Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C.

Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C.

Unidad Mazatlán en Acuicultura y Manejo Ambiental

Diagnóstico sanitario de virus en camarón blanco

(Litopenaeus vannamei) silvestre en sistemas costeros de la zona Centro-Norte del Estado de Sinaloa

Informe técnico

en cumplimiento del convenio específico celebrado entre el centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo (CIAD) y El Centro de Manejo de Recursos Costeros del Estado de Sinaloa (CEMARCOSIN) el 21 de mayo de 2012

Responsable: Dra. Silvia Alejandra García Gasca Técnico analista: MC Rubí Hernández Cornejo

Agosto 2012

Antecedentes

El Plan Estatal de Desarrollo Proyecto 2011 - 2016 del Gobierno Constitucional del Estado de Sinaloa, en el Eje Tres, sección 3-d, Nuevo Impulso a la Pesca y Acuacultura establece como objetivo posicionar a Sinaloa como primer lugar a nivel nacional en volumen y valor de la producción pesquera, estableciendo la normatividad necesaria para ordenar integralmente al sector. En dicho apartado se contempla impulsar la reconversión productiva e innovación tecnológica en la pesca y acuacultura mediante la repoblación en bahías, esteros y embalses de semillas, larvas y alevines, con la finalidad de incrementar la reproducción de las diferentes especies.

El 16 de mayo de 2011, la Subsecretaría de Pesca del Gobierno del Estado de Sinaloa convocó a representantes del Comité Estatal de Sanidad Acuícola de Sinaloa (CESASIN), de la Asociación Nacional de Productores de Larva de Camarón, A.C. (ANPLAC), de la Federación de Sociedades Cooperativas del Centro de Sinaloa, de la Federación de Cooperativas del Norte de Sinaloa y Sur de Sonora, entre otros, para abordar la temática relacionada con el repoblamiento de camarón con la finalidad de incrementar la población de reproductores y larva en bahías y esteros como apoyo a las pesquerías en el Estado de Sinaloa. Derivado de diversas reuniones convocadas por la Subsecretaría de Pesca para abordar dicho tema, el CESASIN propuso, como una acción previa, llevar a cabo un diagnóstico sanitario de poblaciones de camarón silvestre en los ecosistemas donde se pretende realizar el repoblamiento, en virtud de evaluar la conveniencia de obtener reproductores y/o sembrar organismos en sitios que no impliquen un riesgo potencial de transmisión y dispersión de enfermedades, sobre todo virales.

El 30 de junio de 2011 la Directora de Desarrollo Pesquero de la Subsecretaría de Pesca, dependiente de la Secretaría de Agricultura, Ganadería y Pesca del Gobierno del Estado de Sinaloa, Ocean. Marben Lucía Miranda Osuna, contactó a la Dra. Silvia Alejandra García Gasca, investigadora del CIAD para solicitar su participación en el proyecto de repoblamiento de camarón blanco en la región centro-norte de Sinaloa. El 18 de julio de 2011 se realizó una reunión en las instalaciones del CIAD en Mazatlán, misma a la que asistieron personal de la Subsecretaria de Pesca y del CEMARCOSIN, del CESASIN, del Centro Regional de Investigación Pesquera (CRIP-INAPESCA), de la ANPLAC, A.C. y de Comisión Nacional de Acuacultura y Pesca (CONAPESCA), para presentar, analizar y debatir dicha parte del proyecto. Personal asistente del CESASIN reiteró la propuesta de que previo a las acciones de siembra o liberación de organismos se lleve a cabo un análisis sanitario de los camarones silvestres de los sitios donde se pretende repoblar. Se acordó que el estudio se realizará por parte del CIAD bajo la responsabilidad de la Dra. Silvia Alejandra García Gasca.

En seguimiento al acuerdo tomado en la reunión del 18 de julio, CEMARCOSIN entregó el 1º de noviembre de 2011 en las instalaciones del CIAD Mazatlán, 700 muestras de camarones (Litopenaeus vannamei) silvestres colectados entre el 24 y el 28 de octubre de 2011, provenientes de cinco sistemas costeros de la zona centro-norte de Sinaloa (Fig.1).

La relación de las muestras fue la siguiente:

• 150 pares de pleópodos recolectados el 24 de octubre de 2011 en Ensenada del Pabellón (75 pares de la zona frente a Altata y 75 de la zona frente a Aguamitas.

Cabe mencionar que estas muestras no estaban etiquetadas por zona (es decir, no estaban numeradas) por tanto se procesaron sólo como “Pabellón”).

• 150 pares de pleópodos recolectados el 25 de octubre de 2011 en Bahía Santa María (75 pares de la zona frente a la Reforma (1-75) y 75 de la zona frente a Yameto (76-150), estas muestras si estaban numeradas).

• 150 pares de pleópodos recolectados el 26 de octubre de 2011 en Bahía Navachiste (75 pares de la zona frente a Huitussi (1-75) y 75 de la zona frente a San Ignacio (76-150), estas muestras si estaban numeradas).

• 150 pares de pleópodos recolectados el 27 de octubre de 2011 en Bahía Jitzamury (75 pares de la zona frente las Banderas (1-75) y 75 de la zona frente Agiabampo (76-150), estas muestras si estaban numeradas).

• 100 pares de pleópodos recolectados el 28 de octubre de 2011 en Bahía del Colorado (50 pares de la zona frente a la Boca (1-50) y 50 de la zona del Estero Criadero (51-100), estas muestras si estaban numeradas).

Las muestras se encontraban preservadas por pares en etanol, mismas que fueron

almacenadas en refrigeración en espera de la firma del convenio (la cual se efectuó el 21

de mayo de 2012) y del depósito del pago acordado, el cual fue recibido el 23 de mayo de

2012. De inmediato se procedió a la cotización y compra de los reactivos necesarios para

llevar a cabo el estudio, los reactivos fueron recibidos el 21 de junio de 2012, fecha en la

que se inició el procesamiento de las muestras. Los virus a detectar fueron: virus de la

mancha blanca (WSSV), virus de la necrosis hematopoyética infecciosa (IHHNV), virus de

Taura (TSV), virus de cabeza amarilla (YHV) y virus de la mionecrosis infecciosa (IMNV).

Figura 1. Sistemas lagunares de la zona centro-norte de Sinaloa en los cuales se colectó camarón

blanco para el presente estudio, de sur a norte: Ensenada del Pabellón, Bahía Santa María, Bahía

Navachiste, Bahía del Colorado y Bahía Jitzamury

Metodología

Cada par de pleópodos fue separado en dos tubos de 1.5 mL, un pleópodo de cada individuo fue destinado para la extracción de ADN (detección de WSSV e IHHNV) y el otro para la extracción de ARN (detección de TSV, YHV e IMNV) formando “pooles” de cinco pleópodos por tubo.

Las extracciones de ácidos nucleicos (ADN y ARN) y las reacciones de PCR para diagnóstico molecular se llevaron a cabo utilizando los sistemas de detección IQ2000

, de acuerdo a las instrucciones del fabricante (GeneReach Biotechnology Corp). La elección del sistema de detección se basó en el nivel de confianza que ha demostrado y que incluso cuenta con recomendación de la Organización Mundial para la Salud Animal (OIE).

Los productos de amplificación por PCR fueron separados en geles de agarosa al 2%, teñido con GelRed, visualizados con luz UV y documentados con cámara digital para su análisis.

La prevalencia (%) estimada para cada virus en cada bahía (y en cada zona) fue calculada dividiendo el numero de muestras positivas (en pooles de cinco individuos) entre el numero total de muestras x 100.

Resultados

Los resultados aquí presentados muestran la prevalencia de cada virus en camarones silvestres colectados en cada una de las zonas y fechas mencionadas utilizando el método de PCR descrito.

WSSV

El método empleado en el presente estudio detectó prevalencia alta de WSSV en la zona centro del Estado, siendo Ensenada del Pabellón la bahía con mayor prevalencia (96.7%), seguida por Bahía Santa María con 93.3% (Fig. 2). La zona norte del Estado, en la cual se encuentran las bahías de Navachiste, Colorado y Jitzamury presentaron una baja prevalencia, desde no detectado en Navachiste y Jitzamury, hasta 10% en Colorado (Fig.

2). Cabe mencionar que dentro de Bahía del Colorado, el virus se detectó únicamente en

el área del Estero Criadero con una prevalencia del 20%, mientras que en la Boca no fue

detectado (Fig. 3).

Figura 2. Prevalencia de WSSV en cinco Bahías del estado de Sinaloa (24-28 Octubre de 2011)

Figura 3. Prevalencia de WSSV en diferentes zonas de muestreo dentro de cada una de las cinco

Bahías del estado de Sinaloa (24-28 Octubre de 2011)

IHHNV

El método empleado en el presente estudio detectó prevalencia muy alta (>95%) de IHHNV en toda la zona de estudio, lo que sugiere que este virus ya se encuentra establecido en camarón blanco silvestre en los sistemas costeros del centro y norte de Sinaloa (Figs. 4 y 5).

Figura 4. Prevalencia de IHHNV en cinco Bahías del estado de Sinaloa (24-28 Octubre de 2011)

Figura 5. Prevalencia de IHHNV en diferentes zonas de muestreo dentro de cada una de las cinco

Bahías del estado de Sinaloa (24-28 Octubre de 2011)

TSV, YHV, IMNV

El método empleado en el presente estudio no detectó TSV, YHV ni IMNV en la zona de estudio, lo que indica que, al menos en la época del año en que se realizó la colecta, estos virus no se encontraban infectando al camarón blanco silvestre en los sistemas costeros del centro y norte de Sinaloa o que su prevalencia y nivel de infección fue muy bajo (no detectable). Cabe mencionar que YHV e IMNV no han sido detectados en esta zona.

Discusión

Las enfermedades virales en camarones peneidos pueden impactar económicamente al sector camaronícola. Históricamente, los virus han sido diseminados a diferentes países e incluso entre diferentes continentes, debido principalmente al transporte de organismos vivos sin las medidas de bioseguridad adecuadas. Esta situación ha costado billones de dólares a la industria del camarón a nivel mundial.

En una revisión exhaustiva llevada a cabo por el Dr. D.V. Lightner (2011), se describen con detalle las características de cada agente viral que afecta al camarón, así como su distribución geográfica y métodos de diagnóstico. Brevemente, el virus de la necrosis hematopoyética infecciosa (IHHNV) fue inicialmente descubierto en Hawaii en 1981 y distribuido ampliamente en el continente Americano. La introducción de este virus en el noroeste de México ocurrió a fines de los 80s y principios de los 90s causando mortalidad en el camarón azul y enanismo en el camarón blanco. IHHNV fue responsable del cierre comercial temporal de la pesquería de camarón en México por varios años, sin embargo, ahora es común encontrarlo tanto en camarón cultivado como silvestre a lo largo de la costa del Pacífico desde México hasta Perú (Lightner, 1996). Este virus fue detectado en el presente estudio con una prevalencia alta (>95%) en las bahías analizadas, tanto en la zona centro como en la zona norte del estado, lo cual sugiere que IHHNV ya esta establecido en las poblaciones silvestres.

El síndrome de Taura se detectó en 1991 en Ecuador, sin embargo el agente causal fue reconocido en camarón blanco hasta 1992 y confirmado como agente viral (TSV) en 1994.

En sus inicios el virus de Taura causó mortalidades entre 40 y 90% de camarón cultivado, sin embargo hubo camarones sobrevivientes, los cuales fueron resistentes al virus. TSV ha sido reportado en poblaciones silvestres de camarón blanco desde 1993 en Ecuador y desde 1994 en otros países latinoamericanos incluyendo México. Los efectos de TSV en la pesquería de camarón no están bien documentados (Lightner & Redman, 1998) y de acuerdo a Brock (1997), la infección por TSV en camarón silvestre parece ser subclínica, lo que indica que este agente viral no ha tenido un impacto significativo en poblaciones silvestres. Los resultados del presente estudio muestran que TSV no se encuentra presente en camarón blanco silvestre de la zona centro-norte de Sinaloa, al menos en la época del año en que se llevó a cabo el muestreo o bien, que su tasa de replicación es baja o nula, por tanto no fue detectado.

El virus de cabeza amarilla (YHV) fue identificado por primera vez en Tailandia en 1991

provocando mortalidades en Penaeus monodon. Existen algunos reportes de la presencia

de YHV en el continente Americano, sin embargo parece tratarse de una variante no

virulenta la cual no ha sido completamente confirmada. Se sabe que YHV se encuentra en camarones silvestres pero no hay suficientes estudios sobre sus efectos en estas poblaciones. Al igual que TSV, YHV no se detectó en el muestreo realizado, al menos en la época del año en que se llevó a cabo el estudio.

El virus de la mionecrosis infecciosa (IMNV) fue inicialmente detectado en 2004 en el noreste de Brasil causando pérdidas millonarias. Debido a la importancia del camarón cultivado en el continente americano (incluyendo México), este virus se añadió a la lista de NACA/FAO/OIE en enero de 2006, por lo que debe ser monitoreado. Los resultados del presente estudio no indican que IMNV se encuentre presente en camarón blanco silvestre de la zona centro-norte de Sinaloa, al menos en la época del año en que se llevó a cabo el muestreo y con el nivel de confianza utilizado.

Finalmente, el virus de la mancha blanca (WSSV) infecta una gran variedad de crustáceos decápodos y es potencialmente letal para camarón. WSSV fue inicialmente detectado en Asia en 1992-1993 y distribuido alrededor del mundo con rapidez. En 1999 se detectó por primera vez en la región noroeste de México, y éste ha sido el patógeno que más ha impactado económicamente a la mayoría de las granjas de camarón, ya que ha llegado a causar hasta el 100% de mortalidad acumulada dentro de los dos a diez días posteriores a la aparición de signos de la enfermedad. Se ha observado que la temperatura influye de manera significativa en la aparición y desarrollo de la enfermedad. Se ha comprobado que temperaturas entre 26-30°C favorecen la replicación viral y por tanto el desarrollo de la enfermedad, sin embargo, temperaturas superiores a 32°C no favorecen la replicación del virus (Guan et al., 2003; Rahman et al., 2006; You et al., 2010). Se sabe que WSSV esta presente en poblaciones silvestres de camarón blanco (así como en otras especies de peneidos y en otros crustáceos), sin embargo sus efectos en estas poblaciones no están bien documentados. En el presente estudio, WSSV fue detectado en la zona centro del Estado (Ensenada del Pabellón y Bahía Santa María) con prevalencias altas (>90%), mientras que en la zona norte (Bahía Navachiste, Bahía del Colorado y Bahía Jitzamuri) sólo se detectó en el Estero Criadero de la Bahía del Colorado con prevalencia relativamente baja (20%) si se compara con la zona centro.

La presencia de WSSV en la población sujeta de estudio puede deberse a la alta influencia

que la actividad camaronícola, principalmente la camaronicultura, tiene sobre los sistemas

lagunares y en particular sobre la fauna carcinológica presente. La prevalencia y

persistencia de los patógenos virales en cuestión está determinada por diversos factores

(entre ellos la temperatura del agua) que obligan a la realización de estudios

epidemiológicos más completos con los cuales sea posible determinar el sitio, la época y

las condiciones más adecuadas que favorezcan un repoblamiento exitoso.

Conclusiones y Recomendaciones

Con base a los resultados obtenidos en materia de sanidad acuícola y a reserva de incorporar el análisis de diversidad genética, la primera recomendación sería, como ya se mencionó, realizar un estudio epidemiológico más completo, que determine prevalencias estacionales de agentes virales (sobre todo WSSV durante toda la temporada de camarón blanco en la zona de estudio) y se registre al mismo tiempo la temperatura del agua, para que sea posible determinar con mayor precisión el sitio, la época y las condiciones más adecuadas para el repoblamiento.

A falta de un estudio más completo y con base en los datos presentados en el presente trabajo, no se recomienda utilizar camarón blanco de la zona centro de Sinaloa (Ensenada del Pabellón y Bahía Santa María) para fines de repoblamiento, pues estos camarones se encuentran fuertemente infectados tanto por WSSV como por IHHNV. El camarón blanco de Bahía Navachiste, Bahía Jitzamuri y el área de la Boca de Bahía del Colorado si puede ser utilizado para repoblamiento, ya que a pesar de las altas prevalencias detectadas para IHHNV, no se detectó WSSV (al menos en la época del año en que se colectaron las muestras). Se recomienda que los esfuerzos de repoblamiento se limiten a esta zona (desde Navachiste hasta Jitzamury, evitando el Estero Criadero), ya que existe el riesgo de que este camarón sea susceptible a mancha blanca y no sobreviva si se siembra en Ensenada del Pabellón o en Bahía Santa María.

Se recomienda también que la obtención de reproductores en la zona norte se lleve a cabo en la misma época del año en que se realizó este trabajo (octubre), pues no se cuenta con datos suficientes sobre prevalencias virales en camarones silvestres de la zona centro-norte de Sinaloa en otras épocas del año.

Referencias

Brock, J.A. 1997. Taura Syndrome, a disease important to shrimp farms in the Americas. World Journal of Microbiology and Biotechnology, 13: 415-418.

Guan, Y., Yu Z. y Li C. 2003. The effects of temperature on white spot syndrome infections in Marsupenaeus japonicus. J. Invert. Pathol., 83:257-260.

Lightner, D.V. 2011. Virus diseases of farmed shrimp in the Western Hemisphere (the Americas): A review. Journal of Invertebrate Pathology, 106:110–130.

Lightner D.V. 1996. A handbook of shrimp pathology and diagnostic procedures for diseases of cultured penaeid shrimp. J. World Aquacult Soc. Baton Rouge, Lousiana, USA.

Lightner, D.V., Redman, R.M. 1998. Shrimp diseases and current diagnostic methods. Aquaculture, 164: 201-220.

Rahman, M., Escobedo-Bonilla C.E. Corteel M. Dantas-Lima J.J. Wille M. Alday-Sanz V. Pensaert M.B, Sorgeloos P. y Nauwynck H.J. 2006. Effect of high water temperature (33°C) on the clinical and virological outcome of experimental infections with white spot syndrome virus (WSSV) in specific pathogen-free (SPF) Litopenaeus vannamei. Aquaculture, 261:842-849.

You, X., Su Y. Mao Y. Liu M. Wang J. Zhang M. y Wu C. 2010. Effect of high water temperature on

mortality, immune response and viral replication of WSSV-infected Mersupenaeus japonicus

juveniles and adults. Aquaculture, 305:133-137.