Susceptibilidad antimicótica in vitro de microsporum canis y trichophyton rubrum al aceite esencial de eucalyptus globulus (eucalipto)

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. ed. ici. na. ESCUELA DE MEDICINA. M. TÍTULO:. de. Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum. a. al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto). te c. PARA OPTAR EL GRADO DE:. Bi b. lio. BACHILLER EN MEDICINA. AUTORA:. RAFAEL HORNA, ANDREA NOELIA. ASESORA: DRA. MEJÍA DELGADO, ELVA MANUELA Trujillo – Perú 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios, por permitirme estar cumpliendo. na. una de mis mayores metas, por ser mi guía y darme las fuerzas necesarias para superar. M. ed. ici. cada reto hallado en el camino.. de. A mi querida familia, por su apoyo. incondicional en cada momento de mi vida,. a. por su confianza en mí y por darme la. te c. motivación necesaria para seguir mis sueños.. lio. A mis amigos, porque de una forma u otra han colaborado en la realización de éste trabajo.. Bi b. Especialmente a quienes están más cerca de mí: Cristopher, Ariadna, Kathy y Hernán.. A Jhonatan Meléndez, por ser mi fiel compañero, mi apoyo incondicional y motivación durante estos años que Dios nos ha permitido compartir.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 2.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. A mi querida asesora, Dra. Elva Mejía Delgado, por su inmenso e incondicional. na. apoyo, por guiarme y acompañarme en cada. M. han colaborado en la realización de éste. ed. A mis amigos, porque de una forma u otra. ici. proceso de la realización de este trabajo.. de. trabajo, especialmente a quienes están más. Bi b. lio. te c. a. cerca de mí.. A la Dra. Marilú Soto, por su apoyo en la ejecución del proyecto, el Laboratorio de Farmacognosia – Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de esta universidad.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 3.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. RESUMEN………………………………………..………………………………. 5. na. ABSTRACT…………………………………………………………………….… 6 INTRODUCCIÓN………………………………………………………...….. 7. II.. MATERIAL Y MÉTODO……………………………………………….…. 10. III.. RESULTADOS……………………………………………………………… 18. IV.. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN……………………………………………….… 25. V.. CONCLUSIONES ……………………………………..…………………… 29. VI.. RECOMENDACIONES …………………………………………………… 30. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………. 31. lio. te c. a. de. M. ed. ici. I.. Bi b. VIII. ANEXOS……………………………………………………………………... 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 4.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) _______________________________________________________________________. na. RESUMEN OBJETIVO: Evaluar la susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y. ici. Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto). MATERIAL Y MÉTODOS: Se realizó un estudio experimental que evaluó el efecto. ed. antimicótico in vitro de 3 concentraciones (100%, 75% y 50%) del aceite esencial de Eucalyptus globulus sobre el crecimiento de Microsporus canis y Trichophyton rubrum;. M. utilizando Terbinafina en crema 1% como tratamiento del grupo control. Se utilizó el método de difusión en base a los fundamentos descritos por Kirby-Bauer, recomendados. de. en los estándares NCCLS para Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana. El método de difusión en discos se aplicó para el grupo experimental y método de difusión en pozo para el grupo control. Posteriormente se evaluó la sensibilidad haciendo uso de la escala de. a. Duraffourd.. te c. RESULTADOS: Microsporum canis y Trichophyton rubrum son susceptibles al efecto antimicótico del aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%, 75% y 50%. Contra Microsporum canis no se halló diferencia estadísticamente significativa con el uso de las. lio. diferentes concentraciones. Contra el crecimiento de Trichophyton rubrum, la. Bi b. susceptibilidad al aceite esencial de Eucalyptus globulus es mayor al 100% y 75%, que con el de 50%.. CONCLUSIÓN: In vitro, Microsporum canis y Trichophyton rubrum son susceptibles al efecto antimicótico del aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) en sus tres concentraciones (100%, 75% y 50%). PALABRAS CLAVE: Eucalyptus globulus, Microsporus canis, Trichophyton rubrum.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 5.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. In vitro antifungal susceptibility of Microsporum canis and Trichophyton rubrum to the essential oil of Eucalyptus globulus (Eucalyptus) _______________________________________________________________________. na. ABSTRACT OBJECTIVE: To evaluate in vitro antifungal susceptibility of Microsporum canis and. ici. Trichophyton rubrum to the essential oil of Eucalyptus globulus (Eucalyptus). MATERIAL AND METHODS: An experimental study was carried out which evaluated. ed. the in vitro antifungal effect of 3 concentrations (100%, 75% and 50%) of the essential oil from Eucalyptus globulus on the growth of Microsporus canis and Trichophyton rubrum;. M. using Terbinafine in cream 1% as treatment of the control group. The diffusion method was used based on the fundamentals described by Kirby-Bauer, recommended in the. de. NCCLS standards for Antimicrobial Susceptibility Tests. The disc diffusion assay was applied for the experimental group and hole diffusion method for the control group. Subsequently the sensitivity was evaluated using the Duraffourd scale.. a. RESULTS: Microsporum canis and Trichophyton rubrum are susceptible to the antifungal. te c. effect of the essential oil of Eucalyptus globulus at 100%, 75% and 50%. Against Microsporum canis no statistically significant difference was found with the use of the different concentrations. Against the growth of Trichophyton rubrum the susceptibility to. Bi b. 50%.. lio. the essential oil of Eucalyptus globulus is greater than 100% and 75%, than with that of. CONCLUSION: In vitro, Microsporum canis and Trichophyton rubrum are susceptible to the antifungal effect of the essential oil of Eucalyptus globulus (eucalyptus) in its three concentrations (100%, 75% and 50%). KEY WORDS: Eucalyptus globulus, Microsporus canis, Trichophyton rubrum.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 6.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. La dermatofitosis o tiña, es una enfermedad causada por un grupo de hongos, con afinidad para crecer sobre la queratina, la cual digieren enzimáticamente y consumen como principal fuente de energía (hongos queratinofílicos). Se clasifican en 2 grupos. na. según el área que afectan: las dermatofitosis epidérmicas (tinea corporis, faciei,. ici. manuum, pedis, cruris) y las dermatofitosis anexiales: tinea capitis, barbae y unguium.. ed. (1, 2, 3). Es una enfermedad muy prevalente, que afecta a aproximadamente el 40% de personas. M. a nivel mundial y representa el 30% de todas las infecciones micóticas cutáneas. En el. de. Perú, es uno de los principales motivos de consulta dermatológica, constituyendo un problema de salud pública debido a su alta morbilidad. Un estudio epidemiológico. a. realizado durante 30 años, reveló que el principal agente infeccioso micótico en nuestro. te c. medio es el Trichophyton rubrum (33,2%), un hongo antropofílico cosmopolita, que posee factores de patogenicidad y resistencia a algunos fármacos antifúngicos, lo que. lio. explica su alta prevalencia en nuestro país; por otro lado, Microsporum canis, es el. Bi b. causante de infecciones en menor cuantía, (1,6%). (4, 5, 7, 24) Los dermatofitos se clasifican en tres géneros: Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton, en total, un aproximado de 50 especies, de las que alrededor de 20 son patógenas para el hombre.. Microsporum posee 20 especies, de las que. aproximadamente solo la mitad son patógenas para el hombre y Trichophyton (es el. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 7.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. más frecuente, con cerca de 30 especies, de las que menos de 10 son responsables de las dermatofitosis humanas. (1, 6) La curación espontánea de las micosis por dermatofitos es improbable, por lo tanto, en la mayoría de los casos será necesario instaurar un tratamiento específico y apropiado,. na. pudiendo ser usada las forma tópica o sistémica; la elección dependerá de la localización, severidad de la infección y preferencias del paciente. Entre los fármacos. ici. más usados destacan la terbinafina y los azoles tópicos. La terbinafina es un alilamina. ed. que inhibe una enzima de la vía metabólica del ergosterol, la escualeno epoxidasa, generando acumulación intracelular tóxica de escualeno que genera su actividad. M. fungicida; además, la depleción de ergosterol conduce a una actividad fungistática. Este. de. fármaco ha demostrado ser más efectivo que los antifúngicos azólicos en las onicomicosis por dermatofitos y su uso se asocia con menor recurrencia comparado con. a. el tratamiento con itraconazol (azol). Otra alternativa terapéutica es el uso de la. te c. fitoterapia. El aceite esencial de Eucalyptus globulus (eucalipto) es usado en la fitoterapia tradicional, por poseer propiedades biológicas antibacterianas, antifúngicas y. lio. antitumorales. Numerosos estudios le otorgan su propiedad antifúngica al más. Bi b. abundante componente del aceite de eucalipto, el 1,8-cineol (eucaliptol). Sin embargo, no se descarta que efectos sinérgicos entre los componentes principales y secundarios puedan ocurrir. (1, 3, 23, 9, 4, 8) En la bibliografía consultada se hallan escasos trabajos publicados sobre la actividad antidermatofítica de la especies E. globulus contra Microsporum canis y Trichophyton rubrum en particular, lo cual motiva la realización de este proyecto, con el propósito de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 8.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. aportar nuevas evidencias para el uso de alternativas terapéuticas naturales en el tratamiento contra la dermatofitosis. PROBLEMA ¿Cuál es la susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y. na. Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)?. ici. HIPÓTESIS. ed. Microsporum canis y Trichophyton rubrum son altamente susceptibles al efecto. M. antimicótico in vitro del aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto). de. OBJETIVOS 1. General. Evaluar la susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y. a. -. te c. Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto). lio. 2. Específicos. Determinar la susceptibilidad antimicótica de Microsporum canis al. Bi b. -. aceite esencial de Eucalyptus globulus.. -. Determinar la susceptibilidad antimicótica de Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus.. -. Determinar a qué concentración del aceite esencial de Eucalyptus globulus, Microsporum canis tiene susceptibilidad antimicótica in vitro.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 9.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -. Determinar a qué concentración del aceite esencial de Eucalyptus globulus, Trichophyton rubrum tiene susceptibilidad antimicótica in vitro.. MATERIALES Y MÉTODOS. na. II. a. Material:. ed. Unidad de análisis y unidad de muestreo. ici. a.1 Diseño estadístico del muestreo. Las unidades de análisis y muestreo estuvieron constituidas por cada placa. M. petri que contenían las cepas en estudio (Microsporum canis o Trichophyton rubrum) con el respectivo tratamiento (aceite esencial de Eucalyptus. a. Tamaño muestral. de. globulus al 100%, 75%, 50% o Terbinafina).. te c. Para determinación de la muestra del estudio se establecieron los siguientes. lio. criterios:. = 1.96. Bi b. Zα/2 Zβ. = 0.84. Para un nivel de confianza del 95% Para una potencia de prueba del 80%. Asumiendo que no se conoce la varianza y que: σ2δ= δ2. N= [(𝑍𝛼⁄2 +𝛽)2 2𝜎𝛿2`] Se obtuvieron n =~ 10 repeticiones como mínimo para cada grupo experimental a evaluar. Por lo tanto, para efectos de este trabajo se tomaron 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 10.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. grupos para la evaluación: 4 grupos (de 10 repeticiones cada uno) con siembra de Microsporum canis, en los que se aplicaron aceite esencial de Eucalyptus globulus en las concentraciones de 100%, 75% y 50% y Terbinafina; y. manera similar, 4 grupos con siembra de Trichophyton. na. rubrum.. Eucaliptus globulus. Independiente. antimicótica de. Dependiente. Microsporum canis. te c. a. Susceptibilidad. Susceptibilidad. Dependiente. lio. antimicótica de. Cualitativa. de. Aceite esencial de. NATURALEZA. M. TIPO DE VARIABLE. ed. b.1 Variables y escalas de medición:. ici. b. Métodos:. Cualitativa. ESCALA DE MEDICIÓN. INDICADOR. 100% Nominal. 75% 50% Diámetro del. De razón. halo de inhibición Diámetro del. Cualitativa. De razón. inhibición. Bi b. Trichophyton rubrum.. halo de. b.2 Definiciones Aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 11.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Definición conceptual: Líquido oleoso proveniente de las hojas de Eucalyptus globulus, de olor ligeramente alcanforado y color amarillo canario pálido. (10) Definición operacional: Líquido oleoso proveniente de las hojas de. na. Eucalyptus globulus al 100%, 75% o 50% de pureza. (10). ici. Susceptibilidad antimicótica de Microsporum canis. ed. Definición conceptual: Sensibilidad o resistencia de la cepa de Microsporum. M. canis a la acción del aceite esencial de Eucalyptus globulus. (14) Definición operacional: Sensible cuando el diámetro del halo de inhibición. de. en placa petri con siembra de Microsporum canis es mayor de 8 mm medido a los 13 días (Sensibilidad límite: 8 – 14 mm; Sensibilidad media:. a. 14 – 20 mm; Sumamente sensible > 20mm). El diámetro del halo de. te c. inhibición menor de 8 mm indica resistencia. (14). lio. Susceptibilidad antimicótica de Trichophyton rubrum. Bi b. Definición conceptual: Sensibilidad o resistencia de la cepa de Trichophyton rubrum a la acción del aceite esencial de Eucalyptus globulus. (14) Definición operacional: Sensible cuando el diámetro del halo de inhibición en placa petri con siembra de Trichophyton rubrum es mayor de 8 mm medido a los 13 días (Sensibilidad límite: 8 – 14 mm; Sensibilidad media:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 12.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 14 – 20 mm; Sumamente sensible > 20mm). El diámetro del halo de inhibición menor de 8 mm indica resistencia. (14) b.3 Diseño procedimental Recolección y reconocimiento de las plantas. na. Se recolectaron especímenes de Eucalyptus globulus de la provincia de Huamachuco, región La Libertad (3269 msnm), durante el mes de enero. ici. del año 2017; para ser reconocidas posteriormente por personal calificado. ed. del Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de Trujillo. De la elaboración del aceite esencial y sus diluciones. M. La obtención del aceite esencial de Eucalyptus globulus se llevó a cabo en. de. el laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, procesados de la siguiente manera:. a. Selección / Deshojado / Pesado: Se desecharon las hojas que no se. te c. mostraron aptas para el procesamiento (Las hojas en estado óptimo para ser. lio. procesadas presentan un color verde con olor característico). Se realizó el deshojado manualmente y posteriormente el pesado de las mismas en una. Bi b. balanza analítica. Se hizo uso de 3 Kg. (10,15) Destilación: Se utilizó un equipo de destilación por arrastre con vapor de agua; que contenía: un balón de 1L, como contenedor del eucalipto y agua, un refrigerante y un matraz Erlenmeyer donde se recibió el destilado (Hidrolato). El hidrolato se saturó con NaCl a una concentración de 10g por cada 10 ml de hidrolato, luego se separó la fase orgánica (aceite volátil). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 13.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. utilizando peras de decantación y se adicionó 50 mL de éter etílico a la pera de decantación para separar el aceite volátil de las impurezas que puedan existir en la fase orgánica. Posteriormente se decantó la capa etérea y se eliminó los residuos de agua que quedaron por la adición de sulfato de. na. sodio anhidro. Se obtuvieron 60 mL de aceite esencial de eucalipto, por lo que el rendimiento del aceite fue de 2 mL por cada 100g de hojas de. ici. eucalipto. (10). ed. Diluciones del aceite esencial. M. El aceite de Eucalyptus globulus obtenido en estado de 100% de pureza, fue diluido al 75% y 50% con etanol, para las respectivas pruebas. Dichas. de. diluciones fueron guardadas a 4ºC para el estudio. (10). a. Preparación de las cepas fúngicas. te c. Preparación del inóculo. Las cepas se cultivaron en un medio Agar Sabouraud Glucosado (ASG), en. lio. tubos de ensayo cerrados. Se incubaron bajo condiciones de temperatura. Bi b. ambiente, Trichophyton rubrum durante 15 días y Microsporum canis, 5 días; con el fin de obtener colonias jóvenes (Macroscópicamente las colonias de Trichophyton rubrum se identifican por el color del reverso, siendo amarillo en las colonias jóvenes y rojo vinoso con el envejecimiento. Las colonias jóvenes de Microsporum canis son blancas y sedosas y con el envejecimiento desarrollan una pigmentación amarilla limón en la periferia.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 14.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El reverso de la colonia se torna amarillo castaño cuando la colonia madura.). Una vez obtenidas las cepas, se diluyeron en tubos con caldo glucosado estéril, hasta obtener una turbidez semejante al tubo número 0.5 de la escala de Mac Farland (1.5 x 108 UFC/ml) que corresponde a 108. na. hongos/mL. (11, 12, 13) Los tubos que contenían los hongos fueron girados verticalmente sobre su. ici. eje longitudinal entre las manos aproximadamente durante 30 segundos. ed. hasta observar un líquido homogéneo, con el fin de distribuir los microorganismos antes de proceder al sembrado. (11, 12, 13). M. Sembrado. de. Hisopos estériles fueron embebidos con el inóculo (hifas, macroconidios y micronidios) de Microsporum canis y se usaron para sembrar en cada placa. a. petri con agar Sabouraud. Se realizó el mismo procedimiento con el inóculo. te c. de Trichophyton rubrum. Las placas fueron incubadas a temperatura ambiente durante 2 semanas. Los pasos se realizaron con sumo cuidado en. lio. búsqueda de la homogenización de las placas. (11, 12, 13). Bi b. Prueba de susceptibilidad Se utilizó el método de difusión en base a los fundamentos descritos por Kirby-Bauer. Esta técnica se puede realizar ya sea en pozo o disco ya que actualmente ambos se encuentran estandarizados y son recomendados en los estándares NCCLS para Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana del Subcomité de ensayos de susceptibilidad, de los Estados Unidos. (11, 13). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 15.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se prepararon discos de papel filtro Whatman N°1 de 6 mm de diámetro previamente esterilizados, los cuales se sumergieron dentro de las 3 diluciones respectivas del aceite esencial de eucalipto (concentraciones de 100%, 75% y 50% de pureza), por 1 hora. Posteriormente usando una aguja. na. estéril, se colocaron sobre los cultivos de las placas petri con agar sabouraud. Las placas se mantuvieron en la misma posición por un periodo. ici. de 5 minutos, luego de este tiempo las placas se incubaron a temperatura. ed. ambiente por el tiempo mencionado. (11, 13). Para el grupo control se utilizó Terbinafina en crema 1%, utilizándose el. M. método de pozos de agar modificado siguiendo las mismas consideraciones. de. que con los grupos anteriores (igual diámetro de tratamiento): Sobre los cultivos en las placas petri con agar Sabouraud se hicieron los pozos con el. a. apoyo de un sacabocados estéril de 6 mm de diámetro y en cada uno de. te c. ellos se depositó de 10 a 25 μL de Terbinafina, hasta llegar al mismo nivel que el resto de la placa, dejándose reposar por de 30 min, finalmente se. lio. incubaron a temperatura ambiente por el tiempo mencionado. (11, 13). Bi b. Lectura de resultados La lectura se llevó a cabo a las 2 semanas, mediante la inspección directa y medición de los diámetros de los halos de inhibición formados en cada placa con Microsporum canis y Trichophyton rubrum, de las cuales se tomó el registro en milímetros y se compararon con las medidas de la escala de Duraffourd (escala utilizada para la determinación cualitativa del efecto. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 16.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. inhibitorio in vitro, según diámetro de inhibición, que considera que la sensibilidad es determinada por un diámetro superior de 8mm), con las respectivas especificaciones: (11, 13) Condición. Diámetro en mm <8. na. Resistente o no sensible: (-). 8 – 14. Sensibilidad límite: (+). 14 – 20. ici. Sensibilidad media: (++). > 20. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. Sumamente sensible: (+++). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 17.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Los resultados de la sensibilidad antimicótica de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus con todas las concentraciones estudiadas según la escala de Duraffourd mostraron que el aceite. na. esencial de eucalipto posee un notable efecto antimicótico como se aprecia en las siguientes tablas.. ici. En la Tabla N°1 se muestra la media de los halos de inhibición obtenidos con los 4. ed. tratamientos (concentraciones de aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%, 75% y 50% y Terbinafina) sobre el crecimiento de Microsporum canis. Todos se. M. hallaron dentro del rango “Sumamente sensible” de la escala de Duraffourd (diámetro de halo de inhibición superior a 20 mm).. de. En la Tabla N°2 se muestra el análisis de varianza del diámetro de los halos de. a. inhibición obtenidos con los 4 tratamientos (concentraciones de aceite esencial de. te c. Eucalyptus globulus al 100%, 75% y 50% y Terbinafina) sobre Trichophyton rubrum, hallándose que no existe diferencia estadísticamente significativa entre los. lio. grupos (Significancia hallada: 0,142. La diferencia de medias es significativa al. Bi b. nivel de ≤ 0.05).. En la Tabla N°3 se muestra la media de los halos de inhibición obtenidos con los 4 tratamientos (concentraciones de aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%, 75% y 50% y Terbinafina) sobre Microsporum canis, hallándose todos dentro del rango “Sumamente sensible” (diámetro superior a 20 mm). en la escala de. Duraffourd.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 18.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la Tabla N°4 se muestra el análisis de varianza del diámetro de los halos de inhibición obtenidos con los 4 tratamientos (concentraciones de aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%, 75% y 50% y Terbinafina) sobre Trichophyton rubrum, hallándose que sí existe diferencia estadísticamente significativa entre los. na. grupos, ya que la diferencia de medias es 0,026. En la Tabla N°5 se muestra las comparaciones de los diámetros de los halos. ici. obtenidos con los 4 tratamientos sobre el crecimiento de Trichophyton rubrum,. ed. evidenciándose que se obtiene mejor resultado antimicótico sobre este dermatofito. Bi b. lio. te c. a. de. M. usando aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100% y 75%, que con el de 50%.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 19.

(20) na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 1. HALOS DE INHIBICIÓN OBTENIDOS CON EL ACEITE ESENCIAL. N. estándar. M. Desviación. de. TRATAMIENTO. ed. Microsporum canis. ici. DE Eucalyptus globulus AL 100%, 75% Y 50% Y TERBINAFINA SOBRE. Media (cm) (cm). 10. 25,00. 0. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 75%. 10. 24,10. 1,4491. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 50%. 10. 24,90. 0,3162. Terbinafina. 10. 24,75. 0,8086. Bi b. lio. te c. a. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 20.

(21) na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 2. ANÁLISIS DE VARIANZA DE LOS DIÁMETROS DE LOS HALOS DE. ici. INHIBICIÓN OBTENIDOS CON EL ACEITE ESENCIAL DE Eucalyptus globulus. Suma de. Variación. cuadrados. Concentraciones. 39,475. Error. 245,300. Total. 284,775. Media. Gl. M. Fuente de. ed. AL 100%, 75% Y 50% Y TERBINAFINA SOBRE Microsporum canis. F. Significancia*. 1,931. 0,142. de. cuadrática 13,158. 36. 6,814. a. 3. te c. 39. Bi b. lio. * La diferencia de medias es significativa al nivel de ≤ 0.05. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 21.

(22) na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 3. HALOS DE INHIBICIÓN OBTENIDOS CON EL ACEITE ESENCIAL. N. estándar. M. Desviación. de. TRATAMIENTO. ed. Trichophyton rubrum. ici. DE Eucalyptus globulus AL 100%, 75% Y 50% Y TERBINAFINA SOBRE. Media (cm) (cm). 10. 23,20. 3,0840. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 75%. 10. 25,00. 0. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 50%. 10. 22,70. 4,1647. Terbinafina. 10. 24,80. 0,6325. Bi b. lio. te c. a. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 22.

(23) na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 4. ANÁLISIS DE VARIANZA DE LOS DIÁMETROS DE LOS HALOS DE. ici. INHIBICIÓN OBTENIDOS CON EL ACEITE ESENCIAL DE Eucalyptus globulus. Suma de. Variación. cuadrados. Concentraciones. 5,7. Error. 19,8. Total. 25,5. Media. Gl. M. Fuente de. ed. AL 100%, 75% Y 50% Y TERBINAFINA SOBRE Trichophyton rubrum. F. Significancia*. 3,455. 0,026. de. cuadrática 1,900. 36. 0,550. a. 3. te c. 39. Bi b. lio. * La diferencia de medias es significativa al nivel de ≤ 0.05. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 23.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 5. COMPARACIONES DE LOS DIÁMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN OBTENIDOS CON EL ACEITE ESENCIAL DE Eucalyptus globulus AL 100%, 75% Y 50% Y TERBINAFINA SOBRE Trichophyton rubrum Significancia*. na. TRATAMIENTOS COMPARADOS. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 75%. Eucalyptus globulus. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 50%. al 100%. Terbinafina. 0,765. Aceite esencial de. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%. 1,000. Eucalyptus globulus. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 50%. 0,010. de. M. ed. ici. Aceite esencial de. al 75%. 1,000 0,010. 0,765. Aceite esencial de. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%. 0,010. Eucalyptus globulus. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 75%. te c. Bi b. Terbinafina. 0,010. Terbinafina. 0,021. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%. 0,765. lio. al 50%. a. Terbinafina. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 50%. 0,765. Aceite esencial de Eucalyptus globulus al 75%. 0,021. * La diferencia de medias es significativa al nivel de ≤ 0.05. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 24.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN. La presente investigación demostró la susceptibilidad de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al efecto antimicótico de tres concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus (100%, 75% y 50%), ya que el diámetro de todos los halos de inhibición obtenidos mediante el método de Kirby y Bauer se ubicaron dentro del rango. ici. na. “sumamente sensible” en la escala de Duraffourd.. ed. Estadísticamente, no se hallaron diferencias significativas en la sensibilidad de Microsporum canis a alguna de las concentraciones del aceite; sin embargo, sí se. M. observó una diferencia dosis - dependiente en la susceptibilidad de Trichophyton rubrum, la cual fue significativamente mayor a las concentraciones de 100% y 75% que. de. a la de 50%, lo que indica que la susceptibilidad fúngica varía dependiendo de la cepa a. te c. a. tratar y concentración del tratamiento usado.. Esto concuerda con los resultados obtenidos por Flores y cols., quienes hallaron la. lio. susceptibilidad de Microsporum canis, Trichophyton rubrum y Epidermophyton floccosum a los aceites esenciales de Eucalyptus globulus y otras dos especies vegetales. Bi b. (romero y orégano) haciendo uso de la misma técnica in vitro empleada por este estudio. Los autores afirman que Microsporum canis y Trichophyton rubrum presentaron mayor sensibilidad al aceite de eucalipto que al ketoconazol y a diferencia del presente trabajo, se encontraron halos de inhibición mayores con el aceite al 100%, siendo 38 mm para Trichophyton rubrum y 39 mm para Microsporum canis; las diferencias de los hallazgos podrían deberse a las condiciones ecológicas del lugar de. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 25.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. procedencia de la planta que los autores estudiaron, ya que la obtuvieron de la zona costera de El salvador, a diferencia del usado en esta investigación, que provenía de la sierra Peruana. (15, 16, 17, 21). na. A pesar de no hallarse numerosos informes sobre la susceptibilidad de estos dermatofitos al efecto de E. globulus en particular, varios estudios confirman que la. ici. acción antifúngica no es exclusiva de esta especie. Así lo demuestra el trabajo de. ed. Ameur y cols, en el que se puso a prueba la acción de los aceites esenciales de ocho especies de eucalipto (E. biscostata, E. leucoxylon, E. astringens, E. cinérea, E.. M. sideroxylon, E. lehmannii, E. maidenii y E. odorata) sobre el crecimiento de Trichophyton rubrum y Microsporum canis y se evaluaron. las diferencias en las. de. composiciones químicas de estos, afirmando que todos los aceites tienen una acción. a. antifúngica altamente significativa, entre lo que se resalta la mayor sensibilidad de T.. te c. rubrum al aceite de E. odorata y M. canis, al aceite de E. bicostata. (19). lio. Otro estudio que concuerda con la alta susceptibilidad dermatofítica al aceite, es el realizado por Tolba y cols. donde se evaluó otra especie de eucalipto, el Eucalyptus. Bi b. criadora y su efecto sobre el crecimiento de 4 dermatofitos, entre ellos Trichophyton rubrum y Microsporum canis. Los investigadores usaron de manera similar, el método de difusión de discos, con la diferencia de que éstos fueron embebidos con diferentes volúmenes de aceite al 100% (10, 20 y 30 ul de aceite por disco), encontrando que éste inhibía con éxito el crecimiento de todos los hongos estudiados y que la zona de inhibición aumentaba según mayor sea la cantidad de aceite colocado en el disco. Los. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 26.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. halos de inhibición generados por el disco con 10 ul de aceite fueron mayores que los observados en este trabajo (contra Microsporum canis hallaron un diámetro promedio de 64 mm y contra Trichophyton rubrum, 39 mm); y con los que contenían 20 y 30 ul por disco, la inhibición del crecimiento fue absoluta. Las diferencias se explican por las características del método utilizado, ya que además de poner a prueba distintas dosis de. na. tratamiento, el inóculo sembrado (106 UFC/ml) fue 150 veces menos concentrado que el. ed. ici. usado en este trabajo, además, de incubarse por la mitad del tiempo (7 días). (20). Por otro lado, Bolutari y cols., estudiaron el efecto del aceite esencial de Eucaliptus. M. smithii contra Microsporum canis y Trichophyton rubrum y mediante microscopía de barrido comprobaron las alteraciones morfológicas que produce. Sus resultados. de. concuerdan con los hallados del presente estudio, al afirmar que ambos hongos son. a. altamente susceptibles al aceite, y entre ellos, es más potente contra M. canis; además,. te c. el estudio microscópico demostró que el aceite perjudica la morfología de los hongos, generando la compresión y agrupamiento de las hifas, alterando su forma tubular. lio. original y dándole apariencia de hifas secas y arrugadas. Los autores sugieren que la naturaleza lipofílica del aceite influye en la extravasación de citoplasma de la célula, lo. Bi b. que conduce a su acumulación en las membranas y aumenta la permeabilidad de las células fúngicas, dando lugar a diversos cambios estructurales y bioquímicos que generan el agotamiento de la energía, finalizando con la muerte; esta hipótesis justificaría los hallazgos encontrados en todos los estudios revisados, sin embargo, aún no se ha confirmado. (4). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 27.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Existen autores que postulan que esta capacidad antifúngica del aceite está relacionada con el alto contenido de 1,8-cineol, un compuesto que representa entre el 32- 70% de su volumen;. sin embargo, otras investigaciones han demostrado mediante estudios. comparativos que algunos aceites con menor concentración de este componente pueden. na. presentar mayor efecto fungicida, por lo que su mecanismo de acción es un tema aún. ici. por dilucidar. (19,20). ed. Los estudios revisados apoyan los resultados de esta investigación, demostrando que el aceite esencial de eucalipto es útil para inhibir el crecimiento Microsporum canis y. M. Trichophyton rubrum. Cabe resaltar que a pesar de las limitaciones que este trabajo presenta, al no investigar datos como concentración mínima inhibitoria y mecanismos. de. de acción intervinientes, los resultados encontrados aportan nueva evidencia para el uso. a. del aceite esencial de E. globulus como una alternativa natural, accesible en nuestro. Bi b. lio. dermatofitos.. te c. medio, bajo costo y eficiente para el tratamiento de las infecciones producidas por estos. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 28.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES.  In vitro, Microsporum canis y Trichophyton rubrum son susceptibles al efecto antimicótico del aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) en sus tres concentraciones (100%, 75% y 50%).. na.  Microsporum canis es “sumamente sensible” in vitro (según la escala de. ici. Duraffourd) al efecto antimicótico del aceite esencial de Eucalyptus globulus. ed. (Eucalipto) en sus tres concentraciones (100%, 75% y 50%)..  Trichophyton rubrum es “sumamente sensible” in vitro (según la escala de. M. Duraffourd), al efecto antimicótico del aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) en sus tres concentraciones (100%, 75% y 50%).. de.  Estadísticamente, la susceptibilidad de Microsporum canis a las concentraciones. a. de 100% y 75% y 50% del aceite esencial de Eucalyptus globulus no presentan. te c. diferencias significativas.  Estadísticamente,. la. susceptibilidad. de. Trichophyton. rubrum. a. las. lio. concentraciones de 100% y 75% del aceite esencial de Eucalyptus globulus es. Bi b. significativamente mayor que la susceptibilidad al aceite al 50% de pureza.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 29.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. RECOMENDACIONES.  Se recomienda realizar estudios que utilicen menores concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus, a fin de determinar la concentración mínima inhibitoria contra Microsporum canis y Trichophyton rubrum.. na.  Se recomienda realizar el análisis cuantitativo y cualitativo de la composición. ici. química del aceite esencial de Eucalyptus globulus disponible en el distrito de. ed. Huamachuco..  Se recomienda realizar estudios in vivo, a fin de comprobar la acción. M. antifúngica tópica del aceite esencial de Eucalyptus globulus en animales de. Bi b. lio. te c. a. de. experimentación afectados por Microsporum canis y Trichophyton rubrum.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 30.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Molina D. Aspectos clínicos, diagnósticos y terapéuticos de las dermatofitosis. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2011; 29(3): 33-39. 2. Navarro V, Nogueras F, Romero M. Infecciones por hongos. Toma de cultivos. FMC. na. Curso. 2015; 22(1): 23-7.. ici. 3. Herrero M., Hernández T., García V., Gómez G. Rodríguez V. Infecciones por hongos. ed. en sujetos no inmunocomprometidos. Medicine. 2014; 11(58): 3426-3434. 4. Bolutari B., Zimmermann F., Barros L., Barbosa R. Chemical composition and. M. antifungal activity of essential oil from Eucalyptus smithii against dermatophytes.. de. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2015; 48(6): 746-752. 5. Bejar, Villanueva, Guevara, González, Vergaray, Abanto, Napán, et al. Epidemiología de. a. las dermatomicosis en 30 años de estudio en el Instituto de Medicina Tropical Daniel A. lio. 167-72. te c. Carrión - Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Perú). An Fac med. 2014; 75(2):. 6. Uribe U, Cardona C. Mecanismos de adherencia e invasión de dermatofitos a la piel.. Bi b. Revista Ces Medicina 2013; 27 (1): 67-75. 7. Sandoval N, Arenas R, Giusiano G., García D., Chávez L., Zúniga P. Diagnóstico y tratamiento de dermatofitosis y pitiriasis versicolor. Rev Med Hondur. 2012; 80(2): 6674.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 31.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 8. Organización Mundial de la Salud. Estrategia de la OMS sobre medicina tradicional 2014-2023.. (Ginebra).. 2013.. Disponible. en:. http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/95008/1/9789243506098_spa.pdf. 9. Rendon S, Torres O. Determinación de la actividad antimicótica de las fracciones. na. obtenidas de la cromatografía de columna procedentes del extracto diclorometanico de la goma-resina de Eucalyptus citriodora (eucalipto). Trabajo para optar el grado de. ici. licenciatura en química y farmacia. 2012.. ed. 10. Moreno J, López G. Siche R. Modelación y optimización del proceso de extracción de. M. aceite esencial de eucalipto (Eucalyptus globulus). Scientia Agropecuaria. 2010; 1(2):. de. 147-154.. 11. Rivas M, Oranday C, Verde S. Investigación en plantas de importancia médica. 1 ed.. a. México: Omnia Science Publisher SL; 2016. te c. 12. Forbes A, Sahm F, Trevino A. Diagnóstico microbiológico. 12ed. Madrid: Editorial. lio. médica panamericana; 2007.. 13. Alzamora L, Morales L, Armas L, Fernández G. Medicina Tradicional en el Perú:. Bi b. Actividad Antimicrobiana in vitro de los Aceites Esenciales Extraídos de Algunas Plantas Aromáticas. Anales de la Facultad de Medicina. 2001; 62 (2): 156-161.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 32.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 15. Lima A. Análisis de los rendimientos obtenidos de dos especies de eucalipto trabajados en seco a nivel laboratorio y a nivel planta piloto en la extracción de su aceite esencial. Trabajo de graduación. 2015. 16. Esmail A. The pharmacological and therapeutic importance of Eucalyptus species. na. grown in Iraq. 2017; 7(3): 72-91.. ici. 17. Wong H, Man L, Yu- On W, Ling C, Tai-Wai Y, Ping-Chung L.Kwok-Pui F, et al. Antifungal mode of action of macrocarpal C extracted from Eucalyptus globulus Labill. ed. (Lan An) towards the dermatophyte Trichophyton mentagrophytes. Chin Med. 2015; 34. M. (10): 1-7.. de. 19. Ameur E., Zyed R., Abid Ben S., Samia M., Youssef ben S., Bel Haj S., Mahjoub A., et al. Chemical composition of 8 eucalyptus species' essential oils and the evaluation of. a. their antibacterial, antifungal and antiviral activities. Elaissi et al. BMC Complementary. te c. and Alternative Medicine 2012, 12:81.. 20. Tolba H., Moghrani H, Benelmouffok A.,Kellou D, Maachi R. Essential oil of Algerian. lio. Eucalyptus citriodora: Chemical composition, antifungal activity. Journal de Mycologie. Bi b. Médicale. 2015; 579: 1-6. 21. Determinación de la actividad antifúngica de aceites esenciales extraídos de Lippia graveolens (Orégano), Rosmarinus officinalis (Romero) y Eucalyptus globulus (eucalipto) en Microsporum canis Trichophyton rubrum y Epidermophyton floccosum. Trabajo de graduación. 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 33.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 22. Mehraban F, Omidi T, Fereshteh J. Anti Dermatophyte Activities of Eucalyptus camaldulensis in Comparison with Griseofulvin. Iranian Journal Of Pharmacology & Therapeutics. 2015; 4 (2): 80-83. 23. Gómez M, Crespo E, Martínez P. Dermatofitosis. Piel (Barc). 2016; 31(8): 546-559.. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. calidad de vida. Dermatología CMQ. 2016; 14(4): 318-327.. na. 24. Cobos L, Fierro A, Arellano M, Bonifaz A. La onicomicosis y su influencia en la. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 34.

(35) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. M. I. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 35.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°1 INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”. 1. na FICHA N°.  Microsporum canis. Aceite. 75%. 50%. Terbinafina. ed. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. M. CEPA EVALUADA:. ici. FECHA: 15/02/17. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd. Observación 2 Observación 3 Observación 4. de. a. Sensibilidad límite. Sensibilidad media. Resistente Sumamente sensible. X. 25. X. 25. X. 25. X. 25. X. Bi b. Observación 5. 25. Sensible (>8mm). te c. Observación 1. lio. N° de observación. Medición de los halos de inhibición (mm). Observación 6. 25. X. Observación 7. 25. X. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 25. X. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 36.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”. FICHA N°. Aceite. 50%. 75%. Terbinafina. ed. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. ici.  Microsporum canis. CEPA EVALUADA:. 2. na. FECHA: 15/02/17. Observación 2. 25. Observación 4. Sensibilidad media. Resistente Sumamente sensible. X X. 25. X. 25. X. lio. Observación 3. de. 25. Sensibilidad límite. te c. Observación 1. Sensible (>8mm). a. N° de observación. M. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd Medición de los halos de inhibición (mm). 25. X. 25. X. Observación 7. 25. X. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 25. X. Observación 5. Bi b. Observación 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 37.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”. FICHA N°. Aceite. 75%. 50%. Terbinafina. ed. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. ici.  Microsporum canis. CEPA EVALUADA:. 3. na. FECHA: 15/02/17. Observación 2. 25. Observación 4. Sensibilidad media. Resistente Sumamente sensible. X X. 25. X. 25. X. lio. Observación 3. de. 22. Sensibilidad límite. te c. Observación 1. Sensible (>8mm). a. N° de observación. M. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd Medición de los halos de inhibición (mm). 22. X. 25. X. Observación 7. 22. X. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 25. X. Observación 5. Bi b. Observación 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 38.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”. FICHA N°. Aceite. 75%. 50%. Terbinafina. ed. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. ici.  Microsporum canis. CEPA EVALUADA:. 4. na. FECHA: 15/02/17. Observación 2. 25. Observación 4. Sensibilidad media. Resistente Sumamente sensible. X X. 24. X. 25. X. lio. Observación 3. de. 25. Sensibilidad límite. te c. Observación 1. Sensible (>8mm). a. N° de observación. M. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd Medición de los halos de inhibición (mm). 25. X. 25. X. Observación 7. 25. X. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 25. X. Observación 5. Bi b. Observación 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 39.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”. FICHA N°. Aceite. 75%. 50%. Terbinafina. ed. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. ici.  Microsporum canis. CEPA EVALUADA:. 5. na. FECHA: 15/02/17. Observación 2. 25. Observación 4. Sensibilidad media. Sumamente sensible. X X. 25. X. 23. X. lio. Observación 3. Resistente. de. 25. Sensibilidad límite. te c. Observación 1. Sensible (>8mm). a. N° de observación. M. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd Medición de los halos de inhibición (mm). 24. X. 22. X. Observación 7. 23. X. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 15. Observación 5. Bi b. Observación 6. X. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 40.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”. FICHA N°. Aceite. 50%. 75%. Terbinafina. ed. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. ici.  Microsporum canis. CEPA EVALUADA:. 6. na. FECHA: 15/02/17. Observación 2. 25. Observación 4. Sensibilidad media. Resistente Sumamente sensible. X X. 25. X. 25. X. lio. Observación 3. de. 25. Sensibilidad límite. te c. Observación 1. Sensible (>8mm). a. N° de observación. M. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd Medición de los halos de inhibición (mm). 25. X. 25. X. Observación 7. 25. X. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 25. X. Observación 5. Bi b. Observación 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 41.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”. FICHA N°. Aceite. 75%. 50%. Terbinafina. ed. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. ici.  Microsporum canis. CEPA EVALUADA:. 7. na. FECHA: 15/02/17. Observación 2. 25. Observación 4 Observación 5. Sumamente sensible. X X. 25. X. 25. X. 22. X. 25. X. Bi b. Observación 6. Resistente. Sensibilidad media. lio. Observación 3. de. 15. Sensibilidad límite. te c. Observación 1. Sensible (>8mm). a. N° de observación. M. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd Medición de los halos de inhibición (mm). X. Observación 7. 15. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 25. X. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 42.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)” FICHA N°.  Microsporum canis Aceite. 75%. 50%. Terbinafina. ici. DISCOS: 100%.  Trichophyton rubrum.. ed. CEPA EVALUADA:. 8. na. FECHA: 15/02/17. Clasificación de acuerdo a la escala de Duraffourd. Observación 2. 25. Observación 3. 25. Observación 5. M. Resistente Sumamente sensible. X X X. 25. X. 25. X. lio. Observación 4. Sensibilidad media. de. 25. Sensibilidad límite. te c. Observación 1. Sensible (>8mm). a. N° de observación. Medición de los halos de inhibición (mm). 25. X. 25. X. Observación 8. 25. X. Observación 9. 25. X. Observación 10. 25. X. Observación 6. Bi b. Observación 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 43.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°2 REGISTRO FOTOGRÁFICO. na. A. Elaboración del aceite esencial:. b. Balón contenedor con eucalipto conectado a un refrigerante y un matraz. c. El destilado de las hojas de eucalipto se recogen en un matraz. te c. a. a. Hojas seleccionadas para la destilación. de. M. ed. ici. Destilación por arrastre con vapor de agua. Bi b. lio. Obtención del aceite esencial de eucalipto al 100%. d. El matraz recoge las 2 fases líquidas. e. Se deshecha el agua para la recolección del aceite. f. El aceite de eucalipto es obtenido al 100% y está listo para realizar las diluciones. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 44.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. Preparación de la cepa y prueba de sensibilidad:. M. b. Obtención del inóculo para la dilución. c. Tubos con el inóculo en caldo glucosado son preparados para la siembra. te c. a. de. a. Cepas de M. canis y T. rubrum cultivadas en agar glucosado. ed. ici. na. Preparación del inóculo:. Bi b. lio. Sembrado del inóculo. d. Sembrado del inóculo. e. La siembra se realiza de manera homogénea. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 45.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ed. ici. na. Preparación del método de difusión en discos. g. Discos son embebidos con aceite de eucalipto. h. Los discos se colocan en las placas y se incuban a temperatura ambiente. te c. a. de. M. f. Discos de papel filtro Whatman de 6mm de diámetro. Bi b. lio. Preparación del método de difusión en pozos. i. Se hicieron pozos de 6mm de diámetro. j. Se depositó el fármaco hasta cubrir el nivel del agar. k. Se incubaron a temperatura ambiente. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 46.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. C. Lectura de resultados:. de. M. ed. ici. na. Se realiza la inspección visual y medición de los halos de inhibición en mm.. T. rubrum y aceite esencial de Eucalyptus globulus al 100%. Bi b. lio. te c. a. M. canis y aceite esencial de Eucalyptus globulus al 50%. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 47.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°3 CONSTANCIA DE ASESORÍA. Yo, ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO, en mi calidad de docente de la. na. Sección de Microbiología Médica del Departamento de Ciencias Básicas de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, con N° Código de. ici. docente: 3147, deja constancia de haber asesorado el proyecto de investigación. ed. titulado: “Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”, cuya. M. autora es: Andrea Noelia Rafael Horna, alumna de la Escuela académico profesional. Matrícula: 10218010-12. Trujillo, 21 de Noviembre del 2017. Bi b. lio. te c. a. Doy fe de lo expresado.. de. de Medicina de la Facultad de Medicina – UNT, identificada con el N° de. ________________________________________ Dra. ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO N° Código de docente - UNT: 3147. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 48.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°4 CONSTANCIA DE REVISIÓN DE INFORME FINAL DE TESIS. P.I.B – MED.127-016. na. Trujillo, 21 de Noviembre del 2017 Por la presente yo, Dra. Elva Manuela Mejía Delgado ,Profesora Principal del. ici. Departamento de Ciencias Básicas y Microbiología de la Facultad de Medicina de medicina. ed. de la Universidad Nacional de Trujillo, con el Código Docente – UNT: 3147, asesora de la tesis: Susceptibilidad antimicótica in vitro de Microsporum canis y Trichophyton rubrum al. M. aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)”, cuya autora es Andrea Noelia Rafael. de. Horna, identificada con DNI: 47482292, carnet universitario N° 1021801012, alumna de la Escuela de Medicina de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo,. a. dejo constancia de que he revisado esta tesis y de que el informe final se encuentra. Se expide el presente, a solicitud del interesado para los fines que crea conveniente.. Bi b. lio. sustentación.. te c. terminado, por lo cual la autora se halla en condiciones de iniciar el proceso para su. Dra. Elva Manuela Mejía Delgado CÓDIGO DOCENTE: 3147. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 49.

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