Validación del proceso de llenado aséptico de preparados oftálmicos del laboratorio vitaline s a c

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI O. Q. UI M. IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Y. “VALIDACIÓN DEL PROCESO DE LLENADO ASÉPTICO DE. AC I. A. PREPARADOS OFTÁLMICOS DEL LABORATORIO VITALINE S.A.C.”. INFORME DE INTERNADO. FA R. M. PARA OPTAR EL TÍTULO DE. AUTOR:. DE. QUÍMICO FARMACEUTICO. CA. Br. PLASENCIA COTRINA, EDGAR LEVÍ. DR. Q.F. ERICSON FELIX CASTILLO SAAVEDRA. BI. BL. IO. TE. ASESOR:. TRUJILLO - PERÚ 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. IC A. Dedico la presente tesis: “A Dios por permitirme triunfar en ésta etapa. UI M. de mi vida, haberme dado la vida para lograr mis objetivos y por darme la oportunidad de. Q. gozar cada día de mis amores Jhordan y. BI O. Dahalia.”. Y. “A mi verdadero impulso, Jhordan, la. A. personita que lleno de dicha y alegría mi. AC I. corazón alimentando mi ser en ésta batalla. M. tan ardua de la vida.”. FA R. Dahalia, gracias por ser mi compañera y. luchar a mi lado; por compartir mis logros y. “A mis padres y hermano por todo su amor, apoyo incondicional y comprensión, por todos sus buenos consejos impartidos para seguir adelante en nuestros estudios.”. BL. IO. TE. CA. inolvidables.. DE. caminar juntos compartiendo experiencias. “A mí mismo, por no dejarme vencer y seguir. BI. firme con mis objetivos, ya que el principal obstáculo se encuentra dentro mí…”. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. AGRADECIMIENTO. Especial reconocimiento a. Q. mi asesor:. BI O. Dr. Q.F. Ericson Felix Castillo Saavedra por el tiempo que me dedico para. AC I A mis Padres : Por su amor y orientación para enfrentar cualquier adversidad y enseñarme que para lograr algo es necesario esforzarse. Por el tiempo dedicado a mí.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. mi agradecimiento sincero.. A. que este trabajo culminara exitosamente,. Y. por su amabilidad, buena disposición,. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Y. BI O. Q. UI M. JURADO DICTAMINADOR. A. ………………………………………….............. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. PRESIDENTE. SECRETARIO. ….………………………………… ASESOR. BI. BL. ….…………………………………. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. AUTOR. AUTOR. CA. DE. ….……………….……………………………. BI. BL. IO. TE. Br. PLASENCIA COTRINA, EDGAR LEVÍ. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. PRESENTACIÓN. Señores miembros del Jurado Dictaminador:. Q. Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de la Facultad de Farmacia y. BI O. Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a vuestra honorable. DEL. PROCESO. DE. LLENADO. A. “VALIDACIÓN. Y. consideración y elevado criterio el presente Informe de Internado, titulado:. ASÉPTICO. DE. AC I. PREPARADOS OFTÁLMICOS DEL LABORATORIO VITALINE S.A.C.”. FA R. M. Es propicia la oportunidad para evidenciar al más sincero reconocimiento a nuestra Alma Mater y toda su plana docente que con su capacidad, buena voluntad y. DE. enseñanzas impartidas han contribuido debidamente a nuestra formación profesional. Señores miembros del Jurado dejó a vuestra consideración la calificación del presente. BI. BL. IO. TE. CA. trabajo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE GENERAL RESUMEN .......................................................................................................................... i ABSTRACT ....................................................................................................................... ii. II.. INTRODUCCIÓN.............................................................................................. 01 Problema ....................................................................................................... 05. −. Hipótesis ....................................................................................................... 05. −. Objetivos ....................................................................................................... 06. IC A. −. UI M. I.. MATERIAL Y MÉTODO ................................................................................. 07. Q. 1. MATERIAL ................................................................................................. 07. BI O. 1.1. Material microbiológico .......................................................................... 07 1.2. Equipos .................................................................................................... 07 1.3. Suministros de apoyo crítico ................................................................... 07. Y. 1.4. Instrumentos mecánico-eléctricos ........................................................... 08 1.5. Instrumentos de vidrio y otros ................................................................. 08. AC I. A. 2. MÉTODO ..................................................................................................... 09 2.1. Diseño de trabajo ..................................................................................... 09 2.2. Diagrama de operaciones de un proceso simulado .................................. 09. M. 2.3. Puntos críticos a controlar ....................................................................... 15. FA R. 2.4. Procedimiento de Ensayos ....................................................................... 17 2.4.1. Etapa previa al proceso de manufactura ................................... 17 2.4.2. Etapa de fabricación ................................................................. 22. DE. 2.4.3. Etapa de envasado .................................................................... 26 2.5. Plan de muestreo y especificaciones ....................................................... 32. CA. 2.5.1. Etapa previa al proceso de manufactura ................................... 32 2.5.2. Etapa de fabricación ................................................................. 35. TE. 2.5.3. Etapa de envasado .................................................................... 40. 2.6. Desarrollo estadístico .............................................................................. 49. RESULTADOS ................................................................................................... 50. IO. III.. DISCUSIÓN........................................................................................................ 58. V.. CONCLUSIONES .............................................................................................. 69. VI.. RECOMENDACIONES .................................................................................... 70. BI. BL. IV.. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................. 71 ANEXO A ANEXO B ANEXO C. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE DE CUADROS. 1. Cuadro 01: Diagrama de operaciones para llenado aséptico ................................ 09. IC A. 2. Cuadro 02: Puntos críticos a controlar en proceso de llenado aséptico ............... 15 3. Cuadro 03: Especificación del control del medio de cultivo ................................ 32. UI M. 4. Cuadro 04: Tamaño muestra para análisis fisicoquímico del agua purificada ..... 33 5. Cuadro 05: Tamaño muestra para análisis microbiológico del agua purificada .. 34 6. Cuadro 06: Tamaño muestra para análisis fisicoquímico del granel.................... 35. Q. 7. Cuadro 07: Tamaño muestra para análisis microbiológico del granel ................. 36. BI O. 8. Cuadro 08: Tamaño muestra para análisis de primeras unidades envasadas ....... 36 9. Cuadro 09: Especificaciones de control ambiental .............................................. 37 10. Cuadro 10: Especificaciones de control de superficies ........................................ 38. Y. 11. Cuadro 11: Especificaciones de control de personal ............................................ 39. A. 12. Cuadro 12: Tamaño muestra para análisis fisicoquímico de producto envasado . 40. AC I. 13. Cuadro 13: Tamaño muestra para análisis de esterilidad de producto envasado . 41 14. Cuadro 14: Tamaño muestra para análisis de esterilidad en válvula de salida de. M. producto del tanque 2 ........................................................................ 42 15. Cuadro 15: Tamaño de muestra para análisis de esterilidad en válvulas de. FA R. ingreso de producto a máquina BFS 624........................................... 43 16. Cuadro 16: Tamaño de muestra para análisis de esterilidad en válvula ingreso de producto al buffer tank de BFS 624............................................... 44. DE. 17. Cuadro 17: Tamaño de muestra para análisis de esterilidad en válvula de salida de producto del buffer tank de BFS 624 .................................. 45. CA. 18. Cuadro 18: Especificaciones de control ambiental .............................................. 46 19. Cuadro 19: Especificaciones de control de superficies ........................................ 48. BI. BL. IO. TE. 20. Cuadro 20: Especificaciones de control de personal ............................................ 49. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE DE FIGURAS. IC A. 1. Figura 01: Diseño de validación del proceso de llenado aséptico ........................ 09 2. Figura 02: Diagrama general del proceso de manufactura para medio de cultivo. UI M. en la línea de producción 2 – BFS 624............................................... 14 3. Figura 03: Puntos de muestreo de agua purificada............................................... 34. Q. 4. Figura 04: Puntos de muestreo de control ambiental - Fabricación ..................... 37. BI O. 5. Figura 05: Puntos de muestreo de control de superficies - Fabricación ............... 38 6. Figura 06: Puntos de muestreo de válvulas críticas ............................................. 46. Y. 7. Figura 07: Puntos de muestreo de control ambiental - Envasado ........................ 47. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. 8. Figura 08: Puntos de muestreo de control de superficies - Envasado .................. 48. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE DE TABLAS. IC A. 1. Tabla 01: Determinación de promoción de crecimiento del medio de cultivo TSB del PLLA frente a especificación ente regulador. ... 50 2. Tabla 02: Determinación del control del agua purificada del PLLA frente. a especificación reguladora. ............................................................ 50. UI M. 3. Tabla 03: Determinación del control de producto a granel en la etapa de. fabricación del PLLA frente a especificación reguladora ......... 51. Q. 4. Tabla 04: Determinación del control ambiental de bacterias mesófilas. BI O. en la etapa de fabricación del PLLA frente a especificación ... 52 5. Tabla 05: Determinación del control ambiental de hongos y levaduras. Y. en la etapa de fabricación del PLLA frente a especificación ..... 52 6. Tabla 06: Determinación del control superficies de bacterias mesófilas. AC I. A. en la etapa de fabricación del PLLA frente a especificación ..... 53 7. Tabla 07: Determinación del control superficies de hongos y levaduras. en la etapa de fabricación del PLLA frente a especificación ..... 53. M. 8. Tabla 08: Determinación del control microbiológico del personal en la. FA R. etapa de fabricación del PLLA frente a especificación ............... 54 9. Tabla 09: Determinación del control de producto envasado del PLLA frente a especificación reguladora ................................................ 54. DE. 10. Tabla 10: Determinación del control de esterilidad del producto residual en válvulas críticas del PLLA frente a especificación ................ 55. CA. 11. Tabla 11: Determinación del control ambiental de bacterias mesófilas en la etapa de envasado del PLLA frente a especificación ......... 55. TE. 12. Tabla 12: Determinación del control ambiental de hongos y levaduras en. IO. la etapa de envasado del PLLA frente a especificación .............. 56. BL. 13. Tabla 13: Determinación del control superficies de bacterias mesófilas en la etapa de envasado del PLLA frente a especificación ......... 56. BI. 14. Tabla 14: Determinación del control superficies de hongos y levaduras en la etapa de fabricación del PLLA frente a especificación ..... 57. 15. Tabla 15: Determinación del control microbiológico del personal en la etapa de envasado del PLLA frente a especificación ................. 57. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Resumen El presente estudio tuvo como objetivo validar el proceso de llenado aséptico de. IC A. preparados oftálmicos del laboratorio VITALINE S.A.C. a través de las pruebas de esterilidad, control fisicoquímico y control del área estéril a lo largo del proceso, para lo. UI M. cual se estableció un diagrama de operaciones con los puntos críticos a controlar en 3. Q. etapas principales, la etapa previa del proceso de manufactura, la etapa de fabricación y. BI O. la etapa de envasado. En el análisis de la etapa previa al proceso de manufactura se determinó la conformidad mediante un control del medio de cultivo, del agua purificada. Y. con características fisicoquímicas de pH entre 6,61 a 6,64, conductividad de 0,82 a 0,86,. A. ausencia de sustancia oxidables y de microorganismos. Por otro lado, en la etapa de. AC I. fabricación se determinó la conformidad mediante un análisis del producto a granel de características fisicoquímicas de peso específico de 1,01404, pH de primeras unidades. FA R. M. envasadas de 7,2322 y microorganismos por debajo de 10 UFC/mL, control ambiental, de superficies y del personal del área que estuvo dentro de las especificaciones. Finalmente, en la etapa de envasado se determinó la conformidad mediante un análisis. DE. del producto envasado de características fisicoquímicas en 21 puntos de muestreo de. CA. peso específico de 1,01345, pH de 7,22952, envases herméticos y esterilidad de 5000 unidades envasadas, un control en válvulas críticas con resultados de esterilidad, un. TE. control ambiental, de superficies como del personal del área que se determinó dentro de. IO. especificación.. BL. Palabras clave: Llenado aséptico, esterilidad, control fisicoquímico, control. BI. microbiológico, medio de cultivo.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Abstract This study aimed to validate the aseptic filling process of laboratory ophthalmic. IC A. preparations VITALINE S.A.C. Testing sterility through of the physicochemical. UI M. monitoring and the control sterile area along the process was performed, for which it was realized a diagram of operations with critical control points in three main stages,. Q. the previous stage of the manufacturing process, the manufacturing stage, the filling. BI O. stage were established. In the analysis of the previous step to the manufacturing process was determined the compliance by control of the culture medium, the purified water. Y. with physicochemical characteristics of pH between 6.64 to 6.61, conductivity from. A. 0.82 to 0.86; absence of oxidizable substances and microorganisms; besides, in the step. AC I. of manufacturing the conformity was determined by an analysis of the bulk of. M. physicochemical characteristics of specific weight of 1.01404, of pH 7.2322, and. FA R. microorganisms below 10 CFU/mL, environmental control, surface and personnel of the area was within specification; finally, in the filling step compliance was determined by analysis of physicochemical characteristics in 21 sampling points specific weight of. DE. 1.01345, pH of 7,22952, hermetically sealed bottles and bottles filled sterility 5000, a. CA. control valves critical with results of sterility, environmental control, surface and. TE. personnel area which was determined within specification. Keywords: Aseptic filling, sterility, physicochemical control, microbiological control,. BI. BL. IO. medium.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Organismos internacionales como la Organización Mundial de la Salud (OMS),. IC A. Food and Drug Administration (FDA), International Organization for Standardization. UI M. (ISO), son los encargados de proporcionar las directrices para realizar la manufactura de. medicamentos seguros, eficaces y de calidad; para contar con un sistema de garantía de. BI O. Q. la calidad, producción, control de calidad, validaciones y mantenimiento 1, 2, 3.. La OMS y la Conferencia Internacional de Armonización (ICH) proveen. Y. requerimientos técnicos para el registro de fármacos para el uso humano y, además de. A. procesos críticos para la manufactura de medicamentos, los cuales deben ser validados y. AC I. controlados en el tiempo. La significancia de validar los procesos de manufactura y sistemas de apoyo crítico es para la obtención de un producto final de calidad, seguro y. FA R. M. eficaz para el paciente 4, 5.. La FDA define a la validación como el establecimiento de evidencia documentada. DE. que proporcione un alto grado de aseguramiento de que un proceso específico genere consistentemente un producto cumpliendo con sus especificaciones predeterminadas y. CA. atributos de calidad 6, por lo que, según cada compañía farmacéutica se debe identificar. TE. qué trabajos de validación son necesarios para demostrar que se controlan los aspectos. IO. críticos de un proceso en particular 7, 8.. BL. La validación de un proceso aséptico consiste en usar un medio de crecimiento. BI. microbiológico nutritivo en lugar del producto que se manufacturando, simulando que el proceso se encuentre bajo control. Esto incluye la exposición del medio de crecimiento microbiológico a superficies de contacto del producto dentro del equipo, sistemas de cierre del envase, ambientes críticos, y manipulaciones del proceso para simular. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. estrechamente la misma exposición a la cual el producto es sometido; el medio de cultivo muestreado es incubado para encontrar una posible contaminación microbiana. IC A. en el proceso 6, 9, 10.. UI M. En este contexto, la presencia de microorganismos viables determina la esterilidad. del producto a analizar, proporcionando información si en el proceso existió alguna. Q. contaminación que repercute la esterilidad de las unidades envasadas y del producto en. BI O. línea. Los resultados muestran el potencial que existe de contaminación durante un proceso actual de una unidad del producto farmacéutico (ej. arranque, adiciones de. A. Y. ingrediente estériles, uniones asépticas, llenado, hermetizado) 11, 12, 13.. AC I. Las pruebas de llenado aséptico deben ser suficientemente representativas en las condiciones ambientales en las cuales las operaciones industriales actuales son llevadas. FA R. M. a cabo según el proceso realizado (manufactura de oftálmicos, liofilizantes, tabletas, capsulas, etc.) 14, 15.. DE. Una evaluación del control ambiental, de superficies de contacto y del personal en condiciones adversas se debe desafiar para dar robustez y solidez al proceso, siendo este. CA. capaz de mantener las condiciones asépticas a pesar de modificaciones en la rutina. TE. diaria laboral. 14, 15, 16.. IO. El medio de cultivo nutritivo utilizado en un llenado aséptico de un proceso de. BL. manufactura simulado debe cumplir con determinadas especificaciones fisicoquímicas. BI. (pH y peso específico), así como un respaldo microbiológico que es capaz de promover el crecimiento microbiano (bacterias aerobias y hongos filamentosos) con facilidad. Las especificaciones fisicoquímicas deben ser controladas en el proceso de fabricación y envasado, mientras que las microbiológicas como etapa previa 17, 18.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por otro lado, el llenado aséptico es un punto crítico a controlar en procesos donde las condiciones microbiológicas ambientales son controladas muy estrictamente. IC A. (ambientes de condiciones grado A y B, como también en menos intensidad los de grado C) y del producto manufacturado presentan grado estéril, por ello se debe poseer. UI M. un sistema de calidad que pueda controlar los diversos procesos críticos que afecten la. Q. integridad del producto 11,19, 20.. BI O. Es así que, la reglamentación peruana, de Buenas Prácticas de Manufactura (BPM), representada con la Dirección General de Medicamentos, Insumos y Drogas. Y. (DIGEMID) exige que los laboratorios farmacéuticos que manufacturan productos. AC I. A. estériles posean procesos de llenado aséptico validados; es por ello que los laboratorios cuentan con un programa anual de validaciones que demuestran el cumplimiento de. FA R. M. estudios, para que la planta se encuentre apta para su funcionamiento 13, 17. Ríos en el año 2007 realizó un estudio sobre la validación preliminar del proceso de llenado aséptico en el área de inyectables del laboratorio Vicar Farmacéutica S.A”, en el. DE. que se evaluó el proceso de llenado aséptico, por triplicado, diseñado en condiciones. CA. normales de producción en el área estéril de inyectables, empleando un medio de cultivo. TE. de crecimiento microbiológico nutritivo que se incubó por 14 días a temperaturas de 20°C a 25°C y 30° a 35°C obteniéndose resultados de ausencia de contaminación en los. BL. IO. frascos, indicando que el proceso cumple las características de esterilidad 11. Asimismo, Fernández, Moreno y Arias en el año 2007, realizaron un estudio sobre. BI. la metodología para la validación del llenado aséptico en un proceso de liofilización en el que se evalúo la metodología para el llenado aséptico en el proceso de liofilización por lo que se realizó 3 pruebas, con un total de3 lotes de 15 000 viales, con caldo casoy. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que se incubó a 22,5 ± 2,5 °C y 32,5 ± 2,5 °C por 14 días respectivamente, finalmente se indicó un plan de monitoreo microbiológico para el área que incluyó puntos de. IC A. muestreos estratégicos, así como realización de sus procedimientos 14.. UI M. Además, Bastías en el año 2008, realizó un estudio sobre la Validación de un proceso de llenado aséptico para ampollas de 2mL en Laboratorio Biosano S.A., se. Q. abordó el proceso de llenado aséptico para ampollas de 2mL empleando medio de. BI O. cultivo Caldo Tripticasa Soya, utilizando las normas sanitarias del proceso, para completar las calificaciones de desempeño en el área de envasado, monitorear el. AC I. A. obteniendo resultados de esterilidad en el proceso 16.. Y. cumplimiento microbiológico de ambientes, superficies y vestuario del personal;. Muchos son los estudios que se han realizado en este campo, García en el año 2009,. FA R. M. realizó un estudio sobre Validación del proceso de llenado simulado de líquidos estériles en la industria farmacéutica, se evaluó el proceso de llenado aséptico simulado describiendo las actividades que se llevan a cabo en el área de líquidos estériles, se. DE. realizaron 3 corridas independientes de 6300 ampollas como mínimo, y se obtuvieron. CA. 20 llenados exitosos (desde el 2005 al 2007) en un proceso de calidad estéril 17.. TE. La calidad de un producto farmacéutico estéril debe asegurarse completamente, esto. IO. para cumplir con las exigencias de las autoridades sanitarias y sobre todo para brindar. BL. un producto verdaderamente confiable a la población; por ello, es necesario realizar el presente estudio para implementar en la nueva línea de producción Nº2 del laboratorio. BI. VITALINE S.A.C. la garantía de que sus productos manufacturados son de grado estéril. Es así, como la validación de procesos se hace indispensable para el. aseguramiento de la calidad de los insumos farmacéuticos siendo uno de los soportes. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que aseguran la calidad del medicamento y con ello la salud del consumidor; motivo por el que se plantea el siguiente problema:. IC A. ¿Cumplirán los preparados oftálmicos del laboratorio VITALINE S.A.C con la. UI M. validación del proceso de llenado aséptico respecto a las especificaciones de esterilidad, fisicoquímicas y de control del área estéril?. BI O. Q. Se planteó la siguiente hipótesis:. Dado la implementación del proceso de llenado aséptico (PLLA) utilizado en la. Y. manufactura de preparados oftálmicos, se desarrolló de acuerdo a las normas técnicas. A. exigidas para el caso, el proceso cumple con las especificaciones de validación,. AC I. garantizando que proporcionen de manera consistente y reproducible productos estériles. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. del laboratorio VITALINE S.A.C.. M. con atributos de calidad conservados a través del tiempo en la línea de producción Nº2. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS: Objetivo general:. IC A. Validar el proceso de llenado aséptico de preparados oftálmicos del laboratorio. Objetivos específicos: la. esterilidad. mediante. la. presencia. de. Q. Determinar. partículas. BI O. . UI M. VITALINE S.A.C.. microbiológicas viables en las unidades de producto envasado, y en el. Y. producto residual de las válvulas críticas de ingreso y salida en el proceso de. Determinar el control fisicoquímico del agua en la etapa previa al proceso,. AC I. . A. llenado aséptico.. M. del producto a granel en la etapa de fabricación y del producto envasado en. . FA R. el proceso de llenado aséptico.. Determinar el control del área estéril mediante especificaciones de control. DE. ambiental, de superficies críticas y del personal en las salas de fabricación y. BI. BL. IO. TE. CA. envasado en el proceso de llenado aséptico.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. 1.. MATERIAL Y METODOS. MATERIALES:. IC A. El material de trabajo que permitió validar el proceso fueron las instalaciones de. UI M. la línea estéril que posee el ambiente de fabricación y envasado, para lo cual se consideró: Material microbiológico:. Q. 1.1. BI O. Medio de cultivo caldo tripticasa soya (TSB) que se adquirió en el. Y. laboratorio VITALINE S.A.C.. AC I. A. Equipos:. Tanque de fabricación 2, PR2600.. . Envasadora blow fill seal (BFS) 624. . Cabina de Flujo Laminar AM0500. . Incubadora de 20 a 25°, CC0200. . Incubadora Incucell de 30 a 35°, CC6000. . Autoclave CC0600. DE. FA R. M. . TE. CA. 1.2. Suministros de Apoyo Crítico: . Sistema de Agua Purificada. . Sistema de Aire Comprimido. . Sistema de Vapor Puro. . Sistema de Electricidad. BI. BL. IO. 1.3. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Instrumentos mecánico-eléctricos: Termohigrómetro de indicación digital (CT1137) KC, 303C.. . Termohigrómetro de indicación digital (CT1138) KC, 303C.. . Balanza electronic balance FWE.. . Medidor multiparámetro Hanna HI255, serie 1677477.. . Controlador de temperatura Autonics TZN4S - autoclave CC0600. . Controlador de temperatura Autonics TZN4S - incubadora CC0200. Q. UI M. IC A. . Instrumentos de vidrio y otros: Filtros millipore de 0,22 µm. . Matraces de 250mL. . Vasos de precipitación de 100mL, 150mL, 200mL. . Pipeta de 10mL. . Picnómetro de 25mL. . Termómetro líquido. . Cinta métrica Stanley. DE. FA R. M. AC I. A. . CA. 1.5. Y. BI O. 1.4. Cinta adhesiva plástica. BI. BL. IO. TE. . 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. MÉTODO: 2.1. Diseño de trabajo 6, 12, 21. VALIDACIÓN DEL PROCESO DE LLENADO ASÉPTICO. Simulación del proceso de manufactura, por triplicado (repetitivo), con medio de cultivo nutritivo.. Actividad principal. UI M. IC A. 2.. Elaboración del protocolo de validación. P3. P2. Se determinó la presencia de partículas microbiológicas viables (esterilidad). BI O. P1. Q. Puntos que se evaluó a cada proceso simulado. A. Y. Se determinó el control fisicoquímico. Se determinó el control ambiental, de superficies críticas y del personal. Fuente: Elaborado por el autor.. AC I. Fig. 01: Diseño de Validación del PLLA. 2.2. FA R. M. Leyenda: P_: Indica los puntos que se evaluaron.. Diagrama de operaciones de un proceso (DOP) simulado 22.. DE. Su aplicación es en una nueva línea de producción la cual es necesario implementar para dar inicio a la manufactura de preparados oftálmicos. CA. (ocuviales) de 0,5mL.. TE. El diagrama de operaciones de procesos se realizó por triplicado, en tiempos. IO. diferentes y con operarios variados según personal disponible.. BI. BL. Cuadro 01: DOP para llenado aséptico: Símbolo. Actividad. Responsable. Trasladar el medio de cultivo al área de Almacén Dispensación Verificar condiciones ambientales del Almacén área de Dispensación. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Símbolo. Actividad. Responsable. Identificar área de Dispensación. Almacén. Efectuar despeje Dispensación. del. área. de. Almacén. Q. Verificar funcionamiento de la(s) balanza(s) a emplear Realizar dispensación de medio de cultivo Verificar dispensación de medio de cultivo Colocar las materias insumo dispensado en el coche transportador y trasladar a la esclusa de ingreso de materiales II. Efectuar control microbiológico al uniforme del personal dispensador Efectuar despeje del área de Dispensación. Almacén. UI M. Verificar materiales y equipos a emplear. IC A. Efectuar control de ambiente durante todo Control Calidad el proceso de dispensación. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Almacén. DE. Limpiar área de Dispensación. BI. BL. IO. TE. CA. Identificar área de Dispensación. Retirar medio de cultivo del coche transportador. Efectuar control de ambiente durante todo el proceso de fabricación Muestrear y analizar agua purificada Punto PM9 Verificar condiciones ambientales del área de Fabricación. Almacén Almacén Producción. /. Almacén Control Calidad. de. Almacén Almacén Almacén Fabricación Control Calidad Fabricación / Control Calidad Fabricación. Verificar materiales y equipos a emplear. Fabricación. Efectuar despeje del área de Fabricación. Fabricación. Preparar Tanque de Fabricación 2. Fabricación. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Actividad. Responsable. Considerar precauciones proceso de fabricación Efectuar incorporación Purificada.. previas de. al. Agua. Fabricación Fabricación. IC A. Símbolo. Fabricación. UI M. Efectuar incorporación de activo Efectuar enrase de granel. Fabricación Fabricación Control. /. BI O. Q. Muestrear y analizar granel Esterilizar granel. Fabricación Fabricación. Y. Enfriar granel. Fabricación. AC I. A. Hermetizar Tanque de Fabricación 2 Preparar envasado de granel. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. Muestrear y analizar primeras unidades envasadas Efectuar control microbiológico al uniforme del personal de fabricación Efectuar control de ambiente durante todo el proceso de Envasado Verificar condiciones ambientales del área de envasado. Fabricación Fabricación Control Calidad Control Calidad Envasado. Verificar materiales y equipos a emplear. Envasado. Efectuar despeje del área de Envasado. Envasado. Controlar impresión de molde y verificar suministros de máquina BFS 624 Controlar parámetros de máquina BFS 624 – Presión Aire Controlar parámetros máquina BFS 624 – Vacío Controlar parámetros de máquina BFS 624 – Extrusor. Envasado Envasado Envasado Envasado. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Responsable Envasado Envasado. IC A. Controlar parámetros máquina BFS 624 – Knife Heat Controlar parámetros de agua de enfriamiento (chiller) Controlar parámetros de calentamiento de máquina BFS 624 Controlar parámetros de máquina BFS 624 –Timers Muestrear y analizar aguar purificada Punto PM11 Efectuar limpieza de líneas y sistemas de filtración de aire, de máquina BFS 624 Efectuar integridad de filtros de aire de soplado (Blowing), de máquina BFS 624 (0,2 ) Efectuar integridad de filtros de aire de inflado (Balloning), de máquina BFS 624 (0,2 ) Efectuar esterilización de líneas y filtros de aire, de máquina BFS 624 Efectuar secado de líneas y filtros de aire, de máquina BFS 624 Verificar parámetros de frasco a emplear en máquina BFS 624 Verificar seteo de timers de llenado para ocuviales de 0,5mL (Contenido: 0,3 a 0,5mL) Verificar requisitos previos al envasado, considerando Tanque de Fabricación 2, máquina BFS 624, parámetros de trabajo, estado de dispositivos y materiales necesarios.. Envasado. UI M. Actividad. Envasado. Envasado / Control Calidad Envasado. Envasado. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. Símbolo. Efectuar proceso de envasado del granel. Envasado. Envasado Envasado Envasado. Envasado. Envasado. Envasado. Separar 5000 unidades envasadas durante todo el proceso y efectuar Prueba de Envasado Esterilidad. Separar y analizar unidades envasadas, 21 Envasado puntos de muestreo (c/punto de 4 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Símbolo. Actividad. Responsable. scraper/6 minutos).. IC A. Control Calidad. UI M. Control Calidad. Envasado / Control Calidad. Envasado / Control Calidad. Control Calidad Envasado / Control Calidad Envasado. Envasado. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. Muestrear producto residual en la válvula de salida del Tanque de Fabricación 2 y efectuar Prueba de Esterilidad. Muestrear producto residual en la válvula de ingreso de producto a la máquina BFS 624 y efectuar Prueba de Esterilidad. Muestrear producto residual en la válvula de ingreso de producto al Buffer Tank de la máquina BFS 624 y efectuar Prueba de Esterilidad. Muestrear producto residual en la válvula de salida de producto del Buffer Tank de la máquina BFS 624 y efectuar Prueba de Esterilidad. Efectuar control microbiológico al uniforme del personal de envasado. Muestrear y analizar agua purificada de suministros Punto PM9 y Punto PM11. Efectuar limpieza de líneas y sistemas de filtración de producto y aire. Efectuar integridad de filtros de aire de soplado (Blowing) de máquina BFS 624 (0,2). Efectuar integridad de filtros de aire de inflado (Balloning), de máquina BFS 624 (0,2).. Envasado. Efectuar secado de líneas y filtros de aire. Envasado Muestrear y analizar agua de enjuague de Envasado / Tanque de Fabricación 2, Steam Cup y Control Calidad Línea de Producto. Entregar unidades envasadas y separadas (5000 unidades), para Prueba de Envasado Esterilidad, a control de calidad.. Fuente: Extraído de Protocolo de validación de llenado aséptico – VITALINE S.A.C.24. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. Fig. 02: Diagrama general del proceso de manufactura para medio de cultivo en la línea de producción 2 – BFS 624. Fuente: Elaborado por el autor (mediante programa AutoCAD 2014). 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3. Puntos críticos a controlar: Los puntos críticos a controlar durante la manufactura del medio de cultivo. IC A. (proceso de llenado aséptico - PLLA), en la línea de producción Nº2 del laboratorio VITALINE S.A.C, se basan en la determinación de esterilidad,. dimensiones a desarrollar).. Símbolo. BI O. Cuadro 02: Puntos críticos a controlar en PLLA.. Q. UI M. del control fisicoquímico y del control del área estéril (son las 3. Etapa del Proceso. Puntos críticos a controlar. A. Y. Control del medio de cultivo:  Promoción de Crecimiento. Etapa de fabricación. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC I. Etapa previa al proceso de Control del agua purificada:  Aspecto manufactura  pH  Conductividad  Microorganismos Control del producto a granel  Aspecto  Peso específico  pH (primeras unidades envasadas)  Biocarga Control del área:  Control ambiental (por sedimentación)  Control de superficies (por placa de contacto)  Control del personal: Por placa de contacto Ingreso y salida del área. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Símbolo. Etapa del Proceso. Puntos críticos a controlar. Q. UI M. IC A. Control del producto envasado: Puntos de muestreo fisicoquímico (21 puntos):  Aspecto  Peso específico  pH  Hermeticidad. AC I. A. Y. BI O. Puntos de muestreo microbiológico (5000 unidades):  Esterilidad Control de esterilidad de producto residual en válvulas críticas:  Válvula de salida de producto del tanque de fabricación 2 (PR2600).  Válvulas de ingreso de producto a máquina BFS 624.  Válvula de ingreso de producto al buffer tank de BFS 624.  Válvula de salida de producto del buffer tank de BFS 624.. TE. CA. DE. FA R. M. Etapa de envasado. BI. BL. IO. Control del área:  Control ambiental (por sedimentación)  Control de superficies (por placa de contacto)  Control del personal: Por placa de contacto Ingreso y salida del área. Fuente: Elaborado por el autor.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4. Procedimiento de Ensayos: 2.4.1 Etapa previa al proceso de manufactura:. IC A. A. Control del medio de cultivo: a. Promoción de crecimiento25, 26, 27:. UI M. Se realizó a cargo del analista del área de control de calidad-. microbiología de laboratorios VITALINE S.A.C, se usó los. BI O. Q. instructivos internos “Manejo de cepas” (ver en anexo A) y “Prueba de promoción de crecimiento y control negativo de. A. Y. medios de cultivo” (ver en anexo A).. M. a. Aspecto:. AC I. B. Control del agua purificada25,28,29:. FA R. Se colocó ± 30mL de muestra en un tubo de ensayo limpio y seco. Empleando luz natural o artificial se observó la solución y. DE. reportaron resultados.. CA. b. pH:. BI. BL. IO. TE. Se colocó 100mL de agua en un vaso de precipitación de 150mL y añadir 0,3mL de una solución saturada de cloruro de potasio. Se sumergió el electrodo y la sonda de temperatura hasta cubrir totalmente la muestra a analizar (4 cm aproximadamente). Se. seleccionó el rango de pH, se esperó a que la lectura se estabilice y se reportaron los resultados.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c. Conductividad: Esta prueba sirve para ver el nivel de sales que posee el agua. IC A. (ver la capacidad para conducir la electricidad), la cual fue determinada usando un conductímetro previamente calibrado.. UI M. Su metodología consta de 3 etapas dependientes de la. BI O. Q. temperatura y pH.. Etapa I:. Y.  Se determinó la temperatura y conductividad del agua usando. A. una lectura de conductividad que no haya sido compensada. AC I. por temperatura. Se midió la temperatura y conductividad a. FA R. 500mL.. M. aproximadamente 230mL de agua, contenidos en un vaso de.  Usando la tabla de requerimientos de conductividad,. DE. (CC.FQ.POE.05, ver en anexo A) encontrar el valor de. BI. BL. IO. TE. CA. temperatura no mayor que la temperatura medida; el valor de la conductividad correspondiente es el límite a esa temperatura..  Si la conductividad medida no es mayor que el valor de la Tabla de requerimientos de conductividad, el agua cumple los requerimientos de la prueba. En caso contrario, proseguir con la Etapa II.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Etapa II:  Se mantuvo la temperatura de la muestra a 25 ± 1ºC y agitó. IC A. vigorosamente. Se midió la conductividad periódicamente. Cuando la variación en la conductividad (debido a dióxido de. minutos, anotar la conductividad.. UI M. carbono atmosférico) sea menor o igual que 0,1µS/cm por 5. BI O. Q.  Si la conductividad no es mayor que 2,1µS/cm, el agua cumple con los requerimientos. Si la conductividad es mayor. AC I. Etapa III:. A. Y. de 2.1µS/cm, pasar a la etapa III.. M.  Se dejó reposar la muestra por 5 minutos manteniendo la. FA R. Temperatura en 25 ± 1ºC; posteriormente se agregó una solución saturada de cloruro de potasio a la misma muestra de agua (0.3g por cada 100 ml) y se determinó el pH con una. DE. aproximación de 0.1. BI. BL. IO. TE. CA.  Empleando la tabla de requisitos de pH y conductividad (CC.FQ.POE.05, ver en anexo A) se determinó el límite de conductividad correspondiente al valor de pH medido. Si la conductividad medida en la etapa II es menor al límite de conductividad obtenido según tabla líneas arriba mencionada, el agua cumple con los requisitos de la prueba de conductividad. Si la conductividad medida en la etapa II es mayor o si el pH esta fuera del intervalo entre 5 y 7, avisar al personal de mantenimiento.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. d. Sustancias oxidables: Colocar 100mL de agua en un matraz y añadir 10mL de ácido. IC A. sulfúrico 2N, hervir. Añadir 0,2mL de permanganato de potasio 0.1N y dejar hirviendo por 5 minutos más. El color rosado no. Q. UI M. debe desaparecer completamente.. BI O. e. Microorganismos:. El muestreo de agua purificada, se realizó con uniforme estéril,. Y. estuvo a cargo del personal de producción, validaciones y. A. control de calidad, se desinfectó cada punto de salida de agua. AC I. con alcohol de 70º, se dejó purgar el agua por un tiempo de 3. M. minutos, se muestreó ± 100mL de agua purificada en un frasco. FA R. de boca ancha estéril (evitando el contacto entre la boca del frasco y punto de muestreo). Se llevó la muestra a control de. DE. calidad para su análisis.. BI. BL. IO. TE. CA.  Recuento total de mesófilos viables: Se empleó el método de incorporación de medio agar Tripticasa Soya (TSA), que consistió en tomar una muestra de 1mL de agua y se colocó en una placa Petri debidamente identificada por duplicado, se adicionó a la placa 15 – 20mL de TSA que previamente fue fundido y entibiado a 45ºC, se homogenizó con movimientos circulares dejándose solidificar a temperatura ambiente, finalmente se invirtieron las placas e incubaron por 48 horas a 32,5 ± 2,5ºC para sus lecturas.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Recuento total de hongos filamentosos y levaduras: Se empleó el método de incorporación de medio agar. IC A. Sabouraud (SA), que consistió en tomar una muestra de 1mL de agua y se colocó en una placa Petri debidamente. UI M. identificada por duplicado, se adicionó a la placa 15 – 20mL. Q. de SA que previamente fue fundido y entibiado a 45ºC, se. BI O. homogenizó con movimientos circulares dejándose solidificar a temperatura ambiente, finalmente se invirtieron las placas e. A. Y. incubaron por 72 - 120 horas a 22,5 ± 2,5ºC para sus lecturas.. AC I.  Prueba para ausencia de patógenos:. M. Pseudomona aureginosa:. FA R. Se agregó 10mL de muestra de agua en un matraz que contiene 100mL de medio TSB. Se mezcló e incubó a 32,5 ±. Escherichia coli: Se agregó 10mL de muestra de agua en un matraz que contiene 100mL de medio caldo MC conkey (MCC). Se. mezcló e incubó a 32,5 ± 2,5ºC por 24 - 48 horas para luego observar si hay crecimiento.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. 2,5ºC por 24 horas para luego observar si hay crecimiento.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Salmonella: Se agregó 10mL de muestra de agua en un matraz que. IC A. contiene 100mL de medio caldo Rappaport – Vassiliadis. Q. para luego observar si hay crecimiento.. UI M. (RVC). Se mezcló e incubó a 32,5 ± 2,5ºC por 24 - 48 horas. Y. A. Control del producto a granel30, 31:. BI O. 2.4.2 Etapa de fabricación:. A. a. Aspecto:. AC I. Se vertió la muestra solicitada a un tubo de ensayo limpio y. M. seco. Se agitó con cuidado la muestra y se observó a trasluz por. FA R. 30 segundos (el producto no debió presentar partículas. DE. extrañas).Finalmente se registró el resultado.. b. Peso específico:. CA. Se seleccionó un picnómetro limpio y seco, debidamente. BI. BL. IO. TE. calibrado. Se llevó el picnómetro a una temperatura de 25°C y se determinó su peso (P) en una balanza analítica previamente verificada. Se llenó el picnómetro con agua purificada, se ajustó la temperatura a 25°C, y luego se determinó su peso (PA) en la balanza analítica. Se llenó el picnómetro con muestra, se ajustó la temperatura a 25°C, y luego se determinó su peso (PM) en la. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. balanza analítica. Calcular el peso específico aplicando la. IC A. siguiente fórmula:. Q. c. pH (primeras unidades envasadas):. UI M. Y finalmente se registró el resultado.. BI O. Se agregó el contenido de la muestra en un vaso de precipitación adecuado, limpio y seco, se verificó que el potenciómetro esté. Y. calibrado. Se llevó la muestra a una temperatura de 25°C y. AC I. A. colocó la sonda de temperatura y el electrodo en el interior del recipiente que contiene la muestra, asegurándose de que estos no. M. toquen el fondo ni las paredes del mismo. El bulbo del electrodo. FA R. debió estar sumergido a unos 4 cm de altura aproximadamente. DE. al momento de la medición. Finalmente se registró el resultado.. CA. d. Biocarga:. BI. BL. IO. TE. A cargo del personal de Control de Calidad se transfirió una alícuota de 10mL de la muestra a un matraz estéril, que contiene 90mL de buffer fosfato estéril con pH 7,2. Se diluyó haciendo. movimientos circulares para luego ser agregado 1mL a placas Petri estériles (trabajar por duplicado para bacterias y hongos). Se adicionó a una placa de petri estéril de 15 a 20mL de TSA que previamente fue entibiado y fundido a 45°C (para bacterias) y se adicionó a una placa de petri de 15 a 20mL de SA que. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. previamente fue entibiado y fundido a 45°C (para hongos). Se homogenizó con movimientos circulares dejando solidificar el. IC A. agar, se invirtieron las placas e incubaron a 32,5 ± 2,5°C por 3 días para bacterias aerobias mesófilas (placas con TSA) y a 22,5. UI M. ± 2,5°C por 5 días para hongos filamentosos y levaduras (placas. Q. con SA).. BI O. Se leyó el número de ufc, se promedió y finalmente se. Y. registraron los resultados.. A. B. Control del área:. AC I. a. Control ambiental (por sedimentación)32:. M. El área de control de calidad preparó placas de sedimentación. FA R. (CC.MB.POE.02, ver en anexo A). Cada placa debió ser expuesta en un área de máximo tráfico de personal. Cada ensayo de exposición de placas debió realizarse por 4horas. DE. (salvo que la operación realizada haya durado menos de 4 horas). CA. bajo condiciones normales de operación. Después de la exposición, se incubaron las placas con TSA en. BI. BL. IO. TE. forma invertida (para prevenir la condensación de gotas de agua sobre la superficie del medio) a 32,5 ± 2,5ºC por 48 horas y se realizaron las lecturas para observar crecimiento de colonias bacterianas (mesófilos aerobios totales). Luego de realizado las lecturas de placas, se colocaron en una incubadora a 22,5 ± 2,5ºC por 72 horas y se realizaron las lecturas para observar crecimiento de hongos filamentosos y. levaduras.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b. Control de superficies (por placa de contacto)33: El área de control de calidad preparó placas de contacto con. IC A. TSA (CC.MB.POE.03, ver en anexo A). Cada placa de contacto rodac se usó exponiendo en contacto la superficie de la placa. UI M. con medio de cultivo a la superficie a muestrear por unos. Q. segundos, se cerró inmediatamente procediendo a su incubación.. BI O. Se incubaron las placas a 32,5 ± 2,5ºC por 48 horas para el recuento bacteriano. Para el recuento de hongos y levaduras se. Y. incubaron a 22,5 ± 2,5ºC por 72 horas. Se leyeron los recuentos. A. en la placa y se calcularon los resultados (para superficies. AC I. regulares) multiplicando el número de colonias obtenidas (ufc). M. por el factor de dilución, por el volumen de solución diluyente. FA R. utilizada en el muestreo (10mL) y se dividió entre el área de la. DE. superficie muestreada (100cm2).. c. Control del personal33:. BI. BL. IO. TE. CA.  Por placa de contacto: El área de control de calidad preparó placas de contacto similar al control de superficies. Cada placa de contacto rodac debió ser identificada con el nombre del operario, labor realizada,. producto,. lote. del. producto,. fecha,. hora,. responsable y superficie del uniforme o guantes muestreados. Él personal de control de calidad ingresó a la esclusa III habiéndose colocado antes el uniforme estéril, se procedió a. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. exponer en contacto la superficie de la placa con medio de cultivo a la superficie a muestrear por unos segundos, se. IC A. cerró inmediatamente para su incubación. Se incubaron las placas a 32,5 ± 2,5ºC por 48 horas para el. UI M. recuento microbiano. Para el recuento de hongos y levaduras. Q. se incubaron a 22,5 ± 2,5ºC por 72 horas. Se leyeron los. BI O. recuentos en la placa y se calcularon los resultados (para superficies regulares) multiplicando el número de colonias. Y. obtenidas (ufc) por el factor de dilución, por el volumen de. A. solución diluyente utilizada en el muestreo (10mL) y se. M. AC I. dividió entre el área de la superficie muestreada (100cm2).. FA R.  Ingreso y Salida del área: Se reportó el ingreso y salida del personal para cada proceso. DE. realizado detallando la fecha, hora de ingreso, hora de salida,. CA. nombre del personal responsable y actividad realizada.. TE. 2.4.3 Etapa de Envasado. BI. BL. IO. A. Control del producto envasado:. a. Puntos de muestreo fisicoquímico (21 puntos) 30:  Aspecto Se vertió la muestra solicitada a un tubo de ensayo limpio y seco. Se agitó con cuidado la muestra y se observó a trasluz. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. por 30 segundos (el producto no debió presentar partículas. IC A. extrañas).Finalmente se registró el resultado..  Peso específico. UI M. Se seleccionó un picnómetro limpio y seco, debidamente. Q. calibrado. Se llevó el picnómetro a una temperatura de 25°C. BI O. y se determinó su peso (P) en una balanza analítica previamente verificada. Se llenó el picnómetro con agua. Y. purificada, se ajustó la temperatura a 25°C, y luego se. A. determinó su peso (PA) en la balanza analítica. Se llenó el. AC I. picnómetro con muestra, se ajustó la temperatura a 25°C, y. M. luego se determinó su peso (PM) en la balanza analítica.. FA R. Calcular el peso específico aplicando la siguiente fórmula:. CA. DE. Y finalmente se registró el resultado.. BI. BL. IO. TE.  pH: Se agregó el contenido de la muestra en un vaso de precipitación adecuado, limpio y seco, se verificó que el potenciómetro esté calibrado. Se llevó la muestra a una temperatura de 25°C, se colocó la sonda de temperatura y el electrodo en el interior del recipiente que contiene la muestra. El bulbo del electrodo debió estar sumergido a unos 4 cm de altura en la medición. Finalmente se registró el resultado.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Hermeticidad: En una cámara de vacío, que contiene agua con azul de. IC A. metileno (10mg/L), se sumergieron las unidades muestreadas, se les aplicó una presión negativa aproximada de -15 a -. UI M. 20inHg por 5 minutos, luego se enjuagaron la unidades. BI O. Q. muestreadas con agua purificada y se observan a tras luz.. b. Puntos de muestreo microbiológico (5000 unidades):. Y.  Esterilidad 6,12, 25:. A. El personal responsable de control de calidad y el personal. AC I. de validaciones colocaron las unidades envasadas a incubar a. M. una temperatura de 22,5 ± 2,5ºC por 7días y se realizaron las. FA R. lecturas para observar crecimiento de colonias bacterianas (Mesófilos aerobios totales).. DE. Luego se colocaron a una temperatura de 32,5 ± 2,5ºC (por. BI. BL. IO. TE. CA. 7días siguientes) y se realizaron las lecturas para observar crecimiento. de. Hongos. Filamentosos. y. Levaduras.. Finalmente se reportaron resultados. Control Positivo: Se realizó la contaminación en un scraper de 30 unidades exponiendo el medio de cultivo al medio ambiente luego de haber sido incrustado con una aguja hipodérmica de 1/2´´. Luego de continuo con la incubación a 22,5 ± 2,5ºC y 32,5 ± 2,5ºC (por 7 días cada una) mencionada líneas arriba.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. Control de esterilidad de producto residual en válvulas críticas25, 34:. IC A. La prueba estuvo a cargo del personal responsable de control de calidad la cual se desarrolló en el área estéril de microbiología. Se. UI M. sanitizó la mesa con alcohol 70º estéril, se verificó que la. Q. membrana filtrante esté en buenas condiciones, se colocó la cámara. BI O. superior y apretó con la mano el anillo de fijación, se procedió a humedecer el filtro de membrana con ± 200mL de peptona al 0,1%. Y. y conectar el suministro de vació a uno de los brazos laterales de la. A. unidad filtrante.. AC I. Se transfirió el contenido de la muestra al filtro, aplicando vacío,. M. seguidamente se lavó la membrana cinco veces con polisorbato 80. FA R. al 1º%. Luego se removió la membrana con ayuda de las pinzas, se cortó en dos mitades y se sumergió la primera mitad en ± 50mL de. DE. TSB, se incubó a 22,5 ± 2,5ºC por 14 días, de igual manera, se sumergió la mitad restante de la membrana en ± 50mL de caldo. TE. CA. Tioglicolato (TC), se incubó a 32,5 ± 2,5ºC por 14 días.. BI. BL. IO. C. Control del área: a. Control ambiental (por sedimentación) 32: El área de control de calidad preparó placas de sedimentación (CC.MB.POE.02, ver en anexo A). Cada placa debió ser expuesta en un área de máximo tráfico de personal.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cada ensayo de exposición de placas debió realizarse por 4horas (salvo que la operación realizada haya durado menos de 4 horas). IC A. bajo condiciones normales de operación. Después de la exposición, se incubó las placas con TSA en. UI M. forma invertida (para prevenir la condensación de gotas de agua. sobre la superficie del medio) a 32,5 ± 2,5ºC por 48 horas y se. BI O. bacterianas (mesófilos aerobios totales).. Q. realizaron las lecturas para observar crecimiento de colonias. Luego de realizado las lecturas de placas, se colocaron en una. Y. incubadora a 22,5±2,5ºC por 72 horas y se realizaron las lecturas. AC I. A. para observar crecimiento de hongos filamentosos y levaduras.. M. b. Control de superficies (por placa de contacto) 33:. FA R. El área de control de calidad preparó placas de contacto con TSA (CC.MB.POE.03, ver en anexo A). Cada placa de contacto. DE. rodac se usó exponiendo en contacto la superficie de la placa con medio de cultivo a la superficie a muestrear por unos. CA. segundos, se cerró inmediatamente procediendo a su incubación.. BI. BL. IO. TE. Se incubaron las placas a 32,5 ± 2,5ºC por 48 horas para el recuento bacteriano. Para el recuento de hongos y levaduras se incubaron a 22,5 ± 2,5ºC por 72 horas. Se leyeron los recuentos en la placa y se calcularon los resultados (para superficies regulares) multiplicando el número de colonias obtenidas (ufc) por el factor de dilución, por el volumen de solución diluyente utilizada en el muestreo (10mL) y se dividió entre el área de la superficie muestreada (100cm2). 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c. Control del personal 33:  Por placa de contacto. IC A. El área de control de calidad preparó placas de contacto con TSA similar al control de superficies. Cada placa de contacto. realizada,. producto,. lote. del. UI M. rodac debió ser identificada con el nombre del operario, labor producto,. fecha,. hora,. Q. responsable y superficie del uniforme o guantes muestreados.. BI O. Él personal de control de calidad ingresó a la esclusa III habiéndose colocado antes el uniforme estéril, se procedió a. A. Y. exponer en contacto la superficie de la placa con medio de. AC I. cultivo a la superficie a muestrear por unos segundos, se cerró inmediatamente para su incubación.. M. Se incubaron las placas a 32,5 ± 2,5ºC por 48 horas para el. FA R. recuento microbiano. Para el recuento de hongos y levaduras se incubaron a 22,5 ± 2,5ºC por 72 horas. Se leyeron los. DE. recuentos en la placa y se calcularon los resultados (para. BI. BL. IO. TE. CA. superficies regulares) multiplicando el número de colonias obtenidas (ufc) por el factor de dilución, por el volumen de solución diluyente utilizada en el muestreo (10mL) y se dividió entre el área de la superficie muestreada (100cm2)..  Ingreso y Salida del área: Se reportó el ingreso y salida del personal para cada proceso realizado detallando la fecha, hora de ingreso, hora de salida, nombre del personal responsable y actividad realizada.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5. Plan de muestreo y especificaciones 24: El plan de muestreo permite controlar y cuantificar los atributos de calidad. IC A. inherentes al producto a lo largo del proceso de manufactura; se tomó en cuenta los puntos críticos para establecer las muestras a tomar y sus. Y. a. Especificación (USP 36):. Q. A. Control del medio de cultivo 25, 26:. BI O. 2.5.1 Etapa previa al proceso de manufactura:. UI M. especificaciones necesarias.. A. - Medio apto para el uso con calificativo:. AC I. Cuadro 03. Especificación del control del medio de cultivo Calificativo. FA R. M. Muy Bueno Bueno. Medio Abundante turbidez a las 24 – 48 horas Turbidez Abundante a las 48 – 72 horas. DE. Fuente: Tomado de laboratorio VITALINE S.A.C.. b. Muestreo:. CA. Se muestreo los envases Nº6 y Nº7 de medio TSB.. BI. BL. IO. TE. B. Control de agua purificada25, 28, 29, 35: El muestreo correspondiente a la etapa previa a la preparación del medio de cultivo consiste en el análisis fisicoquímico y microbiológico de muestras de los puntos de suministro de agua purificada, punto 9 (PM9) de fabricación y punto 11 (PM11) de envasado, y steam cup (SC) de enjuague en la preparación de la máquina BFS 624 (Steam Cup). El analista se dirigió a la zona de. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.