DETERMINACIÓN DE LEVODROPROPIZINA EN GOTAS ORALES POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN

Texto completo

(1)

Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos

DETERMINACIÓN DE LEVODROPROPIZINA EN GOTAS ORALES

POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN

Xiomara Pérez Gutiérrez1 y Vivian Martínez Espinosa2

RESUMEN

La levodropropizina es una sustancia sintética que ha demostrado tener eficaz acción antitusígena y actúa a nivel periférico. Se desarrolló y validó un método analítico por cromatografía líquida de alta resolución para la cuantificación de levodropropizina en gotas orales al 6 %. Los parámetros de validación analizados fueron: linealidad, especificidad, precisión, exactitud y rango, según lo establecido por la USP 23 para esta categoría de ensayo. El método desarrollado resultó ser lineal, específico, preciso y exacto en el rango de concentraciones estudiado, por lo que su empleo se considera factible para la cuantificación de la levodropropizina en el control de la calidad y en el estudio de estabilidad de las gotas orales.

DeCS: AGENTES ANTITUSIVOS/uso terapéutico; CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESION/métodos; CONTROL DE CALIDAD.

1 Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Investigadora Aspirante. 2 Técnico Medio en Tecnología Farmacéutica.

La levodropropizina (S (-)-3-(4-fenil-1-piperazinil) 1,2-propanodiol) es un antitusígeno no narcótico de acción periférica a nivel traqueobronquial. Consti-tuye el isómero levorrotatorio de la dropropizina, la cual es un derivado de la fenilpiperazina.1,2 Según Melillo y otros ha

demostrado tener un índice terapéutico (ac-tividad/efectos adversos) más favorable que la dropropizina y el isómero dextro-rrotatorio (XXIII Congreso Nazionale della Societá Italiana di Farmacologia, San Remo, 6-8 ottobre 1986).

En 1988, Zarantin y otros describieron una técnica analítica que combina la croma-tografía de gases con la espectrometría de masas para la detección y cuantificación de los niveles de levodropropizina en plasma proveniente de voluntarios sanos quienes recibieron una dosis oral única del fárma-co, y lograron medir concentraciones tan bajas como 5 ng/mL.3

Por otra parte, Calatozzolo y otros, en 1993, evaluaron la pureza enantiomérica de la levodropropizina con la utilización de la espectroscopia FT-IR y la cromatografía

(2)

líquida de alta resolución (CLAR). Este estudio demostró que el método cromato-gráfico ofrecía mejores resultados, aunque el método espectroscópico era una alter-nativa en este tipo de análisis.4

En el presente trabajo se describe un método analítico por CLAR para la cuantificación de levodropropizina en gotas orales, el cual ha sido debidamente validado según los requisitos establecidos en la USP 23 para esta categoría de ensa-yos y las metodologías descritas por otros autores,5-7 a fin de poder ser empleado en el

control de la calidad y en los estudios de estabilidad de la formulación nacional en gotas orales de este fármaco.

MÉTODOS

Se desarrolló un método por CLAR, para cuatificar la levodropropizina en el control de la calidad y el estudio de estabi-lidad de las gotas orales 6 %, basado en la separación de esta en una columna cromatográfica con detección UV y su cuantificación frente a una muestra de referencia según el método del patrón externo.

El estándar de referencia de levodro-propizina fue suministrado por el área de patrones del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). El producto terminado en forma de gotas orales al 6 %, lote 99022, fue elaborado a partir de la materia prima procedente de la Swiss Branch, Suiza, por el Departamento de Formas Terminadas del CIDEM, así como el placebo empleado. Todos los reactivos utilizados fueron de calidad analítica (Merck).

En el ensayo se empleó un

croma-(SHIMADZU CR6A). La separación se realizó isocráticamente sobre una columna Li Chrospher RP18250 mm ×4 mm, 10 µm. La fase móvil utilizada consistió en una mez-cla desgasificada de metanol:ácido fosfó-rico 0,025 mol/L, ajustado a pH = 3 ± 0,1 con trietilamina, en proporción (98:2) con una velocidad de flujo de 1,0 mL/min.

Para el análisis se disolvió una cantidad exacta del estándar de referencia con ácido fosfórico 0,025 mol/L a pH = 3 y posterior-mente se realizó una dilución en fase móvil para obtener una solución con una con-centración final de 12 µg/mL. Las muestras fueron preparadas de forma similar, disol-viendo inicialmente en ácido fosfórico 0,025 mol/L a pH = 3 un volumen exacto de gotas orales.

Para el estudio de la linealidad de la respuesta del detector se preparó una curva de calibración con soluciones patrón de levodropropizina en un rango de con-centraciones de 2,4 hasta 18,0 µg/mL.

Se evaluó la precisión del método. La repetibilidad se estudió sobre la base de 7 determinaciones y se efectuaron valora-ciones por 2 analistas para comprobar la precisión intermedia del método.

En el estudio de la exactitud y linealidad del método analítico se empleó el método de recuperación para muestras con diferentes niveles de levodropropizina que representaban el 80, 100 y 120 % de la concentración teórica del principio activo en las gotas orales, según la formulación propuesta.

Con el objetivo de evaluar la especi-ficidad del método se analizó una muestra placebo y una muestra sometida a oxidación con peróxido de hidrógeno al 3 %.

(3)

comprendido entre 2,8 y 18,0 µg/mL. La ecuación de la recta se expresa según: y = 74256,9896 x - 7466,2029. El coeficiente de correlación lineal es 0,9994. Al aplicar la prueba de linealidad, utilizando el coeficiente de variación de los factores de respuesta, se obtuvo un CVf = 2,8 %. Mediante la prueba de proporcionalidad se determinaron los límites de confianza del término indepen-diente, los cuales fueron: - 21293,5326 y 6361,1268.

En la tabla 1 y 2 se reportan los resulta-dos del estudio de la precisión y exactitud del método respectivamente.

Al aplicar la prueba de G de Cochran la Gexp dio como resultado 0,7318 siendo la Gtab, 0,9669 para p = 0,05. En la tabla 3 se pre-senta el resultado de la prueba de t de Student.

Por otra parte, la curva de recupe-ración en el intervalo de 80 a 120 % fue y = 4976,5625 x – 20808,5833, con un coefi-ciente de correlación lineal t = 0,9988. La figura muestra los resultados obtenidos en el estudio de especificidad del método.

TABLA 1. Estudio de la precisión del método cromatográfico Repetibilidad Muestra % 1 103,9 2 102,9 3 102,8 4 103,8 5 106,6 6 107,5 7 104,8 Media: 104,6 % S = 1,81 CV = 1,73 % Precisión intermedia (%) Analista I Analista II 104,1 104,8 104,9 103,9 104,7 106,6 105,0 103,8 106,1 102,9 Media: 105,0 Media: 104,4 S = 0,7266 S = 1,4018 SV = 0,69 % CV = 1,34 % Fcalc = 3,72 F5 % = 6,39 g.l. =4/4 tcal = 0,849 t5 % = 2,306 Intervalo de confianza: 104,7 ± 0,7972

TABLA 2. Estudio de la exactitud del método cromatográfico Valor Valor Cantidad Media

teórico (%) hallado (%) de recobro (%) (%) ± S CV (%) S2

80 80,0 79,7 100,0 99,6 79,8 ± 0,2 0,27 0,04

100 99,2 98,9 99,2 98,9 99,0 ± 0,2 0,21 0,04

120 120,7 121,4 100,6 101,2 121,9 ± 0,5 0,41 0,24

TABLA 3. Resultados de la prueba t de Student en el estudio de exactitud

n Recuperación media Desviación estándar Coeficiente de variación

6 99,9 0,87 0,87 %

texp = 0,028

(4)

DISCUSIÓN

El coeficiente de correlación lineal ob-tenido para la curva de calibración en la evaluación de la linealidad del sistema cromatográfico propuesto demuestra el cumplimiento de la ley de Lambert-Beer.

El coeficiente de variación de los fac-tores de respuesta obtenido demostró una adecuada linealidad de acuerdo con el límite establecido (CVf < 5 %).

Como los límites de confianza del tér-mino independiente, determinados en la prueba de proporcionalidad, incluyen el cero, se cumple la condición de proporcio-nalidad del método.

precisión ya que para métodos cromato-gráficos se permite como límite máximo el 2 %. Los valores expuestos en el estudio de la presición intermedia indican que no existen diferencias significativas entre la precisión alcanzada por los 2 analistas para el 95 % de probabilidad, ya que el valor calculado en la prueba de Fisher es menor que el tabulado. No se observó diferencia significativa entre las medias de ambos analistas, debido a que al realizar la prueba de la t de Student el valor hallado resultó ser menor que el tabulado, para 8 g.l. con el 95 % de probabilidad. Es posible encontrar, con un nivel de significación del 5 %, los valores registrados en el intervalo comprendido entre 103,9 y 105,5 %.

Según el estudio de la exactitud, en

FIG. Resultados del estudio de especificidad del método (A: cromatograma del estándar de referencia de levodropropizina; B:

cromatograma de la muestra; C: cromatograma del placebo; D: cromatograma de la muestra degradada en H2O2 al 3 %).

2,775 5,333 A B C D 5,305 1,99 2,758 3,203 5,11

(5)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Rosestein E. Diccionario de especialidades farmacéuticas. 40 ed. México, DF. Ediciones PLM, 1995;1716. 2 . Repertorio Farmacéutico Italiano. Farmindustria. Associazione Nazionale dell’Industria Farmacéutica.

2 ed. Milano: Cedof Editore; 1987/88;A-1251-2.

3 . Zarantin P, De Angelis L, Cattabeni F. Gas chromatographic-mass spectrometry determination of levodropropizine plasma levels in healthy volunteers. Arzneim Forsch 1988;38(6):1156-8. 4 . Calatozzolo M, Celentano G, Clerici F, Giaminarusti G, Stradi R. FT-IR spectroscopy for the evaluation of the

enantiomeric purity of levodropropizine comparison with HPLC analysis. Boll Chim Farm 1993;132:467-71. 5 . The United States Pharmacopoeia 23 and National Formulary 18. Rockville, MD: The United States

Pharmacopoeial Convention, Inc;1994:1982-4.

6 . Quattrocchi OA, de Andrizzi SA, Laba RF. Introducción a la HPLC, aplicación y práctica. Buenos Aires: Artes Gráficas Farro; 1992:302-27.

7 . Métodos analíticos. Validación. México, DF: Colegio Nacional de Químicos, Farmacéuticos y Biólogos; 1992. Recibido: 30 de abril de 2002. Aprobado: 3 de junio de 2002.

Lic. Xiomara Pérez Gutiérrez. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Ave 26 No. 1605 entre Boyeros y Puentes Grandes, Plaza de la Revolución, Ciudad de La Habana, Cuba. E-mail: cidem@infomed.sld.cu

SUMMARY

Levodropropizine is a synthetic substance, acting at the peripheral level and which has proved to have an efficient antitussive action. An analytic method was developed and validated by high pressure liquid chromatography to quantify levodropropizine in oral drops at 6 %. The following validation parameters were analyzed: lineality, specificity, precision, accuracy and range, according to what is established by the USP 23 for this assay category. The method developed proved to be lineal, specific, accurate and exact in the studied concentration range; therefore, its use is considered as accessible for the quantification of levodropropizine in the quality control and in the stability study of the oral drops.

Subject headings: ANTITUSSIVE AGENTS/therapeutic use; CHROMATOGRAPHY, HIGH PRESSURE LIQUID/methods; QUALITY CONTROL.

102,0 %, lo que se considera adecuado para este tipo de análisis. No se observó in-fluencia del factor concentración ya que el valor de la Gexp fue menor que el obtenido

para la Gtab. Al aplicarse la prueba de la t de Student, se comprobó que no existen dife-rencias significativas entre la recuperación media y el 100 %, lo cual confirma la buena exactitud del método.

El coeficiente de correlación lineal de la curva de recuperación en el intervalo de 80 a 120 % demostró la linealidad del método. En el estudio de especificidad, como puede observarse en el cromatograma corres-pondiente a la muestra placebo (C), no se obtuvo ninguna señal en la zona de interés, al ser comparado con la señal obtenida para la solución estándar de referencia (A) y de

la muestra de levodropropizina en solución oral (B), lo cual indica que los excipientes o sustancias auxiliares de la solución no interfieren con la determinación del principio activo. En cuanto a la muestra sometida a condiciones drásticas de oxidación se observa en el cromatograma (D) la apari-ción de un pico secundario atribuible a un posible producto de degradación, el cual no interfiere con la determinación del fármaco, lo que demuestra que el método es capaz de detectar, separadamente, al principio activo de su producto de degra-dación en medio oxidante.

El método analítico para la cuanti-ficación de levodropropizina en gotas orales por CLAR resultó ser lineal, preciso, exacto y específico en el rango de concentraciones estudiado.

Figure

Actualización...

Referencias

Actualización...