Flia_Enterobacteriaceae

(1)

El desafío de identificar correctamente

Enterobacterias.

(2)

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

(3)

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2

da

EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS

BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS:

HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN

(4)

Familia

Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I:

ESCHERICHIEAE:

Género I:

Escherichia

/ Género II:

Shigella

Tribu II:

EDWARSIELLEAE :

Género I:

Edwarsiella

Tribu III:

SALMONELLEAE:

Género I

: Salmonella

Tribu IV:

CITROBACTEREAE :

Género I

: Citrobacter

Tribu V

: KLEBSIELLEAE:

Género I:

Klebsiella /

Género II:

Enterobacter

Género III:

Hafnia

/ Género IV:

Serratia

Tribu VI:

PROTEEAE:

Género I:

Proteus /

Género II:

Morganella

Género III:

Providencia

Tribu VII:

YERSINIEAE :

Género I

: Yersinia

(5)

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN

IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS

CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O

PRIMARIAS

(6)

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES

BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O

(SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H

(FLAGELARES)

(7)

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN

Salmonella

y

E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS

ANTIMICROBIANOS

(8)

Antígenos de

Enterobacteriaceae

(9)

(10)

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis,

Complejo

Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

(11)

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM

POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS

NO ENTÉRICAS

(12)

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES

(sangre, orina, material de abscesos y

heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ Cromogénicos

Agar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES:

Selectivos- diferenciales

(13)

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan

las colonias?

(14)

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan

las colonias?

1-

Shigella

2- Grupo KES

(15)

(16)

(17)

(18)

¿Cómo diferenciamos

Shigella

de

E.coli ?

Pruebas

E.coli

Shigella

Indol

+ (96,3)

- ó + (37,8)

Lisina

decarboxilasa

D (80,6)

- (0)

Ornitina

decarbox.

D (57,8)

- ó + (20)

Lactosa

+ (91,6)

- (0,3)

Acetato de sodio

+ (83,3)

- (0)

Gas de glucosa

+ (92)

- (2,1)

(19)

(20)

(21)

(22)

E.coli

(23)

LIA

TSI

(24)

(25)

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo

Serotipo

S. dysenteriae

A 1- 12

S. flexneri

B 1- 6

S. boydii

C 1- 18

(26)

(27)

TRIBU II:

EDWARDSIELLEAE

Hombre y animales

Habitad

+

Movilidad a 37

º

C

-Malonato (utilizaci

ó

n)

-/+

Arabinosa (fermentaci

ó

n)

-Manitol, sacarosa (ferm)

-Trehalosa (fermentaci

ó

n)

+

Indol

+

SH

₂

-Lactosa (fermentaci

ó

n)

(28)

TRIBU III:

SALMONELLEAE

GÉNERO I:

Salmonella

(29)

Salmonella enterica

subesp.

enterica

(I)

Prueba bioquímica Sal.subesp.(I) Lactosa (fermentación)***

-ONPG

-SH2 +

Glucosa (fermentación)*** +/ con gas Rojo de Metilo* + Voges – Proskauer* -Lisina decarboxilasa** + Ornitina decarboxilasa** + Arginina dehidrolasa** + Urea (hidrólisis)** -Malonato (utilización)* -Citrato Simmons** +

*Lectura a los 2días **Lectura hasta los 4 días ***Lectura hasta los 7 días

(30)

Diferencias entre

Salmonella

subesp.

enterica

(I) y

Proteus mirabilis

Prueba bioquímica Salmonella entérica

subesp.enterica(I)

Proteus mirabilis

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - + Fenilalaninadeaminasa - + Lisina decarboxilasa + -Ornitina decarboxilasa + + Lactosa (fermentación) - -Dulcita (fermentación) +

-ONPG -

-+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos

(31)

Diferencias entre

Salmonella

subesp.

enterica

(I) y

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Salm entérica

subesp.enterica(I)

Citrobacter freundii

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - d Lisina decarboxilasa +

-Ornitina decarboxilasa + d Lactosa (fermentación) - d Sacarosa (fermentación) - d Dulcita (fermentación) + d Malonato (utilización) - d

ONPG - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

(32)

Pruebas bioquímicas Salmonella entérica

subesp. enterica(I)

E.Tarda E.coliSH2+

Indol - + +

Citrato Simmosns + - -Lisina decarboxilasa + + + Arginina dehidrolasa + - -/+ Manita (fermentación) + - + Dulcita (fermentación) + - +/-Ramnosa (fermentación) + - + Xylosa (fermentación) + - +

ONPG - - +

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre

Salmonella enterica

subesp.

enterica

(I),

(33)

(34)

(35)

LIA de

Salmonella

TSI de

Salmonella

(36)

(37)

(38)

(39)

TRIBU IV:

(40)

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Citrobacterspp Movilidad +

Manitol (fermentación) + Lisina decarboxilasa

-ONPG +

Citrato de Simmons + Rojo de Metilo + Voges- Proskauer

-Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

(41)

En cepas de

Citrobacter freundi

i pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con

Salmonella

)

O clasificadas como

S. arizonae

por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

(42)

(43)

Klebsiella

(44)

(45)

(46)

Enterobacter aerogenes

(47)

-+ Arginina dehidrolasa + -Lisina decarboxilasa + + Movilidad

E. aerogenes

E. cloacae

(48)

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

(49)

(50)

DNAsa

(+)

(51)

-d

Pigmento rojo

+

-Rafinosa (fermentación)

+

-Melibiosa (fermentación)

+

-Xilosa (fermentación)

+

-Arabinosa (fermentación)

Serratia liquefaciens

Serratia marcescens

Prueba bioqu

í

mica

(52)

-Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa

:-Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con

Salmonella

: Citrato:-,

SH2:-Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con

Yersinia enteroclotica

: diferenciar

(53)

(54)

(55)

Test Bioquímicos Proteusa _Providenciaa _Morganellaa

Citrato V +

-Ferm de D- Manosa - + +

Liquefacción de gelatina 22ºC + -

-H2S en TSI + - V

Ferm myo-inositol - V

-Ornitina decarboxilasa V - (+)

Swarmming + -

-Hidrólisis de urea + V +

a reacciones dentro de las 48 hs

+: 90 – 100% de positivo

(+): 75 – 89,9% de positivo

(-) 10,1 a 25 5 de positivo

-: 0 – 10% de positivo

O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

(56)

(57)

TRIBU VI:

YERSINIEAE

Género

: Yersinia

+ VP (22º-25ºC)

-Rammonsa (fermentación a 25ºC)

-Fenil alanita deaminasa

-Lactosa (fermentación)

+ Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)

K/A sin gas SH2 -TSI

(58)

(59)

Medios cromogénicos- BD CHROMagar

Orientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

(60)

(61)

(62)

(63)

(64)

(65)

(66)

María Emilia Suárez

(67)

El desafío de identificar correctamente

Enterobacterias.

(68)

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

(69)

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2

da

EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS

BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS:

HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN

(70)

Familia

Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I:

ESCHERICHIEAE:

Género I:

Escherichia

/ Género II:

Shigella

Tribu II:

EDWARSIELLEAE :

Género I:

Edwarsiella

Tribu III:

SALMONELLEAE:

Género I

: Salmonella

Tribu IV:

CITROBACTEREAE :

Género I

: Citrobacter

Tribu V

: KLEBSIELLEAE:

Género I:

Klebsiella /

Género II:

Enterobacter

Género III:

Hafnia

/ Género IV:

Serratia

Tribu VI:

PROTEEAE:

Género I:

Proteus /

Género II:

Morganella

Género III:

Providencia

Tribu VII:

YERSINIEAE :

Género I

: Yersinia

(71)

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN

IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS

CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O

PRIMARIAS

(72)

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES

BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O

(SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H

(FLAGELARES)

(73)

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN

Salmonella

y

E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS

ANTIMICROBIANOS

(74)

Antígenos de

Enterobacteriaceae

(75)

(76)

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis,

Complejo

Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

(77)

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM

POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS

NO ENTÉRICAS

(78)

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES

(sangre, orina, material de abscesos y

heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ Cromogénicos

Agar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES:

Selectivos- diferenciales

(79)

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan

las colonias?

(80)

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan

las colonias?

1-

Shigella

2- Grupo KES

(81)

(82)

(83)

(84)

¿Cómo diferenciamos

Shigella

de

E.coli ?

Pruebas

E.coli

Shigella

Indol

+ (96,3)

- ó + (37,8)

Lisina

decarboxilasa

D (80,6)

- (0)

Ornitina

decarbox.

D (57,8)

- ó + (20)

Lactosa

+ (91,6)

- (0,3)

Acetato de sodio

+ (83,3)

- (0)

Gas de glucosa

+ (92)

- (2,1)

(85)

(86)

(87)

(88)

E.coli

(89)

LIA

TSI

(90)

(91)

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo

Serotipo

S. dysenteriae

A 1- 12

S. flexneri

B 1- 6

S. boydii

C 1- 18

(92)

(93)

TRIBU II:

EDWARDSIELLEAE

Hombre y animales

Habitad

+

Movilidad a 37

º

C

-Malonato (utilizaci

ó

n)

-/+

Arabinosa (fermentaci

ó

n)

-Manitol, sacarosa (ferm)

-Trehalosa (fermentaci

ó

n)

+

Indol

+

SH

₂

-Lactosa (fermentaci

ó

n)

(94)

TRIBU III:

SALMONELLEAE

GÉNERO I:

Salmonella

(95)

Salmonella enterica

subesp.

enterica

(I)

-ONPG

-SH2 +

(96)

Diferencias entre

Salmonella

subesp.

enterica

(I) y

Proteus mirabilis

subesp.enterica(I)

Proteus mirabilis

SH2 + +

-ONPG -

(97)

Diferencias entre

Salmonella

subesp.

enterica

(I) y

Citrobacter freundii

subesp.enterica(I)

SH2 + +

ONPG - +

(98)

subesp. enterica(I)

E.Tarda E.coliSH2+

Indol - + +

ONPG - - +

Diferencias entre

Salmonella enterica

subesp.

enterica

(I),

(99)

(100)

(101)

LIA de

Salmonella

TSI de

Salmonella

(102)

(103)

(104)

(105)

TRIBU IV:

(106)

Citrobacter freundii

-ONPG +

-Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

(107)

En cepas de

Citrobacter freundi

i pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con

Salmonella

)

O clasificadas como

S. arizonae

por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

(108)

(109)

Klebsiella

(110)

(111)

(112)

Enterobacter aerogenes

(113)

E. aerogenes

E. cloacae

(114)

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

(115)

(116)

DNAsa

(+)

(117)

-d

Pigmento rojo

+

Serratia liquefaciens

Serratia marcescens

Prueba bioqu

í

mica

(118)

-Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa

:-Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con

Salmonella

: Citrato:-,

SH2:-Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con

Yersinia enteroclotica

: diferenciar

(119)

(120)

(121)

Citrato V +

-H2S en TSI + - V

Swarmming + -

(+): 75 – 89,9% de positivo

(122)

(123)

TRIBU VI:

YERSINIEAE

Género

: Yersinia

+ VP (22º-25ºC)

(124)

(125)

Medios cromogénicos- BD CHROMagar

Orientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

(126)

(127)

(128)

(129)

(130)

(131)

(132)

María Emilia Suárez

(133)

El desafío de identificar correctamente

Enterobacterias.

(134)

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

(135)

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2

da

EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS

BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS:

HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN

(136)

Familia

Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I:

ESCHERICHIEAE:

Género I:

Escherichia

/ Género II:

Shigella

Tribu II:

EDWARSIELLEAE :

Género I:

Edwarsiella

Tribu III:

SALMONELLEAE:

Género I

: Salmonella

Tribu IV:

CITROBACTEREAE :

Género I

: Citrobacter

Tribu V

: KLEBSIELLEAE:

Género I:

Klebsiella /

Género II:

Enterobacter

Género III:

Hafnia

/ Género IV:

Serratia

Tribu VI:

PROTEEAE:

Género I:

Proteus /

Género II:

Morganella

Género III:

Providencia

Tribu VII:

YERSINIEAE :

Género I

: Yersinia

(137)

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN

IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS

CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O

PRIMARIAS

(138)

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES

BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O

(SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H

(FLAGELARES)

(139)

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN

Salmonella

y

E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS

ANTIMICROBIANOS

(140)

Antígenos de

Enterobacteriaceae

(141)

(142)

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis,

Complejo

Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

(143)

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM

POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS

NO ENTÉRICAS

(144)

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES

(sangre, orina, material de abscesos y

heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ Cromogénicos

Agar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES:

Selectivos- diferenciales

(145)

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan

las colonias?

(146)

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan

las colonias?

1-

Shigella

2- Grupo KES

(147)

(148)

(149)

(150)

¿Cómo diferenciamos

Shigella

de

E.coli ?

Pruebas

E.coli

Shigella

Indol

+ (96,3)

- ó + (37,8)

Lisina

decarboxilasa

D (80,6)

- (0)

Ornitina

decarbox.

D (57,8)

- ó + (20)

Lactosa

+ (91,6)

- (0,3)

Acetato de sodio

+ (83,3)

- (0)

Gas de glucosa

+ (92)

- (2,1)

(151)

(152)

(153)

(154)

E.coli

(155)

LIA

TSI

(156)

(157)

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo

Serotipo

S. dysenteriae

A 1- 12

S. flexneri

B 1- 6

S. boydii

C 1- 18

(158)

(159)

TRIBU II:

EDWARDSIELLEAE

Hombre y animales

Habitad

+

Movilidad a 37

º

C

-Malonato (utilizaci

ó

n)

-/+

Arabinosa (fermentaci

ó

n)

-Manitol, sacarosa (ferm)

-Trehalosa (fermentaci

ó

n)

+

Indol

+

SH

₂

-Lactosa (fermentaci

ó

n)

(160)

TRIBU III:

SALMONELLEAE

GÉNERO I:

Salmonella

(161)

Salmonella enterica

subesp.

enterica

(I)

-ONPG

-SH2 +

(162)

Diferencias entre

Salmonella

subesp.

enterica

(I) y

Proteus mirabilis

subesp.enterica(I)

Proteus mirabilis

SH2 + +

-ONPG -

(163)

Diferencias entre

Salmonella

subesp.

enterica

(I) y

Citrobacter freundii

subesp.enterica(I)

SH2 + +

ONPG - +

(164)

subesp. enterica(I)

E.Tarda E.coliSH2+

Indol - + +

ONPG - - +

Diferencias entre

Salmonella enterica

subesp.

enterica

(I),

(165)

(166)

(167)

LIA de

Salmonella

TSI de

Salmonella

(168)

(169)

(170)

(171)

TRIBU IV:

(172)

Citrobacter freundii

-ONPG +

-Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

(173)

En cepas de

Citrobacter freundi

i pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con

Salmonella

)

O clasificadas como

S. arizonae

por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

(174)

(175)

Klebsiella

(176)

(177)

(178)

Enterobacter aerogenes

(179)

E. aerogenes

E. cloacae

(180)

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

(181)

(182)

DNAsa

(+)

(183)

-d

Pigmento rojo

+

Serratia liquefaciens

Serratia marcescens

Prueba bioqu

í

mica

(184)

-Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa

:-Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con

Salmonella

: Citrato:-,

SH2:-Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con

Yersinia enteroclotica

: diferenciar

(185)

(186)

(187)

Citrato V +

-H2S en TSI + - V

Swarmming + -

(+): 75 – 89,9% de positivo

(188)

(189)

TRIBU VII:

YERSINIEAE

Género

: Yersinia

+ VP (22º-25ºC)

(190)

(191)

Medios cromogénicos- BD CHROMagar

Orientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

(192)

(193)

(194)

(195)

(196)

(197)

(198)

María Emilia Suárez

(199)

El desafío de identificar correctamente

Enterobacterias.

(200)