Validación del método analítico para la cuantificación de hierro sérico, en el laboratorio quintanilla s r l ”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y. Q. UI M. IC A. BIOQUÍMICA. BI. O. “VALIDACIÓN DEL MÉTODO ANALÍTICO PARA LA. Y. CUANTIFICACIÓN DE HIERRO SÉRICO, EN EL LABORATORIO. RM. AC. IA. QUINTANILLA S.R.L.”. FA. INFORME DE INTERNADO REALIZADO EN EL AREA DE:. CA. DE. BIOQUIMICA DEL LABORATORIO QUINTANILLA S.R.L.. QUIMICO FARMACEUTICO. BI BL. IO. TE. PARA OPTAR EL TITULO DE:. AUTOR. :. Br. MONCADA WUTON, EDUARDO JUNIOR. ASESOR. :. Dr. Q.F. PEDRO ALVA PLASENCIA. TRUJILLO - PERÚ 2010. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A nuestro Dios Todopoderoso, por darnos el don de la vida y por ser Él, la inspiración y la fuerza que nos hace superar. IC A. los obstáculos de la vida y ser mejores día a día…. UI M. A mis padres, Segundo y Juana, quienes gracias a su sacrificio,. Q. consejos y amor, inculcaron en mi el hábito de estudio,. AC. IA. Y. BI. O. responsabilidad y deseo de superación…. RM. A mis hermanos, por su cariño y comprensión,. TE. CA. DE. FA. y por motivarme a ser un ejemplo a seguir para ellos…. IO. A mi tutora de internado, Dra. Judith Castro. BI BL. y a todo el personal que labora dentro del Laboratorio Quintanilla, por ser buenos amigos y por apoyarme en la realización del presente trabajo de investigación…. A mis queridos profesores, por su gran carisma y ejemplo, y a mis compañeros, gracias por su amistad, apoyo, comprensión y por los gratos momentos vividos durante mi vida universitaria…. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO EVALUADOR. (PRESIDENTE). IC A. MsC. Q.F. Jesús Gallardo Meléndez. (MIEMBRO). UI M. Dr. Q. F. Pedro Alva Plasencia. (MIEMBRO). BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. MsC. Q.F. Yuri Curo Vallejos. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACION. Señores miembros del Jurado:. De conformidad con las disposiciones legales y dando cumplimiento a las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y. IC A. Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestra consideración y. MÉTODO. ANALÍTICO. PARA. LA. BI. DEL. O. “VALIDACIÓN. Q. UI M. elevado criterio científico el presente Informe de Internado intitulado:. IA. Y. CUANTIFICACIÓN DE HIERRO SÉRICO, EN EL LABORATORIO. RM. AC. QUINTANILLA S.R.L.”. FA. Es propicia la oportunidad para manifestar mi sincero agradecimiento a los docentes de. DE. la Facultad de Farmacia y Bioquímica, que con su capacidad y buena voluntad. IO. TE. CA. contribuyeron a mi formación profesional.. BI BL. En consecuencia, Señores Miembros del Jurado dejo a vuestro criterio la calificación del presente Informe de Internado, esperando sea de interés y gran utilidad para nuestra facultad.. Trujillo, Octubre del 2010. ________________________ Br. Moncada Wuton, Eduardo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. Se realizó la validación del método analítico para la cuantificación de Hierro Sérico, en el Laboratorio Quintanilla S.R.L. Los parámetros validados fueron: Linealidad, precisión, exactitud, límite de detección, límite de cuantificación y robustez; que corresponden a una validación tipo I, según la USP XXII. Se demostró que el método es. IC A. lineal, al obtenerse un coeficiente de correlación r = 0.996646 y un coeficiente de. UI M. determinación r2= 0.993303, y al aplicársele el test estadístico de linealidad (t de. Q. Student), se obtuvo un t experimental mayor a t de tablas (43.910164 > 2.16). El método. BI. O. demostró precisión tanto para el ensayo de repetibilidad (C.V: 0.9148%) como para la. Y. precisión intermedia (C.V: 1.0959%). El método demostró exactitud al evaluarse el test. AC. IA. G de Cochran, obteniéndose un G experimental menor que el G de tablas (0.6443 <. RM. 0.871), y de igual modo para el análisis de t Student, obteniéndose un t experimental. FA. menor al t de tablas (1.370 < 2.306). Se determinó un límite de detección de 0.929. DE. ug/dL y un límite de cuantificación de 3.096 ug/dL. Finalmente, el ensayo de robustez. CA. demostró que no existe variación significativa de los resultados por el cambio. BI BL. usadas.. IO. TE. temperatura, de analistas y por el uso de puntas para micropipetas tanto nuevas como. Palabras clave: Validación, método analítico, linealidad, precisión, exactitud, límite de detección, límite de cuantificación, robustez, test estadístico, coeficiente de variación.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. Validation test of analytical method for quantification of serum iron in Quintanilla SRL Laboratory, was done. The parameters validated were linearity, precision, accuracy, limit of detection, limit of quantification and robustness, correspond to a validation type I, according to the USP XXII. It shown that the method is linear, by obtaining a. IC A. correlation coefficient r = 0.996646 and a coefficient of determination r2 = 0.993303,. UI M. and be caught by statistical test of linearity (t Student test), we obtained a t experimental. Q. greater than t table (43.910164 > 2.16). The method proved accurate for both the test. BI. O. repeatability (CV: 0.9148%) and intermediate precision (CV: 1.0959%). The method. Y. proved accurate when assessing Cochran G test, obtaining a G experimental lower than. AC. IA. the G tables (0.6443 < 0.871), and similarly for the Student t analysis, obtaining a t. RM. experimental lower than t table (1,370 < 2306). Was found a detection limit of 0,929. FA. ug/dL and a quantification limit of 3,096 ug/dL. Finally, the robustness test showed no. DE. significant variation in results by temperature change, analysts and the use of. BI BL. IO. TE. CA. micropipette tips new and used.. Keywords: validation, analytical method, linearity, precision, accuracy, limit of detection, limit of quantification, robustness, statistical tests, coefficient of variation.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. PAGINAS PRELIMINARES. Pág.. i. Jurado Evaluador…………………………………………………………. ii. Presentación………………………………………………………………. iii. Resumen………………………………………………………………….. iv. IC A. Dedicatoria.………………………………………………………………. v. I. INTRODUCCION……………………………………………………... 1. Y. BI. O. Q. UI M. Abstract…………………………………………………………………... 6. AC. IA. II. MATERIAL Y METODO……………………………………………. 21. FA. RM. III. RESULTADOS …………………………………………………….... DE. IV. DISCUSION………………………………………………………….. TE. CA. V. CONCLUSIONES…………………………………………………….. BI BL. IO. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS……………..…………….…. ANEXOS.………………………………………………………………..... 28. 33. 34. 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCION. El hierro, elemento imprescindible para la salud, es un constituyente esencial de la. IC A. hemoglobina, mioglobina, transferrina, ferritina, y es fundamental para el transporte de. UI M. oxígeno a los tejidos, para la conservación de los sistemas enzimáticos oxidativos de las. O. Q. células y para la eritropoyesis, manteniendo activa la reserva de células progenitoras. IA. Y. BI. sanguíneas y estimulando su diferenciación 1.. RM. AC. La absorción del hierro es más fácil cuando se encuentra en estado ferroso (Fe2+); sin. FA. embargo, la mayor parte del hierro dietético se encuentra en estado férrico (Fe3+). En el. DE. estómago se absorben solo trazas de hierro, pero las secreciones gástricas lo disuelven y. CA. permiten la formación de complejos solubles con el ácido ascórbico y otras sustancias,. TE. que ayudan a su reducción al estado Fe2+. En esta forma, se absorbe casi totalmente en. BI BL. IO. la parte superior del intestino delgado 2.. El transporte de hierro de un órgano a otro se realiza mediante una proteína transportadora llamada apotransferrina. El complejo que forma con el hierro se conoce como transferrina. La ferritina, localizada en casi todas las células del cuerpo, constituye una reserva de hierro disponible para la formación de la hemoglobina y otras proteínas que contienen el grupo hemo. Tanto la ferritina como la transferrina están presentes en las células de la mucosa intestinal y juntas regulan la absorción de hierro 3.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El valor normal de la sideremia oscila entre 50 y 150 mg/dL. Disminuye en la anemia ferropénica, así como en todos los estados de ferropenia, en infecciones y neoplasias (excepto en la hepatitis aguda y neoplasias hepáticas, en que es normal o elevada), en la policitemia vera, hipoproteinemias intensas y hemosiderosis pulmonar idiopática. Por el contrario, está aumentada en la hemocromatosis idiopática, las hemosiderosis secundarias, las anemias sideroacrésticas e hipoplásicas, así como en la mayoría de las. IC A. hemolíticas, en la anemia perniciosa, la hepatitis aguda, algunas hepatopatías crónicas y. Q. UI M. neoplasias hepáticas, sobrecargas orales y parenterales de hierro y en el alcoholismo 4.. BI. O. La anemia por pérdida de hierro representa uno de los trastornos orgánicos más. Y. frecuentes, especialmente en niños, mujeres jóvenes, embarazadas y ancianos, de ahí. AC. IA. que la correcta determinación de la sideremia en el laboratorio clínico es de suma. FA. RM. importancia.. DE. Uno de los métodos analíticos para cuantificar hierro en sangre es el utilizado por el. CA. laboratorio Wienner S.A.C., que se fundamenta en la liberación del hierro de la unión. IO. TE. con su proteína transportadora específica, la transferrina, en buffer acetato pH 4,5 y. BI BL. convertido del estado Fe3+ a Fe2+ en presencia de un reductor, el ácido ascórbico. Posteriormente este Fe2+ reacciona con un reactivo de color, piridil bis-fenil triazina sulfonato (ferrozina) dando un complejo color magenta, que se mide a 560 nm 3.. La finalidad de un laboratorio es producir información (datos) relevantes, confiables y adecuados para su finalidad o propósito perseguido ya que muchas de las decisiones que se toman están basadas en la información que estos resultados proporcionan. Estos datos deben ser obtenidos con técnicas analíticas confiables, precisas y adecuadas para su fin.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esto, que parece obvio, no es tan fácil de lograr en la realidad, como se ha demostrado en múltiples estudios entre laboratorios, que muestran que laboratorios diferentes, utilizando una misma metodología analítica y personal experimentado, analizando una misma muestra, obtienen resultados con una amplia variabilidad 3, 5.. Un laboratorio clínico, está en la obligación de implementar el aseguramiento de la. IC A. calidad en todas las etapas del trabajo llámese estas: pre-analítica, analítica y post-. UI M. analítica. De los datos registrados el laboratorio puede registrar tendencias,. Q. principalmente si emplea técnicas estadísticas para analizar resultados. Para lograr el. BI. O. aseguramiento de la calidad, el laboratorio debe disponer de procedimientos de control. Y. para comprobar la validez de sus actividades, especialmente las del ensayo. La. AC. IA. validación de los métodos junto a otras actividades englobadas en el control del. RM. aseguramiento de la calidad, permite demostrar a los laboratorios que sus métodos. DE. FA. analíticos proporcionan resultados fiables 6, 7, 8.. CA. Validación es el establecimiento de evidencia documentada que un procedimiento. IO. TE. analítico conducirá, con un alto grado de seguridad a la obtención de resultados precisos. BI BL. y exactos dentro de las especificaciones y los atributos de calidad previamente establecidos, satisfaciendo los requisitos para la aplicación práctica deseada 9, 10, 11.. Según la norma ISO/IEC 17025, los laboratorios deben validar todos los métodos que se utilicen en el laboratorio, tanto los desarrollados por ellos mismos como aquellos procedentes de fuentes bibliográficas o desarrollados por otros laboratorios. Además, también es necesario que el laboratorio valide los métodos de referencia aunque, en este caso, no es necesario que el laboratorio realice una validación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. completa. Asimismo, el laboratorio debe validar todo el procedimiento analítico teniendo en cuenta el intervalo de concentraciones y de matrices de las muestras de rutina. Como los procesos en un laboratorio son complejos y tienen muchas posibilidades de sufrir variaciones que pueden afectar la veracidad del un resultado, la validación de un proceso debe establecer, mediante estudios sistemáticos los rangos de esas variaciones con parámetros como la reproducibilidad sensibilidad, especificidad,. UI M. IC A. límites de detección o cuantificación, etc. 10, 12.. Q. La validación proporciona un alto grado de confianza y seguridad del método analítico. BI. O. y se realiza con carácter obligatorio cuando se desarrolla un nuevo procedimiento, ya. Y. que permite asegurar que el método propuesto hace lo que tiene que hacer. Es necesario. AC. IA. señalar que los métodos descritos en textos oficiales se consideran validados, aunque. RM. debe aclararse que ellos se refieren solamente a métodos generales y a materias primas.. FA. Estos no precisan de validación, aunque deben ser comprobados antes de su utilización. DE. rutinaria con la verificación de la idoneidad en las condiciones de laboratorio. Sin. CA. embargo, para la determinación de analitos en suero, que pueden variar su composición. BI BL. analítico 12, 13.. IO. TE. cualitativa o cuantitativa, habrá que proceder en cada caso a la validación del método. El hecho de contar con los procesos validados no sólo significa para el laboratorio clínico emitir resultados exactos y precisos que permitan garantizar seguridad y confianza por parte del paciente y el galeno, sino también significa un valioso ahorro en tiempo y dinero, por cuanto se hace menos necesario la repetición o verificación de un determinado resultado. Además, la colaboración y capacitación del personal técnico y profesional también es de suma importancia, ya que incide en forma directa en el procedimiento realizado. Por esta. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. razón, el personal debe estar debidamente entrenado y conciente que tras su trabajo se esgrime una gran responsabilidad 14.. Por lo anteriormente mencionado; el Químico Farmacéutico, dentro del área del laboratorio clínico, es un profesional altamente capacitado para la realización de ensayos de validación y es conocedor de la importancia de éstos dentro del Sistema de. IC A. Gestión de Calidad. Es por esto que se realizó el presente trabajo de investigación; para. Q. UI M. lo cual se planteó la siguiente interrogante:. BI. O. ¿El método analítico para la cuantificación de Hierro Sérico empleado en el Laboratorio. Y. Quintanilla S.R.L. cumplirá con los parámetros de validación requeridos?. RM. AC. IA. Los objetivos a alcanzar fueron:. FA.  Validar el método para la cuantificación de Hierro Sérico utilizando el kit de. TE. CA. Quintanilla S.R.L.. DE. reactivos Wiener Lab. empleado en el área de Bioquímica del Laboratorio. BI BL. IO.  Verificar la linealidad, exactitud, precisión, límite de detección y de cuantificación, y robustez del método; mediante un ensayo experimental en las condiciones particulares del laboratorio.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y METODOS. 2.1. MATERIAL. IC A. 2.1.1. Muestra:. UI M.  Standard Fer Color AA (100ug/dL). BI. O. Q.  Matriz: Agua bidestilada. Y. 2.1.2. Material de Laboratorio. AC. IA.  Micropipetas de 100, 200 y 1000 uL.. RM.  Puntas graduadas nuevas y usadas. FA.  Épendors (viales graduados). DE.  Termómetro ambiental. CA.  Agua desionizada. IO. TE.  Agua bidestilada. BI BL.  Papel Toalla  Cronómetro  Calculadora  Tubos de Vidrio  Guantes descartables  Frascos color ámbar. 2.1.3. Equipos. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Fotómetro BPC BioSed. Modelo o tipo: Prime/G N° de Serie: 022346. 2.1.4. Reactivos : Fer Color AA. Fabricante. : Wiener Lab (Argentina). Lote. : 1492003. Vencimiento. : Agosto 2011. BI. O. Q. UI M. IC A. Nombre. Reactivo A. : Solución de acetato 150 mmol/L para pH 4,5,. . Reactivo C. . Standard. : Acido ascórbico.. FA. Reactivo B. : Solución estabilizada de ferrozina 0.2mmol/L. : Solución de iones Fe3+ equivalente a 100ug/dL.. IO. TE. CA. DE. . RM. conteniendo guanidina.. AC. . IA. Y. Contenido del Kit de Reactivos:. BI BL. Instrucciones Para su Uso: . Reactivo C. : Listo para usar.. . Standard. : Listo para usar.. . Reactivo de Trabajo: Transferir al vial de Reactivo B la cantidad de Reactivo A indicada en el rótulo (20mL). Colocar fecha de preparación.. Conservación de los Reactivos:. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Reactivos Provistos. : Son estables a temperatura ambiente. (<25°C) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. . Reactivo de Trabajo. : Es estable durante 3 meses a partir de la. fecha de su preparación conservado en refrigerador (2-10°C) o 10 días a temperatura ambiente (18-25°C).. IC A. 2.2. MÉTODO. UI M. 2.2.1. Requisitos Previos a la Validación 15, 16:. O. BI. cumplimiento de los requisitos siguientes:. Q. Para garantizar la confiabilidad de los resultados se aseguró el. Y.  Calificación del personal en el uso de los métodos a validar.. AC. IA.  Calibración de los instrumentos de medición.. FA. RM.  Observación de las medidas de bioseguridad.. DE. 2.2.2. Desarrollo de los Parámetros Evaluados para la Validación del. CA. Método 7, 9, 11, 17, 18 :. IO. TE. Para la validación del método analítico utilizado en la determinación de. BI BL. Hierro Sérico, se tomaron los parámetros adecuados según criterios de validación que aparecen reportados en la USP. Según la USP XXIX, los métodos analíticos se clasifican en varias categorías para su validación. Los métodos que son objetos de estudio en el presente trabajo pertenecen a la categoría I y se clasifican como “Métodos Cuantitativos para la determinación de un Analito”. Los parámetros de validación que se deben considerar varían según la literatura. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. consultada para este tipo de métodos deben evaluarse los siguientes parámetros:. 2.2.2.1. Linealidad: Es la capacidad del método analítico para obtener resultados directamente proporcionales a la concentración o cantidad del. IC A. analito en un rango definido. Se determina mediante el. UI M. tratamiento matemático de los resultados; a diferentes cantidades. Q. o concentraciones del analito.. BI. O. Para evaluar la linealidad se hará uso del Standard Fer Color AA,. Y. de concentración 100 ug/dL, del cual se realizará diluciones con. IA. cuyas concentraciones serán: 80 ug/dL, 60. AC. agua bidestilada,. RM. ug/dL, 40 ug/dL y 20 ug/dL; las cuales serán analizadas por. DE. FA. triplicado y por un mismo analista.. CA. 2.2.2.2. Precisión:. IO. TE. Refleja la medida en que los valores de una serie repetida de. BI BL. ensayos analíticos que se realizan sobre una muestra homogénea, son semejantes entre sí. Para determinar la precisión del método, se tomaron en cuenta 2 parámetros: Repetitibilidad y Precisión Intermedia, que a continuación se detalla..  Repetibilidad: Para su cálculo se realizarán un número de 10 determinaciones de la dilución de 80 ug/dL, por un mismo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. analista, el mismo día, con los mismos instrumentos de medición..  Precisión Intermedia: Para su determinación se empleará la dilución de 80 ug/dL, el cual se analizará en dos días diferentes, por dos analistas en un número de tres. UI M. IC A. determinaciones, por analista y por día.. Q. 2.2.2.3. Exactitud:. BI. O. Se refiere a cuán cerca del valor real (material de referencia. Y. certificado o estándar de una farmacopea) se encuentra el valor. AC. IA. medido. En términos estadísticos, la exactitud está relacionada. RM. con el sesgo de una estimación. Cuanto menor es el sesgo más. FA. exacta es una estimación.. DE. Se evaluará, a través del análisis repetitivo de 3 concentraciones:. CA. 80 ug/dL, 60 ug/dL y 40 ug/dL. El análisis de cada una de estas. BI BL. IO. TE. diluciones se llevará a cabo por triplicado.. 2.2.2.4. Limite de Detección y Limite de Cuantificación:  Límite de Detección: Cantidad más pequeña de analito en una muestra que puede ser detectada por una única medición, con. un. nivel. de. confianza. determinado,. pero. no. necesariamente cuantificada con un valor exacto.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Límite de Cuantificación: Cantidad más pequeña del analito en una muestra que puede ser cuantitativamente determinada con exactitud aceptable. Se usa particularmente para cuantificar impurezas y productos de degradación. Para determinar estos parámetros se realizará el análisis repetitivo de un blanco. El blanco utilizado será el Reactivo Fer Color AA y. UI M. IC A. se llevarán a cabo 10 determinaciones.. Q. 2.2.2.5. Robustez:. BI. O. La Robustez se determinará de acuerdo al diseño de Youden &. Y. Steiner, a una concentración del estándar de 80 ug/dL, siendo las. AC. IA. variables evaluadas: Analistas (2), Uso de Puntas (nuevas y. FA. RM. usadas) y Temperatura de Trabajo (21°C y 30°C).. DE. Cada una de las determinaciones a realizar se efectuará empleando la. CA. técnica descrita en el inserto del kit de reactivos de la marca provista por. BI BL. IO. TE. el fabricante Wienner Lab., el cual se describe a continuación:. 2.2.3. Condiciones de Reacción 3:  Longitud de onda. : 560 nm en espectrofotómetro o 540-560. nm en fotocolorímetro con filtro verde.  Temperatura de reacción : Temperatura ambiente (<25°C).  Tiempo de reacción. : 5 minutos.  Volumen de muestra. : 200 uL.  Volumen total de reacción: 1,4 mL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.4. Procedimiento 3: En 2 tubos marcados B (blanco) y D (desconocido), colocar:. Agua Bidestilada. B. D. 200uL. -. -. 200uL. 1mL. 1mL. 200uL. 200uL. Muestra Rvo. de Trabajo. IC A. Reactivo C. UI M. Mezclar inmediatamente. Volver a leer cada tubo a los 5 minutos, llevando. Q. el aparato a cero con agua. Corregir las lecturas de la muestra, restándole el. Y. BI. O. valor del blanco correspondiente.. AC. IA. 2.3. Análisis Estadístico 7, 19, 20, 21, 22. RM. 2.3.1. Linealidad:. FA. 2.3.1.1. Cálculos de los parámetros de regresión:. DE. a) Ecuación de la recta de regresión:. CA. Con los datos obtenidos en este ensayo se procedió a elaborar. BI BL. IO. TE. la recta de regresión, la cual tuvo la siguiente fórmula:. y  bx  a. Donde: y= lecturas obtenidas a partir de estándar x= concentración de las muestras utilizadas b= pendiente de la recta de regresión a= intercepto de la recta de regresión con el eje de ordenadas. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b) Fórmula. empleada. para. calcular. la. pendiente. o. coeficiente de regresión (b) La pendiente o coeficiente de regresión fue determinada empleando la siguiente fórmula:. b.  x y.  xy. 2. n. UI M. IC A. x. n ( x ) 2. Q. Donde:. BI. O. x = concentración de las muestras utilizadas. Y. y= lecturas obtenidas. RM. AC. IA. n = número de determinaciones. FA. c) Fórmula empleada para el cálculo del intercepto (a):.  y  b x n. CA. DE. a . BI BL. IO. TE. d) Fórmula empleada para el calculo del coeficiente de correlación (r):. r.   x2   .  xy  x .  x y. 2. n. n 2    y 2  ( y )   n  . e) Fórmula empelada para el cálculo del coeficiente determinación (r2) r2= (r)2 Criterio de aceptación: r2 ≥ 0.990. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.1.2. Cálculos efectuados en el test de linealidad de la pendiente b a) Cálculo del test de regresión (t de student) para el coeficiente de correlación Se calcula el valor de regresión (test de regresión) con n-2 grados de libertad y un intervalo de confianza de 95% (α= 0.005), luego se compara con el valor de la ttabla (ttabulado) para. UI M. r (n  2) (1  r 2 ). BI. O. Q. tregresión . IC A. el nivel de confianza requerido.. Y. Donde:. AC. IA. n= número de determinaciones. RM. r= coeficiente de correlación. DE. FA. b) Cálculo del valor de la varianza residual (S2 x,y). y . 2.  a y  b xy n2. CA. s. 2 x, y. BI BL. IO. TE. Donde: b= pendiente de la recta de regresión a= intercepto con el eje de abscisas n= nº de determinaciones. c) Cálculo del valor de la varianza de la pendiente b( S b2 ) S b2 . S x2, y. x. 2. . ( x) 2 n. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. d) Cálculo del valor de la desviación estándar de la pendiente b (Sb) Se obtuvo a partir del valor de la varianza de la pendiente b.. Sb . S b2. e) Fórmula empleada para determinar el intervalo de. UI M. I.C. = b ± tsb. IC A. confianza de la pendiente:. Donde:. O. Q. b: pendiente de la recta de regresión. Y. BI. t: ttab para un nivel de significancia del 95% y n-2 grados de. AC. IA. libertad. FA. RM. Sb: desviación estándar de la pendiente b. Cálculo del valor de texp:. DE. f). texp=. b Sb. BI BL. IO. TE. CA. Se determinó empleando la siguiente fórmula. Donde: b: pendiente de la recta de regresión Sb: desviación estándar de la pendiente b. 2.3.1.3. Cálculos efectuados en el test de proporcionalidad a) Cálculo de la varianza del término independiente ( S a2 ). S. 2 a.  S. 2 b. x .. 2. n. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b) Fórmula. empleada. para. determinar. la. desviación. estándar del término independiente:. Sa . S a2. c) Fórmula empleada para determinar el intervalo de confianza del intercepto a:. IC A. Int. Conf. = a ± tsa. UI M. Donde: a: intercepto. BI. O. Q. t: ttab para un nivel de significancia del 95% y n-2 grados de. Y. libertad.. RM. AC. IA. Sa: desviación estándar del intercepto a. FA. El método será lineal si texp es mayor al ttab con el 95% de confianza y n-2 grados. TE. 2.3.2. Precisión. CA. DE. de libertad y el coeficiente de correlación (r) es igual o mayor que 0.995.. BI BL. IO. 2.3.2.1. Repetibilidad a) Determinación de la media Se utilizó la siguiente fórmula: n. x .  xi i 1. n. Donde:. x = media n = número de determinaciones. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b) Determinación de la desviación estándar (s) Se utilizó la siguiente fórmula: n. . s. i 1. ( xi  x ) 2 n 1. c) Determinación del coeficiente de variación:. IC A. Se utilizó la fórmula descrita a continuación. UI M. Y. BI. O. Q. CV=. s * 100 x. IA. Donde:. DE. FA. x = media. RM. AC. S= desviación estándar. CA. d) Determinación del porcentaje de recuperación:. BI BL. IO. TE. Se utilizó la fórmula descrita a continuación %R=. CC. Pr áctica x100 CC.Teórica. Donde: CC: concentración. 2.3.2.2. Precisión Intermedia Los valores de concentración prácticas, de la media de desviación estándar y coeficiente de variación se obtuvieron de manera idéntica que el ensayo de Repetitibilidad.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El método será Preciso si en los ensayos de Repetitibilidad y Precisión Intermedia se obtienen coeficientes de variación menores al 2%.. 2.3.3. Exactitud 2.3.3.1. Cálculo del % de recuperación En la determinación de la exactitud del método los valores de las. IC A. concentraciones se expresan como % de recuperación de la. Q. CC. práctica x100 CC.teórica.  x. Y. n. i 1. AC. IA. S2 . BI. O. % R. UI M. siguiente forma:. i.  x. 2. n 1. RM. Desviación s tan dar x100 media (%) recuperación. DE. FA. C.V . . CA. 2.3.3.2. Cálculos efectuados en la aplicación de la t de Student. IO. TE. Para la aplicación de esta prueba fue necesaria la determinación. BI BL. del valor de texp mediante la siguiente fórmula:. texp . 100  % R CV .. n. Donde: %R = valor del promedio de los % de recuperación N. = nº de determinaciones. CV = coeficiente de variación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El método será Exacto si el valor de ttab es mayor que el texp, al 95% de confianza y n-1 grados de libertad en la aplicación del test de Student.. 2.3.4. Limite de Cuantificación y Detección Se obtuvo mediante la aplicación de la siguiente fórmula:. K  S bl b.. K  Sbl b.. IC A. CLQ . UI M. C LD . Q. Donde:. BI. O. CLD = Límite de Detección.. Y. CLQ = Limite de Cuantificación. IA. = Constante (3 para el límite de detección y 10 para el límite de. AC. K. 2.3.5. Robustez:. DE. FA. = pendiente obtenida en el test de linealidad. CA. b. RM. cuantificación). IO. TE. Se empleo el diseño de Youden & Steiner, el cual se muestra en el. BI BL. siguiente esquema. Factor/. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. A/a. A. A. A. A. a. a. a. a. B/b. B. B. b. b. B. B. b. B. C/c. C. c. C. c. C. c. C. C. Resultados. s. t. u. v. w. x. y. z. Prueba. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Siendo: A = Temperatura de trabajo (ambiente): 21°C a = Temperatura de trabajo (ambiente): 30°C B = Analista 1 b = Analista 2 C = Puntas nuevas. IC A. c = Puntas usadas. Q. UI M. s,t,u,v,w,x,y,z = Determinación de Hierro sérico para cada prueba.. BI. O. A continuación se procedió a determinar las diferencias para cada factor,. Y. empleando la formula siguiente.. AC. IA. VA = ¼ (s+t+u+v) - (w+x+y+z). RM. VB = ¼ (s+t+w+x) - (u+v+y+z). DE. FA. VC = ¼ (s+u+w+y) - (t+v+x+z). CA. Donde:. IO. TE. VA, VB, VC = Valor de las diferencias existentes entre las variables. BI BL. estudiadas.. Si |VX| < S. 2 ; la diferencia no es significativa y el método será. robusto para esa variable (s = desviación estándar hallada en el test de repetibilidad).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. Cuadro 1: Parámetros de regresión lineal obtenidos en el ensayo de Linealidad, para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico.. Especificación. Pendiente b. 0.001301. --. Intercepto a. - 0.014123. --. y = 0.001301x - 0.014123. --. Coeficiente de Correlación (r). 0.996646. > 0.995. Coeficiente de Determinación (r2). 0.993303. ≥ 0.990. IA. Y. BI. O. Q. Ecuación de la Recta. IC A. Resultado. UI M. Parámetros de Regresión. AC. Cuadro 2: Parámetros del Test de Linealidad de la Pendiente (b), obtenidos en el. FA. RM. ensayo de Linealidad, para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico. Parámetros del Test de Linealidad de la. Resultado. DE. Pendiente. TE. CA. Varianza Residual ( s 2y , x ). IO. Varianza de la Pendiente ( S 2b ). BI BL. Desviación Estándar de la Pendiente ( S b ) Intervalo de Confianza de la Pendiente Prueba t-Student. 0.000011 0.000030 8.78083 E-10 Superior  0.001365 Inferior  0.001237 43.910164 >> 2.16 (13; 0.05). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 3: Parámetros del Test de Proporcionalidad, obtenidos en ensayo de Linealidad, para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico.. Parámetros del Test de. Resultado. Especificación. 3.86357 E-06. --. 0.001966. --. Superior  - 0.009878. Rango incluya. Inferior  - 0.018369. al 0. Proporcionalidad Varianza del Intercepto ( S a2 ) Desviación Estándar del Intercepto ( Sa ). BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Intervalo de Confianza del Intercepto. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gráfico 1: Recta de regresión obtenida en el ensayo de Linealidad, para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico.. IC. A. LINEALIDAD. y = 0.0013x - 0.0141. UI. M. ABSORBANCIA. R 2 = 0.9933. O. Q. 0.1400. Y. BI. 0.1200. AC IA. 0.1000. FA RM. 0.0800 0.0600. TE CA. DE. 0.0400. 0.00. 20.00. BI B. 0.0000. LI O. 0.0200. 40.00. 60.00. 80.00. CONCENTRACION TEORICA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 100.00. 120.00.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 4: Valores individuales y estadística descriptiva del ensayo de Repetibilidad, para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico.. Concentración. Concentraciones. Teórica. Prácticas (ug / dL ) 82.17 79.79 81.10. IC A. 80.64. UI M. 80.79. 80 ug / dL. Q. 79.56. FA. Media. RM. Nº de análisis. AC. IA. Y. BI. O. 80.87. CA. DE. Desviación Estándar. IO. TE. Intervalos de confianza individual. BI BL. Intervalos de confianza de la media C.V. (aceptación  2%). 81.10 80.95 80.25 10 80.72. 0.738448 Superior  82.39 Inferior  79.05 Superior  81.44 Inferior  80.01 0.9148 %. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 5: Valores individuales y estadística descriptiva del ensayo de Precisión Intermedia, para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico.. Concentración. Nº de Muestra. ug/dL. 1 Analista 1. 78.79. 2. 78.56. 3. 78.95. Día 1. 78.10. 2. 77.95. UI M. Analista 2. IC A. 1. Q. 3. BI. 2. 79.64. IA. 3. Día 2. CA. IO. TE. Desviación Estándar Intervalos de confianza individual. BI BL. 79.56. 3. Media. Intervalos de confianza de la media C.V. (aceptación  2%). 79.18. 2. DE. FA. RM. AC. 1. Analista 2. 80.95 79.87. Y. Analista 1. O. 1. 78.49. 79.95 79.16 0.8675 Superior  81.12 Inferior  77.21 Superior  79.81 Inferior  78.52 1.0959%. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 6: Porcentaje de recuperación promedio, Test de Cochran y Prueba t-Student aplicada durante el ensayo de Exactitud para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico.. Concentración ug / dL. % de. Test de Cochran. Recuperación. (aceptación Gexp <. Promedio. Gtabla(0.05;3;3). 100.7663. 0.6443 < 0.871(0.05;3;3). t - Student. 100 1.370 < 2.306(0.05;8). IC A. 80. BI. O. Q. UI M. 60. IA. Y. Cuadro 7: Valores de los Límites de Detección y Cuantificación para la determinación. RM. AC. cuantitativa de Hierro Sérico.. FA. Limite de Detección. 3.096 ug/dL. BI BL. IO. TE. CA. DE. Limite de Cuantificación. 0.929 ug/dL. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 8: Valores para la determinación de la Robustez para la determinación cuantitativa de Hierro Sérico.. Temperatura del. Factor / Ensayo. Área. Analista. Puntas. Absorbancia. 21 ºC. Analista 1. Puntas 1. 0.0884. 2. 21 ºC. Analista 1. Puntas 2. 0.0902. 3. 21 ºC. Analista 2. Puntas 1. 0.0876. 4. 21 ºC. Analista 2. Puntas 2. 0.0894. 5. 30 ºC. Analista 1. Puntas 1. 0.0924. 6. 30 ºC. Analista 1. Puntas 2. 0.0939. 7. 30 ºC. Analista 2. 8. 30 ºC. Analista 2. Q. UI M. IC A. 1. 0.0928. Puntas 2. 0.0941. IA. Y. BI. O. Puntas 1. Especificación. AC. Factores. DE. Vx  S 2. 0.0044 < 1.47 0.0002< 1.47 0.0016 < 1.47. s. IO. = Valor de las diferencias existentes entre las variables estudiadas.. BI BL. |VX|. TE. CA. Puntas nuevas y usadas. FA. Analista. RM. Temperatura (21ºC - 30 ºC). Resultado. = Desviación estándar hallada en el test de repetibilidad.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSION. En primer lugar, un método analítico debería validarse cuando se necesita verificar que sus parámetros de aptitud son adecuados para usar para un problema analítico particular, por ejemplo: cuando se desarrolla un método nuevo, cuando se revisa un método ya establecido para mejorar o extender a un nuevo problema, cuando el control de calidad. IC A. indica que el método en uso está cambiando con el tiempo, cuando se usa un método ya. UI M. establecido en un laboratorio diferente o con diferente analista o con diferente. Q. instrumental, o para demostrar la equivalencia entre 2 métodos (un método nuevo y una. Y. BI. O. norma) 9.. AC. IA. Un factor importante a tener en cuenta, es el diluyente a emplear al realizar las distintas. RM. diluciones para determinar los parámetros de la validación. No debe perderse de vista. FA. que, para obtener resultados confiables, las muestras deben tener una matriz similar a. DE. las muestras reales de pacientes. En general, para determinaciones de química clínica. CA. puede emplearse agua pura o solución fisiológica; pero para algunos casos es. IO. TE. recomendable el uso de soluciones de albúmina humana o idealmente una muestra. BI BL. sérica libre del analito a determinar, como por ejemplo en el caso de drogas de abuso 22.. El ensayo para determinación de linealidad, consiste en procesar un determinado número de muestras de concentración conocida o de una serie de diluciones realizadas a partir de una muestra única también de concentración conocida. Las muestras pueden prepararse empleando soluciones estándares de alta concentración o bien ser adquiridas a partir de marcas comerciales 21, 22.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego de efectuados los cálculos respectivos, se apreció que el método presenta la capacidad de brindar resultados linealmente proporcionales a la concentración del analito en estudio, dentro del intervalo de concentración que va desde 20 ug/dL hasta 100 ug / dL, tal como se muestra en la gráfico Nº 1.. El coeficiente de correlación “r” nos indica el grado de relación entre la concentración. IC A. (x) y la respuesta (y), su valor máximo es cercano a 1. En el Cuadro N°1 se observa que. UI M. en el ensayo de linealidad se obtuvo un coeficiente de correlación de 0.996646, en este. Q. caso mayor a 0.995. Al ser limitada la información aportada por el coeficiente de. BI. O. correlación, se halló el coeficiente de determinación (r2) cuyo valor fue 0.993303;. Y. mayor a 0.990, lo que demuestra que existe una regresión (regresión lineal) entre las. RM. AC. IA. variables (concentración y respuesta) con una probabilidad superior al 99% 23, 25, 26.. FA. Para confirmar que dicha regresión es lineal, se aplicó un test de Student, que es. DE. empleado para mostrar la significancia estadística de la varianza de la pendiente b, la. CA. cual aplicada a nuestro estudio nos demuestra que el método de diagnóstico analizado. IO. TE. cumple con el criterio de linealidad, pues el valor del texp (43.9102) obtenido es mucho. BI BL. mayor al ttab (2.16) con un nivel de confianza del 95%, tal como se muestra en el Cuadro Nº 2. Este valor es tan alto que indica que la probabilidad de que la pendiente “b” sea diferente de cero es muy elevada, y según los organismos internacionales establecen como criterio de aceptación que el texp sea mucho mayor que el ttab 19, 21, 23.. La pendiente “b” o coeficiente de regresión está relacionada con la sensibilidad del método, de forma que a mayor pendiente, mayor sensibilidad (respuesta del método frente a los cambios de la concentración del analito) 19.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El término “a” independiente u ordenada en el origen, es la intersección de la recta con el eje de ordenadas y es indicativo del error sistemático si es que no pasa cerca del origen de coordenadas; en éste caso existe un error sistemático por defecto; tanto para la linealidad como para el método 18, 19, 23.. En el test de proporcionalidad (Cuadro N°3) vemos que los límites de confianza no. IC A. incluyen al cero, lo que significa que el método analítico presenta sesgo; como ya lo. Q. UI M. mencionamos, éste es por defecto 19, 23.. BI. O. El ensayo de precisión se evaluó en términos de repetibilidad y reproducibilidad. La. Y. precisión se expresa matemáticamente por la desviación estándar o preferiblemente por. AC. IA. el coeficiente de variación, y se establece que éste valor sea menor del 2%. En el caso. RM. de la determinación de la repetibilidad (Cuadro Nº 4) se efectuaron 10 determinaciones. FA. sobre la dilución de concentración 80 ug/dL, tras la cual se obtuvieron una desviación. DE. estándar de 0.7384 con un coeficiente de variación de 0.9148 %, que se traduce en. CA. resultados estadísticamente similares bajo las mismas condiciones de operación en. BI BL. IO. TE. intervalos cortos de tiempo.. Asimismo, el intervalo de confianza para los resultados individuales, indica que el 95% de los análisis están entre 79.05 - 82.39 ug/dL, el intervalo de confianza de la media indica que el contenido medio del analito se encuentra con una probabilidad del 95% entre 80.01 - 81.43 ug/dL 18, 19, 22.. Por otra parte, al determinar la precisión intermedia (Cuadro N°5) se encontró resultados estadísticamente similares en 2 analistas diferentes, con un mismo equipo y. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en días diferentes. Se obtuvo una desviación estándar de 0.8675 con un coeficiente de variación de 1.0959% y lo establecido por la AEFI que sea menor al 2%.. El intervalo de confianza para los resultados individuales, indica que el 95% de los análisis están entre 77.21 - 81.12 ug/dL, el intervalo de confianza de la media indica que el contenido medio del analito se encuentra con una probabilidad del 95% entre 78.52 -. UI M. IC A. 79.81 ug/dL 19, 23, 26.. Q. La precisión esta relacionada con la dispersión de una serie de mediciones, pero no da. BI. O. ninguna indicación de lo cerca que están del valor verdadero. Podemos tener. Y. mediciones muy precisas pero poco exactas; sin embargo, para que un método sea. RM. AC. IA. exacto se requiere un cierto grado de precisión 19, 25.. FA. En cuanto al ensayo de exactitud (Cuadro N°6), se demostró que el método es capaz de. DE. de dar resultados próximos al valor verdadero. Se obtuvo un texp de 1.370 que es menor. CA. al ttablas que es de 2.306, lo que significa que no existe una diferencia significativa entre. IO. TE. la recuperación media (100.77 %) y el 100%. El test G de Cochran resultó de Gexp. BI BL. 0.6443 siendo éste menor al Gtabla que es de 0.871, según AEFI considera que el factor comparado no influye y existe homogeneidad de varianzas entre los grupos de resultados con una probabilidad del 95% 14, 19, 25.. Se determinó un Límite de Detección 0.929 ug/dL y el Límite de cuantificación de 3.096 ug/dL (Cuadro N°7).. En el caso del parámetro robustez, según AEFI, es definida como el grado de influencia. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que pequeños cambios en las condiciones analíticas ejercen sobre la fiabilidad del método analítico. Es importante evaluarla porque permite localizar factores que originan fluctuaciones menores y los que necesitan una atención especial por cuanto son origen de variaciones significativas en los resultados. En el estudio (Cuadro N°8), los cambios a los que fue sometido el método analítico, sobre la dilución de concentración 80 ug/dL fueron: la variación de analistas, temperaturas de trabajo (21 °C y 30 °C) y uso de. IC A. puntas para micropipetas nuevas y usadas. Se consideran como aceptables aquellos. UI M. valores absolutos de las diferencias obtenidas de acuerdo al diseño de Youden & Steiner. Q. que sean menores o iguales al valor del producto de su desviación estándar por 2.. BI. O. Tomando en cuenta esto, se aprecia en los resultados que el método es robusto a las. Y. variaciones que surgen por el cambio temperatura, de analistas y por el uso de puntas. AC. IA. para micropipetas tanto nuevas como usadas. No obstante, al haberse comprobado. RM. experimentalmente que no hay influencia de temperatura del área de trabajo sobre los. BI BL. IO. TE. CA. DE. establecidos (< 25°C) 14, 19, 21, 25.. FA. factores estudiados, se recomienda la realización de este ensayo dentro de los límites. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. Luego de determinar los parámetros de Validación para Cuantificación de Hierro Sérico en el área de bioquímica, que se realiza en el Laboratorio Quintanilla S.R.L., se concluye que:.  El método es lineal en el intervalo de concentraciones de 20 ug/dL a 100 ug/dL del. IC A. analito empleado.. Q. con una buena precisión intermedia (C.V: 1.0959%).. UI M.  El método es preciso, obteniendo resultados repetitivos (C.V: 0.9148%) y además. BI. O.  El método es exacto, no existe diferencia significativa entre la recuperación media. Y. (100.76%) y el 100%.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA.  El método presenta robustez.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1.. Padullés N., Sala F.: Fisiopatología del Hierro. Criterios de indicación de hierro parenteral, disponibilidad y pautas de administración. Pharmaceutical Care España 2006; 8(5): 199-252. Disponible en: http://www.pharmaceutical-care.org/doccontenidos/articulos/234-245%20FISIO.pdf. Ganong W. Fisiología Médica. 18ºed. Ed. El Manual Moderno. México. 2001. pp.:. Q. 2.. UI M. IC A. [Consultado: 14 de Septiembre del 2010]. Y. BI. O. 521-522.. IA. Wiener Laboratorios S.A.I.C.: Vademécum - Reactivos para el Laboratorio. AC. 3.. RM. Clínico. Argentina. 2006. Disponible en:. FA. http://www.wiener-lab.com.ar/wiener/catalogo/archivos/7580_fer_color_aa_sp.pdf. TE. Farreras P., Rozman C.: Medicina Interna. Edición en CD-ROM. 16°ed. Ed.. IO. 4.. CA. DE. [Consultado: 03 de Marzo del 2010]. BI BL. Doyma S.A. España. 2000. pp. 1640.. 5.. Prand, M; Zimmermann, L; Scorciapino, C et al: Validación Interna del Método de Digestibilidad In Vitro de la Materia Orgánica (DIVMO) y Control Interno de la Calidad. Universidad Nacional de Entre Ríos. XVII Jornadas IRAM-Universidades. Panamá. Octubre 2006. Disponible en: http://www.uniram.com.ar/Jornadas/XVII/Ponencias/foro-labora.asp [Consultado: 15 de Septiembre del 2010]. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(47) IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo Nº 1: Datos experimentales obtenidos en el ensayo de Linealidad. 11.43 10000. 2. 100.00. 0.1158. 11.58 10000. 3. 100.00. 0.1161. 11.61 10000. 1. 80.00. 0.0898. 7.18. 6400. 2. 80.00. 0.0894. 7.15. 6400. 3. 80.00. 0.0903. 7.22. 6400. 1. 60.00. 0.0681. 4.09. 3600. 2. 60.00. 0.0677. 4.06. 3600. 3. 60.00. 0.0678. 4.07. 3600. 1. 40.00. 0.0331. 1.32. 1600. 40.00. 0.0329. 1.32. 1600. 40.00. 0.0326. 1.30. 1600. 20.00. 0.0140. 0.28. 400. 2. 20.00. 0.0138. 0.28. 400. 3. 20.00. 0.0135. 0.27. 400. 2. DE. 3. CA. 1. UI M. Q O BI. BI BL. IO. TE. Muestra 5. IC A. 0.1143. FA. Muestra 4. X2. 100.00. Y. Muestra 3. XY. 1. IA. Muestra 2. Absorbancia (Y). (X). RM. Muestra 1. ug/dL. AC. Nº Repeticiones. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo Nº 2: Datos experimentales obtenidos en el ensayo de Repetibilidad. Concentración. Teórica (ug/dL). Práctica (ug/dL). 0.0928. 80.0000. 82.17. 2. 0.0897. 80.0000. 79.79. 3. 0.0914. 80.0000. 81.10. 4. 0.0908. 80.0000. 80.64. 5. 0.0910. 80.0000. 6. 0.0894. 80.0000. 7. 0.0911. 80.0000. 8. 0.0914. 80.0000. 9. 0.0912. 80.0000. 10. 0.0903. 80.0000. BI. O. Q. UI M. 80.79. Y. 1. 79.56 80.87 81.10 80.95 80.25. FA. RM. AC. IA. Absorbancia. IC A. Concentración. Muestra. TE. CA. DE. Anexo Nº 3: Datos experimentales obtenidos en el ensayo de Precisión Intermedia. IO. Muestra. Analista 2. Analista 1. Analista 2. BI BL. Analista 1. 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3. Absorbancia 0.0884 0.0881 0.0886 0.0875 0.0873 0.0880 0.0912 0.0898 0.0895 0.0889 0.0894 0.0899. Concentración. Concentración. Teórica (ug/dL). Práctica (ug/dL). 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000 80.0000. 78.79 78.56 78.95 78.10 77.95 78.49 80.95 79.87 79.64 79.18 79.56 79.95. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo Nº 4: Datos experimentales obtenidos en el ensayo de Exactitud. 100.00. 98.70. 2. 0.1158. 100.00. 99.85. 3. 0.1161. 100.00. 100.08. 1. 0.0898. 80.00. 79.87. 2. 0.0894. 80.00. 3. 0.0903. 80.00. 1. 0.0661. 60.00. 2. 0.0657. 60.00. 61.35. 3. 0.0668. 60.00. 62.19. 1. 0.1143. 100.00. 98.70. 2. 0.1158. 100.00. 99.85. 3. 0.1161. 100.00. 100.08. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. 0.1143. 1. 79.56 80.25 61.65. CA. DE. Analista 2. Práctica (ug/dL). AC. Analista 1. Teórica (ug/dL). RM. Analista 2. Concentración. Absorbancia. FA. Analista 1. Concentración. Muestra. BI BL. IO. TE. Anexo Nº 5: Datos experimentales obtenidos en el ensayo de LOD, LOQ. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10. Concentración. Absorbancia. 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000. 0.0090 0.0087 0.0098 0.0091 0.0095 0.0094 0.0089 0.0097 0.0093 0.0099. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.