UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS
ESCUELA DE TECNOLOGIA MÉDICA
TESIS DE GRADO
PRESENTADA COMO REQUISITO PARA OPTAR EL TÍTULO DE LICENCIADO EN LABORATORIO CLINICO.
TEMA
ANTICUERPOS DE HERPES SIMPLE TIPO 2 POR MICROELISA EN MUJERES GESTANTES, HOSPITAL DR. TEODORO MALDONADO CARBO.
AUTOR
T.M.D RAMÍREZ SUÁREZ LUIS ARTURO
TUTOR Y DIRECTOR
MSC. HARRY ALVAREZ
GUAYAQUIL – ECUADOR AÑO 2013
DECLARACION DEL AUTOR
YO, RAMIREZ SUAREZ LUIS ARTURO, con C.I. 0925080368, T.M.D de la carrera Laboratorio Clínico, Escuela de Tecnología Médica, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad de Guayaquil declaro que: El presente trabajo de Investigación titulado: ANTICUERPOS DE HERPES SIMPLE TIPO 2 POR MICROELISA EN MUJERES GESTANTES, HOSPITAL
DR. TEODORO MALDONADO CARBO., es de mi autoría y ha sido realizado bajo mi absoluta responsabilidad y con la supervisión del MSC. HARRY ALVAREZ en calidad de Tutor y Director de tesis.
____________________________________
RAMIREZ SUAREZ LUIS ARTUROC.I. 0925080368
CERTIFICADO DE ACEPTACIÓN DEL DIRECTOR
En mi calidad de DIRECTOR de trabajo de investigación de tesis
CERTIFICO
Que he dirigido y revisado el trabajo de tesis de grado, presentado por el T.M.D. RAMIREZ SUAREZ LUIS ARTURO, como requisito previo a la probación y desarrollo de la investigación para optar el grado académico de Licenciado en Laboratorio clínico, cuyo tema es:
ANTICUERPOS DE HERPES SIMPLE TIPO 2 POR MICROELISA EN MUJERES GESTANTES, HOSPITAL DR. TEODORO MALDONADO CARBO.
El mismo que luego de revisado, lo considero correctamente realizado, por lo cual apruebo, para que continúe con el proceso correspondiente.
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MSC. HARRY ALVAREZ DIRECTOR DE TESIS
CERTIFICADO DE ACEPTACIÓN DEL TUTOR
En mi calidad de tutor de trabajo de investigación de tesis.
CERTIFICO
Que he dirigido y revisado el trabajo de tesis de grado, presentado por el T.M.D RAMIREZ SUAREZ LUIS ARTURO, como requisito previo a la probación y desarrollo de la investigación para optar el grado académico de Licenciado en Laboratorio Clínico, cuyo tema es:
ANTICUERPOS DE HERPES SIMPLE TIPO 2 POR MICROELISA EN MUJERES GESTANTES, HOSPITAL DR. TEODORO MALDONADO CARBO.
El mismo que luego de revisado, lo considero correctamente realizado, por lo cual apruebo, para que continúe con el proceso correspondiente.
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MSC. HARRY ALVAREZ TUTOR DE TESIS
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DEDICATORIA
Son tantas personas a las cuales debo parte de este triunfo, de lograr alcanzar mi culminación académica, la cual es el anhelo de todos los que así lo deseamos.
Definitivamente, Dios, mi Señor, mi Guía, él sabe lo esencial que has sido en mi posición firme de alcanzar esta meta, esta alegría,
ii AGRADECIMIENTO
Agradecemos a Dios, el Creador del Universo, por haber iluminado nuestras mentes al realizar este trabajo.
A nuestros padres quienes con sus esfuerzos y apoyos, hicieron posible el cumplimiento de este trabajo.
iii 1.1 Planteamiento del problema……….…4
1.2 Formulación del problema………....5
1.3 Delimitación del problema………6
1.4 Evaluación del problema………..6
1.5 Objetivos………..8
1.5.1 Objetivo General………8
1.5.2 Objetivos Específicos………8
1.6 Justificación……….9
CAPITULO II MARCO TEORICO 2.1 Microelisa.………...11
2.2 Importancia………...13
2.3 Conceptos de la técnica de elisa………...13
2.4 Fundamento del método………...16
2.5 Reactivos provistos………..17
2.6 Materiales necesario no contenido en el kit………...18
2.7 Muestra………..18
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2.9 Condiciones y almacenamiento de las muestras………20
2.10 Calibración y procedimiento del equipo……….21
2.11 Aplicación diagnostico………...23
2.12 Protocolo de validación por el usuario………...23
2.13 Herpes simple tipo 2………..25
2.14 Infección por virus del herpes simple tipo 2………..26
2.15 Epidemiologia y vía de transmisión……….27
2.16 Aspectos Virológico………...32 3.1 Diseño de la investigación………..45
3.2 Tipo de la investigación………...45
3.3 Diseño Retrospectivo………..…45
3.4 Nivel de estudio………46
3.5 Población………...………46
3.6 Muestra………..46
3.7 Operacionalización de las variables………..47
v CAPITULO IV
MARCO ADMINISTRATIVO
4.1 Análisis e interpretación de los resultados………...49
4.2 Conclusiones……….56
4.3 Recomendaciones………57
4.4 Terminología……….58
4.5 Bibliografía……….60
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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS ESCUELA DE TECNOLOGÍA MÉDICA
TEMA: ANTICUERPOS DE HERPES SIMPLE TIPO 2 POR MICROELISA EN MUJERES GESTANTES, HOSPITAL DR. TEODORO MALDONADO CARBO
TUTOR Y DIRECTOR: MSC. HARRY ALVAREZ
AUTOR: LUIS RAMIREZ SUAREZ FECHA: GUAYAQUIL 2013
RESUMEN
El presente trabajo tiene por propósito la detección de anticuerpos de herpes simple tipo 2, mediante la técnica de microelisa que es de bajo costo, sencilla, fácil de interpretar y de gran utilidad en el despistaje del VHS-2; siendo un estudio investigativo, documental, descriptivo, de corte transversal, y retrospectivo. La infección de herpes simple tipo 2 es vírica de transmisión sexual y se caracteriza por afectar al aparato urogenital. Dado que la mayor parte de los lactantes se infectan a través del canal del parto, si la madre está infectada con el VHS, resulta necesario determinar la presencia de la infección antes del momento del parto; con lo cual se evitaría una infección congénita que da lugar a problemas como microcefalia, corriorretinitis y retraso mental en el recién nacido, y la infección neonatal diseminada por este virus con lleva una elevada incidencia de mortalidad entre los lactantes. Si se comprueba que no existe infección por el virus, el parto vaginal es posible; por el contrario, si se detecta infección, entonces es preciso practicar una cesárea. La prueba de detección del virus puede llevarse a cabo en varones y en mujeres para determinar el riesgo de transmisión sexual.
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INTRODUCCIÓN
El herpes es una infección común causada por el virus herpes simple (VHS) - tipo 1 o tipo 2. El herpes genital puede afectar cualquier parte de los genitales, así como las áreas circundantes, incluyendo el ano, glúteos y la parte superior de los muslos.
Una vez que la persona ha sido infectada por el VHS, este queda permanentemente en su organismo, en el tejido nervioso cerca de la base de la espina dorsal, en el ganglio de la raíz dorsal. La mayoría del tiempo, el virus permanece inactivo, pero muy a menudo algo sucede que lo reactiva. Los cuadros agudos de herpes (o recurrencias) ocurren cuando el virus se multiplica (se replica), generando nuevas partículas del virus que viajan a lo largo del nervio hasta el sitio original de la infección. Esto causa los síntomas que se conocen. A veces, el virus se puede replicar y se esparce desde el sitio de la infección sin síntomas reconocibles (esto se reconoce como diseminación asintomática).
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Las mujeres que tuvieron la enfermedad antes del embarazo y padecen un rebrote o una infección silenciosa en el momento del parto vaginal tienen sólo aproximadamente un tres por ciento de probabilidades de contagiar a sus bebés.En ocasiones, lo que parece ser el primer episodio grave de herpes durante el embarazo puede ser un rebrote de una infección inicialmente silenciosa. El riesgo de que estas mujeres infecten a sus bebés es bajo. En algunos casos, los análisis de sangre pueden diferenciar entre una infección nueva y la recurrencia de una infección anterior.
Ecuador en 1995, de acuerdo a información del Ministerio de salud Pública – Dirección Nacional de Epidemiología se presentaron 1413 casos en mujeres embarazadas y una tasa de 12.33% por 1000 habitantes.
El herpes afecta muy seriamente a mujeres embarazadas, en quienes las complicaciones de la salud tienden a ser mayores y muy graves, tales como meningitis (inflamación de las meninges cerebrales), e infecciones oculares. Y si bien las vesículas (ampollas) desaparecen y las ulceras sanan espontáneamente en dos o tres semanas, el virus invade los nervios de la región pélvica y continúa viviendo en la base de la médula espinal.
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La investigación está estructurada en los siguientes cuatro capítulos: • Capítulo I. Se describe el problema en su contexto socio cultural y educativo; su situación conflicto: la delimitación del mismo según su campo, la evaluación del problema, los objetivos generales y específicos que se persiguen con la investigación, a lo que se añade la justificación e importancia de la investigación.
• Capítulo II, se describe el marco teórico, exponiendo los aspectos de la etiología, epidemiología, patología y diagnóstico, además de establecer la relación con los reglamentos y normas legales que existe sobre el tema, estructurando la hipótesis y las variables. • Capítulo III, se explica el tipo de metodología que se utiliza en la
investigación, caracterización de la población y la determinación de la muestra, así como el tratamiento y análisis de los resultados. • Capítulo IV, se describen los recursos materiales y humanos
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CAPITULO I
EL PROBLEMA
1.1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Detectar anticuerpos de herpes simple tipo 2 por microelisa en mujeres gestantes, en el hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo”
El objeto de estudio es describir la técnica de microelisa para el diagnóstico del herpes simple tipo 2. Dado que la mayor parte de los lactantes se infectan a través del canal del parto, si la madre está infectada con el VHS, dicho estudio se llevó a cabo en el centro de inmunopatología del Hospital Teodoro Maldonado Carbo en la ciudad de Guayaquil en el periodo 2013.
La Organización Mundial de la Salud estima que alrededor de 536 millones de personas entre los 15 y 49 años de edad están infectadas con el virus del herpes genital, que se contrae por el contacto sexual.
Cada año, 20 millones de nuevas personas resultan infectadas por este virus que se contrae de manera permanente para toda la vida, agrega el estudio.
Este primer estudio global sobre la prevalencia del herpes genital estima que un 16 por ciento de la población mundial entre los 15 y 49 años está infectado, y se concluye que el virus es más frecuente en las mujeres que en los hombres.
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los afectados ignoran que lo están, por lo que es fácil que contagien a otras personas.
"Las consecuencias más graves del virus llegan hasta el punto de que es más fácil contraer, y luego transmitir, el SIDA", señaló el doctor George Schmid, del departamento sobre el virus HIV de la OMS.
Los expertos dicen desconocer de forma clara por qué el herpes genital se da más en las mujeres, y apuntan a que "puede deberse a las diferencias anatómicas entre mujeres y hombres, que hacen a éstas más susceptibles de ser contagiadas, como ocurre con otras enfermedades de transmisión sexual.
1.2. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
El VHS tipo 2 es la causa de infección congénita que da lugar a problemas como microcefalia, corriorretinitis y retraso mental en el recién nacido, y la infección neonatal diseminada por este virus conlleva una elevada incidencia de mortalidad entre los lactantes transmitido por las madres afectadas a sus hijos durante el parto.
Interrogantes de la investigación
En esta investigación planteamos las siguientes interrogantes:
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¿Será que la técnica de microelisa diagnostica anticuerpos del virus del herpes simple tipo 2?
1.3. DELIMITACION DEL PROBLEMA
Campo: Laboratorio Clínico
Área: Consulta externa del área de Ginecología y Obstetricia
Aspecto: Virus del herpes simple tipo 2
Tema: Anticuerpos de herpes simple tipo 2 por microelisa en mujeres gestantes, hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo, año 2013”
Población: 337 mujeres gestantes.
El estudio se realizará en las mujeres gestantes que acudieron a la consulta externa del área de ginecología y obstetricia del hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo” de la ciudad de Guayaquil durante los meses de Julio a diciembre del 2013, al estudio ingresaron un total de 377 pacientes para la determinación de virus del herpes simple tipo 2 por microelisa.
1.4. EVALUACIÓN DEL PROBLEMA
Esta evaluación es delimitada porque se llevo a cabo en el Hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo” el objeto de estudio fueron las mujeres gestantes en el periodo 2013.
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Nuestro tema es original ya que el interés surgió porque el herpes simple tipo 2 es una enfermedad asintomática, siendo más frecuente en las mujeres causando infecciones potencialmente mortales en los bebés. Es factible porque en el hospital Teodoro Maldonado Carbo se detectaron anticuerpos contra VHS-2 en las mujeres gestantes de la consulta externa del área de ginecología y obstetricia durante los meses de julio a diciembre.
Identifica los productos esperados porque se espera que las mujeres gestantes tengan la presencia de anticuerpos VHS-2, que indican la infección por herpes simple tipo 2.
Identifica claramente las variables: Herpes simple tipo 2. El herpes simple tipo 2 es una enfermedad de transmisión sexual que provoca infecciones congénitas.
La técnica denominada ELISA (del inglés enzyme – linkedinmuno – sorbentassay) utiliza anticuerpos que se unen covalentemente a las enzimas; de este modo se conservan las propiedades catalíticas de las enzimas y la especificidad de los anticuerpos.
Las enzimas de unión típicas utilizadas incluyen peroxidasa, fosfatasa alcalina y galactosidasa, que catalizan reacciones cuyos productos son coloreados y pueden medirse en cantidades muy pequeñas.
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1.5. OBJETIVOS
1.5.1. OBJETIVO GENERAL
Detectar anticuerpos de herpes simple tipo 2 por microelisa en mujeres gestantes, en el hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo, año 2013”.
1.5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1. Determinar anticuerpos VHS-2 por microelisa en suero sanguíneo de mujeres gestantes de la consulta externa del área de ginecología y obstetricia del hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo, año 2013”.
2. Describir la técnica microelisa para detectar anticuerpos de herpes simple tipo 2 en mujeres gestantes, en el hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo, año 2013”.
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1.6. JUSTIFICACIÓN
El virus del herpes simple tipo 2 se transmite por lo general, aunque no siempre, por contacto sexual. Los síntomas abarcan úlceras o llagas en los genitales. Sin embargo, algunas personas con VHS-2 son asintomáticas.
El virus del herpes puede infectar al feto y causarle anomalías. Una mujer que esté infectada con herpes puede trasmitirle el virus a su bebé durante el parto vaginal, especialmente si la madre tiene una infección activa en el momento de dar a luz. Sin embargo, del 60 al 80% de las infecciones por VHS-2 adquiridas por recién nacidos ocurren en mujeres que no tienen síntomas de dicha infección o antecedentes familiares de infección genital por VHS-2.
Es posible que el virus se transmita incluso cuando no haya ningún síntoma o úlcera visible. Dos tercios de las personas con infección genital por VHS no presentan recurrencias de sus síntomas y un tercio tiene tres o más recurrencias (brotes) por año.
El VHS-2 nunca se elimina del cuerpo; permanece latente y puede reactivarse, lo que causa síntomas.
El VHS-2 se detecta en mujeres gestantes empleando la técnica de microelisa la cual es de bajo costo, sencilla, fácil de interpretar y de gran utilidad. La técnica denominada ELISA (del inglés enzyme – linkedinmuno – sorbentassay) utiliza anticuerpos que se unen covalentemente a las enzimas; de este modo se conservan las propiedades catalíticas de las enzimas y la especificidad de los anticuerpos.
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El objeto de estudio de la tesis es detectar el VHS-2 mediante microelisa en mujeres gestantes de la consulta externa del área de ginecología y obstetricia en el hospital “Dr. Teodoro Maldonado Carbo, año 2013”.
Es conveniente porque nos permite tener un registro real de las mujeres gestantes infectadas por el VHS-2 que da lugar a problemas como microcefalia, corriorretinitis y retraso mental en el recién nacido, y la infección neonatal diseminada por este virus conlleva una elevada incidencia de mortalidad entre los lactantes.
La importancia social en mujeres gestantes con un mal diagnóstico con VHS-2 producirá una infección congénita o la muerte del recién nacido.
La importancia teórica en el presente trabajo se detallará la técnica de microelisa y se dejara claro como se establecerá el diagnóstico de VHS-2 a través de la presencia o ausencia de anticuerpos de tipo IgM o IgG.
Importancia práctica radica en que la descripción de la técnica usada en el presente estudio servirá como base para estudios posteriores de otras tesis o trabajos estudiantiles.
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El laboratorio de serología, encuadrado en el servicio de Microbiología Clínica, es el encargado de realizar el diagnostico indirecto a través de una tecnología que ha evolucionado en el estudio y diagnóstico de las enfermedades infecciosas muy rápidamente; la aparición de los anticuerpos de la muestra con el antígeno unido a de su superficie de poliestireno.
La producción controlada de anticuerpos más específicos y de mayor afinidad hizo posibles, por una parte la mejoría de las técnicas ya existentes (IFI, latex, hemaglutinación) y por otra la aparición de microtécnicas, (RIA, ELISA), que utilizan pequeños volúmenes de muestra para su realización.
Desde siempre el inconveniente más importante que ha tenido el diagnóstico indirecto ha sido su falta de rapidez. Al tiempo que tarda el organismo en formar los anticuerpos se le sumaba la tediosidad en tiempo de la realización técnica.
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La llegada de la biología molecular ha puesto a nuestra disposición la posibilidad de producir antígenos nativos lo que ha permitido una gran expansión del catálogo de pruebas diagnósticas disponibles en los últimos años y por otro se ha mejorado mucho las pruebas permitiendo acortar sustancialmente los tiempos de realización de las mismas.
En la actualidad es muy rara la metodología que no pueda realizarse a lo largo de unas pocas horas e incluso minutos y todas ellas con una calidad excelente.
Todas pueden por tanto considerarse como técnicas cortas y aunque es muy difícil de precisar en cuanto disminuye el coste de la enfermedad la celeridad y el significado diagnóstico de un resultado serológico, sí es cierto que en muchas ocasiones elimina la práctica de otras exploraciones complementarias y la aplicación más dirigida de los tratamientos.
Esto hace del mismo un método nada despreciable, y a veces único, a la hora de plantearse en clínica el diagnóstico etiológico de algunas enfermedades infecciosas.
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Esta capacidad multiparamétrica capacita a los laboratorios para la realización diaria de una gran cantidad de determinaciones en corto intervalo de tiempo, con el inconveniente de que en muchos casos las pruebas no pueden personalizarse.
2.2. IMPORTANCIA
Se confirma que ELISA proporciona títulos más significativos de IgG e IgM que la reacción de microelisa, durante la fase inicial de la infección. Esta mayor sensibilidad de Elisa y la importancia que deriva de dicho resultado con respecto al diagnóstico precoz de aquellas infecciones que requieren de un tratamiento inmediato.
Por otra parte, se demuestra la superioridad de ELISA, en la detección de las infecciones agudas aparentemente asintomáticas, adquiridas y congénitas. Los resultados indican que la introducción del método de ELISA (IgG e IgM) constituye una responsabilidad ineludible para aquellos laboratorios especializados que practican la serología de la enfermedad de chagas con fines diagnósticos.
2.3. CONCEPTOS DE LA TECNICA DE ELISA.
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De igual manera, se puede citar otros autores, que indican que las pruebas de ELISA son las preferidas por los laboratorios para establecer un diagnóstico eficaz.
Sleisenger M. D. Marvin (2009) dice:
“Las pruebas serológicas de los anticuerpos especificados por
ELISA han resuelto el problema del diagnóstico, permitiendo un
monitoreo serológico en un corto tiempo, usando un método
simple altamente específico sin recurrir a técnicas invasivas”.
La unión covalente de las enzimas a los anticuerpos da lugar a una herramienta inmunológica que posee a la vez una alta especificidad y sensibilidad.
La técnica denominada ELISA (del inglés enzyme – linkedinmuno – sorbentassay) utiliza anticuerpos que se unen covalentemente a las enzimas; de este modo se conservan las propiedades catalíticas de las enzimas y la especificidad de los anticuerpos.
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Berg Martín Salomón (2009), dice:
“El inmunoanálisis absorbente ligado a enzimas (ELISA), se emplean para detectar antígenos de agentes infecciosos presentes en las muestras clínicas. Un formato empleado comúnmente es unir un anticuerpo capturado, especifico para el antígeno en cuestión, con los pozos de las microplacas de plástica para micro dilución. La muestra que contiene el antígeno se incuba en los pozos y luego se enjuagan. Un segundo anticuerpo para el antígeno, marcado con enzima, se emplea para detectar el antígeno. La adición del sustrato para la enzima permite detectar el antígeno unido mediante una reacción colorimétrica”. (Págs. 576).
Se han desarrollado dos metodologías de ELISA, una para la detección del antígeno (ELISA directo) y otra para la detección de anticuerpos (ELISA indirecto). Para la detección de antígenos, como partículas víricas, a partir de la sangre o de una muestra, se utiliza el ELISA directo. En esta técnica, el antígeno es <<atrapado>> entre dos capas de anticuerpos, de ahí que a veces se denomine a este método (ELISA en sándwich).
La muestra se añade a los pocillos de una placa de microtitulación previamente recubierta con anticuerpos específicos para el antígeno que quiere detectarse. Si el antígeno (partícula vírica) se halla presente en la muestra, quedará atrapado en los sitios de unión al antígeno de los anticuerpos.
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Después del lavado, la actividad de la enzima del material unido en cada pocillo de micro titulación se determina añadiendo el sustrato de la enzima. El color que se forma es proporcional a la cantidad de antígeno presente.
El ELISA indirecto se utiliza para detectar anticuerpos en el suero humano. La prueba de ELISA indirecta se usa habitualmente para la detección de anticuerpos; se va a exponer esta prueba con cierto detalle, pues los principios en que se basa se aplican a todas las pruebas del ELISA indirecta.
La velocidad, el bajo coste, la ausencia de residuos radiactivos y el largo periodo de caducidad convierten los ELISA en unas pruebas particularmente atractivas para muchos laboratorios. Pero lo que realmente hace de los ELISA herramientas inmunodiagnósticas importantes es su exquisita sensibilidad.
2.4. FUNDAMENTO DEL METODO
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2.5. REACTIVOS PROVISTO
1: vircell herpes simplex dos plate: una placa con 96 pocillos recubierto con antígenos gG- 2 de herpes simplex tipos dos, sepa lovelace.
2: vircell serum diluent : 25 ml de diluyente para suero: tamponfosfatos con estabilizante de proteínas, con proclin y coloreado de azul. Lista para su uso.
3: vircell IgG positive control: 500 ul de suero contro positivo para IgG con proclin.
4: vircell IgM positive control: 500ul de suero control positivo para IgM con proclin.
5: vircell IgG cut off control: 500 ul de suero cut off para IgG con proclin.
6: vircell IgM cut off control: 500 ul de suero cut off para IgM con proclin.
7: vircell IgG negative control: 500 ul de suero control negative para IgG con proclin.
8: vircell IgM negative control: 500 ul de suero control negativo para Igm con Proclin.
9: vircell IgG conjugate: 15 ml de una dilución de globulina anti-IgG humana conjugada con peroxidasa, con proclin y coloreada de naranja. Lista para su uso.
10: vircell IgM conjugate 15 ml de una dilución de globulina anti-IgM humana conjuga con peroxidasa, con proclin y coloreada de naranja. lista para su uso.
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12: vircell stop reagent: 15 ml de solución de parada: acido sulfúrico 0,5 ml .
13: vircell wash buffer : 5 ml de solución de lavado (concentrado 20x) : tampón fosfato con tween-20 y con proclin.
2.6. MATERIALES NECESARIO NO CONTENIDO EN EL KIT.
Pipeta de precisión para dispensar 5 100 ul.
Pipeta multicanal de precisión para dispensar 100ul.
Lavador de placas de ELISA.
Incubador –baño termostatizado.
Espetrofotometro de placas de ELISA con filtro de 450 nm y filtro de
referencia de 620 nm. Agua destilada.
Alternativamente procesador automático de ELISA.
Para las pruebas de IgM, sorbente de IgG humana (REF. vircell s001).
2.7. MUESTRA.
Suero o plasma
a) Recolección: obtener de la manera usual. No usar muestra inactivadas por calor (pueden dar falsos positivos).
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c) Sustancias interferentes conocidas: la hemolisis hiperlipemia y otras causas de turbiedad pueden provocar resultados erróneos. Estas muestras deben ser clarificadas por centrifugación
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: las muestras no diluidas pueden conservarse durante 7 días de 2 a 10ºC. Para conservación por periodos más prolongados, deben ser congeladas a -20ºc o menos evitar los congelamientos y descongelamientos reiterados.
Existen evidencias que muestran que los congelamientos sucesivos pueden ser causas de resultados erróneos. Si las muestras deben ser transportadas, embalar de acuerdo a las especificaciones legales relativas al envió de materiales infecciosos.
2.8. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD.
Use guantes cuando manipule muestras y reactivos.
No pipetee con la boca.
No coma, beba, fume o manipule lentes de contacto en el área de
trabajo.
Limpie y desinfecte cualquier derrame de muestras o reactivos utilizando
algún desinfectante tal como hipoclorito de sodio al 0,5%.
Evite el contacto de la solución de frenado con piel y mucosas. Si éste u
otro reactivo entra en contacto con piel o mucosas, lave el área afectada con abundante agua.
Elimine todo el material contaminado en recipientes adecuados para
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a 121º C por una hora o tratados con hipoclorito de sodio por dos horas.
Los restos de muestras, controles y reactivos utilizados deben ser
tratados con hipoclorito de sodio al 0,5% por dos horas antes de ser eliminados.
2.9. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE.
Reactivo a utilizar para identificar anticuerpos DE HERPES EN ELISA” debe ser almacenado y transportado a una temperatura de entre 2 y 8º C.
No debe ser congelado.
Los estudios de estabilidad demuestran que HERPES TIPO DOS EN ELISA conserva su actividad inicial después de una semana a 37ºC. Sin embargo se recomienda respetar las condiciones de almacenamiento descritas.
PREPARACION Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS
Las muestras que contienen precipitados o coágulos deben ser centrifugadas a 2500 rpm por 10 minutos antes del análisis. Advertencia: no utilizar muestras con contaminación microbiana pues pueden producir falsos resultados. Las muestras pueden ser conservadas entre 2 y 8º C hasta una semana antes de ser analizadas.
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No someta las muestras a ciclos repetitivos de congelamiento-descongelamiento, ya que esto afecta su estabilidad.
Advertencia: no congele las muestras en congeladores con deshielo automático. Si utiliza muestras congeladas éstas deberán ser homogeneizadas y centrifugadas antes de su uso.
2.10. CALIBRACION Y PROCEDIMIENTO DEL EQUIPO
Calibración.- Alternativamente, los resultados pueden calcularse a partir de una curva de calibración a tres puntos: calibrador 1 (punto alto), calibrador 2 (punto medio) y blanco de reactivos (cero), usando un grafico punto a puntos.
Procedimiento
1: Ajustar estufa a 37+/- grados centígrado.
2: Sacar todos los reactivos una hora antes de la realización del test para alcance la temperatura ambiente evitando sacar la placa del envase. 3: Agitar todos los componentes.
4: Sacar el número de pocillos 1 necesario para el numero de suero que se va a procesar, mas otro 4 pocillos, uno para el control positivo, uno para el control negativo y dos para el suero de cut off. Colocar el resto de los pocillos en el sobre y volver a cerrarlo.
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dilusion de la muestra en tubo o placa añadiendo el doble del volumen del diluyente e muestras 2 y de muestra. Homogenizar con la pipeta y trasvasar seguidamente 105 ul de cada muestra ya diluida a los pocillos 1 .
6: Para determinación de anticuerpos IgM añadir 25 ul de sorbente IgG (REF. vircell s001) a todo los pocillos que se vallan a emplear , exceptos a los pocillos donde se dispense los controles : añadir 5 ul de las muestras y seguidamente 75 ul del diluyente de muestra 2 a todos los pocillos empleados ; para la preparación de los pocillos de los controles , añadir100 ul de diluyente de muestra 2 , y seguidamente 5 ul del control positivo 3M , 5 ul del suero cut off 4M (en duplicado), y 5 ul de control negativo 5M en los pocillos correspondiente. En el caso de la realización manual del método, se agitara la placa en un agitador (dos minutos) para garantizar una mezcla homogénea de los reactivos: sino es posible asegurar esta agitación, debe hacerse una pre dilución de la muestra en tubo o placa añadiendo el doble del volumen de los reactivos y de la muestra: homogenizar con la pipeta y trasvasar seguidamente 105 ul de cada muestra ya diluida de los pocillos 1.
7: Tapar mediante lamina adhesiva e incubar en estufa – baño durante 45 minutos a 37 +/- un grado centígrado.
8: Retirar la lamina adhesiva aspirar el contenido de todos los pocillos y lavar cada uno de ellos cinco veces con 0,3 ml de solución de lavado 9, asegurándose que no quedan restos de solución de lavado.
9: Añadir inmediatamente 100 ul de conjugado IgG 6G o IgM 6M a todos los pocillos.
10: Tapar mediante lamina adhesiva e incubar en estufa- baño durante 30 minutos a 37 +/- un grado centígrado.
11: Retirar la lamina adhesiva , aspirar el contenido de todos los pocillos y lavar cada uno de ellos 5 veces con 0,3 ml de solución de lavado 9, asegurándose que no quedan resto de solución de lavado.
12: Añadir de inmediatamente 100 ul de solución de sustrato 7 a todos los pocillos.
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15: Valorar espectrofotométricamente a 450 / 620 nm, antes de una hora de acabado el ensayo.
2.11. APLICACIÓN DIAGNÓSTICA
La responsabilidad de todo laboratorio se Salud Pública es la de diagnosticar y controlar las enfermedades transmisibles y para ello debe contar con técnicas rápidas posibles sin menoscabar la especificidad. La técnica de la MICROELISA es potencialmente aplicable a cualquier sistema en los cuales una reacción del antígeno y anticuerpo se produce. Desde el punto de vista diagnóstico la técnica permite identificar rápidamente un anticuerpo o un antígeno con un alto grado de sensibilidad y especificidad. Por lo tanto la técnica de MICROELISA ha venido a sustituir en parte a las lentas y laboriosas etapas de aislamiento, preparación, caracterización bioquímica y serológica empleadas en un laboratorio de diagnóstico.
Control de calidad interno.
Cada lote se somete a control de calidad interno antes de su liberación asegurando el cumpliendo del protocolo de validación por el usuario mediante especificaciones más estrictas: los resultados de control final de cada lote están disponibles.
La correlación del material de control se asegura mediante ensayo paralelos frente a panales de sueros de referencia internamente
2.12. PROTOCOLO DE VALIDACION POR EL USUARIO.
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La densidad óptica de los controles deben estar en los rango siguientes : en caso contrario se desechara la prueba.
CONTROL
D.O
CONTROL POSITIVO > 0,9
CONTROL NEGATIVO < 0,5
CONTROL CUT OFF > 0,55 / < 1,5
INTERPRETACION DE RESULTADO.
Cacular la media de las D.O . del suero cut off.
Índice de anticuerpo = (D.O. de la muestra- media de D.O. del suero cut off) x 10.
INDICE
INTERPRETACION
< 9 NEGATIVO
9-11 DUDOSO
> 11 POSITIVO
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Las muestras con índices inferiores a 9 se consideran que no tienen anticuerpos especifico frente al herpes simplex tipo dos IgG – IgM , según el procedimiento empleado.
Las muestras con índices superiores a 11 se consideraran que tienen anticuerpos específicos frente a herpes simplex tipo dos IgG o gM, según el procedimiento empleado.
2.13. HERPES SIMPLE TIPO 2
La familia de los herpes virus contiene varios de los virus patógenos humanos más importantes. Los herpes virus producen una amplia gama de enfermedades clínicas. Algunos afectan a una amplia variedad de células hospedadoras, en tanto que otros afectan a unas cuantas.
Brooks, G (2010) dice: “La propiedad destacada de los herpes virus
es su capacidad para establecer infecciones persistentes de por vida
en sus hospedadores y experimentar reactivación periódica. Su
activación frecuente en los pacientes inmunodeprimidos produce
complicaciones graves” (p, 433).
Es curioso que desde el punto de vista clínico, la infección reactivada pueda ser muy diferente a la enfermedad causada por la infección primaria. Los herpes virus poseen un gran número de genes, algunos de los cuales han resultado ser susceptibles a la quimioterapia antiviral.
26
herpes virus 8 (herpes virus relacionado con el sarcoma de Kaposi). El virus del herpes B de los monos también puede infectar al ser humano.
2.14. INFECCIÓN POR VIRUS DEL HERPES SIMPLE TIPO 2
El herpes genital, que suele deberse al VHS-2, afecta principalmente a los adultos y se transmite por contacto sexual. Se presentan infecciones primarias y recurrentes, con síntomas o sin ellos. En las mujeres, los sitios principales de afección primaria son el cuello uterino y la vulva; la enfermedad recurrente por lo general afecta a la vulva, la piel perineal, las piernas y los glúteos.
En los hombres, las lesiones aparecen en el glande o en el prepucio, así como en el ano y el recto en quienes tienen relaciones sexuales anales. En hombre y mujeres, la infección puede afectar otras zonas genitales o perineales, así como la boca, según las prácticas sexuales de los individuos. El VHS-2 se acompaña con mayor frecuencia de meningitis aséptica y radiculitis que de meningoencefalitis.
Son los patógenos más importantes de esta familia. El VHS-1 fue el primer virus de herpes que primero aislado. Ambos virus comparten homología del DNA, determinantes antigénicos y sintomatología. La respuesta inmune es permanente pero no es protectora.
27
En la segunda fase se expresan los genes tempranos que codifican por proteínas virales involucradas en la síntesis del DNA, entre ellas está la polimerasa viral y por factores de trascripción. Finalmente en la tercera fase se sintetizan las proteínas tardías, que son principalmente estructurales.
La transcripción del genoma viral la hacen las transcriptasas celulares, pero se regula por factores de transcripción codificados por el virus y por la célula. La respuesta lítica o latente está regulada por los factores de transcripción y genes celulares.
En la respuesta latente se transcriben únicamente los genes pre-tempranos, en cambio, para tener una respuesta lítica se requiere la expresión de genes de las tres diferentes fases. El genoma de los virus de herpes tiene capacidad para codificar de 40 a 80 proteínas, aunque algunas de ellas no se expresan en cultivos celulares y están involucradas en el transporte del virus en el organismo.
Las infecciones neonatales se dividen en tres cuadros clínicos iniciales: infecciones diseminadas que afectan en particular al hígado, cuadros de encefalitis e infecciones limitadas a la piel, los ojos o la boca. Las dos primeras formas suelen ser mortales.
Heymann, D. (2010) considera:
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el recién nacido, con la rara excepción de las infeccio- nes intrauterinas. La infección primaria de la madre ele- va el riesgo de infección de 3% a más de 30%, tal vez porque la inmunidad materna confiere cierta protección en caso de infección secundaria (p. 353).
2.15. EPIDEMIOLOGÍA Y VÍAS DE TRANSMISIÓN
Puesto que el VHS puede alcanzar un estado de latencia, con posibilidad de recurrencia asintomática, el individuo infectado es una fuente de contagio durante toda la vida. Como cualquier otro virus encapsulado, el VHS se transmite a través de secreciones y por contacto íntimo. El virus es muy lábil y se inactiva con facilidad con la desecación, los detergentes y las condiciones imperantes en el tubo digestivo. A pesar de que el VHS puede infectar las células animales, la infección por VHS es una enfermedad exclusivamente humana.
Las infecciones por VHS 1 y 2 son vitalicias y aunque la latencia se establece con rapidez, el paciente infectado puede infectar a otros como resultado de recurrencia. El virus se encuentra en las lesiones cutáneas pero también puede estar presente en diversos fluidos corporales incluyendo la saliva y secreciones vaginales. A pesar de la aparente regla de arriba de la cintura/debajo de la cintura, ambos tipos de VHS pueden infectar tanto la mucosa oral como la genital dependiendo de las regiones de contacto. No obstante, el VHS-1 usualmente se transmite de boca a boca (al besar o al compartir utensilios contaminados con saliva) o por la transferencia de virus infeccioso a las manos y posterior penetración del mismo mediante heridas o por la mucosa de los ojos.
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países en vías de desarrollo, se encuentran anticuerpos al VSH-1 en más del 90% de la población infantil.
El VHS-2 normalmente se disemina sexualmente y se encuentra en el ano, recto y tracto alimentario superior así como en el área genital. Además, como se mencionó anteriormente, un niño puede infectarse al nacer si la madre tiene infección genital. El niño también puede adquirir la enfermedad in útero si la infección de la madre se disemina. Debido a que el niño tiene un sistema inmune poco desarrollado, la infección resultante puede ser muy severa y algunas veces conllevar a la muerte.
Cualquiera que haga contacto con fluidos impregnados del virus infeccioso está en riesgo. Existe una entidad que afecta a los profesionales de la salud denominada panadizo herpético que resulta en lesiones en los dedos (puede ser causado por cualquier tipo de VHS).
Como es de suponer, las infecciones por VHS-2 son más prevalentes más tarde en la vida, a medida que aumenta el número de contactos sexuales. Por ende, las tasas más bajas de infección se encuentran en niños las más altas en prostitutas, dentro de las cuales un 80% están infectadas con VHS-2.
La infección por VHS-1 es frecuente en sitios hacinados y con condiciones precarias de higiene se tienen porcentajes de 90% de la población tienen anticuerpos antivirales. La infección por VHS-2 depende de la actividad sexual.
30
El VHS se transmite a través del líquido de las vesículas, la saliva y las secreciones vaginales (la mezcla y coincidencia de las membranas mucosas). El lugar de la infección y, por tanto, de la enfermedad se ve determinada fundamentalmente por el tipo de combinación de membranas mucosas. Ambos tipos de VHS pueden provocar lesiones bucales y genitales.
El VHS-1 en ubicación oral se transmite por saliva, besos, por compartir vasos, cepillos de dientes y en otras partes del cuerpo se debe a contacto del virus con la piel, se autotransmite con frecuencia, principalmente a los ojos. El VHS-2 se transmite por secreciones vaginales, contacto sexual y al neonato durante el paso por el canal de parto infectado.
El herpes genital activo en la madre es un factor obvio de riesgo aunque en gran porcentaje de los niños infectados la causa es herpes asintomático.
La posibilidad de que VHS-1 y VHS-2 establezcan infecciones latentes con recidivas asintomáticas favorece su transmisión, ya que un individuo infectado puede ser transmisor durante toda su vida. Los virus infectantes se encuentran en el líquido de las vesículas.
31
La infección por el VHS-1 es frecuente. Más del 90% de los individuos que viven en regiones subdesarrolladas tiene anticuerpos frente al VHS-1 a la edad de 2 años. Este fenómeno no puede ser consecuencia del hacinamiento o de una higiene deficiente.
El VHS-2 se disemina principalmente por contacto sexual o autoinoculación, o una madre infectada puede contagiarlo a su hijo en el momento de nacer. Dependiendo de las prácticas sexuales del sujeto y de su higiene, el VHS-2 puede infectar los genitales, los tejidos anorrectales o la bucofaringe. La incidencia de la infección genital por el VHS-1 se acerca ya a la del VSH-2. El VHS-2 puede provocar una infección genital primaria sintomática o asintomática, o bien dar lugar a las recurrencias.
Murray, P. (2010) afirma:
La infección neonatal acostumbra a ser resultado de la excreción de VHS-2 desde el cuello uterino durante el parto vaginal, pero también puede deberse a una infección ascendente in útero durante una infección primaria de la madre. La infección neonatal da lugar a una enfermedad diseminada y neurológica cuyas consecuencias son graves. (p 522).
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Melnick, J (2011) afirma: “Se estima que el herpes neonatal se
presenta en casi 1 de 5000 partos al año. El infante recién nacido al
parecer es incapaz de limitar la replicación y diseminación de VHS y
es propenso a desarrollar enfermedad grave” (p, 431).
2.16. ASPECTOS VIROLÓGICOS
Los viriones son icosaédricos y están formados por hasta 162 capsómeras tubulares que rodean un núcleo de ADN. Dicho núcleo está rodeado de una estructura amorfa llamada tegumento y en forma más externa se encuentra una envoltura abombada; también es posible hallar partículas sin envoltura.
El diámetro de la partícula desnuda se aproxima a 100 nm y el del virión envuelto completo es de 120 a 200 nm.
2.17. GENOMA
Estos virus poseen genoma de ADN de doble cadena lineal cuyo peso molecular varía entre 125 y 229 kbp, según la subfamilia a la que pertenezcan. El genoma es infeccioso.
33
Collier, L. (2009) asevera:
El herpes simple es el prototipo de virus de la familia y su secuencia genómica ya ha sido secuenciada completamente. Posee 152 kbp que contienen 80 genes; cada uno de éstos se expresa a partir de su propio promotor. Existen muchos marcos de lectura traslapados. El genoma de VHS-1 tiene dos secciones unidas por covalencia a las que se llama regiones larga única y corta única; cada una se ve limitada por repeticiones invertidas que permiten reordenamientos estructurales de las regiones únicas y, en consecuencia, el genoma de VHS-1 es una mezcla de cuatro isómeros funcionalmente equivalentes entre sí. Todos los genomas del herpes muestran secuencias repetidas, lo cual introduce otra variante en el tamaño de los genomas de la familia viral. (p.138)
34
2.18. POLIPÉPTIDOS
El gran genoma codifica para 80 a 100 polipéptidos, muchos de los cuales son proteínas NS, incluso una ADN polimerasa fundamental para la replicación. VHS-1, VHS-2 y VVZ codifican una enzima fosforilante, una TK esencial para activar ciertos medicamentos antivirales. Las proteínas estructurales se observan en la nucleocápside, el tegumento y la envoltura lipídica.
2.19. ANTÍGENOS
Como cabría esperar por los numerosos polipéptidos que contienen estos virus, el análisis de antígenos y el estudio de las pruebas serológicas de reacción cruzada resultan difíciles las pruebas convencionales, como las de neutralización y las de fijación del complemento permiten identificar a las subfamilias.
Oxford, J (2010) considera: “Es posible distinguir entre 1 y
VHS-2 por absorción cruzada, pero es mejor emplear anticuerpos
monoclonales o el análisis de restricción de endonucleasas del ADN
viral. En el laboratorio de diagnóstico se ha dado más atención a los
antígenos del virus de Epstein-Barr (VEB), ya que su patrón permite
obtener información valiosa acerca de los estados de infección”.
2.20. REPLICACIÓN
35
de fusión complejo de la envoltura lipídica viral con la membrana plasmática.
La cápside viral es transportada al poro nuclear, donde el ADN lineal es liberado e ingresa al núcleo de la célula donde se llevan a cabo la mayoría de las actividades de transcripción, replicación viral y ensamble de la cápside.
i) Fijación a la superficie celular: Al igual que con muchos otros virus, el tropismo celular está determinado por la disponibilidad de los receptores adecuados en la superficie de la célula a ser infectada.
El virus de fija a la membrana celular a un pH ambiente y por tanto cabe la posibilidad de la formación de sincitios entre las células infectadas y de transmisión de célula a célula aún en la presencia de anticuerpos humorales neutralizantes. Esto significa que la inmunidad mediada por células es importante en la supresión de infecciones por herpesvirus.
ii) Entrada de la nucleocápside al citoplasma: La nucleocápside rodeada de tegumento es transportada a la membrana nuclear a la que se une. El genoma de ADN entra al núcleo.
iii) Transcripción: Este es un proceso muy complejo, como es de esperarse por el gran tamaño del genoma. Hay tres clases de proteínas que necesitan sintetizarse para la producción de un virus maduro.
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Beta proteínas. Estas son las proteínas tempranas y están implicadas también en la replicación de ADN (entre estas se incluyen la ADN polimerasa y los factores de transcripción). Solo unas cuantas copias de la ADN polimerasa son necesarias para que ocurra la replicación.
Gamma proteínas. Estas son las proteínas de fase tardía y son componentes estructurales del virus. La síntesis de gamma proteínas comienza después del inicio de la síntesis de ADN (figura 4).
iv) Transcripción de ARN: El ADN herpético se transcribe a ARN por una enzima celular (ARN polimerasa I ADN-dependiente). No obstante, la transcripción de varios genes es dependiente tanto de factores nucleares de la célula como de proteínas codificadas por el virus.
Este control del ARNm viral, y por tanto, de la síntesis de proteínas virales, determina si la infección propagará la producción de nuevas partículas víricas y de muerte celular (una infección lítica), una descamación continua del virus (infección persistente) o latencia. El que ocurra o no la latencia es propiedad de la célula huésped, eso es, algunas células no permiten la replicación del ADN viral. Si la célula permite la progresión más allá de las etapas de los genes tempranos inmediatos, sobreviene una infección lítica.
37
pudieran replicarse dada la poca cantidad de precursores de ADN en las células nerviosas.
vi) Ensamblaje: Las nucleocápsides son ensambladas en el núcleo y se rellenan con ADN. Luego yeman a través de la doble membrana nuclear y dejan la célula mediante exocitosis o yeman a través de otra membrana celular como la membrana plasmática.
El virus induce la interrupción de la síntesis de proteína y ácido nucleico del hospedero. Inicialmente se observa actividad explosiva de transcripción de los genes virales tempranos y, poco más tarde, al iniciarse la replicación del ADN viral se transcribe los genes intermedios y tardíos. No es raro que todo el proceso esté bajo control estricto.
La proteína tegumentaria del virus estimula la transcripción de las moléculas de ARNm α temprano inmediato que, una vez transferidas al citoplasma, inician la traducción a proteínas α.
En conjunto éstas son proteínas transreguladoras que controlan la expresión de los genes β y tardíos. Las proteínas β son principalmente enzimas, como TK, ADN polimerasa y helicasa, necesarias para la replicación del ADN viral. Las partículas de ARNm se activan después de la replicación del ADN viral y codifican para proteínas estructurales.
38
Se produce gemación a través de la membrana nuclear y los virus envueltos se agrupan en el retículo endoplásmico antes de ser liberados de la célula.
Casi cualquier tipo de célula humana puede ser infectada por un VHS. En muchas células, como las endoteliales y fibroblastos, la infección es lítica pero las neuronas generalmente soportan una infección latente.
Fijación: El paso inicial de la interacción del virus con la célula es la fijación al proteoglicano, heparan sulfato. Esta molécula se encuentra en la superficie de muchas células.
Fusión: Luego de la fijación, el virus se funde directamente con la membrana plasmática (no es necesaria la entrada a través de endosomas/lisosomas de pH bajo). Luego de que ocurre la fusión, el virus libera algunas proteínas al citoplasma. Entre estas se incluyen algunas toxinas, una proteína cinasa y un iniciador de la transcripción genética.
39
Como se mencionó anteriormente, solo unas cuantas proteínas de ADN polimerasa necesitan sintetizarse para la replicación del ADN viral. En principio, se sintetizan concatómeros circulares pero luego la síntesis pasa a cadenas lineales de moléculas individuales que con separadas en monómeros.
Esto ocurre por un mecanismo de rodillos (vea lectura). Los genes de fase tardía son luego transcribidos en grandes cantidades, probablemente impulsados por la síntesis de ADN. Son traducidos en el citoplasma y transportados de nuevo hacia el núcleo en donde se ensamblan en la procápside. Esta última es rellenada con AND viral.
Síntesis de glicoproteínas: Todas las glicoproteínas se sintetizan en el retículo endoplásmico rugoso en donde reciben cadenas ricas en azúcar manosa. Las glicoproteínas son llevadas a la membrana nuclear, probablemente por un proceso de difusión puesto que la membrana del retículo endoplásmico es continua con la membrana nuclear externa. Se desconoce cómo la proteína sobrepasa los poros nucleares.
Luego las nucleocápsides yeman a través de la membrana nuclear mediante áreas en las cuales las proteínas virales están muy concentradas. De alguna manera, el virus entra en el proceso de exocitosis luego de ser modificado en el cuerpo de Golgi en donde recibe cadenas de sacarosas características de proteínas procesadas en el cuerpo de Golgi (es decir, que contienen galactosa y ácido siálico).
2.21. SÍNTOMAS
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en la mucosa de la vagina y del cérvix y en la piel de la vulva. En el caso del hombre aparecen estas mismas lesiones de vesículas y úlceras, tanto en la mucosa como en la piel del pene. La mayoría de las personas con herpes genital no tienen síntomas, muestran síntomas muy leves que pasan desapercibidos o algunos síntomas que no reconocen como síntomas de la infección. El síntoma típico del herpes es un grupo de llagas o ampollas, generalmente en la vagina, vulva, cuello del útero, pene, glúteos o ano. Los síntomas pueden durar varias semanas y desaparecer. Pueden volver a aparecer a las semanas, meses o años.
La primera vez que aparecen los síntomas de herpes genital se llama "primer episodio" o "herpes inicial". Generalmente, los síntomas de herpes inicial son más notorios que aquéllos de los rebrotes posteriores.
Algunos de los síntomas de herpes genital son:
Ampollas
Sensación de ardor si la orina cae sobre las llagas
Imposibilidad de orinar si una marcada hinchazón de las llagas bloquea la uretra
Picazón
Llagas abiertas
Dolor en el área infectada
En el herpes inicial, los síntomas también pueden incluir:
Glándulas hinchadas y sensibles en el área de la pelvis, la garganta y en las axilas
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Sensación general de cansancio
Sensación de dolor similar a la de una gripe
Si aparecen síntomas de herpes inicial, generalmente lo hacen de 2 a 20 días después de la infección. Pero pueden pasar años hasta que aparezcan los primeros síntomas.
Las llagas del herpes inicial frecuentemente sanan en aproximadamente dos a cuatro semanas. Pero el virus permanece en el cuerpo. Puede reaparecer y causar la reaparición de las llagas. Los síntomas de los rebrotes generalmente se sanan en unos 10 a 14 días. Los síntomas del herpes pueden ser más dolorosos y duraderos en mujeres y hombres que tienen alguna enfermedad que debilita su sistema inmunitario, como en el caso de la leucemia y el VIH.
Estas lesiones tienen una duración de algunos días, una semana o diez días, evolucionan a costras que desaparecen, y meses después, o a veces semanas incluso, vuelven a aparecer las lesiones en un nuevo brote. Se acompañan de manifestaciones de tipo sensitivo como distesias o hiperestesias, esto es, que el individuo siente en la región de los glúteos, muslos y a veces del escroto, sensaciones de hormigueo, cosquilleo o presenta una mayor sensibilidad evidente, con hipersensibilidad al roce de la ropa.
Esto se debe a que el virus se encuentra en la región de los ganglios sacros y las fibras sensitivas se irritan, lo que trae como secuencia trastornos de sensibilidad.
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Como consecuencia de este brote se pueden desarrollar complicaciones como meningitis aséptica, disuria, crecimiento de ganglios linfáticos inguinales y síndrome de retención urinaria que es más frecuente en mujeres. Unas complicaciones a largo plazo pueden ser las neuralgias y la radiculomielitis sacra.
Otra localización de las lesiones por Herpes simplex tipo 2 es rectal y perianal. La proctitis presenta el desarrollo a nivel de la mucosa rectal de las mismas lesiones descritas en otras partes. Esta localización se produce por la transmisión a través de actividad sexual con penetración anal. La evolución del brote herpético secundario tiende a ser diferente del primario, ya que la duración es menor y las manifestaciones clínicas en general son menos severas y con menos complicaciones.
2.22. FUNDAMENTACIÓN LEGAL
Ley sobre salud
Art 359 Sistema nacional de salud comprenderá instituciones programas ,políticas recursos ,acciones y actores en salud, abarcando con todas dimensiones del derecho a salud ,garantizara promoción ,prevención ,recuperación y rehabilitación en todos niveles y propiciara participación ciudadana y control social.
43
otros proveedores que pertenecen estado, con vínculos jurídicos, operativos y de complementariedad.
Art.361. Estado ejercerá rectoría del sistema a través de autoridad sanitaria nacional, será responsable de formular a política nacional de salud, así como el funcionamiento de entidades del sector.
Art.362. Atención de salud como servicio público se prestara a través de entidades estatales ,privadas autónomas, comunitarias y aquellos que ejercen medicinas ancestrales alternativas y complementarias .servicios de salud serán seguros de calidad y calidez y garantizaran el consentimiento informado, el acceso a información y confidencialidad de información de pacientes servicios públicos estatales de salud serán universales y gratuitos en todos niveles de atención y comprenderán procedimientos de diagnóstico tratamientos ,medicamentos y rehabilitación necesarios
Art.363.- El estado será responsable de:
1. Formular políticas públicas que garanticen la promoción, prevención, curación, rehabilitación y atención integral en salud y fomentar prácticas saludables en los ámbitos familiar, laboral y comunitario.
2. Universalizar la atención en salud, mejorar permanentemente la calidad y ampliar la cobertura.
44 4. Asegurar acciones y servicios de salud integral.
5. Garantizar las disponibilidad y acceso a medicamentos de cálida, seguros y eficaces, regular su comercialización y promover la producción nacional y la utilización de medicamentos genéricos que respondan a las necesidades epidemiológica de la población
6. Promover el desarrollo integral del personal de salud
2.23. FUNDAMENTACIÓN PSICOLÓGICA
El ser humano en sus manifestaciones conductuales por eso se dice que la psicología es la ciencia que estudia el comportamiento de los seres vivos, especialmente del hombre y del medio que lo rodea.
La falta de información, la importancia de conocer esta enfermedad, conlleva a diversos factores de riesgo a nivel cardiaco y digestivo y cerebral, lo cual complica el tratamiento empeorando la salud del paciente cuando está en un estadio complicado.
2.24. HIPÓTESIS
¿Sera que la técnica de microelisa es una prueba para detectar el herpes tipo dos?
2.25. VARIABLES
Dependiente: Técnica de Microelisa.
45
CAPÍTULO III
METODOLOGÍA
3.1. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
El estudio realizado responde a una investigación científica por constar del conocimiento racional, descriptivo, no experimental, bibliográfico, documental, investigativo, de corte transversal y retrospectivo que presento el diagnóstico de anticuerpos de herpes simple tipo 2 de mujeres gestantes.
3.2. TIPO DE LA INVESTIGACIÓN
El tipo de investigación considera el conocimiento racional y el conocimiento empírico, lo que determina el tipo de investigación científica basado en la amplia bibliografía sustentada por investigadores de nivel científico; respaldo de la actividad de campo que comprende el conocimiento empírico.
3.3. DISEÑO RETROSPECTIVO
La información de esta tesis fue obtenida al finalizar el período 2013 en los registros y archivos del área de inmunopatología.
46
3.4. NIVEL DE ESTUDIO
El nivel es científico porque se apoya en una amplia bibliografía que sustentada respalda la investigación de campo.
3.5. POBLACIÓN
La población que permitió realizar la presente investigación responderá a mujeres en estado de gestación que acudieron a la consulta externa del área de ginecología y obstetricia, a quienes se aplicó la técnica de MICROELISA; cuyos resultados se pueden observar en el literal 3.7 de la presente investigación.
POBLACION N.
PACIENTES 337
TOTAL 337
3.6. MUESTRA
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3.7. OPERACIONALIZACION DE LAS VARIABLES
El proceso de Operacionalización de variables en nuestra tesis se da a través de dimensiones, con indicadores observables, que permiten obtener información sobre cada indicador, para finalmente analizar el instrumento utilizado en la investigación. Una vez planteado el tema y problema quedaron establecidas como:
VARIABLE: CONCEPTO: DIMENSION: INDICADORES:
48
3.8. PROCEDIMIENTO Y TECNICA DE LA INVESTIGACION
En este estudio el proceso de investigación se llevó a efecto a través del planteamiento del problema que nos llevo a la revisión bibliográfica, tuvimos que definir la población con la cual íbamos a trabajar, la concreción del sistema de variables y la elaboración de los instrumentos, el diseño que realizamos en nuestra tesis fue el diseño transversal del cual obtuvimos los resultados respectivos para su análisis, finalmente terminamos nuestra investigación con las conclusiones y recomendaciones aquí expuestas.
TECNICAS:
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CAPITULO IV
4.1. ANALISIS E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS.
1. Análisis de los resultados de las mujeres gestante contagiada por
herpes tipo dos en el Hospital Teodoro Maldonado Carbo del área de
Ginecología de acuerdo a los meses.
Grafico1
Cuadro 1
Meses
N. Casos
Julio-Agosto
137
Septiembre-Octubre
120
Noviembre-Diciembre
80
Total
337casos
De acuerdo al análisis de investigación de los 337 casos hubo alto índice de contagio de mujeres gestantes con herpes tipo dos en los meses de Julio y Agosto con 137 casos; mientras en los meses de Noviembre y Diciembre hubo un Bajo de índice de contagio de mujeres gestante con herpes tipo dos con 80 casos.
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
80%
137%
50
2. Análisis de los resultados de las mujeres gestante contagiada por
herpes tipo dos en el Hospital Teodoro Maldonado Carbo del área de
Ginecología de acuerdo a las edades.
Grafico2
Cuadro 2
Edades
N. Casos
18-20
137
21-23
120
24-27
80
Total
337casos
De acuerdo al análisis de investigación de los 337 casos hubo mayor índice casos de contagio de mujeres gestantes con herpes tipo dos en las edades de 18-20 años con 137 casos; mientras en las edades de 24 a 27 años hubo un menor índice de contagio de mujeres gestante con herpes tipo dos con 80 casos.
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
137%
51
3. Análisis de los resultados de las mujeres gestante contagiada por
herpes tipo dos en el Hospital Teodoro Maldonado Carbo del área de
Ginecología de acuerdo a los resultados positivos.
Grafico3
Resultados del contagio por herpes
tipo dos
Positivo
negativos
Cuadro 3
Resultados
Números de casos
Positivo
240
Negativo
97
De acuerdo al análisis de investigación de los 337 casos hubo mayor índice casos de contagio de mujeres gestantes con herpes tipo dos fue de 240 casos positivos; mientras que hubo menor índice casos de contagio de mujeres gestantes de un resultado de 97 casos.
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo. Autor: Luis Ramírez
240% 97%
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4. Análisis de los resultados de las mujeres gestante contagiada por
herpes tipo dos en el Hospital Teodoro Maldonado Carbo del área de
Ginecología de acuerdo a la Edad gestacional de casos positivos.
Grafico 4
Edad Gestacional.
6 Smns EG
8 Smns EG
10 Smns EG
Cuadro 4
Edad Gestacional
N. Casos
6 semanas
150
8 semanas
50
10 semanas
40
Total
240 casos
De acuerdo al análisis de investigación de los casos hubo mayores casos de contagio de mujeres gestantes con herpes tipo dos en la edad gestacional de seis semanas con 150 casos; mientras tanto hubo menores casos positivos en la edad gestacional de 8 semanas con 40 casos.
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
150% 50%
53
5. Análisis de los resultados de las mujeres gestante contagiada por
herpes tipo dos en el Hospital Teodoro Maldonado Carbo del área de
Ginecología de acuerdo por cesárea o partos normal.
Grafico 5
Partos
normales
cesareas
Cuadro 5
Partos Números de casos
Normales
97
Cesáreas
240
Total
337
De acuerdo al análisis la población de las 337 mujeres contagiada por herpes tipo dos, 97 partos corresponde a partos normales; mientras 240 partos fueron por cesárea los que corresponde un alto índice.
97%
240%
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
54
6. Análisis de los resultados de las mujeres gestante contagiada por
herpes tipo dos en el Hospital Teodoro Maldonado Carbo del área de
Ginecología de acuerdo al análisis cuantitativo.
Grafico 6
cuantitativo
15 Eu/ml
18 Eu/ml
20 Eu/ml
Cuadro 6
Casos Cuantitativa
120
15
Eu/ml100
18
Eu/ml20
20
Eu/ml240 casos
Mayor de
11 Eu/mL
De acuerdo al análisis la población de las 240 mujeres contagiada por herpes tipo dos, de los 120 casos hubo un resultado cuantitativamente de 15 Eu/mL; mientras hubo un menor porcentaje de 20 casos de resultados cuantitativamente de 20 Eu/mL.
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
120% 100%
20%
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7. Análisis de los resultados de las mujeres gestante contagiada por
herpes tipo dos en el Hospital Teodoro Maldonado Carbo del área de
Ginecología de acuerdo al análisis cuantitativo de las Ig G – Ig M.
Grafico 7
Analisis de la IgG/IgM
IgG
IgM
Cuadro 7
Análisis IgG/IgM
casos
IgG
160
IgM
90
total
240
De acuerdo al análisis la población de las 240 mujeres contagiada por herpes tipo dos, de los 160 casos hubo un resultado IgG de 160 casos; mientras hubo un menor porcentaje de 90 casos de resultados de IgM. Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
Fuente: Hospital Teodoro Maldonado Carbo Autor: Luis Ramírez
56
4.2. CONCLUSIONES
1. De acuerdo a resultados de exámenes realizados a las unidades de sangre del hospital Teodoro Maldonado Carbo durante el año 2013, determinamos que tuvimos 240 pacientes contagiada por herpes tipo dos, que representan el 0,50% de la población
2. Con la muestra obtenida en nuestra investigación concluimos que la enfermedad en las mujeres corresponde al 80 % del herpes tipo dos.
3. En las edades en que se realizaron exámenes para detección del herpes tipo dos en mujeres gestante fue 18-20 años tubo un índice alto en realizarse exámenes y de 24 -27 tubo un poco frecuencia de exámenes.
4. El área de serología está acorde a normas internacionales planteadas al interior del marco teórico de esta investigación para detectar el herpes tipo dos por medio de la técnica de ensayo inmunoenzimático en el hospital Teodoro Maldonado Carbo.
