Producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp usando como hospederos Spodoptera frugiperda J E Smith y Galleria mellonella Linnaeus

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(1)PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA PROFESIONAL DE AGRONOMÍA. AG. RO. “Producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. usando como hospederos Spodoptera frugiperda J.E. Smith y Galleria mellonella Linnaeus”. DE. TESIS. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE. TE. CA. INGENIERO AGRÓNOMO. AUTOR. : Solano Plasencia, Sandra Giuliana. BI. BL. IO. ASESOR : MSc. Cedano Saavedra, Carolina Esther. TRUJILLO – PERÚ 2019. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. DEDICATORIA En memoria a mi Papá Nelson por todos los consejos y por todas esas palabras que quedaron guardadas en lo más profundo de mi corazón, sé que ahora estas feliz al ver que logre lo que tanto anhelabas. Para ti,. AS. hasta el cielo.. A la mejor Madre, Rosita por tus mejores consejos, por hacer siempre. PE CU AR I. lo imposible para sacarme adelante, por tu preocupación en mi formación profesional, por todos tus valores puestos en mí para. hacerme una buena persona, por todo tu amor; y porque te mereces mucho más, hoy tu mayor deseo se hace realidad. Gracias infinitas mami.. A William, por la vida, por tu apoyo, por los momentos que me. RO. regalaste y por los consejos que guardo.. A mi Adrianito; eres la razón más importante para superar los. AG. obstáculos, porque la vida está llena de retos que debemos asumir con la mejor voluntad y demostrar que somos capaces de alcanzar el éxito en cada etapa de nuestra vida; hoy es el inicio de lo lejos que llegaremos y de los logros que aún nos faltan disfrutar; siempre juntos. DE. mi amor.. palabras de aliento y por estar siempre juntas.. TE. CA. A Consuelo y Angie, por el cariño, por el apoyo de cada día, por las. A Esmilton, Elmor, Nelson y a toda mi familia; por sus consejos,. IO. siempre estuvieron junto a mí, apoyándome en cada momento de mi. BI. BL. vida.. A Juanjo, por llegar a mi vida en el momento perfecto para enseñarme el mejor significado del amor, ser fuerte y a no decaer nunca, por tu apoyo incondicional, y porque siempre tus mejores deseos son para mí.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(3) BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. AGRADECIMIENTO. AS. A Dios todo poderoso por bendecirme con la vida, la salud, por no. soltarme nunca de sus manos, guiándome y protegiéndome en cada. PE CU AR I. momento de mi vida.. De manera muy especial, con respeto, admiración y con mucho cariño a mi asesora de tesis MSc. Carolina Cedano Saavedra, por su apoyo incondicional, por sus conocimientos brindados, por la paciencia, por sus. RO. consejos y por sus buenos deseos para alcanzar el éxito profesional. Dios. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. la cuide y guarde siempre.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. ÍNDICE GENERAL CAPÍTULO I: INTRODUCCIÓN. 1. CAPÍTULO II: MATERIALES Y MÉTODOS. 7 7. 2.2 Materiales. 8. AS. 2.1 Ubicación. 2.2.2 Herramientas y equipos 2.3 Metodología. 8. 9 9. 2.3.2 Selección y pesado de larvas. 10. 2.3.3 Infestación con nematodos entomopatógenos. 10. 2.3.4 Obtención de nematodos entomopatógenos. 11. RO. 2.3.1 Crianza de G. mellonella y S. frugiperda. 2.3.5 Recolección de juveniles infectivos. AG. 2.4 Parámetros evaluados. 12. 2.4.2 Relación peso y producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis por hospedero. 12. 2.4.3 Relación tamaño y producción de juveniles infectivos por hospedero. 18. CA. DE. 12. TE IO BL. 11. 2.4.1 Nivel de producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis obtenidos por hospedero. CAPÍTULO III: RESULTADOS Y DISCUSIÓN. BI. 8. PE CU AR I. 2.2.1 Material biológico. 14. 3.1 Nivel de producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis obtenidos por hospedero. 14. 3.2 Relación peso y producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis por hospedero. 16. 3.3 Relación tamaño y producción de juveniles infectivos por hospedero. 18. CAPÍTULO IV: CONCLUSIONES. 22. CAPÍTULO V: RECOMENDACIONES. 23. CAPÍTULO VI: REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 24. CAPÍTULO VII: ANEXOS. 28 v. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. LISTA DE FIGURAS. 7. FIGURA 2: Datos promedio de la temperatura registrada en la ciudad de Trujillo en el mes de febrero. 8. PE CU AR I. AS. FIGURA 1: Datos promedio de la temperatura registrada en la ciudad de Trujillo en el mes de enero. FIGURA 3: Número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva de G. mellonella.. 14. 15. FIGURA 5: Peso de las larvas de G. mellonella y número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva. 16. RO. FIGURA 4: Número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva de S. frugiperda. AG. FIGURA 6: Peso de las larvas de S. frugiperda y número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva. 17 18. FIGURA 8: Relación de tamaño de larva de S. frugiperda y número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos. 19. FIGURA 9: Infestación de larvas de G. Mellonella con nematodos entomopatógenos. 28. FIGURA 10: Larvas de G. Mellonella infestadas. 28. TE. CA. DE. FIGURA 7: Relación de tamaño de larva de G. mellonella y número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos. 29. FIGURA12: Nemátodos entomopatógenos saliendo de la larva de G. mellonella. 29. FIGURA 13: Nemátodos entomopatógenos vistos al estereoscopio. 30. FIGURA 14: Larvas muertas de G. Mellonella. 30. BI. BL. IO. FIGURA 11: Pesado de larvas de G. Mellonella. FIGURA 15: Infestación de larvas de S. frugiperda. 31. FIGURA 16: Larvas infestadas de S. frugiperda. 31. FIGURA 17: Larvas de S. frugiperda colocada en cámara White modificada. 32. FIGURA 18: Nemátodos entomopatógenos en larva de S. frugiperda. 32 vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. 33. FIGURA 20: Larvas de S. frugiperda. 33. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. PE CU AR I. AS. FIGURA 19: Nemátodos entomopatógenos saliendo de la larva de S. frugiperda. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. LISTA DE TABLAS. 20. TABLA 2: Prueba de comparación U de Mann Whitney del peso, tamaño y población de juveniles infectivos. 21. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. PE CU AR I. AS. TABLA 1: Prueba de Normalidad de Shapiro Wilk del peso, tamaño y población de juveniles infectivos. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. AS. PRESENTACIÓN. PE CU AR I. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. En cumplimiento a las disposiciones vigentes en el Reglamento de Tesis Universitaria de la Escuela Profesional de Agronomía, someto a su elevado criterio para su evaluación la tesis titulada “Producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. usando como hospederos Spodoptera frugiperda J. E. Smith y. RO. Galleria mellonella Linnaeus” con el propósito de obtener el título profesional de. Solano Plasencia, Sandra Giuliana. BI. BL. IO. TE. CA. Trujillo, enero de 2019. DE. AG. Ingeniero Agrónomo.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. RESUMEN. AS. “Producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. usando como hospederos Spodoptera frugiperda J. E. Smith y Galleria mellonella Linnaeus”. E-mail: sankyupc_1806@hotmail.com. Asesor: MSc. Cedano Saavedra Carolina. E-mail: carolina_cedano@hotmail.com. PE CU AR I. Autor: Solano Plasencia Sandra Giuliana. El presente trabajo de investigación titulado “Producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. usando como hospederos Spodoptera frugiperda y Galleria mellonella” tuvo como objetivo determinar el nivel de producción de juveniles. RO. infectivos de Heterorhabditis spp.. AG. Se realizó la crianza de Spodoptera frugiperda y Galleria mellonella para obtener larvas del ultimo estadio, las cuales se infectó con juveniles de Heterorhabditis spp.. DE. obteniendo nematodos entomopatógenos que fueron recolectados y contabilizados. Se determinó que las larvas de G.mellonella producen un promedio de 326 280 juveniles infectivos.. CA. infectivos caso contrario a S. frugiperda que produce solamente 225 776 juveniles. TE. El mayor porcentaje de infección de larvas se obtuvo en Galleria mellonella siendo este 98%, mientras que en Spodoptera frugiperda solamente se infectó el 78 % de las larvas. BI. BL. IO. evaluadas.. Palabras clave: Nematodos entomopatógenos, Heterorhabditis spp. juveniles, estadio, hospederos.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. ABSTRACT. PE CU AR I. AS. "Production of infective youth of Heterorhabditis spp. using as hospederos Spodoptera frugiperda J. E. Smith and Galleria mellonella Linnaeus". Author: Solano Plasencia Sandra Giuliana. E-mail: sankyupc_1806@hotmail.com. Advisor: MSc. Cedano Saavedra Carolina. E-mail: carolina_cedano@hotmail.com. RO. The present research work entitled "Level of production of infective juveniles of Heterorhabditis spp. using Spodoptera frugiperda and Galleria mellonella as hosts. AG. "aimed to determine the level of production of infective juveniles of Heterorhabditis spp.. DE. The breeding of Spodoptera frugiperda and Galleria mellonella was carried out to obtain larvae of the last stage, which were infected with juveniles of Heterorhabditis. CA. spp. obtaining entomopathogenic nematodes that were collected and accounted for. It was determined that G. mellonella larvae produce an average of 326 280 infective. TE. juveniles, contrary to S. frugiperda, which produces only 225 776 infective juveniles.. IO. The highest percentage of larval infection was obtained in Galleria mellonella being. BI. BL. 98%, while in Spodoptera frugiperda only 78% of the evaluated larvae were infected.. Key words: Entomopathogenic nematodes, Heterorhabditis spp. youth, stadium, hosts.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. CAPÍTULO I. AS. INTRODUCCIÓN. PE CU AR I. La agricultura ha acompañado la historia del hombre desde tiempos muy remotos, tanto como elemento básico de los procesos de socialización y formación de. asentamientos humanos, como para la producción de alimentos. Paralelamente al crecimiento poblacional, fueron incrementándose las necesidades alimentarias por lo cual los sistemas agrícolas se vieron obligados a transformarse para mejorar los rendimientos de su producción. El método de control de plagas comúnmente utilizado es el uso de insecticidas sintéticos, los cuales desequilibran el ecosistema, destruyen. RO. los organismos benéficos y permiten en algunos casos que la plaga desarrolle. AG. poblaciones resistentes a los insecticidas (Doucet y Nienstedt 1992, p. 230).. Al analizar esta gama de problemas derivados del uso inadecuado y desmedido de estas. DE. sustancias químicas, se hace necesario replantear la manera de manejar los sistemas agrícolas y buscar nuevas soluciones para el control de plagas, de manera que se. CA. restablezca el equilibrio de los ecosistemas, se cultive, coseche y consuma alimentos de alta calidad, es decir que no pongan en riesgo la salud humana y que puedan. TE. colocarse en mercados cada vez más exigentes y preocupados por su calidad de vida. IO. (Badii y Abreu, 2006, p. 20).. BL. El control biológico es una forma de manejar poblaciones de animales o plantas; consiste en el uso de uno o más organismos para reducir la densidad de una planta o. BI. animal que causa daño al hombre. Así, el control biológico puede definirse como el uso de organismos benéficos llamados enemigos naturales contra aquellos q causan daño. Un organismo indeseable puede eliminarse localmente o, lo que resulta mejor, su población puede reducirse a una escala que no cause daño económico. La ventaja. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. más sobresaliente del control biológico es que no contamina el ambiente y no destruye la vida silvestre (Sáenz y López 2011, p. 40).. AS. El agricultor para evitar pérdidas considerables, aplica agroquímicos en dosis elevadas,. desequilibrando la fauna y micro fauna nativa, agravando el problema (Sáenz y López. PE CU AR I. 2011, p. 42).. Los nematodos entomopatógenos constituyen una opción para el control de plagas, ya que tienen un amplio rango de hospederos, gran capacidad de búsqueda hacia el hospedero, alta virulencia y pueden ser producidos comercialmente (Doucet y. RO. Nienstedt 1992, p. 231).. En la actualidad las personas se encuentran expuestas con mayor frecuencia a los. AG. productos químicos a través de los alimentos y del ambiente, gran parte de ellos proviene de los plaguicidas. La preocupación por este hecho se debe a evidencias que. DE. relacionan el uso inadecuado de productos químicos para el control de plagas los que ocasionan la contaminación del agua, contaminación del suelo y problemas de salud. CA. (Badii y Abreu, 2006, p. 20).. Con el transcurrir de los años se vienen estudiando nuevas técnicas para el manejo de. TE. plagas; como el empleo de agentes de control biológico, los que demuestran su efectividad y proporcionan el menor uso de los plaguicidas. El empleo de. IO. biorreguladores en el manejo de plagas, teniendo en cuenta los contextos;. BL. sociocultural, económico y tecnológico de los sistemas agrarios constituye una alternativa viable, sostenible y posible para nuestro país. Los nematodos. BI. entomopatógenos son organismos utilizados en los programas de control biológico en diferentes partes del mundo debido a la combinación de atributos deseables, como su amplia gama de hospedantes, capacidad de provocar altos índices de mortalidad; son ambientalmente seguros, pueden producirse in vivo e in vitro y los estadios infectivos pueden ser formulados y almacenados.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. El uso de los nematodos entomopatógenos como alternativa de control de plagas disminuiría el uso de plaguicidas, generando reducción de la contaminación ambiental, minimizaría esfuerzos y costos de producción, permitiendo de esta manera obtener una. AS. mayor rentabilidad acompañada de productos más saludables sin que afecten la salud. PE CU AR I. de los consumidores (Madrigal, 2001, p 110).. Disponer de un hospedero que propicie la multiplicaciòn a escala de juveniles infectivos de nematodos entomopatògenos del genero Heterorhabditis permitira que estos agentes de biocontrol formen parte del manejo sostenible de los cultivos.. En México, Salas (2001) reportaron la existencia de nematodos entomopatógenos. RO. (Steinernematidae y Heterorhabditidae) en agrosistemas del cañón de Juchipila en el estado de Zacatecas. 18 NEPs del género Steinernema y 12 del género Heterorhabditis,. AG. inspección que demuestra la gran distribución y diversidad existente. En el año 2002, Díaz reporta la presencia de un aislamiento del género Heterorhabditis asociado a. DE. larvas del género Phyllophaga en el estado de Jalisco (Sáenz y López, 2011, p. 28). Asimismo, Toledo (2005) evaluó la susceptibilidad de larvas de Anastrepha obliqua. CA. Macquart (Diptera: Tephritidae) a Heterorhabditis bacteriophora en condiciones de laboratorio, los resultados obtenidos permitieron determinar al tercer estadio inicial. TE. como más susceptible, pero la infección estuvo muy dependiente del nivel de humedad, a menor humedad menor mortalidad. Igualmente, evaluaron la. IO. patogenicidad de cuatro especies de Steinernema, tres introducidas y la especie S. mexicana y dos especies de Heterorhabditis una introducida y una nativa, sobre larvas. BL. de Anastrepha ludens. Las especies H. indica, S. mexicana y S. carpocapsae. BI. presentaron los porcentajes de mortalidad entre 75 y 52% (Sáenz y López, 2011, p. 30).. En Costa Rica, Powers (2009, p 30) realizaron un estudio para determinar la diversidad y estratificación vertical de los nematodos en bosques húmedos tropicales, dentro del cual aislaron seis especies de NEPs, identificada tres en el género Steinernema, S. puntauvense, S. feltiae y S. websteri y tres especies de Heterorhabditis, H. indica, H. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. bacteriophora y una especie sin describir Heterorhabditis sp. (Sáenz y López., 2011, p. 33).. AS. Por otro lado, Rodríguez (2009, p 20), también realizaron reconocimiento de NEPs en diferentes zonas y sistemas agrícolas de Costa Rica y evaluaron la patogenicidad de. PE CU AR I. seis aislamientos obtenidos sobre larvas de Phyllophaga elegans (L2 y L3), pero sólo. una causó el 60% de mortalidad sobre larvas L2 de P. elegans, aislamiento que fue identificado solamente a nivel de género, (Heterorhabdithis spp.) de los aislamientos restantes no se especifica a que género pertenecen (Sáenz y López, 2011, p. 34).. Carvajal (2009, p. 33), menciona que, en Honduras, trabajando a nivel de laboratorio,. RO. se obtuvo una baja mortalidad de picudos infectados por nematodos en cajas Petri pues, el mayor porcentaje de mortalidad fue de 35% con la dosis de 1000 juveniles/picudo.. AG. El autor menciona que los resultados difieren de los obtenidos por Sepúlveda-Cano (2008, p. 28) quienes reportan una mortalidad máxima de 58% en el tratamiento con. DE. 100 juveniles/picudo.. CA. En Cuba, estudios realizados por Pozo (2003, p. 24) en la Estación Experimental de la Universidad Central, en cultivos de Ipomoea batatas, Oriza sativa L., Musa sp. Y. TE. Sorghum bicolor (L.), encontraron solo dos muestras positivas en sorgo, perteneciente a género Heterorhabditis, los cuales fueron denominados como CIAP-DEY-6 y CIAP-. IO. DEY-7 (Sáenz et al.,2011, p. 40).. BL. En Colombia, Jiménez et al., (2003), probaron dos cepas de entomonenátodos. BI. (Heterorhabditis bacteriophora y Steinernema carpocapsae) en tres concentraciones (10, 100 y 1000 juveniles infectivos por insecto) y dos estados de desarrollo del insecto (larvas de último instar y adultos). Se encontró que los adultos de Metamasius hemipterus sericeus son susceptibles al ataque de ambas cepas de entomonenátodos mostrando porcentajes de mortalidad entre 26 y 94% con H. bacteriophora y entre 36 y 64% con S. carpocapsae, mientras que en larvas se encontraron mortalidades entre 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. 56.39 y 95.74% y entre 49.57 y 91.1% respectivamente. Se realizaron disecciones de insectos muertos obteniendo porcentajes de penetración en adultos entre 22.6 y 1.3% y 0.054 y 19.8%, mientras en larvas entre 6 y 64.23% y 58.63 y 60.36, para H.. AS. bacteriophora y S. carpocapsae respectivamente. Por último, se analizó el recobro de entomonenátodos a partir de insectos muertos siendo nulo para adultos, pero bacteriophora y S. carpocapsae, respectivamente.. PE CU AR I. mostrando en larvas recobros hasta de 235 990 y 165 300 JI por larva con H.. Por otra parte, con el fin de encontrar nuevos controladores de la broca en frutos caídos en el suelo, Quintero et al. (2007), evaluaron la mortalidad de estados y el desplazamiento hacia frutos infestados, de siete nuevos nematodos entomopatógenos. RO. nativos (seis del género Steinemema y uno del género Heterorhabditis), utilizando como testigo dos aislamientos seleccionados previamente de Cenicafé (S. colombiense. AG. sp. Nov-SNI0198 y H. bacteriophora Poinar-HNIOIOO). El experimento lo realizaron en laboratorio bajo diseño completamente aleatorio y en dos fases; en la primera se. DE. evaluó la mortalidad de huevos, larvas y adultos de la broca posterior a la aplicación de 10 juveniles infectivos por estado, y en la segunda se evaluó la capacidad de desplazamiento y mortalidad de brocas al interior de cerezas infestadas, de 1000. CA. juveniles del nematodo, a 5 cm de distancia. Ambas fases contaron con un control absoluto. Las variables de respuesta fueron porcentaje de huevos no eclosionados,. TE. mortalidad de larvas y adultos y mortalidad de brocas dentro del fruto. Los resultados mostraron que no hubo efecto de los nematodos sobre huevos de la broca. La mayor. IO. mortalidad de larvas se presentó con Steinemema sp. (95%), mostrando diferencias. BL. estadísticas con el control (Duncan a=0,05) y la mayor mortalidad de adultos se presentó con Heterorhabditis sp. (29.58%) con efecto significativo. El nematodo que. BI. menor desplazamiento y mortalidad causó dentro del fruto fue SNI0198 con 82,55%. Se concluye que los nematodos entomopatógenos evaluados pueden ser una alternativa para el control de broca al interior de frutos caídos en el suelo.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. Por otro lado, López y colaboradores (2007, p. 30), realizaron un reconocimiento en la región central Andina de Colombia, de las cuales el 92% correspondieron a Steinernema y sólo 7,2% a Heterorhabditis. La caracterización morfológica y. AS. molecular permitió establecer que de los cinco aislamientos de Steinernema spp., uno correspondía a la especie S. websteri y cuatro especies aún permanecen sin describir. PE CU AR I. (Sáenz y López, 2011, p. 41).. En Brasil, Dolinski (2008, p. 15) muestrearon el bosque lluvioso de Monte Negro Rondonia, recuperando 19 aislamientos, los cuales todos resultaron del género Heterorhabditis. Cuatro cepas fueron estudiadas morfológica y molecularmente, las cuales se identificaron como Heterorhabditis indica y Heterorhabditis baujardi. RO. (Sáenz y López, 2011, p. 42).. AG. En Ecuador, Hernández et al. (2008) realizaron un trabajo de prospección de NEPs en tres provincias productoras de papa y evaluaron la patogenicidad de los aislamientos, como una alternativa de control biológico de la plaga. De un total de 357 muestras de. DE. suelo se encontraron 28 aislamientos de NEPs de los cuales se evaluaron 11 aislamientos, cuatro aislamientos del género Heterorhabditis y siete del género. CA. Steinernema los cuales mostraron una mortalidad superior al 90% sobre larvas de. TE. quinto instar de Premnotrypes vorax.. Por ello la presente investigación fue determinar la producción de juveniles infectivos. IO. de Heterorhabditis spp. usando como hospedero Spodoptera frugiperda J. E. Smith y. BI. BL. Galleria mellonella Linnaeus.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. CAPÍTULO II. AS. MATERIAL Y MÉTODOS. PE CU AR I. 2.1 Ubicación y fecha de ejecución. El presente trabajo se ejecutó durante los meses de enero a marzo del 2018, se realizó en el Laboratorio de Sanidad Vegetal de la Escuela de Agronomía de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Nacional de Trujillo. Ubicada en el distrito de Trujillo, provincia de Trujillo, departamento La Libertad; 79º02’33,27’’ de longitud oeste.. AG. 2.2 Características del clima. RO. a una altitud de 21 m.s.n.m, entre las coordenadas de 8º06’57,50’’ latitud sur y. La temperatura registrada durante la realización de esta investigación se describe. DE. en las figuras 3 y 4.. Figura 1: Datos promedio de la temperatura registrada en la ciudad de. BI. BL. IO. TE. CA. Trujillo en el mes de enero.. Fuente: Servicio Nacional de Meteorología e Hidrología del Perú. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. Figura 2: Datos promedio de la temperatura registrada en la ciudad de. RO. PE CU AR I. AS. Trujillo en el mes de febrero.. DE. AG. Fuente: Servicio Nacional de Meteorología e Hidrología del Perú. CA. 2.3 Materiales. TE. 2.3.1 Material biológico. ✓ Larvas de Galleria mellonella.. IO. ✓ Larvas de Spodoptera frugiperda. BI. BL. ✓ Nematodos entomopatógenos cepa nativa genero Heterorhabditis spp.. 2.3.2 Herramientas y equipos ✓ Microscopio ✓ Estereoscopio ✓ Computadora 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. ✓ Calculadora ✓ Pipetas ✓ Probetas. AS. ✓ Propipeta ✓ Pinzas ✓ Espátulas ✓ Bandejas conservadoras de plástico Nº 5 ✓ Papel toalla ✓ Placas Petri ✓ Plumón marcador. RO. ✓ Balanza de precisión. PE CU AR I. ✓ Pizeta. ✓ Vaso graduado. AG. ✓ Hipoclorito de sodio ✓ Alcohol 96º ✓ Algodón ✓ Agua destilada. CA. ✓ Lápiz. DE. ✓ Tapers de plástico. ✓ Papel bond. TE. ✓ Impresora. ✓ Cámara digital. BL. IO. ✓ Memoria USB. BI. 2.4 Metodología. 2.4.1 Crianza de Galleria mellonella y Spodoptera frugiperda Para obtener las larvas del último estadio se seguirá el siguiente procedimiento:. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. ✓ Obtención de posturas Las posturas fueron obtenidas del Centro de Control Biológico del Servicio. PE CU AR I. AS. Nacional de Sanidad Agraria SENASA.. ✓ Obtención de las larvas de G. mellonella. Larvas del sexto estadio de desarrollo de la polilla fueron utilizadas como hospederos para multiplicar nematodos entomopatógenos. Estas larvas fueron proporcionadas por el laboratorio privado de crianza de insectos. RO. benéficos Biomil Solutions E.I.R.L.. AG. ✓ Obtención de las larvas de S. Frugiperda. Las masas de posturas se colocaron en una caja de plástico número 5 de 6.1. DE. litros de capacidad marca BASA de la tapa de esta caja se recortó gran parte de la superficie y se cubrió con tela de poliseda, en el interior de la caja se colocó las masas de posturas con hojas de Ricinus communis “higuerilla”. CA. que se renovaron 2 a 3 veces por semana según como fueron creciendo y. TE. alimentándose las larvas hasta que llegaron al sexto estadio de desarrollo.. IO. 2.4.2. Selección y pesado de las larvas. BL. Al término de la crianza de cada especie se seleccionaron 50 larvas del último. BI. estadio, se procedió a pesar y registrar el peso de cada una de ellas.. 2.4.3. Infestación con los nematodos entomopatógenos Cada larva tuvo un código que permitió relacionar el nombre de la especie y peso, este código se registró con plumón indeleble en una caja descartable 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. pequeña que en su interior había un disco de papel toalla estéril en la base, sobre esta se colocó la larva, se la asperjo con agua destilada estéril que. AS. contenía 50 juveniles infectivos de nematodos del genero Heterorhabditis. El volumen del agua destilada se aplicó con una pipeta tratando de cubrir toda. PE CU AR I. la larva, posteriormente se dejó incubar a temperatura ambiente por 48 a 72 horas.. 2.4.4 Obtención de los nematodos entomopatógenos. Para obtener los nematodos entomopatógenos, las larvas infectadas que murieron entre las primeras 48 a 72 horas fueron acondicionadas en cámara. RO. White (modificada) que consiste en una caja descartable pequeña que en su interior contiene un disco de papel toalla estéril húmedo en la base y la mitad. AG. de una lámina portaobjetos estéril, sobre la lámina se coloca la larva muerta. Luego estas cajas descartables se colocan en el interior de una caja de plástico. DE. BASA número 5 que contiene en su base papel toalla humedecido, se tapa y se. CA. colocan a temperatura ambiente por 15 días.. TE. 2.4.5 Recolección de juveniles infectivos Transcurrido el periodo de incubación, para la recolección de juveniles. IO. infectivos se procedió a humedecer la larva con agua que fue recolectada en un. BI. BL. vaso de precipitación. Se observó diariamente al microscopio para determinar la emergencia de los nematodos. Una vez que comenzaron a emerger se procedió a recolectarlos y contarlos, así se determinó el número total de nematodos obtenidos por larva durante 5 a 7 días.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. 2.5. Parámetros evaluados 2.5.1 Nivel de producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp.. PE CU AR I. AS. obtenidos por hospedero.. Para determinar el nivel de producción de juveniles infectivos (J3) de Heterorhabditis spp. por hospedero se procedió a contar los nematodos obtenidos por larva de cada especie utilizando el método de dilución volumétrica (Kaya y Stock, 1997; Alcázar y Cañedo, 2003). Este método consiste en colocar 100 μl (micro litros) de la suspensión inicial en una placa Petri rayada o dividida, para realizar el conteo directo de los nematodos. Este. RO. procedimiento se repitió tres veces.. DE. AG. La concentración de nematodos se determinó mediante la siguiente fórmula:. 𝑁𝑥 1 𝑥 (𝑋 + 1) 𝑀. CA. 𝑆=. TE. Donde:. N: Numero promedio de nematodos registrados en cada muestra. X + 1: Dilución. M: Número de ml de cada muestra tomada.. BI. BL. IO. S: Concentración (nematodos/ml) en la suspensión.. 2.5.2. Relación peso y la producción de juveniles infectivos por hospedero. Se registrará de acuerdo al peso de cada larva el número de juveniles infectivos obtenidos y se expresará en promedio por hospedero. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. 2.5.3. Relación de tamaño y producción de juveniles infectivos por hospedero. Se registrará de acuerdo al tamaño de cada larva el número de juveniles infectivos. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. PE CU AR I. AS. obtenidos y se expresará en promedio por hospedero.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. CAPÍTULO III. AS. RESULTADOS Y DISCUSIÓN. 3.1 Nivel de producción de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos. PE CU AR I. por hospedero.. Del total las larvas de G. mellonella que se utilizaron para esta investigación, se recuperó juveniles infectivos de Heterorhabditis del 98 % de las larvas infectadas a las 48 horas. En la figura 5 se presenta el número total de juveniles infectivos obtenidos en cada una de las larvas de sexto estadio de G. mellonella evaluadas.. RO. Aquí, podemos observar que el número de juveniles infectivos (J3) fluctuó entre 109,200 a 638,300 siendo el promedio de juveniles infectivos obtenidos de. AG. 326,280.. DE. 650000. 550000. CA. 500000 450000. TE. 400000 350000 300000. IO. Nº de juveniles infectivos emergidos. 600000. 250000. BI. BL. 200000 150000 100000 50000. REPETICIONES Juveniles Infectivos. Figura 3. Número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva de G. mellonella. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. Solamente del 78 % de las larvas de S. frugiperda infectadas se pudo recuperar. AS. juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. En la figura 6 se presenta el número total de juveniles infectivos obtenidos en. PE CU AR I. cada una de las larvas de sexto estadio de S. frugiperda. Aquí, podemos observar. que el número de juveniles infectivos (J3) fluctuó entre 66,000 a 484,800 siendo el promedio de juveniles infectivos obtenidos de 225, 776.. RO. 500000. AG. 400000. DE. 300000. 200000. 100000. CA. N° de juveniles infectivos emergidos. 600000. 0. Repeticiones Juveniles infectivos. Figura 4: Número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva de S. frugiperda.. BI. BL. IO. TE. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32. El promedio de juveniles infectivos obtenidos en G. mellonella en esta investigación es superior a los resultados obtenidos por Realpe (2007), quien obtuvo solamente 78 750 juveniles infectivos por larva. Crisanto (2016) obtuvo 123 850 siendo estos números de juveniles inferior a los obtenidos. Las 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. diferencias pueden ser debido a factores como especie, tamaño y peso de los hospederos; así como a las condiciones ambientales.. AS. En relación a S. frugiperda, Crisanto (2016) obtuvo 162 950 juveniles infectivos por larva, en esta investigación los resultados fueron superiores obteniendo 225. PE CU AR I. 776 juveniles infectivos por larva.. 3.2. Relación peso y producción de juveniles infectivos por hospedero.. En la figura 7 se grafica el peso de cada larva de sexto estadio de G. mellonella y número total de juveniles infectivos obtenidos. Aquí, podemos observar que el peso de las larvas fluctuó entre 232 a 390.9 mg. siendo el peso promedio de. RO. 297.36 mg. No se observó relación directa entre el peso y el número de juveniles infectivos dado que el peso de la larva que obtuvo el mayor número de juveniles. AG. infectivos fue 380.7 mg. mientras que la larva de mayor peso (390.9 mg) obtuvo solamente 367,000 juveniles, es decir 42 % menos que la larva que obtuvo la. DE. 650000. CA. 550000. 360. 500000. 260. TE. 450000. 310. 400000. 210. 350000 300000. IO. Nº de juveniles infectivos emergidos. 600000. 160. BI. BL. 250000. 110. 200000 150000. 60. Peso de Galleria mellonella (mg). mayor producción.. 100000. 10. 50000 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10111213141516171819202122232425262728293031323334353637383940414243. REPETICIONES Juveniles Infectivos Peso Larva. Figura 5: Peso de las larvas de G. mellonella y número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. En la figura 8 se grafica el peso de cada larva de sexto estadio de S. frugiperda y número total de juveniles infectivos obtenidos. Aquí, podemos observar que las larvas de este hospedero presentaron un rango superior de peso en. AS. comparación a G. mellonella. Fluctuando entre 224.6 a 661.9 mg., siendo el. PE CU AR I. peso promedio de 425 mg.. No se observó relación directa entre el peso y el número de juveniles infectivos dado que el peso de la larva que obtuvo el mayor número de juveniles infectivos fue 341.1 mg. mientras que la larva de mayor peso (661.9 mg) obtuvo solamente 465,200 juveniles, es decir 4.1 % menos que la larva que obtuvo la mayor. AG. Nº de juveniles infectivos emergidos. 600000 500000. 300000. 400. 100000 0. 300 200. CA. 200000. 600 500. DE. 400000. 700. Peso de Spodptera frugiperda (mg). RO. producción.. 100 0. Repeticiones. Juveniles infectivos. peso de larva. BL. IO. TE. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32. BI. Figura 6: Peso de las larvas de S. frugiperda y número de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos por larva. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. 3.3. Relación tamaño y producción de juveniles infectivos por hospedero.. AS. En la figura 9 se grafica el tamaño de cada larva de sexto estadio de G. mellonella y número total de juveniles infectivos obtenidos. Aquí, podemos observar que el. PE CU AR I. tamaño de las larvas fluctuó entre 20 a 29 mm. siendo el tamaño promedio de 24.07 mm. No se observó relación directa entre tamaño y número de juveniles. infectivos dado que la larva que obtuvo el mayor número de juveniles infectivos tuvo 24 mm. de tamaño, mientras que la larva de mayor tamaño (29 mm) obtuvo. RO. 700000 600000. AG. 500000 400000. 200000. CA. 100000 0 1. 3. 5. 7. 35 30. 25 20 15. DE. 300000. 10 5 0. 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41. Repeticiones. Juveniles Infectivos. tamaño (mm). IO. TE. N° de juveniles infectivos emergidos. mayor producción.. Tamaño de Galleria mellonella (mm). solamente 367,000 juveniles, es decir 42.6 % menos que la larva que obtuvo la. juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos.. BI. BL. Figura 7: Relación de tamaño de larva de G. mellonella y número de. En la figura 10 se grafica el tamaño de cada larva de sexto estadio de S. frugiperda y número total de juveniles infectivos obtenidos. Aquí, podemos observar que el tamaño de las larvas fluctuó entre 20 a 32 mm. siendo el tamaño 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. promedio de 27 mm. No se observó relación directa entre tamaño y número de juveniles infectivos dado que la larva que obtuvo el mayor número de juveniles infectivos tuvo 28 mm. de tamaño, mientras que la larva de mayor tamaño (32. AS. mm) obtuvo solamente 75,300 juveniles, es decir 84.5 % menos que la larva que. PE CU AR I. obtuvo la mayor producción.. 30. 500000. 25. 400000. 20. 300000. 15. RO. 200000 100000 0. 10 5 0. Tamaño Spodoptera frugiperda (mm). 35. AG. N° de juveniles infectivos emergidos. 600000. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32. DE. Repeticiones. Juveniles Infectivos. Tamaño (mm). CA. Figura 8: Relación de tamaño de larva de S. frugiperda y número de. IO. TE. juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. obtenidos.. Los resultados de la tabla 1, muestran p-valores menores a .05, evidenciando una. BL. diferencia estadísticamente significativa (p<.05) entre la distribución del tamaño (mm). BI. en ambos hospederos y de la Población emergida de nemátodos entomopatógenos en la Spodoptera frugiperda con la distribución normal, en tal sentido se decide aplicar la prueba no paramétrica U de Mann Whitney para realizar el análisis comparativo del peso (gr), tamaño (mm) y Población emergida de nematodos entomopatógenos entre ambos hospederos.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. Tabla 1. PE CU AR I. AS. Prueba de Normalidad de Shapiro Wilk del peso, tamaño y población de juveniles infectivos de Heterorhabditis spp. usando como hospedero Spodoptera frugiperda y Galleria mellonella. Hospederos Galleria mellonella Spodoptera frugiperda Estadístico gl p Estadístico gl P ,962 42 ,176 ,967 32 ,420 ,933 42 ,017* ,927 32 ,033* ,978 42 ,587 ,926 32 ,030*. Variables Peso (gr) Tamaño (mm) Población emergida de Neps. DE. AG. RO. Nota: gl: grados de libertad p: Significancia *p<.05. CA. En la Tabla 2, se aprecia una diferencia estadísticamente significativa (p<.05) en el peso (gr) del hospedero Spodoptera frugiperda (Rango promedio=53.97) respecto al. TE. hospedero Galleria mellonella (Rango promedio=24.95), de igual manera se encontró una diferencia estadísticamente significativa (p<.05) en el tamaño (mm) del hospedero. IO. Spodoptera frugiperda (Rango promedio=47.70) respecto a Galleria mellonella (Rango. BL. promedio=29.73), además se evidenció una diferencia estadísticamente significativa (p<.05) en el tamaño (mm) a favor del hospedero Galleria mellonella (Rango. BI. promedio=44.51). respecto. al. hospedero. Spodoptera. frugiperda. (Rango. promedio=28.30).. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. Tabla 2 Prueba de comparación U de Mann Whitney del peso, tamaño y población de juveniles. AS. infectivos de Heterorhabditis spp. usando como hospedero Spodoptera frugiperda y Galleria mellonella. Peso (gr) Tamaño (mm) Población emergida de Neps. PE CU AR I. Variables. Hospederos (Rangos promedio) Galleria Spodoptera mellonella frugiperda 24,95 53,97 29,73 47,70 44,51 28,30. U. 145,0 345,5 377,5. Z. p. -5,75 ,000** -3,59 ,000** -3,21 ,001**. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. Nota: U: Estadístico U de Mann Whitney Z: Valor Normal Estándar p: Significancia **p<.01. U de Mann-Whitney. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. CAPÍTULO IV. El mayor porcentaje de infección de larvas se obtuvo en Galleria mellonella. PE CU AR I. •. AS. CONCLUSIONES. siendo este 98%, mientras que en Spodoptera frugiperda solamente se infectó el 78 % de las larvas evaluadas. •. Las larvas hospedantes de Spodoptera frugiperda presentan diferencia estadísticamente significativa (p<.05) en el tamaño (mm) a favor del hospedero. RO. Galleria mellonella (Rango promedio=44.51) respecto al hospedero Spodoptera frugiperda (Rango promedio=28.30) mientras que los hospederos de Galleria. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Spodoptera frugiperda.. AG. mellonella presentan una población estadísticamente mayor a los obtenidos en. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. CAPÍTULO V. AS. RECOMENDACIONES. PE CU AR I. • Repetir la investigación evaluando otras especies del género Spodoptera.. • Evaluar dosis más altas de juveniles infectivos para la infección de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. las larvas.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. CAPÍTULO VI. Alizar, T., Saavedra, Lauren, L., Cárdenas M., Valdés R., y Pozo, E. (2010).. PE CU AR I. ▪. AS. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Determinación del instar óptimo de Spodoptera frugiperda en la reproducción de Heterorhabditis indica, 19-25. ▪. Amador, M., Molina, D., Guillen, C., Parajeles, E., Jiménez, K., Uribe, L. (2012). Utilización del nematodo entomopatógeno Heterorhabditis atacamensis. RO. cia-ne07 en el control del picudo del banano Cosmopolites sordidus en. ▪. AG. condiciones in vitro, 47-60.. Arteago, E.; Fernández, E., y Vásquez, T. 1994. Los nematodos entomopatógenos. Situación actual y prospectiva. III Simposio Internacional de. Badii, M. Y Abreu, L., (2006). Control biológico una forma sustentable de. CA. ▪. DE. Zoología. La Habana, Cuba. 50-55. ▪. TE. control de plagas, 86-89. Baker, G.; Capinera, J. 1997. Nematodes and Nematomorphs as control agents. IO. of grass hoppers and locusts. Memoriors of the Entomological Society of. BL. Canada, 171, 157 - 211.. BI. ▪. Chacón, Y., Garita, C., Vaglio, C., Villalba, V. (2009). Desarrollo de una metodología de crianza en laboratorio del gusano cogollero del maíz Spodoptera frugiperda (Smith) (Lepidoptera: Noctuidae) como posible hospedante de insectos biocontroladores de interés agrícola, 28-37.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. ▪. De Doucet, A., De Doucet, E. y Nienstedt, K., (1992). Diferencias inter e intraespecificas en la capacidad infectiva de poblaciones de Heterorhabditis y. ▪. AS. Steinernema aislados en argentina, 50-62. Ferrer, F., Arias, M., Trelles, A., Palencia, J., Navarro, M. y Colmenarez, R.. PE CU AR I. (2004). Posibilidades del uso de nematodos entomopatógenos para el control de Aeneolamia varia en caña de azúcar, 30-43. ▪. García del Pino, (1994); Los Nematodos Entomopatógenos (Rhabditida: Steinernematidae y Heterorhabditidae) presentes en Cataluña y su utilización para el Control Biológico de Insectos. Consultado el 30 de Setiembre de 2015,. RO. de. http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3686/fgp1de8.pdf?sequence=1 Lozano, J. 2001. El estrés calórico en la expresión de las proteínas hsp70 y hsp90 en. AG. ▪. nematodos. entomopatógenos. (Rhabditida:. Steinermatidae,. DE. Heterorhabditidas). Tesis para obtener el grado de doctor en ciencias. Area. ▪. CA. Biotecnología de la Universidad de Colima. México. 122-130. Madrigal, A. 2001. Fundamentos de control biológico de plagas. Universidad. Maximiliano Orbegoso (2014), Tesis: Aislamiento y multiplicación de. IO. ▪. TE. Nacional de Colombia sede Medellín – Facultad de Ciencias. 45-53. BL. nematodos entomopatógenos en Trujillo – La Libertad, 35-40.. BI. ▪. Peters, A. 1996. The natural host ramge of Steirneman and Heterorhabditis spp. and their impacto on insectos populations. Review. Biocontrol science and technology, 382-402.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

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(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. ▪. Sanchez, L. 2002. Heterorhabditis bacteriophora HCI, Estrategia de desarrollo como agente de control biológico de plagas insectiles. Tesis en opción al Grado de Doctor en Ciencias Agrícolas. UNAH, La Habana, Cuba. (CENDA Nº 09613-. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. PE CU AR I. AS. 002). 50-58. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. ANEXOS. AG. RO. PE CU AR I. AS. ➢ G. Mellonella. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Figura 9: Infestación de larvas de G. Mellonella con nematodos entomopatógenos. Figura 10: Larvas de G. Mellonella infestadas. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(40) AG. RO. PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Figura 11: Pesado de larvas de G. Mellonella. Figura 12: Nemátodos entomopatógenos saliendo de la larva de G. mellonella 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(41) AG. RO. PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Figura 13: Nemátodos entomopatógenos vistos al estereoscopio. Figura 14: Larvas muertas de G. Mellonella. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. AG. RO. PE CU AR I. AS. ➢ S. frugiperda. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Figura 15: Infestación de larvas de S. frugiperda. Figura 16: Larvas infestadas de S. frugiperda. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(43) PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. Figura 17: Larvas de S. frugiperda colocada en cámara White modificada. Figura 18: Nemátodos entomopatógenos en larva de S. frugiperda. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(44) RO. PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. Figura 19: Nemátodos entomopatógenos saliendo de la larva de S. frugiperda. Figura 20: Larvas de S. frugiperda. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(45) BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

(46) BI. BL. IO. TE. CA. DE. AG. RO. PE CU AR I. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas y Comunicaciones. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-ca/2.5/pe/.

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