UNIVERSIDAD LATINA
FACULTA DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE FARMACIA
Curso de Biología
PRACTICAS DE LABORATORIO NO.1 Prof. Magister Ricardo Vizuete
Práctica nº1
Normas del laboratorio y uso del microscopio
Normas básicas del uso del laboratorio
En el laboratorio de hay gran cantidad de material para utilizar en las diferentes prácticas . Este material es caro y su uso inadecuado puede ser peligroso. Por ello han de seguirse una serie de normas para conseguir la seguridad de los alumnos y el mantenimiento del material.
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En el laboratorio solo se trabajará con los materiales específicos de cada práctica. No se toca ni curiosea el resto del material.
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Sólo se trabajará con materiales y aparatos de los que se conozca su uso.
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No se realizarán experimentos no autorizados.
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Prohibido terminantemente cualquier tipo de juegos o bromas.
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En caso de accidente se avisará inmediatamente al profesor.
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Al finalizar la sesión de prácticas el material utilizado debe quedar en perfecto estado con el fin de facilitar su uso por otros grupos. El material tiene que quedar limpio y recogido. Cada grupo de prácticas se
encargará del material utilizado y de la limpieza de su puesto.
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Será el profesor, una vez comprobado el material del grupo, el que autorice la salida del laboratorio.
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Aquellos desperfectos, causados intencionadamente, debidos al uso inadecuado, o la sustracción de material tendrán su sanción
correspondiente y deberán ser abonadas por el alumno causante de los mismos.
Uso del microscopio óptico Objetivos
1. Recordar las partes mecánicas y ópticas del microscopio.
2. Comprender la interrelación entre parte óptica y mecánica.
3. Manejar perfectamente el mecanismo de enfoque del microscopio.
4. Practicar lo estudiado en enfoques de preparaciones de práctica.
Material
● Microscopio
● Papel milimetrado ●hilos de colores o cabellos ●papel periódico
● Portaobjetos
● Preparaciones ● goteros
Estudio del microscopio
INTRODUCCIÓN
El microscopio (mikrós, pequeño y skopéoo, observar) fue acuñado con este nombre por Jean Faber en 1624. Ya los antiguos babilonios utilizaban lupas; pero el verdadero impulsor del microscopio fue Anton van Leeuwenhöek (1632-1723) que construía microscopios con lentes convexas y observaba distintas estructuras, fue el primero que dibujó y observó Protozoa.
Hay diversas clases de microscopios, simple, de contraste de fases, electrónico, de barrido, etc; nosotros usaremos el compuesto, que consta:
a) Parte mecánica, b) Parte óptica c) Sistema de iluminación.
1. PARTES ÓPTICAS E ILUMINACIÓN DEL MICROSCOPIO 1.1. SISTEMA DE REFRACCIÓN
Un microscopio compuesto tiene dos lentes, objetivo (situado cerca del objeto) y ocular (situado cerca del ojo). El aumento primario del objeto es producido por el objetivo, y el aumento final se realiza en el ocular.
El poder de resolución es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder de resolución, mayor será la definición del objeto. El poder de resolución depende de ë (longitud de onda utilizada) y de AN: APERTURA NUMÉRICA (característica de la lente que depende del índice de refracción del medio y del seno del ángulo de apertura). Como ë es constante, el poder de resolución depende de AN, la apertura
numérica.
El ojo tiene un poder de resolución de 0,1 mm; y el microscopio de 0,12 F. Un diámetro de 0,2 Fm, si se aumenta 1000 veces aparecerá como un objeto de 0,2 mm
El poder de resolución por lo tanto es directamente proporcional a ë, e inversamente proporcional a AN1
Un factor que afecta a la apertura numérica es, además, de la talla de la lente, el medio a través del cual atraviesa la luz. Mientras el objetivo está separado del objeto por el aire, la AN nunca es mayor que 1; si se desean valores mayores que 1, el objetivo deberá estar inmerso en aceite de cedro que aumente el índice de refracción entre 1,2 y 1,4 (esta lente se denomina lente de inmersión y se diferencia de las otras con la palabra oil. Este objetivo nunca se utiliza sin aceite y una vez utilizado hay que limpiarlo rápidamente para que no se seque el aceite.
1.2. SISTEMA DE ILUMINACIÓN
Este sistema es importante, ya que la luz debe enfocarse sobre la preparación mediante el condensador; subir o bajar el condensador hace que el foco de luz se disponga en un punto.
El diafragma controla el diámetro del círculo de luz que alcanza el objeto. Si la luz es brillante se deberá cerrar el diafragma.
Otro aspecto que varía la nitidez de la observación es la profundidad de campo (espesor de la preparación). A mayor aumento la
profundidad es menor de 1 Fm. La profundidad de campo es inversamente proporcional al aumento utilizado.
PR= l /AN
COMPONENTES:
Parte mecánica
Comprende el conjunto de piezas que sirven para sostener y manejar los elementos de la parte óptica, las preparaciones y la fuente de iluminación.
• Pie o base: Pieza que apoya sobre la mesa de trabajo sobre la que descansan las demás piezas
• Brazo : Pieza que une el pié con el resto de elmentos mecánicos del microscopio.
• Platina: Superficie plana para depositar las preparaciones a observar. Se encuentra perforada en el centro para permitir la entrada de luz. Lleva unas pinzas para sujetar las preparaciones.
• Tubo ocular o cañón: Cilindro hueco que sujeta el ocular. Es móvil para que las preparaciones puedan ser vistas por varios observadores sin mover el pie.
• Tornillo macrométrico: Cilindro giratorio que permite mover verticalmente la platina para conseguir el enfoque de las preparaciones.
• Tornillo micrométrico: Cilindro menor que permite el enfoque fino.
• Revolver: Pieza que contiene los oculares. El él se encuentran atornilladas las lentes de diferentes aumentos. Permite un giro para utilizar los distintos objetivos.
Parte óptica
Conjunto de lentes que permiten el aumento de las imágenes
• Ocular: Situado al final del tubo. Por el se observa la preparación
• Objetivos: Montados en el revólver. Recogen la luz procedente de la preparación.
Fuente de iluminación
• Interruptor : Permite el encendido de la lámpara de iluminación.
• Lámpara : Fuente de luz situada bajo la platina
• Diafragma: Dispositivo situado entre la platina y la lámpara que regula el paso de luz
Preparación microscópica
Los objetos a observar el el microscopio han de ser atravesados por la luz para que ésta llegue al ocular y verlos. Por ello han de ser transparentes o, al menos, traslúcidos, y estar montados en una lámina de vidrio transparente de 75x25 mm llamada portaobjetos o porta. En la mayoría de las ocasiones el material a observar se cubre con una lámina de vidrio muy fino de uno 20x20 mm llamado cubreobjetos o cubre.
Cuando los materiales a observar son muy transparentes o sus partes ofrecen poco contraste se tiñen con colorantes de microscopía específicos para cada objeto a teñir. En las tinciones es muy importante controlar las concentraciones de los tintes y los tiempos de tinción.
Manejo del microscopio
El microscopio ha de tratarse con cuidado evitando forzar las piezas. Debe estar situado firmente sobre el pie evitando que pueda moverse.
Para realiza una observación al microscopio se han de seguir los siguientes pasos:
1. Colocar el microscopio, conectarlo y encender la fuente de alimentación 2. Colocar la preparación en la platina.
3. Colocar el objetivo de menor aumento (el más corto)
4. Enfocar la preparación mirando por el ocular utilizando el tornillo macrométrico 5. Cuando se vea la preparación enfocada regular con el el diafragma la cantidad de
luz adecuada y localizar zonas interesantes a observar.
6. Ajustar con el tornillo micrométrico.
7. Si es necesario un mayor aumento cambiar el siguiente objetivo y repetir el enfoque y la regulación de la iluminación.
Ejercicios
1 - Pon nombres a las diferentes partes del microscopio
2
-Calcula los aumento de tu microscopio
Para ello basta con multiplicar el aumento que proporciona el ocular por el del objetivo Objetivos
Ocular x x x
x
3 - Calcula el campo de cada objetivo.
Para ello coloca un trozo de papel milimetrado en el porta, añade una gota de agua para hacerlo traslúcido, enfócalo y observa los milímetros que se observan
Objetivos
x x x
mm
4 - Observa una preparación microscópica y haz un dibujo de la misma.
Los dibujos han de ser de una parte del campo observado, precisos, detallados y grandes y se ha de indicar el aumento con el que se observa la preparación.
5- Preparación De Un Montaje Húmedo De La Letra “H”
Corta un fragmento de periódico donde se encuentre la letra “h”.
Coloca la letra en el porta objeto y luego agrega una gota de agua, cúbrela con un cubre objeto bajando este ultimo de forma inclinad para evitar la formación de burbujas.
Procede observar con el objetivo de 10X y 40X. Observa la posición de la letra “h” con respecto a su colocación sobre la platina, al movimiento de la letra al desplazarla de arriba hacia abajo, hacia la derecha y hacia la izquierda, dibuja o toma fotos.
6- preparación de una placa con dos hilos (azul y rojo)
Coloca sobre el portaobjeto dos hilos (azul y rojo) o cabellos de distinta tonalidad. de manera que se crucen entre si, añade una gota de agua y coloca el cubreobjetos.
Enfoca con el objetivo de bajo poder, ahora mueve el micrométrico y describe que observas.
identifica que hilo esta superpuesto.
7- Observación una célula
Pon una gota de azul de metileno diluido en un portaobjetos. Abre la boca y con la parte plana de un palillo de dientes raspa la cara interna de tu mejilla. Coloca el contenido del raspado que hiciste sobre el portaobjetos, golpeando suavemente el palillo en la gota del colorante, y cubre la preparación con un cubreobjetos. Observa a través del microscopio con objetivos de 10 y 40X.
8- Empleo del objetivo de inmersión:
Bajar totalmente la platina.
a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.
c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.
AUTOEVALUACIÓN
a) De qué partes del microscopio depende la correcta iluminación?
b) )A qué parte del microscopio debe dirigirse la luz de la lámpara?
c) Cómo varía la iluminación al abrir o cerrar el diafragma?
d) Cómo varía la iluminación al desplazar el condensador?
e) Cuántos grupos de lentes hay? )Qué nombre reciben?
f) Escribir e interpretar las inscripciones que llevan cada grupo de lentes.
g) Enfocando preparaciones con letras interpreta el funcionamiento de los tornillos macro y micrométrico.
h) )Qué se entiende por profundidad de campo?
i) ) Cuáles son las tres características que tiene la imagen final del microscopio compuesto? Al desplazar el portaobjetos en qué sentido se mueve la imagen al mirar por el ocular.
j) )Cuántas imágenes se forman del objeto desde la preparación hasta el ojo?
k) Cómo se calcula el aumento total del microscopio?
l) Analizar las relaciones que hay entre:
* El aumento del objetivo y del ocular y el campo de la preparación,
* el enfoque y los distintos objetivos según los vayamos cambiando,
* el aumento y la iluminación.
m )Por qué es interesante centrar lo que nos interesa observar de la preparación si queremos observarlo a gran aumento?
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
1. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
2. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
3. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
4. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
5. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
6. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
7. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
8. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
