RESEÑA REUNIÓN AMYS-2014
La reunión AMYS-2014, celebrada en el mes de junio, tuvo dos bloques de sesiones científicas, el primero dedicado a la infección por el papilomavirus humano y el segundo a las modernas técnicas diagnósticas microbiológicas basadas principalmente en la detección de ácidos nucleicos. En los enlaces de las distintas ponencias del programa se pueden ver amplios resúmenes de lo tratado.
Primer bloque
Los virus papiloma humanos (VPH) son un grupo de más de 150 virus relacionados, de ellos, más de 40 se pueden propagar fácilmente a través del contacto directo de piel o de mucosas durante el sexo vaginal, anal y oral. Las infecciones por este virus son las más comunes de trasmisión sexual. Más de la mitad de las personas sexualmente activas pueden estar infectadas con uno o más tipos de VPH en algún momento de sus vidas.
Los VPH de transmisión sexual se dividen en dos categorías: los de bajo riesgo (VPHbr), que no causan cáncer pero pueden causar verrugas en la piel o alrededor de los genitales o el ano, como, por ejemplo, los tipos de VPH 6 y 11 que causan el 90 por ciento de todas las verrugas genitales; y los de alto riesgo o VPH oncogénicos (VPRar), que puede causar cáncer, y dos de ellos, los tipos de VPH 16 y 18, son causantes de la mayoría de los cánceres por VPHar.
Una vez que un VPH entra en una célula epitelial, comienza a producir proteínas; dos de ellas pueden interfieren con las funciones
normales de la célula, permitiéndola crecer de manera incontrolada para evitar la muerte celular.
Muchas veces estas células infectadas son reconocidos por el sistema inmune y eliminadas, pero, a veces, no se destruyen y continúan creciendo con la posibilidad de desarrollar mutaciones que promueven aún más el crecimiento celular, lo que conduce a la formación de una
lesión de alto grado y, en última instancia, un tumor. El proceso puede tardar entre 10 y 20 años desde el momento de la infección inicial hasta que se forma un tumor; no
Dr. Córdoba, moderador de la primera sesión
Prof. Cisterna, presidente de AMYS y de la Reunión
obstante, las lesiones, incluso las de alto grado, no siempre conducen al cáncer. Se estima que algo menos del 50 por ciento.
La infección por VPHar supone alrededor del 5 % de todos los cánceres en el mundo; sin embargo, la mayoría de estas infecciones se producen sin síntomas, desaparecen al cabo de 1 a 2 años, y no causan cáncer, solo anormalidades celulares autolimitadas; sin embargo, algunas pueden persistir durante muchos años conduciendo a lesiones que pueden progresar a cáncer. Prácticamente todos los cánceres cervicales son causados por infecciones del VPHar. Los tipos VPH-16 y HPV-18, causan alrededor del 70 por ciento de todos los casos, y también cerca de la mitad de los cánceres de la vagina, vulva y pene. También se conoce que las infecciones por VPH causan cáncer de la orofaringe, más de la mitad de ellos vinculados al VPH-16. La incidencia de este cáncer se ha incrementado durante los últimos 20 años, especialmente entre los hombres.
Las infecciones por el VPH pueden ser detectadas por análisis de muestras celulares para ver si contienen ADN o ARN viral.
Los distintos ponentes analizaron y profundizaron en temas importantes de actualidad, como la utilidad de determinar los genotipos para valorar su potencial oncogénico, el pronóstico, diferenciar persistencia de reinfección, diagnóstico de infecciones mixtas, estudios epidemiológicos, evaluación de la eficacia de las vacunas profilácticas, evaluación de la eficacia terapéutica, etc.
Se presentaron datos concretos de estudios de la experiencia con el VPH en Aragón, Castilla y León, Comunidad Valenciana y Bolivia, y de la prevención integral con sus matices de prevención primaria, con la aplicación de vacunas que son seguras, efectivas y eficientes, la prevención secundaria por medio de métodos rediseñados de cribado (poblacional u oportunista) del cáncer de cérvix, usando nuevas técnicas más eficaces y eficientes.
En España se recomienda garantizar la equidad de actuación en cuanto a la prevención se refiere (19 estrategias diferentes de cribado del cáncer de cérvix) y modificar la estructura del cribado, siguiendo las
recomendaciones del Consenso 2014, a punto de aparecer, de las Sociedades Científicas Españolas para la Prevención Secundaria del Cáncer de Cuello de Útero.
Entre los métodos diagnósticos fue interesante la presentación del sistema Viper LTTM Y BD OnclarityTM HPV Assay, cerrado y automático,
como una nueva solución innovadora al diagnóstico del HPV para los laboratorios de microbiología y otros, que mejora la flexibilidad y la eficacia de los mismos, y, por lo tanto, la aplicación clínica.
Cómo informar los resultados de las pruebas de laboratorio de VPH fue un tema debatido ampliamente. Las conclusiones fueron que hay que evitar emisión de resultados ambiguos, no trasladar resultados brutos del analizador al Sistema de Informes del Laboratorio, traducir a las reglas de consenso, verificar periódicamente los informes de VPH con los nuevos consensos de riesgo oncogénico y usar expresiones claras y entendibles, todo enfocado a la utilidad clínica.
Segundo bloque
La sesión de la tarde, estuvo dedicada a las modernas técnicas diagnósticas microbiológicas basadas principalmente en la detección de ácidos nucleicos.
Se analizó en profundidad la aplicación MALDI-TOF (Matrix-Assisted Laser
Desorption/Ionization), técnica de ionización suave, que utiliza en espectrometría de
masas y permite el análisis de biomoléculas, como las proteínas, péptidos, azúcares, biopolímeros y lípidos, y moléculas orgánicas grandes que tienden a hacerse frágiles y fragmentarse cuando son ionizadas por métodos más convencionales. Se presentaron resultados de la aplicación a la detección de micobacterias y bacterias en sangre (hemocultivos) y en orinas, con algunas sugerencias propias de los ponentes fruto de su experiencia en los distintos laboratorios, que mejoran los resultados publicados previamente.
Por otra parte, fue expuesto con todo detalle un estudio de la situación epidemiológica mundial y española de las carbapenemasas, causa del aumento del perfil de resistencias en los BGN, así como sus tipos, los diferentes sistemas de detección, fenotípicos, diferenciales cromogénicos, basados en pruebas de ácidos nucleicos. Se concluyo que la detección de este tipo de microorganismos y sus
M. Basaras, secretaria científica J.A. Pilas coordinador técnico
resistencias en el laboratorio es compleja, pero prioritaria, y que los test fenotípicos pueden proporcionar una aproximación para la detección de carbapenemasas, para posterior confirmación genotípica de los determinantes de resistencia. Los sistemas comerciales de PCR a tiempo real o microarray han permitido el acceso a estos sistemas genotípicos, obteniéndose resultados con gran rapidez y estableciéndose así medidas preventivas que limiten la difusión de este tipo de mecanismos de resistencia.
Un tema a tener en cuenta es que muchas de las bacterias productoras de carbapenemasas no confieren grados de resistencia detectables por los test fenotípicos habituales por lo que no son seguros y ni rápidos. El uso de MALDI-TOF podría ser útil en esta situación.
Con el MALDI-TOF se ha avanzado especialmente en la detección de β-lactamasas. Los antibióticos β-lactámicos tras la hidrólisis por β -lactamasas del anillo β-lactámico dan lugar a productos de distinta masa (adición de un residuo de H20, incremento en la masa de 18 Da), además algunos β-lactámicos son decarboxilados (diferente masa). En los espectros (o huella proteica) de la molécula original aparecen los picos correspondientes al β-lactámico y sus sales, mientras que en los espectros obtenidos tras incubar una suspensión bacteriana con el antibiótico (1-3 h), en caso de hidrólisis, se producirá la desaparición de los picos del β-lactámico o bien se observarán los picos de los productos de degradación. Se ha comprobado que hay buena correlación con técnicas moleculares. Se piensa que es un sistema potencialmente importante para detectar en tiempo real brotes de infecciones nosocomiales y que son necesarios procedimientos uniformes validados, adaptados a cada tipo de cepa estudiada que permitan incluir este sistema en el flujo de trabajo habitual de los laboratorios de microbiología.
Dr. Ortiz de Lejarazu, moderador 2ª sesión
El BD MAXTM es un sistema de diagnóstico molecular al alcance de todos, que ofrece una ruta eficiente para la mejora de los resultados clínicos mediante la combinación y la automatización de la extracción y el termociclado, en una plataforma única capaz de ejecutar, de manera flexible, tanto pruebas aprobadas por las agencias reguladoras (vg. FDA) como ensayos abiertos definidos por el usuario. Tiene la posibilidad de incorporar ensayos distintos en un mismo proceso y es simple ya que, independientemente de la muestra y el diagnóstico a
realizar, todos los ensayos tienen unos reactivos base iguales. El flujo de trabajo es semi-continuo ya que una vez finalizada la extracción y mientras se está ejecutando la PCR, es posible programar otro bloque de procesos sin interferir con el inicial. La velocidad de
respuesta se deriva del mayor número de pruebas realizadas y resultados obtenidos de forma simultánea. Son muchas las pruebas diagnósticas o de detección de resistencias, gran parte en forma de paneles, diseñadas o adaptadas al sistema, entre otras Helicobacter pylori, Bordetella pertusis y B. parapertusis, Clostridium difficile,
Salmonella spp, Shigella spp, Campylobacter spp. toxina de Shiga, SARM, M. tuberculosis, de Mycoplasma pneumoniae y Legionella pneumophila, Chlamydia trachomatis y Neisseria gonorrhoeae Cryptosporidium spp., Trichomonas vaginalis, Giardia lambia, Entamoeba histolytica, citomegalovirus, norovirus, rotavirus, virus
Influenza A y B; y carbapenemasas KPC, NDM, OXA-48
Por último, ya avanzada la tarde, se insistió en que la identificación rápida de microorganismos en el laboratorio de microbiología clínica es de gran valor para el diagnóstico precoz y la selección óptima del tratamiento del enfermo grave para las infecciones causadas por distintos microorganismos; y también la necesidad de valoraciones críticas de las nuevas tecnologías diagnósticas y su repercusión. Se presentó un nuevo método para el diagnóstico de infecciones graves a partir de muestra directa basado en tecnología molecular innovadora, IBIS (Ibis Biosciences), cuyo objetivo es desarrollar una plataforma que puede identificar rápidamente una amplia gama de organismos infecciosos, sin saber de antemano cuales pueden estar presentes en una muestra.
Los instrumentos PCR/ESI-MS, usando la plataforma IRIDICA, miden la relación de masa / carga (m / z) de los amplificados generados por PCR multiplex que se dirigen a varios loci dentro de los genomas bacterianos o fúngicos. El método se dirige tanto a regiones génicas bien conservadas como a las específicas de
especie para identificar los microbios basándose en la composición de bases de
amplicones relacionadas con una base de datos conocida de microorganismos. Estos
instrumentos son bien conocidos por su habilidad para detectar directamente e identificar bacterias y su asociación con los genes que codifican resistencias a los antibióticos, así como micobacterias, hongos y virus de muestras o aislados clínicos; y todo en muy poco tiempo con las ventajas de adecuar la terapia correcta a los enfermos y ahorro en costes tanto directos como indirectos. PCR/ESI-MS también tiene gran utilidad en la vigilancia y control de las infecciones.
La Reunión AMYS 2014, terminó con la Asamblea General de socios, pero ese es otro tema.