Manual de Microbiologia UST.pdf

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Asignatura: “Microbiología Aplicada al Laboratorio” TLC – 119 Plan 3

PORTAFOLIO EVIDENCIAS

TM Carolina Sepúlveda B.

TM Valeska Troncoso O.

Revisado por TM Benjamín Riveros C.

Coordinador Nacional TNS LABI

2016

MANUAL

MICROBIOLOGÍA APLICADA AL

LABORATORIO

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I n d i c e

Página

 Introducción 5

 Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiología 6

 Métodos de Desinfección y Esterilización 16

 Niveles de Acción de los Desinfectantes 21

 Esterilización 30

 Trabajo Personal del Estudiante “Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiología” 35  Microbiología 48

 Trabajo Personal del Estudiante “Microbiología: Morfología Bacteriana” 55

 Medios de Cultivo 65

 Mantención y Preparación de los Medios de Cultivo 68

 Esterilización de los Medios de Cultivo 70

 Medios Usados en la Identificación Bioquímica de Enterobacterias 76

 Pruebas Especiales para la Identificación Bacteriana 79

 Clasificación de las Bacterias 81

 Trabajo Personal del Estudiante “Microbiología: Medios de Cultivo” 84

 Conceptos Generales de Salud 92

 Muestras Microbiológicas 96

 Siembras de Muestras 97

 Siembra Muestras de Orina Aséptica 98

 Siembra Muestra de Herida 99

 Siembra Muestras Respiratorias 99

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Página

 Muestra Deposición 103

 Muestra Secreciones 104

 Muestra Sangre 104

 Muestra Secreción Uretral 105

 Muestra Líquidos 105

 Estudio de Anaerobios 106

 Etapas de Realización de un Frotis para Tinción 107

 Realización y Estudio de Antibiogramas 109

 Trabajo Personal del Estudiante “Microbiología: Muestras Microbiológicas y su Diagnóstico Procedimental” 111

 Parasitología 120

 Clasificación de los Parásitos 125

 Protozoos 125

 Helmintos 127

 Artrópodos 129

 Parasitosis por Protozoos 133

 Amebiasis 133  Balantidiosis 134  Giardiasis 135  Isosporiasis 136  Criptosporidiasis 137  Tricomoniasis 138  Blastocistosis 139  Enfermedad de Chagas 140  Toxoplasmosis 141

 Parasitosis por Helmintos 142

 Ascariasis 142

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Asignatura: “Microbiología Aplicada al Laboratorio” TLC – 119 Plan 3 Página  Oxiuriasis 144  Teniasis 145  Cisticercosis 147  Difilobotriasis 148  Himenolepiasis 149  Dipilidiasis 151  Hidatidosis 152  Triquinosis 153  Fasciolasis 154

 Trabajo Personal del Estudiante “Microbiología: Diagnóstico Parasitológico Procedimental” 155

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INTRODUCCIÓN

El presente Manual de Apoyo Microbiológico, tiene por finalidad establecer

las directrices de bioseguridad que norman el trabajo en un Laboratorio de

Microbiología, junto con aprender a realizar las diferentes técnicas de competencia

del Técnico en Laboratorio Clínico, promoviendo un trabajo fácil, seguro y

técnicamente correcto.

Se mostrarán las diferentes técnicas y sus fundamentos, para poder así

relacionar lo que estamos haciendo con la importancia que radica el trabajo que

realizamos con la salud del paciente.

No debemos olvidar el cuidado que hay que tener al manejar las muestras

clínicas, ya que un mal manejo de éstas puede generar un resultado erróneo para

el paciente y ver afectada nuestra salud.

En este sentido, aparece el concepto de Bioseguridad, que se define como

el conjunto de medidas preventivas destinadas a disminuir o eliminar el riesgo de

exposición a agentes biológicos, físicos y químicos potencialmente peligrosos.

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BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Los riesgos a los cuales se puede estar expuesto en el Laboratorio de

Microbiología, ya sea por las infecciones adquiridas en éste o por la liberación al

medio ambiente, deben ser reducidos con la capacitación de todo el personal de

salud, desde su formación empírica como desde la formación curricular

académica.

Las competencias que se adquieren al capacitar al personal pueden ser medibles

y éstas, a su vez, se pueden relacionar con las habilidades de las personas que

trabajen ahí. Es importante evaluar el nivel de riesgo del laboratorio, clasificándolo

según las actividades técnicas que se realizan (tipos de microorganismos a

trabajar) y el nivel de seguridad que se requiere según el tipo de laboratorio que

es.

Gran parte de los accidentes están relacionados con:



el carácter potencialmente peligroso de las muestras,



el poco compromiso con el uso de elementos de protección (pecheras,

guantes de procedimientos, antiparras),



el mal manejo de las muestras,



errores humanos,



malos hábitos del personal y



el compromiso de los funcionarios con el seguimiento de las normas de

bioseguridad.

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Para prevenir algún tipo de accidente relacionado con las enfermedades

infecciosas dentro del laboratorio, es muy importante implementar medidas de

buenas prácticas de bioseguridad, tales como:



No comer ni beber absolutamente nada,



No maquillarse,



Usar guantes de procedimientos cada vez que manipule una muestra,



Usar antiparras en el caso de existir riesgo de salpicaduras,



Usar mascarillas de alta eficiencia si hay generación de aerosoles (Ej:

muestras respiratorias, líquido cefalorraquídeo).



Usar pecheras desechables por un eventual derrame y proteger nuestros

uniformes,



Lavado de manos antes y después de manipular muestras y en forma

recurrente.

Cada laboratorio se clasifica según los riesgos a los cuales está expuesto, de

acuerdo al tipo de microorganismos que ahí se trabaje. Según la OMS

1

, la

clasificación es la siguiente:

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Tabla 1. Clasificación de Microorganismos Infecciosos (MO) por

Grupo de Riesgo

Grupo Riesgo Tipo de Microorganismos Aislados

1 Riesgo individual y

poblacional escaso o nulo

Microorganismos con poca probabilidad de producir daño en el ser humano o animales.

2

Riesgo individual moderado y poblacional bajo

Microorganismo que pueden producir infecciones en el ser humano pero con baja probabilidad en el personal debido a medidas

preventivas y terapéuticas existentes.

3 Riesgo individual elevado

y poblacional bajo

Microorganismo que producen infecciones graves pero no propagables de un ser humano a otro.

Existen medidas preventivas y terapéuticas.

4 Riesgo individual y

poblacional alto

Microorganismos que producen infecciones graves y se propagan de un ser humano a otro.

No existen medidas preventivas y terapéuticas. 1_{Organización Mundial de la Salud.}

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Tabla 2. Relación de los Grupos de Riesgo con los Niveles de

Bioseguridad, Prácticas de Laboratorio y Equipo de Seguridad

Grupo Nivel de Bioseguridad

Tipo de

Laboratorio Practica de Laboratorio Equipo de Seguridad

1 Básico

Nivel 1

Enseñanza Básica,

Investigación TMA*

Ninguno, trabajo en mesa de laboratorio al descubierto 2 Básico Nivel 2 Servicios de Atención Primaria, Diagnóstico, Investigación

TMA y ropa protectora, señal de riesgo biológico Trabajo en mesa de laboratorio al descubierto y CBS** para posibles aerosoles. 3 Contención Nivel 3 Diagnóstico Especial, Investigación

Prácticas de Nivel 2 más ropa especial, acceso controlado y

flujo direccional

CBS además de otros medios de contención primaria para

todas las actividades

4 Contención Máxima Nivel 4 Unidad de Patógenos Peligrosos Prácticas de Nivel 3, más cámara de entrada con cierre hermético, salida con ducha y

eliminación de residuos especiales

CBS Clase III o trajes presurizados junto con CBS

de Clase II, autoclave de doble puerta (a través de la

pared), aire filtrado.

* TMA: Técnicas Microbiológicas Aplicadas ** CBS: Cabina de Bioseguridad

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Cabe destacar que existen conceptos que se deben manejar al momento de hablar de bioseguridad y éstos son los siguientes:

 Accidente Laboral: Aquél que sucede al trabajador durante su jornada laboral pudiendo ser de origen biológico, físico y/o químico que puede revestir algún riesgo para su salud. La exposición laboral a fluidos corporales de riesgo biológico es considerada accidente laboral por lo que se encuentra amparada por el Seguro Social contra Riegos de Accidente Laboral y Enfermedades Profesionales2.

 Accidente Cortopunzante: Aquél derivado de la manipulación de elementos o material cortopunzante, contaminado o no, que concurre en heridas que pudieran constituir puerta de entrada de diversos agentes infecciosos deletéreos para la salud del funcionario. Se considera como el principal agente de riesgo de transmisión el Virus de la Hepatitis B (10 a 40%), Virus de la Hepatitis C (3 a 10%) y Virus de la Inmunodeficiencia Humana (0,2-0,5%).

 Área de Trabajo: Lugar delimitado físicamente (pared, panel, mesón) en el cual se manipulen y procesen muestras clínicas.

 Área Limpia: Espacio físico libre de muestras clínicas y material relacionado con ellas (implementos para el procesamiento de ellas, desechos biológicos, etc.).

 Área Sucia: Área de trabajo del laboratorio donde se depositen muestras clínicas.

 Riesgo Biológico: Posibilidad de sufrir algún daño (infección) debido a agentes infecciosos como bacterias, virus, hongos y parásitos.

 Riesgo Físico: Posibilidad de sufrir algún daño debido a fuego, radiaciones, ruidos, vibraciones, etc.

2_{Ley 16.744}

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 Riesgo Químico: Posibilidad de sufrir algún daño debido a agentes químicos como ácidos, álcalis, etc.

 Fluidos Corporales: Se clasifican según el riesgo de transmitir enfermedades de importancia epidemiológica con bajo riesgo de transmisión (saliva, sudor, deposiciones, orina).

Respecto a la planta física de un laboratorio, es muy importante tener en consideración ciertos requisitos para evitar accidentes y así trabajar de forma segura.

Es por este motivo que se debe tener puertas de acceso y escape del laboratorio con apertura interna y debidamente señalizadas como acceso restringido a personal autorizado.

Las áreas de trabajo deben estar separadas por murallas o paneles con las puertas señalizadas con el tipo de estudio que se realiza ahí. Las superficies deben ser lavables, iluminación adecuada, sala para descontaminar material y para lavado de material. Baños y duchas de emergencia

Sistema de Precauciones Universales:

Se entiende como un conjunto de técnicas y procedimientos destinados a proteger al personal que conforma el equipo de salud de la posible infección con ciertos agentes, principalmente Virus de la Inmunodeficiencia Humana, Virus de la Hepatitis B, Virus de la Hepatitis C, entre otros, durante las actividades de atención a pacientes o durante el trabajo con sus fluidos o tejidos corporales.

Toda muestra debe considerarse como potencialmente infecciosa por lo que se deben utilizar las precauciones estándar mínimas al manejar cualquier tipo de estas.

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Lavado de Manos:

Debe realizarse siempre antes y después de colación y eliminación de guantes. Examinar o realizar procedimiento en un paciente. Ej.: punciones, manipular fluidos corporales.

Tipos de Lavado de Manos: o Lavado de alta frecuencia o Lavado clínico

o Lavado en seco.

Lavado de Alta Frecuencia usado para:

o Toma de muestras que involucran procedimientos no invasivos: Expectoración, deposición, orina en paciente incontinente, etc.

o Manejo de muestras clínicas en general.

Instrucciones:

- Subir las mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas. - Adoptar posición cómoda frente al lavamanos.

- Abrir la llave del agua y déjela corriendo.

- Mojar las manos y muñecas antes de aplicar jabón de glicerina - Depositar gotas de jabón en la palma de la mano

- Jabonar las manos y muñecas friccionando 15 segundos las manos para obtener espuma especialmente entre los dedos.

- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia las muñecas.

- Secar con toalla de papel desechable.

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Lavado Clínico usado para:

o Toma de muestras que involucran procedimientos medianamente invasivos y/o de corta duración

o Toma de muestras microbiológicas (urocultivos, hemocultivos, punción venosa o arterial, etc.)

o Atención de pacientes con precauciones de transmisión o Manipulación de muestras microbiológicas durante su análisis

Instrucciones:

- Subir mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas. - Adoptar una posición cómoda frente al lavamanos. - Abrir la llave del agua.

- Mojar las manos y muñecas antes de aplicar jabón antiséptico - Dispensar jabón desde el dispensador

- Jabonar sus manos y muñecas, friccionando 30 segundos para obtener espuma especialmente entre los dedos.

- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia la muñeca.

- Secar las manos con 1 a 2 hojas de toalla de papel desechable. - Cerrar llave de agua con la toalla de papel y elimínela.

Lavado en Seco con Alcohol Gel:

o Se usa hasta 3 veces seguidas con manos visiblemente limpias y secas entre lavado de manos.

o Usado para:

- Realización de procedimientos no invasivos o invasivos de corta duración - Atención de pacientes con precauciones de transmisión

- Manejo de muestras biológicas en general.

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Uso de Guantes de Procedimientos:

Se debe tener en cuenta que los guantes de procedimientos nunca deben sustituir el lavado de manos. Tampoco estos deben ser lavados, ya que el látex no esta fabricado para ser lavado y reutilizado, ya que puede formar microporos cuando es expuesto a este estrés.

Siempre utilizar al manipular cualquier tipo de muestra.

Manejo de Derrames de Muestras en Superficies: o Cubrir con toalla de papel zona derramada.

o Verter solución de cloro al 0,5% sobre el papel absorbente. o Dejar actuar por 20 minutos.

o Recoger con mano enguantada papeles embebidos con solución de cloro y desechos biológicos (basureros amarillos).

o Retirar con pala y espátula o cepillo si hay material corto punzante.

o Rociar 2 a 3 veces más con solución de cloro al 0,5%, secar con papel y eliminar en desechos biológicos (contenedores de color amarillos).

Manejo de Derrames Relacionados a Centrífugas:

o Esperar detención total de la centrífuga. Si el derrame se produce por quiebre de tubos con material potencialmente infeccioso se debe detener la marcha de la centrífuga y mantener ésta cerrada por lo menos 30 minutos, antes de su apertura.

o Antes de destapar la centrífuga, colocarse lentes, mascarilla, guantes y pechera. o Abrir y cubrir base con toalla de papel.

o Rociar abundantemente solución de alcohol 70° en paredes y base. o Dejar actuar 10 minutos.

o Retirar con mano enguantada (doble guante si hay presencia de material cortopunzante) papeles embebidos con solución de alcohol 70°.

o Eliminar restos según corresponda a material cortopunzante (cajas amarillas) o desechos biológicos (contenedores de color amarillos).

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o Rociar 2 a 3 veces más con alcohol 70°, secar con papel y eliminar en basura común.

Manejo de Derrame de Muestras con Sospecha de Agentes de Transmisión Aérea (muestras respiratorias, sangre, LCR)

o Cubrir zona de boca y nariz con delantal y contener respiración. o Evacuar lugar de derrame y cerrar sección.

o Avisar a Jefatura o Supervisión.

o Esperar 60 minutos antes de entrar (para decantación de partículas en suspensión).

o Cubrir derrame con toalla de papel.

o Rociar abundante Cloro al 2% y dejar actuar 10 a 15 minutos.

Precauciones Generales Durante las Actividades Prácticas:

Uso de guantes de procedimientos, y todo tipo de barrera de protección, según la actividad a realizar.

Pipeteo: Está prohibido pipetear con la boca, debido a los riesgos que involucra el uso de pipetas porque existe la posibilidad de succión bucal. Solo se deben ocupar con propipetas.

Extensiones y Frotis para el Examen al Microscopio: Estas fijaciones se deben utilizar con guantes de procedimientos y deben ser eliminadas en contenedores amarillos de material cortopunzante.

Mecheros: Se deben encender en el momento en que comienza el trabajo en el laboratorio, es decir cuando realicemos siembra de muestras, tinciones, antibiogramas. Las asas metálicas se deben incinerar siempre al utilizarlas.

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MÉTODOS DE DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN

En los ambientes hospitalarios podemos encontrar gran variedad de microorganismos. La presencia de éstos por si solos no constituye un riesgo para los pacientes al menos que, mediante una dosis infectante, puedan afectar a un huésped susceptible. La mayoría de los objetos inanimados destinados a la atención de pacientes requieren de algún tipo de procedimiento que elimine o disminuya los microorganismos con el fin de interrumpir la cadena de transmisión y ofrecer una práctica segura para el paciente.

Los objetos inanimados destinados a la atención de pacientes requieren de procedimientos que ayuden a disminuir o eliminar los microorganismos con el fin de interrumpir la cadena de transmisión y ofrecer una práctica segura para el paciente.

Los distintos procedimientos que se utilizan para la eliminación o disminución de la carga de microorganismos deben ser seleccionados adecuadamente para los distintos artículos dependiendo de la naturaleza del material y a la vez los procedimientos a realizar. Dentro de los principales procedimientos podemos encontrar la descontaminación, desinfección y esterilización.

Semmelweis3 fue un médico húngaro, de origen alemán, que consiguió disminuir drásticamente la tasa de mortalidad (en un 70 %) por sepsis puerperal entre las mujeres que daban a luz en su hospital mediante la recomendación a los obstetras que se lavaran las manos con una solución de cal clorurada antes de atender los partos.

En 1862, Luis Pasteur publicaría la hipótesis microbiana, planteando que las infección están producidas por agentes causales. Y Joseph Lister en 1865, extendería la práctica quirúrgica higiénica al resto de especialidades médicas destacando la importancia de las medidas asépticas. Introdujo los términos de asepsia y antisepsia, utilizando el fenol como primer antiséptico.

3_{Ignác Semmelweis 1918-1865.}

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En la actualidad cada recinto de salud se debe regir bajo las normas establecidas por la “Norma General Técnica Sobre Esterilización y Desinfección de Elementos Clínicos” del Ministerio de Salud4_{. Estas normas tienen por objetivo uniformar los} procesos de esterilización y desinfección en el país, asegurar la calidad del material de uso clínico y recomendar sistemas para una mayor eficiencia de estas actividades.

En la atención directa se utilizan numerosos artículos y equipos que tienen contacto con el paciente por distintas vías. El método de eliminación de microorganismos requerido por cada artículo, está directamente relacionado con el riesgo potencial que tiene ese artículo en particular de producir infección en el paciente. En 1968, Spaulding clasificó los artículos en tres categorías de acuerdo al riesgo antes mencionado:

Artículos Críticos: Corresponden a artículos que se ponen en contacto con cavidades normalmente estériles del organismo o el tejido vascular. Éstos deben ser siempre estériles.

Artículos Semicríticos: Corresponden a artículos que entran en contacto con piel no intacta o con mucosas. Estos artículos, deben estar libres de los microorganismos antes mencionados y de preferencia deben ser estériles. En caso que la esterilización no sea posible deben ser sometidos al menos a desinfección de alto nivel. Ejemplos de artículos en esta categoría son circuitos de las máquinas de anestesia, y endoscopios.

Artículos No Críticos: Estos artículos toman sólo contacto con piel sana o no se ponen en contacto con pacientes por lo que el riesgo de producir infecciones es mínimo o inexistente. En general sólo requieren limpieza y secado.

Para entender los aspectos relacionados con la higiene del medio sanitario es importante que se tengan claro el significado de diversos términos:

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Infección

Se denomina infección a la penetración en un huésped de un microorganismo o agente infeccioso. Los agentes infecciosos son los microorganismos y pueden encontrarse en cualquier parte del medio ambiente pudiendo ser bacterias, hongos, virus y protozoos. La infección no siempre produce una enfermedad ya que el organismo dispone de mecanismos de defensa producidos por el sistema inmunológico capaces de actuar sobre el agente agresor. Cuando el sistema inmunológico es sobrepasado por los agentes infecciosos aparecen los diversos signos y síntomas de las distintas enfermedades.

Asepsia

La asepsia es un conjunto de medidas y técnicas que tiene como finalidad impedir la proliferación de microorganismos, así impidiendo la contaminación del material, personas y ambiente hospitalario. Se logra una ausencia total de microorganismos patógenos que causan enfermedades.

Antisepsia

Utilización de agentes químicos sobre la piel o sobre tejidos vivos para inhibir o eliminar los microorganismos (no implica una acción esporicida).

Limpieza

Procedimiento físico por arrastre del material orgánico contenido en los utensilios.

Antisépticos y Desinfectantes:

Los antisépticos y los desinfectantes son usados ampliamente en los hospitales y otros centros del cuidado de la salud. Son parte esencial de las prácticas de control de la infección y ayudan en la prevención de las infecciones nosocomiales. Los agentes antisépticos rápidamente desinfectan superficies por disminución de la cantidad de bacterias sobre la piel intacta.

Cuando se usan pre-quirúrgicamente, los antisépticos sirven como profilácticos para la prevención de la infección.

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Se denomina desinfección a la técnica de saneamiento que tiene como objetivo la destrucción de formas vegetativas de microorganismos en objetos inanimados y no necesariamente esporas. Esta destrucción se realiza por métodos químicos o físico siendo muy útil para la mayoría de los microorganismos.

Existen agentes desinfectantes que se clasifican dependiendo del tipo de destrucción frente a los microorganismos vegetativos. De acuerdo al tipo de agentes que es capaz de destruir, se han definido tres niveles de desinfección:

Desinfección de Bajo Nivel:

La desinfección de nivel bajo elimina bacterias patógenas en su forma vegetativa y algunos hongos, no elimina el Mycobacterium tuberculosis ni los virus de tamaño pequeño no lipídico. Existen desinfectantes de nivel bajo que no destruyen las formas vegetativas de todas las bacterias.

Desinfección de Nivel Intermedio:

La desinfección de nivel intermedio elimina formas vegetativas de bacterias, hongos y virus pero no de tamaño pequeño no lipídico. En circunstancias especiales puede eliminar

Mycobacterium tuberculosis.

Desinfección de Alto Nivel:

La Desinfección de alto nivel elimina todos los microorganismos incluyendo los virus resistentes y Mycobacterium tuberculosis. No elimina esporas bacterianas.

Entre los principales métodos de desinfección podemos encontrar Desinfección Térmica por Medio de Vapor a Baja Temperatura y la Desinfección por Métodos Químicos.

Desinfección Térmica por Medio de Vapor a Baja Temperatura:

Esta consiste en procesar el material en autoclave de vapor a temperatura de 73ºC. El equipamiento usado para este proceso es una autoclave a vapor común con modificaciones para efectuar ciclos a menor temperatura.

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Este método puede utilizarse para la desinfección de artículos que resistan la temperatura requerida y al poder utilizar material empaquetado permite su posterior almacenaje. Para obtener una desinfección de alto nivel se debe procesar en la autoclave por un tiempo de 12 a 15 minutos.

Desinfección por Métodos Químicos:

Consiste en poner en contacto el material o superficies con agentes químicos. Para la desinfección de alto nivel, el material debe permanecer en inmersión por un tiempo determinado de acuerdo al producto.

La institución de salud debe tener definido el listado de desinfectantes en uso y a su vez los desinfectantes de alto nivel deben estar aprobados por el Ministerio de Salud, estando sujetos a una seria de normas (Normas Técnicas Sobre Esterilización y Desinfección de Elementos Químicos” del MINSAL)

Las propiedades que podemos encontrar en un desinfectante ideal son:

 Amplio espectro

 Rápida acción

 No se afecta por factores del medio ambiente

 Sin toxicidad

 Compatibles con las superficies

 Dentro de los desinfectantes usados con mayor frecuencia en los recintos hospitalarios podemos encontrar ácido Peracético, alcoholes, amonios cuaternarios, cloro y compuestos clorados, fenoles, formaldehído, Glutaraldehido, orthophtalaldehido y peróxido de hidrógeno estabilizado

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Niveles de Acción de los Desinfectantes

Alto Nivel

El procedimiento de desinfección de alto nivel es complejo porque se aplica en numerosas oportunidades a equipos que son difíciles de manipular como son los endoscopios. En general dado que el proceso de desinfección de alto nivel es engorroso, difícil de evaluar y sujeto a falla humana, dentro de lo posible deben preferirse los métodos vigentes de esterilización para los artículos de uso médico. Los artículos no críticos y las superficies inanimadas (Ej. muebles, suelo y muros) en general no han sido involucradas en la transmisión de infecciones y se pueden tratar con limpieza y en situaciones excepcionales con desinfectantes de nivel bajo o intermedio.

Los agentes desinfectantes apropiados para desinfección de alto nivel deben cumplir varias características:

 Amplio espectro

 Estabilidad frente a materia orgánica

 Compatibilidad con el material de los equipos

 Posibilidad de medir su actividad o concentración por medio de indicadores químicos

Idealmente estos desinfectantes deben tener rapidez en su acción, baja toxicidad, vida media prolongada, degradabilidad en el medio ambiente y ausencia de olor.

El personal a cargo del procesamiento de estos equipos, debe estar capacitado y ser evaluado en forma constante. Para obtener buenos resultados, se deben lavar todas las superficies (internas y externas) usando detergentes enzimáticos o neutros que aseguren la eliminación de materia orgánica sin dañar los equipos

Si se procesan por inmersión, se debe asegurar que tanto superficies internas como externas se pongan en contacto con el agente desinfectante. Para el enjuague se debe

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utilizar agua estéril y en el caso de no contar con este suministro, se debe usar agua potable y posteriormente aspirar alcohol por los canales.

El secado debe ser realizado con aire filtrado para evitar su re contaminación, se recomienda procesar los equipos inmediatamente antes de su uso para evitar contaminación de los mismos. No obstante si no se utilizan inmediatamente de procesados, el almacenamiento debe ser en un sitio libre de polvo y las superficies externas protegidas con cubiertas estériles

Métodos de Desinfección de Alto Nivel

Glutaraldehido

Corresponde a un di aldehído saturado que se utiliza como desinfectante de alto nivel. Las formulaciones convencionales de Glutaraldehido tienen una duración aproximada de 14 días. Existen formulaciones nuevas en las que se han agregado agentes estabilizantes para prolongar la vida útil a alrededor de 28 días. El mecanismo de acción de Glutaraldehido se debe a la alquilación de los grupos amino, sulfidrilo, hidroxilo y carboxilo, los cuales alteran el ARN, el ADN y la síntesis proteica en los microorganismos.

Cloro y Compuestos Derivados del Cloro

Los agentes clorados tienen amplio espectro microbicida. Su uso está limitado porque se inactivan en presencia de materia orgánica, son inestables y corroen el material metálico. Por otra parte, son tóxicos en contacto con piel y mucosas.

Los hipocloritos son los desinfectantes clorados más utilizados. Su presentación líquida como hipoclorito de sodio es la más conocida, y existe una forma sólida como hipoclorito de calcio. Las soluciones de cloro no deben conservarse en envases destapados por más de 12 horas debido a la evaporación del producto activo, haciendo que las concentraciones de cloro disponible disminuyan.

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Mezcla de Ácido Peracético al 0.08% y Peróxido de Hidrógeno al 1%. No requiere activación, su duración es de 14 días. Buena compatibilidad con el material. Experiencia limitada en endoscopios.

Formaldehído

Este agente inactiva los microorganismos por alquilación de los grupos aminos y sulfidrilo de las proteínas y el anillo del átomo de nitrógeno de las bases purínicas. El formaldehído con alcohol es un desinfectante de alto nivel y fue usado en el pasado para la desinfección de equipos. En la actualidad su uso está discontinuado debido a su alta toxicidad y el olor penetrante que aparece aún a muy bajas concentraciones.

Características y tiempo de inmersión de productos vigentes disponibles en Chile para Desinfección de Alto Nivel.

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Para efectuar los procedimientos de Desinfección de Alto Nivel siempre deben cumplirse los siguientes aspectos

 El material debe estar totalmente libre de materia orgánica, porque ésta interfiere en el proceso de desinfección.

 Se recomienda la utilización de detergentes de tipo enzimático y sumergir el endoscopio inmediatamente después de ser utilizado.

 Enjuagar y secar prolijamente para evitar dilución del desinfectante y alterar su concentración.

 El tiempo de desinfección de alto nivel debe ser establecido de acuerdo a las características propias de cada desinfectante.

 No es recomendable enjuagar los artículos desinfectado con agua corriente debido a la posibilidad de contacto con superficies contaminadas.

 En caso de no contar con agua estéril para este fin debe usarse alcohol etílico o isopropílico para el último enjuague.

Nivel Intermedio:

Se utiliza para la limpieza de superficies o de instrumentos en los que es poco probable la contaminación por esporas bacterianas o por microorganismos con alto grado de resistencia.

Métodos de desinfección de Nivel Intermedio

Alcoholes

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El alcohol se considera un desinfectante de nivel intermedio y se usa en la desinfección de superficies y artículos no críticos. Se utiliza en la desinfección de termómetros orales y rectales, laringoscopios y pequeñas superficies como las tapas de goma de algunos frascos de medicamentos y para el enjuague de canales de endoscopios.

Fenoles

Estos productos fueron de los primeros usados en desinfección hospitalaria. En concentraciones altas, el fenol actúa como un gran tóxico del protoplasma penetrando y destruyendo la pared celular y precipitando las proteínas celulares. Se usa para limpieza de superficies hospitalarias y elementos no críticos.

Compuestos Yodados

Similares a los alcoholes, pero ligeramente más tóxicos, También se desactivan con las sustancias orgánicas.

Bajo Nivel

Se utilizan para tratar instrumentos no críticos, no traspasan las mucosas ni los tejidos estériles de los pacientes.

Método de Desinfección de Bajo Nivel:

Amonios Cuaternarios (AC)

Estos productos han sido utilizados ampliamente como desinfectantes y hasta hace algunos años como antisépticos. No deben usarse como antiséptico ni como desinfectante de alto nivel, debido a que existe evidencia que las soluciones pueden contaminarse con bacilos gram negativos ya que el agente activo es absorbido por textiles como los géneros y gasas. La acción microbicida de los amonios cuaternarios es en general muy limitada. La mayoría de las formulaciones son como detergentes/desinfectantes y su uso se limita al saneamiento ambiental común de superficies.

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Los antisépticos son biosidas o sustancias químicas que se aplican sobre los tejidos vivos, con la finalidad de destruir o inhibir el crecimiento de microorganismos patógenos. No tienen actividad selectiva ya que eliminan todo tipo de gérmenes.

Un antiséptico ideal debería cumplir con los siguientes atributos para su elección:

 Amplio espectro

 Bajo costo

 Inocuo para tejidos vivos

 No debe ser toxico

 Rapidez y eficacia en materia orgánica

 Efecto acumulativo y residual

 Baja capacidad de generar resistencia

 No irritante, ni sensibilizante

Los antisépticos y desinfectantes se clasifican más en la actualidad según el grupo químico a las que pertenecen:

Jabón Corriente

Por remoción mecánica (arrastre) tiene la capacidad de eliminar a los microorganismos presentes en la microbiota transitoria.

Jabón Antiséptico

A diferencia del jabón corriente, el jabón antiséptico tiene la capacidad de eliminar los microorganismos presentes en la microbiota residente. Este debe ser utilizado en los siguientes momentos:

 Antes de hacer un procedimiento con cualquier paciente

 Antes de procedimientos invasivos

 Antes de atender pacientes en unidades críticas

 Antes y después de atender pacientes en aislamiento

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Alcoholes

El mecanismo de acción de los alcoholes es la desnaturalización de las proteínas de los microorganismos. La desnaturalización proteica sólo es posible en presencia de agua; por este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las mezclas de alcoholes con agua. Podría tener cierta acción bacteriostática al inhibir la producción de metabolitos esenciales para la división celular rápida. Tiene acción bactericida pero poco efecto residual. Los alcoholes tienen excelente actividad frente a todos los microorganismos, exceptuando las esporas, se inactiva por sustancias orgánicas por lo que se debe limpiar la piel antes de ser usados y no son tóxicos. Dentro de los efectos adversos que se pueden destacar por el uso de alcoholes podemos destacar que al ser aplicado brevemente a la piel no causa daño, pero irrita si se deja mucho tiempo. En superficies lesionadas empeora el daño y causa un coágulo bajo el cual pueden crecer bacterias, por lo que no se utiliza como antiséptico para heridas abiertas. Su utilización puede provocar irritación y sequedad de la piel. Al volatilizarse puede causar irritación de la mucosa nasal y lagrimal.

Alcohol 70%- 90%

Se utiliza principalmente para el lavado de manos en preparación preoperatorio y preparación de piel en procedimientos invasivos de corta duración. Dentro de sus ventajas podemos destacar su acción rápida y amplio espectro y sus limitantes es la rápida evaporación, inflamable, produce sequedad de piel y no tiene efecto residual

Alcohol Gel

Reemplaza lavado de manos clínico (solo 3 veces el lavado clínico) tiene gran aceptación por los usuarios y mejora la adherencia.

(28)

El yodo y sus compuestos han sido usados ampliamente para la prevención de las infecciones y el tratamiento de heridas. Los compuestos yodados son agentes oxidantes, precipitan las proteínas bacterianas y ácidos nucleicos.

El yodo tiene una poderosa actividad germicida, ataca bacterias gram positivas y gram negativas, Micobacterias, esporas, hongos, virus, quistes y protozoos. Hay varios tipos de preparaciones de yodo, según la zona que haya que desinfectar. La actividad antiséptica de todas las preparaciones depende del yodo en forma libre. Se emplea en: la desinfección de la piel sana, el tratamiento de afecciones de la piel causadas por bacterias y hongos, la limpieza de las heridas en solución acuosa, etc.

Alcohol Yodado (Alcohol 70% + Yodo 0,5%)

Se utiliza en el lavado de manos preparación preoperatoria y preparación de piel. Tiene como ventaja su amplio espectro, acción rápida, Delimitación de zonas por coloración; puede producir sequedad de piel, Irritación, alergia y se puede evaporar.

Clorhexidina

Constituye uno de los tres antisépticos quirúrgicos más importantes y es el antiséptico bucal que más se usa actualmente. La clorhexidina posee amplio espectro de acción. Es bactericida sobre bacterias gram positivas y gram negativas.

Las ventajas que justifican el empleo de la clorhexidina son la acción germicida rápida y su duración prolongada, gracias a que ésta sustancia tiene gran adhesividad a la piel y buen índice terapéutico.

Clorhexidina (2% / 4%)

Se utiliza en lavado quirúrgico de manos, preparación de piel preoperatoria y procedimientos invasivos. Dentro de los beneficios podemos encontrar: acción bactericida rápida, actividad residual duradera entre 6 y 8 horas, reducción rápida del número de bacterias de la piel, efecto antiséptico prolongado, amplio espectro de actividad.

(29)

Dentro de las limitaciones se encuentran su poco efecto frente a Micobacterias, efecto lento (3 minutos en adherirse al estrato corneo), produce ototoxicidad e irritación de córnea.

Triclosán

Es un derivado fenólico, poco soluble en agua su mecanismo de acción es disrupción de la membrana bacteriana a través del bloqueo de la síntesis de lípidos. El Triclosán ha demostrado actividad contra bacterias gram positivas y gram negativas, bacterias multiresistentes donde se destaca su acción frente al Staphylococcus aureus meticilinorresistente.

Entre sus propiedades, el Triclosán tiene rápida acción y son útiles frente a la microbiota residente y transitoria. Su eficacia es inhibida mínimamente por la presencia de materia orgánica, y tiene gran afinidad con la piel, no produciendo irritación ni efectos tóxicos. El Triclosán está disponible en un amplio rango de productos, incluyendo jabones para la preparación pre quirúrgica de la piel, lavado de manos y antisépticos se utiliza además como desinfectantes de superficies y lavado de manos en la industria de la alimentación.

Triclosán (0,5% al 1%)

Se utiliza en el lavado clínico de manos. Tiene como ventajas su buen efecto residual, buena aceptación de usuarios y amplio espectro. Dentro de sus limitantes podemos encontrar su nulo efecto frente a Pseudomonas spp.

Consideraciones en el uso de un antiséptico y desinfectantes

 Su almacenaje (Fecha de Vencimiento y Condiciones )

 Contaminación intrínseca (al momento de utilizar )

 Inactivación : Materia orgánica, agua, jabones, Resistencias

 Los desinfectantes deben usarse solo en objetos inanimados o superficies.

(30)

 No rellenar ni trasvasijar antisépticos ni desinfectantes

 No deben hacerse mezclas (altera su acción, inactivándolos)

 Deben usarse respetando las instrucciones del fabricante respecto a la duración del producto, conservación, dilución y tiempo de contacto

 Previo a su uso, limpiar la superficie

Esterilización

La esterilización del material de uso médico es un componente clave en la prevención y control de infecciones. Históricamente han sido utilizados métodos físicos para la destrucción de microorganismos que actúan por medio de altas temperaturas como son la autoclave a vapor y las estufas por calor seco (Pupinel).

En los últimos años ha habido un aumento progresivo de artículos críticos que no pueden ser sometidos a calor. Por lo anterior, se han desarrollado nuevas tecnologías de esterilización a bajas temperaturas.

Los métodos validados que se utilizan en la actualidad en los hospitales para la esterilización del material pueden clasificarse en métodos de esterilización a altas temperaturas: calor seco (Pupinel) y calor húmedo (Autoclave a Vapor), y métodos de esterilización a bajas temperaturas: Inmersión en Ácido Peracético, Óxido de Etileno, vapor de Formaldehido, Plasma de Peróxido de Hidrógeno y Plasma combinado (Peróxido de Hidrógeno y Ácido Peracético).

Métodos de Esterilización a Altas Temperaturas

Esterilización por Calor Húmedo:

Este método de esterilización elimina microorganismos por desnaturalización de las proteínas, proceso que es acelerado por la presencia de agua, requiriendo temperaturas y tiempos menores de exposición que el calor seco. Este método de esterilización se considera el método más efectivo, económico y rápido disponible en la actualidad, por lo

(31)

que debe ser la primera opción en la selección de métodos de esterilización; el equipo más utilizado es el autoclave a vapor.

Existe una gran variedad de modelos de autoclaves. Estos tienen diferencias en cuanto a operación, tiempos de esterilización y forma de acción.

Clasificación de los Autoclaves: 1. Según Sistema de Operación:

 Manuales

 Semiautomáticos

 Automáticos

2. De acuerdo a la Producción de Vapor:

 Vapor centralizado

 Generador eléctrico incorporado

 Vapor centralizado y generador eléctrico incorporado

 Generador a gas

3. En relación al Funcionamiento:

 Desplazamiento por gravedad

 Con vacío previo

 De sistema pulsante Esterilización por Calor Seco:

Para la esterilización con calor seco se utilizan estufas que comúnmente reciben el nombre de Pupinel.

Este sistema elimina microorganismos por coagulación de las proteínas. La acción microbicida del calor seco está condicionada por la presencia de materia orgánica o

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suciedad en el artículo. El calor seco penetra lentamente en los materiales por lo que se requieren largos períodos de exposición. El uso del calor seco debe limitarse a materiales que no pueden ser esterilizados en autoclave.

Los materiales que pueden esterilizarse en Pupinel y no pueden esterilizarse en autoclave son sólo aceites, vaselina, petrolatos y polvos.

Existen dos tipos de equipos que obtienen el calor a través de la energía eléctrica:

 Convección gravitatoria

 Convección mecánica Esterilización a Baja Temperatura

Esterilización por Óxido de Etileno (ETO)

El óxido de etileno es un agente químico con alto poder microbicida que puede ser utilizado para esterilizar artículos sensibles al calor y a la humedad. Su acción microbicida se produce por alquilación de la pared celular del microorganismo que inhabilita a la célula para tener un metabolismo normal o reproducirse.

La esterilización por óxido de etileno debe ser realizada en equipos que reúnen los parámetros para lograr la esterilización. Los equipos existentes son automáticos con dispositivos de seguridad que impiden abrir el equipo mientras no se haya completado el ciclo. Están dotados de un sistema de vacío para facilitar la introducción del gas en la cámara y la evacuación después del período de exposición. Existen unidades de distintos tamaños y cada establecimiento deberá seleccionar el adecuado de acuerdo a sus necesidades.

Esterilización por Peróxido de Hidrógeno en estado de Plasma:

El Peróxido de Hidrógeno (H2O2) es un agente químico que se ha utilizado por muchos años como desinfectante de alto nivel. Elimina los microorganismos por oxidación.

(33)

La esterilización por peróxido de hidrógeno se realiza en equipos automáticos.

Es compatible con la mayoría de los materiales de uso médico. No son compatibles con el método los derivados de la celulosa como el papel, género, lino, ni tampoco líquidos y polvos.

Esterilización Por Acido Peracético

El Ácido Peracético es un agente químico oxidante soluble en agua, efectivo en forma rápida contra un amplio espectro de microorganismos a bajas concentraciones. Tiene poder bactericida, fungicida y esporicida. No deja residuos tóxicos. Se ha utilizado desde hace años como desinfectante de alto nivel.

Esterilización con Formaldehído

El formaldehído esteriliza a temperaturas entre 60 y 80°C. Elimina los microorganismos por alquilación, requiere equipos especiales.

Esterilización por Radiaciones Ionizantes

La esterilización se obtiene sometiendo los materiales a dosis predeterminadas de radiaciones. Hasta la fecha se han utilizado tecnologías con rayos gamma. Este tipo de proceso es de alta complejidad y sólo puede ser realizado bajo estrictas condiciones de seguridad. Requiere infraestructura especializada que en general no es posible ni se justifica en centros de salud.

(34)

Ventajas y Limitaciones de los distintos Métodos de Esterilización

Método Ventajas Limitaciones Autoclave a vapor Ciclos más cortos. Menor costo de

operación. Efectivo frente a la eliminación de priones.

No presenta toxicidad para el personal ni para el ambiente. Certificable.

Método no compatible con material Termosensible.

No elimina pirógenos.

No esteriliza sustancias oleosas ni polvos.

Calor seco Equipamiento de menor costo que el autoclave

Facilidad de operación de los equipos

Daño del material por exposición a Temperaturas elevadas.

Tiempos de exposición prolongados en Comparación con la esterilización a vapor. Dificultad en la certificación del método. Costos de operación elevados.

No hay información respecto a su efectividad contra priones

Óxido de etileno Permite la esterilización de material Termosensible

Certificable Penetración

Requieren períodos prolongados de Proceso y aireación.

No es un método efectivo contra priones. Tóxico para el personal, pacientes y ambiente

Plasma Baja temperatura. Ciclos de corta duración.

No tóxico para las personas ni para el Ambiente.

No requiere instalaciones especiales

Incompatibilidad con algunos materiales. Controversia respecto a su utilización en artículos con lúmenes largos entre 1 y 2mt. y angostos (entre 1 y 3mm). No elimina priones

Ácido Peracético líquido

Rápido. Efectivo en la esterilización de endoscopios y laparoscopios

Sólo puede ser utilizado para material sumergible

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Asignatura: “Microbiología Aplicada al Laboratorio” TLC – 119 Plan 3 Equipo automático estandarizado No contamina al medio ambiente

Esteriliza un solo contenedor por ciclo por lo que no puede ser utilizado para cantidades Mayores de material.

No elimina priones

Debe ser utilizado en forma inmediata

Formaldehído Baja temperatura. Ciclos de corta duración. Certificable

Incompatibilidad con algunos materiales. Método no aprobado para su utilización en USA

(36)

TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE

“Bioseguridad en el Laboratorio de

Microbiología”

Desarrolle los siguientes Talleres o Actividades de acuerdo a

instrucciones dadas para cada uno de ellos.

El desarrollo de estos talleres le ayudará a estudiar y a

comprender lo relevante que serán en su quehacer técnico y

cuidado personal.

La base del conocimiento está en esta etapa del proceso,

después solo quedará el aplicar y agregar su proactividad,

dándole el sello que lo debe caracterizar en su Práctica

Curricular y Laboral.

(37)

Taller Formativo N° 1 “Asepsia y Antisepsia” I Parte

I Ítem: Respuesta Breve

1.- ¿Qué representa una Norma?

2.- ¿A quién le corresponde la responsabilidad en un Centro Asistencial de entregar

los elementos estériles y desinfectados, sin que ellos involucren un riesgo para el

paciente?

3.- Defina los siguientes conceptos:



Esterilización:



Desinfección:

(38)



Antisepsia:



Limpieza:



Descontaminación:



Empaque:

4.- ¿Qué importancia le atribuye Ud. a la presencia de materia orgánica en los

elementos que van a ser sometidos al proceso de esterilización?

5.- Realice un listado de microorganismos considerando su capacidad de resistencia

a los procesos de esterilización (de mayor a menor resistencia)

6.- ¿Qué métodos de esterilización son recomendables para esterilizar los siguientes

materiales?:



Líquidos

:



Plásticos

:



Vidrios

:

(39)

7.- Identifique en orden las etapas del proceso de esterilización:

8.- ¿Cómo se realiza la recepción y distribución del material en una Central de

Esterilización?:

9.- ¿Cuáles son las etapas del proceso de lavado?:

10.- Mencione los dos elementos más importantes para el lavado de material y

describa sus características más relevantes:

11.- ¿Cómo se clasifican los tipos de empaques a preparar en una Central de

Esterilización? Mencione 3 ejemplos de cada uno de ellos.

(40)

Taller Formativo N° 2 “Esterilización y Desinfección”

I Ítem: Respuesta Breve

(41)

2.- ¿Cuáles son los métodos de Esterilización de Baja Temperatura?

3.- Describa las características del Método de Esterilización por Calor Húmedo:

(42)

5.- ¿Qué variables o parámetros participan en el proceso?:

6.- ¿En qué consisten los Esterilizadores “Flash” y cuando se utilizan?:

(43)

II Ítem: Completación de Oraciones



Tiempo

de

esterilización

es

aquella

que

comienza

cuando……….



La relación de tiempo / temperatura para el Pupinel es………°C por…..….. min.



El Óxido de Etileno se caracteriza por………..



La exposición al ETO puede ocurrir por……… y………



La aireación es fundamental en.………



La tecnología más barata y efectiva para esterilizar es……….



La esterilización por radiaciones ionizantes es en base a rayos……….



Los controles mecánicos de un autoclave son……… - ………



Las etapas del proceso de lavado son:……… - ……… - ………….



El uso de agua dura en los materiales se detecta por la presencia

de………

(44)

Taller Formativo Individual N° 3 Mapa Conceptual

“Indicador Biológico”

Realice la lectura del siguiente artículo

“El uso de Indicadores Biológicos en la

Esterilización con Óxido de Etileno”, y desarrolle con posterioridad un “Mapa

Conceptual” una vez finalizada su revisión y comprensión lectora..

El uso de indicadores biológicos en la Esterilización con Óxido

de Etileno

Introducción

El óxido de etileno desde los años 50 ha sido el agente esterilizante por excelencia y desde que comenzó a utilizarse ha demostrado ser uno de los métodos más sencillos, seguros y económicos para esterilizar a baja temperatura toda una gama de dispositivos médicos, en fábricas como así también e todas las instituciones hospitalarias tanto privadas como estatales. Este método de esterilización aún no ha podido ser superado por otras tecnologías, lo que lo hace imprescindible para la esterilización de elementos termo sensibles.

El desarrollo de nuevos materiales y por lo tanto de nuevos productos, para uso médico principalmente, ha hecho que esta técnica de esterilización se adapte y actualice permanentemente para poder satisfacer las necesidades que demanda el mercado.

(45)

Asignatura: “Microbiología Aplicada al Laboratorio” TLC – 119 Plan 3 Mecanismo de Acción

Es por muchas conocidas su actividad sobre bacterias, hongos, levaduras, virus.

En la célula bacteriana existen tres sitios principales susceptibles de ser atacados por los agentes químicos: las capas superficiales, las enzimas, y el material nuclear. El funcionamiento correcto de cada uno de estos sectores es esencial para la vida del microorganismo. Las proteínas enzimáticas contienen cierto número de grupos reactivos esenciales para su actividad. Entre éstos están los grupos ácidos y básicos de las nucleoproteínas, grupos carboxilos, hidroxilos y aminos, sulfidrilo, amino y otros.

El óxido de etileno actúa químicamente como un agente alquilante reemplazando átomos lábiles, de hidrógeno de los grupos antes mencionados, por radicales hidroxietilos.

Debido a sus características químicas es uno de los más efectivos métodos de esterilización gaseosa.

Las características fisicoquímicas del gas lo hacen muy activo principalmente por su alta capacidad de penetración que permite la mortalidad de los microorganismos en lugares de muy difícil acceso.

Además podemos decir que penetra en sustancias porosas como así también permitiendo la esterilización de superficies que no se puede lograr por otros métodos.

Monitoreo del proceso de esterilización

Existen básicamente tres tipos de controles o indicadores de un proceso de esterilización:

 Físicos

 Químicos

 Biológicos

Los físicos, son los instrumentos con que el fabricante diseña el esterilizador, que monitorizan y además deben registrar, es decir, imprimir y/o graficar curvas del proceso de esterilización donde provee información sobre las condiciones internas de la cámara de esterilización.

El instrumental debe ser validado y fundamentalmente sensible.

Los indicadores químicos para óxido de etileno deben definir los parámetros críticos siguientes:

 Concentración del gas

 Tiempo de exposición

 Temperatura

 Humedad relativa

El cambio que se debe observar en el indicador después de la exposición al proceso debe ser perfectamente definido para poder realizar una lectura segura.

Los indicadores biológicos para monitorear un proceso de esterilización, consisten en obtener una población estandarizada de microorganismos viable, usualmente esporos microbianos, de conocida resistencia al proceso de esterilización que se destina.

(46)

Con los indicadores biológicos se intenta demostrar si las condiciones del proceso fueron las adecuadas para alcanzar la esterilización.

Un indicador biológico negativo no prueba que todos los items del ciclo son estériles, solo que ellos fueron expuestos a condiciones adecuadas de esterilización.

Utilización

La esterilidad absoluta de un lote de esterilización no puede demostrarse sin realizar prueba de esterilidad de cada elemento que componen dicho lote, lo que es un imposible.

En consecuencia, la esterilidad de un lote se define en términos probabilísticos, donde la probabilidad que un elemento esté no estéril es prácticamente remota.

Por lo tanto para establecer condiciones óptimas de garantía de la esterilización, pueden implementarse mediante el uso de procesos adecuados, es decir validados, y buenas prácticas donde se debe establecer:

 Equipamiento adecuado

 Demostrar que se opera dentro de los parámetros establecidos

 Demostrar que la probabilidad de supervivencia microbiana no es mayor que los limites establecidos

 Controlar diariamente y protocolizar los resultados

Es por lo anteriormente expuesto, que los indicadores biológicos cumplen como un único sistema integrador de todas las variables que concurren en un ciclo de esterilización, y sin dudarlo es el indicador más válido para un proceso con óxido de etileno.

Desarrollo de los indicadores biológicos

Diferentes pruebas se realizaron antes de aceptar internacionalmente al Bacillus subtilis o Globigii, como comúnmente también se lo conoce, antes de su uso como indicador biológico para la esterilización gaseosa con óxido de etileno.

Generalmente el soporte utilizado para transportar las esporas microbianas son tiras de papel de filtro que después de inoculadas son colocadas en sobres, y una vez terminada la esterilización son llevadas al laboratorio y preferiblemente en cabina de flujo laminar son transferidas a un medio de cultivo líquido.

Posteriormente son incubadas a 37º C durante 5 o 7 días para recién ser leídos, observando la turbidez producida por el crecimiento de microorganismos.

La desventaja de éste método es el largo período de incubación, puesto que se necesita observar turbidez, es decir que el desarrollo microbiano debía ser abundante, por lo tanto su período de incubación, largo.

En una segunda etapa se introdujeron mejoras a éste método, evitando la transferencia de la tira de papel porque se envasa en una unidad plástica la tira y el medio de cultivo líquido contenido

(47)

en una ampolla de vidrio, que después del ciclo se rompe logrando así impregnar la tira y luego incubar.

Con este método también se ve facilitada la lectura, porque al medio de cultivo líquido se le adiciona o incluye un indicador de pH, púrpura de bromocresol que cambia de color cuando existe desarrollo microbiano, puesto que el medio de cultivo se acidifica.

Existen algunas ventajas con este método porque el cambio permite una mejor y segura lectura del resultado, la reducción del tiempo de incubación de 24 a 48 hs, la no transferencia de la tira de papel inoculada del sobre al medio de cultivo, lo que podría ser motivo de introducir contaminación, teniendo por resultado posibles falsos positivos.

Finalmente en los últimos años se ha introducido en el mercado indicadores biológicos de lectura rápida para el monitoreo de la esterilización con óxido de etileno.

Estos indicadores detectan la presencia de una enzima: a D-glucosidasa contenida en las esporas, lo que permite una lectura fluorescente al cabo de 4 hr de incubación.

Esta lectura se realiza en la misma incubadora mediante un sistema de luces que de acuerdo a color indica si la esterilización ha sido satisfactoria, es decir, si existen indicios de desarrollo microbiano o no. Este método todavía no ha sido suficientemente aceptado.

Existen diferentes tipos de indicadores biológicos y su elección depende para el uso que se lo destine:

 Desarrollo de ciclo

 Validación de ciclo

 Monitoreo de rutina

La carga microbiana utilizada por indicador biológico es de no menos de 10 (4) y no más de 10 (9) d esporas de Bacillus subtilis-variedad niger.

En la fabricación y validación de los indicadores biológicos se emplean equipos altamente especializados de esterilización, por lo tanto las características de resistencia del indicador utilizado por el usuario pueden no coincidir con las especificadas en la etiqueta del mismo debido a diferencias entre las condiciones del usuario y las condiciones de esterilización empleadas por el fabricante.

Por lo tanto la elección de un indicador biológico es crítica y requiere que se le de debida importancia, conociendo la resistencia de la población microbiana del indicador biológico en relación al proceso de esterilización específico, para que cuando se lo emplee dentro de sus características de desempeño constituya un desafío para el proceso de esterilización, mayor que el desafío representado por la carga microbiana contenida en el producto a procesar.

La determinación de diferentes niveles de carga microbiana está basada en recuperar microorganismos y esporos del producto a ser esterilizado, teniendo en cuenta la eficiencia del método utilizado en la toma de la muestra en orden que los resultados obtenidos reflejen con exactitud la carga existente.