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"Control Biológico Phytophthora infestans en Lycopersicum esculentum "tomate" por microorganismos productores de Biosurfactantes"

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(1)DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AC I. Ó. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Y. CO. M UN. Dr. Orlando Velásquez Benites. IC. A. VICERRECTOR ACADEMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IN. FO. RM. ÁT. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. DE. VICERRECTOR ADMINISTRATIVO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. EM AS. TRUJILLO. SI. ST. Dra. Flor Luna Victoria Mori. Dr. Hermes Mario Escalante Añorga. DI. RE. CC. IO. N. DE. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIA BIOLÓGICAS. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. Ó. N. El que suscribe, asesor de la tesis Control Biológico de Phytophthora. IC. AC I. infestans en Lycopersicum esculentum “Tomate” por microorganismos. M UN. productores de biosurfactantes.. CO. CERTIFICA. IC. A. Y. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su respectivo. RM. ÁT. proyecto y con las orientaciones pertinentes a la tesista.. FO. El informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo mis. IN. observaciones y sugerencias, por lo que autorizo al Bachiller ROXANA VERA. DE. CASTILLO. para. continuar. con. los. trámites. EM AS. MILAGROS. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. correspondientes.. Ms.C. Julio Cèsar Arellano Barragán Profesor Del Departamento De Química Biológica –CC.BB Universidad Nacional De Trujillo. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. PRESENTACION. En cumplimiento con lo. M UN. IC. Señores miembros del jurado:. dispuesto con el Reglamento General para el. CO. otorgamiento del Titulo Profesional de la UNIVERSIDAD NACIONAL DE. IC. A. Y. TRUJILLO, me permito someter a vuestra consideración la TESIS. RM. ÁT. TITULADA:. FO. Control Biológico de Phytophthora infestans en Lycopersicum esculentum. DE. IN. “Tomate” por microorganismos productores de biosurfactantes.. EM AS. Propongo el presente trabajo a vuestro criterio y consideración para que con. SI. correspondiente.. ST. serenidad y justicia que ustedes poseen, sea evaluado y se emita el dictamen. DI. RE. CC. IO. N. DE. Trujillo, Abril De 2013. Roxana Milagros Castillo Vera Bachiller en Ciencias Biológicas. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LOS ILUSTRÍSIMOS MIEMBROS DEL JURADO DAN POR. Ó. N. APROBADO EL PRESENTE TRABAJO PARA LO CUAL ESTAMPAN. Y. CO. M UN. IC. AC I. SU FIRMA. ÁT. IC. A. Dr. Marco Salazar Castillo. EM AS. DE. IN. FO. RM. PRESIDENTE. SECRETARIO. Dr. Carlos Nomberto Rodríguez. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Ms.C. Julio Arellano Barragán. VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. DEDICATORIA. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. Mi DIOS, tú que todo lo puedes, hiciste que cada una de mis metas hasta ahora hayan sido alcanzadas, sabes que mi amor es incondicional y mi agradecimiento infinito por que todo es por ti y para ti. TE AMO. Federico y Marlene. Nunca pensé poder devolver algo de lo que me ofrecieron, más que mi triunfo es el triunfo del amor, del amor que me ofrecen día a día y que alimenta mis ganas de hacer bien las cosas. Dios permita nunca defraudarlos y ofrecerles mas alegrías, porque se merecen lo mejor en esta vida. Va por ustedes, por que lo valen, por que admiro su fortaleza y por lo que han hecho de mí.. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. A mis padres:. RE. Muchas Gracias. DI. Los Amo.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. A mis hermanos:. IC. Carlos y Cecilia. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. Por su cariño, paciencia y apoyo para alcanzar con éxito mis objetivos, ya que son los motores emocionales en mi vida. Los amo. A mi Mamá Melita y mi Tía Isabel por su apoyo incondicional y por estar siempre conmigo. Las Quiero Mucho. ST. EM AS. Gracias. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. A mis amigas: Lady, Jheny, Gaby, Sandra, Claudia y Vanessa por confiar en mí y apoyarme en el desarrollo de esta tesis, Las Quiero chicas.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. N. A Dios por día a día demostrarme que con humildad, paciencia y sabiduría todo es. M UN. IC. AC I. Ó. posible.. A mi maestro, amigo y guía Julio César Arellano Barragán por su paciencia, tiempo y. CO. dedicación para el desarrollo de la presente tesis, así como; en mi desarrollo personal y. IC. A. Y. profesional.. ÁT. De manera especial a mis padres por su incondicional apoyo en la presente tesis, así como. Gracias por confiar en mí.. DE. IN. FO. RM. en mis estudios profesionales.. EM AS. Al Fitopatólogo Wilmer Pérez del Centro Internacional de la Papa por las facilidades. ST. brindadas para la culminación de la presente tesis.. DE. IO. N. investigación.. SI. Al equipo técnico de Departamento de Microbiología por el apoyo en el desarrollo de mi. de ustedes.. DI. RE. CC. Mil palabras no bastarían para expresarles mi agradecimiento, Dios bendiga a cada uno. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. AC I. Ó. N. AUTORIDADES………………………………….………………………………………ii. IC. DEL ASESOR…………………………………………………………………………….iii. M UN. PRESENTACIÓN…………………………………………………………………….......iv. CO. FIRMAS DE APROBACIÓN DE TESIS……………………………………...………....v vi. Y. DEDICATORIA. IC. A. AGRADECIMIENTO. RM. ÁT. INDICE. FO. RESUMEN. ix x xi. IN. ABSTRACT. viii. 1. DE. INTRODUCCIÓN. 13. RESULTADOS. 19. ST. EM AS. MATERIAL Y MÉTODOS. 30. SI. DISCUSIÓN. 33. N. DE. CONCLUSIONES. 34. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 35. RE. CC. IO. RECOMENDACIONES. 44. DI. ANEXOS. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Ó. N. El uso de controladores químicos para enfermedades de plantas se ha constituido como una. AC I. de las fuentes de contaminación ambiental y pérdidas económicas, por su rechazo en el. M UN. IC. mercado internacional de productos agrícolas manejados con insumos químicos; por ello el presente trabajo tiene por objeto estudiar la producción de biosurfactantes obtenidos de. CO. microorganismos aislados de suelos agrícolas con miras a su aprovechamiento como. Y. controladores biológicos de Phytophthora infestans causante del Tizón tardío en. IC. A. Lycopersicum esculentum “Tomate”.Para ello se indujo la actividad biosurfactógena de los. RM. ÁT. microorganismos, añadiendo petróleo a 50 000 ppm a suelo agrícola obteniendo 20. FO. aislamientos. Para la selección de los microorganismos productores de biosurfactantes se. IN. sembraron los aislamientos en Agar Sangre, Agar Tween 80 y en un medio que tiene como. DE. única fuente de carbono el petróleo al 10%; de este proceso se seleccionaron quince cepas. EM AS. que resultaron ser biosurfactantes positivas y solo 3 fueron seleccionadas por presentar mayor anillo de emulsificación y mayor halo de hemolisis.Las tres cepas seleccionadas. ST. fueron sometidas a la producción de biosurfactante en un biorreactor conteniendo 50 mL de. DE. SI. un medio líquido, incubado por 7 días a temperatura ambiente y aireación constante. El. N. producto final fue centrifugado a 5 000 rpm por 15 minutos y el sobrenadante fue sometido. CC. IO. a prueba de hemolisis en placa utilizando discos de 5 mm de diámetro obteniendo. RE. resultados positivos.Estos biosurfactantes fueron enfrentados a Phytophthora infestansen. DI. Lycopersicum esculentum “Tomate”, encontrando que tienen un efecto biocontrolador sobre este oomycete inhibiendo su crecimiento y desarrollo de la enfermedad.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. Ó. N. The use of chemical controllers for plant diseases has been established as one of the sources. AC I. of environmental pollution and economic losses for the refusal on the international market. M UN. IC. for agricultural products managed with chemical inputs, hence the present work is to study the production of biosurfactants obtained from microorganisms isolated from agricultural. CO. soils with a view to its use as a biological control of late blight causes Phytophthora. Y. infestans in Lycopersicum esculentum "Tomato." This was induced biosurfactógena activity. IC. A. of microorganisms, adding oil to 50 000 ppm to obtain agricultural land 20 isolates. For. RM. ÁT. selecting microorganisms producing biosurfactants isolates were plated on blood agar,. FO. Tween 80 and in an environment having as sole carbon source oil at 10%, of the process. IN. fifteen strains were selected that proved positive biosurfactants only 3 were selected to. DE. present greater emulsification and higher ring hemolisis. The halo three selected strains. EM AS. were submitted to biosurfactant production in a bioreactor containing 50 mL of a liquid medium, incubated for 7 days at room temperature and constant aeration. The final product. ST. was centrifuged at 5000 rpm for 15 minutes and the supernatant was tested for hemolisis. DE. SI. using plate discs 5 mm in diameter were obtained results biosurfactants positivos. Estos. N. Phytophthora infestans en facing Lycopersicum esculentum "tomato", finding that. DI. RE. CC. IO. impact biocontrol this oomycete inhibiting growth and development of the disease.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCION. Ó. N. El empleo de microorganismos para la producción de compuestos útiles es una actividad. AC I. antigua. Estos organismos han sido empleados por pueblos en todo el mundo para la. M UN. IC. modificación de las propiedades de algunos alimentos y para la producción de bebidas alcohólicas. La existencia de los microorganismos y su participación en transformaciones. CO. químicas fue demostrada por los trabajos pioneros de científicos como Louis Pasteur y. Y. Antonie van Leeuwenhoek. La aplicación de estas herramientas al desarrollo de cepas. IC. A. microbianas de uso industrial, ha ampliado de forma muy importante el tipo y número de. RM. ÁT. productos útiles que pueden ser obtenidos, como los biosurfactantes1.. FO. Los biosurfactantes son agentes anfipáticos, que contienen restos hidrofóbicos o no polares. IN. (soluble en aceite) e hidrofílicos o polares (soluble en agua), con potente actividad. DE. superficial2, 3,4. La solubilidad parcial tanto en agua como en aceite permite al surfactante. EM AS. ocupar la interfase, reducir la tensión superficial y las tensiones interfaciales entre. ST. moléculas individuales en la superficie y la interfase, respectivamente 2.. SI. Estos metabolitos también disminuyen la tensión superficial de la membrana celular de. DE. células eucarióticas y zoosporas de oomycetes, lo que ocasiona lisis de la célula; tal. IO. N. reacción se debe a la capacidad que tienen los surfactantes de intercalarse entre los. CC. componentes estructurales de la membrana plasmática de las zoosporas, característica que. DI. RE. puede ser efectiva para el control de esta clase de patógenos 5.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dependiendo de la orientación del tensoactivo en la micela se obtienen dos tipos de. N. microemulsiones:. AC I. Ó. Microemulsiones de aceite en agua (o/w), o directas, cuando el surfactante está en contacto. IC. con un medio acuoso la parte polar del tensoactivo se orienta hacia el exterior de la micela,. M UN. mientras que la parte no polar se orienta hacia el interior.. CO. Microemulsiones de agua en aceite(w/o), o inversas, en las que el medio continuo es no. Y. polar, la parte no polar del tensoactivo se orienta hacia el exterior y la parte polar va hacia. ÁT. IC. A. el interior de la micela2, 6.. RM. Las propiedades de los biosurfactantes que hacen que se ponga gran énfasis en éstos son. FO. dos fenómenos: la capacidad de adsorberse a las interfases y su tendencia a asociarse para. DE. IN. formar estructuras organizadas.. EM AS. Adsorción: La molécula de biosurfactante se orienta de manera que el grupo polar esté en el agua, mientras que el grupo apolar se ubica "fuera" del agua, en el aire o en el aceite, se. ST. puede decir que la energía libre de una molécula de surfactante a la interfase es inferior a la. SI. de una molécula solubilizada en el seno de una fase acuosa. La transferencia desde el seno. N. DE. de una fase acuosa a la interfase, llamada adsorción es por lo tanto espontánea 2, 7.. CC. IO. Asociación: Cuando a una solución se le añade surfactante, éste comienza por adsorberse a. RE. las interfases disponibles, luego su concentración en forma monomolecular aumenta hasta. DI. que se forman las primeras micelas. La micela es un polímero de asociación en el cual el surfactante alcanza una posición favorable. En solución acuosa la fuerza motriz principal que favorece la formación de micelas es el efecto hidrófobo, es decir, la sustracción de la. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. parte apolar del surfactante del contacto con las moléculas del agua y la formación de un. Ó. N. contacto más favorable con las partes apolares de otras moléculas de surfactante 2, 7.. AC I. La formación de micelas se produce como un compromiso entre dos tipos de efectos: el. IC. hidrófobo, que aumenta con el tamaño de la cadena hidrocarbonada del surfactante y el de. M UN. repulsión entre los grupos hidrofílicos. Los efectos que favorecen la micelización producen. CO. un descenso de la Concentración Micelar Crítica (CMC), que es la concentración mínima. A. Y. de un agente surfactante capaz de formar micelas2, 8.. ÁT. IC. Los biosurfactantes se pueden dividir en dos clases: los de alto peso molecular, que. RM. generalmente son glicolípidos y los de bajo peso molecular, que pueden ser polisacáridos,. FO. proteínas, lipoproteínas o lipopolisacáridos5,9,10,11 y son producidos por organismos vivos. IN. incluyendo animales, plantas y microorganismos, pero en su mayoría son sintetizados. DE. durante el crecimiento microbiano2,3,5,12; así por ejemplo Pseudomonasaeruginosa produce. EM AS. biosurfactante en la parte final de su crecimiento, mientras que Torulopsismagnoliae lo produce durante toda la fase de crecimiento y se estabiliza dicha producción en la fase. SI. ST. estacionaria13. En la Tabla 1 se resumen los principales tipos de biosurfactantes según su. DE. peso molecular y los microorganismos que los producen 9.. IO. N. Los biosurfactantes tienen ventajas sobre los surfactantes químicos en ser biodegradables,. CC. efectivos a temperaturas y pH extremos, presentan una menor toxicidad 4, se pueden obtener. DI. RE. por procesos de fermentación5 y son más activos a bajas concentraciones14.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las condiciones de cultivo son muy importantes en la producción de biosurfactantes, en. N. particular la relación C:N y la velocidad de crecimiento del microorganismo 4,15, estas. AC I. Ó. moléculas de superficie se adaptan a los cambios de sustrato de crecimiento, tienen. IC. estructuras definidas y mejoran la degradación del hidrocarburo por sus propiedades. M UN. emulsificantes16.. CO. Esencialmente existen tres fenómenos que regulan la sobreproducción de biosurfactantes, la. A. Inducción. En general los microorganismos producen biosurfactantes cuando. IC. . Y. inducción, la represión y el efecto de la fuente de nitrógeno y cationes multivalentes.. RM. Represión. La represión catabólica de la síntesis de biosurfactantes por glucosa. FO. . ÁT. crecen a expensas de sustratos inmiscibles en agua 2.. IN. o metabolitos primarios, es uno de los mecanismos regulatorios importantes. DE. encontrados en los microorganismos. La función del biosurfactante está. EM AS. relacionada a la cadena de hidrocarburo, y por lo tanto éste es sintetizado predominantemente por microorganismos degradadores de hidrocarburos2. Efecto de la fuente de nitrógeno y cationes multivalentes. La fuente de nitrógeno. ST. . DE. SI. en el medio juega un papel muy importante en el metabolismo celular,. N. incluyendo la producción de biosurfactantes2.. CC. IO. Si bien, existe interés en sustituir los surfactantes sintéticos por los biosurfactantes, estos. RE. últimos no compiten económicamente y resulta muy compleja y difícil su producción a. DI. gran escala, por lo tanto las investigaciones deben ser orientadas a mejorar los surfactantes sintéticos como por ejemplo en que su estructura sea similar al surfactante natural, que se. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. pueda reutilizar y reciclar, en que no sean tóxicos o bien en buscar sinergias con mezclas de. N. otras sustancias para aminorar los efectos negativos16.. AC I. Ó. Por lo anterior, la producción y el uso de biosurfactantes han adquirido gran interés en el. IC. área biotecnológica, principalmente en aplicaciones ambientales para mejorar la. M UN. biodisponibilidad de compuestos hidrofóbicos3, 13, en procesos de biodegradación y control. CO. biológico.. Y. El cultivo de tomate “Lycopersicum esculentum” constituye una de las actividades agrícolas. IC. A. de mayor importancia para las economías empresarial,familiar y campesina de las zonas. RM. ÁT. altas y frías del País.. FO. Este cultivo se puede sembrar todo el año, pero los problemas cambian según la época, es. IN. así que en el período de lluvias la incidencia de enfermedades es mayor mientras que. DE. durante la época seca las plagas son el mayor problema. Sin embargo dichos problemas son. EM AS. superables mediante un conjunto de prácticas agrícolas que incluyan métodos de manejo y controles adecuados, los cuales tienen que ser realizados en el momento y la forma precisa. ST. en que se indican, ya que de éstas depende el éxito de una buena cosecha 17.El tomate es uno. DE. SI. de los cultivos que más riesgo de contaminación presenta debido al uso excesivo de. N. plaguicidas sobre todo para el control de enfermedades , el cual es más difícil cuando las. DI. RE. CC. IO. condiciones meteorológicas son favorables a los patógenos.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA 1: PRINCIPALES BIOSURFACTANTES Y MICROORGANISMOS PRODUCTORES 9.. BIOSURFACTANTE. MICROORGANISMO. Ó. N. CLASE. Pseudomonasa eruginosa. Lípidos de trehalosa. Arthrobacter paraffineus. M UN. IC. AC I. Rhamnolípidos. Rhodococcus erythropolis. IC. Candida lipolytica. Torulopsis bombicola. FO. RM. ÁT. Lípidos de soforosa. A. Y. CO. Mycobacterium spp.. IN. Viscosin. Surfactin. DE. Bajo peso. Polimixinas. EM AS. molecular. Bacillus subtilis Bacillus polymyxa Bacillus brevis. Acinetobacter spp. Fosfolípidos. Thiobacillus thiooxidans. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Gramicidin S. Pseudomonas fluorescens. Bacillis pumilis. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Lipopéptidos. Bacillus licheniformis. AC I. Ó. N. Pseudomonas fluorescens. IC. Rhodotorula glutinis. Rhodotorula graminis. Serrawettin. Serratia marcescens. Y. CO. M UN. Lípidos de polioles. Corynebacterium lepus. IC. A. Ácidos grasos. FO. RM. ÁT. Arthrobacter parafineus. Talaromyces trachyspermus Capnocytophaga spp.. EM AS. DE. IN. Sulfonilípidos. Penicillium spiculisporum. Diglicosildiglicéridos. Acinetobacter adioresistens Acinetobacter calcoaceticus. Biodispersan. Acinetobacter calcoaceticus. Liposan. Candida lipolytica. molecular. Lipoproteínas de manano. Candida tropicalis. Emulsificante de alimentos. Candida utilis. Acetil heteropolisacárido. Sphingomonas paucimobilis. DI. RE. IO. N. Alto peso. DE. SI. Emulsan. CC. ST. Alasan. Lactobacillus fermentii. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tizón tardío (Phytophthora infestans) es una de las enfermedades más severas de este. N. cultivo. Para su manejo, los productores orgánicos recurren a controladores biológicos,. AC I. Ó. extractos naturales, fertilización orgánica y prácticas agrícolas que en forma directa o. IC. indirecta les permitan combatir la enfermedad13, 14,18.. M UN. Puede aparecer en las hojas, tallos y frutos. Cuando se presenta en las hojas aparece una. CO. mancha acuosa de color café oscuro. Con mucha humedad se puede observar el hongo en. Y. forma de vello grisáceo en el envés de las hojas. En el tallo la mancha se observa hundida y. IC. A. si hay humedad se pueden observar el micelio. En los frutos tiernos primero la mancha es. ÁT. difusa de color café suave, luego la mancha se hunde adquiriendo un color café oscuro y el. FO. RM. fruto muere17, 18.. IN. El patógeno P. infestans pertenece al reino Chromista (grupo Stamenophyle) y a la clase. DE. Oomycete; los microorganismos pertenecientes a este grupo se caracterizan porque la pared. EM AS. celular tiene celulosa, son diploides, el micelio no tiene septas y son bisexuales; en efecto, su reproducción puede ser sexual (heterotálicos) y asexual (homotálicos), además posee. ST. gran plasticidad genética y altos niveles de virulencia sobre diversas plantas solanáceas ,. DE. SI. puede afectar a la papa, pero también se han reportado daños en cultivos de tomate. N. (Lycopersicum esculentum), tomate de árbol (Lycopersicum betaceum) y lulo. IO. (Lycopersicum quitoense). Ya que P. infestanses considerado como una amenaza para la. CC. seguridad alimentaria mundial, es uno de los fitopatógenos más estudiados en su. DI. RE. reproducción, fisiología y procesos infectivos 4, 5, 14,19.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La reproducción asexual de P. infestans ocurre por medio de un zoosporangio que, bajo. N. condiciones ambientales de temperatura entre 12 y 15ºC y humedad relativa de 95 al100%,. AC I. Ó. liberan zoosporas móviles cuyos flagelos son característicos y distintivos de la especie 20,. IC. Fig.1. Cuando los esporangios de P. infestans germinan a temperaturas entre 12 a 15°C. M UN. producen de tres a ocho zoosporas móviles a causa del fraccionamiento del citoplasma. CO. multinucleado en células uninucleadas carentes de pared celular. Después de aproximadamente una hora de movilidad, las zoosporas se enquistan, pierden los flagelos,. IC. A. Y. desarrollan una pared celular y germinan emitiendo el tubo germinativo 21, además el agua. ÁT. es un mecanismo de transporte de las esporas, por lo tanto, en época lluviosa y con campos. RM. mal drenados se favorece la enfermedad. El salpique del suelo por la lluvia es otro factor. FO. para que la enfermedad aparezca y los frutos tiernos que aún no poseen cera son fácilmente. DE. IN. atacados17, 22.. EM AS. En países desarrollados, la enfermedad es controlada con relativa facilidad mediante el empleo de fungicidas, pero en países en desarrollo, el alto costo de los mismos limita su. ST. utilización. Esto es agravado por factores climáticos muy favorables para el desarrollo de. SI. la enfermedad y continuidad del cultivo, desconocimiento de estrategias de aplicación de. DE. fungicidas apropiadas para el tizón, uso irracional de los fungicidas, y desconocimiento de. IO. N. las consecuencias de fungicidas químicos23.Actualmente se trata de eliminar el control. CC. químico y reemplazarlo por un control biológico evitando así se forme una resistencia por. DI. RE. P. infestans.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM AS. Figura 1. Ciclo de la Gota o Tizón tardío por Phytophtorainfestansen la planta de papa.. SI. ST. (Tomado de Agrios, 2005).. DE. En México se ha demostrado que el biosurfactante que sintetiza Penicillium sp. , tiene la. N. propiedad de emulsificar los hidrocarburos que contiene el diesel y además podría utilizarse. CC. IO. como emulsificante de hidrocarburos aromáticos y alifáticos (de c9 y c20), ya que el diesel. RE. esta constituido en su mayoría por éstos3, se debe tener en cuenta además, que la limitación. DI. de las fuentes de nitrógeno en el medio de cultivo favorece la producción de dicho biosurfactante24.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Por otro lado , se estudió el biosurfactante producido por Torulopsis magnoliae que es. N. capaz de disminuir la tensión superficial del agua hasta en 40 dinas, lisa glóbulos rojos y. AC I. Ó. forma rápidamente emulsiones acuosas de petróleo pesado , además se observó una. IC. actividad antibacteriana y antifúngica, dicho surfactante deja de producirse inmediatamente. M UN. en ausencia del sustrato (azúcares de melaza)13.. CO. Existen pocos hongos productores de biosurfactantes, mientras que hay una amplia. Y. variedad de bacterias capaces de producirlos, donde Pseudomonas, Bacillus, Acinetobacter. ÁT. IC. A. y Candida son los géneros más versátiles en la producción de biosurfactantes.. RM. En Colombia se realizó un trabajo donde se utilizó biosurfactantes bacterianos activos. FO. contra zoosporas P. infestans (Mont.) De Bary, produciendo la inmovilidad de éstas a los 2. IN. minutos después de entrar en contacto y la lisis total antes de los 5 minutos , el. DE. biosurfactante obtenido tiene la capacidad de retrasar el crecimiento de P. infestans debido. EM AS. a que no solo tiene acción sobre oosporas sino también sobre otras estructuras como las hifas5.Así mismo; Bacillus subtilis logró producir grandes cantidades de biosurfactante a. SI. DI. RE. CC. IO. N. DE. la producción4.. ST. diferentes concentraciones de C.N, demostrando así la relación que existe entre el sustrato y. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBJETIVO GENERAL. Ó. N. Determinar si los biosurfactantes producidos por microorganismos de suelos. M UN. IC. AC I. agrícolas son capaces de controlar a P. infestans.. CO. OBJETIVOS ESPECIFICOS. IC. A. Y. Aislar microorganismos de suelos agrícolas.. RM. ÁT. Evaluar la capacidad biosurfactógena de los microorganismos.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. Producir biosurfactantes.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. MATERIALES Y METODOS. IC. AC I. Ó. MATERIAL:. . M UN. Cultivo de Phytophtora infestans colectado de tomate en Ica en el año 1996,. CO. perteneciente al linaje clonal EC-1, proporcionado por el Centro. Y. Internacional de la Papa (CIP) en Agar V8. . IC. A. Microorganismos productores de biosurfactante aislados de suelos agrícolas. ÁT. contaminados con hidrocarburo. . FO. RM. Semillas de Lycopersycum esculetum “Tomate”.. EM AS. DE. IN. METODO:. a) Inducción de actividad biosurfactógena. ST. Se tomaron muestras de suelo agrícola, obteniéndose un total de 10 Kg de. SI. suelo.El procesamiento en el laboratorio implicó el acondicionamiento del. DE. suelo humedecido en muestras de 1 Kg cada una con 50 000 ppm de. DI. RE. CC. IO. N. petróleo25. Para la inducción de la actividad biosurfactógena se dejó en reposo 15 días para favorecer la utilización del hidrocarburo por parte de los microorganismos. La humedad no fue un parámetro que se controló cuantitativamente sino que, se reguló de manera cualitativade acuerdo a las. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. necesidades el suelo; es decir no se permitió observar sequedad en el suelo. AC I. Ó. N. se le agregó agua hasta humedecerlo sin crear excesos. 26. IC. b) Aislamiento de microorganismos del suelo. M UN. Se realizó el aislamiento de microorganismos de suelos por triplicado ,10. CO. gramos de las muestras se llevaron a 90 mL de Agua Peptonada al 0.1% relación 1:1 y se mantuvo en reposo durante 15 minutos, realizándose luego. A. Y. diluciones 1:10 inciando desde la dilución 10-1 hasta la dilución 10-7 en para sembrar por. ÁT. IC. tubos con 9 mL de Agua Peptonada al 0.1%27,. RM. incorporación en Agar nutritivo28 y Agar papa-dextrosa29de las dos últimas. FO. diluciones e incubarse por 48 horas a 37°C y 30°C respectivamente 3,14.. IN. Luego se realizo las observaciones macroscópicas y microscópicas mediante. DE. tinción Gram30de las colonias, para obtener cultivos puros, obtenidos éstos. ST. EM AS. se procedió a evaluar su capacidad biosurfactógena.. SI. c) Evaluación de microorganismos con potencial biosurfactante. DE. Para realizar la selección inicial de microorganismos productores de. IO. N. biosurfactantes, los aislamientos se sembraron en tres medios de cultivo. DI. RE. CC. diferentes para su identificación presuntiva. El primer medio fue un medio cuya única fuente carbono es el petróleo al 10 % y con ello se verifica la tolerancia de los microorganismos a los hidrocarburos30, 31.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Luego se sembró en el segundo medio Agar Tween 80® para observar la. N. producción de enzimas lipasas mediante la formación de un halo blanco de. AC I. Ó. precipitación de cristales de calcio que indican la degradación de los lípidos. IC. del medio para la síntesis de ácidos grasos que conforman la molécula del. M UN. biosurfactante5 y el tercer medio fue Agar con 5% de sangre en incubación. CO. por 48 h a 30°C33.. Y. Identificados los microorganismos productores de biosurfactantes se. RM. d) Producción de biosurfactante. ÁT. IC. A. procedió a la producción del metabolito.. FO. Los inóculos de cada uno de los diferentes microorganismos en una 34. (Nefelometría) , se. DE. IN. concentración de 1x108 microorganismos ml-1. colocaron con 50 mL de medio de producción (MP) que contiene peptona 5. EM AS. g/L, extracto de levadura 3 g/L y glicerol 10 g/L.. ST. El pH inicial fue de 5,0 para las levaduras y de 7,0 para las bacterias. Este. SI. medio fue esterilizado y una vez inoculados, los cultivos se incubaron a. DE. 30°C y a las 48 horas se centrifugaron a 5000 x g durante 15 min 13, siendo. IO. N. estos centrifugados posteriormente filtrados.. DI. RE. CC. A diferentes tiempos durante la producción se retiro muestra de 1 ml para realizar observaciones microscópicas y comprobar que la morfología de los microorganismos fuera similar al inicio y final de la producción para eliminar posibilidad de contaminación13.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El sobrenadante de cada una de las cepas que fue filtrado y sometido a la. AC I. Ó. N. evaluación de la capacidad emulsificante.. IC. e) Evaluación de la capacidad emulsificante. M UN. En un tubo de ensayo se adiciono 0.5 mL del sobrenadante del caldo. CO. obtenido en la centrifugación, 0,5 mL de petróleo y 4 mL de agua destilada;. Y. cada tubo se agito por 1 min y luego de un período de reposo (24 horas) se. IC. A. realizo la lectura observando el anillo de emulsificación presente en cada. ÁT. tubo.. RM. Adicionalmente se estimo la calidad de la emulsificación al observar si se. FO. desestabilizaba el anillo formado al agitar fuertemente los tubos 5, 35,36.. DE. IN. También se evaluó la capacidad hemolítica del biosurfactante, colocando discos de 5 mm de diámetro embebidos con dicho metabolito en Agar. ST. EM AS. sangre e incubando por 48 horas a 37 °C 33.. SI. f) Actividad biocontroladora de los biosurfactantes contra Phytophthora. DE. infestans en tomate “Lycopersicum esculentum”.. IO. N. La capacidad de los biosurfactantes para controlar la infección de Gota o. DI. RE. CC. Tizón tardío se evaluó en tres tratamientos, para ello se utilizaron plántulas de tomate de 3 semanas de edad37, 38, a las cuales se le aplicaron prácticas. agronómicas para evitar plagas y enfermedades.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para los controles se siguió el siguiente protocolo: Control 2. Control 3. Plántula de tomate. Plántula de tomate sana. Plántula de tomate sana. sana de 3 semanas.. de 3 semanas.. de 3 semanas.. IC. AC I. Ó. N. Control 1. M UN. Añadir. P. infestans (1x 104. CO. Hidrocarburo (50 000. esporangios.mL-1),. raíz en suelo.. añadir junto a la raíz en. IC. A. -. Y. ppm), añadir junto a la. ÁT. suelo.. DE. IN. FO. RM. Evaluar a los 14 días.. EM AS. Mientras que para los problemas se tuvo en cuenta el siguiente protocolo: PROBLEMA 2. SI. ST. PROBLEMA 1. DE. Plántula de tomate sana de 3 semanas. CC. IO. N. semanas con P. infestans (1x 104 esporangios.mL-1), añadir. Añadir. junto a la raíz en suelo.. RE DI. Plántula de tomate sana de 3. Microorganismos productores de biosurfactantes.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Añadir durante 7 días. P. infestans (1x 104 esporangios.mL-1),. 50 mL biosurfactante al suelo.. IC. AC I. Ó. N. 7 días incubar y añadir. CO. M UN. añadir junto a la raíz en suelo.. primer problema se evaluó la actividad de los microorganismos. ÁT. En el. IC. A. Y. INCUBAR 7 DIAS Y EVALUAR. RM. productores de biosurfactantes, dichos microorganismos (10 4 UFC/g de suelo) 38. FO. fueron agregados a las raíces de las plántulas de tomate, luego de siete días se y se evaluó durante 7 días39. DE. IN. agregóP. infestans (1x 104 esporangios.mL-1). EM AS. adicionales y en el segundo problema se determinó la actividad de los biosurfactantes; para ello a plántulas de tomate sanas de 3 semanas se le agregóP.. ST. infestans (1x 104 esporangios.mL-1) y cada día durante 7 días se le aplicó por. SI. riego 50 mL de biosurfactantes39; para evaluar durante 7 días adicionales.. DE. Todos los ensayos, se incubaron a temperatura ambiente (18+ 2°C). 5, 20,40. y se. IO. N. evaluó el daño foliar y radicular a las plántulas de tomate.. DI. RE. CC. El suelo de las plántulas tratadas con P. infestans se colocó en placas estériles para observar el crecimiento del oomycetecon el objetivo de recuperar el microorganismo, luego de 4 días a temperatura ambiente (25 +/-2) se sembró el suelo de las placas anteriores en Agar papa a 30 °C por 7 días.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Ó. N. De la muestra de suelo agrícola con hidrocarburo se aisló 22 microorganismos a los cuales. AC I. se les codificó, para facilitar su identificación, se realizaron pruebas de selecciónen. M UN. IC. búsqueda de microorganismos productores de biosurfactantes. Según las características. CO. morfológicas halladas el 100% corresponde a cocos Gram negativos.. TABLA 2: CARACTERÍSTICAS MICRO Y MACROMORFOLOGICAS DE LOS. IC. A. Y. MICROORGANISMOS AISLADOS. MACROMORFOLOGIA. RCV -1. Borde entero, blanca, circular. IN. FO. RM. ÁT. CEPA. DE. y lisa.. Borde entero, blanca, circular. EM AS. RCV -2. IO. N. DE. RCV -4. SI. ST. RCV -3. DI. RE. CC. RCV -5. RCV -6. MICROMORFOLOGIA. Gram negativo, cocos en cadena. Gram negativo, cocos aislados.. y lisa.. Borde entero, blanca, circular. Gram negativo, cocos. y lisa.. agrupados.. Borde entero, blanca, circular. Gram negativo, cocos aislados. y lisa.. y en pares.. Borde entero, beige, circular ,. Gram negativo, cocos aislados.. lisa y puntiforme. Borde entero, blanca, circular. Gram negativo, cocos aislados.. y lisa.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RCV -7. Borde entero, beige, circular y. Gram negativo, cocos aislados.. Gram negativo, cocos aislados.. Ó. Borde lobulado, beige, circular. AC I. RCV -8. N. lisa.. Borde entero, blanca, circular. Gram negativo, cocos aislados.. M UN. RCV -9. IC. y lisa.. y lisa.. y en pares.. Y. Gram negativo, cocos aislados. Borde lobulado, blanca,. ÁT. IC. RCV -11. Borde entero, blanca, circular. A. RCV -10. RM. circular y lisa.. Borde entero, blanca, circular. FO. RCV -12. DI. RE. CC. IO. RCV -16. RCV -17. y en pares. Gram negativo, cocos aislados y en pares.. Borde lobulado, blanca,. Gram negativo, cocos aislados. circular y lisa.. y en pares.. Borde entero, beige, circular y. Gram negativo, cocos aislados. lisa.. y en pares.. Borde entero, blanca, circular. Gram negativo, cocos aislados. y lisa.. y en pares.. Borde entero, crema, circular y. Gram negativo cocos aislados. lisa.. y en pares.. Borde entero, crema, circular y. Gram negativo, cocos aislados.. IN N. EM AS. DE. SI. ST. RCV -14. Gram negativo, cocos aislados. y lisa.. DE. RCV -13. RCV -15. CO. y lisa.. lisa.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RCV -18. Borde entero, beige, circular y. Gram negativo, cocos aislados.. Borde entero, crema, circular y. Gram negativo, cocos aislados.. IC. RCV -19. AC I. Ó. N. lisa.. Borde entero, beige, circular y. Gram negativo, cocos aislados.. CO. RCV -20. M UN. lisa.. lisa.. A. ÁT. circular y lisa.. Gram negativo, cocos en. Y. Borde lobulado, blanca,. IC. RCV -21. Borde entero, blanca, circular. RM. RCV-22. Gram negativo, cocos agrupados.. DE. IN. FO. y lisa.. cadena.. EM AS. En la selecciónde microorganismos productores de biosurfactantes se sembraron los microorganismos aislados en medio con petróleo, para evaluar la capacidad de. ST. adaptación de éstos a los hidrocarburos, pero esta no fue la única prueba para. SI. seleccionar cepas con actividad surfactante y, por lo tanto, se continuó el estudio. DI. RE. CC. IO. N. DE. con otros procedimientos de selección.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA 3: CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS EN MEDIO CON. CEPA. MEDIO CON. PETROLEO. CEPA. MEDIO CON. AC I. MEDIO CON. PETROLEO. PETROLEO. +. RCV-9. -. RCV-17. RCV-2. +. RCV-10. +. RCV-18. RCV-3. -. RCV-11. -. RCV-4. +. RCV-12. +. RCV-5. -. RCV-13. RCV-6. -. RCV-14. RCV-7. +. RCV-15. RCV-8. +. RCV-16. CO. M UN. RCV-1. IC. CEPA. Ó. N. PRETROLEO.. + -. -. RCV-21. +. +. RCV-22. -. FO. RM. IC. A. +. + +. DE. IN. RCV-20. ÁT. Y. RCV-19. +. EM AS. Leyenda:+/- Crecimiento en medio con petróleo. sobre agar sangre y se obtuvo 18 microorganismos (82%) que. ST. Para esto se sembró. SI. produjeron halo de hemólisis. El diámetro del halo de hemolisis constituyó un criterio de. DE. orientación hacia los posibles resultados en los siguientes ensayos de evaluación de. IO. N. actividad de biosurfactante: a mayor halo hemolítico, mayor cantidad de biosurfactante. CC. producido, también se constató la actividad lipolítica de los aislamientos sembrados en agar. RE. Tween 80 observándose la presencia de una zona blanca de cristales de calcio precipitados. DI. alrededor de la colonia, los mismos que muestran relación con los datos obtenidos en la actividad hemolítica.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA. 4:. CAPACIDAD. HEMOLÍTICA. Y. LIPOLÍTICA. DE. LOS. HEMOLISIS(cm). (Capacidad lipolítica). AC I. AGAR TWEEN 80. +. 0.50. RCV -2. +. 0.60. RCV -3. -. -. RCV -4. -. -. RCV -5. +. 0.40. -. RCV -6. +. 0.40. +. RCV -7. +. 0.20. +. RCV -8. +. 0.85. +. RCV -9. -. -. -. +. 0.85. +. +. 0.63. +. +. 0.12. +. RCV -13. +. 0.26. +. RCV -14. +. 0.55. +. RCV -15. +. 0.29. +. RCV -16. +. 0.30. +. RCV -17. +. 0.20. +. RCV -18. +. 0.15. +. RE. CC. N. IC. A. Y. CO. +. ÁT RM FO IN. DE. EM AS SI. DE. RCV -12. ST. RCV -11. +. M UN. RCV -1. RCV -10. DI. HALO DE. IC. HEMOLISIS. IO. CEPA. Ó. N. MICROOGANISMOS.. -. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) -. -. RCV -20. +. 0.30. +. RCV -21. +. 0.40. +. RCV-22. +. 0.15. +. Ó. -. IC. AC I. RCV -19. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. M UN. Leyenda:+/- Capacidad hemolítica o lipolítica.. CO. Se seleccionó a los microorganismos con capacidad hemolítica y se les cultivó en medio. Y. líquido para producir biosurfactante, y éste fue evaluado en su capacidad de emulsificación,. IC. A. obteniendo 13 cepas positivas a esta prueba. Los anillos de emulsificación se mantuvieron. RM. ÁT. estables y densos por 24 horas.. RCV-2. +. RCV-3. +. CEPA. emulsificación. Capacidad de emulsificación. RCV-9. +. RCV-17. +. RCV-10. +. RCV-18. +. RCV-11. +. RCV-19. +. +. RCV-12. +. RCV-20. +. +. RCV-13. -. RCV-21. +. RCV-6. +. RCV-14. +. RCV-22. -. RCV-7. +. RCV-15. -. RCV-8. +. RCV-16. -. DI. RE. CC. IO. N. DE. RCV-4 RCV-5. ST. -. SI. RCV-1. Capacidad de. EM AS. emulsificación. CEPA. IN. Capacidad de. DE. CEPA. FO. TABLA 5: CAPACIDAD DE EMULSIFICACIÓN DE LOS MICROORGANISMOS.. Leyenda:+/- Formación de anillo de emulsificación.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. De acuerdo a su capacidad emulsificante y su actividad hemolítica se lograron seleccionar. Ó. N. 3 aislamientos a los que se le pudo evaluar su capacidad controladora a P. infestans.. AC I. Figura 3: MICROORGANISMOS SELECCIONADOS POR SU PRODUCCIÓN DE. CO. 1. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. 1. M UN. IC. BIOSURFACTANTE.. 2. 3 3 1.-RCV-8. SI. ST. EM AS. DE. IN. 2. 2.-HEMOLISIS +. 2.-HEMOLISIS +. CAPACIDAD LIPOLITICA +. CAPACIDAD LIPOLITICA +. 3.-ANILLO DE EMULSIFICACION +. CC. IO. N. DE. 1.-RCV-2. DI. RE. 3.-ANILLO DE EMULSIFICACION +. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. 1. 3. FO. RM. 2. EM AS. DE. IN. 1.-RCV-10. 2.-HEMOLISIS +. CAPACIDAD LIPOLITICA +. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. 3.-ANILLO DE EMULSIFICACION +. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Figura. 3:CAPACIDAD. HEMOLITICA. DE. LOS. BIOSURFACTANTES. Ó. N. SELECCIONADOS.. Y. CO. M UN. IC. AC I. RCV-8. IC. A. RCV-2. RM. ÁT. RCV-10. FO. A estos biosurfactantes seleccionados se les enfrento con P. infestans para evaluar su. IN. actividad biocontroladora hallando que las tres cepas seleccionadas inhiben el desarrollo de. DE. dicho hongo.. EM AS. TABLA 6: Características de las plántulas de Lycopersicum esculentum “Tomate” al. ST. estar en contacto con P.infestans.. CONTROL 1. Plántula de crecimiento normal. IO. N. DE. SI. Características. DI. RE. CC. y color verde.. CONTROL 2. Muerte de la plántula dentro de las 24 horas.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Deterioro progresivo de la plántula, a los cuatro días. Ó. N. CONTROL 3. AC I. manifestó color amarillo hasta. M UN. IC. oscurecer y posterior muerte de. Y. CO. la plántula.. PROBLEMA 1. FO. RM. RCV-8. ÁT. IC. A. RCV-2. Las plántulas se mantuvieron verdes y sanas.. RCV-2 Las plántulas se mantuvieron RCV-8. verdes y sanas.. RCV-10. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. PROBLEMA 2. EM AS. DE. IN. RCV-10. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA 7: EFECTO DE BIOSURFACTANTES SOBRE P.infestans EN Lycopersicum. Ó. N. esculentum “TOMATE”.. AC I. CRECIMIENTO DE P.infestans -. M UN. IC. CONTROL 1. -. Y. CO. CONTROL 2. PROBLEMA 1. -. RCV-2. -. RCV-8. -. RCV-10. -. IN DE. SI. ST. EM AS. -. -. RCV-10. PROBLEMA 2. +. FO. RM. RCV-8. ÁT. RCV-2. IC. A. CONTROL 3. DI. RE. CC. IO. N. DE. Leyenda:+/- Crecimiento de P. infestans. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSION. Ó. N. Los resultados de esta investigación indican que los biosurfactantes obtenidos a partir de. IC. AC I. cepas aisladas de suelos agrícolas tienen un efecto Biocontrolador sobre P. infestans.. M UN. En el aislamiento de los microorganismos, cabe destacar que la humedad ejerce un efecto. CO. regulador sobre los microorganismos ya que determina el contenido de agua entre los intersticios del suelo, el cual es un requisito fundamental para las transformaciones. ÁT. IC. nutrientes hacia el interior de la célula y fuera de ella 41,42.. A. Y. enzimáticas; porque los microorganismos lo utilizan como medio de transporte de los. RM. De los 22 aislamientos logrados, solo 3 fueron las cepas seleccionadas para la producción. IN. FO. de biosurfactante de los tres medios de cultivo utilizados para la selección primaria de los. DE. microorganismos, el agar sangre fue el mas significativo al momento de la selección ya que. EM AS. permite observar la formación de halos de hemólisis provocada por la disminución de la tensión superficial y el rompimiento de la membrana de los hematíes del medio a causa de. SI. ST. los biosurfactantes secretados5, 33.. DE. A las tres cepas seleccionadas (Fig. 2) se les evaluó la producción de los biosurfactantes. N. para luego estudiar su capacidad de emulsificación (TABLA 5) y capacidad hemolítica. CC. IO. (Fig. 3), confirmando así las características de los biosurfactantes que son la mejora de la. RE. disponibilidad de los compuestos hidrofóbicos y su capacidad para disminuir la tensión. DI. superficial de las células y lisar glóbulos rojos43.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A los biosurfactantes producidos se les confrontó con plántulas de tomate siguiendo el. N. protocolo respectivo, la plántula del control 1 presentó un crecimiento normal, el control 2. AC I. Ó. murió a las 24 horas quizá por la concentración de hidrocarburo, mientras que el control 3. IC. desarrolló la enfermedad, estas plántulas manifestaron amarillamiento foliar que luego la enfermedad se inicia. M UN. oscureció características resaltantes de Tizón tardío, ya que. CO. mostrando pequeñas manchas irregulares de color verde pálido o amarillo a verde oscuro.. Y. En condiciones ambientales óptimas de temperatura (12 a 15°C) y humedad relativa. IC. A. (100%), estas pequeñas manchas irregulares que se desarrollan generalmente en los bordes. ÁT. y en el ápice de los folioloscrecen rápidamente, dando lugar a lesiones necróticas grandes. RM. de color marrón a negro, rodeadas de un halo amarillento44, 45,46.. FO. La manifestación de estos signos y síntomas se dio a las 72 horas después que el patógeno. DE. IN. fue inoculado sobre las raíces de las plántulas, indicando de esta forma quetanto en laboratorio como en campo el período deincubación del patógeno es aproximadamente de. EM AS. 72 horas. Apartir de las 72 horas la enfermedad fue incrementándose hastacubrir el 100%. ST. del área foliar47, 48,49.. SI. Como se puede observar en la TABLA 8, el problema 1, en el que se confrontó los. DE. microorganismos productores de biosurfactante con el oomycete causante del Tizón tardío,. IO. N. el oomycete no presentó crecimiento, debido a que los microorganismos liberaron su. CC. metabolito secundario (biosurfactante) y permitió el control de P.infestans.. RE. En el problema 2 se obtuvo un control positivo de los biosurfactantes sobre el oomycete,. DI. debido al efecto lítico de éste sobre las zoosporas del patógeno que por un mecanismo físico-químico que tienen dichas sustancias penetran y se intercalan dentro de la membrana plasmática, la cual está compuesta por glicolípidos, lo que establece una afinidad química 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. con la porción hidrofílica del biosurfactante que favorece el desequilibrio de la integridad y. N. la permeabilidad que conducen al rompimiento de la membrana de la zoospora y la. AC I. Ó. liberación del contenido celular5, 35, 50,51.. IC. Una vez enquistada la zoospora, los surfactantes no pueden alterarla debido a la presencia. M UN. de la pared celular que le brinda protección, por ello la aplicación a nivel de campo debe ser. CO. constante para controlar el Tizón tardío al primer contacto oomycete–planta y evitar así el. A. Y. desarrollo de la enfermedad 52, 53, 54.. ÁT. IC. La investigación en manejo de la gota o Tizón tardío se ha orientado hacia diferentes. RM. métodos de control, como la obtención de variedades resistentes mediante el cruzamiento. FO. varietal, control cultural, la inducción de resistencia sistémica,ingeniería genética o a través. IN. de microorganismos55 y el uso de metabolitos de origen microbiano como los. DE. biosurfactantes producidos por bacterias, siendo este el método recomendado en la presente. EM AS. investigación ya que es un producto que no genera resistencia ni contaminación, entre otras. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. características favorables56, 57, 58.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. N. En este estudio se demostró que las cepas aisladas de suelos agrícolas y los. Ó. . AC I. biosurfactantes producidos por éstas, tienen la capacidad de disminuir el porcentaje. Adicionalmente, estos productos, en combinación con otras estrategias de manejo,. CO. . M UN. IC. de la infección y crecimiento de P. infestans en condiciones controladas.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. pueden ser potenciales biocontroladores de la gota o Tizón tardío del tomate. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. N. Realizar nuevos estudios en los que se evalúen estos productos en. Ó. . AC I. condiciones de campo y acompañados de otros productos que aumenten su. M UN. IC. persistencia en el ambiente del cultivo, sin alterar su potencial biocontrolador y teniendo en cuenta las condiciones favorables.. Aplicar biosurfactante y bacterias productoras de biosurfactante en Tizón. CO. . A. IC. Escalar la producción de biosurfactantes a volumen semi-industrial para la. ÁT. . Y. tardío de otros frutos.. RM. aplicación en campo, investigando costo de producción y calidad del. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. producto.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Industrial.. Revista. Latinoamericana. de. Ó. Microbiología. AC I. 1. GossetLagarda.. N. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. M UN. IC. Microbiologia.2006; 48(2):91-98.. Calva Calva. Biosurfactantes Producidos por Microorganismos. CO. 2. Pérez Vargas y. Y. Aislados de Sitios Contaminados. Tecnológico de Estudios Superiores de Ecatepec,. RM. ÁT. IC. A. Mexico.2007; 1:2-6.. FO. 3. Luna Velasco, Esparza García, Salazar Montoya, Rodríguez Vásquez. Optimización De. IN. Las Condiciones De Cultivo Para La Producción Y Remoción De Fenantreno por. EM AS. DE. Penicilliumsp. Sociedad Cubana De Bioingeniería.2005;74.. 4. Mejía Farfán y López y López. Efecto De La Relación Carbono: Nitrógeno Sobre. SI. ST. Crecimiento Y Producción De Biosurfactantes Producidos Por Bacillussubtilis. Centro. DE. de Investigación en Biotecnología Aplicada del I. P. N.2007.. IO. N. 5. Martínez Patricia y Osorio Antonio. Estudios preliminares para la producción de un. CC. biosurfactante bacteriano activo contra Phytophthorainfestans(Mont.) De Bary.Revista. DI. RE. Corpoica.2007:6-10.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 6. Robledo Alberto y Ruiz Gerardo. Microemulsiones: Estructura y Aplicaciones. Instituto. Ó. N. de Física UNAM.1990:18-22.. AC I. 7. Salager Louis. El Mundo De Los Surfactantes. Universidad De Los Andes,. M UN. IC. Venezuela.1192; 1:3-5.. CO. 8. IustmanRaiger y López Nancy. Los biosurfactantes y la industria petrolera. Revista. IC. A. Y. QuímicaViva.2009; 3:148-155.. En. Un. Biorreactor. De. Tres. Para. La. Degradación. De. DE. IN. FO. Hexadecano[Tesis].Colombia, 2006: 4-9.. Fases. RM. Cinéticos. ÁT. 9. Quijano Govantes Evaluación De Los Coeficientes De Transferencia De Masa Y. EM AS. 10. DesaiJitendra y Banat Ibrahim. Microbial Production of Surfactants and Their. ST. Commercial Potential. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 1997;6(1):47-64.. SI. 11. MazaheriAssadi y Tabatabaee.Biosurfactants and their Use in Upgrading Petroleum. IO. N. DE. Vacuum Distillation Residue: A Review.Int. J. Environ. Res. 2010;4(4):549-572.. CC. 12. LakshmipathyDeepika y Krishnan Kannabiran.Biosurfactant and Heavy Metal. RE. Resistance Activity of Streptomyces spp. Isolated from Saltpan Soil.British Journal of. DI. Pharmacology and Toxicology.2010; 1( 1 ): 33-39.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 13. Torres Gudiño y José Antonio Sánchez Crispín.Producción de un biosurfactante. N. microbiano por Torulopsismagnoliae en cultivos sumergidos por carga.CIENCIA.2001;. AC I. Ó. 9(3): 1-8.. M UN. IC. 14. Araujo Ismenia, Gómez Antonio, Barrera Magleidy y col.Surfactantes Biológicos en la Biorremediación de Aguas Contaminadas con Crudo Liviano.Interciencia.2008;. A. Y. CO. 33(4):245-250.. IC. 15. Angulo Nancy, Gómez Antonio, Barrera Magleidy y col.Aislamiento De Cepas. RM. ÁT. Bacterianas Productoras De Biosurfactantes Recuperando Aguas Contaminadas Con. IN. FO. Hidrocarburos Interciencia.2006:1-8.. Mondaca Fernández y col. Efectos De Los. DE. 16. Riojas González, Torres Bustillos,. EM AS. Surfactantes En La Biorremediación De Suelos Contaminados Con Hidrocarburos.. SI. ST. QuímicaViva.2010; 124-135.. DE. 17. Giraldo1, Juárez, Pérez Y Col.Severidad Del Tizón Tardío De La Papa. N. (Phytophthorainfestans) En Zonas Agrícolas Del Perú Asociado Con El Cambio. RE. CC. IO. Climático.Revista Peruana Geo-Atmosférica RPGA.2010; 2:56-67.. DI. 18. Parker Joanne y Navia Oscar. Estrategias de control químico del Tizón Tardío (Phytophthorainfestans) de la papa. Revista Latinoamericana de la Papa. 199;4:115126.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. 19. Corpeño Boris. Manual del Cultivo del Tomate. Centro de Inversión, Desarrollo y. AC I. Ó. Exportación de Agronegocios.2004;16-20.. M UN. IC. 20. Agrios, G. Plant pathology. 5 Ed. Elsevier Academic Press, Londres pp. 2005;425-456.. CO. 21. Jaramillo Villegas. Phytophthorainfestans(MONT DE BARY).Universidad Nacional de. IC. A. Y. Colombia.2003;4-11.. ÁT. 22. Halterman, Chen, Berduo-Sandoval y col.Competition between Phytophthorainfestans. RM. Effectors Leads to Increased Aggressiveness on Plants Containing Broad-Spectrum. DE. IN. FO. Late Blight Resistance.PLoS ONE.2010;5(5):1-10.. 23. Fernández Pavía, Rodríguez Alvarado, Garay Serrano y col. Caracterización De. EM AS. Aislamiento De Phytophthorainfestans (Mont.) De Bary Provenientes De Michoacán ,. SI. ST. México. Revista Mexicana De Fitopatología.2005;23(2):191-197.. DE. 24. Luna Velasco, García Esparza, Salazar Montoya Y Col.Selección De Condiciones De. IO. N. Cultivo Que Intervienen En La Producción De Biosurfactantes Por Penicilliumsp. En. RE. CC. Presencia De Fenantreno.CINVESTAV-IPN. México.. Efecto del tipo de. DI. 25. Ojeda Morales, Hernández Rivera, Domínguez Pérez y col. surfactantes en la restauración de Suelos Contaminados. con Hidrocarburos de. Petróleo.Semana de Divulgación y Video Científico. 2008;695-699. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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