Efecto del extracto crudo del fruto de morinda citrifolia l “noni” sobre los niveles de malondialdehído en membranas cerebrales de rattus rattus var norvegicus con hiperglicemia inducida”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Y. TESIS II. BI. O. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. AC I. A. “EFECTO DEL EXTRACTO CRUDO DEL FRUTO DE Morinda citrifolia L.“NONI” SOBRE LOS NIVELES DE MALONDIALDEHÍDO EN MEMBRANAS CEREBRALES. RM. DE Rattus rattus var. norvegicus CON HIPERGLICEMIA INDUCIDA”. FA. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE. AUTORES:. ARROYO ARROYO, FRANCIES JHOMPIER. BI BL IO. TE CA. DE. BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BRIONES ANAMPA, SEGUNDO ALCIDES. ASESOR:. Dr. YBAÑEZ JULCA, ROBERTO OSMUNDO. CO-ASESORA:. Dra. MANTILLA RODRÍGUEZ, ANA ELENA. TRUJILLO – PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Dedicatorias. M IC. A. A Dios… Q. UI. Por darme la fuerza para seguir adelante con mis objetivos. BI. O. trazados en este pequeño avance académico y no dejarme caer. A mis Padres… Arroyo Cotrina, T. y Arroyo Pablo, G.. DE. FA. RM. AC I. A. Y. cuando creía que no había salida.. TE CA. Por darme su amor, su ayuda incondicional, ser mi apoyo moral,. BI BL IO. mis guías y mis mejores críticos; por confiar en mí, por siempre estar a mi lado y ser mi fuerza que no me deja caer, por alentarme y motivarme a seguir adelante hasta alcanzar mis objetivos. Son mi mejor ejemplo para llegar a ser mejor. ¡Infinitas gracias, los quiero mucho!. Francies Jhompier Arroyo Arroyo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios… Por su infinito amor, misericordia y protección que me brinda día a día; por llenarme de sabiduría, paciencia, y darme la fuerza necesaria para seguir adelante en esta etapa. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. de mi vida.. A mis Padres…. FA. RM. Anampa Cueva, R. y Briones Rojas, Samuel.. DE. Por su apoyo incondicional en mi camino hacia el éxito, son mi motivo. TE CA. para continuar mejorando todos los días, siempre los tengo en mi. BI BL IO. corazón.. Briones Anampa, Segundo Alcides. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. A nuestro asesor: Dr. ROBERTO OSMUNDO YBAÑEZ JULCA. A. Por su apoyo desinteresado, paciencia y valiosas orientaciones. Gracias por su. M IC. tiempo, su dedicación, por compartir sus conocimientos y experiencias para poder. Q. UI. concluir la presente investigación. Gracias por su amistad y su preocupación durante. AC I. A. Y. BI. O. la realización de la investigación y por motivarnos a ser mejores cada día. RM. A la Dra. ANA ELENA MANTILLA RODRÍGUEZ. FA. Por el apoyo, orientación y experiencia que nos brindó, y sirvió de mucho para la. TE CA. DE. realización del presente trabajo.. BI BL IO. Un enorme agradecimiento a ambos por su amistad y porque nos enseñaron que todo proyecto emprendido debe realizarse con pasión y profesionalismo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. M IC. Dra. Anabel Doris Gonzalez Siccha. A. _______________________________. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. PRESIDENTE. RM. _____________________________________. FA. Dra. Ana María del Carmen Guevara Vásquez. BI BL IO. TE CA. DE. MIEMBRO. ______________________________ Dr. Roberto Osmundo Ybañez Julca MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores miembros del jurado dictaminador: Dando cumplimiento a lo establecido por el Reglamento de Grados y Títulos de la. M IC. A. Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo – La. UI. Libertad, sometemos a vuestra honorable consideración y elevado criterio el presente. O. Q. informe final de Tesis II:. Y. BI. “EFECTO DEL EXTRACTO CRUDO DEL FRUTO DE Morinda citrifolia L.“NONI”. A. SOBRE LOS NIVELES DE MALONDIALDEHÍDO EN MEMBRANAS. AC I. CEREBRALES DE Rattus rattus var. norvegicus CON HIPERGLICEMIA. RM. INDUCIDA”. FA. Es propicia esta oportunidad para manifestarle nuestro más sincero reconocimiento a. TE CA. DE. nuestra alma máter y toda su plana docente, que con su capacidad y buena voluntad contribuyeron a nuestra formación profesional.. BI BL IO. Dejo a vuestro criterio Señores Miembros del Jurado dictaminador, la respectiva calificación del presente informe.. ____________________________. _____________________________. Arroyo Arroyo Francies Jhompier. Briones Anampa Segundo Alcides. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. A. RESUMEN ............................................................................................................................... 1. M IC. ABSTRACT.............................................................................................................................. 2. Q. UI. INTRODUCCIÓN .................................................................................................................... 3. BI. O. MATERIAL Y MÉTODO ...................................................................................................... 13. A. Y. RESULTADOS....................................................................................................................... 23. RM. AC I. DISCUSIÓN ......................................................................................................................... 267. FA. CONCLUSION ....................................................................................................................... 33. DE. RECOMENDACIONES ......................................................................................................... 34. TE CA. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .................................................................................... 35. BI BL IO. ANEXOS ................................................................................................................................... 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN En la presente investigación se determinó el efecto del extracto crudo del fruto de Morinda citrifolia L.“noni” sobre los niveles de malondialdehido en membrana cerebral con hiperglicemia inducida. Se utilizaron 24. A. de Rattus rattus var. norvegicus. M IC. especímenes machos, de 2 a 3 meses de edad, cuyos pesos estuvieron comprendidos entre. UI. 200 a 250 g y distribuidos aleatoriamente en 3 grupos experimentales; control, problema. O. Q. 1 y problema 2. Al grupo control se le administró por vía oral 2 mL de NaCl 0.9%, a los. Y. BI. grupos problema 1 y 2 se les administró extracto crudo de Morinda citrifolia L. a dosis. AC I. A. de 5ml/kg y 10ml /kg respectivamente, por un periodo de 21 días; luego se les indujo. RM. hiperglicemia con estreptozotocina (45 mg/kg vía i.p), pasados 8 días, se procedió a. FA. sacrificarlas y extraer las muestras de cerebro que sirvieron para la determinación del. DE. efecto antioxidante según niveles de malondialdehido, mediante el método colorimétrico. TE CA. de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (TBARS) a 532 nm de longitud de onda. Los resultados muestran que el extracto de Morinda citrifolia L. a dosis de 5ml/kg y reducir significativamente los niveles de malondialdehido en. BI BL IO. 10ml/kg lograron. membranas cerebrales de Rattus rattus var. norvegicus. evidenciando mejor efecto. antioxidante la dosis de 10 ml/Kg (p≤ 0.05).. Palabras claves: Morinda citrifolia L., membrana cerebral, malondialdehido, hiperglicemia. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT In the present investigation the effect of the crude extract of the fruit of Morinda citrifolia L. "noni" on the levels of malondialdehyde in the cerebral membrane of Rattus rattus var. norvegicus with induced hyperglycemia. Twenty-four male specimens, 2 to 3 months old,. M IC. A. whose weights ranged from 200 to 250 g and were randomly distributed in 3. UI. experimental groups; Control, problem 1 and problem 2. The control group was. Q. administered orally 2 mL of 0.9% NaCl, groups 1 and 2 were given crude extract of. BI. O. Morinda citrifolia L. at doses of 5 ml / kg and 10 ml / Kg respectively, for a period of 21. A. Y. days; Then hyperglycemia was induced with streptozotocin (45 mg / kg ip), after 8 days,. AC I. were sacrificed and extracted brain samples that were used to determine the antioxidant. RM. effect according to levels of malondialdehyde, by the colorimetric method of reactive. FA. substances To thiobarbituric acid (TBARS) at 532 nm wavelength. The results show that. DE. the extract of Morinda citrifolia L. at doses of 5ml / kg and 10ml / kg managed to. TE CA. significantly reduce the levels of malondialdehyde in brain membranes of Rattus rattus. BI BL IO. var. norvegicus showing a better antioxidant effect at a dose of 10 ml / kg (p≤0.05). Key words: Morinda citrifolia L., cerebral membrane, malondialdehyde, hyperglycemia. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. La diabetes mellitus (DM) se define como un síndrome heterogéneo de causas múltiples, caracterizado principalmente por hiperglicemia crónica, en ella se presentan alteraciones. A. en el metabolismo de los carbohidratos, grasas y proteinas. En la diabetes mellitus están. M IC. involucrados varios procesos patogénicos desde la destrucción autoinmune de la células β. O. Q. UI. el páncreas con déficit de insulina, o la aparición de la resistencia a dicha hormona1,2.. BI. La DM es una enfermedad compleja que se caracteriza fundamentalmente por una. A. Y. insuficiencia absoluta o relativa de la secreción de insulina, y por una sensibilidad o. AC I. resistencia de los tejidos al efecto metabólico de la insulina. La frecuencia de la diabetes. RM. va en aumento tanto en países desarrollados como en vías de desarrollo, debido al. FA. envejecimiento de la población, la tendencia al sedentarismo y el mejoramiento del. DE. control de las enfermedades infectocontagiosas. La obesidad se asocia con la diabetes. TE CA. mellitus como parte integrante del síndrome y como factor precipitante de las personas. BI BL IO. genéticamente expuestas. Los obesos presentan una hiperinsulinémia, ya sea por el aumento del adipocito, o por un aumento del flujo sanguíneo portal. Esta hiperinsulinémia se debe a la insulinorresistencia, y de hecho el estado clínico de la insulinorresistencia es la obesidad. La hipersecreción de insulina es insuficiente para rebasar la resistencia a la misma, y aparece la hiperglicemia3. Entre las características clínico epidemiológicas más sostenibles de la diabetes figuran su predominio en edades tardías, en el sexo femenino, su localización en áreas urbanas, la frecuencia de historia familiar de diabetes4. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La diabetes está asociada a un incremento del riesgo de muerte prematura; así, cada año, cerca de 4 millones de muertes son atribuidas directamente a la DM lo que constituye el 6,8% de la mortalidad global por todas las causas, el 80% de las muertes por DM se producen en países en vías de desarrollo 5.. A. La prevalencia mundial de la diabetes en adultos (mayores de 18 años) ha aumentado del. M IC. 4,7% en 1980 al 8,5% en 2014. La prevalencia de la diabetes ha aumentado con mayor. Q. UI. rapidez en los países de ingresos medianos y bajos. Esta enfermedad es una importante. BI. O. causa de ceguera, insuficiencia renal, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular y. Y. amputación de los miembros inferiores6.. AC I. A. Se estima que en 2012 la diabetes fue la causa directa de 1,5 millones de muertes, y que. RM. otros 2,2 millones de muertes eran atribuibles a la hiperglucemia. Aproximadamente la. FA. mitad de las muertes atribuibles a la hiperglucemia tienen lugar antes de los 70 años de. DE. edad. Según proyecciones de la OMS, la diabetes será la séptima causa de mortalidad en. TE CA. 20306.. En nuestro país, de acuerdo a un estudio de alcance nacional realizado por el Instituto. BI BL IO. Nacional de Salud, la prevalencia de DM en mayores de 20 años para el año 2005 fue de 2,8%; asimismo, los estudios de factores de riesgo para enfermedades no transmisibles (FRENT) realizados por la Dirección General de Epidemiología encontraron una prevalencia de DM de 2,8 a 3,9% en ciudades de la costa y sierra (Lima, Callao, Villa el Salvador, Trujillo, Huancayo). Debido a la reducción de la mortalidad infantil y al incremento de la esperanza de vida de la población peruana como consecuencia de haber superado la transición epidemiológica, es esperable un incremento de los casos de DM, de sus consecuencias fatales e incapacitantes. Esto se evidencia en el último estudio de 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. carga de enfermedad realizado por la Dirección General de Epidemiología en el que la DM fue responsable del 3,4% de la carga nacional del año 20085. La insulina es una proteína constituida por dos cadenas de aminoácidos (A y B), las que están unidas por dos puentes desulfuro. Se sintetiza en el interior de las células β de los. A. islotes de Langerhans del páncreas en forma de un precursor, la “proinsulina”, el cual en. M IC. el momento de su liberación a la sangre, se rompe en sus dos componentes, “insulina” y. Q. UI. “péptido C”; esta liberación en el páncreas está sometida a múltiples factores de. BI. O. regulación: químicos, nerviosos y hormonales, pero como es lógico, son las. Y. modificaciones de los principales sustratos energéticos (glucosa, aminoácidos, ácidos. AC I. A. grasos libres, cuerpos cetónicos) los que inducen modificaciones inmediatas en la. RM. respuesta. Los efectos de la insulina corresponden principalmente a la disminución de las. FA. concentraciones sanguíneas de glucosa, ácidos grasos y aminoácidos, promoviendo la. DE. conversión intracelular de éstos en sus formas de almacenamiento en el organismo, como. TE CA. lo son glucógeno, triglicéridos y proteínas7. BI BL IO. Cuando ocurre un déficit secretor de insulina (insulinopenia), una disminución de la sensibilidad periférica a la insulina (insulinorresistencia) o una combinación de ambos mecanismos se llega a la hiperglicemia que como tal es la causante de los síntomas clásicos de la diabetes: polidipsia, polifagia y poliuria. Otro síntoma considerado como clásico es la astenia, se caracteriza por un malestar general producido por el defecto metabólico generalizado a causa de la falta o ineficaz acción de la insulina, la principal hormona anabólica. El adelgazamiento, signo clásico de la Diabetes Mellitus tipo 1 (DM1) debida a la destrucción de las células beta del páncreas y, en general, con déficit. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. absoluto de insulina. En lo que respecta a la Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) debida a una insulinorresistencia, aunque exista una producción normal de insulina en los islotes pancreáticos (o incluso niveles altos), puede haber tendencia a la obesidad, que acentúa aún más el proceso de resistencia insulínica característico de la DM.8,9. A. La evolución de la DM viene marcada por un desarrollo lento y una presentación clínica. M IC. inicialmente poco clara, pero que evoluciona a notables complicaciones crónicas, tales. Q. UI. como: cardiopatía isquémica, enfermedad cerebro vascular, vasculopatía periférica,. BI. O. alteraciones macrovasculares ateroescleróticas, retinopatía, nefropatía, neuropatía. Y. somática y autonómica. Todas ellas relacionadas directa o indirectamente con la elevada. AC I. A. morbimortalidad que presenta la DM10.. RM. Las enfermedades metabólicas, como la DM, tienen grades posibilidades de tener una. FA. participación de elementos oxidativos en su génesis, evolución o complicaciones ya que. DE. pueden generar estados oxidantes o afectar la generación o la eficiencia de recuperación. TE CA. de los mecanismos antioxidantes. El daño oxidativo se presenta cuando hay un. BI BL IO. crecimiento de la concentración de moléculas oxidantes, sean endógenas o exógenas, o cuando se tiene una condición de reducción de las defensas antioxidantes10. A pesar de que existen evidencias experimentales que sugieren que el estrés oxidativo puede determinar el inicio y la progresión de las complicaciones tardías de la DM, todavía hay controversia sobre si el incremento de este fenómeno sólo es asociativo y no causal. Cada vez hay más evidencias que muestran que pacientes con DM presentan un aumento en el estrés oxidativo y los procesos de inflamación, siendo mayores en aquellos que presentan complicaciones propias de la patología, caracterizadas por una disminución 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en la actividad de los sistemas antioxidantes y un incremento de los productos de oxidación10. Se ha descrito que la DM está asociada con las reacciones oxidativas catalizadas por la transición de metales descompartamentalizados. Esta serie de hallazgos concuerdan con. A. estudios que presentan considerables evidencias en las que se sugiere que el EOx juega. M IC. un importante papel en la patogénesis y complicaciones de la DM. Los mecanismos que. Q. UI. pueden contribuir al aumento de dicho estrés en pacientes diabéticos son diferentes, en. BI. O. particular en aquellos sujetos con pobre control de la glicemia e hipertrigliceridemia.. Y. Estos mecanismos que participan en la formación de RL en diabéticos no solamente. AC I. A. incluyen el incremento de la glucosilación no enzimática y la auto-oxidativa, sino que. RM. también al estrés metabólico, que es el resultado de cambios en la energía del. FA. metabolismo, en el nivel de los mediadores de la inflamación y en el estado del sistema. DE. antioxidante de defensa11.. TE CA. Otros estudios realizados por Šardaš y cols. (2001), en pacientes diabéticos apoyan esta. BI BL IO. teoría. Ellos encontraron incremento de ROS, tales como O2-, H2O2, OH, lo que contribuyó a que se dañara el ADN de linfocitos en sangre periférica. Dicho daño oxidativo afecta tanto al ADN nuclear como al mitocondrial. Al respecto, Ames y cols. (1993), estimaron que una célula humana recibe 10,000 impactos oxidativos en el ADN/día producidos por OH-, es decir, de cada 1012 moléculas de oxígeno que entran a la célula/día, es posible que 1 en 200 dañen al ADN11. Por otra parte, en lo que respecta a la DM gestacional, existen estudios realizados en animales de experimentación en los que se especula que las alteraciones morfológicas 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que se encontraron en los productos de gestación probablemente se debieron a las modificaciones de factores del suero, asociadas a la diabetes en el medio ambiente intrauterino, y aunque el mecanismo biológico exacto de teratogenicidad en esta patología se desconoce, en otros estudios con hiperglucemia inducida en modelos animales se detectaron varias alteraciones, entre ellas, el metabolismo de prostaglandinas. M IC. A. y la producción excesiva de ROS11.. Q. UI. Existen modificaciones en las proteínas del cuerpo humano que son inducidas por su. BI. O. interacción con carbohidratos (como la fructosa y la glucosa–6–fosfato o sus derivados). Y. con las proteínas, ácidos nucleicos, y lípidos, para formar productos de glicación. Este proceso es conocido como glicación y está asociado con el. RM. end products).. AC I. A. avanzada, conocidos como AGE o AGEs (por sus siglas en inglés, advanced glycalion. FA. envejecimiento que se acelera con la diabetes, y se inicia con la reacción de los grupos. DE. carbonilos de los carbohidratos con los grupos amino de las proteínas, en especial con el. TE CA. amino terminal y el ε–amino de residuos de lisina, dando origen a los productos tempranos de glicación, también llamados de Ámadori o fructosamina. A partir de ellos y. BI BL IO. por cambios o transposiones moleculares y oxidaciones, se forman compuestos α– dicarbonilos (α–oxoaldehídos) como la 3–desoxiglucosona, el metilglioxal y el glioxal, los que son conocidos como precursores de los AGEs; éstos son más reactivos que sus predecesores y al combinarse simultáneamente con dos grupos reactivos de las proteínas, forman puentes cruzados entre ellas muy estables; produciendo su agregación, y pérdida en sus funciones biológicas. Las proteínas ricas en aminoácidos básicos (L–lisina y L– arginina) son especialmente susceptibles a la glicación12,13.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los AGEs afectan no sólo por alterar la estructura y función de las proteínas, sino también por su acción con receptores específicos. Se han descrito receptores para los AGEs en numerosas células, incluyendo a los monocitos, a los macrófagos, a las células endoteliales, a las células mesangiales, a los pericitos, a los podocitos, a las neuronas periféricas y a la microglía. La lista de las moléculas capaces de ligar a los AGEs incluye. M IC. A. a los receptores I y II, al receptor de AGEs (RAGE), a la oligosacaril transferasa (AGE–. UI. RI), a. la fosfoproteína 80K–H (AGE–R2) y la galectina–3 (AGE–R3). Las proteínas. O. Q. gibadas que se unen a estos receptores inducen diversos eventos como la producción de. Y. BI. especies reactivas de oxígeno (ERO), estado proinflamatorio; proliferación de células. A. (como los macrófagos) y las del endotelio y músculo liso arterial; la activación de. RM. AC I. factores de transcripción como el NFκB112,13; así como la expresión de diversos péptidos. FA. y proteínas (incluyendo a factores de crecimiento, citocinas, proteínas de matriz. DE. extracelular y PAI–1). En los macrófagos estimulan la producción de la interleucina–1, el factor de crecimiento–1, el factor de crecimiento tumoral α y el factor estimulante de. TE CA. colonias de granulocitos (IL–1, GF–1, TNF α y GC–SF, respectivamente, por sus siglas. tipo IV12.. BI BL IO. en inglés), en tanto en los glomérulos inducen el aumento de la síntesis de la colágeno. Los productos naturales han sido utilizados por centurias en el mundo por varias culturas. La comunidad científica ha comenzado a mostrar cada vez más interés en estos productos por los beneficios que aportan, y en muchos casos se han convertido en agentes bien conocidos, sustituyendo incluso a los medicamentos de origen químico-sintético14.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El noni posee un amplio rango de propiedades medicinales el cual es originado de diferentes partes de la planta. Entre estas se pueden mencionar: el fruto y las hojas ejercen actividades antibacteriales, la raíz elimina las infecciones de los pulmones y las hemorroides, también muestra propiedades sedativas naturales y a bajar la presión sanguínea. Los extractos de las hojas inhiben la formación de coágulos de sangre. Es útil. M IC. A. particularmente por su habilidad para tratar dolores e inflamaciones de la piel. Muchas. UI. personas toman extractos de la fruta para tratar la hipertensión, dolores menstruales,. BI. O. Q. artritis, úlceras gástricas y diabetes, entre otras afecciones14,15.. Y. Las primeras investigaciones sobre fitoquímica de M. citrifolia se centraron en. AC I. A. metabolitos secundarios en hojas, raíces y corteza. Las raíces contienen una amplia gama. RM. de antraquinona como rubiadin, damacanthal y alizarina-1-metil éter, derivados de. FA. naftoquinona y esteroles, mientras que se reportó en las hojas varios iridoides, glucósidos. DE. de flavonoles y triterpenos. Cultivos de células vegetales fueron analizados. TE CA. principalmente por su capacidad para la síntesis de los pigmentos antraquinoides. Hasta ahora, varias clases de metabolitos se ha descrito, incluyendo los polisacáridos, los. BI BL IO. glucósidos de ácidos grasos, iridoides, antraquinonas, cumarinas, flavonoides, lignanos, fitoesteroles, carotenoides, y una gama de componentes volátiles como monoterpenos y ácidos grasos de cadena corta y ésteres de ácidos grasos15. Heinicke R., (2001), descubrió que el cuerpo humano produce una substancia cuya función principal es de ayudar al funcionamiento normal de todas las células humanas: la xeronina. La polución y la agricultura química en exceso hacen desaparecer del suelo ciertos nutrientes necesarios para el buen funcionamiento del organismo y también. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. disminuir la producción de xeronina. Además, el estrés, la inactividad y las actitudes negativas reducen la formación de la xeronina. Para compensar esa falta el cuerpo humano necesita la pro-xeronina para fabricar la xeronina y conservar así la buena salud. Se ha descubierto que el fruto del noni contiene abundantemente la pro-xeronina que se considera precursor de la xeronina, un alcaloide que se plantea que al combinarse con. M IC. A. proteínas humanas mejora su funcionalidad. Es decir, que según Heinicke, siempre que. UI. surja un problema en la célula, debido a un problema estructural de una proteína, la. O. Q. presencia de Xeronina sería beneficiosa, explicando esta hipótesis el por qué el jugo de la. Y. BI. Morinda citrifolia L pudiera ayudar en muchos problemas de salud de diferentes maneras,. AC I. A. puesto que se considera que el ingrediente activo en muchas de las enzimas farmacológicamente activas y en muchas de las drogas tradicionales efectivas, es la. FA. RM. Xeronina16-18.. DE. Con la enorme incidencia de diabetes en todo el mundo por causa de múltiples factores y. TE CA. de las complicaciones que se generan a partir de esta enfermedad, es necesario buscar fuentes naturales de antioxidantes que ayuden a prevenir el daño celular y el estrés. BI BL IO. oxidativo, una alternativa es el noni, el cual según algunos estudios se menciona que puede prevenir el incremento de productos de peroxidación en el tejido cerebral, como lo es el malondialdehído.. Por lo expuesto se planteó el siguiente problema: ¿Cuál es el efecto del extracto crudo del fruto de Morinda citrifolia L. “noni” sobre los niveles de malondialdehído en membranas cerebrales de Rattus rattus var. norvegicus con hiperglicemia inducida? 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se formuló la siguiente hipótesis: El extracto crudo de Morinda citrifolia L. “noni” disminuye los niveles de malondialdehído en membranas cerebrales de. Rattus rattus var. norvegicus. con. hiperglicemia inducida.. M IC. A. OBJETIVOS:. Q. UI. Objetivo general:. BI. O. Determinar el efecto del extracto crudo del fruto de Morinda citrifolia L. “noni”. A. AC I. norvegicus con hiperglicemia inducida.. Y. sobre los niveles de malondialdehído en membrana cerebral de Rattus rattus var.. FA. RM. Objetivos específicos:. DE. 1. Determinar los niveles séricos de glucosa en Rattus rattus var. norvegicus antes y. TE CA. después de ser tratados con extracto crudo de Morinda citrifolia L. por 21 días. 2. Determinar los niveles de malondialdehído en membrana cerebral de Rattus. BI BL IO. rattus var. norvegicus tratadas con extracto crudo de Morinda citrifolia L a dosis de 5 ml/kg de peso e inducidas a hiperglicemia. 3. Determinar los niveles de malondialdehído en membrana cerebral de Rattus rattus var. norvegicus tratadas con extracto crudo de Morinda citrifolia L a dosis de 10 ml/kg de peso e inducidas a hiperglicemia.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1 MATERIAL 2.1.1. Material biológico . Animales de experimentación. M IC. A. Se emplearon 24 especímenes machos de Rattus rattus var.. UI. norvegicus adquiridos del Instituto Nacional de Salud, con un peso. Q. de 200 a 250 g. y 2 meses de edad, con 7 días de aclimatación en el. BI. O. bioterio de la facultad de Farmacia y Bioquímica, alimentados con. A. Especie vegetal. AC I. . Y. cebada y agua ad libitum.. Material de laboratorio. FA. 2.2.2. RM. Se trabajó con el fruto de Morinda citrifolia L.“noni”. DE. Material de uso común en el laboratorio Equipos. TE CA. 2.2.3. BI BL IO. •. Extractor PHILIPS. •. Glucómetro AccuCheck-Active de ROCHE. •. Balanza mecánica OHAUS y balanza gramera de cocina. •. Balanza analítica RADWAG. •. Refrigeradora COLDEX. •. Baño maría – MEMMERT. •. Cocina eléctrica. •. Centrifuga refrigerada – HETTICH. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. •. Espectrofotómetro - HEWLETT PACKARD 8452ª. •. Estufa – BLINDER. •. pH-metro - METTER TOLEDO.. • Calculadora CASIO. M IC. A. Material químico. Estreptozotocina S0130 SIGMA, ≥75% base α-anómero, ≥98%. •. Ketamina 50mg/mL, Sol. inyectable. •. Ácido tricloroacético 10%. •. Ácido tiobarbitúrico 0.67%. •. N-Butanol-piridina (15:1 V/V). •. Solución tampón fosfato 50 mM pH 7.4. •. Solución tampón citrato de sodio pH 4.5. •. Solución NaCl 0.9% fría (4°C). DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. •. TE CA. 2.2.4. Alcohol 70º G.L. •. Agua destilada. BI BL IO. •. •. 2.2.5. Agua bidestilada. Otros materiales. • Tiras reactivas para glucosa AccuCheck-Active • Agujas N° 26 • Algodón x 50 g • Jeringas de tuberculina 1mL 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. • Hoja de bisturí N° 21 • Equipo de disección • Puntas desechables para micropipeta 20-200 µLvv • Guantes quirúrgicos N° 7 ½. A. • Mascarilla quirúrgica. Q. UI. M IC. • Tubos de ensayo. Y. A. A. Preparación de la especie vegetal. BI. O. 2.3 MÉTODO. AC I. a. Recolección y selección de la especie vegetal. RM. El fruto de Morinda citrifolia L.“noni” se recolectó del Jardín Botánico. FA. de Plantas Medicinales “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad. DE. de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo,. TE CA. durante el mes de septiembre (invierno).. BI BL IO. Se seleccionó los frutos de similar longitud, diámetro y estado de madurez (fruto pre-maduro), en una cantidad aproximada de 4 kilogramos de fruto.. b. Identificación y determinación de la especie vegetal Un ejemplar de la especie vegetal se llevó al Herbarium Truxillense (HUT) donde fue identificada como Morinda citrifolia L. y codificada con el número: 58578.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c. Elaboración del extracto crudo de Morinda citrifolia L.“Noni” 19. Al seleccionar los frutos se prefirió de similar longitud, diámetro y estado de madurez, se lavaron y se llevaron a la extractora para ser triturados con cáscara y semillas y poder obtener el extracto crudo diariamente, el extracto se filtró con una fina gasa.. M IC. A. B. Determinación del efecto del extracto de Morinda citrifolia L.“noni”. UI. sobre los niveles de malondialdehído en membrana cerebral de Rattus. O. Q. rattus var. norvegicus.. Y. BI. a. Distribución de los animales de experimentación.. AC I. A. Los animales estuvieron divididos aleatoriamente en 3 grupos de. RM. estudio, cada grupo está conformado por 8 especímenes,. FA. alimentados con cebada y agua ad libitum, durante el tiempo que se. DE. realizó el experimento. La identificación de los especímenes se. TE CA. realizó mediante marcas en ubicaciones específicas sobre el cuerpo. BI BL IO. con violeta de genciana19.. b. Preparación del extracto crudo de fruto de Morinda citrifolia L. Para determinar la dosis de extracto crudo se tomó una muestra de 5 mL y 10 mL (por triplicado) se llevó a estufa a 105 °C durante 2 h, de esta manera obtener el residuo seco, la cual se dejó enfriar y se pesó hasta tener un peso constante. Así se pudo expresar la dosis mg/kg p.c, contenida en 5 ml y 10 ml respectivamente.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c. Modelo de inducción de hiperglicemia20,21 A los grupos control, problema 1 y problema 2 se les realizó la inducción de hiperglicemia. mediante la administración de 45. mg/kg de p. c. (dosis única) vía intraperitoneal de estreptozotocina. Volumen de administración: 1 mL.. M IC. A. Las soluciones de estreptozotocina se prepararon inmediatamente. UI. antes de su administración, disolviendo la cantidad respectiva en. O. Q. buffer citrato de sodio 0.1 M pH 4,5. Los niveles de glucosa se. Y. BI. evaluaron a las 24 y 48 horas después de la administración de STZ.. AC I. A. A las 48 horas, los animales en ayuno que presentaron una glicemia entre 170 y 300 mg/dL fueron considerados hiperglicémicas.. FA. RM. d. Evaluación de los niveles de glucosa 29.. DE. Se evaluaron los niveles de glucosa en sangre tomándose una gota. TE CA. de sangre extraída de la vena de la cola mediante punción con una aguja hipodérmica N° 26 y colocándose a las tiras reactivas. BI BL IO. AccuCheck Active para ser leídas en el glucómetro AccuCheck Active de Lab. Roche antes de administrar el extracto (glucosa basal). y. finalizado. la. administración. del. extracto. y. la. estreptozotocina (STZ) (glucosa post STZ), para lo cual los especímenes estaban con 12 horas de ayuno. Para obtener la muestra de sangre se empleó una jaula pequeña de polipropileno con un agujero que permitió el aislamiento de la cola del animal. Se sujetó firmemente la cola para el lavado con agua y 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. desinfección con alcohol. Se procedió a identificar la vena caudal para realizar la extracción de la muestra con una aguja Nº 26, la cual se colocó en una tira reactiva para su análisis con el glucómetro Accu-Chek Active de Roche. Distribución de los grupos experimentales19,20. Grupo control: Conformado por 8 especímenes machos a los. M IC. -. A. e.. UI. cuales se les administró 2 ml de solución salina fisiológica 0.9%. O. Q. vía oral durante 21 días a las 7:00 pm diariamente, al cabo de los. Y. BI. cuales se determinó la glucosa sanguínea basal llevando una. AC I. A. gota de sangre extraída de la vena caudal de la cola de los. de Lab. Roche, para ser leídas en el respectivo. FA. Active. RM. especímenes con aguja N° 26 a las tiras reactivas AccuCheck. DE. glucómetro AccuCheck Active, posteriormente se indujo a. TE CA. hiperglicemia con estreptozotocina 0.1 M en solución buffer citrato a pH: 4.5 en dosis única (45 mg/kg p.c) vía. BI BL IO. intraperitoneal, se determinó la glicemia a las 24 y 48 horas en la cual se considera diabética. Luego de 8 días de la inducción de hiperglicemia se sacrificó a los especímenes mediante sobredosis de anestesia con ketamina (100 mg/kg) y se extrajo la membrana cerebral rápidamente para determinar los niveles de MDA a 532 nm de longitud de onda previo homogeneizado.. -. Grupo Problema 1: Conformado por 8 especímenes machos, a los cuales se les administró una dosis de 5 ml/Kg de extracto 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. crudo de los frutos de Morinda citrifolia L.“noni” vía oral durante 21 días a las 7:00 pm diariamente, al cabo de los cuales se les determinó la glucosa sanguínea basal llevando una gota de sangre extraída de la vena caudal de la cola de los especímenes con aguja hipodérmica N° 26 a las tiras reactivas AccuCheck. M IC. A. Active para ser leídas en el glucómetro AccuCheck Active,. UI. posteriormente se indujo a hiperglicemia con estreptozotocina. O. Q. 0.1 M en solución buffer citrato a pH: 4.5 en dosis única (45. Y. BI. mg/kg p.c) vía intraperitoneal, se determinó la glicemia a las 24. AC I. A. y 48 horas. Luego de 8 días de inducir la hiperglicemia. RM. finalmente se sacrificaron a los especímenes mediante. FA. sobredosis de ketamina y se extrajo la membrana cerebral. DE. rápidamente para determinar los niveles de MDA a 532 nm de. TE CA. longitud de onda previo homogeneizado.. Grupo Problema 2: Conformado por 8 especímenes machos, a. BI BL IO. -. los cuales se les administró una dosis de 10 ml/Kg de extracto crudo de los frutos de Morinda citrifolia L.“noni” vía oral durante 21 días a las 7:00 pm diariamente, al cabo de los cuales se les determinó los niveles de glucosa sanguínea basal llevando una gota de sangre de la vena caudal de la cola de los especímenes con aguja hipodérmica N° 26 a las tiras reactivas AccuCheck Active de Lab. Roche para ser leídas en el 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. glucómetro AccuCheck Active, posteriormente se indujo a hiperglicemia con estreptozotocina 0.1 M en solución buffer citrato a pH: 4.5 en dosis única (45 mg/kg p.c) vía intraperitoneal, se determinó la glicemia a las 24 y 48 horas. Luego de 8 días de inducir la hiperglicemia finalmente. se. M IC. A. sacrificaron los especímenes mediante sobredosis de ketamina. UI. 100 mg/kg y se extrajo la membrana cerebral rápidamente para. O. Q. determinar los niveles de MDA a 532 nm de longitud de onda. la. concentración. de. malondialdehido. RM. (MDA)22,23.. de. AC I. f. Determinación. A. Y. BI. previo homogeneizado. DE. FA. Se utilizó el método colorimétrico basado en la reacción del MDA con el ácido 2-tiobarbitúrico (TBA) para formar aductos. TE CA. cromógenos y fluorescentes de MDA-2TBA muy estables que se. BI BL IO. cuantifican por espectrofotometría de absorción. -. Obtención de la muestra. Los especímenes se sacrificaron por decapitación, previamente anestesiados con Ketamina a la dosis de 100 mg/Kg p.c. por vía intraperitoneal. Inmediatamente se procedió a extraer el órgano de interés, el cerebro, el cual fue recepcionado en una placa. Se secó con papel adsorbente y se llevó a pesar el órgano completo en una balanza analítica. Se pesaron 3 gramos 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de la muestra y se trituró para ser homogenizado con tampón fosfato 50 mM pH 7,40. Filtrar con gasa estéril. -. Procesamiento de la muestra 22. La muestra de los 3 grupos de experimentación se procesó de la siguiente manera:. M IC. A. En tubos con tapa se colocó el homogenizado en 8 mL de. UI. buffer 20 Mm de tampón fosfato de potasio helada (pH 7.4),. O. Q. centrifugar a 3290 rpm por 10 minutos. Recoger 3 mL del. Y. BI. sobrenadante, llevar a baño maría por 1 hora a 37ºc en. AC I. A. oscuridad, añadir 0.02 mL de ácido tricloroacético (ATC) al. RM. 10%, centrifugar a 2400 rpm por 10 minutos, colocar 1 mL de. FA. la fracción soluble en cada tubo y mezclar con 2 ml de TBA al. DE. 0.67% y llevar a ebullición por 1 hora a 95-100ºc, posterior a. TE CA. eso enfriar las muestras en hielo por 15 minutos, añadir 2.5 mL de n-butanol piridina (15:1) y 0.5 mL de agua, centrifugar a. BI BL IO. 24000 rpm por 10 minutos, por ultimo recoger la fase orgánica y leer a 532 nm. Se utilizó una curva de calibración para expresión de las unidades en mmol/mg de tejido.. C. Análisis estadístico Para interpretar los resultados de la investigación se compararon los resultados obtenidos para cada grupo (control y problema 1 y 2), se realizaron procedimientos estadísticos como el análisis de varianza 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (ANOVA) y para comparar a los diferentes grupos de estudio se empleó la prueba de comparaciones múltiples utilizando la diferencia mínima significativa de la prueba de Duncan y la prueba de Tukey con un valor de significancia del 95% (p<0.05) mediante el paquete estadístico SPSS. Versión 22.0 para Windows.. M IC. A. D. Ética en investigación. UI. El manejo de los animales de laboratorio se realizó cumpliendo. O. Q. estrictamente con las normas establecidas para el uso de animales en. Y. BI. trabajos de laboratorio, respetando los derechos universales de los. A. mismos, considerados en la legislación de la Sociedad Española para. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. las ciencias del animal de laboratorio (SECAL)24.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS TABLA № 01: Niveles de glucosa en sangre en los grupos control, problema 1 y problema 2 basal y posestreptozotocina en Rattus rattus var. norvegicus. 78 76 77 69 76 74 71 75 74 76 71 76 69 72 64 68 70 72 75 68 72 68 67 71. 80 74 80 68 78 69 73 77 66 69 68 69 70 66 75 63 55 57 60 67 60 70 72 65. 222 198 187 201 189 193 188 195 70 72 67 81 79 71 86 75 69 60 74 68 56 78 88 70. UI. Q. O BI Y A. AC I. RM. A. 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8. POSTESTREPTOZOTOCINA 8 DIAS (mg/dL). M IC. POSTESTREPTOZOT OCINA 24 HORAS (mg/dL). BI BL IO. PROBLEMA 2. POSTTRATAMIENT O (mg/dL). FA. PROBLEMA 1. BASAL (mg/dL). DE. CONTROL. Nº. TE CA. GRUPOS/GLICEMIAS. 278 315 298 269 283 258 226 288 95 112 105 88 94 99 96 121 95 87 116 98 86 85 95 85. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA № 02: Niveles de malondialdehido (mmol/mg de tejido) en membrana cerebral de Rattus rattus var. norvegicus de los grupos control, problema 1 y problema 2. PROBLEMA 1. PROBLEMA 2. CC. MDA. ABS. CC. MDA. ABS. CC. MDA. 1,273. 14,6139535. 1,149. 13,172093. 0,801. 9,1255814. 1,149. 13,172093. 1,138. 13,044186. 0,874. 9,9744186. 1,138. 13,044186. 1,120. 12,8348837. 0,836. 1,156. 13,2534884. 1,112. 12,7418605. 0,797. 9,07906977. 1,48. 17,0209302. 1,310. 15,044186. 0,821. 9,35813953. 1,12. 12,8348837. 1,273. 14,6139535. 0,935. 10,6837209. 1,511. 17,3813953. 1,003. 11,4744186. 0,804. 9,16046512. 1,16. 13,3. 1,156. 13,2534884. A. ABS. Q. GRUPO CONTROL. BI. O. UI. M IC. 9,53255814. 10,1953488. DE. FA. RM. AC I. A. Y. 0,893. TABLA N° 03: Análisis de varianza para determinar el efecto del extracto crudo del. TE CA. fruto de Morinda citrifolia L.(Noni) sobre los niveles de malondialdehido en. BI BL IO. membrana cerebral de Rattus rattus var. norvegicus con hiperglicemia inducida. Suma de cuadrados. Gl. Media cuadrática. F. Sig.. Inter-grupos. 96,794. 2. 48,397. 28,869. ,000. Intra-grupos. 35,205. 21. 1,676. Total. 131,999. 23. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA N° 04: Prueba de Duncan para determinar la concentración óptima del extracto crudo del fruto de Morinda citrifolia L.(Noni) sobre los niveles de malondialdehido en membrana cerebral de Rattus rattus var. norvegicus. con. hiperglicemia inducida. Subconjunto para alfa = 0.05 1. 2. 9,6387. Q. UI. 8. Morinda citrifolia L. 10 mL/kg Morinda citrifolia L. 5 mL/kg Cloruro de sodio 0.9%. 13,2713. O. 8. BI. Duncan. A. N. M IC. Tratamiento. 14,3276. Y. 8. 1,000. ,118. RM. AC I. A. Sig.. FA. TABLA N° 05: Prueba de Tukey para determinar la concentración óptima del. DE. extracto crudo del fruto de Morinda citrifolia L. (Noni) sobre los niveles de con. TE CA. malondialdehido en membrana cerebral de Rattus rattus var. norvegicus. BI BL IO. hiperglicemia inducida.. HSD de Tukey. Tratamiento. N. Subconjunto para alfa = 0.05 1 2. Morinda citrifolia L.10 mL/kg. 8. 9,6387. Morinda citrifolia L.5 mL/kg. 8. 13,2713. Cloruro de sodio 0.9%. 8. 14,3276. Sig.. 1,000. ,255. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FA. GRAFICO N° 01: Niveles de malondialdehido en membrana cerebral de Rattus. DE. rattus var. norvegicus con hiperglicemia, previo tratamiento durante 21 días con cloruro de sodio al 0.9% para el grupo control, 5 ml de extracto crudo de Morinda. TE CA. citrifolia L. para el grupo problema 1 y 10 ml de extracto crudo de Morinda citrifolia. BI BL IO. L. para el grupo problema 2.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSIÓN La presente investigación señala al extracto de Morinda citrifolia L. como una alternativa preventiva en las complicaciones de la Diabetes Mellitus, ya que en la actualidad ha suscitado un renovado interés en la medicina fitoterapeútica, por lo que se ha realizado el. A. estudio de este fruto a dosis de 5 ml/kg y 10 ml/kg de p.c con la finalidad de determinar. M IC. el efecto del mismo al disminuir los niveles de malondialdehido en membranas cerebrales. Q. UI. de Rattus rattus var. albinus con hiperglicemia inducida.. BI. O. En la primera parte del estudio se determinaron los niveles de glicemia en los. Y. especímenes Rattus rattus var. norvegicus habiendo sido previamente separados en 3. AC I. A. grupos; control, problema 1 y problema 2, conformados por 8 especímenes cada uno, la. RM. TABLA N° 01 muestra los niveles de glucosa tanto al inicio de la investigación como al. FA. final del tratamiento con extracto crudo de Morinda citrifolia L. y solución salina al 0.9%. DE. donde se puede observar pequeñas reducciones en las concentraciones de glucosa en. TE CA. sangre en los grupos problema 1 y más aún en el grupo problema 2. Asimismo se puede apreciar que luego de la inducción a hipoglucemia con solución tamponada de. BI BL IO. estreptozotocina a dosis de 45 mg/kg de p.c. los niveles de glicemia aumentan considerablemente en el grupo control en contraste con los grupos problema en las primeras 24 horas, posteriormente la glucosa sérica aumenta en los siguientes 8 días de seguimiento en los especímenes. Sin embargo los grupos tratados con extracto crudo de noni no mostraron grandes variaciones de glicemia, mas evidentemente en el grupo problema 2 donde se les administro dosis de 10 ml/kg de p.c de extracto a los especímenes, denotando que una dosis de 10 ml/kg de peso es más antihiperglicémico que una dosis de 5 ml/kg de peso, según se observa a mayor dosis el efecto es mayor. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego de los 8 días de espera, los animales de experimentación fueron sacrificados usando ketamina e inmediatamente se le extrajo el tejido cerebral. En el análisis del tejido cerebral se realizó la cuantificación de los niveles de malondialdehido mediante espectrofotometría a 532 nm de longitud de onda para la lectura de las muestras, los niveles de malondialdehido (VER TABLA N° 02), para el grupo control se encuentran. M IC. A. entre 13 y 17,3 (mmol/mg), para el grupo problema 1 entre 11,4 y 14,6 (mmol/mg) y para. UI. el grupo problema 2 entre 9 y 10,6 (mmol/mg). Para la determinación de malondialdehido. BI. O. Q. fue necesario realizar una curva de calibración estándar.. Y. En la tabla Nº 03 se analizó los resultados mediante el análisis de varianza (ANOVA). AC I. A. que permite comparar las medias de malondialdehido en las membranas cerebrales en los. RM. grupos de trabajo intergrupos e intragrupos donde es estadístico F es de 28,869 siendo. FA. altamente mayor que el valor critico 3.47 según la tabla de distribución estadística. Lo. TE CA. de los grupos de estudio.. DE. cual significa que existe una diferencia significativa entre los niveles de malondialdehido. BI BL IO. En la tabla N° 04 se muestra el análisis de los niveles de malondialdehido según la prueba de Duncan evidenciándose que existe una diferencia estadísticamente significativa entre al menos un grupo de investigación, esto dado a que el valor de P de la prueba de análisis de varianza es menor de 0.05 (p = ,000). Observando que el grupo problema 2 tiene una concentración de malondialdehido de 9.6387 mmol/mL, seguido del problema 1 con una concentración de 13,2713 mmol/mL semejante a la del grupo control que tiene la media más alta con 14,3276 mmol/mL, debido a que no recibió el extracto, por tal motivo se encuentran elevados. Debido que en la hiperglicemia se ha puesto en manifiesto una serie. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de cambios que permiten señalar un incremento en la formación de radicales libres, causado por la glucoxidación y la autoxidación de la glucosa, la disminución de las concentraciones plasmáticas e intracelulares de antioxidantes. Así pues, se producen numerosos cambios que de forma indirecta permite indicar que en la diabetes existe un marcado estrés oxidativo. Es conocido que la autoxidación de los azúcares generan. M IC. A. radicales libres de oxígeno a concentraciones elevadas de glucosa, típica de estados. UI. diabéticos, así la producción de radicales libres incrementa, generando el desbalance. O. Q. entre mecanismos de pro-oxidación y anti-oxidación lo que predispone a distintas. Y. BI. enfermedades26-28.. AC I. A. Las teorías que vinculan el estrés oxidativo con la diabetes plantean que la hiperglicemia. RM. per se es esencial en el desarrollo de la neuropatía diabética. Entre estas teorías se. FA. proponen: alteraciones en la vía del poliol, insuficiencia vascular, síntesis alterada de. DE. óxido nítrico, transporte axonal desajustado y glucosilación de lípidos y proteínas. Los. TE CA. niveles de malondialdehido están relacionados con el daño al tejido cerebral, ya que este es un marcador de la acción de los ROS sobre las células, en gran medida las especies. BI BL IO. reactivas son responsables de la neuropatía diabética al contribuir con la inflamación de tejido vascular, todo esto como consecuencia de los altos niveles de glucosa en sangre y los bajos niveles de insulina.29,30 En la tabla Nº 05 se muestra el análisis de los niveles de malondialdehido según la prueba de Tukey, la prueba muestra que existen tres grupos estadísticamente diferentes entre sí, considerando que el grupo de 10 ml/kg tuvo mejor efecto antioxidante según disminución de niveles de malondialdehido.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El efecto de la disminución de las concentraciones de malondialdehido es debido al extracto crudo de los frutos de Morinda citrifolia L., según sus fitocomponentes que actúan a nivel de membrana cerebral generando un efecto antioxidante de forma directamente proporcional a la dosis administradas, siendo mayor en el grupo problema 2. A. que el grupo problema 1.. M IC. Muchos frutos y vegetales que se pueden adquirir en el Perú, contienen gran cantidad de. Q. UI. compuestos fenólicos y carotenoides responsables de proteger las células de los efectos. BI. O. oxidantes de factores como una dieta lipídica, alta en carbohidratos entre otros, estas. Y. moléculas funcionan como antioxidantes naturales y que su consumo es muy importante. AC I. A. en la prevención de enfermedades como el cáncer. Un estudio realizado por Muñoz, J. et. RM. al en la USMP (2007) afirma que el fruto de Morinda citrifolia L. contiene una gran. FA. cantidad de sustancias fenólicas antioxidantes y vitaminas entre ellas la E y la C siendo. DE. superado solo por frutos como el Camu-camu (Myrciaria dubia) y el tumbo serrano. TE CA. (Passiflora tripartita var. mollisima)31.. BI BL IO. Este efecto antioxidante se debe en parte a que el Noni contiene elevado contenido de vitamina C, vitamina E, compuestos fenólicos, minerales (entre ellos, Zn), que son sustancias con capacidad antioxidante probada. Además, se considera que el fruto maduro tiene más componentes antioxidantes que el fruto pintón o muy maduro19.. Los compuestos polifenólicos constituyen una clase de metabolitos secundarios biosintetizados por el reino vegetal, los polifenoles comprenden un amplio rango de sustancias.. Entre. ellos. están. los. flavonoides,. isoflavonoides,. antraquinonas,. antocianidinas y xantonas, a los ácidos fenólicos y fenoles simples, ácidos 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. hidroxicinámicos, fenilpropenos, ligninas entre otros, los mismos actúan generalmente como capturadores y estabilizadores de radicales libres, el consumo de estos capturadores evitan que los radicales libres se unan a proteinas o lipidos y produzcan malformaciones celulares25. Las vitaminas antioxidantes, conforman un grupo de agentes reductores capaces de donar. M IC. A. electrones a especies oxidadas como los radicales libres y los lipoperóxidos,. Q. UI. neutralizando de esta manera el potencial oxidativo destructor de estos30.. BI. O. La vitamina E es una de las primeras barreras de la peroxidación de los ácidos grasos. Y. poliinsaturados. Los fosfolípidos de la membrana mitocondrial, del retículo. AC I. A. endoplasmático y plasmática poseen afinidades para el alfa-tocoferol, por lo que está muy. RM. concentrado en estos sitios. Los tocoferoles actúan interrumpiendo reacciones de cadena. FA. con radicales libres como resultado de su capacidad de transferir el hidrógeno fenólico a. DE. un radical peróxilo libre, quedando, a la vez, en la forma de radical libre fenoxi o. TE CA. fenoxilo, en reacciones intermedias no reversibles que presuponen la transformación de la. BI BL IO. vitamina hasta su producto final inocuo32-35. En un estudio del 2016 por Sandoval, M. afirma que el extracto acuoso del fruto de Morinda citrifolia L. (noni) disminuye los niveles de malondialdehido sérico en Rattus norvergicus var. albinus con hiperglicemia, contrarrestando el incremento de los ERO y así restablece el equilibrio entre generación y eliminación de sustancias oxidantes. En el tejido cerebral, los antioxidantes naturales del noni evitan la producción de malondialdehido a partir de los lípidos cerebrales36.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la tabla Nº 05 se muestra el análisis de los niveles de malondialdehido según la prueba de Tukey, la prueba muestra que existen tres grupos estadísticamente diferentes entre sí, considerando que el grupo de 10 ml/kg tuvo mejor efecto antioxidante según disminución de niveles de malondialdehido. De ahí que se puede afirmar que consumir una dosis de 10 ml de extracto crudo de Morinda citrifolia L. por kilogramo de peso, ayuda a prevenir. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. la lipoperoxidación en tejido cerebral.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. CONCLUSIONES 1. Los niveles de glucosa sérica promedio en Rattus rattus var. norvegicus basales fueron de 71,25 mg/dl para el grupo problema 1 y 70,38 mg/dl para el grupo problema 2 y después de ser tratados con extracto crudo de Morinda citrifolia L. M IC. A. por 21 días presentaron una glicemia de 68,25 mg/dl y 63,25 mg/dl. UI. respectivamente.. O. Q. 2. El extracto crudo del fruto de Morinda citrifolia L. “noni” a dosis de 10 ml/kg p.c. BI. disminuye los niveles de malondialdehído en membranas cerebrales de Rattus. A. Y. rattus var. norvegicus con hiperglicemia inducida.. L.. disminuye. significativamente. RM. citrifolia. AC I. 3. Se determinó que la dosis de 10 ml/kg de peso de extracto crudo de Morinda (p<0.05). los. niveles. de. FA. malondialdehido en comparación de la dosis de 5 ml/kg de peso en membranas. BI BL IO. TE CA. DE. cerebrales de Rattus rattus var. norvegicus.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. RECOMENDACIONES. Considerando la importancia de este estudio dado que el efecto antioxidante es de suma importancia a los diversos procesos patológicos degenerativos de las células causada por los radicales sobre todo en la enfermedad de la diabetes es necesario. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M IC. A. continuar estudios como este y así evaluar la acción antioxidante.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Pérez A, Berenguer M. Algunas consideraciones sobre la diabetes mellitus y su. [citado. 2017. Ene. 03];. 19(3):. [Internet]. 2015 Mar. 375-390.. en:. M IC. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1029-. Disponible. A. control en el nivel primario de salud. MEDISAN. UI. 30192015000300011&lng=es.. O. Q. 2. Mora H, Aragón N, Ospina G. Caracterización del Estrés Oxidativo en Ratas. BI. Wistar Diabéticas por Estreptozotocina. Vitae, Revista de la Facultad de Química. A. Y. Farmacéutica. Issn 0121-4004, Issne 2145-2660. Volumen 16 Número 3, Año. acceso:. 22. de. Agosto. RM. de. AC I. 2009. Universidad De Antioquia, Medellín, Colombia. Págs. 311-319. (1) [Fecha del. 2016]. Disponible. en:. FA. http://www.scielo.org.co/pdf/vitae/v16n3/v16n3a05.pdf. DE. 3. González R, Crespo N, Crespo N. Características clínicas de la diabetes mellitus. 2017. Ene. 03]. ;. 16(. 2. ):. 144-149.. Disponible. en:. BI BL IO. [citado. TE CA. en un área de salud. Rev Cubana Med Gen Integr [Internet]. 2000 Abr. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S086421252000000200007&lng=es. 4. Crespo N, Rosales E, González R, Crespo N, de Dios Hernández J. Caracterización de la diabetes mellitus. Rev Cubana Med Gen Integr [Internet]. 2003. Ago. [citado. 2017. Ene. 03]; 19. (4):. Disponible. en:. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S086421252003000400004&lng=es.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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