Facultad de Ciencias Exactas
Físicas y Naturales
Lic. PEDRO ELÍAS PATIÑO MARTÍNEZ Lic. EDGAR ENRIQUE RAMÍREZ PARRA
Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales Universidad de Santander
Teléfono (57) 6516500 Ext 253 • Fax (57) 6516492
BUCARAMANGA
2006
Justificación
Durante el proceso de formación del estudiante de la UDES, los conceptos teóricos requieren ser corroborados mediante la experimentación los cuales muchos de ellos se privilegian al interior de las prácticas de laboratorio. Para dichas prácticas el alumno debe utilizar una serie de sustancias y/o soluciones de reactivos químicos los cuales son preparados por laboratoristas o docentes.
La preparaciones de las sustancias o soluciones de reactivos químicos requieren especial cuidado ya que no se trata de una simple mezcla de sustancias; por el contrario hay que seguir unos parámetros para cada sustancia teniendo en cuenta las cantidades, la forma de prepararlos y cuidados básicos.
El presente manual permitirá a los laboratoristas o docentes tener una guía para la preparación de las diferentes soluciones utilizadas en las practicas de la Facultad de Ciencias Exactas Físicas y Naturales
CUIDADOS BASICOS Y NORMAS DE
BIOSEGURIDAD PERSONAL
La preparación de las soluciones es un Proceso que requiere todos los cuidados básicos posibles y el cumplimiento de normas de Bioseguridad personal, ya que en
dicha preparación se esta expuesto a químicos que son altamente tóxicos y nocivos para la salud humana CUIDADOS BASICOS
• Que la balanza donde se pesan las sustancias este debidamente nivelada y calibrada.
• Al terminar el pesaje de las sustancias la balanza debe quedar completamente limpia.
• La vidriería donde se preparan los soluciones debe estar completamente limpia y en algunos casos estéril.
• Las soluciones que lo requieran deben almacenarse en frascos oscuros para evitar procesos de oxidación por acción de la luz. • Las soluciones deben codificarse, teniendo en cuenta: nombre,
concentración, fecha de preparación, fecha de vencimiento y código de riesgos.
• Siempre se deben mezclar lentamente los ácidos fuertes sobre el agua.
• La preparaciones de ácidos fuertes o reactivos volátiles debe hacerse en las campanas extractoras de gases.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL
• Usar guantes desechables o guantes de nitrilo de acuerdo a la preparación que se realice
• Utilizar bata, mascara artigases y gafas de seguridad, siempre que se prepare una solución.
• No realizar preparaciones bajo condiciones anormales de salud como: fiebre, problemas respiratorios, cefalea, mareos, etc.
• En caso de inhalar alguna sustancia buscar la zona mas aireada de la zona de preparación de reactivos o fuera de esta y consultar un médico.
SOLUCIONES
AGUA DE BROMO
Pesar 4,17 gr. de bromo en 100 ml de agua destilada o agua de bromo en tetracloruro de carbono.
Cuidados: solución altamente tóxica para el organismo
1
Uso: Para determinación de compuestos orgánicosACETO-ORCEINA
Pesar 2 gr de orceina, y adicionarle 60 ml de Ácido Acético Glacial y 40 ml de Agua destilada, y someter a ebullición por 2 minutos, dejar enfriar y luego filtrar. Filtrar por lo menos cada 2 meses Cuidados: Tóxicos
1
y corrosivosUso: Para tinción de material nuclear (cromosomas)
ACETO –CARMIN
Pesar 0,5 gr de carmín, adicionarle 45 ml de ácido acético glacial y completar con 55 ml de agua destilada
Uso: Para tinción de material nuclear (cromosomas) Cuidados: Tóxicos
1
y corrosivos
ACIDO CLORHIDRICO 2.5 N
Cuidados: Tóxicos
1
y corrosivoUso: En pruebas de división celular (mitosis) ALCOHOL- CETONA
Medir 70 ml de Alcohol Etílico absoluto y completar a 100 ml de solución con Acetona pura
Cuidados: Comburente
Uso: Decolorante para la coloración de Gram
ACIDO CLORHIDRICO 0.1 N
Medir 50 ml de agua destilada, adicionarle 0,83 ml de HCl 37% y completar a 100 ml con agua destilada
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivosUso: Para titulación ácido–base y pruebas cualitativas de pH.
ACIDO SULFURICO 1 M
Medir 49 ml de Ácido Sulfúrico y aforar a 1000 ml con agua destilada
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Para titulación ácido–baseACIDO ACETICO 1 N
Medir 60.05 ml de ácido acético 100% y aforar a 1000 ml con agua destilada.
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Pruebas cualitativas de pH.AZUL DE METILENO 1%
Pesar 1 gr. de azul de metileno y disolver en 100 ml de agua destilada hasta obtener una solución uniforme
Cuidados: Tóxicos
1
Uso : Para tinción de tejidos animales (epitelio bucal) y tejidos vegetales, pruebas de difusión celular
ALCOHOL ACIDO 3%
Medir 97 ml de alcohol etílico absoluto, adicionarle con mucho cuidado por las paredes del recipiente 3 ml de Ácido Clorhídrico al 37%
Cuidados: Comburente y corrosivos Uso: Para coloración de Microbiológica
ACIDO OXALICO 1 N
Pesar 6,3 gr de ácido oxálico y aforar a 100 ml con H2O destilada
Uso: Para titulación de ácido-base
ACIDO NITRICO 3M
Medir 50 ml de Agua Destilada, adicionarle 29.1 ml de ácido nítrico al 65% luego completar a 100 ml con H2O destilada
Cuidados: Tóxicos y corrosivos
AZUL DE BROMOTIMOL
Pesar 0.1 gr. de azul de bromotimol y diluirlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 %
BARFOED
Medir 13.3 gr. de acetato de cobre en 200 ml de H2O, luego
adicionarle 1.8 ml de ácido acético glacial Cuidados: Tóxicos y corrosivos
Uso: Diferenciación los Monosacáridos reductores de los Disacáridos reductores
BIAL
Pesar 1.5 gr. de orcinol y disolverlo en 500 ml de HCl concentrado y añadir 20 gotas de Fe Cl3 1%
Cuidados: Tóxico y corrosivo Uso: Para identificar pentosas
BIURET
Pesar 3 gr. de CuSO4 .5H2O, adicionarle 9 gr. de tartrato de sodio y
potasio y disolver en 500 ml de NaOH 0.2 M; Añadir 5 gr. de KI y completar a 1000 ml con NaOH .
(NaOH 0.2 M: 8 gramos de NaOH en 1 litro de agua) Uso: Para determinación de proteínas(Enlace peptídico) Cuidados: Tóxico y corrosivo
BENEDICT
Solución A:
Pesar 173 gr. de Citrato de sodio, adicionarle 100 gr. de Na2CO3
completar a 800 ml de H2O destilada. Filtrar y completar hasta 850
ml de H2O.
Solución B:
Pesar 17.3 gr de CuSO4 y disolverlo en 150 ml de agua destilada
Disolver suavemente la solución B en la A agitando continuamente.
Uso: Para determinación de carbohidratos reductores Cuidados: Tóxico y corrosivo
BUFFER DE FOSFATOS
Solución I:
Pesar 13.8 gr. De NaH2PO4 y disolverlo en 250 ml de H2O destilada
Solución II:
Pesar 35.85 gr. De Na2HPO4 y disolverlo en 500 ml de H2O destilada
Mezclar 212.5 ml de solución I + 37.5 de solución II y aforar a 500 ml con H2O destilada
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Extracción de DNABUFFER LISIS II
Medir 4.8 ml de EDTA Na 0.5 M pH 8.0 y adicionarle 0.438 gr NaCl y aforar a 1000 ml con agua destilada
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Extracción de DNABUFFER LISIS I
Pesar 103 gr. de sucrosa, adicionarle 10 ml de triton x100,
adicionarle 10 ml de Tris-HCl 10mM. pH 7.5 y 5 ml de MgCl2 1M
aforar a 1000ml con H2O destilada
destilada.
(Tris-HCl 10mM. PH 7.5)=0.15756 gr 100 ml s/n
Para 500ml (51.5 gr. Sucrosa, 5 ml triton x 100+ 5 ml tris + 2.5 ml Mgcl2 1M).
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Extracción de DNABÚFER DE EXTRACCIÓN Mezclar las siguientes sustancias:
Tris HCl pH 8.0 100 mM, EDTA 50 Mm, NaCl 500 mM, B-Mercaptoetanol 10 mM y SDS 1.3%.
Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Extracción de DNABÚFFER DE DILUCIÓN (TE) Mezclar las siguientes sustancias:
Tris HCl pH 8.0 50 mM, EDTA 10 Mm
Completar con agua destilada en balón aforado acorde a la cantidad que se vaya a preparar, posteriormente autoclavar
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Extracción de DNABÚFFER TBE 5X Mezclar las siguientes sustancias:
Pesar 54 gr. de Tris Base, adicionarle 20 ml de EDTA 0.5 M y 27,5 gr de Ácido Bórico Completar con agua destilada en balón aforado a la cantidad necesaria, posteriormente autoclavar
Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos Uso: Extracción de DNABUFFER PARA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Solución A :
Fosfato ácido de disodio (Na2HPO4 ) 0.2 M
Solución B : Ácido cítrico (C6H8O7. H2O) 0.1 M BUFFER pH 5.0 (515 ml S/N A + 485 ml S/N B). BUFFER pH 6.8 (772 ml S/N A + 227,5 ml S/N B) BUFFER pH 8.0 (972,5 ml S/N A + 27.5 ml S/N B). CLORURO DE SODIO 0.1 M
Pesar 5.85 gr. de NaCl y aforar a 1000 ml con H2O destilada
Uso: Para Fenómenos de membranas
DAMASHECK
Pesar 8 gr. de sucrosa, adicionarle 0.4 gr. de Citrato de sodio y 0.15 gr. de azul de cresilo. Completar a 100 ml de H2O destilada.
Adicionarle 3 gotas de formol 37 % Uso: Para recuento de reticulocitos
| DRABKIN
Pesar 0.05 gr de Cianuro de Potasio (KCN), adicionarle 1 gr. de
bicarbonato de sodio (NaHCO3) y 0.2 gr. de ferrocianuro de potasio
(K3Fe(CN)6)
Completar a 1000 ml con H2O destilada.
Uso: Para Recuento en Hematológico Cuidados: Tóxicos
1
corrosivos2,4 DINITROFENILHIDRIZINA
Pesar 3 gr. de 2.4 dinitrofenilhidrizina y disolver en 15 ml de H2SO4
concentrado y disolver en 20 ml de agua destilada y 70 ml de Etanol absoluto, decantar y utilizar el filtrado.
Uso: Indicador
Cuidados: Tóxicos
1
DISOLUCION DE FERROCIANURO
Pesar 1.65 gr. de K3(Fe(CN)6) recristalizado, adicionarle 10.6 gr.
carbonato de sodio anhídrido y aforar a 1000 ml de H2O destilada.
Guardar en frasco oscuro (duración 2 meses) . Uso: Indicador
Cuidados: Tóxicos
1
ETANOL 0.6 M
Medir 34.9 ml de alcohol etílico absoluto y completar a un 1 litro de solución con H2O destilada
Uso: Para Fenómenos de membrana.
ERLICH (PRUEBA)
Ácido sulfanilico 0.5 % en HCl 2% con solución de NaNO3 0.5% y
Na2CO3
FOUCHER
25 gr. de tricloroacetico en 100 ml de H2O y 10 ml de cloruro férrico
FEHLING A
Pesar 34.6 gr. de CuSO4 .5 H2O (vitriolo azul) y disolverlo en 500 ml
de H2O destilada
Cuidados: Tóxicos
1
Uso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling B para determinación de azucares reductores
FEHLING B
Pesar 173 gr. de tartrato de Na y K ( sal de Rochelle) se le añaden 62.5 gr. de NaOH y se lleva hasta 500 ml de H2O
Cuidados: Tóxicos
1
y corrosivoUso: Se utiliza conjuntamente con el Fehling A para determinación de azucares reductores
FENOLFTALEINA
Pesar 0.1 gr. de fenolftaleina y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 96 %
Uso: Indicador Ácido-Básico Cuidados: Tóxicos
1
GLUCOSA 0.1 M
Pesar 1.8 gr de glucosa y llevarlo a 100 ml de H2O destilada
Uso: Para Fenómenos de membrana.
GLICEROL 0.6 M
Medir 4.39 ml de glicerol y llevarlo a 100 ml de H2O destilada
HAYEN 2.5 gr. de sulfato de sodio 0.5 gr. de cloruro de sodio 0.25 gr. cloruro de mercurio completar a 1000 ml de H2O HIDROXIDO DE SODIO 1M
Pesar 4.0 gr. de NaOH y llevarlo a 100 ml de H2O destilada
Nota: La disolución del NaOH en el agua se debe realizar en la cámara extractora de gases
Uso: Diferentes usos, principalmente Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo
JUGO GASTRICO ARTIFICIAL
Medir 40 ml de Ácido Acético 0.1 N, adicionarle 15 ml de Ácido Clorhídrico 0.1 N y aforar a 100 ml con agua destilada
Uso: Titilación Ácido-Básico Cuidados: Corrosivo
LUCAS
Pesar 17 gr. de ZnCl2 y adicionarle 12 ml de HCl concentrado en
baño frío, agitar continuamente, prepararlo cada vez que se utilicen y guardar en nevera.
Uso: Diferenciación de alcoholes primarios, secundarios y terciarios Cuidados: Tóxico
1
y corrosivoLUGOL
Tejidos vegetales Parásitos
0.5 gr. de yodo 0.5 gr. de yodo
1 gr. de yoduro de potasio 1 gr. de yoduro de potasio 100 ml de agua destilada 300 ml de agua destilada Uso: Colorante
Cuidados
: CorrosivoLIQUIDO DILUYENTE PARA ESPERMOGRAMA Pesar 5 gr. de Bicarbonato de sodio y llevarlo a 100 ml de H2O
destilada y adicionarle 1 ml de Formol 37% MILLON
Pesar 40 gr. de nitrato de mercurio, adicionarle 57 ml de HNO3
concentrado, luego se calienta y se lleva a 200 ml, se deja sedimentar y se decanta (preparación en cámara extractora ).
Cuidados
: CorrosivoMOLISCH
Pesar 50 gr. de α naftol y llevarlo a 1000 ml de Etanol 95% (estable 1 semana)
Uso: Para determinación general de Azucares Cuidados: Tóxico
1
y corrosivoMEZCLA CROMICA (SULFOCROMICA)
Medir 500 ml de H2O destilada y adicionar lentamente 250 ml de
H2SO4 concentrado y agitar constantemente se deja enfriar se le
mezcla dicromato de potasio y finalmente sé afora a 1000 ml con H2O destilada.
Uso: Limpieza de material con restos carbónicos
Cuidados
: CorrosivoMETIL NARANJA
Pesar 0.04 gr. de metil naranja y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico al 20 % o en 100 ml de H2O destilada
Uso: Indicador Ácido Básico Cuidados: Tóxico
1
NESSLER
Pesar 15 gr. de HgI2 en un vaso de precipitado, en otro vaso se
disuelven 10 gr. de KI en 20 ml de H2O.
Esta disolución se vierte en el vaso con HgI2 , disolver muy bien con
agitación.
En un matraz de 500 ml disolver 40 gr.de NaOH en 300 ml de H2O
Luego se le adiciona la otra solución y se agita, al final decantar y separar el exceso de sales de mercurio (precipitado amarillo) Cuidados: Tóxico
1
NITRATO DE PLATA 0.1 N
Pesar 1,7 gr. de nitrato de plata y disolverlo en 100 ml de Agua destilada.
Uso: Determinación de cloruros (formación de un precipitado blanco) Cuidados: Tóxico
1
y corrosivoNYLANDER
Pesar 2 gr. de nitrato dibásico de bismuto y adicionarle 4 gr. de tartrato de Na Y K. Se disuelve 100 ml de NaOH al 10%. Se hierve para disolución completa de la sal , se enfría y se separa por
filtración.
NINHIDRINA 0.2%
Pesar 0.2 gr. de Ninhidrina aforar a 100 ml con Etanol absoluto o acetona
Uso: Determinación del grupo amino de aminoácidos y proteínas
Cuidados
: Tóxico1
y corrosivo
NEGRO DE ERICROMO
Pesar 0.5 gr. de negro de ericromo y disolverlo en 100 ml de
alcohol etílico al 96 % (o triturarlo con solución al 1 % de cloruro de sodio)
Uso: Indicador
O-TOLUIDINA
Pesar 10 gr. de O-Toluidina y adicionarle 0.03 gr. de tiourea, luego disolverlos hasta completar a 1000 ml con ácido acético al 95 % Cuidados: Tóxico
1
ROJO CONGO 5%
Pesar 5 gr. de rojo congo y disolverlo en 100 ml de
H
2O
destilada
Uso: Para reconocimiento de lípidos Cuidados: Tóxicos
1
ROJO DE METILO
Pesar 0.1 gr. de rojo de metilo y completar a 100 ml de alcohol etílico al 96 %
Uso: Indicador Ácido Básico Cuidados: Tóxico
1
REACTIVO DE SCHIFF
Pesar 2 gr. de fucsina básica y disolverlo en 400 ml de H2O
hirviendo, enfriar a 50 °C luego añadir 10 ml de HCl 2N, 4 gr. de metasulfito de potasio, 1 gr. de carbón activado filtrar y adicionarle 10 ml de HCl 2N
Almacenar en frasco oscuro y en nevera SELIVANOFF
Pesar 0,05 gr. de resorcina (resorcinol) y disolverlo en 100 ml de Ácido Clorhídrico al 20%
Uso: Para reconocimiento de cetosas (fructosa) Cuidados: Tóxicos
1
corrosivosSOLUCION DE RINGER(Holfretter)
( S/N madre) A: Pesar 3,5 gr. de NaCl, adicionarle 0.05 de cloruro de potasio y 0.2 gr. de bicarbonato de sodio en 1000 ml de H2O
destilada
Holfretter al 10 % una parte de A + 9 partes de H2O destilada
(1:9)
SOLUCION PATRON DE LIPIDOS
Pesar 1 gr. de ácido esteárico y disolver en 100 ml de cloroformo Uso: Determinación de lípidos
Cuidados: Tóxico
1
corrosivosSOLUCION DE YODO DE RESERVA(0.1mol/l )
Pesar 3.6 gr. de KIO3 y 45 gr. de KI, disolverlo en 300 ml de H2O
destilada, añadir 9 ml de HCl 12M lentamente y llevar a 1000 ml de solución. Conservar a 4 °C.
Uso: Determinación de lípidos Cuidados: Tóxicos
SOLUCION FIJADORA PERMANENTE DE PLACAS MICROSCOPICAS
Proporción 1: 3
SOLUCION DE Mn 20 ppm A PARTIR DE KMnO4
Pesar 0.05745 gr. de KmnO4 y disolverlo en 1000 ml de H2O
destilada
Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría y calibración del espectrofotómetro
Cuidados: Tóxicos
SOLUCION 30 ppm DE K2Cr2O7 EN KOH 0.05 N
Pesar 2.8 gr. de KOH y 0.030 gr de dicromato de potasio (K2Cr2O7) y
llevarlo a 500 ml de solución con agua destilada. Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría Cuidados: Tóxico
1
corrosivosSOLUCION DE Mn 50 ppm A PARTIR DE KMnO4
Pesar 71.8 mg de KMnO4 y llevar a 500 ml de solución con H2O
destilada
Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría Cuidados: Tóxico
1
SACAROSA 0.1 M
3, 4 gr. de sacarosa y completar hasta 100 ml de solución con H2O
destilada
SUDAN III 0.2%
Pesar 200 mg de sudan III en 100 ml de alcohol etílico al 70%, se mezclan(calentando en baño de María a 90 grados centígrados) y se dejan en reposo durante 24 horas.
Uso: Para coloración de cutícula y gotas de grasa en células vegetales Cuidados: Tóxico
1
SUDAN III
1 gr. de sudan en polvo +30 ml de ácido acético y completar con 70 ml de H2O. (calentar para lograr una mejor disolución)
Uso: Para determinación de lípidos por solubilidad en muestras biológicas
Cuidados: Tóxico
1
SUSTRATO DE ALMIDON EN BUFFER pH 7
Pesar 13.3 gr. de Na2HPO4 y 4.3 gr. de ácido benzoito, llevar a 250
ml de H2O destilada, calentar y añadir 0.2 gr. de almidón y 5 ml de
H2O destilada y completar a 500 ml con H2O destilada y conservar a
4 °C.
SULFATO DE COBRE (CuSO4) 2000ppm
Pesar 2 gr. de CuSO4 y llevar 1000 ml de H2O destilada
Uso: Elaboración de curvas para espectrofotometría Cuidados: Tóxico
1
SULFATO 100 ppm
Pesar 0.1825 gr. de K2SO4 en un litro de H2O destilada
TIONINA
Pesar 0,1 gr. de tionina, adicionarle 10 ml de Etanol absoluto y completar a 100 ml con H2O destilada.
Uso: Para coloración de tejidos vegetales Cuidados: Tóxico
1
TOLLENS
Solución A: Preparar 50 ml nitrato de plata al 5 % en agua destilada
Solución B: Preparar 20 ml de NaOH al 10%
Mezclar Solución A y Solución B, luego adicionarle amoniaco concentrado hasta disolver el precipitado.
Guardar preferiblemente en frasco oscuro Uso: Para formación del espejo de plata Cuidados: Tóxico
1
corrosivosTURK
100 ml de Ácido acético al 3% + 3 gotas de azul de metileno TIMOL AL 1 %
Pesar 1 gr. de timol y disolverlo en 100 ml de alcohol etílico absoluto Uso: Indicador de pH
TIMOLFTALEINA
Pesar 0.1 gr. de tiomolftaleina en 100 ml de alcohol etílico al 50 %
TANRED
Solución A: 18 gr. KI + 200 ml de H2O destilada.
Solución B: 6.75 gr. de HgCl2 +200 ml de H2O destilada
La solución B se disuelve sobre la A, agitar hasta que
desaparezca el naranja , completar con ácido acético glacial hasta 500 ml.
Cuidados: Tóxico
1
VIOLETA DE METILO
Pesar 0.1 gr. de violeta de metilo en 10 ml de alcohol etílico al 20 % Uso: Indicador de pH
WRIGHT
Pesar 0.1 gr. de Colorante de Wright, pulverizarlo, adicionarle poco a poco 60 ml de Metanol Analítico y homogenizarlo, dejarlo en
maduración por lo menos ocho (8) días. Filtrarlo cada dos meses
Uso: Colorante para identificación de Células Sanguíneas Cuidados: Tóxico
1
Bibliografía
Merck, Merck KGaA, Reactivos y productos químicos 2005-2007. Frankfurter Strabe 250 64293 Darmstadt.GERMANY.
J.T.Baker.Catalog 2004-2005.Tyco Specialty Products.2003 Mallinckrodt Baker,Inc. Printed in USA.
Promega, Life Science Catalog-2004
Merck, Productos de Laboratorio para la práctica-Indicadores- Sustancias patrón primario.
Patiño, Pedro; Edgar Ramírez, Manuel de Preparación de Soluciones-Manual de Protocolos UDES 2002
Plumer, David; Introducción a la Bioquímica Práctica. McGraw Hill