Resistencia Bacteriana en el Ecuador

Resistencia

Bacteriana en el Ecuador

Iliana Alcocer Negrete, Dra.

Pontificia Universidad Católica del Ecuador Escuela de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Microbiología

Simposio interdisciplinar de investigación, Postgrados y vinculación con la comunidad

Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas

Año 2004

Laboratorio de Microbiología

Escuela de Ciencias Biológicas

Interdisciplinaridad

ESCUELA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

FACULTAD DE MEDICINA

Iliana Alcocer Jeannete Zurita

Confianza Apoyo mutuo Grupos de trabajo Apoyo de la PUCE

Año 2009

Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas

Medicina

Biología

Biología Biología

Biología Bioanálisis

Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas

Chef DRIII System

Para análisis de clonalidad bacteriana por electroforesis de

campo pulsado

1. PUCE

2. San Francisco 3. INH

Laboratorio de Microbiología Escuela de Ciencias Biológicas

Sistema de fotodocumentación

Molecular Imager Gel Doc XR+ BioRad

Laboratorio de Microbiología

Escuela de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Microbiología

Escuela de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Microbiología

Escuela de Ciencias Biológicas

Laboratorio de Microbiología

Escuela de Ciencias Biológicas

Antimicrobianos

• Los antimicrobianos son compuestos

relativamente sencillos, producidos por bacterias u hongos que atacan

específicamente a las bacterias.

• Tienen capacidad, en baja concentración, de inhibir el crecimiento bacteriano

• Pueden ser naturales, sintéticos o semisintéticos.

Antimicrobianos

Alexander Fleming, 1928

Desde el descubrimiento de la penicilina, se han descubierto una docena de nuevos tipos de antimicrobianos y optimizado o sintetizado cerca de una

centena.

1940

Cepas resistentes raras

Cepas resistentes predominantes Exposición a

antimicrobianos

Resistencia bacteriana

Resistencia

 Introducción en la terapia

 Aislamiento de cepas resistentes

 Capacidad adaptativa de las células bacterianas

 Alta tasa de diseminación por transferencia horizontal de genes de resistencia

Patógeno

Infección

Uso de

antimicrobianos Resistencia a los

antimicrobianos

Patógeno Resistente

Prevención de la infección

Diagnóstico y tratamiento eficaces

Uso acertado

Prevención de la transmisión

Resistencia bacteriana

Preocupación mundial

• Resistencia a betalactámicos:

–

BLEEs –AMP-C

–Carbapenemes

• Resistencia a quinolonas

• Resistencia a aminoglucósidos

BLEE

Enzimas capaces de conferir a la bacteria resistencia a penicilinas, cefalosporinas de primera, segunda, tercera e inclusive cuarta generación y a los monobactámicos como el aztreonam, pero no a cefamicinas ni carbapenémicos

Diseminación de la

Resistencia bacteriana

Beta lactamasas de espectro extendido

EMAs

1. acetiltransferasa (AAC),

2. fosfatidil transferasa (APH) y

3. adenil transferasa (ANT o AAD).

Diseminación de la

Resistencia bacteriana

Enzimas modificadoras de aminoglucósidos

Klebsiella

pneumoniae Pseudomonas aeruginosa

IMIPENEM

MEROPENEM

AMIKACINA GENTAMICINA

ESTREPTOMICINA TOBRAMICINA

Serratia

marcenses Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas

aeruginosa Klebsiella

pneumoniae ^IMIPENEM _MEROPENEM

Resistencia Adquirida

Tipo Serin-β-lactamasas

(Residuo de Serina en el sitio activo)

Metalo-b-lactamasas

(Cationes divalentes tipo Zinc)

Clase A

SME NMC SFC

Clase D

OXA

Clase B

IMP VIM SPM

GIM SIM NDH

Carbapenemasas

Clase A

KPC GES IMI

E. cloacae S.

marcenscens

K. pneumoniae P. aeruginosa

Acinetobacter

baumannii Acinetobacter

baumannii S. marcescens

P. aeruginosa

Especies patógenas:

Klebsiella pneumoniae

- Infecciones de

tracto respiratiorio - Infección de vías

urinarias

- Sistema nevioso osteoraticular

- Sepsis

Especies patógenas:

Escherichia coli

- Infección de vías urinarias

- Sepsis

- Meningitis - Enfermedad

diarreica

Especies patógenas:

Serratia marcescens

- Infecciones de tejidos

- Sepsis

Especies patógenas:

Pseudomonas aeruginosa

- patógeno oportunista

principalmente en ambientes

hospitalarios

Materiales y

métodos

Hospitales participantes de la REDNARBEC y laboratorios interesados

1. Carlos Andrade Marín 2. De las Fuerzas Armadas 3. De la Policía

4. Baca Ortiz 5. Enrique Garcés 6. Solca Quito 7. Vozandes Quito 22. Patronato San José 23. Clínica la Merced 24. Clínica Guadalupe

8. Vozandes Shell

9. Homero Castañer

10. Solca Cuenca 11. Clínica Santa Ana 25. Clínica del Río Cuenca

12. Vicente de Paúl 13. IESS Ibarra

14. Centro Médico Ibarra

15. Rodríguez Zambrano 16. Icaza Bustamente

17. Guayaquil 18. Roberto Gilbert 19. Luis Vernaza 20. De infectología 21. Alcívar

Población bacteriana

•2792

– Escherichia coli

– Klebsiella pneumoniae – Serratia marcescens – Enterobacter cloacae

– Enterobacter aerogenes – Proteus mirabilis

– Citrobacter freundii

– Staphylococcus aureus – Pseudomonas aeruginosa – Shigella spp.

IIdentificación genotípica

Identificación de genes de resistencia y determinantes genéticos relacionados en aislados entéricos de la Colección Bacteriana Quito Católica CB-QCA

Identificación de genes por PCR

Secuenciamiento

DETECCIÓN DE GENES POR PCR Y SECUENCIAMIENTO

 BLEE: bla_SHV, bla_TEM, bla_PER, bla_CTX-M y AmpC

 CARBAPENEMASAS: bla_KPC, bla_GES, bla_VIM, bla_IMP bla_SPM

 EMAs: aac(3)-IIa, aac(6’)-Ib, ant(2”)-Ia,,

 Resistencia a quinolonas: qnr

 IntI y RV de integrones clase I

Diseño de primer y padronización para detección de genes

María Fernanda Yauri David Ortega Pedro Barba

Genotipaje de la resistencia a antibióticos en

aislados clínicos de Klebsiella pneumoniae

productores de β- lactamasas de

espectro extendido (BLEE)

David Ortega Paredes

Confirmación fenotípica de producción de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE)

• Prueba confirmatoria de producción de BLEE: Positivo aumento < 5 mm en el halo de inhibición de cefalosporina de tercera generación / clavulanato

Detección de genes en Klebsiella pneumoniae

100.0

0.0

•bla_SHV cromosómico

•Componente de ADN cromosómico en ADN plasmidial

Detección de genes en Klebsiella pneumoniae

Primer lugar en la categoría pregrado universidades el área Ciencias de la Salud y el Segundo lugar dentro de todas las áreas en la categoría Pregrado Universidades en la

IX Feria Nacional de Ciencia, Tecnología e Innovación (FENACYT 2008)

Búsqueda de BLEE y carbapenemasas en enterobacterias

Diana Muñoz Gabriela Yépez Ana María Gómez

382

301

124

233

1075

232

107

212

69

5 0

200 400 600 800 1000 1200

Carlos Andrade Marín General De Las Fuerzas Armadas No.1 Solón Espinosa, Solca Quito De Niños Baca Ortiz Vozandes Gineco-Obstétrico Isidro Ayora De La Policía Nacional Pablo Arturo Suárez Enrique Garcés Castañier en Azogues

Número de aislados

Bacterias entéricas de origen clínico

17

7 8

11

34

2

9

13

1

49 49

16

33 34

5 4

19

15

0 10 20 30 40 50

60 Comunitarias

Hospitalarias

12,1 / 2693/325

17,3

18,9 19,4

18,9

6,3

3,0

13,1

15,1

23,2

0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0

Carlos Andrade Marín General De Las Fuerzas Armadas No.1 Solón Espinosa, Solca Quito De Niños Baca Ortiz Vozandes Gineco-Obstétrico Isidro Ayora De La Policía Nacional Pablo Arturo Suárez Enrique Garcés

Porcentaje

Porcentaje de BLEE en bacterias

entéricas

Identificación molecular de KPC

Control positivo Primer caso Azogues Segundo caso Guayaquil Tercer caso Cuenca Control negativo

738 pb

Pseudomonas aeruginosa

48/12 9 37%

RESISTENCIA A CARBAPENEMES

Aislados Resistentes a Carbapenemes

78/129 61%

RESISTENCIA A AMINOGLUCÓSIDOS

Aislados Resistentes a Aminoglucósidos

Identificación de bla

en aislados de Pseudomonas

aeruginosa

31% (44/129)

Identificación de bla

en aislados de Pseudomonas

aeruginosa

5,4% (7/129)

Identificación de bla_VIM y bla_IMP en aislados de Pseudomonas aeruginosa

INTEGRONES

3,1%

7,8%(10/129) bla_IMP 22,5% (29/129)

bla_VIM

Amplificación de genes EMAs en

Pseudomonas aeruginosa

27/129 (20,9%)

6/129 (4,7%) 13/129

(10,1%) 21/129

(16,3%)

Integrones Clase I

Total

Aislados Presentan Integrón

Clase I

Porcentaje

129 79 61,2%

% genes productores de carbapenemasas presentes Integrones

Clase I

21,7%

Búsqueda de carbapenemasas en enterobacterias

Camila Cilveti Andrea León Nathaly Espinel

Identificación molecular de BLEE

TEM SHV CTX-M

862pb 858pb 585pb

Identificación molecular de

carbapenemasas: serin-beta-lactamasas

A

bla_KPC bla_GES

738 pb 864 pb

Identificación molecular de

carbapenemasas: metalo-beta-lactamasas

A

bla_VIM bla_IMP

Número de aislamientos entéricos positivos para los genes de análisis

281

162

98

125

0

27

5 1 4

101

51

9 16

0 0 0 0 0

0 50 100 150 200 250 300

Total blaCTX blaTEM blaSHV blaPER bla KPC bla GES bla IMP bla VIM

Total

Hospitalarios Total

Comunitarios

Total bla_CTX bla_TEM bla_SHV bla_PER bla_KPC bla_GES bla_IMP bla_VIM

Número de aislamientos

Casos

bla con _KPC n

Azogues Guayaquil

Quito

Cuenca 1

2

3 4 5 6 7 8

9

10 11

12

13

14-22

Klebsiella pneumoniae Serratia marcescens Klebsiella oxytoca Enterobacter aerogens Enterobacter cloacae

Genotipificación de KPC por campo pulsado

Quito

8 11

Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca

Casos

bla con _GES n

15 14

Cuenca

Quito

Serratia marcescens

Casos

bla con _IMP n

Cuenca

Quito

Serratia marcescens

Casos

bla con _VIM n

Cuenca

Morganella morganii

16 19 17

Klebsiella pneumoniae

Conclusiones

CONCLUSIONES

• Dentro de la población de estudio se encontró alta resistencia a betalactámicos, aminoglucósidos y carbapenemes y no registraron resistencia a

polimixina B, colistina, tigeciclina ni fosfomicina.

• Los resultados confirman que en nuestro medio hay una evidente asociación entre producción de BLEE y resistencia a otras familias de antibióticos, en

especial quinolonas, aminoglicósidos y carbapenemes.

• Existe una relación entre la presencia de plásmidos y de integrones con la alta resistencia

antimicrobiana.