Efeito de dexmedetomidina sobre lesão pulmonar aguda em modelo experimental de isquemia‐reperfusão

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REVISTA

BRASILEIRA

DE

ANESTESIOLOGIA

PublicaçãoOﬁcialdaSociedadeBrasileiradeAnestesiologia

www.sba.com.br

ARTIGO

CIENTÍFICO

Efeito

de

dexmedetomidina

sobre

lesão

pulmonar

aguda

em

modelo

experimental

de

isquemia-reperfusão

Ömer

Burak

Küc

¸ükebe

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_,

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_Özzeybek

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_Abdullayev

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Tekmen

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Tuncay

Küme

e

a_Adıyaman_University_Research_and_Educational_Hospital,_Department_of_{Anesthesiology}_and_Reanimation,_Adıyaman,_Turquia b_Dokuz_Eylül_University_Medical_Faculty,_Department_of_{Anesthesiology}_and_{Reanimation, ˙Izmir,}_Turquia

c_Zonguldak_Atatürk_Hospital,_Department_of_{Anesthesiology}_and_Reanimation,_Zonguldak,_Turquia d_Dokuz_Eylül_University_Medical_Faculty,_Department_of_Histology_and_{Embryology, ˙Izmir,}_Turquia e_Dokuz_Eylül_University_Medical_Faculty,_Department_of_Medical_{Biochemistry, ˙Izmir,}_Turquia

Recebidoem1demarçode2015;aceitoem17deagostode2015

PALAVRAS-CHAVE Experimental; Dexmedetomidina; Lesãodereperfusão; Lesãopulmonar aguda Resumo

Objetivo: Alesãodeisquemia-reperfusãoéumadasconsequênciasdaaplicac¸ãodotorniquete emcirurgiasdeextremidades.Oobjetivodoestudofoideterminaroefeitodedexmedetomidina emlesãopulmonaragudaapósmodeloexperimentaldeisquemia-reperfusãoemextremidade inferiorderatos.

Métodos: VinteeoitoratosalbinosWistarforamrecrutadosapósaprovac¸ãodoComitêdeÉtica ealocadosemquatrogrupos,cadaumcomseteindivíduos.OGrupo1(Sham)recebeuapenas anestesia.OGrupo2(IR)foisubmetidoa3horasdeisquemiae3horasdereperfusãocomo usodetorniqueteemextremidadeinferiorapósaaplicac¸ãodaanestesia.Osgrupos3(D-50) e4(D-100)foramsubmetidosaosmesmosprocedimentosdoGrupo2,excetoporreceberem 50 e 100mg.kg−1 _de_{dexmedetomidina,} _{respectivamente,} _por_via_{intraperitoneal} _uma _hora

antesdaliberaçãodotorniquete.AmostrasdesangueforamcoletadasparaanálisedeTNF-␣ eInterleucina-6(IL-6).Amostrasdetecidopulmonarforamcoletadasparaanálisehistológica. Resultados: NãohouvediferençasignificativaquantoaosvaloressanguíneosdeTNF-␣eIL-6 entre osgrupos, enquanto osescores delesão em tecidos pulmonaresrevelaramdiferença significativa.OsescoreshistológicosobtidosnoGrupo2foramsignificativamentemaioresdo que osdos grupos1, 3e 4,com valores-pde 0,001para cadacomparação.Alémdisso, os escoresdoGrupo1foramsignificativamentemenoresdoqueosdosgrupos3e4,comvalores-p de0,001e0,011,respectivamente.Nãohouvediferençasignificativaentreosgrupos3e4.

∗_Autor_para_{correspondência.}

E-mail:[email protected](R.Abdullayev).

http://dx.doi.org/10.1016/j.bjan.2016.09.004

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Conclusão:Dexmedetomidinamostroueficácianareduçãodelesãoemtecidopulmonar indu-zidaporisquemia-reperfusãoexperimentalemratos,ocasionadaporaplicaçãodetorniquete emextremidade.

KEYWORDS

Experimental; Dexmedetomidine;

Reperfusioninjury;

Acutelunginjury

Effectofdexmedetomidineonacutelunginjuryinexperimental ischemia---reperfusionmodel

Abstract

Objectiv:Ischemia-reperfusioninjuryisoneoftheconsequencesoftourniquetapplicationfor extremitysurgery.Theaimofthestudywastoestablishtheeffectofdexmedetomidineonthe acutelunginjuryfollowinglowerextremityexperimentalischemia---reperfusionmodelinrats. Methods:Twenty-eightWistar-AlbinobreedratswererecruitedafterEthicsCommittee appro-valandallocatedinto4groups,eachwith7subjects.Group1(SHAM)receivedonlyanesthesia. Group2(IR)hadexperienced3hofischemiaand3hofreperfusionusingleftlowerextremity tourniquetafteranesthesiaapplication.Groups3(D-50)and4(D-100)hadundergonethesame proceduresasintheGroup2,exceptforreceiving50and100mg.kg−1_,_{respectively,}

dexme-detomidineintraperitoneally1hbeforethetourniquetrelease.Bloodsampleswereobtained fortheanalysisoftumornecrosingfactor-␣andinterleukin-6.Pulmonarytissuesampleswere obtainedforhistologicalanalysis.

Results:Nosignificantdifferenceregardingbloodtumornecrosingfactor-␣andinterleukin-6 valueswasfoundamongthegroups,whereaspulmonarytissueinjuryscoresrevealedsignificant difference.HistologicalscoresobtainedfromtheGroup2weresignificantlyhigherfromthose intheGroups1,3and4withp-values0.001foreachcomparison.Moreover,Group1scores werefoundtobesignificantlylowerthanthoseintheGroups3and4withp-values0.001and 0.011,respectively.NosignificantdifferencewasobservedbetweentheGroups3and4. Conclusion:Dexmedetomidine is effective in reduction of the experimental ischemia---reperfusioninducedpulmonarytissueinjuryinrats,formedbyextremitytourniquet application.

Introduc

¸ão

A suspensão do fluxo sanguíneo, isto é, isquemia teci-dual, e a reperfusão após um período de tempo são os principais mecanismos fisiopatológicos responsáveis por lesionarórgãos apósalgunsprocedimentos médicos,como transplante de órgãos, isquemia cerebral, acidente vas-cular cerebral, infarto do miocárdio, tromboembolismo, circulação extracorpórea e cirurgias vasculares, grande traumatismoechoquehemorrágico,bemcomo procedimen-toscirúrgicoscomousodetorniquete.1,2_A_lesão_isquêmica resulta principalmente da necrose celular devido à sus-pensãodeoxigênio.Ofornecimentodeoxigêniodurantea isquemianão é suficiente parasatisfazer asnecessidades metabólicasdascélulaseessacondiçãoresultanaativação do metabolismo anaeróbico.3 _Quando _o _fluxo _sanguíneo retorna novamente ao tecido, isto é, quando a reperfu-sãoteminício,oretornodofluxoparadoxalmenteaumenta o dano aos tecidos locais, juntamente com a resposta inflamatória,oqueresultaemdanosaórgãosdistantes.2,3 Muitosagentesinflamatóriosdemonstraramserresponsáveis poressesdanos,entreelesalesãodeisquemia-reperfusão

(LIR).2 _As _citocinas _foram _{responsabilizadas} _por _danos a órgãos distantes devido à LIR.4 _Relatou-se _que _os níveis plasmáticosdofator-␣denecrosetumoral(TNF-␣), interleucina-1(IL-1)eIL-6estavamelevadosemtecidorenal epulmonarapósisquemiaemmembroposterior.5_Os medi-adoresliberadosapósisquemia-reperfusão(IR)resultamem lesõesorgânicaslocaisedistantespormeioderadicaislivres deoxigênioeleucócitos.6,7_Efeitos_{imunorreguladores} nega-tivos de noradrenalina foram demonstrados na formac¸ão demediadoresdeorigemmonocítica/macrofágica(TNF-␣, IL-1, IL-6)eessesefeitosestavamligadosa adrenorrecep-tores␤e␣2.8

Dexmedetomidinaéumagonista␣2-adrenérgicopotente eseletivo,od-isômerofarmacologicamenteativoda mede-tomidina, que é metabolizado no fígado. Seu uso foi aprovado para sedação em unidade de terapia intensiva e tem propriedades sedativas e analgésicas.9,10 _Há pou-cosestudosnaliteraturasobreosefeitosanti-inflamatórios dedexmedetomidina.11---16_Yagmurdur_et_al_.14_demonstraram quedexmedetomidinadiminuiosníveisdemalondialdeídoe hipoxantina(quesãoformadosapósaIR),apósaaplicação detorniqueteparacirurgiadeextremidadesuperior.Embora

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tenhasidodemonstrado quedexmedetomidinatemalguns efeitosprotetoresem LIRlocalizada,nãoencontramosum estudodeseusefeitossobrearespostainﬂamatória sistê-micaedanosemórgãosdistantes.

Nossoobjetivofoiavaliarosefeitosdeduasdoses dife-rentesdedexmedetomidinasobrealesãopulmonaraguda apósmodeloexperimentaldeisquemia-reperfusãoem mem-bros inferiores de ratos. A hipótese teve como base os possíveisefeitosprotetoresdedexmedetomidinaelevouem considerac¸ãoseusefeitosanti-inﬂamatórios.

Métodos

EsteestudofoiconduzidonoLaboratóriodeExperimentação Animal da Faculdade de Medicina da Universidade Dokuz Eylul entre 01/01/2009 e 31/05/2009, após obter a aprovação doComitêdeÉticapara EstudosExperimentais emAnimaisdaUniversidadeDokuzEylul,Esmirna,Turquia (24/11/2008, n◦ 134, Presidente Prof. M. Olguner). Vinte eoitoratos, fêmeasadultas,daraçaWistar-Albino,entre 250-340g, foramusados para o estudo. Osanimais foram alimentadoscomraçãopadrãoeáguaemantidosemciclos de12horasdeclaro/escuroparaadaptaçãoantesdoinício doestudo.Temperaturaeumidadetambémforam padroni-zadas.

Osratosforammantidosemjejumpor12hantesdo pro-cedimentocirúrgico, receberamsomente água. Cadarato foi pesado antes da experiência e as doses de dexmede-tomidina foramcalculadas.A distribuição dos animaisem quatro grupos foi feita de modo aleatório com o método deenvelopelacrado:Grupo1(Sham,n=7)recebeuapenas anestesia,comobtençãodeamostradesanguenaprimeira horade reperfusãoe amostras desangue e tecidono fim dareperfusão;Grupo 2s (IR, n=7) foisubmetidoa 3h de isquemiae3hdereperfusãoeusoutorniqueteemmembro posterioresquerdoapósaaplicaçãodaanestesia.Amostras desangueforamcolhidasnaprimeirahoradereperfusãoe amostrasde sanguee tecido nofimdareperfusão;Grupo 3(D-50,n=7)foisubmetidoaosmesmosprocedimentosdo Grupo2,excetoporreceber50␮g.kg-1_de_{dexmedetomidina}

(Precedex, Abbott Laboratories Ltd., North Chicago ABD, 100␮g.mL-1₎_por_via_{intraperitoneal}₁_h _antes_da_liberac_¸ão

do torniquete; Grupo 4 (D-100, n=7) foi submetido aos mesmos procedimentos do Grupo 2, exceto por receber 100␮g.kg-1_de_{dexmedetomidina}_por_via_{intraperitoneal}₁_h

antes da libertac¸ão do torniquete. Novamente, amostras desangueforamobtidasnaprimeirahoradereperfusãoe amostrasdesanguee tecidonoﬁm dareperfusãoparaos grupos3e4.

Aanestesiafoiadministradaporviaintraperitonealcom mistura de50mg.kg−1_de_cetamina _(Pﬁzer_Pharma_GmbH,

Alemanha)e10mg.kg−1_de_cloridrato_de_xilazina_(Alfazine,

2%,Egevet).Aisquemiafoifeitacomgarroteelástico(1cm delargurae30cmdecomprimento)aplicadoàregião ingui-naldomembroposterioresquerdo.Otorniquetefoiliberado para estabelecer a reperfusão após o período de tempo determinado.Atemperaturaambientefoimantidaestável, a mesa de operac¸ão foi aquecida para proteger os ratos de hipotermia e a temperatura corporal dos animais foi mantida entre 36,8◦C e 37,5◦C. Os ratos foram hidrata-doscom3mL.kg-1_.h-1_de_cloreto_de_sódio_isotônico,_por_via

subcutânea,durantetodooprocedimentodeIRparaevitara desidratação.Osanimaisforamsacrificadosapósaobtenção dasamostrasdesangueetecido.Aduraçãodoprocedimento foiigualemtodososgrupos.

No fimda primeira hora dastrês horas de reperfusão, 1,5mL de sangue foi coletado da veia da cauda dos ani-masparaanálisedeTNF-␣eIL-6,colocadoemtuboestéril comácidoetilenodiaminotetracético(EDTA)ecentrifugado por10min a umavelocidade de1.200rpm.O plasma das amostrasdesanguefoiseparadoecolocadoemtubos Eppen-dorf,congeladoemantidoa70◦Catéodiadaanálise.Os ratosreceberamcloretodesódioisotônicoporvia intrape-ritoneal,emquantidadeigualàextraídaparaamostragem. No fim da reperfusão, o tórax foi aberto por abordagem subdiafragmática.Aamostrade sanguepara TNF-␣ e IL-6 foi obtida em volume de 2mL diretamente docoração e acondicionadadamesmaformamencionadaacima.Nofim doprocedimento,5mLdeformola10%foramlentamente aplicadosatravésdoápexcardíacocomumadaagulhade calibre 20G e o coração e o leito pulmonar foram exci-sados após o sacrifício. Uma secção da zona média do pulmãodireitoetodoopulmãoesquerdoforamcolocados em formol a 10% e mantidos parafixação por no mínimo 24h.

Análisedemediadoresinﬂamatórios

Aanálisedosmediadoresinﬂamatórios(TNF-␣vs.IL-6)foi realizadacomotesteElisa(Enzyme-LinkedImmunosorbent Assay).Osvaloresdeabsorbânciaforamlidosa450nmno dispositivoparaElisa(OrganonTechnicaMicropoc¸osSystem Reader230S).Osresultadosforamexpressosempg.mL-1_.

Análisehistopatológica

Os tecidos pulmonares obtidos dos animais foram cora-doscomométodohematoxilina-eosina eexaminadoscom microscópiodeluz(OlympusBH-2)emampliaçãode200×. Seisregiõesaleatóriasforamselecionadasdecadaamostra eumaclassificaçãode0-4pontosfoifeita.Levaram-seem consideraçãoosachadoshistopatológicos,comohemorragia intersticialealveolar,infiltradodeneutrófilosintersticiale alveolar, edema e atelectasia. A classificação foi feitade acordocom a proporção daárea lesionada:0 = nenhuma lesão;1=<25%delesão;2=25-50%delesão;3=50-75% delesão;4=lesãodifusa.

Análiseestatística

OsdadosobtidosforamavaliadoscomoprogramaSPSS11.0 (Statistical Package for Social Sciences,Chicago, Illinois). OstestesdeKruskall-Wallisedoqui-quadradoforamusados paracomparar os grupos. O teste Ude Mann-Whitney foi usadoparacompararosgruposseparadamenteeacorrec¸ão de Bonferroni foi usada quando necessário. Valores de p inferioresa0,05 foramconsideradosestatisticamente sig-niﬁcativos.

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Grupo 1 (

SHAM

)

Δ

---

--- n = 7

6. horas

4. horas

3. horas

0. hora

6. horas

4. horas

3. horas

0. hora

6. horas

4. horas

3. horas

2. hora

2. horas

0. hora

6. horas

4. horas

3. horas

0. hora

Histopatologia e

Bioquímica

Histopatologia e

Bioquímica

Histopatologia e

Bioquímica

Grupo 2 (IR)

ISCHEMIA REPERFUSION

Δ

---

--- n=7

Grupo 3 (D 50)

ISCHEMIA REPERFUSION

Δ

---

--- n=7

Dexmedetomidina

50 µg.kg

-1

Histopatologia e

Bioquímica

Dexmedetomidina

100 µg.kg

-1

Grupo 4 (D 100)

ISCHEMIA REPERFUSION

Δ

---

--- n=7

Figura1 Representac¸ãoesquemáticadoprotocolodoestudo.

Resultados

Esteestudofoiconcluídocom28ratos,cadagrupocomsete. Ointervalodetempoparaoestudofoiomesmodescritona sec¸ãoMétodos(ﬁg.1).

A tabela 1 mostra os valores de TNF-␣ e IL-6 e as classificações histológicas do tecido pulmonar. A análise intergrupos não revelou diferença estatisticamente signi-ficativa em relação aosvaloresde TNF-␣ e IL-6, tanto na primeiraquantonaterceirahoradereperfusão.

Aanálise estatísticadasalterações histológicas pulmo-nares foi feita com os valores médios das classificações obtidas a partir de seis áreas microscópicas examinadas. Houvediferençaestatisticamentesignificativaentreos gru-posnaclassificaçãodaslesõespulmonares(p=0,001).Lesão difusa(classificação4)em todososespécimesdoGrupo2. AsclassificaçõeshistológicasobtidasparaoGrupo2foram significativamente diferentes daquelas para os grupos 1, 3 e 4 (p=0,001 para cada comparação). Além disso, as

classificaçõesdoGrupo1foramsignificativamentediferente daquelas dos grupos 3 e 4 (p=0,001e0,011, respectiva-mente). Nãohouve diferençasignificativaentreosgrupos trêsequatro.

No exame microscópico, as amostras do Grupo 1 apresentaram sequência alveolar, estruturas perialveolar e células normais e áreas intersticiais também normais (fig. 2).As amostrasdo Grupo 2 apresentaram infiltração de neutrófilos intersticial e interalveolar, hemorragia, espessamento dos septos interalveolares, edema inters-ticial, áreas enfisematosas difusas e congestão. Grande ampliação revelou áreas mais atelectásicas e áreas com estase capilar com ventilação diminuída, alvéolos colap-sados, áreas parenquimatosas não funcionais, neutrófilos parenquimatosos densos e infiltração macrofágica nes-sas regiões, hemorragia interalveolar difusa nas áreas de estase capilar e áreas irregulares de fibrose, jun-tamente com campos esparsos normalmente ventilados (figs. 3e 4). As amostras doGrupo 3, ainfiltração difusa

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Tabela1 ValoresdeTNF-␣eIL-6epontuac¸õeshistológicas Grupo1 (Sham) n=7 Grupo2 (IR) n=7 Grupo3 (D50) n=7 Grupo4 (D100) n=7 p TNF-_˛(pg.mL-1₎ Reperfusão1h 9,40 (7,40-11,50) 10,10 (9,10-25,30) 9,70 (8,30-10,90) 9,70 (7,70-10,60) 0,55 Reperfusão3h 9,30 (8,20-10,90) 9,80 (9,30-22,90) 10,20 (8,70-11,80) 9,00 (8,90-12,10) 0,26 IL-6(pg.mL-1₎ Reperfusão1h 27,10 (21,60-41,30) 17,30 (13,20-52,60) 19,00 (15,80-58,00) 25,20 (20,00-48,90) 0,11 Reperfusão3h 32,70 (21,60-64,70) 61,20 (17,40-120,30) 24,40 (14,00-91,80) 31,80 (21,40-47,70) 0,83

Pontuac¸ãohistológica 0,5b (0,0-1,0) 4,0a (4,0-4,0) 2,5 (2,0-3,0) 2,0 (0,5-3,5) 0,001

a _Diferenc_¸a_{signiﬁcativa}_no_Grupo_2,_em_comparac_¸ão_com_os_grupos_1,₃_e_4,_p_<_0,05.

b _Diferenc_¸a_{signiﬁcativa}_no_Grupo_1,_em_comparac_¸ão_com_os_grupos₃_e_4,_p_<_0,05.

Valoresexpressosemmediana(mínimo-máximo).

Figura2 Grupo1:estruturanormaldetecidopulmonar ven-tilado.

Figura3 Grupo2:aestruturaalveolarperdeuoseupadrão (_↑), alteraçõesenfisematosas (A),infiltraçãode células infla-matóriasnoparênquima(P˙I).

Figura4 Grupo 2: infiltração densade neutrófilos, alarga-mentodoparênquima,áreaspulmonaresnãoventiladas( ) eáreasatelectásicas(A).

de neutrófilos no interstício, o espessamento de septos interalveolares,aatelectasia,acongestão,ahemorragiae oenfisemaforammenoresdoquenoGrupo2.Tecido pulmo-narnormalfoiobservadonasáreascontíguas,adespeitode levealargamentodoparênquima einfiltração de neutrófi-los.Algumasregiõesapresentaramtecidopulmonarnormal juntamentecomhemorragiaparenquimatosaintensa,áreas enfisematosas e infiltrações peribrônquicas (fig. 5). No Grupo4,asamostrasapresentaramleveinfiltraçãode neu-trófilosintersticial,espessamentodeseptosinteralveolares, atelectasia,congestãoehemorragiaemgraumuitoinferior doqueasamostrasdoGrupo2.Algumasregiões apresenta-ramtecidopulmonarcompletamentenormal(fig.6).

Discussão

Oprincipal resultado doestudo foique dexmedetomidina diminui as pontuac¸ões das lesões histológicas relaciona-das a IR em ratos submetidos à isquemia e reperfusão,

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Figura 5 Grupo 3: leve alargamento do parênquima e infiltraçãodeneutrófilos(*),juntamentecomestruturatecidual pulmonarnormaladjacente.

Figura 6 Grupo 4: leve infiltração inflamatória e espessa-mentodos septosinteralveolares (*),juntamentecomtecido pulmonarnormal.

induzida pela aplicação de torniquete em extremidade. Embora não tenha havido diferenças entre os grupos em relaçãoaosníveisplasmáticosdosmediadoresinflamatórios TNF-␣ e IL-6, uma diferença significativa foi observada nas alterações histológicas dos tecidos. A classificação histológicadoGrupo2foielevada,indicouefeitosdalesão de IRno tecido pulmonar. Os grupos 3 e 4 apresentaram pontuaçõesmenoresdelesão,indicaramefeitoprotetorde dexmedetomidinacontraaLIR.

Embora alguns autores ofereçam múltiplos métodos de ligação em vez da aplicação de torniquete devido à preocupaçãocomaobstruçãovenosaelinfáticaelesão mus-cularapósacompressãomecânicaprolongada,17 _o_método deaplicaçãodetorniquetenãoéinvasivoeparecesermais práticonaaplicaçãoclínica.7,18

Diferentestemposdeisquemiaereperfusãoforam usa-dos para a indução de IR na literatura. Nós levamos em consideração a resistência do tecido contra a isque-mia.Por exemplo,alteraçõesmorfológicasimportantesno tecidomuscular surgem após 2h deisquemia e, porisso, estudosque avaliaram tecidos musculares em LIR usaram temposmaislongosdeisquemia.19,20_Uma_correlac_¸ão impor-tante entre o tempo de isquemia e a lesão isquêmica foiobservada.21 _Considerando _os_relatos _de_lesão histoló-gica irreversível20 _e _de _infiltrac_¸ão _difusa _de _{neutrófilos}18

no tecidomuscular após 3h de isquemia em estudos que avaliaramaLIRemtecidomuscular,optamosporumtempo deisquemiade3hemestudo.

Observou-seque o tempodereperfusãotambémé um fator importante na formação dos efeitos locais e distan-tes da IR.2,7,19 _Yasin _et _al_.7 _usaram _tempos _diferentes _de reperfusãoapós 3hdeisquemiae descobriramcorrelação positiva entre o tempo de reperfusão e as disfunções orgânicas distantes. Também descobriram alterações his-tológicas após 3h de reperfusão que nãoeram aparentes nas primeiras 2h. Portanto, optamos por um tempo de reperfusão de 3h. Alterações histológicas proeminentes, comoinfiltraçãodifusadeneutrófilos,distorçãoda sequên-cia alveolar e edema no tecido pulmonar do grupo IR, sustentaram a nossa opção. Essesachados estão em con-formidade com os de estudos que usaram os mesmos tempos.7,18

TNF-␣mostrouterumpapel importantenapatogênese da síndrome de resposta inflamatória sistêmica (SRIS) e falênciademúltiplosórgãos(FMO).5,22,23_Mecanismos seme-lhantesforamsugeridosnosefeitoslocaisedistantesdaLIR e estudosmostraramqueTNF-␣desempenhaumpapelna patogênesedalesãoorgânica.3,7_{Similarmente,}_IL-6_também mostroudesempenharumpapelnareaçãoinflamatória com-plexaassociadaaotrauma,choqueeinfecção.24_Correlac_¸ão positiva foi demonstrada entre as concentrações plasmá-ticas de IL-6e a magnitudeda lesãoem tecidos moles.24 EstudosqueavaliarammodelosdeIRemextremidades pos-terioresmostraramumaumentodeIL-6emcorrelaçãocom TNF-␣.5,6_Yasin_et_al_.7_sugeriram_que_a_resposta inflamató-ria relacionada àIRpodeser observadanos níveis séricos de TNF-␣ e IL-6 e que há correlação positiva entre esse aumentoelesõesdeórgãosdistantes.Osautoresavaliaram osníveissanguíneosdeTNF-␣eIL-6naprimeira,segundae terceirahoradereperfusãoapós3hdeisquemia. Descobriu--se que TNF-␣ aumentou deforma significativano fimda primeirahoraevoltouaosvaloresdecontrole nasegunda hora,enquantoosvaloresdeIL-6aumentaram progressiva-menteapósaprimeirahoradereperfusãocompiconofim daterceirahora.Portanto,avaliamososníveis sanguíneos deTNF-␣eIL-6,tantonofimdaprimeiraquantodaterceira hora.

Vários estudos clínicos e experimentais foram condu-zidos com dexmedetomidina devido às suas propriedades analgésicas, ansiolíticas e sedativas.25,26 _Além _disso, demonstrou-se que dexmedetomidina tem propriedades anti-inflamatórias em estudos que avaliaram seus efeitos em modelosdeinflamaçãoisquêmicae tóxica.11 _Taniguchi

etal.11_demonstraram_que_{dexmedetomidina}_atenua_a_lesão pulmonarediminuiastaxasdemortalidadeaodiminuiros níveisdeTNF-␣eIL-6eainfiltraçãodeneutrófilosnas pare-desalveolaresemmodeloexperimentaldechoque séptico eendotoxêmico.Shen etal.27 _avaliaram_os_níveis _de TNF--␣ e IL-6em lesãopulmonar em modelo experimental de LIR intestinal e descobriram diminuição daprodução des-sas citocinas notecidopulmonarapós a administração de dexmedetomidina.

Dexmedetomidinafoi administrada por via intraperito-neal antes28 _ou _durante12-14 _a _IR _em _modelos _de _IR _em ratos. Embora os efeitos protetores de dexmedetomidina tenham sido demonstrados, independentemente de seu tempodeadministrac¸ão,nãoháestudosnaliteraturaque

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comparem os tempos de aplicação. Além disso, alguns estudos que avaliaram os efeitos de dexmedetomidina administradaintraperitoneal mostraramqueostemposde IRnãoforammaislongosdoque ostemposdeeliminação dedexmedetomidina.13,28_Como_o_principal_responsável_na formação delesãopulmonaréoprocesso dereperfusãoe osníveisdeTNF-␣começamasubirpertodofimda isque-mia---comníveisdepiconaprimeirahoradereperfusão---,7 consideramosrelevanteadministrardexmedetomidinauma horaantesdareperfusão.

Nãoencontramosintervaloscertosdadosede dexmede-tomidinaparaseusefeitosanti-inﬂamatóriosnaliteratura.A dosededexmedetomidina,administradaporvia intraperito-neal,foiestabelecidaem100␮g.kg-1_,_a_dose_mais_elevada

administrada de formasegura na literaturaatual,16,28 _e _a segundadose foiestabelecida em 50␮g.kg-1_,_para _avaliar

seuspossíveisefeitosadependerdadose.

AdespeitodetempossemelhantesdeIRem estudosde LIR pulmonar após aplicação de torniquete em membros de ratos, resultados diferentes em relação aos níveis de TNF-␣ foramobservados.5,18,29 _Seekamp_et _al_.5 _relataram que os níveis de TNF-␣ não foram detectados no sangue durante todo o tempode quatro horas deisquemia, mas começaramaseelevarnaprimeirahoradereperfusãocom declínioapósasegundahora.Alémdisso,osníveis deIL-6 começaram ase elevarnotrigésimominuto, compico no fimdaquartahora. Yassinetal.7_relataram _que _os_níveis deTNF-␣ eIL-6atingemseuspicosna primeirae terceira hora de reperfusão, respectivamente; osníveis de TNF-␣ caíramabaixo dos níveis detectáveisapós asegunda hora dereperfusãoeIL-6atingiuníveisplasmáticosdetectáveis apartirdaprimeirahoradereperfusão.

Duru et al.,18 _Harkin _et_al_.30 _e _Gaines _et _al_.31 _usaram modelos e tempos semelhantes de IR e, embora tenham observado alterações histopatológicas devido à LIR, não conseguiram observar alterações nos níveis de TNF-␣. De forma semelhante, Welbourn et al.29 _não _observaram alteraçõesnosníveisdeTNF-␣apósareperfusãoe concluí-ram que TNF-␣ desempenha um papel na patogênese da LIRporqueasalteraçõeshistopatológicasdiminuíramcoma aplicaçãodeanti-TNF.Tambémnãoobservamosdiferenças nos níveis de TNF-␣ e IL-6 nos grupos que receberam dexmedetomidina, em comparação com o grupo Sham, apesardasdiferençashistopatológicassignificativas.

Essacondiçãopodeseratribuídaaonúmeroinsuficiente deanimais.Duruetal.18 _relataram _que_a_razão _pela_qual não conseguiram demonstrar alterações no nível de cito-cinas foiporque eles podemnãoteratingido osníveis de picodeTNF-␣,poisobtiveramasamostrasdesanguenofim dasegundahoradereperfusão.Gainesetal.31 _atribuíram essacondiçãoàinsuficiência deamostrasdesangue. Wel-bournetal.29 _propuseram_que_TNF-_␣_pode_permanecer_no tecidoapósaproduçãodemacrófagospulmonarese, por-tanto,nemsemprepoderiaserdetectadonosangue---TNF-␣ podemediaralesãotecidualpulmonareativaroendotélio localmente.

A LIRinduzida commodelo deaplicação detorniquete foi histopatologicamente demonstrada neste estudo. As alteraçõesnoGrupoIRforamsignificativasemcomparação com o Grupo Sham e ambos os grupos de dexmedetomi-dina e isso demonstrou que o modelo foi conduzido de formaadequada.Asdiferençassignificativasnosresultados

dos grupos de dexmedetomidina, em comparac¸ão com o Grupo IR, foram interpretadas como dexmedetomidina diminuiualesãopulmonar.

Embora as pontuac¸ões histopatológicas entre os gru-poscom dexmedetomidina (50 e 100␮g.kg-1₎ _não _tenham

sidosigniﬁcativamentediferentes,algumasáreasdetecido pulmonarnormal ao examemicroscópico noGrupo D-100 sugeriram que o medicamento pode ter agido de forma dependentedadose.Estudoscomtamanhoamostralmaior ediferentesdoses,temposeviasdeadministrac¸ãopodem serconduzidosparaavaliaresseefeito.

Em conclusão,em nossoestudo de modelo experimen-taldeIRinduzidoportorniqueteem membroposteriorde ratos, dexmedetomidina foi eficaz na prevenção de lesão pulmonarinduzidaporIR.Asdiferençashistopatológicasnos níveisdeIL-6entreosdoisgruposcomdiferentesdosesde dexmedetomidina,emboranãosejaestatisticamente signi-ficativa,sugereafeituradeestudoscomamostrasmaiores paraavaliarosefeitosdedosesdiferentes.

Declarac¸ãodeimplicac¸ão

Este estudo experimental demonstra a capacidade da dexmedetomidina de reduzir a lesão relacionada à isquemia-reperfusãoexperimentalem ratos.Estudos clíni-coscontroladospodemserfeitosemhumanosparaobservar osigniﬁcadoclínicodesseefeito.

Conﬂitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconﬂitosdeinteresse.

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