INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
CENTRO INTERDISCIPLINARIO DE INVESTIGACIÓN PARA EL DESARROLLO INTEGRAL REGIONAL
UNIDAD SINALOA
Desarrollo embrionario y metamorfosis del caracol chino Hexaplex (Muricanthus) nigritus
(Philipi, 1845) en condiciones de laboratorio
TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRÍA EN
RECURSOS NATURALES Y MEDIO AMBIENTE
PRESENTA
FÁTIMA YEDITH CAMACHO SÁNCHEZ
GUASAVE, SINALOA, MÉXICO, DICIEMBRE DEL 2012
RECONOCIMIENTO A PROYECTOS Y BECAS
El trabajo de tesis se desarrolló en el Departamento de Acuacultura del Centro Interdisciplinario de Investigación para el Desarrollo Integral Regional (CIIDIR) Unidad Sinaloa del Instituto Politécnico Nacional (IPN). El alumno/a Fátima Yedith Camacho Sánchez fue apoyado con una beca CONACYT con clave 367499.
El autor agradece el apoyo económico brindado por el Instituto Politécnico Nacional como becaria del Programa Institucional de Formación de Investigadores (PIFI) y por el apoyo económico brindado a través de la Beca Tesis del programa de becas institucionales de posgrado.
Un agradecimiento al COECYT, por el apoyo para la terminación de esta tesis.
Un poco de ciencia aleja de Dios, pero mucha ciencia devuelve a él.
Louis Pasteur
DEDICATORIA
A mi hijo Israel.
AGRADECIMIENTOS
Este trabajo no hubiera sido posible sin la participación de diversas personas que me brindaron su apoyo y me han estimulado durante este tiempo. Aún con el riesgo de olvidar a alguien, me gustaría citar de manera especial:
A mis directores de tesis: cDr. Andrés Martin Góngora Gómez y Dr.
Wenceslao Valenzuela Quiñonez. Gracias por la oportunidad que me dieron de trabajar y aprender de ustedes.
A los miembros de mi comité tutorial: Dra. Ana Laura Domínguez Orozco, M. en C. Ana Elsi Ulloa Pérez y Dr. Héctor Manuel Esparza Leal.
Gracias por sus comentarios en cada tutorial los cuales me ayudaron a mejorar mi trabajo de tesis.
Al M.en C. Carlos Miguel Cervantes Cervantes por su apoyo en el laboratorio y por la gran amistad que me brindo. Al M en C. Luis Daniel García Rodríguez, gracias por su valiosa ayuda y por haber compartido sus conocimientos conmigo. Al equipo administrativo: Lic. Roberto Urías y Lic. Dorín Ortiz, por su excelente disposición durante la maestría para cada trámite que necesitaba, muchas gracias. A Tino, gracias por su ayuda técnica, siempre con amabilidad.
A mis Compañeros de Laboratorio: Brenda, Lizeth, Yuli, Tere, Vane, Ana Luisa, Juan Luis, Neto, Fer, Sabyel, gracias por cada momento compartido y por su amistad.
Mis Amigas: Lucy, Judith, gracias por su sincera y leal amistad, después de tantos años, por sus consejos y palabras de ánimo siempre, a ti también Abraham, gracias amigo.
Sheila, Elizeth, Magnolia, John, José Luis, Styll, gracias por permitirme conocerlos, por todas las locuras que compartimos y me hicieron reír, por todos los favores, pero sobre todo gracias por aceptarme como su amiga es lo mejor que me llevo del CIIDIR espero contar con ello siempre.
A mis Papás: no tengo palabras para agradecerles todo su apoyo incondicional, los amo.
A mis Hermanas: Marisol y Grisel, las quiero mucho gracias por todo.
A mis Compañeros del departamento de acuacultura y de generación.
Gracias por su compañía.
III GLOSARIO
Maricultura: rama especializada de la acuicultura involucrada en el cultivo de organismos marinos para productos alimenticios y otros en tanques ubicados en mar abierto, en una sección cerrada del océano, o en estanques o canales que se llenan con agua de mar.
Desarrollo embrionario: son las diferentes etapas desde que el espermatozoide se une al óvulo por el proceso de la fecundación, dando como resultado la formación de un nuevo organismo.
Metamorfosis: proceso biológico por el cual un animal se desarrolla desde su nacimiento (pasado el desarrollo embrionario) hasta la madurez por medio de grandes cambios estructurales y fisiológicos.
Lecitotrófico: Larva que posee suficiente vitelo para alimentarse y desarrollarse hasta la metamorfosis.
Plactotrófico: Se refiere a las larvas que se alimentan de plancton durante su permanencia en la columna de agua y que requieren de alimentación externa para completar su metamorfosis.
Masa ovígera: Conjunto de huevos, también conocida como freza.
Larva Trocófora: Estado larvario, que se caracteriza por que la larva presenta una simetría bilateral, generalmente esta larva se desarrolla dentro de una cápsula o saco.
Larva Veliger: Larva característica de Gasterópodos, se forma después de la etapa embrionaria, de vida libre y planctónica.
IV
ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1.- Localización geográfica del área de colecta de los organismos reproductores del caracol chino H. nigritus. ... 10
Figura 2.- Nitrógeno total en acuarios de reproductores. ... 15
Figura 3.- Total de masas ovígeras obtenidas de H. nigritus. Barras de error=
promedio ± DE. ... 16
Figura 4.- Número de cápsulas del caracol chino H. nigritus... 17
Figura 5.- Número de embriones de H. nigritus registrados en cada mes. ... 18
Figura 6.- Principales características observadas durante el desarrollo embrionario de H. nigritus, a) Huevo fertilizado, b) Distribución de macrómeros y micrómeros en el huevo, c) Gastrulación, d) Inicio del movimiento en la larva, e) Larva preveliger, e) Aparición de cilios, f) Velum y ojos bien desarrollados y h) Concha bien desarrollada y formación de sistema gástrico. ... 20
Figura 7.- Aparición de estructuras y cambios morfológicos mas importantes durante el desarrollo embrionario de H. nigritus. ... 21
Figura 8.- Longitud de embriones del caracol chino H. nigritus, durante el desarrollo de los macrómeros y micrómeros. ... 22
Figura 9.- Longitud que presentaron las larvas de H. nigritus, cuando iniciaron su movimiento ... 22
Figura 10.- Longitud alcanzada en larvas de H. nigritus, durante la aparición de sus cilios. ... 23
V
Figura 11.- Longitud de larvas de H. nigritus cuando eclosionaron. ... 24
Figura 12.- Estructuras observadas durante el desarrollo larval de H. nigritus. a) Opérculo y pie, b) Corazón larval y estatocistos en larva veligera, c) Canal sifonal de la concha, d) Primera boluta y velum bilobulado en larva asentada. ... 25
Figura 13.- Aparición de estructuras durante el desarrollo de larvas de H. nigritus .. 26
Figura 14.- Longitud de en larvas de H. nigritus, cuando se desarrollo su opérculo y pie. ... 27
Figura 15.- Longitud alcanzada cuando se desarrolló el corazón larval y canal sifonal de H. nigritus. ... 27
Figura 16.- Longitud de larvas de H. nigritus, al momento de la observación de los estatocistos. ... 28
Figura 17.- Longitud de larvas de H. nigritus, en la cual efectuaron torsión de la concha y asentamiento. ... 28
Figura 18.- Sobrevivencia obtenida en larvas de caracol chino H. nigritus. ... 29
VI
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla 1.- Variación de parámetros en acuarios para organismos reproductores de Hexaplex nigritus. ... 14
Tabla 2.- Parámetros fisicoquímicos registrados durante el desarrollo embrionario de Hexaplex nigritus. ... 18
Tabla 3.- Concentración de nutrientes durante el desarrollo embrionario de H.
nigritus. ... 19
Tabla 4.- Aparición de las características morfológicas. ... 29
VII RESUMEN
El caracol burro negro o chino Hexaplex (Muricanthus) nigritus (Philipi, 1845), es una de las especies del género Hexaplex que más se captura en el Golfo de California. Los gasterópodos Murícidos carecen de dimorfismo sexual, su reproducción se efectúa entre los meses abril a octubre, que es la época en la que se presentan las mayores temperaturas del año. Este gasterópodo desarrolla un cigoto denominado larva trocófora y eclosiona como larva velígera, posteriormente ocurre la fijación y la metamorfosis, este trabajo se realizó debido a que actualmente es escasa la información con relación a aspectos básicos de la biología de esta especie.
El objetivo general del presente estudio fue determinar el desarrollo embrionario hasta la fase de metamorfosis del caracol chino H. nigritus, a nivel de laboratorio.
Para realizar el presente estudio, primeramente se desinfectó el material de plástico y de vidrio, se colectaron los organismos progenitores, se colocaron en acuarios donde fueron alimentados, se esperó a que la hembra ovopositara para obtener masas ovígeras, estas fueron lavadas. Posteriormente, con el fin de determinar el desarrollo embrionario en cada una de sus etapas, las masas ovígeras se depositaron en acuarios de 3 L a diferentes temperaturas (30, 32 y 34°C), manejando tres réplicas por tratamiento. En cada réplica se registraron los parámetros físico- químicos diariamente. Los resultados obtenidos mostraron 216 masas ovígeras, con 24, 537 cápsulas y un promedio de 1,609 larvas por cápsula. Se describieron las etapas morfológicas del desarrollo embrionario tales como: huevo fertilizado (longitud: 192 ± 15.51 µm), macrómeros y micrómeros en división, inicio del movimiento de la larva trocófora temprana, gástrula, larva véliger temprana con concha, larva preveliger y véliger eclosionando (longitud: 334.5 ± 19.92 µm). El tiempo de eclosión fue de 10 días para el tratamiento de 32°C y 11 días para el de 30°C. Mientras que el tratamiento a 34°C en el día 7 las cápsulas tomaron un color purpuráceo (muertos). Durante el desarrollo larval se observó la aparición de estructuras tales como el pie, el opérculo, con una longitud larval de 367.75 ± 11.27 µm; así como la formación del canal sifonal, la aparición del corazón larval, el desarrollo de la primera boluta por efecto del proceso de torsión de la concha y finalmente el velum bilobulado, junto con el asentamiento de la larva (longitud final:
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617.5 ± 6.45 µm). Se obtuvo un porcentaje de asentamiento larval del 40 al 65 % para los tratamientos de 32 y 30 °C, respectivamente.
Palabras clave: H. nigritus, cápsulas, larvas.
IX ABSTRACT
The snail or Chinese black donkey Hexaplex (Muricanthus) nigritus (Philipi, 1845), is a species of the genus Hexaplex more is captured in the Gulf of California.
Muricid gastropods lack sexual dimorphism, reproduction takes place between the months of April to October, which is the time when the highest temperatures occur year. This gastropod larva called a zygote develops trochophore and veliger larva hatches as subsequently occurs settlement and metamorphosis, this work, because currently there is little information regarding basic aspects of the biology of this species. The aim of this study was to embryonic development to the stage of metamorphosis Chinese snail H. nigritus, in the laboratory. To perform this study was disinfected first plastic material and glass, the parent organisms were collected, placed in aquaria which were fed, the female waited for ovopositara ovigerous masses, these were washed. Subsequently, in order to determine the embryonic development in each of its stages, the masses ovigerous aquariums were deposited in 3 L at different temperatures (30, 32 and 34 ° C), driving three replicates per treatment. In each replicate were recorded daily physicochemical parameters. The results showed ovigerous masses 216, 24, 537 capsules of 1.609 and an average larvae per capsule. Described the morphological stages of embryo development such as fertilized egg (length: 192 ± 15.51 microns), and micromeres dividing macromers, initiation of movement of the trochophore larva early gastrula, with early veliger larvae shell and veliger larvae hatching preveliger (length: 334.5 ± 19.92 microns). Hatching time was 10 days for the treatment of 32 ° C for 11 days and 30 ° C. While treatment at 34 ° C on day 7 capsules taken purplish color (dead). During the larval development was observed the appearance of structures such as the foot, operculum, with a length of 367.75 ± 11.27 larval microns, and siphonal channel formation, the appearance of the heart larval development of the effect of the first boluta twisting process of shell and finally the velum bilobed, with the settlement of the larva (final length: 617.5 ± 6.45 microns). We obtained a percentage of larval settlement from 40 to 65% for treatments of 32 and 30 ° C respectively.
Keywords: H. nigritus, capsules, larvae.
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1.- INTRODUCCIÓN
Entre los recursos de mayor importancia económica para los pescadores del estado de Sinaloa y otros habitantes de las costas del Golfo de California, aunque poco conocidos en sus aspectos biológicos, ecológicos y tecnológicos, están los caracoles de las siguientes especies: Hexaplex (Muricanthus) nigritus, H. princeps, H. ambiguus, H. radix, Phyllonotus brasicca, P. erythrostoma, P. regius; las cuales se encuentran distribuidas ampliamente en las zonas costeras de aguas marinas someras de la región (FAO, 1995; Góngora , 1999). El caracol burro negro o chino negro Hexaplex (Muricanthus) nigritus (Philippi, 1845), es una de las especies del género Hexaplex (Muricanthus) más importante de las pesquerías del Golfo de California, la cual está sometido a una intensa presión pesquera, debido a la prohibición de pesca de otras especies principalmente el camarón (Góngora-Gómez, 2008).
Los caracoles constituyen la clase de Moluscos más abundantes del phyllum de los invertebrados, habitan tanto las aguas dulces, el mar y la tierra. Estos han sido utilizados por el hombre desde tiempos prehistóricos, tanto en su alimentación sustituyendo a las monedas o con significado religioso, desafortunadamente, el aprovechamiento de las especies de caracol en México se ha realizado, hasta la fecha, como una captura directa indiscriminada sin dar consideración suficiente a sus necesidades reproductivas que asegure el mantenimiento de poblaciones viables (Góngora-Gómez, 1999). Actualmente la pesquería del caracol ha declinado notablemente debido en gran parte a la sobreexplotación, colocando al recurso en una situación crítica para su supervivencia. El caracol burro chino Hexaplex (Muricanthus) nigritus, habita sobre sustrato arenoso-fangoso, distribuido en el área infralitoral en la zona intermareal, su distribución geográfica va desde el Golfo de California hasta Perú.
La captura de esta especie ha sido tan alta que en los últimos años ha venido decreciendo principalmente en los estados de Baja California, Baja California Sur, Sonora y Sinaloa, lo que ha llevado a una disminución de las poblaciones de la especie solicitando reducir la captura en estas entidades (Carta Nacional Pesquera,
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2006). Con la demanda del mercado asiático por su carne y opérculo, el caracol chino negro, fue colectado en 1993 en grandes cantidades en Puerto Peñasco, desembarcando 600 toneladas por año.
La disminución de las poblaciones del caracol chino es preocupante no solo por el bienestar de los pescadores, sino también por el impacto que puede ocasionar a todo el ecosistema bentónico submareal, alimentándose de numerosos bivalvos.
Además, la concha de estos caracoles sirve como un importante hábitat para numerosas especies de moluscos y artrópodos. En el alto Golfo el caracol chino negro forma grandes agregaciones reproductivas (grupos de hasta más de 5000 caracoles), depositando sus masas ovígeras o fresas en otros caracoles de la misma especie. Estas masas ovígeras o fresas sirven de criadero o refugio para otros invertebrados y peces en sus etapas juveniles y proveen de una fuente de alimento a varios organismos, incluyendo peces y tortugas de mar. Esencialmente, las agregaciones reproductivas de caracol actúan como arrecifes temporales, proveyendo substrato, refugio y alimento en una región donde los substratos rocosos no son abundantes (Camacho, 2008).
Las conchas de los gasterópodos Murícidos carecen de dimorfismo sexual por lo que, para la determinación del sexo, es necesario revisar las partes blandas buscando la presencia o ausencia de pene, teniendo la precaución de no dañar a los animales (Naegel y Gómez Del Prado, 2004).
La reproducción se efectúa mayormente en los meses calurosos del año, (Cudney, et al., 2008). La fecundación es casi siempre interna con oviparidad; se desarrolla un cigoto referido como larva trocófora y que posteriormente eclosiona para dar lugar a la larva veligera de vida pelágica. El apareamiento y el desove ocurren de abril a septiembre, alcanzando altos picos de desove en los meses de junio-julio (Cudney, et al., 2008). La cópula generalmente se da en la noche y precede dos o tres semanas al desove. El esperma puede ser conservado por la hembra durante varios días para fecundaciones posteriores (Cudney, et al., 2008).
El desove tiene una duración aproximada de 24 a 36 horas. El adulto deposita los huevos sobre arena o cascajo calcáreo. La freza (masa de huevos) está compuesta por cápsulas que son ovopositadas a manera de agregación. Como en
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otras especies los huevecillos están cubiertos por una membrana dentro de la cápsula; la cápsula puede tener un largo de aproximadamente 21.84 mm, con 27-337 cápsulas por masa ovígera y contener aproximadamente 3382-3325 huevecillos o cigotos en cada cápsula, según el tamaño de la puesta (Cudney, et al., 2008).
La metamorfosis es el período más crítico en el desarrollo larval y si se retrasa
genera baja supervivencia y deformaciones en caracoles (Rodríguez, 1986). Se denomina fijación al proceso por el cual las larvas se adhieren
a un sustrato. Para la realización de este complejo proceso, es necesario el desarrollo de determinadas estructuras larvarias, como la aparición del ojo y el desarrollo del pie. Después de la fijación se produce el inicio de la metamorfosis, proceso que engloba todos los fenómenos que sufren las larvas para adquirir las estructuras y el aspecto de un animal adulto y que permiten el paso de la vida planctónica a una vida bentónica. La fijación y la metamorfosis no sólo están condicionadas por características propias de la especie y de la propia larva, sino que también están afectadas por las características físicas del medio y por diferentes inductores. Las larvas de distintas especies de invertebrados marinos necesitan sustancias inductoras de naturaleza diferente, cuya actuación parece estar mediada por receptores (García, et al. 2003).
El objetivo del presente estudio es conocer el desarrollo embrionario desde la ovoposición hasta la fase de metamorfosis del caracol chino H. nigritus en condiciones controladas de laboratorio.
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2.- ANTECEDENTES
Los primeros estudios sobre el desarrollo de gasterópodos se remontan al año de 1895 por Crampton, realizando un estudio experimental sobre el desarrollo de gasterópodos en el cual observó la conducta de los blastómeros y cada paso en su división, también observó la forma de la capsula del género Ilyanasa que corresponde a la forma de un poliedro irregular con un promedio de 1.6 mm de diámetro y contiene de 30 a 100 huevos.
En el año 1965, D’Asaro, observó la organogénesis, desarrollo y metamorfosis en el caracol reina Strombus gigas, con notas sobre hábitos de crianza, definiendo la forma de la masa de huevo, la forma de la cápsula y describe el inicio del desarrollo hasta los 69 días hasta la larva veligera, bajo condiciones de laboratorio.
Eisawy y Sorial, en el año de 1968, en su estudio sobre el desarrollo de Strombus (Monodactylus) tricornis, la metamorfosis ocurrió en un periodo corto de 3- 4 días y el desarrollo de las larvas se dio entre 10-11 días.
En 1986, Rodríguez, observó 27 características morfológicas externas durante el desarrollo de las larvas del caracol rosado Strombus gigas, hasta su eclosión, obteniendo así larvas para la metamorfosis, logrando su asentamiento utilizando un alga roja del género Laurencia sp.
Davis en 1994, a nivel experimental estableció técnicas y sistemas para el cultivo de juveniles del caracol reina Strombus gigas, colocando un área para reproductores, de los cuales obtuvieron masas ovígeras, las cuales fueron incubadas para obtener larvas veligeras listas para la metamorfosis en 3 semanas, dichas larvas fueron inducidas a la metamorfosis.
Un estudio realizado por Góngora en 1999, del efecto de la temperatura sobre el desarrollo embrionario del caracol marino Strombus pugilis L., tomó en cuenta temperaturas de 24, 26, 28, 30 y 32°C, en donde observó preliminarmente 25 características del desarrollo embrionario de la larva a 28°C en sus primeras 70 horas, de éstas, seis fueron de gran utilidad para el cálculo de las temperaturas debido a su fácil observación y que pueden servir para la maricultura de la especie.
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Se realizó un estudio por Brito y Aldana, en el 2004, sobre el desarrollo, crecimiento y supervivencia de las larvas del caracol reina Strombus gigas bajo condiciones de laboratorio, en el cual las larvas alcanzaron la metamorfosis entre 25 y 29 días. Los resultados obtenidos en el desarrollo mostraron que las larvas obtenidas en marzo, abril y septiembre tienen el desarrollo más lento que las larvas de junio, julio y agosto.
Por otro lado Góngora et al, en el 2006, realizaron otro estudio, para obtener masas ovígeras del caracol lancetilla, Strombus pugilis (Mesogastropoda:
Strombidae) en condiciones de laboratorio, en donde obtuvieron masas ovígeras de dicha especie, y registraron su eclosión a una temperatura de 28°C, en un tiempo de 70 horas, también estimaron el número total de embriones, el número de embriones en toda la masa de huevos, la longitud total de la masa y el número de embriones contados en 2 cm.
En lo referido a las etapas de desarrollo larval, Uyan y Aral, en el año del 2003, investigaron las etapas del desarrollo larval del caracol japonés, Rapana thomasiana, que se distribuye en el Mar Negro, en donde fueron identificadas las características de los huevos recién liberados fertilizados (día 0). La actividad larval en la cápsula no fue observada durante la primera etapa de desarrollo. La primera larva de movimiento fue observada durante el día 10. En este período, larvas fueron capaces de mover sus cilios en la cápsula y su color se hizo gradualmente más oscuro dependiendo de la presencia de concha larval, estas completaron su metamorfosis hasta el día 25; en este estudio también se determinaron las variaciones en las dimensiones, índices de crecimiento y formas de las larvas durante su desarrollo.
En cuanto al desove e historia de los gasterópodos, Moore y Sander en 1978 realizaron un estudio acerca de Murex pomum y encontraron que los embriones/larvas contenidas en una sola cápsula variaban en talla o estadio de desarrollo, eclosionando en 12 días.
Mientras que, en el año del 2004, Naegel y Gómez Del Prado, estudiaron la embriogénesis y desarrollo larvario intra-capsular del murícido marino Plicopurpura pansa (Gould, 1853) en condiciones de laboratorio, en donde observaron que
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después de la ovoposición, las cápsulas mostraron cambios de color que están relacionados con el grado de desarrollo de los embriones; y en los siguientes días, presentaron las siguientes características: día 0: Ovocitos/huevos, día 3/7:
Segmentación, día 8/12: Gastrulación, día 15: Larva trocófora, día 17/18: Larva preveliger, día 19/24: Larva veliger.
Romero et al, en el 2004, realizaron una investigación acerca de las masas de huevos y desarrollo embrión-larva en el caracol Thais (Stramonita) chocolata (Duclos, 1832) con observaciones relacionadas con Murícidos, encontrando entre 100-150 cápsulas por cada masa de huevos y cada cápsula contenía 2,600 huevos.
Fernández et al., en el 2006 estudiaron los efectos de la temperatura y la disponibilidad de oxígeno sobre desarrollo intracapsular de Acanthina monodon (Gasteropoda: Muricidae), colectaron capsulas recientemente depositadas y las incubaron bajo diferentes condiciones experimentales de temperatura (7, 11, 15 y 19°C) y oxígeno (hipoxia: 50-60% saturación de aire; normoxia; e hiperoxia: 150- 160%), en donde obtuvieron que el número promedio de embriones desarrollados fue significativamente más bajo en hipoxia que bajo normoxia e hiperoxia, pero no fue influenciado por la temperatura.
Por otro lado Naegel y López, en el 2007, estudiaron el efecto de la temperatura sobre el crecimiento del caracol púrpura intermareal Plicopurpura pansa bajo condiciones de laboratorio a temperaturas de 20 a 32°C, en donde observaron que la temperatura óptima para el crecimiento del caracol púrpura intermareal se encuentra en el rango de 26 a 30°C.
En lo referente al caracol chino Hexaplex (Muricanthus) nigritus existen pocos estudios de este, dentro de los cuales se encuentran el de Góngora-Gómez et al, en el 2008, describieron el desarrollo embrionario e intracapsular del caracol burro negro M. nigritus en condiciones de laboratorio, en donde observaron etapas embrionarias.
Cudney, et al., 2008, estudiaron la ecología y el comportamiento reproductivo del caracol negro Hexaplex nigritus, identificaron la formación y el hábitat de las agregaciones de cría, la fidelidad a sus sitios reproductivos, ovoposición, también describieron el comportamiento antes y después de la reproducción e hicieron observaciones sobre la alimentación y depredación.
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3.- JUSTIFICACIÓN
A pesar de la importancia de Hexaplex (Muricanthus) nigritus como recurso pesquero, es escasa la información con relación a aspectos básicos de su biología, tal como tipo de desarrollo embrionario, tiempo de eclosión, tamaño que alcanzan las larvas y su proceso de metamorfosis, datos que son relevantes para que en el futuro se esté en posibilidades tanto de cultivar dicha especie como de repoblarla en su medio natural, ya que en nuestro país su aprovechamiento hasta la fecha se ha realizado de forma indiscriminada, sin tomar en cuenta las necesidades reproductivas que aseguren el mantenimiento de las poblaciones naturales. Ya sea por razones ecológicas, económicas o sociales, resultaría muy conveniente encontrar a corto plazo alternativas que puedan mantener la producción y reproducción de estos moluscos. Entre las opciones que se ha tomado en cuenta es la de cultivar estos caracoles en estanques o encierros costeros, mejor conocido como maricultura, con esta actividad se cría a los organismos desde su condición de huevecillo hasta etapas larvarias y juveniles, las cuales se liberan al mar en donde sus posibilidades de sobrevivir y contribuir a la repoblación del medio natural son mucho mayores.
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4.- OBJETIVOS
4.1.- OBJETIVO GENERAL:
Evaluar el desarrollo embrionario del caracol chino H. nigritus en condiciones controladas de laboratorio, bajo diferentes condiciones de temperatura, desde la ovoposición hasta la fase de metamorfosis.
4.2.- OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
1.- Describir los cambios morfológicos externos y conductuales del caracol chino H.
nigritus, durante su desarrollo en tres diferentes temperaturas (30, 32 y 34°C).
2.- Determinar el comportamiento de las variables físicas (temperatura, pH, salinidad y oxigeno disuelto) y químicas (nitritos, nitratos y amonio) durante el desarrollo experimental en las diferentes temperaturas.
3.- Estimar el porcentaje de asentamiento larval (metamorfosis) en las diferentes temperaturas.
4.3.- HIPÓTESIS:
Bajo condiciones controladas, la temperatura condiciona el desarrollo embrionario intracapsular y la metamorfosis del caracol chino Hexaplex nigritus.
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5.- METODOLOGÍA
5.1.- Desinfección y lavado del material
El material de campo y laboratorio que se utilizó para el estudio, se lavó con agua dulce y jabón neutro para evitar que se contaminara. Posteriormente, se desinfectó con una disolución de agua dulce y cloro comercial al 2%, se lavó con agua destilada y se dejó escurrir. Una vez desinfectado el material se colocó en un lugar seco y ventilado para evitar que se desarrollaran organismos patógenos (Góngora, 1999).
5.2.- Área de colecta
La colecta se llevó a cabo en la Laguna Macapule, que se ubica en el municipio de Guasave, Sinaloa, México (25º 21’ y 25º 24’ latitud N y 108º 30’ y 108º 45’ longitud O; Fig. 1).
5.3.- Colecta de los organismos reproductores
Se colectaron 18 reproductores mediante la técnica de marisqueo, que consistió en capturar los organismos manualmente cuando la marea se encuentre baja, en la Laguna Macapule, Guasave, Sinaloa, sobre arena-fango. De los organismos progenitores que se colectaron, se eliminaron los organismos adheridos a sus conchas como algas, balanos, lapas y sedimento, posteriormente se colocaron en cubetas de aproximadamente 20 l, con agua de mar y se trasladaron al Laboratorio de Acuacultura del IPN-CIIDIR, Sinaloa (Góngora, 1999).
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Figura 1.- Área donde se colectó los organismos reproductores del caracol chino H.
nigritus.
5.4.- Sistema de mantenimiento para reproductores
El agua de mar se vació en un reservorio, para posteriormente ser bombeada a los acuarios de mantenimiento de los progenitores, los cuales tenían un filtro biológico formado de grava, arena, tul y fibra de vidrio (Góngora, 1999). Diariamente se registró la temperatura del agua, pH, salinidad y oxigeno disuelto (Seki y Kan-no, 1977).
Los progenitores de caracol chino H. nigritus fueron alimentados semanalmente con moluscos bivalvos vivos (Almeja china Chione californiensis, Almeja marinera Chione subrugosa, Mejillón Mytella strigata, Almeja catarina Argopecten circularis, Pata de mula Anadara tuberculosa, Almeja blanca Dosinia
SINALOA
Laguna Macapule
GUASAVE
MÉXICO
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ponderosa, Venus rayada Chione subrugosa, Almeja de lodo Protothaca aspérrima, Choro Donax radiata y Mejillón chino Cardita affinis).
5.5.- Obtención de masas ovígeras, conteo de capsulas, promedio de embriones por capsula y promedio de embriones por masa ovígera
Las masas ovígeras se obtuvieron posterior a que las hembras ovopositaron en los acuarios (a), para ello con la ayuda de un bisturí se quitaron con cuidado las cápsulas (b), para luego limpiarlas con agua filtrada, al mismo tiempo se contabilizaron el número total de cápsulas presentes de cada una de las masas de huevo obtenidas durante las etapas reproductivas, así también para conocer el número de embriones presentes en cada cápsula, se colocaron por separado 30 cápsulas en diales de 20 ml, una ves que eclosionaron los embriones se puso el volumen total en una caja petri con cuadricula, para contarlos, se observaron en un microscopio estereoscópico y así se calculó un promedio por cápsula, finalmente para conocer el numero total de embriones presente en cada masa de huevo, con el número de embriones por cápsula y el total de cápsulas presentes en toda la masa ovígera.
5.6.- Desarrollo embrionario o intracapsular
El agua de mar que se utilizó para la incubación de las cápsulas ovígeras fue esterilizada previamente con filtro UV marca Fish Mate, esto para evitar la proliferación de protozoarios (Rodríguez, 1986). Estas masas ovígeras fueron limpiadas con agua de mar esterilizada para eliminar organismos indeseables, como protozoarios (Vorticella e Infusorius), ya que estos pueden causar mortalidades en los cultivos.
Las cápsulas se observaron bajo un microscopio, para asegurarse de que los huevos se encontraran en el mismo estado de desarrollo, fértiles, es decir con los micrómeros en movimiento. De estas, 18 cápsulas fueron incubadas en 3 temperaturas (30, 32 y 34°C) por triplicado, en acuarios de 3 L de capacidad, cada uno contaba con aireación y sistema de recirculación.
Posteriormente, se le dio seguimiento a las capsulas expuestas en cada temperatura, para determinar su desarrollo embrionario, utilizando para ello un
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microscopio óptico (Marca Wesco). Se observó continuamente la aparición de las siguientes estructuras: cigoto fertilizado; los dos cuerpos polares, primera división, segunda división, divisiones sucesivas que ocurren desde la tercera división hasta la gastrulación. Tres veces al día se observaba la aparición de los cilios cortos y el inicio del movimiento de la larva trocófora, hasta el momento de su eclosión, cada rasgo morfológico fue anotado, fotografiado para comparar con diferentes claves de identificación (Góngora 1999; Rodríguez, 1986; D’Asaro, 1965; Naegel y Gómez Del Prado, 2003). Finalmente, se realizaron las mediciones de 10 larvas para cada una de las réplicas, con el fin de determinar el crecimiento de las larvas durante el tiempo que estuvieron dentro de la cápsula.
5.7.- Desarrollo larval
Para la cría de larvas se utilizó un sistema estático, con agua de mar previamente esterilizada, el cual consistió en 3 acuarios de plástico de 3 L de capacidad para cada una de las temperaturas utilizadas (30 y 32°C), cada acuario contaba con aireación y un termostato para controlar la temperatura. Las larvas se retenían con una red de luz de malla de 250 micras, diariamente se realizaba recambio total de agua (Rodríguez, 1986).
5.7.1- Alimentación con Microalgas
Las microalgas se cultivaron con el medio de Ott (1966), en cultivo por lote se utilizaron matraces de 500 ml y a una temperatura promedio de 24°C, con el propósito de cosechar microalgas frescas con un tiempo de crecimiento de 3 a 4 días, para Chaetoceros calcitrans (Rodríguez, 1986). La cantidad de alimento que se proporcionó al principio para la cría de las larvas fue de 1,000 células/ml y este fue incrementando conforme iban creciendo las larvas. La forma de proporcionar el alimento consistió en tomar 54 ml del volumen del matraz de cultivo, posteriormente se derramaba sobre la superficie del acuario de crías de larvas, una vez al día para cada uno de los tratamientos (Davis, 1994).
13 5.7.2.- Densidad y características morfológicas
La densidad de larvas al principio fue de 500 larvas/l y al final se determinó la supervivencia una vez que se llevó a cabo la metamorfosis, se realizaron observaciones diariamente de cada una de las características más importantes de la cría larval tales como el comportamiento y la morfología que definieron cada etapa hasta llegar al asentamiento (Rodríguez, 1986).
5.7.3.- Retención de las larvas
Una vez que las larvas se observaron en el fondo de los acuarios, con la ayuda de un filtro de malla de 250 micras de plancton se retuvieron, determinando el numero de larvas que se asentaron, tomando en cuenta el criterio que estas dejaron de nadar, aun conservando sus lóbulos velares.
5.7.4.- Análisis estadístico
Las observaciones se hicieron hasta que todas las larvas efectuaron el asentamiento. Los resultados del asentamiento fueron analizados con un ANOVA de una vía y las diferencias entre tratamientos se identificaron con la prueba de t Student (Rodríguez, 1986).
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6.-RESULTADOS 6.1.- Mantenimiento de reproductores
Parámetros fisicoquímicos en acuarios de reproductores de H. nigritus El valor medio para la salinidad fue de 36.58%o, para temperatura fue de 24.51°C, de oxigeno 4.48 mg/L y un pH de 7.22 upH, tales valores no afectaron la reproducción de los organismos, se realizó un análisis estadístico (ANOVA de dos vías) tomando en cuenta los valores antes mencionados de los parámetros, según este, mostró que no existen diferencias significativas entre cada uno de los acuarios (1, 2 y 3), para cada uno de los parámetros (p > 0.05) (Tabla 1).
Tabla 1.- Variación de parámetros en acuarios para organismos reproductores de Hexaplex nigritus.
PARAMETRO MEDIA DESV. EST. F P
SALINIDAD 36.58 1.15 0.2 0.83
TEMPERATURA 24.51 3.68 0.02 0.98
OXIGENO 4.48 0.79 2.01 0.13
pH 7.22 0.23 0.02 0.97
El nitrógeno total que se registró en cada uno de los acuarios de reproductores, presentó una variación muy similar en los tres acuarios, encontrándose concentraciones bajas, por lo que dichas concentraciones no afectaron el período de reproducción y ovoposición de los caracoles (Figura 2). No se presentaron diferencias significativas (p>0.05)
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Figura 2.- Nitrógeno total en acuarios donde se mantuvieron los reproductores.
6.2.- Masas ovígeras del caracol chino
Las masas ovígeras producto de los reproductores de H. nigritus obtenidas durante la primera etapa del presente estudio (2011) se presentó de la siguiente manera: 4 en junio, 50 en julio, 63 en agosto, 9 en septiembre y 1 en octubre.
Mientras que durante la etapa del 2012 fue de la siguiente manera: 1 en abril, 17 en julio, 50 en agosto y 25 en septiembre. El total de masas ovígeras registradas en ambas etapas fue de 216 (Fig. 3).
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Figura 3.- Temperatura y salinidad durante la reproducción del caracol chino. Total de masas ovígeras obtenidas de Hexaplex nigritus. Barras de error= promedio ± DE.
6.3.- Número de cápsulas obtenidas
Durante la reproducción del caracol chino, se contabilizaron cada una de las cápsulas que formaban cada masa ovígera registrada, obteniendo los siguientes resultados: junio 59, julio 4635, agosto 8407, septiembre 719, octubre 70, en el 2011 y abril 166, julio 1218, agosto 5009, septiembre 2754, en el 2012, obteniendo un total de 24,537 cápsulas (Figura 4).
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Figura 4.- Número de cápsulas del caracol chino Hexaplex nigritus. Barras de error:
promedio + DE.
6.4.- Total de embriones de Hexaplex nigritus
Se contabilizaron el total de embriones presentes en cada cápsula alcanzando para cada uno de los meses los valores siguientes: junio 86,494, julio 6, 794,910, agosto 12, 324,662, septiembre 1, 054,054, octubre 112,630, en el 2011 y abril 267, 094, julio 2, 442,462, agosto 8, 059,481 y septiembre 4, 431,186, para el 2012, obteniendo un total de 35, 754, 033 embriones (Figura 5).
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Figura 5.- Número de embriones de Hexaplex nigritus registrados en cada mes.
Barras de error: promedio +DE.
6.5.- Desarrollo embrionario
Durante la incubación de las cápsulas a las 3 diferentes temperaturas, en lo que se refiere a pH, no variaron los promedios entre la temperatura de 32 y 34°C, al igual que la desviación estándar, mientras que en la temperara de 30°C estas fueron diferentes, se obtuvieron promedios los cuales no presentaron variaciones para ningún parámetro, la desviación estándar fue muy baja para cada una (Tabla 2).
Tabla 2.- pH, salinidad y oxígeno disuelto registrados durante el desarrollo embrionario de Hexaplex nigritus. Se indican promedios + DE
Tratamiento (°C) pH S‰ (mg/L-1) O2 (mg/L-1) 34 °C 7.25 ± 0.39 35.5 ± 3.67 3.36 ± 0.84 32 °C 7.25 ± 0.39 34.5 ± 2.56 3.65 ± 0.85 30 °C 7.35 ± 0.4 34 ± 2.72 3.71 ± 0.99
19 6.6.- Nutrientes
Durante el desarrollo embrionario de Hexaplex nigritus, se registró que la mayor concentración de nitritos fue de 0.0077 mg/L-1 a 32°C y la menor a 34°C con 0.0044 mg/L-1, para nitratos la mayor se registró a 32°C con 0.1759 mg/L-1 y la menor en 30°C con 0.1326 mg/L-1, y finalmente el amonio el mayor valor se obtuvo en el tratamiento a 34 °C con 0.0159 mg/L-1 y la menor a 32°C con 0.0092 mg/L-1 (Tabla 3).
Tabla 3.- Concentración de nitritos, nitratos y amonio durante el desarrollo embrionario de Hexaplex nigritus.
Tratamiento (°C) Nitritos (mg/L-1) Nitratos (mg/L-1) Amonio (mg/L-1)
30 °C 0.0062 0.1326 0.0128 32 °C 0.0077 0.1759 0.0092 34 °C 0.0044 0.1679 0.0159
6.7.-Aparición de las características morfológicas
Se observaron 32 características del caracol H. nigritus durante su desarrollo intracapsular, 8 fueron las más importantes (Fig. 6). En la figura 6a se observa el huevo fertilizado, con sus células en división y al mismo tiempo puede verse como se encuentran los embriones distribuidos dentro de la cápsula, iniciando con una longitud de 172.54 ± 8.71 µm. En la figura 6b, se encuentran distribuidos los micrómeros y macrómeros en el huevo, para dar paso a la gastrulación en donde iniciará la formación del gástrico (Fig. 6c). En la figura 6d se observa el inicio del movimiento de la larva trocófora temprana y en la Fig. 6e y 6f se observa la larva preveliger. En la fig. 6f se ve la aparición de cilios, velum y ojos, mientras que en la figura (6g), ya se encuentran los órganos gástricos bien desarrollados dentro de la concha y claramente se ven puntos negros en la concha que darán lugar a las
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espinas de esta, y finalmente las larvas eclosionaron de la cápsula con una longitud 341.5 ± 2.59 µm, con un pie desarrollado, cilios y lóbulos velares figura (6h).
Figura 6.- Principales características observadas durante el desarrollo embrionario del caracol chino Hexaplex nigritus, a) Huevo fertilizado, b) Macrómeros y micrómeros en el huevo, c) Gastrulación, d) Primeros movimientos en la larva, e) Larva preveliger, e) Aparición de cilios, f) Velum y ojos y h) Concha y sistema gástrico.
Las características mas importantes que se observaron durante el desarrollo embrionario fueron: las primeras divisiones celulares como desarrollo de macrómeros y micrómeros en la larva, durante el día 4, en donde la longitud media fue de 128 µm a 30°C, durante el día 3 a 32°C esta fue de 228 µm, mientras que a 34°C la longitud fue de 265 µm en el día 3; en el día 6 inicia el movimiento de la larva trocófora dentro de la cápsula, con 232µm para la temperatura de 30°C y en el día 5 se dio a los 32°C
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con 268µm de longitud, posteriormente aparecen los cilios, el velum y ojos en donde la larva alcanza una longitud media de 271µm a una temperatura de 30°C, esto ocurre en el día 8 y en la temperatura de 32°C se observó antes, en el día 7, con 307 µm, finalmente la larva eclosiona a los 336µm de longitud media a una temperatura de 30°C, a los 11 días y a los 10 días a 32°C, la longitud fue de 333µm (Figura 7).
Figura 1.- Aparición de estructuras y cambios morfológicos mas importantes durante el desarrollo embrionario de Hexaplex nigritus.
Las primeras divisiones observadas en la larva trocófora de H. nigritus fueron los macrómeros los cuales forman el vitelo y los micrómeros, próximas estructuras del organismo, para la temperatura de 30°C, en la larva aparecieron cuando ésta tuvo una longitud de 188 ± 14.17 µm, mientras que a los 32°C se desarrollaron cuando la larva tenía 228 ± 22.33 µm y a los 34°C a una longitud de 265 ± 17.97 µm. Encontrando diferencias significativas entre las tres temperaturas p<0.05 (Figura 8).
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Figura 8.- Longitud de embriones del caracol chino Hexaplex nigritus, durante el desarrollo de los macrómeros y micrómeros.
Uno de los cambios conductuales mas importantes de la larva es el movimiento éste se dio cuando la larva tuvo 232 ± 47.97 µm a los 30°C, para 32°C a los 268 ± 8.44 µm de longitud. Con diferencias significativas entre las temperaturas p<0.05 (Figura 9).
Figura 9.- Longitud que presentaron las larvas de Hexaplex nigritus, cuando iniciaron su movimiento.
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Posteriormente se dio la aparición de los cilios, estructuras auxiliares para la alimentación y movimiento de las larvas, estas tenían una longitud de 271 ± 21.06 µm a 30°C, en la temperatura de 32°C se dio cuando la larva alcanzó una longitud de 307 ± 12.83 µm. Se encontraron diferencias entre las dos temperaturas p<0.05 (Figura 10).
Figura 10.- Longitud alcanzada en larvas de Hexaplex nigritus, durante la aparición de sus cilios.
La larva finalmente eclosiona como una larva veligera, con 336 ± 17.70 µm de longitud para 30°C y 333 ± 22.15µm para 32°C. Los tratamientos no mostraron diferencias significativas entre sí p>0.05 (Figura 11).
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Figura 11.- Longitud en larvas de Hexaplex nigritus cuando eclosionaron.
6.8.- Desarrollo larval
Durante el desarrollo de las larvas se observó inicialmente la aparición de estructuras como el pie, opérculo, observándose este como una estructura alargada y delgada, así como la formación del canal sifonal de la cocha (figura 12a, b), posteriormente se apreció claramente el corazón latiendo dentro de la concha del organismo con una forma circular y transparente, los estatocistos se ubican cercanos a los ojos figura (12c), finalmente ocurre el proceso de torsión, el tracto digestivo se hace mas notable, aparecen los tentáculos; los lóbulos velares se vuelven de aspecto bilobulado figura (12d), una vez que se desarrollan cada una de estas estructuras se da paso al asentamiento de la larva.
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Figura 12.- Estructuras observadas durante el desarrollo larval de H. nigritus. a) Opérculo y pie, b) Corazón larval y estatocistos en larva veligera, c) Canal sifonal de la concha, d) Primera boluta y velum bilobulado en larva asentada.
Las principales características que se observaron durante el desarrollo larval de H. nigritus, fueron el desarrollo de un pie, opérculo en el día 1, con una longitud media de 364.5µm para la temperatura de 30°C y 371µm a los 32°C, luego aparece el corazón larval, al mismo tiempo que en la concha se forma el canal sifonal en el día 3 a los 30°C con 472.5µm de longitud y al 4 día en la temperatura de 32°C, siendo su longitud de 474µm, posteriormente en el día 6 se observan claramente los estatocistos a 30°C con 553µm de longitud media y a 32°C las larvas alcanzaron los 525.5µm de longitud en el día 7 y a los 8 días con una longitud de 615µm, a 30°C, ocurre la torsión de la concha y el asentamiento de la larva, mientras que a 32°C la longitud en la que se desarrollan estas estructuras fue de 620µm en el día 9 (Figura 13).
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Figura 13.- Aparición de estructuras durante el desarrollo de larvas de H. nigritus.
Durante el desarrollo larvario del caracol H. nigritus, cuando este alcanzó una longitud de 364.5 ± 9.26 µm en el tratamiento a 30°C, se observó el opérculo y pie, por otro lado a los 32°C, la observación de estas estructuras se dio cuando la larva presentó una longitud de 371 ± 13.29 µm. No se encontraron diferencias entre las temperaturas utilizadas p>0.05 (Figura 14).
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Figura 14.- Longitud de en larvas de Hexaplex nigritus, cuando se desarrollo su opérculo y pie.
El corazón larval y el canal sifonal de la concha, fue observado en la temperatura experimental de 30°C cuando la larva presentaba una longitud de 472.5
± 14.57 µm, mientras que a los 32°C dicho órgano y estructura se observaron cuando la longitud larval fue de 474 ± 8.09. No se presentaron diferencias entre las temperaturas p>0.05 (Figura 15).
Figura 15.- Longitud alcanzada cuando se desarrolló el corazón larval y canal sifonal de Hexaplex nigritus.
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Los estatocistos, pequeñas estructuras en forma circular; ubicadas en la parte superior de los ojos, aparecieron cuando la larva presentó una longitud de 553 ± 9.58 µm a 30°C, para 32°C la longitud en la que se observo tal estructura fue de 525.5 ± 12.57 µm. No se presentaron diferencias significativas entre las temperaturas p>0.05 (Figura 16).
Figura 16.- Longitud de larvas de Hexaplex nigritus, al momento de la observación de los estatocistos.
Cuando la larva finalmente alcanzó una longitud de 615 ± 6.66 µm en la temperatura de 30°C y 620 ± 6.23 µm para 32°C, las conchas de las larvas efectuaron un proceso conocido como torsión, al mismo tiempo que presentaron velum bilobulado y el asentamiento de la larva. No se encontraron diferencias significativas p>0.05 (Figura 17).
Figura 17.- Longitu d de
larvas
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de Hexaplex nigritus, en la cual efectuaron torsión de la concha y asentamiento.
Finalmente se obtuvo un porcentaje de sobrevivencia larval para la temperatura de 30°C fue del 65% y a 32°C fue de 40% (Figura 18).
Figura 18.- Sobrevivencia obtenida en larvas de caracol chino Hexaplex nigritus.
De acuerdo a las temperaturas utilizadas que fueron 30, 32 y 34 °C, se muestra la siguiente tabla (tabla 4), en donde primeramente se da la fertilización del huevo a las 24 h en las tres temperaturas utilizadas, observándose una capa transparente conocida como membrana de fertilización, el desarrollo embrionario se detuvo en la temperatura de 34°C en la cual los embriones tomaron un color morado y observándose células muertas, mientras que en la de 30 y 32°C inicia el movimiento larval dentro de la capsula entre los 5 y 4 días respectivamente, a los 7-8 días a los 30°C aparecen la concha larval y los ojos bien desarrollados, siendo que a los 32°C esto se da entre los 6-7 días, la eclosión se da en 11 días a 30°C y a 32°C ocurrió a los 10 días y por último la torsión de la concha y el asentamiento de la larva veligera se da a los 17 días a 30°C y a los 16 días a temperatura de 32°C (Tabla 4).
Tabla 4.- Aparición de las características morfológicas.
Proceso Embrionario Temperaturas
30
30 °C 32 °C 34°C
Fertilización 24 h 24 h 24 h
Macrómeros y Micrómeros 48-72 h 48 h 48 h
Gastrulación 4 días 3 días 4 días
Inicio de movimiento 5 días 4 días
Aparición de concha, cilios y velum 6 días 5 días Concha larval y ojos 7-8 días 6-7 días
Larva pre-veliger 10 días 8-9 días
Eclosión 11 días 10 días
Opérculo, pie 11-12 días 10-11 días Corazón larval, canal sifonal 13-15 días 12-14 días
Estatocistos 16 días 15 días
Torsión y velum bilobulado 17 días 16 días
7.- DISCUSIÓN
Al inicio del desarrollo embrionario de Hexaplex nigritus se observó la membrana de fertilización, la aparición de los cilios cortos, otra importante característica que se observó fue la larva dentro de su concha, los cilios, ojos, velum perfectamente bien y desarrollados , coincidiendo con Naegel y Gomez del Prado (2004) con la especie Plicopurpura pansa esta pertenece a la misma familia (Muricidae) que Hexaplex nigritus, las diferencias entre los resultados de estos autores y este experimento tal vez no sean muy marcadas ya que P. pansa y Hexaplex nigritus, son de ambientes y distribución muy similar, aunque en este estudio las observaciones fueron menores a las de Naegel y Gómez Del Prado (op.
cit.). El desarrollo embrionario de Hexaplex nigritus se llevó a cabo a temperaturas de