AGAR CALDO UREA
AGAR CALDO UREA
Se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por
Se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por
algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa
algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa
peptona urea ! ro"o de
peptona urea ! ro"o de
#enol. Las bacterias $ue producen
#enol. Las bacterias $ue producen
ureasa a partir de
ureasa a partir de
la urea dan lugar al carbonato de amonio !
la urea dan lugar al carbonato de amonio !
el indicador se vuelve ro"o p%rpura. Obs&rvese en la
el indicador se vuelve ro"o p%rpura. Obs&rvese en la
tabla de
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reacciones bio$u'mi
reacciones bio$u'mi
cas $ue solo el g&nero
cas $ue solo el g&nero
(roteus da esta
(roteus da esta
reacción positiva.
reacción positiva.
) Utilización de urea como #uente de carbono.
) Utilización de urea como #uente de carbono.
) La enzima ureasa *idroliza la urea en
) La enzima ureasa *idroliza la urea en
amoniaco ! an*'drido
amoniaco ! an*'drido
carbónico ante la variación del p+
carbónico ante la variación del p+
por la alcalinización el
por la alcalinización el
indicador Ro"o ,enol vira de amarillo claro a ligeramente
indicador Ro"o ,enol vira de amarillo claro a ligeramente
rosado o rosa me-icano.
rosado o rosa me-icano.
) Se utiliza solamente para la detección de la
) Se utiliza solamente para la detección de la
ureasa en
ureasa en
especies del g&nero (roteus.
especies del g&nero (roteus.
) Si los nutrientes suministrados por el e-tracto de levadura se
) Si los nutrientes suministrados por el e-tracto de levadura se
consumen antes $ue la bacteria muestre crecimiento no podr
consumen antes $ue la bacteria muestre crecimiento no podr
determinarse con e-actitud su capacidad de *idrolizar urea.
determinarse con e-actitud su capacidad de *idrolizar urea.
) (ero si es
) (ero si es
capaz de *idrolizar la urea pero no utilizar el
capaz de *idrolizar la urea pero no utilizar el
amoniaco como #uente de nitrógeno no se produce
amoniaco como #uente de nitrógeno no se produce
crecimiento ! puede dar un #also negativo.
crecimiento ! puede dar un #also negativo.
Christensen Medio (Urea Agar
Christensen Medio (Urea Agar
Base).
Base).
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad
ureásica.
ureásica.
Se utiliza para identificar bacterias que
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteushidrolizan urea, tales como Proteus
spp., otras enterobacterias y estafilococos.
spp., otras enterobacterias y estafilococos.
Fundamento
Fundamento
En el medio de cultivo, la tripteína y la
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para elglucosa, aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. El cloruro de
desarrollo de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balancesodio mantiene el balance
osmtico, y el ro!o de fenol es el indicador de p".
osmtico, y el ro!o de fenol es el indicador de p".
#lgunas bacterias hidrolizan la urea por medio de
amoníaco y di$ido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el ro!o de fenol del amarillo al ro!o. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan lentamente la urea, como especies de Enterobacter o %lebsiella.
Resultados
Microorganismo Actividad ureásica Color del medio Proteus mirabilis #&''
()*+
Positiva -o!o-osado %. pneumoniae #&''
+**/*)
Positiva d0bil -o!o-osado Escherichia coli #&''
12311
4egativa #marillo S. fle$neri #&'' 1*11 4egativa #marillo
S. typhimurium #&'' (*15
4egativa #marillo
Limitaciones
6acterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser %lebsiella, Enterobacter y 'itrobacter, viran al color ro!orosado de todo el medio de cultivo luego de varios días de incubacin.
4o calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone facilmente.
Características del
medio
SM Medio
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es 8til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
El triptfano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la tripteína, que puede ser o$idado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un con!unto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de
%ovac9s o de Erlich, para originar un compuesto de color ro!o. :as cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro
de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un p" mayor a +.1.
esultados
Ce!as m"viles# producen turbidez del medio, que se e$tiende mas allá de la línea de siembra.
Ce!as inm"viles# el crecimiento se observa solamente en la línea de siembra. Ce!as S$% !ositivas# ennegrecimiento a lo largo de la línea de siembra o en
todo el medio.
Ce!as S$% negativas# el medio permanece sin cambio de color.
Ce!as indol !ositivas# desarrollo de color ro!o luego de agregar el reactivo de %ovac9s o de Erlich.
Microorganismo Movilidad ndol &roducci"n de ácido sul'hídrico E. coli #&'' 12311 ; ; %. pneumoniae #&'' +**/*) P. mirabilis #&'' ()*+ ; ; S. typhimurium #&'' (*15 ; ; S. enteritidis #&'' )*+/ ; ; S. fle$neri #&'' 1*11
Limitaciones
En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la movilidad puede ser difícil de observar.
#lgunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la
produccin de ácido sulfhídrico.
Características del medio
Simmons Citrato Agar
Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como 8nica fuente de carbono y energía.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la 8nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la 8nica fuente de carbono. #mbos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. :as sales de fosfato forman un sistema
buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de p", que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como 8nica fuente de carbono, usan
sales de amonio como 8nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a trav0s del ciclo del ácido tricarbo$ílico. El desdoblamiento
del citrato da progresivamente, o$alacetato y piruvato. Este 8ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de
citrato permeasa.
Resultados
&ositivo# crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
egativo# el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.
Microorganismo Citrato !ermeasa Color del medio %lebsiella pneumoniae #&'' +**/*) Positivo #zul
S. typhimurium #&'' (*15 Positivo #zul E. coli #&'' 12311 4egativo <erde S. fle$neri #&'' 1*11 4egativo <erde
Limitaciones
Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del pico del verde al amarilloamarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la visualizacin azul de un resultado positivo.
=nculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
'uando se siembra una serie de pruebas bioquímicas a partir del mismo cultivo, se debe esterilizar la agu!a de inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. 'ualquier arrastre de materia orgánica puede originar resultados falsos positivos.
*S Agar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de ácido
sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el e$tracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. :a lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y
amonio, es la fuente de iones >e+, , los cuales se combinan con el ácido
sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El ro!o de fenol es el indicador de p", y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de az8cares, se producen ácidos, que se detectan por medio
del indicador ro!o de fenol,el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con
una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Resultados
Pico alcalino?fondo ácido @pico ro!o?fondo amarilloA7 el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
1Pico ácido?fondo ácido @pico amarillo?fondo amarilloA7 el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y?o sacarosa.
)Pico alcalino?fondo alcalino @pico ro!o?fondo ro!oA7 el microorganismo es no fermentador de az8cares.
microorganismo produce gas.
2El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Microorganismo &ico-Fondo &roducci"n de gas &roducci"n deácido sul'hídrico E. coli #&'' 12311 #?# ; %. pneumoniae #&'' +**/*) #?# ; P. mirabilis #&'' ()*+ %?# ; ; S. typhimurium #&'' (*15 %?# ; S. enteritidis #&'' )*+/ %?# ; ; S. fle$neri #&'' 1*11 %?# P. aeruginosa #&'' 1+52) %?% #7 ácido %7 alcalino
Características del medio
Medio preparado7 ro!o
Agar TSI(Triple azucar hierro)
Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono específico incorporado en un medio de crecimiento básico, con producción o no de gases, junto con la determinación de posible ácido sulfhídrico.
El agar TSI es un medio diferencial que determina tanto la fermentación de los hidratos de carbono la producción de ácido sulfhídrico. !as bacterias pueden utili"ar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio ser metaboli"ados, características que son utili"adas para la diferenciación de #stas, principalmente para las Enterobacterias.
Este medio contiene lactosa con una concentración de $% glucosa &.$%, lo cual permite la obser'ación de la fermentación de uno o de ambos carbohidratos por parte de las bacterias, además de la producción de gas de ácido sulfhídrico.
!a fermentación es un proceso que se lle'a a cabo en condiciones aeróbicas (pico de flauta) anaeróbicamente (capa inferior). En el pico de flauta la glucosa (monosacárido) es cataboli"ada inicialmente por medio del ciclo anaeróbico de Embden*+eerhof, utili"ado tanto por los aerobios como por los anaerobios para dar ácido pir'ico, posteriormente #ste será degradado a tra'#s del ciclo de -rebs para dar /0, 10/ energía.
2or otra parte la lactosa (disacárido) será primero degradada a sus monosacáridos correspondientes (glucosa galactosa).
El medio TSI contiene una cantidad limitante de glucosa una concentración $& 'eces maor de lactosa. !as Enterobacterias los fermentadores de glucosa comien"an metaboli"ando este a"car, a que las en"imas que utili"an la glucosa están presentes como constituentes de las bacterias, #stas pueden obtener maor energía por utili"ación del a"car más simple.
Todos los otros carbohidratos deben ser con'ertidos en glucosa para entrar en el ciclo de Embden*+eerhof. !a utili"ación de la glucosa se reali"a en forma aerobia sobre la estría, donde el o3ígeno presente acta como aceptor terminal de electrones en la parte terminal de la columna en condiciones de anaerobiosis. 4na 'e" que una bacteria fermentadora de glucosa ha reducido toda la glucosa disponible a piru'ato, comen"ará a metaboli"ar el piru'ato a tra'#s del ciclo aeróbico de -rebs (sobre la estría), formando productos finales ácidos. El ácido en el medio hace 'irar el amarillo del indicador de p1, rojo de fenol. Entonces, luego de 5 horas de incubación, la "ona de la estría el fondo del tubo inoculado con un fermentador de glucosa tendrán un color amarillo. Si el microorganismo no fermenta la glucosa, el fondo permanecerá rojo (indicando que no ha 'ariación del p1) o se alcalini"ará (lo que puede 'isuali"arse por un color rojo algo más intenso que del medio original), demostrando que la bacteria no es miembro de la familia Enterobacteriaceae.
Despu#s de haber agotado la cantidad limitada de glucosa, una bacteria con capacidad para utili"ar la lactosa o sacarosa comen"ará a degradarlas. omo el medio contiene $& 'eces más lactosa que glucosa, las bacterias encontrarán sustrato suficiente para continuar la formación de productos finales ácidos. !uego $6 7 08 horas de incubación todo el medio TSI permanecerá de color amarillo. Esta reacción se denomina ácido sobre ácido (9:9) el organismo se identifica como un fermentador de lactosa. !a producción de gas pro'ocará la ruptura de la columna de agar o la empujará hacia la parte superior, de modo que un fermentador de lactosa que produce gas dará una reacción 9:9 más gas.
Interpretación
$. ;ojo en pico de flauta< alcalino= degradación aeróbica de glucosa. 9marillo en capa profunda< ácido= degradación anaeróbica de la glucosa.
0. 9marillo en pico< ácido 9marillo en capa profunda< ácido
>. ;ojo en pico de flauta< alcalino Sin cambio de color en capa profunda< alcalina. 8. 2roducción de 10S< precipitado negro
?. 2roducción de gases< 2roducción de burbujas, descomposición del medio, ligera muesca del medio sobre el costado del tubo o despla"amiento del medio del fondo, dejando un espacio libre.
Forma de reporte de resultados.
$. - : 9 (@ermentación de glucosa solamente)
0. 9 : 9 (@ermentación de glucosa lactosa)
>. - : - (Ao fermentación de glucosa lactosa).
!os resultados se escriben siempre siguiendo un patrón. 2rimero la
reacción del pico de flauta seguida por la reacción de la capa profunda,
separadas por una barra.
isina $ierro Agar.
Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarbo$ilacin ? desaminacin de la lisina y en la produccin de ácido sulfhídrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el e$tracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. :a glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarbo$ilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el
tiosulfato de sodio, son los indicadores de la produccin de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de p", el cual es de color amarillo a p" igual o menor a 2.1, y de color violeta a p" igual o mayor a /.5.
Por decarbo$ilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el vira!e del indicador al color violeta. :a
decarbo$ilacin de la lisina, tiene lugar en medio ácido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.
:os microorganismos que no producen lisina decarbo$ilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un vira!e de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 1( hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
:a produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
:as cepas de los g0neros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un ácido alfacetocarbnico, el cual, con la sal de hierro y ba!o la influencia del o$ígeno forma un color ro!izo en la
superficie del medio.
Resultados
/ecar0o1ilaci"n de la lisina#
Prueba Positiva7 Pico violeta?fondo violeta. Prueba 4egativa7 Pico violeta?fondo amarillo. %/esaminaci"n de la lisina#
Pico ro!izo?fondo amarillo. Esto sucede con cepas del g0nero Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.
+&roducci"n de ácido sul'hídrico#
Prueba positiva7 Ennegrecimiento del medio @especialmente en el límite del pico y fondoA
Microorganismos Color en el !ico de 'lauta
Color en la 0ase del tu0o
2nnegrecimiento del medio Proteus mirabilis #&'' ()*+ -o!o #marillo 4egativo Salmonella typhimurium #&''
(*15 P8rpura P8rpura Positivo
Salmonella enteritidis #&''
)*+/ P8rpura P8rpura Positivo
Providencia spp. -o!o #marillo 4egativo 'itrobacter freundii P8rpura #marillo Positivo
Morganella spp.3 -o!o #marillo 4egativo EdBarsiella spp. P8rpura P8rpura Positivo %lebsiella pneumoniae #&''
+**/*) P8rpura P8rpura 4egativo
Escherichia coli #&'' 12311 P8rpura P8rpura 4egativo 3Algunas es!ecies de Morganella s!!.4 !ueden desaminar la lisina.
Características del medio
Medio preparado7 color violeta.
1.- Lisina
descarboxilasa positivo
Descarboxilaciòn positiva, H2S positivo
".- Lisina desaminasa positivo
2.- #itrato ne!ativo
M5 Medio.
Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de ornitina decarbo$ilasa y produccin de indol.
Fundamento
Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de
e$tracto de levadura, peptona y tripteína. #demás, la tripteína aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. :a de$trosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina decarbo$ilasa, el p8rpura de bromocresol es el indicador de p", que en medio alcalino es de color p8rpura y en medio ácido es amarillo.
Por su composicin, es posible detectar ) reacciones en un mismo tubo7 movilidad, presencia de ornitina decarbo$ilasa e indol.
:a movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea de inoculacin.
:a reaccin positiva a la ornitina está dada por un color p8rpura del medio. Cebido a la fermentacin de la glucosa se reduce el p" produciendo una condicin ácida y originando que el indicador de p" p8rpura de bromocresol vire al amarillo. :a presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarbo$ilasa, la cual decarbo$ila la ornitina presente. Por decarbo$ilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente vira!e del indicador hacia el color p8rpura.
El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color ro!o luego de agregar unas gotas de reactivo de %ovac9s o de Erlich, indica un resultado positivo.
Resultados
Movilidad#
-esultado positivo7 presencia de turbidez o crecimiento mas allá de la línea de siembra.
-esultado negativo7 crecimiento solamente en la línea de siembra. %5rnitina decar0o1ilasa#
-esultado positivo7 color p8rpura.
-esultado negativo7 color amarillo. # veces se puede desarrollar un color violáceo en la superficie del medio.
+&rue0a del indol#
:a prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina.
-esultado negativo7 el color del reactivo revelador permanece incoloro amarillento.
Microorganismo Crecimiento Movilidad ndol 5rnitina decar0o1ilasa E. coli #&'' 12311 6ueno ; ; ;
%. pneumoniae #&'' +**/*)
6ueno
P. mirabilis #&'' ()*+ 6ueno ; ;
Características del medio
Medio preparado7 p8rpura transparente a ligeramente opalescente.
MR6& Medio
Medio utilizado para la realizacin del ensayo de -o!o de Metilo y <oges ProsDauer.
Es particularmente 8til para la clasificacin de enterobacterias.
Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
:a glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a trav0s de distintas vías metablicas. Seg8n la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos @ácido láctico, ácido ac0tico, ácido frmicoA, o productos finales neutros @acetil metil carbinolA.
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adicin de un indicador como ro!o de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por la adicin de alfa naftol e hidr$ido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros.
<oges y ProsDauer, describieron una coloracin ro!iza que aparecía despu0s de adicionar hidr$ido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloracin se debe a la o$idacin del acetilmetil
carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color ro!o.
Revelado de !rue0as 0io7uímicas
a&rue0a del ro8o de metilo#
#adir unas gotas de una solucin de ro!o de metilo al *.*(F, observar el color del medio.
0&rue0a del 6oges &ros9auer#
#adir *,/ ml de alfa naftol al 2F en alcohol etílico absoluto y *.1 ml de
hidr$ido de potasio al (*F a 1.2 ml de cultivo. #gitar vigorosamente el tubo, y de!ar a temperatura ambiente durante *2 minutos. Gbservar el color de la
superficie del medio.
Resultados
&rue0a del ro8o de metilo# Positivo7 color ro!o.
4egativo7 color amarillo.
%&rue0a de 6oges &ros9auer#
Positivo7 desarrollo de un color ro!o en pocos minutos despu0s de una completa agitacin del tubo.
4egativo7 ausencia de color ro!o.
Microorganismo Crecimiento RM 6& E. coli #&'' 12311 6ueno ; %. pneumoniae #&'' +**/*) 6ueno ; P. mirabilis #&'' ()*+ 6ueno ; S. typhimurium #&'' (*15 6ueno ;
'itrobacter freundii 6ueno ; Enterobacter aerogenes 6ueno ;
Limitaciones
En algunas cepas positivas para la prueba <P, pueden no desarrollar el color ro!o en la superficie mediante el revelado por la metodología descripta
anteriormente. En estos casos, se recomienda calentar el medio de cultivo para favorecer el desarrollo de color ro!o.
