Actividad antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth frente a Escherichia coli y Candida albicans

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. UI M. IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. O. Q. TESIS II. Y. Actividad antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de Peperomia. RM. AC. IA. dolabriformis Kunth frente a Escherichia coli y Candida albicans. FA. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE. AUTORES:. TE. . CA. DE. BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. . BI BL. IO. ALFARO TTITO, Bertha Mirella GARCÍA RODRÍGUEZ, Yesica Paola. ASESOR:. Dra. SOTO VÁSQUEZ, Marilú Roxana. TRUJILLO- PERÚ 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A DIOS: Por la vida y la salud que me proporciona, por el gran amor que me imparte y la. IC A. fortaleza que me concede para poder. UI M. alcanzar mis metas, por guiarme siempre y permitirme llegar a cumplir un sueño más.. BI. O. Q. A MIS PADRES. Y. David García y Beatriz Rodríguez. AC. IA. Por brindarme su apoyo incondicional, por. tienen, dándome la motivación necesaria para seguir adelante.. CA. DE. FA. RM. sus consejos y por el gran amor que me. TE. A MIS HERMANOS. BI BL. IO. Jenny, Josué y Percy Por su apoyo constante, por motivarme día a día a ser alguien mejor y por su confianza puesta en mí.. YESICA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A DIOS Por ser mi padre, confidente, por su amor infinito para mantenerme firme y no desmayar ante las adversidades y brindarme. IC A. sabiduría para cumplir este anhelo.. UI M. A MIS PADRES Y HERMANO. Q. Fernando, Jannet y Anthony. BI. O. Por el apoyo que me brindan, sus consejos,. Y. sus valores y ejemplo de perseverancia para adelante,. por. todo. ese. amor. IA. seguir. que me impulsa a ser mejor cada día.. TE. A MIS ABUELOS. CA. DE. FA. RM. AC. incondicional que se convierte en el motor. BI BL. IO. Bertha, Ernesto, Erminia y Leonidas Por el amor y la confianza que me han brindado siempre para llegar alcanzar mis metas.. MIRELLA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A nuestra asesora, Dra. Marilú Roxana Soto Vásquez, que en este andar por la vida influyó con sus lecciones y experiencias en formarnos como unas personas de bien y preparadas para los retos que pone la vida, le agradecemos por todo el tiempo y dedicación que nos brindó. IC A. para llevar a cabo este trabajo de investigación.. UI M. A nuestra coasesora, Mblga. Karina Soto Vásquez, por su apoyo desinteresado en el. Q. desarrollo del presente trabajo de investigación, gracias por brindarnos sus conocimientos,. IA. Y. BI. O. experiencias, su tiempo y dedicación.. AC. A la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo y al Hospital. RM. Belén de Trujillo, por el apoyo en la infraestructura y la facilidad de brindar los equipos para. DE. FA. realizar el presente trabajo de investigación.. TE. CA. A todas aquellas personas que de una u otra forma contribuyeron en la realización del. BI BL. IO. presente trabajo, nuestros más profundos agradecimientos.. Los autores. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores miembros del jurado dictaminador:. Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de trabajos de investigación de la. IC A. Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, nos es grato. UI M. someter a vuestra consideración y elevado criterio profesional el presente Informe de. BI. O. Q. Investigación intitulado:. Y. “Actividad antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis. RM. AC. IA. Kunth frente a Escherichia coli y Candida albicans”. DE. Trujillo, Octubre del 2018. BI BL. IO. TE. CA. Investigación Científica.. FA. Dejamos a su criterio, señores miembros del jurado la calificación del presente trabajo de. ______________________________. _______________________________. ALFARO TTITO, Bertha Mirella. GARCÍA RODRÍGUEZ, Yesica Paola. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. ____________________________________ Dr. Segundo Guillermo, RUÍZ REYES. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. (Presidente). RM. ____________________________________. FA. Dra. Marilú Roxana, SOTO VÁSQUEZ. BI BL. IO. TE. CA. DE. (Miembro). ____________________________________ Dr. Francisco Moisés, ABANTO ZAMORA (Miembro). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente estudio de investigación tuvo como objetivo evaluar la actividad antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth frente a Escherichia coli y Candida albicans. Las hojas fueron recolectadas de las Lomas Costeras del Cerro Campana del distrito de Huanchaco, a partir de las cuales se obtuvo el aceite esencial. IC A. mediante el método de hidrodestilación. La evaluación de la actividad antimicrobiana in. UI M. vitro se llevó a cabo mediante el método de difusión en pozos de Agar de Kirby-Bauer. Q. modificado. El aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis presentó efecto. BI. O. antimicrobiano in vitro frente a Escherichia coli (ATCC 25922) y Candida albicans (ATCC. IA. Y. 90028), a las concentraciones de 0,5%, 1,0%, y 2,5%, obteniéndose promedios de halos de. AC. inhibición de 14,06 mm; 15,14 mm; 17,36 mm frente a Escherichia coli y 12,78 mm; 14,02. RM. mm; 15,72 mm frente a Candida albicans; así también los porcentajes de inhibición. FA. obtenidos fueron de 51,05%, 54,97% y 63,03% para Escherichia coli y 42,43%, 46,55% y. DE. 52,19% para Candida albicans, a las concentraciones de 0,5%, 1,0% y 2,5%. CA. respectivamente; mostrando mayores porcentajes de inhibición en E.Coli (63,03%) y. IO. TE. C.albicans (52,19%) a la concentración de 2,5%, y con diferencia estadísticamente. BI BL. significativa (p<0,05).. Palabras claves: Peperomia dolabriformis, congona de zorro, Escherichia coli, Candida. albicans, antimicrobiano, aceite esencial.. i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The objective of the present study was to evaluate the antimicrobial activity of the essential oil of the leaves of Peperomia dolabriformis Kunth against Escherichia coli and Candida albicans. The leaves were collected from the Coastal Hills of Cerro Campana in the district of Huanchaco, from which the essential oil was obtained by the hydrodistillation method.. IC A. The evaluation of the in vitro antimicrobial activity was carried out by the well diffusion. UI M. method of modified Kirby-Bauer agar. The essential oil from the leaves of Peperomia. Q. dolabriformis presented an antimicrobial effect in vitro against Escherichia coli (ATCC. BI. O. 25922) and Candida albicans (ATCC 90028), at concentrations of 0.5%, 1.0%, and 2.5%,. IA. Y. obtaining averages of inhibition halos of 14.06 mm; 15.14 mm; 17.36 mm against. AC. Escherichia coli and 12.78 mm; 14.02 mm; 15.72 mm against Candida albicans; thus, the. RM. percentages of inhibition obtained were 51.05%, 54.97% and 63.03% for Escherichia coli. FA. and 42.43%, 46.55% and 52.19% for Candida albicans, at concentrations of 0.5%, 1.0%. DE. and 2.5% respectively; showing higher percentages of inhibition in E. coli (63.03%) and. TE. BI BL. IO. difference (p <0.05).. CA. C.albicans (52.19%) at the concentration of 2.5%, and with a statistically significant. Keywords: Peperomia dolabriformis, fox congal, Escherichia coli, Candida albicans, antimicrobial, essential oil.. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. RESUMEN….……..………………………………………..……………... i. IC A. ABSTRACT…….………....……………………………..………………… ii. Q. UI M. I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………........ 1. Y. BI. O. II. MATERIAL Y MÉTODO…………………………………………....... 10. AC. IA. III. RESULTADOS………………….……………………………………… 17. FA. RM. IV. DISCUSIÓN………………………………………………………......... 19. DE. V. CONCLUSIONES……………………………………………………… 23. TE. CA. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………...... 24. BI BL. IO. ANEXOS...……………………………………….…………......……… 32. a. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN. En la actualidad uno de los problemas con mayor impacto en el mundo son las enfermedades de origen microbiano, por ello es importante considerar que los principales responsables de dichas enfermedades se debe a la existencia de microorganismos patógenos tales como bacterias, protozoos, hongos y virus 1.. IC A. El nuevo Sistema Mundial de Vigilancia de la Resistencia a los Antimicrobianos de. UI M. la Organización (GLASS), manifestó la presencia generalizada de resistencia a los. O. Q. antibióticos en muestras de 500 000 personas de 22 países en las que se suponían. IA. Y. BI. infecciones bacterianas2.. AC. Las bacterias son microorganismos que presentan un tamaño promedio entre 0,5 y. RM. 5 µm de longitud y diversas formas. Las especies bacterianas son grupos de cepas con. FA. muchas características en común, y notables diferencias con otras especies. Las bacterias. DE. resistentes más frecuentes son Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus. TE. CA. aureus y Streptococcus pneumoniae, seguidas de Salmonella spp3.. IO. Escherichia coli, pertenece a la familia enterobacteriaceae , del género Escherichia. BI BL. ( Gram negativa) que está compuesto de 5 especies: E. coli, E. blattae, E. vulneris, E. hertmannii, E. fergusonii, siendo Escherichia coli de mayor importancia desde una perspectiva clínica, que se localiza en el sistema digestivo de los animales y de los seres humanos, y al formar parte de la flora intestinal se puede emplear como indicador para detectar y medir la contaminación fecal en la evaluación de la seguridad de los alimentos y el agua . Por lo general, son comensales inofensivas, que constituyen el 1% de la población microbiana del tracto gastrointestinal4, 5. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Desde hace más de dos décadas, Escherichia coli generador de toxina Shiga (STEC) es un patógeno emergente transmitido por alimentos, vinculado a casos esporádicos y brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH)6.. Por otro lado las infecciones de tracto urinario (ITU), son uno de los problemas de salud pública, ya que se calcula que globalmente se suscita al menos 150 millones de. IC A. casos de ITU por año, mientras en el Perú, de los casos de infecciones asociadas a la. UI M. atención en salud el 19% es por ITU, y de todos los casos, Escherichia coli es el. O. Q. microorganismo más frecuentemente aislado en los tipos de infección de tracto urinario,. Y. BI. presentes en infecciones intrahospitalarias con 50% y extrahospitalarias con 63%, no. IA. obstante las infecciones urinarias por levaduras también son cada vez más prevalentes en. RM. AC. pacientes hospitalizados7.. FA. Los hongos son organismos ubicuos y el hombre se encuentra propenso a ellos, así. DE. factores dependientes del tipo de vida y de las nuevas terapias han generado una mayor. CA. propensión a las enfermedades fúngicas. Causantes en gran medida de este aumento, son. IO. TE. las levaduras, patógenos oportunistas habituales y pertenecientes a los géneros Candida,. BI BL. Cryptococcus, Trichosporon y Malasezzia entre otros5.. La candidiasis es una infección primaria o secundaria ocasionada por levaduras pertenecientes al género Candida. Entre ellas, Candida albicans es el agente etiológico con mayor implicación en estas infecciones, no obstante otras especies como C. glabrata, C. krusei, C. parapsilosis o C. tropicalis son aisladas con una frecuencia elevada en las muestras clínicas5.. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Candida albicans, miembro del microbioma humano normal, es una levadura Gram positiva, dimorfo que forma largas seudohifas, hifas y blastoconidios, además son capaces de absorber y fermentar azucares. Poseen abundantes clamidosporas unicelulares, redondas u ovaladas, con gruesa pared refringente, ubicadas al final de las hifas, seudohifas o laterales sobre blastoconidios ovalados. Posee colonias de crecimiento rápido, circulares, lisas, blancas o cremosas, pastosas y blandas, de bordes precisos y. IC A. centro ligeramente prominente. Se encuentra normalmente en la cavidad oral, tracto. UI M. gastrointestinal y en la vagina5, 8,9.. O. Q. En la mayoría de los individuos, C. albicans reside como un comensal de toda la. Y. BI. vida, inofensivo. Sin embargo, bajo ciertas circunstancias C. albicans puede causar. IA. infecciones que van desde infecciones superficiales de la piel a infecciones sistémicas. RM. AC. potencialmente mortales8, 10.Sin embargo el problema no solo es la prevalencia con la que. FA. Candida albicans y E.coli afectan a la población causando infecciones, sino que cada vez. DE. estos microorganismos se hacen resistentes a una variedad de fármacos7.. CA. Los fármacos actualmente disponibles, presentan una toxicidad importante, genera. IO. TE. recurrencia o causan resistencia, por tal razón se está procurando nuevos agentes. BI BL. antimicrobianos más potentes y más seguros que los existentes actualmente; es por ello que los compuestos derivados de plantas es de interés en este contexto porque ellos comprenden sustitutos más seguros o más eficaces como fuente de agentes antimicrobianos que los producidos en la industria11.. Dentro de los compuestos derivados de las plantas tenemos el aceite esencial, un metabolito secundario. Los aceites esenciales que contienen las plantas como metabolito secundario, son compuestos complejos, naturales y volátiles caracterizados por un fuerte 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. olor y son producidos por aquellas plantas aromáticas. Pueden ser sintetizados en todos los órganos de la planta: flores, hojas, semillas, frutos y raíces. Los aceites esenciales tienen un rol importante en la protección de las plantas como antibacteriales, antivirales, antifúngicos, insecticidas y también contra herbívoros para reducir su apetito por algunas plantas12, 13.. Dentro de las plantas aromáticas que poseen aceite esencial encontramos aquellas. UI M. IC A. pertenecientes a la familia de las Piperáceas12.. Q. La familia Piperácea comprende 10 géneros y unas 3.000 especies de distribución. BI. O. pantropical; siendo los más importantes y extensos el género Piper (> 1.200 especies) y. IA. Y. Peperomia (> 700 especies) 14.. RM. AC. Las diversas especies de Peperomia tiene en común su porte herbáceo sus hojas. FA. suculentas sin estipulas, sus flores con estigma simple o hendido y dos estambres por cada. DE. flor. Su hábitat suele ser epifito en zonas con gran humedad atmosférica. Así mismo, una. CA. especie en particular, es la Peperomia dolabriformis Kunth, descrita por Humboldt en. TE. Huancabamba y se halla distribuida en valles andinos cálidos de La Libertad, Cajamarca,. IO. Lambayeque y Amazonas entre los 1200 a 1900 m. Son plantas de 25-35 (-65) cm de alto.. BI BL. Presenta tallo cilíndrico, suculento, ramificado en forma arborescente, con hojas alternas subsésiles; lámina comprimida en sentido vertical, dolabriformes , 2.5-5.5 cm. de largo x 1.2-3 cm de alto, base cuneada, borde superior surcado, fenestrado transparente. Su inflorescencia es una panícula terminal, de 15-20 cm de largo. Su nombre vulgar es “Congona de zorro”. Esta Peperomia tiene diversas aplicaciones, sus hojas trituradas sirve como cicatrizantes tópicos, la infusión de estas y su inflorescencia se usa como antiinflamatorio. Sin embargo, según la literatura, otras especies de Peperomia poseen 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. propiedades no solo antiinflamatorias y cicatrizantes, sino también antiparasitarias, analgésicas, tranquilizantes y antimicrobianas15. Carvajal C, Quintero B. En su investigación titulado: “Caracterización fitoquímica, actividad antimicrobiana y antimicótica del aceite esencial de congona (Peperomia inaequalifolia) Piperaceae.” Determinaron la actividad antimicrobiana y antimicótica del aceite esencial de Peperomia inaequalifolia mediante el método de microdilución en. IC A. el cual concluyeron que las bacterias (Staphylococcus epidermis y Staphylococcus. UI M. aureus) y la levadura Candida albicans presentaron sensibilidad, mientras que las Gram. BI. O. Q. negativas la sensibilidad fue nula16.. IA. Y. Ganiyat K, Patricia A. En su investigación titulado: “Evaluación fitoquímica,. AC. toxicológica, antimicrobiana y antioxidante de extractos de hojas de Peperomia pellucida. RM. de Nigeria”, determinaron mediante difusión de pozos de agar, que tiene una actividad. FA. antimicrobiana de amplio espectro contra microorganismos patógenos entre ellos E.coli. DE. y C.albicans. En general, se demostró que el extracto metanólico crudo era bajo en la. CA. actividad en comparación con las otras fracciones, mientras que en las fracciones de. IO. TE. hexano, acetato de etilo y butanol en concentración de 50 - 200 mg/ml mostró una amplia. BI BL. actividad antimicrobiana del espectro en bacterias y hongos utilizados en este ensayo17. Hastuti U, Ummah Y, Khasanah H. En su investigación titulado: “Actividad antifúngica de Piper aduncum y extracto etanólico de hojas de Peperomia pellucida contra Candida albicans”. Los extractos se prepararon mediante la técnica de maceración usando 95% etanol, a concentraciones de 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% y 90%. El efecto antifúngico de cada concentración de extracto de hoja fue examinado mediante difusión de agar, en medio Agar Sabouraud Dextrosa. Concluyendo 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que el extracto etanólico de hojas de Piper aduncum al 80% es el más eficaz para la inhibición del crecimiento de colonias de C. albicans in vitro; y el extracto etanólico de la hoja de Peperomia pellucida al 70% es el más efectivo para la inhibición del crecimiento de colonias de C. albicans in vitro18. Akinnibosun H, Akinnibosun F. En su investigación titulado: “Actividad antibacteriana del extracto acuoso y etanólico de la hoja de Peperomia pellucida” se. IC A. investigó en Escherichia coli, Proteus mirabilis y Pseudomonas aeruginosa mediante. UI M. difusión en pozos de agar. Los resultados determinaron que E. coli tuvo. mayor. O. Q. susceptibilidad en extracto acuoso (17,4 mm-21,2 mm) seguido de P. mirabilis (12,4 mm-. Y. BI. 15 mm) y menos en P. aeruginosa (10,2 mm-12,24 mm). Por el contrario, el extracto. IA. etanólico mostró la mayor inhibición en P. aeruginosa (13,4 mm-19,6 mm) seguido de. RM. AC. Proteus mirabilis (10,2 mm-18,2 mm) y el menor en Escherichia coli (0,0 mm-12,2. FA. mm)19.. DE. Kalunta C. En su investigación titulado: “Efecto antimicrobiano de diferentes. CA. extractos de semillas de Piper nigrum contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus. IO. TE. y Candida albicans”, evaluó el efecto antimicrobiano de diversos extractos de semillas. BI BL. de Piper nigrum contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Candida albicans. Los tres extractos de semillas (agua caliente, agua fría y sopa de pimienta) se hicieron en réplicas para el estudio de sensibilidad. El método del disco de papel de filtro se empleó para la sensibilidad. Se evidenció mediante los resultados que la zona media de inhibición fue 12,604 mm, 13,548 mm y 13,374 mm para C. albicans, E. coli y S. aureus, respectivamente, que estaban en el orden C. albicans <S. aureus <E. Coli 20.. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Heredia S, Estivaleti T, De Paulo F, Filho B. En su investigación titulado: “La actividad antifúngica del aceite esencial de Piper diospyrifolium Kunth (Piperaceae)”, emplearon patrones de cepas de levadura de Candida albicans ATCC 90028, C.parapsilosis ATCC-22019 y C. tropicalis ATCC-28707. La actividad in vitro del aceite esencial de las hojas Piper diospyrifolium fue probada usando técnicas de difusión en disco. Concluyendo que el aceite esencial de P.diospyrifolium, tiene una significativa. IC A. actividad potencial antifúngica: el aceite era eficaz contra varias cepas de hongos. UI M. clínicos21.. O. Q. De Madeiros K. En su investigación titulado: “Composición química y actividad. Y. BI. antifúngica de aceites esenciales de especies de Piper frente a cepas de Candida spp”.. IA. Evaluaron la actividad antifúngica contra nueve cepas de Candida spp y se ensayaron en. RM. AC. el rango de 10 a 0,015 mg/ml mediante microdilución en caldo de acuerdo con el. FA. protocolo M27-A3. Utilizándose como control las cepas de C. parapsilosis ATCC 22019. DE. y ATCC 6258. Concluyendo que P. dilatatum fue el más activo con MIC50 de 0,65 ±. CA. 0,39 mg / mL. Otros aceites mostraron MIC50 que va desde 1, 55 ± 0,77 a 2,10 ± 0,75. TE. mg/ml, lo que demuestra la importancia de los aceites esenciales de Piper como. BI BL. IO. alternativa natural para el tratamiento de infecciones causadas por Candida spp 22.. Por todo lo ante expuesto y debido a que no hay muchos estudios realizados sobre las propiedades de dicha planta y a la aparición de diferentes cepas resistente frente a diferentes antibacterianos y antifúngicos convencionales, sus efectos indeseados y el alto costo del tratamiento, se ha creído conveniente realizar este trabajo en el cual se investigará la actividad antimicrobiana in vitro del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth en cepas de Escherichia coli y Candida albicans,. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. aportando de esta forma ciertos conocimientos y una alternativa más para el tratamiento de enfermedades causadas por dichos microorganismos.. Es por tal razón que en el presente trabajo de investigación se planteó el siguiente problema:. ¿Presentará actividad antimicrobiana el aceite esencial de las hojas de Peperomia. UI M. IC A. dolabriformis Kunth frente a Escherichia coli y Candida albicans?. O. Q. Se formuló la siguiente hipótesis:. Y. BI. El aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth presenta actividad. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. antimicrobiana frente a Escherichia coli y Candida albicans.. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se plantearon los siguientes objetivos:. Objetivo general: Evaluar la actividad antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth frente a Escherichia coli y Candida albicans.. IC A. Objetivos específicos:. UI M. 1. Determinar los halos de inhibición de los aceites esenciales de las hojas de. O. BI. frente a Escherichia coli y Candida albicans. Q. Peperomia dolabriformis Kunth a las concentraciones de 0,5%, 1,0% y 2,5%. IA. Y. 2. Determinar el porcentaje de inhibición del aceite esencial de las hojas de. AC. Peperomia dolabriformis Kunth a las concentraciones de 0,5%, 1,0% y 2,5%. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. frente a Escherichia coli y Candida albicans.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1. MATERIALES 2.1.1. Material botánico Se utilizó 2 kg de hojas de Peperomia dolabriformis Kunth (Congona de zorro), recolectadas del Cerro Campana del Distrito de Huanchaco-La. IC A. Libertad.. UI M. 2.1.2. Material biológico. Q. Se utilizó dos cepas microbianas tipificadas, bacteria E. coli (ATCC. BI. O. 25922) y levadura Candida albicans (ATCC 90028), las cuales fueron. IA. Y. proporcionadas por el Laboratorio de Microbiología del Hospital Belén de. RM. 2.1.3. Material de vidrio. AC. Trujillo.. FA.  Placas Petri de vidrio estéril de 90 mm por 15 mm. DE.  Tubos de ensayo. CA.  Pera de separación 250 mL. IO. TE.  Probeta de 100 mL. BI BL.  Matraz Erlenmeyer de 250 mL  Balón de 500 ml. 2.1.4. Solventes  Tween 80  Agua destilada 2.1.5. Reactivos  Sulfato de sodio anhidro  Suero fisiológico 0,9% 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.6. Equipos  Autoclave  Balanza analítica OHAUS GA 200 sensibilidad : 0.01 g  Refrigeradora Coldex  Estufa Memmert  Balanza triple brazo OHAUS 700/800 series sensibilidad :0.1 g. IC A.  Incubadora microbiológica PRESICION THELLO. UI M.  Equipo de Flujo laminar. Q.  Cámara de bioseguridad nivel II. BI. O.  Micropipeta BIOHIT. Y.  Vortex Miker. AC. IA.  Turbidimetro. FA.  Agar Sabouraud. RM. 2.1.7. Medios de cultivo. DE.  Caldo Sabouraud. CA.  Agar Mueller Hinton. IO. TE.  Caldo Mueller Hinton. BI BL. 2.1.8. Fármacos  Fluconazol, cap. 150 mg, laboratorio portugal, lote 1080797, fecha de vencimiento Agosto 2020.  Gentamicina amp. 160 mg/2 ml, laboratorio farmaindustria, lote 1164053, fecha de vencimiento Noviembre 2020.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.9. Otros  Cocina eléctrica Finely  Hisopos Estériles  Gasa  Asa bacteriológica  Mechero. IC A.  Algodón. UI M.  Gradilla. Q.  Guantes estériles. BI. O.  Mascarilla. Y.  Tijeras. AC. IA.  Papel kraft. FA.  Pizetas de plástico. RM.  Puntas desechables para micropipetas. DE.  Espátula de metal. BI BL. IO. TE. CA.  Hipoclorito de sodio. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.MÉTODO 2.2.1. Recolección e identificación taxonómica de la especie vegetal Se recolectó 2 Kg de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth “congona de zorro” de las lomas costeras del Cerro Campana entre los 200 y 400 m.s.n.m. del distrito de Huanchaco, provincia de Trujillo y región de La Libertad. Luego un ejemplar completo de la planta se llevó al Herbarium. IC A. Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo, para su identificación y. UI M. posterior verificación taxonómica, registrándose con el código 59458.. Q. 2.2.2. Preparación de la muestra23. BI. O. Selección: Las hojas recolectadas se llevaron al Laboratorio de. IA. Y. Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad. AC. Nacional de Trujillo, donde se eliminó las sustancias extrañas y las hojas que. RM. se encontraron en malas condiciones.. FA. Lavado y desinfección: Se lavó las hojas con agua potable a chorro, seguido. DE. de una desinfección, para lo cual se utilizó hipoclorito de sodio al 0,5%.. CA. Posteriormente se realizó un enjuague con suficiente agua destilada, esto para. IO. TE. retirar los residuos de hipoclorito.. BI BL. 2.2.3. Obtención del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth “Congona de zorro” A partir de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth se extrajo el aceite esencial mediante el método de hidrodestilación. Se cortó las hojas frescas en trozos de aproximadamente 1 cm por 1 cm, luego se pesó 100g y se colocó en un balón. Posteriormente se añadió 400 ml de agua destilada, y finalmente se calentó hasta punto de ebullición durante 3 h. Como producto del proceso de condensación se obtuvo dos fases una de aceite 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. esencial y otra del agua; posteriormente se separó el aceite esencial y se deshidrató las impurezas de agua en el aceite esencial con Na2SO4 anhidro, se filtró y se guardó en un frasco de vidrio color ámbar (para evitar la descomposición por la luz), bajo refrigeración a una temperatura de 4 °C 24,25. 2.2.4. Determinación del rendimiento de aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth “Congona de zorro”. IC A. Mediante el método gravimetría-volumétrico se determinó el porcentaje de. UI M. rendimiento del aceite esencial (%RAE), aplicando la siguiente formula26, 27.. O. Q. %RAE=Vol.AE (ml)/P muestra (g) x100. %RAE: Porcentaje del rendimiento del aceite esencial.. Y. BI. Dónde:. AC. IA. Vol.A.E: Volumen del aceite esencial obtenido en mililitros.. RM. P muestra: Peso de la muestra a destilar por gramos. FA. 2.2.5. Ensayo microbiológico in vitro. TE. CA. modificado28-30.. DE. Se realizó empleando el método de difusión en pozos de Agar de Kirby-Bauer. IO. Microorganismos. BI BL. Se utilizó dos cepas microbianas tipificadas, bacteria Escherichia coli (ATCC 25922) y levadura Candida albicans (ATCC 90028), las cuales fueron proporcionadas por el Laboratorio de Microbiología del Hospital Belén de Trujillo.. Preparación de la muestra Se preparó las concentraciones de aceite esencial de Peperomia dolabriformis Kunth al 0,5%, 1,0% y 2,5% disueltas en Tween 80. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Reactivación de las cepas Los microorganismos fueron reactivados en caldo Mueller-Hinton para bacterias y Caldo Sabouraud Glucosado para levaduras y se incubaron durante 18 horas a 37 °C. Luego se tomó una asada de cada microorganismo y se ajustó con solución salina fisiológica al patrón de turbidez de Mac Farland N° 0,5 (108UFC/mL).. IC A. Sembrado. UI M. Se procedió a colocar en 14 placas Petri, 20 mL de Agar Mueller-Hinton para. O. Q. bacterias, y 20 mL de Agar Sabouraud Dextrosa para levaduras. Una vez. BI. Solidificado cada agar, se sembraron los microorganismos en la superficie de. IA. Y. este y se hisopó uniformemente, girando cada placa 30 grados por 10 veces. AC. aproximadamente. Las placas recién sembradas se colocaron en estufa a 37. FA. RM. °C por 10 minutos.. DE. Elaboración de los pozos de agar. CA. Por cada microorganismo se tomó 7 placas Petri respectivamente. Sobre estas. TE. placas sembradas, se realizó con la ayuda de un sacabocado 4 perforaciones. BI BL. IO. de 11 mm de diámetro, y se sellaron con 0,1mL del mismo agar, para evitar la dispersión de las muestras. Luego se colocó en cada perforación 200 μL del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a las concentraciones de 0,5%, 1,0% y 2,5%. Como blanco se colocó 200 μL de Tween 80 y como control se colocó 200 μL de gentamicina 10 µg/mL para bacterias y 200 μL de fluconazol 100 µg/mL para levaduras. Posteriormente las placas Petri se incubaron a 37 °C por 24 horas.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Lectura de los resultados Se realizó la lectura de los halos de inhibición a las 24 horas para bacterias y 48 horas para levaduras. El diámetro de la zona de inhibición se expresó en milímetros (mm). Las mediciones se realizaron colocando una regla al reverso de la placa Petri. Finalmente se calculó el porcentaje de inhibición mediante la siguiente. Q. UI M. IC A. fórmula29:. x 100. Y. BI. O. % inhibición = D. muestra – D. blanco D. control – D. blanco. AC. IA. Dónde:. RM. Diámetro de la muestra (D. muestra) = Halo de inhibición de la. FA. muestra (mm).. CA. (mm).. DE. Diámetro del blanco (D. blanco) = Halo de inhibición del Tween 80. IO. TE. Diámetro del control (D. control) = Halo de inhibición de los fármacos. BI BL. de referencia (mm).. 2.2.6. Análisis de datos Los resultados fueron procesados utilizando el programa estadístico SPSS v. 20.0 y expresados como media aritmética ± desviación estándar. Se determinó la relación entre los grupos mediante el test de ANOVA de una vía, donde p<0,05 se consideró como estadísticamente significativo.. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. Tabla N° 1.- Actividad antimicrobiana in vitro de los aceites esenciales de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth frente a Escherichia coli (ATCC. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. 25922) y Candida albicans (ATCC 90028). BI BL. IO. TE. CA. Promedio del halo de inhibición de 5 placas y desviación estándar. p0.05 comparado con el grupo control positivo (test de ANOVA). 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 70. 63.03 54.97. 52.19. 51.05 46.55. 50. 42.43. UI M. IC A. 40. E.coli. Q. 30. C.albicans. BI. O. 20. Y. Porcentaje de inhibición (%). 60. 0 1,0%. RM. 0,5%. AC. IA. 10. 2,5%. Porcentaje de inhibición de los aceites esenciales de las hojas de. CA. Gráfico 1.. DE. FA. Cocentración de aceite esencial de P. dolabriformis (%v/p). IO. TE. Peperomia dolabriformis Kunth frente a cepas de Escherichia coli. BI BL. (ATCC 25922) y Candida albicans (ATCC 90028). 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN. Los aceites esenciales son mezclas homogéneas de compuestos químicos orgánicos, procedente de una misma familia química, terpenoides. Tienen la característica en común, de producir diversos aromas agradables y perceptibles al ser humano. A condiciones ambientales, son líquidos menos densos que el agua, pero más viscosos que ella. Poseen. IC A. un color en la gama del amarillo, hasta ser transparentes en algunos casos y pueden ser. UI M. sintetizados en todos los órganos de la planta: flores, hojas, semillas, frutos y raíces31.. Q. Los aceites esenciales por sus propiedades son usados como agentes carminativos,. BI. O. estimulantes, diuréticos y antireumáticos; algunos poseen propiedades insecticidas,. IA. Y. antifúngicas y antibacterianas frente a microorganismos patógenos32.. AC. En este trabajo se utilizó las hojas frescas de Peperomia dolabriformis Kunth, del cual se. RM. extrajo el aceite esencial mediante el método de hidrodestilación, obteniéndose un. FA. rendimiento de 0,3% v/p (Anexo VII), ya que para 100 g de hojas de Peperomia. DE. dolabriformis Kunth, se obtuvo 0,3 ml de aceite tras un proceso de destilación de. CA. alrededor de tres horas; este método es ampliamente usado debido a que representa un. IO. TE. bajo costo, además de ser fácil de usar y brindar rendimientos efectivos33.. BI BL. Respecto a la evaluación de la actividad antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth frente a Escherichia coli y Candida albicans, se puede observar (Tabla N°1), los valores promedios de los halos de inhibición frente a los microorganismos ensayados; obteniéndose promedios de halos de inhibición para E.coli de 14,06 mm; 15,14 mm; 17,36 mm y para C.albicans se obtuvo promedios de halos de inhibición de 12,78 mm; 14,02 mm; 15,72 mm, correspondientes a las concentraciones de 0,5%, 1,0% y 2,5% de aceite esencial respectivamente, siendo estos directamente 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. proporcionales a las concentraciones, con diferencias estadísticamente significativas p<0,05. Así mismo, los compuestos de referencia empleados en este ensayo (Gentamicina 10 μg/mL y fluconazol 100 μg/mL) presentan halos de inhibición de 27,54 mm y 30,12 mm, respectivamente; los cuales están catalogados como sensibles frente a estos microorganismo según el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio de los Estados Unidos de Norteamérica (CLSI) 34. Respecto al grupo blanco (Tween 80), no presento. IC A. inhibición del crecimiento, lo que indica la inocuidad del solvente frente a los. UI M. microorganismos ensayados.. O. Q. En cuanto a los resultados de la determinación del porcentaje de inhibición del aceite. BI. esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a las concentraciones de 0,5%,. IA. Y. 1,0% y 2,5% frente a Escherichia coli y Candida albicans, se pueden observar en el. AC. Gráfico 1, que conforme se incrementa las concentraciones de aceite esencial (0,5%, 1,0%. FA. RM. y 2,5%), los porcentajes de inhibición de los halos también se incrementan, existiendo. DE. una relación directamente proporcional, es así que para E.coli se obtuvo porcentajes de. CA. inhibición de 51,05%, 54,97% y 63,03%; mientras que para C.albicans se obtuvo. TE. porcentajes de inhibición de 42,43%, 46,55% y 52,19% respectivamente; observándose. IO. de esta forma que a la concentración de 2,5% el aceite esencial de Peperomia. BI BL. dolabriformis tiene un mayor porcentaje de inhibición (63,03% y 52,19%) en el crecimiento de E. coli y C.albicans respectivamente. Estos hallazgos son corroborados con otras investigaciones del género Peperomia, como Ganiyat, et al, quienes manifiestan que los extractos de Peperomia pellucida de Nigeria con hexano, acetato de etilo y butanol en concentración de 50 - 200 mg/ml mostró una amplia actividad antimicrobiana del espectro en bacterias y hongos entre ellas Escherichia coli y Candida albicans17. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. De igual manera Hastuti, et al. Menciona que el extracto etanólico de hojas de Piper aduncum y Peperomia pellucida, a las concentraciones del 80% y 70% respectivamente, fueron más efectivos para la inhibición del crecimiento de colonias de C.albicans in vitro18. Akinnibosun, et al. Menciona la actividad antibacteriana del extracto acuoso y etanólico de las hojas de Peperomia pellucida, mostrando que E. coli presenta mayor. IC A. susceptibilidad en extracto acuoso (17,4 mm-21,2 mm) que en extracto etanólico (0,0. UI M. mm-12,2 mm) 19.. BI. O. Q. La actividad antimicrobiana presentada por los aceites esenciales, se debe mayormente a. Y. la presencia de terpenoides; de acuerdo a un orden de actividad: los terpenoides que. AC. IA. poseen grupos alcoholes, luego los que poseen aldehídos y por consiguiente los que tienen. RM. grupos cetónicos. Así mismo, algunos autores plantean que los aceites con un alto. FA. porcentaje de compuestos terpenoides del tipo fenólicos poseen notables propiedades. DE. antimicrobianas32.. TE. CA. El efecto antibacteriano encontrado en el aceite esencial de Peperomia dolabriformis,es. IO. debido a la capacidad de alterar y penetrar en la estructura lipídica de la pared celular. BI BL. alterando estructuras celulares lo que genera la desnaturalización de las proteínas y la destrucción de la membrana celular. Esto se debe probablemente a que la pared celular de las Gram-negativas está constituida solo por el 10% del peptidoglicano, además posee tres polímeros que se encuentran fuera de su envoltura: lipoproteína, membrana externa y lipopolisacáridos, este último con un contenido de lípido A que pudiera facilitar la entrada, por disolución de los aceites esenciales debido a su carácter hidrofóbico y causar la muerte celular por desestabilización de la membrana externa y la membrana plasmática. El carácter hidrofóbico de los AE le permite atravesar la pared celular de 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. bacterias Gram-negativas por medio de canales compuestos por unas proteínas llamadas porinas, las cuales se localizan en la membrana externa y facilitan el transporte de nutrientes y sustancias de bajo peso molecular dentro de la célula, incluyendo agentes antimicrobianos35,36.. El efecto antifúngico encontrado en el aceite esencial de Peperomia dolabriformis, estaría mediado por la presencia de los terpenoides que presentan actividad antifúngica. IC A. debido a su propiedad de inhibir biosíntesis de ergosterol o de otros esteroles presentes. UI M. en la pared celular de la levadura, el componente estructural más abundante en la. O. Q. membrana celular del hongo, causando una alteración de la membrana celular, que se. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. vuelven más permeable y vulnerable al daño37, 38.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES. 1. El aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a las concentraciones de 0,5%, 1,0% y 2,5% presenta actividad antimicrobiana frente a Escherichia coli y Candida albicans, con halos de inhibición de 14,06 mm; 15,14 mm; 17,36 mm para E.coli y 12,78 mm; 14,02 mm; 15,72. IC A. mm para C. albicans, con diferencias estadísticamente Significativas. UI M. (p<0,05).. BI. O. Q. 2. El aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a las. Y. concentraciones de 0,5%, 1,0% y 2,5% presenta actividad antimicrobiana. AC. IA. frente a Escherichia coli y Candida albicans, con porcentajes de inhibición. RM. del crecimiento de 51,05%, 54,97% y 63,03% para E.coli y 42,43%, 46,55%. FA. y 52,19% para C.albicans respectivamente.. DE. 3. El aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a la. CA. concentración de 2,5% presenta mayor porcentaje de inhibición del. IO. TE. crecimiento microbiano: Escherichia coli (63,03%) y Candida albicans. BI BL. (52,19%).. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Torres J, León J. Actividad antibacteriana y antifúngica de extractos de hojas de Luma chequen (Molina) A. Gray “arrayán” frente a patógenos de origen clínico. RSVM. [en línea]. 2017 [citado 20 de junio 2018]; 37:10-16. Disponible en: http://www.redalyc.org/pdf/1994/199452813004.pdf 2. Organización Mundial de la Salud. Datos recientes revelan los altos niveles de. IC A. resistencia a los antibióticos en todo el mundo. [en línea]. 2018 [citado 20 de junio. UI M. 2018]; 37:10-16. Disponible en: http://www.who.int/es/home/29-01-2018-high-. Q. levels-of-antibiotic-resistance-found-worldwide-new-data-shows. BI. O. 3. Ortiz S, Larrea A. Morfología de Diplococos Tetradas y Sardinas. Scielo. [en. IA. Y. línea]. 2014 [citado 20 de junio 2018]; 49:2614-2618. Disponible en:. AC. http://www.revistasbolivianas.org.bo/scielo.php?pid=S2304-. RM. 37682014001000006&script=sci_arttext. FA. 4. Franco P, Ramírez L, Orozco M. Determinación de Escherichia Coli e. DE. identificación del serotipo O157:H7 en carne de cerdo comercializada en los. CA. principales supermercados de la ciudad de Cartagena. Scielo. [en línea]. 2013. IO. TE. [citado 20 de junio 2018]; 10(1):91-100. Disponible en:. BI BL. http://www.scielo.org.co/pdf/rlsi/v10n1/v10n1a09.pdf 5. Mamani V, Huallpa J. Actividad antifúngica y antibacteriana in vitro del aceite esencial de Eugenia Caryophyllata (Clavo de olor) frente a .C. albicans, E. coli, P. aeruginosa, S. aureus y S. pyogenes. [Tesis en línea]. [citado 21 de junio 2018]; Disponible en: https://core.ac.uk/download/pdf/54220177.pdf. 6. Lopardo H. Bacterias de Importancia Clínica. [en línea]. [citado 21 de junio 2018]; Disponible en: http://www.aam.org.ar/descarga-archivos/Parte21Enterobacterias.pdf. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 12. Cuellar A. Evaluación del Rendimiento y la actividad de los Aceites esenciales como antimicrobianos; Eucalyptus globulus, Cymbopogon citratus y Rosmarinus officinalis en el distrito de Mbarara (Uganda). Rev. Colombiana cienc. Anim. [en línea]. 2009 [citado 25 de junio 2018]; 1(2):240-249. Disponible en: https://revistas.unisucre.edu.co/index.php/recia/article/view/361/403 13. Flores L. Evaluación del efecto antimicrobiano del aceite esencial de orégano. IC A. (Origanum vulgare) aplicado en el pan molde en microencapsulado y pulverizado.. UI M. [Tesis en línea]. [citado 25 de junio 2018]; Disponible en:. Q. http://repositorio.upeu.edu.pe/bitstream/handle/UPEU/689/Lenny_Tesis_bachill. BI. O. er_2017.pdf?sequence=4&isAllowed=y. IA. Y. 14. Guayanlema J, Vargas C. “Determinación de la actividad antibacteriana de los. AC. aceites esenciales de dos especies de la familia Piperaceae recolectadas en la. RM. provincia del Guayas – Ecuador”. [Tesis en línea]. [citado 25 de junio 2018];. FA. Disponible en: http://dspace.unach.edu.ec/bitstream/51000/3727/1/UNACH-EC-. CA. DE. FCS-LAB-CLIN-2017-0004.pdf. TE. 15. Pino G. Estado actual de las suculentas en el Perú. 2007. pp. 11-12 [citado 26 de. IO. junio 2018]. Disponible en: http://www.lamolina.edu.pe/ciza/pdfs/art%2012-. BI BL. %20za10.pdf. 16. Carvajal C, Quintero B. Caracterización fitoquimica, actividad antimicrobiana y antimicótica del aceite esencial de congona (Peperomia inaequalifolia) Piperaceae. [Tesis para obtener el título de ingeniero en biotecnología de los recursos naturales en línea]. Ecuador: Universidad Politécnica Salesiana; 2012. [citado 26 de junio 2018]. Disponible en: http://dspace.ups.edu.ec/bitstream/123456789/4073/1/UPS-QT02906.pdf. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 17. Ganiyat K, Patricia A. “Evaluación fitoquímica, toxicológica, antimicrobiana y antioxidante de extractos de hojas de Peperomia pellucida de Nigeria”. AENSI. [en línea]. 2011. [citado 26 de junio 2018]; 5(12):3700-3709. Disponible en: https://www.researchgate.net/profile/Ganiyat_Oloyede2/publication/264889381 _Phytochemical_toxicity_antimicrobial_and_antioxidant_screening_of_leaf_ext racts_of_Peperomia_pellucida_from_Nigeria/links/57445c3708ae9ace841e84ce.. IC A. pdf. UI M. 18. Hastuti U, Ummah Y, Khasanah H. Actividad antifúngica de Piper aduncum y. Q. extracto etanólico de hojas de Peperomia pellucida contra Candida albicans. [en. BI. O. línea]. 2017[citado 28 de junio 2018]. Disponible en:. IA. Y. https://aip.scitation.org/doi/abs/10.1063/1.4983417. AC. 19. Akinnibosun H, Akinnibosun F. Actividad antibacteriana de extractos foliares. RM. acuosos y etanólicos de Peperomia pellucida (L.) HB y K. (piperaceae) en tres. FA. aislamientos de bacterias gramnegativas. SWJ. [en línea]. 2010. [citado 28 de junio. DE. 2018]; 3(4):33-36. Disponible en:. CA. https://www.researchgate.net/publication/272336683_Antibacterial_activity_of_. IO. TE. aqueous_and_ethanolic_leaf_extracts_of_Peperomia_pellucida_l_H_B_K_piper. BI BL. aceae_on_three_gram-negative_bacteria_isolates 20. Kalunta C. Efecto antimicrobiano de diferentes extractos de semillas de Piper nigrum contra Escherichia coli, Staphylococcus aureus y Candida albicans. Biotechnol Res. [en línea]. 2017. [citado 28 de junio 2018]; 3(3):71-76. Disponible en: http://biotechnologicalresearch.com/index.php/BR/article/view/63 21. Heredia S, Estivaleti T, De Paulo F, Filho B, et al. La actividad antifúngica del aceite esencial de Piper diospyrifolium Kunth (Piperaceae). Brazilian Journal of 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 28. Corrales L, Castillo A. Evaluación del potencial antibacterial in vitro de Croton lechleri frente a aislamientos bacterianos de pacientes con úlceras cutáneas. Scielo. [en línea].2013 [citado 30 de junio 2018]. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v11n19/v11n19a05.pdf 29. Huanquis L, León M. Evaluación de la actividad antimicrobiana de los extractos metanólicos de las hojas y flores de la especie vegetal mastuerzo (Tropaeolum. IC A. majus L.) frente al crecimiento de microorganismos (Escherichia coli y. UI M. Staphylococcus aureus). [Tesis en línea].Universidad Nacional del Centro del. Q. Perú; 2015. [citado 30 de junio 2018]. Disponible en:. BI. O. http://repositorio.uncp.edu.pe/bitstream/handle/uncp/1259/huanquis%20albinaco. IA. Y. rta.pdf?sequence=1&isallowed=y. AC. 30. Soto M.Cuantificación de glicoalcaloides esteroidales totales de las hojas de. RM. Solanum habrochaites S. Knapp & D. M. Spooner (Solanaceae) y su actividad. DE. 118. Disponible en:. FA. antimicrobiana. Arnaldoa. [en línea].2015 [citado 30 de junio 2018]; 22(1): 105-. CA. https://www.researchgate.net/publication/299508279_cuantificacion_de_glicoal. IO. TE. caloides_esteroidales_totales_de_los_frutos_liofilizados_de_solanum_habrochai. BI BL. tes_s_knapp_d_m_spooner_solanaceaea_y_su_actividad_antimicrobiana 31. Palacios A, Castillo W. Modelamiento de extracción del aceite esencial de Aloysia citriodora y Schinus molle. Ingeniería: Ciencia, Tecnología e Innovación. [en línea]. 2015 [citado 17 de setiembre 2018]. Disponible en: http://revistas.uss.edu.pe/index.php/ING/article/view/254 32. Sánchez Y, Pino O, Teresa M. Estudio químico y microbiológico del aceite esencial de Piper auritum Kunth (Caisimón de anís).Scielo. [en línea]. 2009 [citado 17 de setiembre 2018]; 24: 39-46.Disponible en: 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S101027522009000100006 33. Casanova L, Rengifo H.Características fisicoquímicas y efecto del aceite esencial de las hojas de Chenopodium ambrosioides L. (Paico) y determinación del porcentaje relativo de sus componentes hidrogenados e hidrocarbonados. [Tesis en línea]. 2016 [citado 17 de setiembre 2018]. Disponible en:. UI M. y%20Luis%20A.%20M.pdf?sequence=1&isAllowed=y. IC A. http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/4315/Casanova%20Godo. Q. 34. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; nineteenth. BI. O. informational supplement.2009, CLSI document M100-S19. Wayne, PA: Clinical. IA. Y. Laboratory Standards Institute. p.: 1-158.. AC. 35. Torrenegra M; Pájaro N. Actividad antibacteriana in vitro de aceites esenciales de. RM. diferentes especies del género Citrus. Rev. Colomb. Cienc. Quím. [en línea].. FA. 2017. [citado 18 de setiembre 2018]; 46(2): 160-175. Disponible en:. CA. DE. http://www.scielo.org.co/pdf/rccqf/v46n2/0034-7418-rccqf-46-02-00160.pdf. TE. 36. Mamani J. Actividad Antibacteriana “in vitro” del Aceite Esencial de Menta. IO. (Mentha piperita l.) frente a Escherichia coli enteropatógena (epec). Rev. de la. BI BL. universidad del altiplano. [en línea]. 2017 [citado 18 de setiembre 2018]; 6(3):244-254. Disponible en: http://www.revistaepgunapuno.org/index.php/investigaciones/article/view/107/9 9 37. Lopez K; Lugo C. Mecanismos de resistencia antifúngica de los azoles en Candida albicans. Una revisión. Rev Biomed .2016. [citado 19 de setiembre 2018]. Disponible en: http://www.revbiomed.uady.mx/pdf/rb162735.pdf 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 38. Martell N. Efecto sinérgico in vitro del fluconazol y el aceite esencial de Origanum vulgare frente a Candida albicans. [Tesis para obtener el grado académico de bachiller en Medicina en línea].Perú: Universidad Nacional de Trujillo;. 2017.. [citado. 19. de. setiembre. 2018].. Disponible. en:. http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/9716/NoelMartell_C.pdf?. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. sequence=1&isAllowed=y. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO I Identificación taxonómica de la planta Peperomia dolabriformis Kunth. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. en el Herbarium Truxillense. 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO II. Fotografías de la Recolección de las hojas de Peperomia dolabriformis. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Kunth en el Cerro Campana. BI BL. IO. TE. CA. Recolección de las hojas de P. dolabriformis entre los 200 y 400 m.s.n.m. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO III Selección y lavado de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth en el. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Cerro Campana. Fig.1. Hojas de Peperomia ..dolabriformis. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. Fig.2. Selección de las hojas de Peperomia dolabriformis.. Fig.3.Lavado de las hojas de Peperomia dolabriformis.. 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO IV. BI. O. Q. UI M. IC A. Obtención del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth. Fig.1. Pesado de las hojas de Peperomia dolabriformis.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. Fig.2. Hidrodestilación del aceite esencial hojas de Peperomia dolabriformis.. Fig.3. Separación del aceite del hidrolato con NaCl.. Fig.4. Trasvasar el aceite esencial en un frasco color ámbar.. 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO V. Fig. 1. Cepas de Escherichia coli (ATCC 25992); levadura Candida albicans (ATCC 90028).. IC A. Ensayo del efecto antimicrobiano del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis.. Fig .3.patron de turbidez Mac Farland N° 0.5 (108 UFC / ml).. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. Fig. 2. Cepas reactivadas en caldo Mueller Hilton.. Fig .5. Sembrado de Escherichia coli y Candida albicans.. BI BL. IO. TE. Fig .4. Sembrado de placas.. Fig. 6. Colocación del aceite esencial en sus respectivas placas con Agar.. Fig. 7. Incubación a 37 °C.. 37. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO VI. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ENSAYO MICROBIOLOGICO. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. Fig. 1. Halos de inhibición del aceite esencial delas hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a las concentraciones de: C1 (0,5%), C2 (1,0%), C3 (2,5%) y del Tween 80 (B) frente a Escherichia coli (ATCC 25922). Agar Müller-Hinton.. Fig. 2. Halos de inhibición de la gentamicina 10 µg /ml frente a Escherichia coli (ATCC 25922). Agar Müller-Hinton.. 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. Fig. 3. Halos de inhibición del aceite esencial de las hojas de Peperomia dolabriformis Kunth a las concentraciones de: C1 (0,5%), C2 (1,0%), C3 (2,5%) y del Tween 80 (B) frente a Candida albicans ATCC 90028. Agar Sabouraud Dextrosa.. Fig. 4. Halos de inhibición del fluconazol 100 µg/ml frente a Candida albicans ATCC 90028. Agar Sabouraud Dextrosa. 39. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO VII. Rendimiento de la extracción del aceite esencial de Peperomia. Volumen de aceite esencial. 2000 g. 6 mL. Rendimiento 0.3%. IA. Y. BI. O. Q. UI M. Gramos. IC A. dolabriformis Kunth. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. %RAE=Vol.AE (ml)/P muestra (g) x100. 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO VIII PRUEBAS ESTADÍSTICAS. Tabla 1: Prueba estadística ANOVA de los Halos de inhibición del aceite esencial de las hojas de P. dolabriformis Kunth frente a E. coli. ANOVA ECOLI gl. cuadrática. Entre grupos. 570,109. 3. 190,036. Dentro de grupos. 1,568. 16. ,098. Total. 571,677. 19. F. 1939,148. Sig. ,000. AC. IA. Y. BI. O. Q. cuadrados. IC A. Media. UI M. Suma de. RM. Tabla 2: Prueba Tukey de los Halos de inhibición del aceite esencial de las hojas de. CA. TE. HSD Tukeya. DE. FA. P. dolabriformis Kunth frente a E. coli. BI BL. 1,00. IO. VAR00003. N. 1 5. 2,00. 5. 3,00. 5. 4,00. 5. Sig.. Subconjunto para alfa = 0.05 2. 3. 4. 14,0600 15,1400 17,3600 27,5400 1,000. 1,000. 1,000. 1,000. Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 5,000.. 41. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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