Metodologías para estudios de control en garrapatas

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(1){Qr. . rr. ó. PARAESTUDIOSDE CONTROL METODOLOGIAS EN GARRAPATAS Antonio Be'f,ncourtE.'. INTRODUCCION á desanollando compuestos acancidas' unos gico que, aunque están respaldados.,poruna rs o en granjas de su pfopiedad en diferentes para ; locales sea con fines de registro o técnicas-. I. t. 'acilidad.. DE I..AEFICACIADE UNCOMPUESTOACARIGIDA DETERMINACION DE CAMPO OBSERVACIONES. I. grupode animalestratados para este t¡pode estud¡os,el trabajoideal es aquelque incluyeun que además' contemplala evaluaciónde parámetros y un grupo control sin trat#iliü-v animalesde ambos grupos El protocolo reproductivos g"rr"p"o, iátpLit¿iJát o" los "n : seríael sigu¡ente unifolme(unos40 boünos) hastaobtener . Deje ¡nfestarnaturalmenteun lote de ganado por ,n'nUt". mín¡mode 40 a 50 teleoginas animal. .. en todo el cuerpode los preferiblemente Cuentelas ganapatasde 4'5 a 8 mm de largo animalesy durantetres díasantesdel tratam¡ento' grupotratadoy al grupocontrolsin tratam¡ento' Asignelos animalespor paresal azar al. r. Apliqueel acaricidaa los bovinosdel grupotratado'. .. _t. ¡Devue|valosanimabsapastoreoenpotrerosdesimilar¡nfestac¡ónpefoseparado. ffi. Agfop€cuarioc¡1i.. óst¡coIn!üt¡to cotomb¡ano.

(2) t. a. en los días1,3,7' 14' 21,28,35' y 42 post en todoslos animales Cuentetefeoginas tratam¡ento. Calculela eficaciaaplicandola fórmulado Roulstony Col.(1968) así: = [(a x d)/ (b x c)] 100 Porcentaiede sobrevivientes Eficacia= 100 - o/ode sobrevivientes. t. ¿ = promediode garrapatasen el grupo controls¡n tratamientodurantelos tres (3) días de losanimalesdel grupotratado' al tfatamiento anteriores despuésde aplicarel b = promediode ganapatasen los controlesen un dia determinado al otrogruPo. tratam¡ento al tratamienio c = Númerode ganapatasen el grupotratadoen los tres(3)diasanteriores despuésdel tratamiento. d = Númerode ganapatasen el grupotratadoen un día determinado. a. .. de cadaanimalunas20 en los díasde recuentose puedendesprender Adicionalmente, a 27oC y 85% de humedadrelativapara lascualesson pesadase ¡ncubadas teleoginas, obtenerhuevos.. .. determineel peso de los huevosproducidospor Pasadoslos 14 días de incubación, de conversión(lEC)así : y calculeel Indicede Eficiencia cadalotede 20 teleoginas. .. teleoginas IEC= PesohuevoslPeso Coloquelo9huevosde cadaloteen tubosde fondoplanotapadoscon tapón.dealgodÓn de eclosión, el porcentaje porotros30 díasparaestablecer y gasá y continúeincubando. ". de eclosiónse calculaa part¡rde una muestradel materialque se obtiene El porcentaje y huevos de los tubos en tos cualeshay larvas,cascaronesde huevoseclosionados infért¡les. X 100)I (huevos+ cáscaras) % de eclosión= (cáscaras. I. '. (lR)así: obtenidase cálculael Ind¡ceReproductivo Conla informac¡ón 20 000 eclosión/100) lR = IECX (o/o. .. t. se puedencompararlos lR en los gn¡postratadosy confol para Estadisticamente establecefdiferenciasentfe gfuposen cadafecha y determinafsignificancia.. En la mayor¡ade los casos,sin embargo,no es pos¡bleincluira nivelde finca un grupode A acaricida.En este caso se configuraun grupode an¡males bovinoscontrolsin tratam¡ento que se trata con el compuestocuyaeficaciase deseaavedguary un grupoB que se rata con otro compuestode conocida eféctiüdad en el mercado. Como no hay grupo control s¡n tratam¡ento los bovinospuedenpastar¡untos..

(3) t. ganapatas en cada La ef¡caciase calcula entoncesfelacionandoel recuentopfomed¡ode determinadodía post tratamiento,con el recuentoen el mismo grupo antes del Sró-;; iratim¡ento.Un ejemploes provistopor los siguientesdatoshipotéticos: Día. PROMEDIODE TELEOGINAE GRUPOB GRUPOA. ñ. 95. tto. 1. tto. 85. o. a. 3. ¿. '14. 2. 21 28. 0. 1 0. z. e. ponce¡¡rl¡E DEEFlcActA GRUPOA 9.48 93.68 96.84 97.89 100 97.89. GRUPOB 1.16 94.18 97.67 98.83 100 96.51. para establecerdiferenciasen cada se puedenaplicarmétodosestadísticos Ad¡cionalmente fecha,. ¡. L o s t r a b a j o s d e e f i c ¡ e n c i a e n c a m p o y e n l a b o r a t o r i o p u e d e n ¡ n c | u i f e nsino s u dentre iseñono5 grupospara compararuno o varioi ótp'ettot enfe sí y con un.grupocontrol de aplicación'Un i"1", ón""ntta"iones de un mismo compuestoo entre varios mÉtodos (1982) b ánteriorpueoeverseen el trabajodescritopor Hamelv col' ;ü;d;;. c u a n d o s e t r a b a j a c o n U n g r u p o c o n t r o | , | a f ó r m u | a d e R o u | g t o n y c o | (la 1 9empleada 68)esquizás ei catcutode eñcacla.Eyjstenen la ltteraturaalgunasvariablescomo de eficacrase deduce del coc¡entede los "pfü0" ü; D; ""y col (1982) "n ra crál ér porcentaje cifras ilustfan lo númefosde ganapatasen bovinostratados t no tratados-Las siguientes anteñor: DIA. t. 0 7 14. 21 28. PROMEDIODE GARRAPATAS No tratados Tratados qA 105 105 5 110 9. PORCENTAJE. YC.Z. 91.8. 82. 35. 30 5. 42. 21. o^. oo. /. 85 119. 94.1. 82.3. El calculode eficaciaparael día 7 sería: 1 0 5 - 1 O O %¡ = ( 5 X 1 0 0 ) / ( 1 0 5=)4 7 6 X 5-. I. % Eficacia= 10O- 4.76 = 95.2% 7t.

(4) t. fó¡mulade Roulstony col (1968)es la utilizadapor González Unavarianteen el empleode la 'd" (1989)quienajustael valorde así: de 5 gramosde ganapatasno tratadasparasacar - Determina el pesode huevosobten¡dos 2.18' un vaforestándar.EjemPlo" - Deteminael mismopesoen garapatastratadaspor cadadía Eiemplo: 1 8928' - Relaciona asli en términosde porcentale = (viabilidad) (1.89 83 86 10O)l 2.18= X 2.18 t0O X 1.89 X. t. sería: 100- 86.83= 13 11 La reducción quedandoen 54 y - Al númerode teleoginasobtenidas(ejemplo.64) le restael 13.1'lo/o utilizaestaúlt¡macifracomoel valorde "d". pierdenpesoporefecto tratadasy su oviposición La razónparael aiustees que lasgarrapatas del tóxico.. r. En estudiosde ganapatascon varios huéspedesno solo es necesariorealizarvarios un por mastiempo.Barrey col (1987)describen lasobseryaciones sinop=rolongar tfatamientos el cual infectadoscon Amblyommavariegatum,en en boünoénaturalmente experimento de uso de aorp"r"n tres métodosde aplicaciónde un acaricidacon la formarecomendada (15) díasde quince con En el diseñolos an¡malesrecibentres tratamientos otfo'compuesto. del los cualesse hacende machosy hembraSen tres sitios animal intervaloy los recuentos, (perine,u-brey vientre)se realizanen los días 1, 15,30, 42,49, y 58. Comoen otrosc¿lsoslas leproductivos' paraobtenerparámetros ñembrasson pesadase incubadas " STALL" ESTUDIOEN BOVINOSCONFINADOS. t. es mucho más precisoya que permiterecupefartodas las Este tipo de observaciones g"n"pát"t que caen de cada animal después del tratamiento.Para desanollarloses provistasde plso con contar con unidadesindividualesde confinam¡ento indispensable caídas,siendo teleoginas y de otropisoinferiorinclinadosobreel cualse lavanlas henciiduras en un cedazo,en un extremode la un¡dádrecuperadas AutOreSpero las Efsten variacionesmenoresen la metodologíausada por diVerSOS es a presentara Continuación tomadode varios El prccedimlento no SonCríticas. d¡ferenc¡as '1988a; Biondiy col' 1988;Roulstony col' 1968;stendely Fucks'1982; tt.o"¡ot. (cramery col y col,sin publ¡car). Daveyy col, 1984y Betancourt. - Adquieraun lote de temerosdestetos,no expuestospreüamentea garapatas (de zonas descritas por encimade 3.OOO metrossobreel n¡veldel mar)y alo¡élosen las un¡dades donde reciben ensilajeo pasto picado, concentrado,agua, y sal y son vermifugados' A|gunosemp|eanganadopreüamenteexpuestoagafTapatasperoestonogaran bu-enainfesiación.En este últ¡mocaso los animalesdeben ser bañadoscon un acaric¡da -. I.

(5) t. número de temeros antes del ensayo, para el¡m¡narcualquierinfestac¡ónque traigan El perctunos10 bovinoses adecuado' AápLnA"Aoe És unioadesdisponibles. t. Entre|osdias.30y.20detensayo(considerandoe|día0comoe|díaenqueseaplic con larvasde Boophilus microplus *',.'prárto a proOar)inicieuna réri"'de ¡nfestaciones cada dos días hasta táOoalos iemeros.La frecuenciade las infestacionesvaria desde de larvas a cantidad por La semana "n ,"t"n" pero la mas flecuentees tres veces ád" colocaren|ostemerostambiénvariamuchoen|osdiferentestfabajos,desde2'000h casoslas ¡nfestac¡ones ió.óóó, ,i"nao 2.000a 3.oooet númeromás común.En atgunos 40 pos tratamiento terminan en el d¡a -14 pero en otros continúan hasta el día conferidopof el (residualidad) protección s¡ se quiere'*no""t el períodode especialmente compuesto.. L o s d i a s - 3 , - 2 , y ' l d e l e n s a y o y d e a h í e n a d e l a n t e t o d o s l o s d í ade s ' r e c u p e r e ' cen uente pesetodasias ganapatas¿e ¿.s -'g mm que caigande todosy cadauno los temeros estudio. -3' -2' y -1' as¡gnepor pares' Conbaseen los númerosde ganapatascontadasen los días m¡tad al grupo control sin al azar, la mitad de tos anirñalesal grupo tratado y la otra tratamiento. a los animalesdel grupotratado En el día Oapl¡queel tratamiento. i. muestra Todoslos días en los cualesse colectanteleoginas'separeuna 9".incubar ?-0p:fp"t"' en las póngalas a peso' y su registre producido más) (o menos si no se han condicionesanotadas,durantedos semanas'. R e g i s t f e e | p e s o d e | o s h u e v o s o b t e n i d o s e n c a d a l o t e d epor hem b r a 25 s y cao30 | ó qdias. ue|esen otros para continuarincubando de fondo plano como v" iúl¿"ri¡io no es suficiente Algunosincubanuñ gramode huevoso menossi la producción . Determineel porcentajede eclosión (1968)en la forma . Calcutela eticaciadel compuestoapticandola fórmulade Roulstony col descrita.. a. antenormente' lR en la formaexpl¡cada calculando - Complemente la evaluación. D i f e r e n t e s a u t o r e s , p r e s e n t a n m o d ¡ f i c a c i o n e s d i v e r s a s a | a s pElemplo: r e s e n tCrarner a d a s . iv nicia. il;ñt;itis$Z,. reproducidos los parámetros rszoi paá estimar. el lR así : col (1968a)determ¡nan. lR=(pesotota|hembfttsco|ectadasporanima|Xpesohuevos/pesoteleog¡nasincuba d€ eclosión). Otrosautor€scomo Daveyy col (198a)est¡manel lR así: (peso huevos/peso hembras)(%eclosión) ¡ft = (# total ganapatasi#animal€spor grupo) (20.000). t.

(6) para obten€r un lR total y Luego se suman los lR diarioshasta el día 22 post tratamiento calcularefectividadasí :. I. control(%)=[(tota||Rcontro|.Tota||Rtratado)/(totallRcontro|)]100. .Sosa(1985)eva|úa|aefectividaddeuncompuestomntresparámetrosasí: a.E|porcentaiedereducc¡ónobtenidocon|afórmu|adeRoulstonyco|(1968). por Daveyy col (1984) (PC)cuyafórmulaes la mismapresentada b.Elcontrolparas¡tológico oaracontrolasí :. I. pg = ¡¡tlR Control- tlR tratado)/(tlR control)l. 100. c.Elefectoresidual(RE)el cualse tratarámásadelante adelantadopor Betancourty col (sin publicar)se empleóun En un estud¡orec¡entemente índices s¡mitaral descritoparaestet¡pode ensayosperose incluyenalgunos procedim¡ento asi : ad¡cionales (Ol)= pesode loshuevos Indicede oviposición. t. (ORl) - lndicede reducción de la ov¡pos¡c¡ón ORI = [( Ol confol - Ol tratado)I (Ol Control)]10O - Porcenta,ie de eclos¡Ón(Hl) Hl = (# úscaras X IOO)/ (# cáscaras+ # huevosinfért¡les) de eclosióñ(HRl) lndicede reducción ¡¡¡ = ¡(Hlcontrol Hl tratado)i(Hlcontrol)1100 (RPl) - Indicede potencialreproductivo huevosincubados)' OOOXpeso = incubadas)(Hyl00X2O RPI (Ol/#he;bras. t. (lRl) - Indicede inhibición de reproducción ¡p¡ = ¡(RPlcontrol- RPItratado)/(RPlcontrol)l100 - Eficaciaglobal(OE) - (sobrevivientes X lRl/100I = 169- i(sobrevivientes) OE 1o7o¡ RUEBAS" IN VITRO" a.. ,. i i. I. Inmers¡ón. para prueba.de eficaciacasi idénticoal que ¡¡irampuriy col (1gg1)describenun procedim¡ento de esta m¡sma quim¡ores¡stencia ;" ¿"i.¡¡L paü inmersiónde adultos en la seüciónde.

(7) del compuestoa probar y se Se emplean 5 teleoginas para cada concentración controlcon agua' iur"tgln en el productopor un minuto'Se incluyeun. I. Lasgafrapatasson¡ncubadasentubosindividualesysedeteÍmina|aoüposic muertas' hemtrasque no oüpos¡tanse cons¡deran. Conaná|isispfobitseca|cu|a|aLDsoYLDssYseestab|ece|areducciónenfecund usandota tórmutaÚé xnan y Srivastava(1977) Estafórmula..no ;;;;;;;t'i"tadas, estád¡sponib|eperoensudefectosepodíanemplear|asfórmu|asdescritas antenormenteParalR Y control.. ? b.. AplicacióntóPica rciónde las garrapatasal compuesto.químico muy proximas.a empleateleoginas cedim¡ento stribuidasen gruposde 25 hembraspor cada rrse incluyeun controlconagua. D e c a d a c o n c e n t r a c ¡ Ó n s e c o l o c a n S m ¡ c r o l i t r o s ' e m ¡ndiüduales p l e a n d o u nea m ¡ c r o p i ppara eta'en incubada a envasesplásticos cada ganapata,la cuat "r-ir"^t"¡d" determinaroviPosición ü. E|critefioparaeficaciaestádadopor|ainh¡bición-en.|aproduccióndehuevosenre|a a análisisProbit oe ingfeoiente;-civopor ganapata.Las cifrasse someten los microgramos c. Nota sobre garrapatasde varios huéspedes r con 20 hembrasy 20 machosde la especle s con bolsasde gasa adheridasa los animales y las hembrasque caen' unidadesindiüduales Itados,se cuentan,se pesany se colocanen para rhalus appendiculatusy 7 semanas ¡atum) para decir cuantasdepositanhuevos el op"ttndo el númerode hembrasfértilesen. I grupocontrory en er tratado. RE,SIOUALIDAO. V a r i o s a u t o r e s p r € s e n t a n e x p e r i m e n t o s e n | o s q l a l e sconferido i n c | u y e npor o b sun e rcompuesto vacionesso residualidado el período ¿lp-iot"*io" contra reinfestación por cramer y col (1988b)v Davevv col (19&4) despuésde apticado.er proiéoiri"nio ieguido es comosigue: en un grupo tratadoy - Un grupode tgmelos limpiosde garrapataes pesadoy distribuido un gruPocontrolsin fatamiento'.

(8) a. se desea En los animalesdel grupotratadose aplicael compuestocuya residualidad Drooar. los del grupocontrol) se infestantodoslos temeros(incluyendo Despuésdel tratamiento, con5.000farvasen losdías0, 3, 5,7, 12,14,17, 19,y 21. pesajey conteode teleoginas los días:21, 24, 26,28, 31, 33' 35' 38' Se reafizacolección, 40 y 42.. ü. Pa,:acadadía de colecciónse obtienenel promedioaritméticodel pesode las hembras grupos. de losdiferentes colectadas 'l a log de X + Y Los númerosde teleoginasobtenidaspor animal/diason transformados de vatianza. medianteanális¡s losdatosdiariosde cadagruposoncomparados menos En el ensayo realizadopor Cramery col (1988b),hubo s¡gnificativamente pero pos y luego tratamiento 28 garrapatas en losanimalestratadosen losdías21,24,26 persistenc¡a que o la Esto permitióasumir la diferenc¡ase hizo no significativa. probado,erade una semanaposttfatamiento. del compuesto res¡dual¡dad se tieneen cuentala aparicióno aumento de residualidad En generalen la determinación (Whartony col tratadosdespuésdeltratamiento del ñúmerode ganapatasen losanimales 1g7O).Parcel cálculocorespondiente,Sosa (1985) proponela fórmula:. ¡. Efectoresidual(ER¡=9¡t - ,t la primerateleogina. en que se desprende DondeDAT= día despuésdeltratam¡ento Whartony col (1970)proponennacel raspadosde los animalesen la tabla Adicionalmente segúnel tamaño,la edadde las larvasy n¡nfasque del cuelloy el flancoparaestablecer así : se encuentren. a. LARVAS edad {días) Lonsitud(mm) 0-1 0.39 0.48 52 0.68 0 e 0.71- 0.97 4-5 1.00-1.13. NINFAS edad (dlas). Longítud(mm) 0.65- 0.87 0 . 9 0- 1 . 0 3 1 . 0 6- ' 1 . 3 9 1 . 4 2- 1 . 8 7 > 'i .52. o- / o. v. 10 tt-. t¿. ESTRATEGICOS TR.ATAMIENTOS. I. de una especiede ganapatasse debe emplear Cuandose conocela d¡námicade poblac¡ón ese conoc¡m¡entopara el diseño de aplicac¡onesestratégicasde acaric¡das,buscando con la deben incluiruna comparac¡ón y economía.Los estudiosconespondientes ef¡c¡enc¡a que informac¡ón de usada en la regióny contemplarla obtención altemativatradicionalmente permitaestablecerel costode cadaestrategia.Un diseñopodríaser el siguiente:.

(9) ásf ./?. .T. .. Seleccioneun grupo un¡fome (edad, raza, sexo' etc.) de 40 o 50 bovinos' péselosy déjelosengarapataren fom.a naturul. as¡gnelos Cuentelasganapatasde 4.5 a 8 mmy de acuerdocon el n¡velde infestación uno. cada grupo (estratégico) an¡males y un de 20 B animalesa un grupoA (tradic¡onal) que los animalesqueden b¡en de acaricida(garantizando Inicie las apl¡caciones en la zona (ejemplo:ceda 21 acostumbrada grupo A, con la frecuencia bañados)en el días). empiecela ser¡e de aplicacionesestratégicasen el grupo B de s¡multáneamente, si los picosson en de ganapatasconocidos.Ejemplo: acuerdoconlostiposde población acancidascon pueden tratamientos 5 aplicar se MarzoiAbrily sept¡embr+octubre, intervalode 21 días en el primerpefiodoy otroscincoen el segundo.si se desea se puedeincluirun tercergrupocon otroesquemade tfatamiento'. *. a. a. a. .. o cada quinced¡as,conteode gafrapatas En todoslos animalesreallcesemanalmente estándaren lodoel cuerpo.. .. para reslizar cada mes se toma peso y se obtiene sangre con anticoagulante están an¡males los Si seguimientoal hematocritoy a la parasitemiacon hemoparás¡tos. de producción. se debenllevarregistros en lactancia. .. De cadaaplicaciónse debenllevarregistrossobrela cantidadde acaricidaempleadopor animal;tiempo empleadoen el tfatamiento,costo del mismo;valor del compuesto etc. de animales, en mov¡l¡zación costosde equ¡po;tiempoempleado utilizado;. '. El estudiodebetenerunaduraciónmínimade un (1) año.. .. parasitem¡as, se Los datosde númerosde ganapatas,gananciade peso,hematocrito, para debensom€teral análisisestadísticoadecuado(pruebade T u otro)en cada fecha, establecersignificanc¡a.. -. deben ser y los parámetrosproductivos Así mismolos datosde costosde aplicación correspondiente. al análisiseconóm¡co somet¡dos. petracc¡aC. y col. (1988)presentaun experimento detalladosobre controlestratégicode pour - on. Los estudiosecológicos flumetrina Booph¡lusmicroplusen Uruguay,empleando / año en los periodosJulio-Agosto preüoshabíanseñaladola ocunenciade tresgeneraciones y Enero-,4bril. Las metasdel trabaioeran:a) del inüemo)Octubre-Diciembre isobreüvientes puedan y sobreüviral invierno(paraesto huevos cuyas hembras r€ducirel númerode adultos primerageneraciónmediante de la formación la se hizo un tfatamientoen Marzo);b) impedir los tratam¡entosde Julioseptiembre y c) impedirel desaÍollo de la segunda generación mod¡anteun tratamientoa fin€s de Octubre.Para el estudio infestaronlos potreros con huelos, larvasy adultosde B. microplus y luegodejaroninfestar20 boünoslos cualesfueron asignadosa uflgrupo experim€ntalI (fumetrinapour - on) y a un grupotesttgosin tratam¡ento €n potr€ross€paradosperoigualmenteinfsstados 2 y pastoreados.

(10) I. y muestra Despuésdel tratamientose fealizóconteode teleoginas@da 21 días se tomó una y establecer incubación para a llevar de 20 de ellas (o menos si no habian sufic¡entes del oüposición y posteriormenteel porcentajede eclosión. La evaluaciónde la ef¡cacia (lR) y traiamientoie n¡ro mediante ei calculo-de parámetroscomo índice reproductivo j" e controlde ta eficaciareproductiva(PCONER)en la forma descritapor Drummond ñ;;;t y col (1967). PRUEBASDE QIMIORESISTENCIA de lo que realmentemidenes la susceptibilidad paraquimioresistenc¡a Las oruebasdiseñadas de un compuesto. o poblacióndadade un artrópodoa difetentesconcentraciones un" un controlcon agua también ""p" cual se incluyen en el Se trata de un ensayodosis-respuesta (concentración0)'Existentrespruebasparaelfinmencionadoasaber:. t. - Pruebade mortal¡dad larvaria(Shaw1966) - Pruebade mortalidadlarvariacon kits de FAO y col (1967'1970) - Pruebade inmersión de adultos(Drummond. t. prueDa En la opin¡óndel autor,lo ¡deales podefhaba¡aruna c9p9de ganapatastantocon una parámetrosmuy de mortalidadlarvariacomo con la ¡nmersiónde adultosya que miden complementa' se obten¡dacon ambas y la información diferentes DE LAS CONCENTRACIONES PREPARACION (en los cualesya Exceptocuandose empleala pruebade mortalidadlarvariacon kits de FAO del compuestorequeridas),es.necesario ,"".h- p"p"f". impregnadosón las concentraciones frescasde cadá compuesto,siendola mayorde ellas la pr"p"o, variasconcentraciones comercial, Pararealizarla Prueba.. t. podríaser 0.005;0.03, 0.1, 0.3 y I vecesla concentración una seriede concentraciones recomendadapore|pfoductor(concentracióncomerc¡al)'Estasconcentrac¡ diferentes pa¡tes por millón (ppm) de c€da su uso y de la cantidadde ual se recom¡enda a emplear' Eiemplo : en un compuestocomo 1 : 1.000contiene500 ppmde principioactivo' de cada el cuadro cte concentfactonesy la cantidad requeridapara trabaiar con 50 ml sería: concentrac¡ón. '| 85.

(11) Veces Diluc¡ón Concentraci Cantidadde producto para volumen ón 1en: conc, ppm de 50 ml . final comercial 1. 1.000. 500. 0.3. 3.333. 150. 0.1. 10.000. 0.03. 3.3333. 44. 0.005. 200.000. 2.5. 0.05 ml. 50 m¡crolitros 0.015 ml ó15 microlitros 5 0.005 ml ó microlitros 1.5 0.0015ml ó microlitros 0.00025ml ó 0.2s microlitros. El cálculode la cantidadde compuestorequeridopara un volumenfinal de 50 ml es como sigue: 1 0 0 0 m-I 1 m l X= (l X 50)/1000= 0.05 ml = 50 microlitros 50ml -X 5OOppm- 0.05ml X=(005 X 150)/500= 0.015ml = 15pl 150 -X Dada la clificultadde trabajarcon volúmenestan pequeñosse prepara una soluciónmadre En este al 1:100(99 ml de aguay I ml del compuestocomercial). (soluciónA) del compuesto quedaria : así cuadro 50 ml, el de para finales trabajarcon volúmenes caso, Dilución Concentraci Agua Veces ml ón len: conc. ppm comercial ,| 45 500 1000 48.5 150 1.333 0.3 49.5 50 10.000 0.1 ¿lE 3U 33.333 0.03 50 2.5 200.000 0.005. Producto diluido 1 /,100 5ml 1.5ml 0.5 ml 150rrl 25 ul. muy pequeñosse debehacer y 25 microlitros aun son volúmenes ComoO.5ml, 150micfolitros + (99 1 ml de solución de agua ml B una segundasoluciónmadreasí : Sotución. E6.

(12) A). El Cuadroentoncesquedaríaasí : Veces conc. comercial 1. 0,3 0.1 0.03 0.005. Agua Diluc¡ón Concentrac ten: ml pom '1.000 45 500 ml 3.333 150 48.5 ml tñ 10.000 45 ml aa eae 48.5 ml 15 2.5 49.75ml 200.000. SoluciónA. SoluciónB. 5ml 1.5ml 5ml 1.5 ml 0.25ml. Para conocercuantasppm t¡eneuna concentración determinada multiplicamos las ppm que porla fracc¡ónsiguiente. (ejemplos). contienela d¡lución comercial 500X 0.3= 150;500X 0,1=50:500X 0.03=15:500X 0.005= 2.5. cuyo empleose recomienda a una dilución1:2000,la situación En el caso de la flumetrina, seríacomos¡gue: 1.000ml del compuestocomercialcontienen60 gramosde princip¡oactivo(60 partespor 60 partesen un millón(60ppm).Perocomola 1.000).Si diluyéramos al 1 en 1 000tendríamos diluc¡ón es al 1 en 2.000,entoncessolotenemos30 ppm. Para conocerla dilucióna la cual quedanlas d¡ferentessolucionesdiüdo 2.000 (dilución queveníamosusandoasí: porla fraccióncorrespondiente comercial = 20.000;2.000/0.03 = 400.000. = 66.6666;2.000/0.005 2.000/0.3= 6.666;2.0O01O.1. El úlculo de las ppm en este caso sería multiplicandolas ppm de la concentrac¡ón recomendada 30 ppmporIa fracc¡ónconespondiente así : 3 0 X 0 . 3 = 9 p p m ;3 0 X 0 . 1= 3 p p m ;3 0 X 0 . 0 3 =0 . 9 p p m3; 0 X 0 . 0 0 5 = 0 . 1 p5 p m . de las concentraciones, en este casoes necesariopreparafuna soluciónA Parala obtención (1i100)y una soluciónB del compuesto comercialcomose explicóanter¡ormente, con lo cual quedaría el Cuadro así:. E7.

(13) Veces conc. Comercial. Dilución len:. 1 0.3. 2.000 6.666. 0.1. 20.000. Concentr. Cantidadde produc-topara volumen ppm de 50 ml. 9. Sin diluir Soluc¡ónB 0.025 ml 0.075 ml. 2.5 ml 0.75 ml. ó. 3. 0.025. 0.25 ml. ó. afl. ml. Solución A. 7,5 ml. 2.5 ml. 0.03. 66.666. 0.9. 0.00075ml. 0.075ml. ó. 0.05. 400.000. 0.15. 0.00012 ml. O.12ml. ó. 0.75 ml. o.12 ml. Losprocedimientos anteriores se puedenaplicara cualquiercompuesto, teniendoen cuentala para su uso y las ppm de principioact¡voque contienela dilucióna la cual se recomienda formulaciónen la cual se presentaal mercado. PRUEBADE INMERSION DEADULTOS t. '. Esta prueba permitemedir en qué grado un compuestoinhibe la reproducc¡ónde las gamapataseleuestas a é1.El proced¡miento a describirse basa principalmente en el desq-ito por Drummondy col (1970),con algunasmod¡f¡caciones por Benaüdesy col introducidas (1989)y por Betancourt(1992)y es como sigue -. Para la pruebase requi€ren20 teleoginaspor cada concentración(¡ncluyendoel control) de cadacompuestoa util¡zar;es decir 120teleoginaspor compuesto.. -. y se en vasosdesechables) Se pesan6 gruposde 10 teleog¡nas cadauno (depositadas registrael pesoen cadarec¡pientey en el librode laboratorioasignandoun grupoa cada concentración.. -. Se transfieren lasteleoginas de cadagrupoa canastillas confeccionadas con un pedazo de tubo de PVC (10 crns de largoX 1" de diámetro)con un fondo de anjeoplástico asegurado con unabandade caucho.. -. Las canastillas con lasteleoginasson sumerg¡das vasode üdrio, en su conespondiente conteniendo50 ml de la concentracióndel compuestoo de agua en el casodel control.. -. Pasados10 m¡nutosse reüranlas canastillasde los vasos,se escurren,se remuevenlas teleoginasy se secancon toallasde papelo servilletas.. -. Se adhierecada una de las 10 tsleoginasdo cada grupo,con su üentre haciaariba, a una cinta de enmascararde 1" de ancho,f¡jadacon el lado pegantehacia aniba, a un.

(14) rectángulode üdrio de 30 cms de largo por 15 de ancho. La parte anterior de la teleog¡nadebe quedarlibresobrela superficiede v¡drio. sobre el nombrede la cepa de ganapata'el El üdrio es rotuladocon la información (sies 1 o 2). y la replicac¡ón la concentración empleado, compuesto durante mencionadas, en las cond¡c¡ones El vidriocon la ganapatase llevaa incubación para que ver se conserveel 14 días.Es importantereüsarel ¡ncubadordiariamente ambientede humedadadecuado.En nuestrocasose mantieneuna bandejaen la parte con agua.Estastoallas toallasde papelhumedecidas conteniendo ¡nferior del incubador, para por de hongos. evitar el crecimiento semana se debencambiarmínimodosveces Pasados14 días se retiranlos üdnos con las garapatas,se anotacuántasganapatas y luegose reúnela posturade todoel grupo,se pesay de cadagrupode 10 ovipositaron dato. se anotael. Cadalotede huevosse depositaen un tubo de üdrio de fondoplanode 4.5 a 5 cmsde alto por 2.5 cms de diámetro.Los tubosse tapancon taponesde algodónfonadosen gasa, se rotulan (cepa, concentración, replicación,peso) y se llevan de nuevo a incubación. En climascálidosesta incubaciónpuedehacerseen bandejaslegumbreras La bandejase cubrecon otra en cuyofondose colocantoallasde papelhumedecidas. hojade papel.. paradetectarcuandoaparecenlas primeraslarvas, Lostubosse obseryand¡ariamente lo cualdebeocuniren otrasdos semanas.Se registra€stafechav se sigueincubando de eclosiónen cada por otros1Odías,despuésde los cualesse evalúael porcentaje tubo.. de eclos¡ón,algunosse basan en una estimación Para la evaluac¡óndel porcenta¡e üsual.En el CNI Palmira,sin embargo,se tomacadatubo y se saca,con una espátula, (despuésde revolverpara hemogenizar)una muestradel materialque cont¡enelarvas, La (infértiles) y cascarones(de los huevosque eclos¡onaron). huevosno eclosionados gotas mezcla y de una enc¡ma unas muestraes llevadaa una ca¡ade Petri se le coloca de alcoholy acetonaa partesigualespara matarlas larvasy separarlos huevoscon el bieny se observaal fin de que puedanser contados.La muestrade materialse revueh¡e y huevosinfértiles.Cuandoel total de estosdos contandocascarones estereoscopio, con la de eclosiÓn lleguemínimoa 200,se suspendeel conteoy se calculael porcentaje fórmulaya descritaen estem¡smotexto. antenoresse calculanvar¡osínd¡ceso Con los datos obten¡dosde las observaciones = peso teleoginas vaioresasí:IEC Pesohuevos/ 20.000 lR = IEC(% eclosión/100). (PCONER) reproductiva de controlde la efic¡encia se obt¡eneel porcentaje Finalmente paracadaconcentración, fórmula: usandola s¡guiente PCONER= [(lRControl- lR tratado)/(lR Control)] 100. E9.

(15) (replicaciones 1 y 2). Cuandose realizauna Todaslas pruebasse hacenpor dupl¡cado pruebacon una cepade campo,se incluyetambiénuna pruebacon una cepapatrónde referenc¡ala cual es susceptiblea diferentesacaricidas.Ejemplo:cepaYerongp¡lly. Siempreque se trabajacon ganapatasse deben tomar las precaucionesdel caso para sobre evitarel escapede larvas.Cadatuboque contienelaryases ab¡ertoy man¡pulado que y en una una caja de Petri contienealcohol acetooa,la cual a su vez se encuentr€¡ bandejacon solución detergente. PRUEBADE MORTALIDADLARVARIA. t a) "Emparedado"(Shaw,1966) causadoen una Como su nombrelo ind¡ca,esta pruebamide el porcentajede mortal¡dad prueba, poblaciónde larvas,por una concentración comoen el un La dada de compuesto. 1 y 2), clebeincluirun controlcon agua casoanterior,debeserhechaporduplicado(versiones El y debe tambiénpoderser comparadacon la realizadacon una cepa patrónsusceptible. procedimiento es comosigue -. Preparelas concentraciones del compuestoa utilizar,en vasos de üdrio debidamente rotulados en cant¡dades de 50 ml.. -. larvasde 10 a 12 días de edad de la cepa a probary Destapeun tubo conteniendo deposite,con un toquedel tapón una cant¡dadde larvassobreun c¡rculode papelde f¡ltroWhatmannúmero1 o 2 de 9 cmsde diámetro.. -. Tomecon una pipetaI ml de la concentracióna probar(primerose trabajacon el control inferiores hastallegara la mas alta)y coloque conaguay luegoconlas concentraciones previamente rotulada. 3 ml en una caiade Petride 10 cmsde diámetro,. -. Depositeencima el papel de filtro con las larvas y luego agregue otros 3 ml de la soluciónacaricida.. -. Cubralas larvascon otro circulode papelde filtroy üerta sobreeste últimolos 3 ml y trabajarde la menora mayorconcentración restantesde la solución.Es ¡mportante una se debe desiinar Además pipeta compuesto. de cada entre réplica cada cambiar pipetaexclus¡vamente al control(agua).. -. Cubrala cajade Petricon su tapa y coloqueel reloje medir10 minutos.Mientrastanto hac¡endo la oruebacon las demásconcentrac¡ones. cont¡núe. -. Pasadoslos 10 m¡nutosretirede la caja de Petri el "emparedado"y separelos papeles tambiénde papelde filtrosecosy sobreunoscuadrados de filtroy séquelosvolteándolos cubriéndoloscon otroscuadradosiguales.. -. 'sobre" con ayuda de un pincelpelo de marta bafra las laNas hacia el fondo de un confeccionado doblandoen 4 un círculode papelde filtrode 9 cmsde diámetro'.

(16) I. (pre^silla) de los empleadospara tabla de Selte el sobre con un gancho de presión 36 horas' áápo, rotUletoy lléveloá incubaciónpor24 a Abra el sobre,empezandopor el control,so. rsivohaciaafuera.. t. fórmula: se empleala sigu¡ente en cadaconcentración' Parael cálculode mortalidad v¡vas+ larvasmuenas' (7o)= ¡¿t"t muerias/laryas Mortalidad de mortalidaden los controles'deben ser Aquellaspruebasque anojanmas de 100/o reoetidas.Pruebasconmas¿esyo¿emorta|¡dad,preferib|ementeserepitenoa| descritaen FAo ajustadoscon la fórmulade conecciónde Abbot ffJ;;.6;;;t (s.f)así :. Morta|idadcoregida(%)=[(%morta|idaden|aprueba.o/omorta|idadencont % mortalidaden control)l100 los datos a papellog/probitcolocando Se puedenconstru¡rcurvasde mortal¡dadllevando de i"g"iiñi." (hofizontal)y la mortalidaden la escala ta concentración ," "r".já "n probabilidad(vertical). ü. Una mortalidadde 100% en las concen' Ninguna o muy baja mortal¡dada conc( resiitencia (R). Un rango de mortalidadÉ conceñtracioñesadyacentes,indica una P susceptibles.La proporciónestimadade re en la parteplanade la curva' sobrevivientas b. Kits ¡le FAO. a : s¡guientes Compuesto Dieldrin Coumaptt9e Dioxathion. Diazinon C¡9€rmetnQq Amibaz ?. I. éo N¡ce ur¡¡cls f\l_l%)0.1 0.1. 0.2. 0,05 0 . 1. o.2. 0.2. o.2. 0.05 0.1 0.4. 0.4 0.4 0.4 0.4 0.8. 0.8 0.8 0.8 0.8. 1.e 1.6 1.6 3.2. 9l.

(17) t. B4 )' t3 de todos los tipos de s€ consideraque los compuestosinclu¡dosacfúan como indicadores a lindanoy toxafeno' resistencia Dieldrines usado como indicadorde rra¡ri""áá prueba básicamentese kit contiene instruccion€sdetalladaspara su uso, la Á-""q""-ál """bcidos. desarollaasí :. -obtengaunamueshade30a50te|eoginasdeunaso|afincaeincúbe|asparaobten un buennúmerode laruasde 7 a 21 días de edad' .Doblee|pape|impregnadoconacaricida(primerosetrabajae|pape|contro|cona a los ladosel clipplásticoproüsto,haciendoasí un sobrecon J" áñ"á'"J"1 V OáSióelá su extremosuPeriorabierto. .. Coloqueel papelen un soporte,tamb¡enprovistoen el clip'. -. .Tomeunap¡nceladade|arvas(mínimo10o)de|tubodecu|t¡Voydéje|acaerene|i del sobreprocurandono tocarel papel'. t. .Remuevaelsobreyco|oqueuntercerclipene|bordesuperiorpalaSel|af|o.Enelc deAmitraz,|ossobrescon|asdiferentesconcentracionesSondepositadosenun con c¡ntaadhesivao bandasde caucho' ptátt¡o ""il"O" -|ncube|ossobresa|ascondicionesmencionadasdurante24horas(enelcasooe amitraz48 horas)' üvas y muertaspara obtener Abra el papel o sobr€con las larvasy realiceel conteode el porc€ntajede mortalidad. )n y los factoresde coneccióndescritospara la es posible estecaso.A manerade información' tal ntraclonesdeseadasdel acaricida' como lo. EVALUACÉN DE VACUNASCONTRAGARRAPATAS. t. y la posible en et paísde la vacunacubanacontraganapata(GAVAC) con la comerclalización que evalúen su de tá versiónAústratiana,ha sido necesariodiseñar estudios ;;il;ü confinados Los diseños efectiüdad tanto en condicionesde campo como-9n animales (Australia)' siguientesfueronprovistospor Hungerford(1995)de Biotec a) Pruebade camPo. l. -. ",:i. I. novillos o vacas) Bos taurus puros o cruzados' -mon¡iorean Un total de 40 bovinos (novillas, '4 -3 del med¡anteconteo en las somanas y natuElmentelnfestados,ü garrapatas, a animalesde alta,med¡ay baia res¡stencia p"- clasificaflos'entfe "riroi" Los animaless€ asignana dos gruposcl( adeciladamenteÉpFs€ntadas en cada grupoA s'ed€nominavacunadosy el grul.

(18) t. en 4lotes los cualesse designanA1, A2, 81 se diüdeun potfefode 20 o 30 hectáreas y 82. Losanimales con su letra de cada grupopastaranen formaaltemaen los dos potferosdesignados de un mes' (ejemplo: losdel grupoA en los potrerosA1 y A2)con periodosde ocupac¡ón esquema: al siguiente Losanimalesdel grupoA son sometidos Semana. t. ACTIVIDAD + acancida Primeravacunación Aolicaciónde acancida. o. 16-18. t. Segundavacunación(primer booster).Más acaricidasi > de 10 o preadultos. qafrapatas >4.5mm por animalo muchosinmaduros Terceravacunación(Segtundobooster).Más acaricidas¡ se dan las descritas. anteriormente condiciones. -. Los animalesdel grupo B se bañan con acaricidaen la forma y la frecuenc¡a (ejemplo: cada21 días)' en la explotac¡ón. acostumbradas. -. En todoslos animalesse cuentancada mes las ganapatasde 4 mm presentesen el lado izqu¡erdoal mismotiempo se reg¡strael peso, la condicióny cualqu¡eranomalíay enfermedad.observadas.. -. en las semanas0, A todoslos animalesse les toma 10 ml de sangresin anticoagulante de ant¡cuerpos 6, 10,y 16- 18 delestudiocon el fin de obtenersueroparadeterminación prueba la de ELISA. mediante. -. Las observacionesse realizan hasta la semana 35 El efecto del programa de en el uso de acaricida,se midecon baseen el númerode bañosahonados vacunación, el cualse obtieneasí :. - # de bañosen vacunados. Totalbañosahonados= # de bañosen controles tambiénel númerode bañosahoradosporboosterasi : Se puedecalcular. t. # de boosters Bañosahonadosporbooster= # de bañosahorr¿dos/ El efecto del programade vacunaciónsobreel controlde las ganapatasse basa en la reducción delnúmerode las m¡smasen los dosúltimosmesesdel ensayoasi: Reducciónen gaÍapatas (o/o)= [( Promedioen controles- promedioen vacunados)/(promedio 100 en controles)l b) Pruebacon animalesconf¡nados Se obüenen10 temeros mestizo holstein o normandono expuestospreüamentea garrapatasy se confinan en unidadesindiüdualesen las condicionesanteriomente descritas. 93. {. I.

(19) o. al grupo B (controlsin Se¡stemerosse asignanal grupoA (vacunados)y los 4 restantes vacunación).. E n | o s d í a s 0 y 2 8 | o s a n i m a | e s d e | g r u p o A s o n V a c u n a d o s ( 2 m grupo |/an¡m |SQ)yse B)a para a todos ellos (incluyendoel ór" r O ml dé sangresin anticoagúlante examenserológico Postenor. paraminimizarposiblesreacciones de ¡midocarb Dipropionato En el dia 40 se adm¡nlstra debidasa hemoParásitos.. Ene|día42sesangfannuevamentetodos|o5an¡ma|esysein¡cialainfestació (en|osgruposAyB)conaproximadamentel.000|arvasporanima|hastae|día estudio. que caigande cadauno garrapatas En el dia 61 se iniciala coleccióndiariade todaslas de los temeroshastael día67 del expenmento. t. de todos los animales En los días 63 y 68 del ensayose toma sangrenuevamente despuésde lo cualsonl¡berados de cadaanimal(entrelos Cadadía,y en formaseparadaparalas ganapatascolectadas : actividades las s¡guientes días61 y 67)serealizan. t. las ganapatasserÉ En el dia de la colecc¡ón,. n al azat50 o más garrapatas"nofnales" Los mismosdías (de colección)se seleccionará 80 a 90% de ." pLr"n 1p"to=w"J v se incubana 28oCde temperaturav ¿;;i;;=C; "dañadas''en un recipientey se humedadrelativa.se cotocarániooas las ganapatas incubarán.. ¡. E n e l d í a 1 4 p o s t . c o | e c c i Ó n s e s e p a r a r á n | o s h - u e v o s dEn e p{a o smisma i t a d o sforma (peso se= E W colocados nuevamenteen incubációnen la forma descrita pesarán(peso= Ew¿), se seoarafánlos huevoso"porii"ios Ñ tastarrapatasdañadas, en incubación' y se colocaránnuevamente por las se separaránlos-huevos sanos depositados En el día 21 post-colección 'normales" pá."ian tEH";en igualformase procederácon los huevosde v," oanagatas (EH¿). "dañadas" éanabatas comodañadaspor la vacunas¡ tienenal menosuna Las garapatasseránconsideradas de las sigu¡entescaracter¡stlcas: roio oscufoo negro)'en pafte 1. coloraciónroi¡za(puedevariardesde anaranjadohasta del cuerpoY Patasenrojecidasó.

(20) c. todo 2) Coloraciónroi¡za(puedeyafiaf desde anaranjadohastarojo oscuroo negro)en el cuerpoó. 3)co|oraciónrqizaoanaraniladaenpartede|cuerpohinchado(surcosdors menosdel 337ode la longituddel cuero)ó hinchado(surcosdorsalesno presentes;forma de friiol 4) Cuerpo marcadamente gelatinoso) In ütro de las garapatas el efectode la vacunael potencialreproductivo Paradeterm¡nar cálculos: se haránoaracadaan¡malen cadadía,los siguientes. t. W" i C" = Tn Pesopromediode garapatasnormales= = Pesopromediode ganapatasnormalesincubadas= W'i / C"i f i = Rn¡ = Tn / Tn, de pesonórmala incubadas Relación = EHn" normales(aiustado)= EHnX R"¡ Huevossanosde garrapatas EHd+ [ EH".X (C"i C") ] = fl, Totalhuevossanos(Ajustado)= Paracadaan¡mal,calcularla cantidadde huevossanos: Sum(Hde cadadia) = f¡,' Cantidadtotalde huevossanos(ajustado) de la cantidadtotalde huevossanos: paracadaqrupo,calcularla mediageométrica. I. de cada Mediageométricade huevossanosen controles= 1O^ (promedio(logroTHt THC". temerocontrol))= Media geométricade huevossanos en vacunados= 10^ (promedio(loglsTHtde cada = THV'" temerovacunado)). Para el experimentq,calcular el porcentaiede reducciónen potenc¡alreproductivo debidoa la vacunaasí: = 100X (THC' - THV.) /THcEfectode la vacuna(%). a. de éste efecto se confirmaráempleandola prueba de "T. student' La significancia (togroÍHd a partirde losdatosde cadaanimal.Se usarála pruebade una solavia ya que se esperaque la vacunareduzcael THr. son: del experimento OtrospaÉmetrosa usary que ayudaránen la interpretac¡ón Porcentaiede garrapatasdañadaspor la vacuna= Promedio(Sum(Ca)/ Sum(C"+ Cd)) promediode la masade ganapatas= Promedio(sum(sum w" + wd) / sum (c" + cd)) + Promediode huevospor garrapata= Promedio(Sum(Hr)/Sum(C" Ct)). 4^¡ {j. i. I. l_. 95.

(21) t ,P r o m e d i o d e | a r e | a c i ó n d e c o n v e r s i ó n d e h u e v o s = P r o m e d i o ( S u m ( H t ) / S u m ( W " + Wd)). DE HUESPEOES ESTUDIOSPARAESTABLECERRESISTENCIA métodocle istentesa la ganapataes un reconocido. i:'#li:¡iJ:i#51:x'""""13,3 (1978)'. T. desPuésde lo c bañodel acaricida)' -. I -. I. glupo 4 . o 5 animales cada uno Cada grupos de varios conformar pueden Se se deseaconocer' conespondea ulra razao crucecuyares¡stenciay se puedenhacer2 o 3 infestaciones Los animalesson intestádáscon áo'ooolarvas de 15 días' conintervalos y hastael día 35 de la misma' a partirdel día 18 despuésde la infestación Diariamente, se cuentany se pesan' tas teteogináslue caende cadaanimal' se colecitan toma una muestr:lde 50 teleoginas y De la colectadiariade garrapatasde cada?lifn"l:: paraincubacióny posteriorevaluaciónde su oüposición (o menoss¡ no hay procedimientos "tliüni!¡ Las ciffas son comparadasmediante o$os palámetro, ,"püu"iío''. conientes' estadísticos de,huéspedes) I para el mismofin (resistenc¡a el conteo de en basa se c¡Ónen ""to infestadoen "it" ganado fue que el B a 22 después DEL MANEJOINTEGRADO EVALUACION. pata Produciruna Progeniefértit'.

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