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Determinación de grupo sanguíneo (1)

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Academic year: 2020

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LAVADO DE ERITROCITOS.

El objetivo de este procedimiento es eliminar el plasma o suero y otras sustancias o elementos formes presentes para de esta manera solo obtener células eritrocitarias.

Materiales y reactivos.

Aguja para vacutainer.

Tubo para vacutainer con anticoagulante EDTA (tapa morada). Torundas de algodón con alcohol.

Ligadura.

Alcohol, benzal o cloro para desinfectar la mesa. Solución salina fisiológica.

Tubos de ensaye Pipetas Pasteur. Perilla de látex Parafilm.

Recipiente con cloro para inactivación de material contaminado.

Técnica.

1. Obtenga una muestra de sangre con vacutainer.

2. Asegúrese de mezclar perfectamente la muestra de sangre con el anticoagulante (mezclar lentamente para que no se hemolise su muestra).

3. Centrifugar la muestra de sangre a 3500 rpm durante 5 minutos. 4. Separe el paquete globular del plasma.

5. En un tubo de ensaye perfectamente limpio coloque una pequeña cantidad de eritrocitos (0.5 ml aproximadamente).

6. Adicione solución fisiológica hasta el 50% de la capacidad del tubo.

7. Mezcle hasta desprender totalmente el paquete globular del tubo de ensaye.

8. Adicione nuevamente solución salina fisiológica hasta un 80 % de la capacidad del tubo de ensaye. 9. Tape el tubo con parafilm y mezcle perfectamente con movimientos suaves.

10. Centrifugar a 1500 rpm durante 2 minutos.

11. Decante el sobrenadante dejando en el tubo únicamente el paquete globular. 12. Repita 2 veces más el procedimiento desde el punto 6 hasta el punto 11.

13. Una vez que lavo tres veces los eritrocitos prepare con ellos una solución al 5% con solución salina fisiológica.

Solución de eritrocitos al 5%

En un tubo de ensaye coloque 5 gotas de eritrocitos lavados más 95 gotas de solución salina fisiológica. Otra forma de hacer una solución de eritrocitos al 5% de forma aproximada es: en el tubo en donde tienes los eritrocitos lavados ya sin SSF(decantados), adiciona nuevamente SSF hasta obtener una solución de

eritrocitos color sandia.

BIBLIOGRAFIA

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Asociación Mexicana De Química Clínica A.C. Luis Moran Villatoro...

Determinación de grupo sanguíneo

Sistema ABO

Fue el primero de los sistemas de grupos sanguíneos descubiertos y continua siendo el más importante con relación a la transfusión sanguínea, pues la compatibilidad ABO es la base fundamental sobre la cual descansan todas las demás pruebas pre transfusionales.

El sistema ABO fue descubierto en el año de 1900 por Karl Landsteiner, quien observo que los glóbulos rojos humanos podían ser clasificados en tres grupos (A, B, O) de acuerdo a la presencia de antígenos específicos en la membrana del eritrocito. El cuarto grupo (AB), de menor frecuencia fue descubiertito por Von Decastello y Sturly en el año de 1902.

En cada uno de los grupos descubiertos, los hematíes tienen en su superficie una sustancia o proteína (antígeno), que es diferente a cada grupo.

El grupo A tiene el antígeno A, el grupo B tiene el antiguo B, el grupo AB, tiene el antígeno A y el antígeno B y el grupo O no presenta antígenos.

La herencia en el sistema ABO es reconocida de acuerdo a las leyes de Mendel y se hace mediante cuatro genes comunes, A1, A2, B y O y una serie de alelos menos frecuentes.

La presencia del antígeno A o B en los glóbulos rojos puede ser determinada mediante pruebas serológicas, empleando los antisueros apropiados y de esta manera, se pone en evidencia la existencia del gen que controla la presencia del correspondiente antígeno.

Determinación de Grupo sanguíneo

Es un método empleado para definir qué tipo de sangre tiene una persona. El tipo de sangre depende de si hay o no ciertas proteínas, que actúan como antígenos, en los glóbulos rojos (grupo directo) o si hay anticuerpos en el plasma o suero de la sangre de la persona (grupo inverso).

La sangre humana se clasifica en cuatro grupos o tipos bajo el sistema ABO:

Tipo A

Tipo AB

Tipo B

Tipo O

La determinación de grupo sanguíneo comprende dos partes:

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c) Las dos pruebas se practican simultáneamente porque ellas se complementan y de esta forma se verifica los resultados.

Nota: las pruebas deben realizarse a temperatura ambiente (20 a 24 ºC) o menos. La incubación debilita la reacción.

Determinación de grupo sanguíneo directo (prueba en tubo)

La determinación en tubo es más específica ya que solamente se utilizan eritrocitos, los cuales ya han sido lavados (libres de plasma).

Materiales y reactivos.

 Tubos de ensaye

 Pipeta Pasteur

 Agujas para vacutainer

 Tubos para vacutaines con tapa lila o roja

 Ligadura  Barrilito

 Solución salina fisiológica (SSF)  Torundas de algodón con alcohol  Antisuero anti A

 Antisuero anti B  Antisuero anti AB

Equipo de laboratorio

Centrifuga

Técnica

Lavar eritrocitos con SSF (hacer tres lavados)

Preparar una solución de eritrocitos al 5% (solución color sandia): colocar 250 micro litros de eritrocitos lavados más 4750 micro litros de SSF y mezclar.

En el tubo A colocar 2 gota de la solución de eritrocitos problema al 5% y adicionar 2 gotas del reactivo anti A.

En el tubo B colocar 2 gotas de la solución de eritrocitos problema al 5% y adicionar 2 gotas del reactivo anti B.

En el tubo AB colocar 2 gotas de la solución de eritrocitos problema al 5% y adicionar 2 gotas del reactivo anti AB.

Mezclar los tubos y centrifugar a 1500 RPM durante 30 segundos.

Agitar suavemente para desprender el botón de eritrocitos del fondo del tubo y buscar aglutinación macroscópica.

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Aglutinación con el reactivo: Anti A Anti B Anti AB

Grupo A + - +

Grupo B - + +

Grupo AB + + +

Grupo O - -

-El antígeno A puede presentarse bajo dos formas diferentes: A1 y A2

Cuando el grupo sanguíneo es tipo A se deberá determinar el subgrupo empleando el reactivo lectina.

Determinación del subgrupo A

El subgrupo A1 es un subgrupo del grupo A y fue descubierto en 1910. Anti A1 normalmente es no reactivo a37oC. Aproximadamente el 78 % de la población del grupo A es A1 y el 22% es A2; para las personas que son del grupo AB se aplican proporciones similares.

Los reactivos provocan la aglutinación directa de los hematíes que contengan el antígeno A1, después de la centrifugación. La ausencia de aglutinación es indicativo de la inexistencia del antígeno A1.

Materiales y reactivos.

 Tubos de ensaye

 Pipeta Pasteur

 Agujas para vacutainer

 Tubos para vacutainer con tapa lila o roja

 Ligadura

 Barrilito

 Solución salina fisiológica (SSF)  Torundas de algodón con alcohol  Reactivo anti A1 lectina

Equipo de laboratorio

Centrifuga

Técnica.

En un tubo colocar 2 gotas de eritrocitos lavados en suspensión (5%)

Adicionar una gota del reactivo lectina anti A1

Mezclar y centrifugar a 1500 RPM durante 30 a 60 segundos.

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Interpretación de resultados.

Ausencia de aglutinación = A2

Presencia de aglutinación = A1

Determinación de grupo sanguíneo inverso

El sistema ABO comprende dos partes: el grupo directo en donde se determinan los antígenos presentes en los glóbulos rojos y el grupo inverso en donde se determinan los correspondientes anticuerpos presentes en el suero.

Bajo condiciones normales, todos los individuos poseen los anticuerpos contra los correspondientes antígenos A y B, que no están presentes en sus propias células, lo cual constituye la base fundamental para la determinación del grupo ABO, así las pruebas celulares evidencian a los antígenos (grupo directo) y las pruebas séricas a los anticuerpos (grupo inverso). Ambas pruebas se complementan.

El grupo A tiene el anticuerpo B, el grupo B tiene el anticuerpo A el grupo AB no tiene anticuerpos y el grupo O tiene el anticuerpo A y el anticuerpo B

Materiales y reactivos.

 Tubos de ensaye

 Pipeta Pasteur

 Agujas para vacutainer

 Tubos para vacutainer con tapa lila o roja

 Ligadura  Barrilito

 Solución salina fisiológica (SSF)  Torundas de algodón con alcohol  Solución de eritrocitos lavados al 5%

tipo A

 Solución de eritrocitos lavados al 5% tipo B

Equipo de laboratorio

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Muestra biológica.

Suero o plasma.

Técnica.

Marcar dos tubos: uno como A y el otro como B

En el tubo A colocar una gota de la suspensión de eritrocitos al 5% tipo A más dos gotas del suero o plasma problema.

En el tubo B colocar una gota de la suspensión de eritrocitos al 5% tipo B más dos gotas del suero o plasma problema.

Mezclar los tubos y centrifugar a 1500 RPM durante un minuto o a 3400RPM por 30 segundos.

Agitar suavemente el tubo para desprender el botos de eritrocitos del fondeo y buscar aglutinación macroscópica

Interpretación del resultado

Aglutinación con eritrocitos A

Aglutinación con eritrocitos B

Grupo A - +

Grupo B +

-Grupo AB -

-Grupo O + +

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Determinación del factor Du

El sistema RH es, después del ABO, el más importante de los sistemas para la clasificación de la sangre humana, esto debido a las complicaciones clínicas que se pueden presentas en la transfusión sanguínea y en la etiopatogenia de la enfermedad hemolítica del recién nacido.

Sistema Rh

En el año de 1940, se detecta la existencia de un nuevo antígeno en la membrana de los hematíes de la mayoría de la población. Este antígeno

es llamado Rh, ya que las primeras investigaciones se llevan a cabo experimentando con el simio del tipo Macaccus Rhesus. Se observó que al inyectar hematíes humanos a estos simios, producían un anticuerpo que era capaz de reaccionar aglutinando los hematíes en un 85% de la población.

Se denominan Rh positivo los hematíes que son aglutinados por este anticuerpo y tienen, por lo tanto, el antígeno Rh (D) en la superficie.

Se denomina Rh negativos a los que no son aglutinados y que, por lo tanto, no poseen el antígeno Rh en su superficie.

De la misma manera que en el sistema ABO, en el sistema Rh no se puede transfundir el antígeno Rh a las personas que no lo tienen, ya que podría originar la producción de anticuerpos Rh en el receptor. Los sujetos Rh negativos solo podrán recibir sangre de donantes Rh negativos.

Este sistema explica la enfermedad hemolítica del recién nacido. Esta enfermedad, de aparición habitual en el segundo hijo de madres RH negativas, podría incluso llegar a provocar la muerte de este.

Nota. A diferencia de la clasificación ABO, en la clasificación Rh no existen anticuerpos en el suero de las personas RH, a menos que la persona sea Rh negativo y haya sido inmunizada (como consecuencia de un embarazo cuyo producto sea Rh positivo o se le haya practicado una transfusión sanguínea con un Rh positivo), desarrollando anticuerpos contra el antígeno del cual ella carecía.

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denotan la presencia del antígeno en la membrana del eritrocito; las sangres que no muestran aglutinación son denominadas Rh negativo y expresan la ausencia del antígeno D.

Determinación del factor Rh en tubo.

Esta prueba es más específica que la prueba en placa ya que se usan eritrocitos lavados libres de otras sustancias que podrían interferir en la prueba.

Materiales y reactivos.

 Tubos de ensaye

 Pipeta Pasteur

 Agujas para vacutainer

 Tubos para vacutainer con tapa lila o roja

 Ligadura

 Barrilito

 Solución salina fisiológica (SSF)  Torundas de algodón con alcohol  Antisuero anti D o Anti RH  Reactivo de Coombs (anti Ig G)

Equipo de laboratorio.

Centrifuga

Baño María

Muestra biológica.

Suspensión de eritrocitos al 5%

Técnica.

Colocar una gota de eritrocitos problema en solución al 5%

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Mezclar y centrifugar a 1500 RPM durante un minuto

Agitar suavemente el tubo para desprender el botón de eritrocitos del fondo y buscar aglutinación macroscópica.

Presencia de aglutinación= Rh positivo

Ausencia de aglutinación= investigar variante Du

Determinación de la variante DU.

No todos los glóbulos rojos pueden ser clasificados como Rh positivo o Rh negativo mediante las pruebas de aglutinación directa con los sueros anti Rh. La mayoría de las muestras de sangre dan una reacción de aglutinación macroscópica, muy definida y clara, inmediatamente después de la centrifugación, estas células pueden ser fácilmente clasificadas como Rh positivo. Otras, no muestran aglutinación directa, sin embargo, no pueden ser clasificadas como Rh negativo, porque el antígeno D puede estar presente en tales células pero débilmente expresado, por lo que se requieren de pruebas adicionales como la anti globulina para poderlo demostrar. Estos tipos de reactividad son debidos a variantes del antígeno D, y los individuos cuyos globulos rojos exhiben tal comportamiento son clasificados como Du.

Importancia de la variante Du

No existe un anticuerpo anti Du que permita detectar esta variante. Esta se demuestra con la prueba de anti globulina, después de que las células han sido incubadas con el suero anti D. siempre se ha dicho que la sangre Du positivo no debe ser administrada a un receptor Rh negativo, porque estas células, aunque tengan el antígeno D pobremente expresado, pueden causar una respuesta inmunológica.

Técnica.

No aglutinación en la determinación del factor RH

Incubar a 37ºC durante 30 minutos

Mezclar y centrifugar a 1500 RPM durante un minuto

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Si no se presenta aglutinación, lavar tres veces con solución salina fisiológica.

Decantar perfectamente el último sobrenadante, secando el borde del tubo con papel secante

Adicionar 2 gotas del reactivo de Coombs

Mezclar y centrifugar a 1500RPM durante 30 a 60 segundos

Interpretación del resultado

Presencia de aglutinación = Variante Du

Ausencia de aglutinación = Factor Rh negativo

La variante Du es poco frecuente entre los individuos blancos, pero común entre la raza negra (22%)

Los individuos Du poseen en antígeno Rh (D) en forma débil, en consecuencia funcionan como donadores de Rh positivos y receptores de Rh negativo.

En las pruebas pre transfusionales es obligatorio, conjuntamente con la determinación del sistema ABO, establecer la presencia o ausencia del factor RH, tanto en el donante como en el receptor, para asegurarse que el paciente Rh negativo reciba este tipo de sangre. Es igualmente importante la clasificación de la madre, para prevenir la inmunización en aquellas que son RH negativo, mediante la aplicación oportuna de la inmunoglobulina anti Rh en los casos que así lo requieran.

Referencias

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