry. 2003. 10:813-829.. 19. FAO. Luchar contra la marchitez por Fusarium del banano. Hoja de información FCCEMPRES. 2016. 7.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 20. BANACOL. Guía de identificación y manejo integrado de plagas y enfermedades en piña. Disponible. en:. http://cep.unep.org/repcar/proyectos-demostrativos. /costa-rica. -. 1/publicaciones-banacol/guia%20identificacion5.pdf 21. Leslie, J.F. and Summerell, B.A. The Fusarium Laboratory Manual. Blackwell. AS. Publishing, Hoboken. 2006, 1-2. https://doi.org/10.1002/9780470278376. IC. 22. Udomsilp J, Piyo A, Khang-Khun P, Thobunluepop P. Antifungal properties of essential. G. oils from Thai medical plants against rice pathogenic fungi. As J Food Ag-Ind. 2009,. LO. Special Issue, 24-S30.. BI O. 23. Barrera LL, García LJ. Actividad antifúngica de aceites esenciales y sus compuestos sobre el crecimiento de Fusarium sp. aislado de papaya (Carica papaya). Revista. AS. Científica UDO Agrícola. 2008;8(1):33-41.. 24. Wogiatzi E, Gougoulias N, Papachatzis A, Vagelas I, Chouliaras N. Chemical. CI. composition and antimicrobial efects of Grek Origanum species esential oil. Biotechnol.. EN. & Biotechnol. 2009.. CI. 25. Ghasemi-Pirbalouti, A. Diversity in chemical composition and yield of essential oil from. DE. two Iranian landraces of sweet basil. Genetika. 2014. 46, (2): 419-426.. 26. Matasyoh L; Matasyoh J; Wachira F; Kinyua M; Thairu A; Mukiama T. Chemical. CA. composition and antimicrobial activity of the essential oil of Ocimum gratissimum L.. TE. growing in Eastern Kenya. African Journal of Biotechnology. 2007. 6, (6): 760-765.. 27. Chalchat, J.C.; Özcan, M.M. Comparative essential oil composition of flowers, leaves. IO. and stems of basil (Ocimum basilicum L.) used as herb. Food Chem. 2008, 110, 501–503.. BL. 28. Ismail M. Central Properties and Chemical Composition of Ocimum basilicum Essential. BI. Oil. Pharmaceutical Biology 2006, 44, (8): 619–626. 29. Sharapin N., Machado L., Pinzón R. Fundamentos de Tecnología de procesos fitoterapéuticos. Edit. CAB-CYTED. Bogotá D.C. (Colombia). 2000.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 30. Castaño-Zapata J. 1998. Prácticas de laboratorio de fitopatología. Práctica (20). Segunda edición. Universidad de Caldas. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Departamento de Fitotecnia. Escuela Agrícola Panamericana. Departamento de Protección Vegetal. p 103.. 31. Booth C. 1977. Fusarium laboratory guide to the identifi cation of the major species. CMI,. AS. Commonwealth Agricultural Bureaux, England. p. 58.. IC. 32. Barnett H.L., Hunter B.B. 1998. Illustrated genera of imperfect fungi. Fourth Edition.. LO. G. Minnesota, USA: Burgess Publishing Company. p. 218.. 33. Castaño-Zapata J., Salazar H. 1998. Illustrated guide for identification of plant pathogens.. BI O. Universidad de Caldas. Manizales, Colombia. p. 108.. 34. Leslie J.F., Summerell B.A. The Fusarium laboratory manual. Lackwell Publishing,. AS. Ames, IA, U.S.A. 2006. p. 387.. CI. 35. Riveros F., Sotomayor R., Rivera V., Secor, G., Espinoza, B. Resistencia de Phytopthora. EN. infestans (Montagne) de Bary a Metalaxyl en cultivo de papas en el monte de Chile.. CI. Agricultura técnica Chile. 2003. 63 (2), 117 – 124p.. 36. Sajjadi S. Analysis of the essential oilsof two cultivated basil (Ocimum basilicum L.) from. DE. Iran. DARU Journal of Pharmaceutical Sciences. 2006. 14, (3): 128-130.. CA. 37. Pérez A., Vitola D., Chamorro L. Actividad del aceite esencial de albahaca (Ocimum basilicum) contra Colletotrichum gloeosporioides de ñame (Dioscorea alata) Rev.. TE. U.D.CA Act. & Div. Cient. 2018. 21(1): 99-108.. IO. 38. Fonnegra R. Plantas medicinales aprobadas en Colombia. 2. ed. Medellín: Editorial. BL. Universidad de Antioquia. (Colombia). 2007. 368pp.. BI. 39. Ruano E., Vallejo A. Formulación de un biofungicida a partir de una emulsión con aceite esencial de oregano silvestre (Lippia origanoides h.b.k) frente al fitopatógeno Fusarium. oxysporum f. sp. pisi causante de marchitez vascular de arveja (Pisum sativum L.). Trabajo de grado presentado como requisito para obtener el título de Ingeniero Agroindustrial. UNIVERSIDAD DE NARIÑO. 2014.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 40. Alzate N., A.; I López V., K.; I Marín H., A.I y Murillo A., W.I… Evaluación preliminar de la actividad fungicida de los aceites esenciales de eucalipto (Eucalyptus tereticornis, Myrtaceae) y cáscara de naranja (Citrus sinensis, Rutaceae) sobre algunos hongos fi lamentosos. Revista Tumbaga 2009 | 4 | 59-71. AS. 41. Burt S. Essential oils: their antibacterial properties and potential applications in foods—. IC. a review. Int. J. Food Microbiol. 2004; 94: 223-253.. G. 42. Goodman, Gilman. Las Bases Farmacológicas de la Terapéutica. 6ª ed. México:. LO. Interamericana. 1985.. Mitochondrial. Respiratory. Chain. of. BI O. 43. Kim JH, Haff RP, Faria NCG, Martins MdeL, Chan KL, et al. Targeting the Cryptococcus. through. Antifungal. Chemosensitization: A Model for Control of Non-Fermentative Pathogens. Molecules. AS. 2013;18: 8873-8894.. CI. 44. Freisesleben SH, Jager AK. Correlation between plant secondary metabolites and their. EN. antifungal mechanism - a review. Med. Arom. Plants 2014; 3: 1–6.. CI. 45. Deabes MM, Abou El-Soud NH, Abou El-Kassem L. In Vitro Inhibition of Growth and Aflatoxin B1 Production of Aspergillus Flavus Strain (ATCC 16872) by Various. DE. Medicinal Plant Essential Oils. Maced J Med Sci. 2011; 4(4):345–350.. CA. 46. Fandohan P, Gbenou JD, Gnonlonfin B, Hell K, Marasas WFO, Wingfield M J. Effect of essential oils on the growth of Fusarium verticillioides and fumonisin contamination in. BI. BL. IO. TE. corn. J Agr Food Chem. 2004; 52:6824–6829. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) BI O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. ANEXOS. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fuente: propia del autor. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. G. IC. AS. Anexo 1. Cultivos agrícolas de las plantas de O. basilicum L. “albahaca” en Pedregal, Distrito de Simbal, Provincia de Trujillo.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. G. IC. AS. Anexo 2. Codificación de la especie vegetal Ocimum basilicum L. en el Herbarium Truxillense (HUT) N°: 59594. BI. Fuente: En colaboración de la Br. Elizabeth Celia Arteaga Quijada, tesista de Microbiología y Parasitología.. Se adjunta declaración Jurada de la Br. Elizabeth Celia Arteaga Quijada.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN. CI. AS. BI O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Anexo 3. Ensamblaje del equipo de acero inxidable de extración del aceites esenciales de O. basilicum L., Método de destilación por arrastre con vapor de agua. Laboratorio de farmacoténia – facultad de Farmacia y Bioquímica - UNT. Cámara de carga del material vegetal. EN. Equipo de extracción de AE por arrastre de vapor de agua. CI. Condensador, receptor del hidrolato (agua+aceite esencial). CI. AS. BI O. LO. G. IC. Cierre hermético del equipo de extracción de aceites esenciales por arrastre de vapor de agua. CA. DE. Cámara de carga del material vegetal y extracción de aceites esenciales.. Cámara generadora de vapores de agua.. BI. BL. IO. TE. Cable de conexión eléctrica. Fuente: propia del autor. Aceite esencial crudo de albahaca. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 4. Mediciones del crecimiento de Fusarium sp en el control, sin aceite esencial de albahaca (0 uL/mL), expresado en cm, desde el día 4 hasta el día 13. 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1.9 2.5 3.0 3.5 3.8 4.6 5.2 6.1 6.8 7.7 1.9 2.5 3.1 3.6 4.0 4.5 5.3 6.1 6.7 7.6 1.9 2.5 3.0 3.4 3.7 4.6 5.3 6.3 7.0 7.9 1.9 2.5 3.1 3.6 3.8 4.6 5.3 6.1 6.8 7.5 1.8 2.4 3.1 3.8 4.4 5.5 5.6 6.4 7.3 7.8 1.8 2.4 3 3.8 4.4 5.4 5.7 6.3 7.3 7.8 1.8 2.3 3.1 3.6 4.5 5.4 5.7 6.4 7.3 7.9 1.8 2.3 3.1 3.7 4.4 5.4 5.6 6.3 7.2 7.8 1.9 2.5 3.2 3.7 4.5 5.0 5.5 6.2 6.8 7.5 1.9 2.5 3.2 3.8 4.4 5.0 5.5 6.3 6.9 7.5 1.9 2.5 3.2 3.8 4.4 5.0 5.5 6.2 6.9 7.6 1.9 2.6 3.2 3.9 4.4 5.0 5.5 6.3 6.9 4.4 1.867 2.458 3.108 3.683 4.225 5.000 5.475 6.250 6.992 7.417. AS. DIAS. G. IC. Control 01. BI O. LO. Control 02. CI. AS. Control 03. 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 2.0 2.6 3.2 3.8 4.3 4.9 5.5 6.3 7.1 7.9 2.0 2.7 3.2 3.8 4.2 4.9 5.5 6.3 7.2 7.9 2.0 2.6 3.1 3.7 4.1 4.8 5.4 6.2 7.2 7.8 2.0 2.7 3.2 3.8 4.3 4.9 5.5 6.3 7.1 7.8 2.0 2.7 3.3 3.8 4.5 5.1 5.6 6.4 7.2 7.8 2.0 2.7 3.4 4.0 4.5 5.2 5.6 6.3 7.3 7.8 2.0 2.7 3.2 3.8 4.4 5.2 5.6 6.3 7.1 7.7 2.0 2.7 3.2 3.9 4.5 5.2 5.7 6.4 7.1 7.9 2.0 2.6 3.2 3.8 4.5 5.0 5.5 6.2 6.8 7.6 2.0 2.6 3.3 3.9 4.5 5.0 5.6 6.3 6.9 7.6 2.0 2.6 3.3 3.9 4.5 5.1 5.6 6.3 6.9 7.7 2.0 2.7 3.2 3.8 4.4 5.0 5.5 6.2 6.9 7.5 2.000 2.658 3.233 3.833 4.392 5.025 5.550 6.292 7.067 7.750. EN. DIAS. DE. CI. control 01. BL. IO. TE. control 03. CA. control 02. BI. X= 7.583 100.000 Fuente: el propio autor. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..