Efecto sinérgico de lactobacillus casei y vancomicina en infecciones edpidérmicas experimentales producidas por staphylococcus aureus en rattus rattus variedad albinus

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA - ESCUELA DE MEDICINA. “EFECTO SINÉRGICO DE Lactobacillus casei Y. na. VANCOMICINA EN INFECCIONES EPIDÉRMICAS EXPERIMENTALES PRODUCIDAS POR. ed. Albinus”.. ici. Staphylococcus aureus EN Rattus rattus VARIEDAD. M. INFORME DE TESIS:. de. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:. ca. BACHILLER EN MEDICINA AUTOR:. lio te. CRUZADO FRANCO, ORLANDO ALEXANDER.. Bi b. ASESORA:. Dra. ELVA MEJÍA DELGADO. TRUJILLO-PERU 2014. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ici. na. A Dios por guiarme en el buen camino y darme la fuerza para seguir adelante.. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. A mis padres, Wilder Cruzado y Adela Franco, por darme la vida, quienes me apoyaron en todo momento para lograr mis sueños, a ustedes por siempre mi corazón y mi agradecimiento.. A mis Hermanas Carol, Verónica, Ana y Kathya, y mis sobrinos Joaquín, Ana, Camila, Ariana y Flavia quienes son mi principal motivación para ser mejor persona y futuro profesional médico, con mucho cariño les dedico cada una de estas páginas de mi tesis.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. A Cristian Aburto, Juan De la Cruz y Darwin Desposorio por su sincera amistad y contribuir incondicionalmente en la realización de este proyecto.. A la Doctora Elva Mejía, por enseñarme con sus lecciones y experiencias como ser una persona de bien y preparada para los retos que pone la vida.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN: EFECTO SINÉRGICO DE Lactobacillus casei Y VANCOMICINA EN INFECCIONES EPIDÉRMICAS EXPERIMENTALES PRODUCIDAS POR Staphylococcus aureus EN Rattus rattus VARIEDAD Albinus. Los. probióticos. se. utilizan. principalmente. para. aplicaciones. na. gastrointestinales, actualmente también en piel, salud oral y vaginal. El. ici. Lactobacillus casei es un microorganismo usado como probiótico. Estudios previos in vitro demuestran eficacia del uso de L. casei asociado. ed. a Vancomicina frente a S. aureus. Se usaron 20 ejemplares de Rattus. M. rattus variedad albinus. Se realizó un modelo experimental de infección en piel con S. aureus. Posteriormente se los trató a las 4 y 6 horas después. de. de infectadas con: Grupo A: Vancomicina sola, Grupo B: Vancomicina y L. Casei al 100%, Grupo C: Vancomicina y L. Casei al 75%, Grupo D:. ca. Vancomicina y L. Casei al 50%. Luego se extrajo una muestra a las 8. lio te. horas de la herida y se incubó en placas con Agar Mueller Hinton. Resultaron diferencias significativas para el grupo A y B (0.037 significancia).. Se. concluye. que. Lactobacillus. casei. asociado. a. Bi b. Vancomicina si tiene efecto sinérgico de sobre infecciones epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus. PALABRAS CLAVE: Lactobacillus casei, Vancomicina, Staphylococcus aureus.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT SYNERGISTIC EFFECT OF Lactobacillus casei AND VANCOMYCIN IN EXPERIMENTAL. INFECTIONS. EPIDERMAL. PRODUCED. BY. Staphylococcus aureus IN Rattus rattus VARIETY Albinus. Probiotics are used primarily for gastrointestinal applications, also present. na. in skin, oral and vaginal health. The Lactobacillus casei is used as a. ici. probiotic microorganism. Previous studies demonstrate in vitro efficacy of Vancomycin associated L. casei against S. aureus. 20 specimens of. ed. Rattus rattus albinus variety were used. An experimental model of skin. M. infection with S. aureus was undertaken. Subsequently they were treated at 4 and 6 hours after infection with Group A: Vancomycin alone, Group B:. de. Vancomycin and L. casei 100%, Group C: Vancomycin and L. casei 75%, Group D: Vancomycin and L. Casei 50%. A sample at 8 hours after the. ca. wound is then removed and incubated in Mueller Hinton Agar plates.. lio te. There were significant differences for group A and B (0.037 significance). It is concluded that Lactobacillus casei associated with vancomycin if you have synergistic effect on epidermal infections caused by Staphylococcus. Bi b. aureus in Rattus rattus variety Albinus. KEYWORDS: Lactobacillus casei, Vancomycin, Staphylococcus aureus.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE I. INTRODUCCIÓN. ..................................................................................... 07 II. MATERIAL Y MÉTODO. ......................................................................... 14. na. III. RESULTADOS........................................................................................ 23. ici. IV. DISCUSIÓN............................................................................................ 25. ed. V. CONCLUSIONES .................................................................................... 28. M. VI. RECOMENDACIONES .......................................................................... 28. de. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................... 29. Bi b. lio te. ca. VIII. ANEXOS............................................................................................... 35. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Hoy en día, los probióticos se utilizan principalmente para aplicaciones gastrointestinales, pero también su uso se puede extender fácilmente a la. na. piel, la salud oral y vaginal. La mayoría de los probióticos actuales son las bacterias ácido-lácticas, pertenecientes a los géneros Lactobacillus y. ed. ici. Bifidobacterium.1. El término probiótico se deriva del griego y significa literalmente "por la. M. vida." Fue acuñado por primera vez en 1965 por Lilley y Stillwell para. de. describir las sustancias secretadas por un microorganismo que estimulan el crecimiento de otro2.La definición actual Organización Mundial de la. ca. Salud de los probióticos es "microorganismos vivos que cuando se administran en cantidades adecuadas confieren un beneficio de salud al. lio te. huésped."3. Bi b. El Lactobacillus casei es un microorganismo que tiene aplicación como probiótico, cultivo iniciador ácido-productor para fermentaciones de leche4. Bacilo anaerobio facultativo Gram-positivas no esporulado. Se encuentra en el intestino humano y la boca3. Para su preparación, la liofilización es una de las técnicas usadas para obtener cultivos bacterianos estables en término de viabilidad y actividad funcional4.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El Lactobacillus casei, aislado por científicos del Centro de Referencia para Lactobacillus de Tucumán - Argentina, tiene capacidad de producir sustancias. antimicrobianas. tales. como. bacteriocinas,. aldehídos,. peróxidos, ácidos orgánicos, etc. Las bacteriocinas son compuestos de naturaleza proteica cuya actividad es ejercida generalmente, aunque no. na. en forma exclusiva, sobre bacterias estrechamente relacionadas desde el punto de vista taxonómico con la cepa bacteriocinogénica 5. Los. ici. probióticos también pueden liberar compuestos antifúngicos (contra. ed. Cándida albicans) en sus células que podrían contribuir a un efecto. M. terapéutico6.. de. En un estudio realizado por Justiniano Mejía se analizó el efecto probiótico in vitro de Lactobacillus casei asociado vancomicina sobre. ca. Staphylococcus aureus. El probiótico empleado a concentraciones de 100%, 75% y 50% asociado a vancomicina tuvo una alta diferencia. lio te. significativa (midiendo diámetro del halo de inhibición) en relación a la vancomicina sola7. Demostrándose in vitro el efecto sinérgico del. Bi b. Lactobacillus casei asociado vancomicina. A partir de ello, surge la necesidad de realizar investigaciones in vivo.. En este estudio, se usa a la vancomicina como fármaco activo frente Staphylococcus aureus. Los primeros usos de este fármaco se introdujeron en la práctica clínica en 1958.La vancomicina es un glicopéptido complejo tricíclico que consta de una cadena peptídica de. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. siete miembros que forman la estructura tricíclica, y un disacárido unido compuesto de vancosamina y glucosa. El efecto primario de glicopéptidos es la inhibición de las últimas etapas de la síntesis de la pared celular en la división de las bacterias; otro mecanismo descrito es la inhibición de la. na. síntesis de ARN y la membrana citoplasmática del S. aureus8.. La vancomicina tiene una amplia actividad contra los microorganismos. ici. Gram-positivos. Los estafilococos (incluyendo S. aureus, Staphylococcus. ed. epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus haemolyticus,. M. Staphylococcus hominis, Staphylococcus warneri, y otros estafilococos coagulasa-negativos) son sensibles normalmente a la vancomicina a una. de. concentración mínima inhibitoria (CMI) menor o igual a 2 mg/ml y a una. ca. concentración mínima bactericida (CMB) menor del doble de la CMI 8.. La más virulenta de las muy diversas especies de estafilococos,. lio te. Staphylococcus aureus, ha demostrado su versatilidad al seguir siendo una causa importante de morbilidad y mortalidad a pesar de contarse con. Bi b. innumerables antibióticos antiestafilocócicos9. Es una bacteria anaerobia facultativa, Gram positiva, productora de coagulasa, catalasa, inmóvil y no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo. Esta bacteria es parte de la micloflora humana normal; aproximadamente 25 a 50 % de las personas sanas. pueden colonizarse de manera. persistente o transitoria. La parte anterior de las fosas nasales es el sitio más frecuente de colonización humana, aunque también se coloniza piel. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (sobretodo cuando está lesionada), vagina, axila, perineo y orofaringe. Es una causa importante de infecciones nosocomiales. Constituye el motivo más frecuente de infección en las incisiones quirúrgicas. Puede producir una amplia gama de enfermedades, que van desde infecciones cutáneas y de las mucosas relativamente benignas, tales como foliculitis,. celulitis,. abscesos. profundos,. osteomielitis,. na. forunculosis o conjuntivitis, hasta enfermedades de riesgo vital, como meningitis,. sepsis,. ici. endocarditis o neumonía. Es un patógeno piógeno conocido por su. ed. capacidad de formar abscesos en los focos de infección tanto locales. M. como metastásicos. Esta bacteria desencadena una reacción inflamatoria que se caracteriza al principio por una respuesta intensa de leucocitos. de. polimorfonucleares y una infiltración ulterior de macrófagos y fibroblastos. Últimamente se ha reportado la presencia de estafilococo resistente a la. ca. meticilina, es por ello que el fármaco de elección es la Vancomicina4. Actualmente, se han descrito en la literatura cepas de Staphylococcus. lio te. aureus resistentes a vancomicina9. Las cepas de VISA (intermedia) han mostrado una pared celular inusualmente engrosada que impide la. Bi b. penetración del fármaco. La pared celular también contiene dipéptidos que se unen a la vancomicina. Cepas totalmente resistentes(VRSA), han adquirido resistencia Van A similar a Enterococcus sp.. Las infecciones de piel y tejidos blandos incluyen a todas las que afectan a piel y anejos cutáneos, tejido celular subcutáneo, fascias y músculo estriado y son, junto con las infecciones de las vías respiratorias, las. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. infecciones más frecuentes en clínica humana. Estas infecciones pueden ser producidas por una amplia variedad de microorganismos que forman parte de la flora normal de la piel y de las mucosas y también proceder del medio ambiente9. Estos microorganismos penetran en el organismo a través de soluciones de continuidad en la piel o en las mucosas,. na. secundariamente a la producción de una herida traumática, de una quemadura o de una mordedura (origen exógeno), como complicación de. ici. la cirugía (origen endógeno) o pueden producirse desde un foco de. M. ed. infección distante a través de la sangre (diseminación hematógena)5.. El tejido subcutáneo expuesto es un excelente medio de cultivo para la. de. colonización y proliferación de los microorganismos, que dependen de las características de la lesión (tipo de herida, profundidad, localización,. ca. grado de perfusión sanguínea, inmunidad y otros factores como la presencia de material extraño o tejido necrótico), y de factores. lio te. propiamente microbianos, como la carga bacteriana y los factores de. Bi b. virulencia de los microorganismos10.. JUSTIFICACIÓN:. La resistencia a los antibióticos es un fenómeno grave y creciente en la medicina contemporánea y se ha convertido en uno de los problemas de salud pública más eminentes del siglo 21. Actualmente la emergencia de resistencia a antibióticos de uso común en la clínica se ha incrementado. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en algunas bacterias patógenas. 11. y es un problema particular en. pacientes infectados con Staphylococcus aureus, debido al aumento de variantes resistentes a β-lacatámicos y aminoglicósidos.12 Es por esto que se quiere dar énfasis a la acción antibacteriana de los probióticos (Lactobacillus Casei) como coadyuvante de los antibióticos (vancomicina). na. para el tratamiento de enfermedades. De esta manera se evitará la resistencia del Staphylococcus aureus a la vancomicina en el futuro y. ici. además se logrará disminuir la dosis de antibióticos (vancomicina) para 13. M. ed. reducir la frecuencia de reacciones adversas medicamentosas.. de. PROBLEMA. ¿Tiene efecto sinérgico el Lactobacillus casei asociado a Vancomicina. ca. frente a infecciones epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus. HIPOTESIS:. Bi b. lio te. en Rattus rattus variedad Albinus?. Ho: El Lactobacilluscasei asociado a Vancomicina no tiene efecto Sinérgico frente a infecciones epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus. H1: El Lactobacilluscasei asociado a Vancomicina si tiene efecto sinérgico frente a infecciones epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS: General: Determinar si Lactobacillus casei asociado a Vancomicina tiene efecto sinérgico sobre infecciones epidérmicas producidas por. na. Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus.. Determinar si Lactobacillus casei Vancomicina. tiene. efecto. al 100% asociado a. sinérgico. ed. . ici. Específicos:. sobre. infecciones. rattus variedad Albinus. Determinar Vancomicina. si. Lactobacillus. de. . M. epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus en Rattus. tiene. efecto. casei. al. sinérgico. 75% sobre. asociado. a. infecciones. ca. epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus en Rattus. lio te. rattus variedad Albinus. . Determinar. Vancomicina. si. Lactobacillus. tiene. efecto. casei. al. sinérgico. 50% sobre. asociado. a. infecciones. Bi b. epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEFINICIÓN DE VARIABLES:. VARIABLE. INDICADOR. Infección. Unidad Formadora de. Cuantitativa. Colonia/mL. aureus. Lactobacillus. casei al 100%. casei y la. 75% y 50%. Cuantitativa. Nominal. M. Lactobacillus. ed. Efecto sinérgico del. Nominal. na. Staphylococcus. MEDICIÓN. ici. epidérmica por. ESCALA DE. TIPO. de. vancomicina.. ca.  Efecto Sinérgico: Efecto del probiótico (Lactobacillus casei) y la. lio te. vancomicina usados simultáneamente, siendo este efecto superior que podría haberse alcanzado si alguno de los medicamentos se. Bi b. hubiera administrado solo.14. II.. MATERIAL Y METODO 2.1 MATERIAL. Para el cálculo del tamaño muestral se utilizó la fórmula para la determinación de dos medias de muestras independientes, obteniéndose n= 5 ratas por grupo. El trabajo presentado tiene 4 grupos, por lo tanto se trabajó con un total de 20 ratas.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las ratas fueron estandarizadas, de cuatro meses de edad, con pesos promedio de 250g, provenientes de la misma camada y sometidas bajo el mismo régimen alimenticio. Se emplearon bacterias jóvenes de Staphylococcus aureus mantenidas en el cepario de la Sección de Microbiología de la Facultad de Medicina. na. de la UNT. ici. Para asegurar la exactitud de resultados, las muestras se sembrarán en. ed. placas Petri realizando el método de duplicación, generando un total de. M. 40 placas Petri 15.. de. 2.2 MÉTODO. probiótico.. Lactobacillus casei liofilizado se inoculó en leche Ultra High. lio te. El. ca. Procedimiento para la obtención de las concentraciones del. Temperatura (UHT) marca Gloria, 8 gr por litro, luego se incubó en microanaerobiosis a 37 grados centígrados por 24 horas, tiempo en el. Bi b. cual se produce el crecimiento de Lactobacillus casei. Las diluciones del producto probiótico se realizaron con medio tioglicolato, que es adecuado para estas bacterias anaerobias facultativas hasta obtener concentraciones de 100% (0,08 gr/mL), 75% (0,056 gr/mL) y 50% (0,04 gr/mL)5.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El Lactobacillus casei se obtuvo a partir de los productos Bacilor ®. Estos productos fueron procesados en el Laboratorio de Investigación de la Sección de Microbiología de la Facultad de Medicina de la UNT, con la finalidad de trabajar con las bacterias probióticas que se encuentran en. ca. de. M. ed. ici. na. ellos.. lio te. Foto N°01 y 02: Preparación del Lactobacillus caseiliofilizado.. Procedimiento para la obtención del inóculo bacteriano.. Bi b. Se preparó un cultivo bacteriano de Staphylococcus aureus, éste se sembró en placas de manitol y se incubó durante 24 horas. Posteriormente se hizo una dilución con solución salina estéril hasta alcanzar la turbidez del tubo N° 0,5 del nefelómetro de Mac Farland que corresponde a una concentración de 1x108blastosporas por ml 12.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M. ed. Foto N° 03 y 04: Preparación del inóculo bacteriano. Dilución con solución salina estéril hasta alcanzar la turbidez del tubo N° 0,5 del nefelómetro de Mac Farland.. Animales y modelo de infección en piel de Rattus rattus variedad. de. albinus. ca. Los ejemplares de Rattus rattus variedad albinus fueron seleccionados. lio te. aleatoriamente. Las ratas fueron anestesiados vía intraperitoneal con una. Bi b. dosis de 100 mg/kg de ketamina y 5 mg/kg de clorhidrato de xilacina 12.. Foto N°05:Rattus rattus variedad albinus anestesiadas.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Modelo de infección superficial. Se. usó. infección. el. modelo. de. superficial13.. Se. removieron. las. primeras. capas epidérmicas del área. na. de la piel de ratón rasurada,. ici. con tres pasajes de hoja de. para. facilitar (1. infección mm. de. Foto N°06: modelo de infección superficial.. M. bacteriana. la. ed. afeitar de acero inoxidable. profundidad aproximadamente). Con procedimientos de bioseguridad y. de. utilizando mecheros en todo el procedimiento se colocó 5 μL del inóculo bacteriano (5 x 105 bacterias) sobre una superficie de piel de 2 cm2.. ca. Pasados 5 min, para dar lugar a la absorción de las bacterias en la piel. lio te. del ratón, se colocó un apósito estéril sobre el área inoculada 12. Tratamiento:. Las ratas experimentales fueron tratadas con Lactobacillus casei al 100%. Bi b. (0,08 gr/mL), 75% (0,056 gr/mL) y 50% (0,04 gr/mL) y vancomicina a dosis de 10 mg/kg de peso, utilizando pipetas serológicas graduadas, empleando para el grupo experimental 12.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) ici. Foto N°07 y 08: Tratamiento.. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Diseño experimental. ed. Se realizó la aplicación de 2 dosis vía tópica a las 4 y 6 h post-inoculación. M. y la recuperación de bacterias se realizó a las 8 h post-inoculación (Fig.01).. de. La primera dosis de los tratamientos se aplicó a las 4 h post-inoculación13. lio te. período12.. ca. dado que la colonización bacteriana se establece dentro de dicho. Bi b. Figura N° 01: Tratamientos a las 4 y 6 horas post inoculación bacteriana.. Se trabajó con tres grupos experimentales y un grupo control (Figura 2). 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura N° 02: Grupos Control y Experimentales. Grupo A Control. Grupo. B. experimental 1. Grupo. C. experimental 2. Grupo. D. experimental 3 experimental 2. 100%. 100%. 100 %. Lactobacillus. Lactobacillus. Lactobacillus. Casei 100%. Casei 75 %. Casei 50 %. na. Vancomicina. Recuperación de Bacterias. M. ed. 100%. Vancomicina. Vancomicina. ici. Vancomicina. de. La determinación de la concentración bacteriana post-tratamiento se realizó según Gisby et al. (2000)16. Se retiró con bisturí el área de 2cm2 de. ca. la piel tratada, se colocó en un tubo con 1 mL de caldo Mueller Hinton. lio te. donde se homogeneizó con un grinder. Luego se realizó diluciones del homogenizado en solución fisiológica y se sembró alícuotas de 100 μL en placas de Petri con agar Mueller Hinton. Las placas se incubaron a 37 ºC. Bi b. durante 24 h y posteriormente se determinó las UFC/mL12. Todos los procedimientos se realizaron en el laboratorio según las Normas de Bioseguridad17,18.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio te. ca. Foto N°09: sembrado de alícuotas de 100 μL en placas de Petri con agar Mueller Hinton.. Foto N°10: Recuentoo final de Unidades Formadoras de Colonias (UFC). 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÉTICA Se tuvo en cuenta el cuidado, la utilización apropiada y el trato humanitario de los animales empleados en la investigación, además se utilizó un ambiente físico y espacio de acuerdo a la raza, según los documentos publicados por la Organización Panamericana de la Salud,. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. respecto al animal como sujeto de experimentación.19. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. El presente estudio de tipo experimental tiene como propósito conocer el efecto sinérgico de Lactobacillus casei y Vancomicina sobre infecciones epidérmicas producidas por Staphylococcus aureus en Rattus rattus. Después de. na. variedad Albinus. que las placas se incubaron a 37 ºC durante 24 h,. se. ed. obteniéndose los siguientes resultados:. ici. determinó las UFC/mL mediante recuento de unidades de colonias. M. CUADRO N° 01. RECUENTO DEL NÚMERO DE COLONIAS CON SU. de. RESPECTIVO GRUPO DE TRATAMIENTO ANTIBIÓTICO.. lio te. ca. GRUPO C: GRUPO D: GRUPO B: GRUPO A: VANCOMICINA VANCOMICINA VANCOMICINA CONTROL + + + Rattusrattus VANCOMICINA PROBIÓTICO PROBIÓTICO PROBIÓTICO (UFC/mL) 100% 75% 50% (UFC/mL) (UFC/mL) (UFC/mL) 5 0 1 4 R1A 2. 0. 3. 1. R2A. 2. 3. 4. 3. R2B. 3. 0. 0. 3. R3A. 2. 0. 4. 0. R3B. 4. 1. 0. 3. R4A. 1. 0. 0. 2. R4B. 1. 0. 1. 3. R5A. 4. 0. 4. 3. R5B. 0. 0. 6. 0. Bi b. R1B. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. UNT año 2014 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Para realizar el análisis de varianza se requiere comprobar si los grupos a tratar tienen muestras homogéneas20, para ello se utiliza el Estadístico de Levene. Nos da como resultado ser mayor o igual a 0.05 (0.07) de significancia, con ello se considera que la muestra es homogénea. (Anexo. na. n°02). A continuación, se determina el ANOVA, obteniendo valor menor a 0.05. Para. determinar. que. M. (Anexo N° 03). grupo de tratamiento antibiótico 22.. ed. menos hay una diferencia en los. ici. de significancia (0.022), esto determina aceptar nuestra hipótesis que al. grupos. tratados. con. antibióticos. son. de. significativamente diferentes se realizaron las comparaciones a posteriori o post Hoc. Resultando como diferencia significativa a menos de 0.05. ca. (0.37) a los grupos A (VANCOMICINA SOLA) y B (VANCOMICINA +. Bi b. lio te. PROBIÓTICO100%). (Anexo N° 04). 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN Los probióticos son definidos por la Organización para la Agricultura y la Alimentación de las Naciones Unidas y la Organización Mundial de la Salud (OMS) como microorganismos vivos que, cuando se administran en. ici. na. cantidades adecuadas, confieren un beneficio de salud al huésped 3.. (menos de 0.05). ed. En el presente estudio, se encontró una diferencia significativa de 0.037 el grupo A (CONTROL, VANCOMICINA) y grupo B. M. (VANCOMICINA +PROBIÓTICO100%) llegando a aceptar nuestra hipótesis alternativa: el Lactobacillus casei asociado a Vancomicina SI. de. tiene efecto sinérgico de sobre infecciones epidérmicas producidas por. ca. Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus. (Anexo N° 04).. lio te. Es de mucha importancia aceptar que para que exista dicho efecto sinérgico se requiere de la concentración máxima (100%) del Probiótico; según los resultados no existe diferencia significativa entre los grupos C. Bi b. (VANCOMICINA. +PROBIÓTICO75%). y. D. (VANCOMICINA+. PROBIÓTICO50%) (Anexo N° 04).. Según los estudios, este efecto sinérgico es probable a través de múltiples mecanismos, entre los cuales destacan21: a) Promover el mecanismo de la fagocitosis; b) inhibición del crecimiento bacteriano; c) Modulación local de la respuesta inmune; d) inhibición competitiva.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. También es válido resaltar la importancia de las Bacteriocinas, que son derivados del metabolismo principalmente de algunas bacterias ácido lácticas, con función antimicrobiana, de naturaleza peptídica, sintetizadas ribosomalmente. Se ha comprobado que pueden actuar en bacterias patógenas, especialmente sobre Gram positivas y en algunas Gram. na. negativas. Las bacteriocinas han sido encontradas en casi todas las. ici. especies bacterianas ácido lácticas examinadas hasta la fecha.. ed. La capacidad de las bacterias lácticas para inhibir el crecimiento de otros. M. organismos en cultivos mixtos ha sido observada durante más de 70 años, lo que comúnmente se ha llamado antagonismo láctico. La. de. reducción del pH y la utilización de los carbohidratos disponibles parecen constituir el principal mecanismo de antagonismo microbiano. No obstante. ca. también se conoce que las bacterias lácticas producen además de ácidos. lio te. orgánicos, peróxido de hidrógeno, radicales libres, diacetilo, acetaldehído, isómeros D de los aminoácidos, antibióticos y bacteriocinas.22-26. Bi b. Las bacterias probióticas pueden producir inhibición del crecimiento bacteriano (FAO). 27. , lo que fue comprobado en el estudio de Justiniano. M7, con la determinación de la concentración mínima inhibitoria mínima.. Dicho estudio menciona que S. aureus fue altamente sensible a todas las asociaciones de probióticos y vancomicina ya que no se formaron UFC en estos tratamientos en cambio la bacteria sin tratamiento dio como resultado promedio 3,08x108bact/mL, con una desviación estándar de. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.95x 108. Estos resultados también concuerdan con los hallazgos de Gutiérrez quien encontró que el extracto de L. casei presenta una buena actividad antagónica al compararse con su control, y de su actividad es mejor cuando utilizó al Lactobacillus sin diluir más que cuando lo utilizó. na. diluido hasta 10E-3 28-29.. Las bacteriocinas tienen propiedades bactericidas contra varias especies. ici. bacterianas al permeabilizar su membrana celular, formación de poros,. ed. que lleva a la dispersión de membrana y el flujo del contenido. de. enzimas para su crecimiento24.. M. citoplasmático hacia el espacio extracelular, así como la inhibición de. No existe evidencia sobre la razón de que a 75% y 50% del probiótico no. ca. se encontrara efecto sinérgico, pero se sospecha sobre las propiedades farmacocinéticas del Lactobacillus asociadas a la vancomicina, los cuales. Bi b. lio te. podrían alterar dicho efecto.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES . Lactobacillus casei asociado a Vancomicina SI tiene efecto sinérgico. sobre. infecciones. epidérmicas. producidas. por. Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus. Lactobacillus casei al 100% asociado a Vancomicina SI tiene. na. . efecto sinérgico sobre infecciones epidérmicas producidas por. Lactobacillus casei al 75% asociado a Vancomicina NO tiene. ed. . ici. Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus.. efecto sinérgico sobre infecciones epidérmicas producidas por. Lactobacillus casei al 50% asociado a Vancomicina NO tiene. de. . M. Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus.. efecto sinérgico sobre infecciones epidérmicas producidas por. ca. Staphylococcus aureus en Rattus rattus variedad Albinus.. lio te. VI. RECOMENDACIONES . Incrementar investigaciones experimentales para demostrar la. Bi b. eficacia del uso sinérgico del Lactobacillus casei asociado a Vancomicina. . Realizar cortes histológicos de piel para evidenciar alguna. diferencia significativa con el tratamiento sinérgico. . Investigar más beneficios terapéuticos del Lactobacillus casei.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Foligné B, Daniel C, Pot B. Probiotics from research to market: the possibilities, risks and challenges. Current opinion in microbiology. 2013;16(3):284--292.. na. 2. Pizzorno J, Murray M. Textbook of natural medicine. 4th ed.. ici. Edinburgh: Elsevier; 2013. Capítulo 116 Probióticos, páginas 979994.. ed. 3. Bennett J, Dolin R, Mandell G. Mandell, Douglas, and Bennett's. M. Principles and practice of infectious diseases. 7ma ed. Philadelphia: Churchill Livingstone Elsevier; 2012. Capítulo 11 Prebióticos,. de. probióticos y simbióticos página 161.. 4. Velásquez J, Giraldo G, Padilla L. Viabilidad de Lactobacillus. ca. caseis sp casei ATCC 393 cultivado en suero de leche clarificado. lio te. en un proceso de fermentación discontinuo. Facultad de Ciencias y el Programa de Posgrados en Ciencia y Tecnología de Alimentos de. la. Universidad. Nacional. de. Colombia--Sede. Bogotá.. Bi b. 2012;19(1):207--209.. 5. Fedorak R, Madsen K. “Probiotics and the management of inflammatory. bowel. disease”. Division. of. Gastroenterology,. University of Alberta, Edmonton, Alberta, Canadá 2004.. 6. Nyanzi R, Awouafack M, Steenkamp P, Jooste P, Eloff J. Anticandidal. activity. of. cell. extracts. from. 13. pro biotic<. i>Lactobacillus</i> strains and characterisation of lactic acid 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. and a novel fatty acid derivative from one strain. Food Chemistry. 2014;164:470--475. 7. Justiniano M. Efecto Probiótico in Vitro de Lactobacillus casei en la disminución de la resistencia a ciprofloxacino, y. Pseudomonas. Vancomicina Aeruginosa. sobre y. Escherichia. coli,. na. imipenen. Staphylococcus. aureus.. ici. Facultad de Medicina Humana de la Universidad Privada. ed. Antenor Orrego. Tesis para obtener el título profesional de. M. Médico Cirujano. Perú – Trujillo 2013. 8. Bennett J, Dolin R, Mandell G. Mandell, Douglas, and Bennett's. de. Principles and practice of infectious diseases. 7ma ed. Philadelphia: Churchill Livingstone Elsevier; 2012. Capítulo 31 Glucopétidos. ca. página 450.. lio te. 9. Lowy F. Infecciones estafilocócicas en: Longo D, Fauci A, Kasper D, Hauser D, Jameson R, Loscalzo J. HARRISON PRINCIPIOS DE MEDICINA INTERNA 18ava edición.. Bi b. McGraw Hill. New York E.E.U.U. 2012. Volumen I Parte 7: Enfermedades infecciosas, páginas 1160- 1170.. 10.Cercenado E, Cantón R. Procedimientos en Microbiología clínica. Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. España 2006.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 11. Mella S. Sergio. Staphylococcus aureus resistente a vancomicina. Rev. chil. infectol. [revista en la Internet]. 2002 [citado 2013 Sep 25];. 19(3):. 186-187.. Disponible. en:. http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S071610182002000300012&script=sci_arttext. na. 12.Barni M, Fontanals A y Moreno S. Estudio de la eficacia antibiótica. ici. de un extracto etanólico de Rosmarinusofficinalis L. contra Staphylococcus aureus en dos modelos de infección en piel de. ed. ratón. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales. M. y Aromáticas, 8 (3), 219 - 223© 2009. 13.Kugelberg E, Norström T, Petersen TK, Duvold T, Andersson DI.. de. 2005. Establishment of a superficial skin infection model in mice by using Staphylococcus aureus and. Streptococcus pyogenes.. ca. Antimicrob Agents Chemother 49:3435-3441.. lio te. 14.Lilley L; Aucker R, Lake R y Gómez R. Farmacologia en Enfermería (2da edición). España: Elsevier. 1999 p. 13. ISBN 8481744484. Consultado el 23 de Octubre de 2013. Disponible en :. Bi b. http://books.google.es/books?hl=es&id=XpHLCYmOuXcC&q=efect o+sinergico#v=snippet&q=efecto%20sinergico&f=false. 15.Barnett R. Estadística en el Laboratorio Clínico. Editorial Reverté. España.1983. Capítulo 12 Medidas por duplicado. página 130.. 16.Gisby J, Bryant J. Efficacy of a new cream formulation of mupirocin: comparison with oral andtopical agents in experimental skin. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. infections.Antimicrob Agents Chemother. American Society for Microbiology. , Brockham Park, Betchworth, United Kingdom 2000. 17.Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Salud. BIOSEGURIDAD EN LABORATORIOS DE ENSAYO, BIOMÉDICOS Y CLÍNICOS. Serie Normas Técnicas N° 18.. na. 18.Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999.Especificaciones. ici. técnicas para la producción, cuidado y uso de animales de. ed. laboratorio. México 1999. 19.Cardozo C, Mrad A, Martínez C, Rodríguez E, Lolas F. El animal. M. como sujeto experimental. Aspectos técnicos y éticos. Primera. de. Edición. Andros Impresores. Chile. 2007.. 20.Dawson B, Trapp RG. Basic & Clinical Biostatistics, 4e: McGraw-. ca. Hill,New York, NY. 2004. Cap 8.. lio te. 21.Figueroa I, Gómez L, García M, Cruza A. El beneficio de los probióticos. Tecnología. [internet] Agosto 2006 [citado Sep25].. Vol.39. N°1. Disponible. en:. 2013. http://www.alfa-. Bi b. editores.com/alimentaria/julio-agosto06/beneficio.pdf. 22.Jaramillo D, Meléndez A, Sánchez Medina O. Evaluación de la producción. de. bacteriocinas. a. partir. de. lactobacilos. y. bifidobacterias. Revista venezolana de Ciencia y tecnología. [internet] 2010 [citado 2013 Octubre 14]; 1(2):193-209 Disponible en:. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. http://www.rvcta.org/Publicaciones/Vol1Num2/ArchivosV1N2/Jaram illo-Giraldo_et_al._RVCTA-V1N2.pdf. 23. Nava J. Evaluación de las bacterias ácido lácticas comercializadas como probióticas. Tesis. Universidad de los Andes de Mérida. 2008.. Disponible. en:. na. http://tesis.ula.ve/pregrado/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=124. ici. 9. 24.Gawronska A, Dziezchciarz P, Horvath A, Szajewska H, A. for. abdominal. pain. disorders. in. children.. Aliment. M. GG. ed. randomized double-blind placebo-controlled trial of Lactobacillus. PharmacolTher 2007; 25: 177-84 M,. Bacteriocinas. de. probióticos.. de. 25.Dolz. Nuevos. enfoques. bioterapéuticos: PINHE. Nutrición clínica y dietética hospitalaria [-. ca. internet]. 2008 [Citado el 24 de octubre del 2014]: 28(3); 20-7. en:. lio te. Disponible. http://www.nutricion.org/publicaciones/revistas/NUTRICION28_3_20_37.pdf. Bi b. 26.LopezM, Domingo D, Antibioticoterapia con probióticos. Revisión Española de Quimioterapia. Junio 2007:20(2):170-181. 27.FAO, WHO experts. Health and nutritional properties of Probiotics in Food including Powder Milk with Live Lactc Acid Bacteria. Octubre. 2001:. 5-20.. Disponible. en:. http://www.who.int/foodsafety/publications/fs_management/en/probi otics.pdf. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 28.Prado M, S-layer de Lactobacillus acidophilus. Caracterización y análisis. funcional.. 2010.. Disponible. en:. digital.bl.fcen.uba.ar/Donwnload/tesis/tsis_4606_PradoAcosta.pdf. 29.Casaus P, Nes F, Hernandez E, Izarra M, Herranz C. Bacteriocins of láctica acid bacteria. Foodscience and technologyinternational.. na. 2001 [internet][Citado el 23 de octubre del 2014]; 7(4), 281-98.. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. Disponible en: http://fst.sagepub.com/content/4/281.abstract.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VIII.. ANEXOS:. ANEXO N° 01. PROTOCOLO DE DATOS.. na. Rattus rattus. GRUPO C: GRUPO D: GRUPO B: GRUPO A: VANCOMICINA VANCOMICINA VANCOMICINA CONTROL + + + VANCOMICINA PROBIÓTICO PROBIÓTICO PROBIÓTICO (UFC/mL) 100% 75% 50% (UFC/mL) (UFC/mL) (UFC/mL). ici. R1A. ed. R1B R2A. M. R2B R3A. R4B R5A. Bi b. lio te. R5B. ca. R4A. de. R3B. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 02. PRUEBA DE HOMOGENEIDAD DE VARIANZAS. gl2. Sig.. 3. 36. 0,07. ici. 4,712. gl1. na. Estadístico de Levene. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. UNT año 2014. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 03. ANALISIS DE VARIANZA DE LOS GRUPOS DE TRATAMIENTO ANTIBIÓTICO. Media cuadrática 3. 9,092. 90,500. 36. 2,514. 117,775. 39. 3,617. Sig. 0,022. ici. 27,275. F. ed. Intergrupos Intragrupos Total. gl. na. Suma de cuadrados. Bi b. lio te. ca. de. M. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. UNT año 2014. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 04: COMPARACIONES MÚLTIPLES Variable dependiente: RECUENTO DE COLONIAS HSD de Tukey (J) C. Diferencia de medias (I-J). Error típico. Sig.. 2,000*. ,709. ,037. GRUPO GRUPO A C. ,100. ,709. ,999. ,200. ,709. -2,000*. ,709. -1,900. Límite superior. ,09. 3,91. -1,81. 2,01. ,992. -1,71. 2,11. ,037. -3,91. -,09. ,709. ,052. -3,81. ,01. de. ed. ici. na. GRUPO B. GRUPO D GRUPO A GRUPO GRUPO B C GRUPO D GRUPO A GRUPO GRUPO C B GRUPO D GRUPO A. Intervalo de confianza al 95% Límite inferior. M. (I) C. ,709. ,071. -3,71. ,11. -,100. ,709. ,999. -2,01. 1,81. 1,900. ,709. ,052. -,01. 3,81. ,100. ,709. ,999. -1,81. 2,01. -,200. ,709. ,992. -2,11. 1,71. GRUPO GRUPO D B. 1,800. ,709. ,071. -,11. 3,71. GRUPO C. -,100. ,709. ,999. -2,01. 1,81. Bi b. lio te. ca. -1,800. *. La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. UNT año 2014. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO Nº 05 EVALUACIÓN DE LA TESIS El Jurado deberá: a. Consignar las observaciones y objeciones pertinentes relacionados a los. na. siguientes ítems.. ed. c. Firmar los tres miembros del Jurado.. ici. b. Anotar el calificativo final.. TESIS:…………………………………………………………………………………. M. …………………………………………………………………………………………. de. …………………………………………………………………………………………. a. ………………………………………………………………………………………….. El Título. te c. 1. DE LAS GENERALIDADES:. lio. …………………………………………………………………………………………. Bi b. ………………………………………………………………………………………… Tipo de Investigación: ………………………………………………………………………………………… 2. DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN: Antecedentes:………………………………………………………………………… ………….......................................................................................................................... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Justificación:.................................................................................................................... ......................................................................................................................................... Problema:……………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………….. na. Objetivos:……………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………….. ici. Hipótesis:………………………………………………………………………………. ed. …………………………………………………………………………………………. Diseño de Contrastación:……………………………………………………………….. M. ………………………………………………………………………………………….. de. Tamaño Muestral:……………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………….. a. Análisis Estadístico:……………………………………………………………………. te c. ………………………………………………………………………………………….. lio. 3. RESULTADOS:………………………………………………………………….... Bi b. ……………………………………………………………………………………... 4. DISCUSIÓN:……………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………….. 5. CONCLUSIONES: …………………………………………………………………………………….. ……………………………………………………………………………………... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:……………………………………………………………... …………………………………………………………………………………….... na. 7. RESUMEN:………………………………………………………………………... ici. …………………………………………………………………………………….... DE. ed. 8. RELEVANCIA. LA. M. INVESTIGACIÓN:……………………………………………………………......... de. 9. ORIGINALIDAD:…………………………………………………………………... te c. 10. SUSTENTACIÓN. a. .…………...…………………………………………………………………………... lio. 10.1Formalidad:……………………………………………………………………………. Bi b. 10.2 Exposici6n:…………………………………………………………………………… 10.3 Conocimiento del Tema: ……………………………………………………………. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CALIFICACIÓN: (Promedio de las 03 notas del Jurado). JURADO:. Nombre. Código. na. Firma. ed. ici. Docente. Dr.……………………......... ……………………. Grado Académico:. …………………………………………………………... Secretario:. Dr.………………………….. ……………………. te c. a. de. M. Presidente:. lio. Grado Académico:. Bi b. Grado Académico:. ………………………………………………………….. …………………………………………………………... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO Nº 06 RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO. El Tesista deberá responder en forma concreta de las observaciones del jurado a manuscrito. na. en el espacio correspondiente:. ici. a) Fundamentando su discrepancia.. b) Si está de acuerdo con la observación también registrarla.. M. ed. c) Firmar.. TESIS:…………………………………………………………………………………………. de. ………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………. te c. a. …………………………………………………………………………………………………. lio. 1.- DE LAS GENERALIDADES:. Bi b. ElTitulo……………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… TipodeInvestigación………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.- DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN: Antecedentes:………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………… Justificación:…………………………………………………………………………………. na. …………………………………………………………………………………………………. ici. Problema:……………………………………………………………………………………… ……............................................................................................................................................. ed. Objetivos:………………………………………………………………………………………. M. …...……………………………………………………………………………………………. DiseñodeContrastación:………………………………………………………………………... de. Tamaño Muestral:……………………………………………………………………………... …………………………………………………………………………………………………. a. Análisis Estadístico:…………………………………………………………………………... te c. …………………………………………………………………………………........................ 3.- RESULTADOS:…………………………………………………………………………. lio. ……………………………………………………………………………………………... Bi b. 4.- DISCUSIÓN:…………………………………………………………………………….. ……………………………………………………………………………………………... 5.- CONCLUSIONES:……………………………………………………………………… ………….............................................................................................................................. 6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………………………….................... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 7.- RESUMEN:……………………………………………………………………………… ………….............................................................................................................................. 8.- RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:…………………………………............... 9.- ORIGINALIDAD:………………………………………………………………………... ici. SUSTENTACIÓN:………………………………………………………………….... Formalidad:…………………………………………………………………….. 10.2. Exposición:…………………………………………………………………….. 10.3. Conocimiento:………………………………………………………………….. M. ed. 10.1. Bi b. lio. te c. a. de. 10.-. na. ……………………………………………………………………………………………... ………………………........ Nombre Firma. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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