Prueba de digestión de tejidos para el examen de formas evolutivas de helmintos

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(1)?t q¡F PRUEBADE DIGESTION DE TEJIDOSPARAEL EXAMEN DE FORMASEVOLUTIVAS DE HELMINTOS. I. \\.. OildorMárquez Lara AlvaroRomeroNasayó". f.. tñtTRoDUCCION. Los helmintosson parásilosimportantesde los rumiantes.La meyoríade estos nemátodosl¡enen un cicfo de v¡da direclo que abarcados grandesfases:la poblac¡ónen el huéspedy la pobtaciónen el med¡oambienteextemo,responsables respec{ivamenle de las tasasde contam¡nación e ¡nfección,las cualesconiuntemente deteminanel tamañode sus poblaciones. Este sistemahuésped-parásito es dinám¡co,constituídopor una serie de entradasy sal¡das,cuyo imbalancedá como resultadola enfermdad. Conocerlos factoresque influencian las entradasy salldasdel sistemaes importante en los estud¡os para epidemiolÓgicos, lo cual es necesarioel uso de diferentesmétodosque permitanevaluarla dinám¡cede sus poblac¡ones. Dentrode éstosestá la pruebade digestiónde tejidos,como métodopara que la recup€rac¡ón de larvas handetenido su desanollo en el ciclode vidade estosparásitos. Antesde delallarlos tuodamenlos de la pruebade d¡gestión de tejidos,es importante exponeratgunos aspeclosinherentesal ¡nteresanle fenómenoconoc¡docomohipobiosis. Ef reconoc¡m¡ento @de vez mayo¡ de la ¡mportanc¡ade las larvas inhibidescomo Drecursorasde enfemedad clínicá o de masiva contaminación de las prederasdel ganado,cuando las condiciones exfemassean favorables,entatizele necesidadqu€ tenemosde conocereste estado de desarrollo inhibicloen cualquierregiónparalograrplanesefectivosde controlgarasitario. Lo anteríorse fundamen(a en el hechode que,en contraste con el nomalmentedesarolladoparásito adulto,las larvasinhib¡das de un considerable númerode trichosfrongilidos del ganadono sonrealmente remov¡dospor los antihelmínticosaclualmentedispon¡bfes,o lo son solo en casos de dos¡s incrementadas, Por lo tanto, es nec€sarioconocerel estadoy los patronesestacionalesdel deseffollode las larvas inhibidasde estos parásitos,conduciendo traba.losque vayan constituyendo partesde le base para la formulaciónde planesestratégicos de controlde la gastroenteritis parasitaria.. OMV.,lnvestigador Asister{e.ProgrÉma Nscionalde Epidemiologla V€ter¡naria. Cent¡ode lnvestigac¡ón eDSaludy Producúlto Animal,CEISA,Corporacióri pqrat¡ Inv6tbac¡ónAgropecuana, Cotombiana CORPOICA. Apartrdoaér€o2974¡L Sanhféde BogCá,O.C.Cotombia DMV, Inwst¡gador Princ¡p¡ar e. Programa Nac¡onarde Epidemior€ra veterinaria,. cErsA,coRporcA A A 29743 S€ntaféde Bogotá,O.C.Cotomb¡a.,. ?:tc.

(2) Epklsniologf. y Di¡gnód¡co dc P.rásltos lrfernos dc ¡os Rum¡antc6(Mcrnorl¡ECl¡r6ol. 13.2. que hacenreferenc¡aa su huéspedy de los parás¡los¡mplicaunaseriede mecanismos La superv¡vencia a sus relac¡onescon el ambienteextemo.esDecialmente eslas últimas.oue influenc¡an o lim¡tan parásito para podersuperv¡vir. dec¡didamente la edaplac¡ón de cuatquier De otra manera,cualquier asociaciónparasít¡cáes un complejode intenelecionesentre el huésped,el parásito y el medio emb¡ente. que las l¡m¡tanles Se ha demostrado medioambientales más importantes son cl¡máticas, espec¡almente humedady lemperalura,las cualesafeclandrásticamenteel desarollo larval de los parásitosy su supervivencia. En relación con el huésped,uno de los más importantesfactoresque influencianexitosamentela supervivenciade los parásiloses la d¡sponibil¡dad y convenientesa cle nuevoshuéspecles susoeptibles fos estadios¡nfeclivosen el t¡empoapropiadode lransmisión,cond¡cions¡neguanon para gue ésta puéda ser lograda.Ad¡c¡onalmenle, otros fecloresdel huéspedson aquellosque pueden afectar la enlreda,el Éstablec¡miento y le reproducción principalmente problemas de los parásitos, de aclimatación a le Íormade vida parasilicaque ésle adqu¡ere,ademásde contranestaro adaptarsea una variedadde tactoresde res¡slenc¡adel huéspedcontra el parásilo,principalmentefaclores de tipo moleculary celuler. De olro lsdo, pare que el c¡clo de vida cle los parásitospueda completarsenecesite desarroar mecan¡smosque le perm¡tans sus formeslarvalessalir a los huéspedesen un evenlualmomenlode lfansm¡sión. son d¡versaslss formes de edaplaciínque desarollsn los perásitospara poder superv¡v¡r.Estas ¡ncluyen res¡stenc¡a lervala efeclosmedioambientales, utilizeción de huéspedes intermed¡os o veclores paralransm¡siÓn, tasasde tecundidadincrementadas estacionalmente, eslrategiasde inmunidadcontra el huéspede hipobiosis.Sin embergo,se sabeque el m¡croambiente intestinalde los huéspedesofrecea los parásitoscierlasventajascomo:disponerde nulrientes, un ambienterelativamente homeostático v protecciónde predadores, enlreolras.. 2.. HtPoBtosls. A la h¡pob¡os¡s se le he detin¡docomo la cápacidedque tienen los parásitosde frenar o derenersu desaffolloen sus esladiosde desanolloinic¡alesy ante situec¡onesadversaspara éste. Se considera comounede las más exitosasadaplaciones del ciclode vida de los parásitosen buscede superv¡vencia. y psreoeexlendersea una gran cantidedde nemátodosparasiticos,Son muchaslas ventajasque este fenómenode adaptaciónrepresentaparalos parásitos,entreéstasrenemos: 1 . Capecitaa los parásilospara sincron¡zar su ciclo de vida con las concticiones medioambientales o. del huésped.. 2. Es de importanciemayordurántelos períodosde adversidacl embienlal,cuandolas condtciones para le lrensmis¡ón son pobresy le superv¡vencia de las formasno paras¡tic€s son mín¡mas..

(3) E¡id€mkloglay ta¡gnólíco d€ p.rásitosIntcmo3de lo! Rsml¡ntcs(Meí|or¡46Cur6o). 13€. -. en los momenlos-'r que el c¡cro paramantener unagrannúmerode estadosinfectivos 3. Losposib¡lita de facil¡tándose de neonatossusceptibles, coincidecon la producción reproduclivode los huéspedes estamanerasu trensmis¡ór 4. C¡erlasospeciosde nemátodos,cuandoel númerode estados infectivospuede ser alto y los en la biomasadel parásitopuedenevitarse, recuEosdel huéspedsean limitados,las oscilaciones altamenteadaptativoparala regulaciónde los parásitosadultos, sirviendoeslo comoun mecen¡smo y favoreciendo de los parás¡tos finalmenlela supervivenc¡a el estrésde los huéspedes disminuyendo como resultado. tratandode explicareste fenómeno,desde los relacionadoscon la Variascausass€ hen menc¡onaclo parac¡endoser los más importantesestos fisiología,la genét¡cey la ecologíahasla los inmunológicos, y últ¡mos los relacionados con la ecología. de los rumiantes, en el mundoconlos trichostrongilos Son muchoslos lrabajosquese handesanollado traba¡os fue el de Marl¡ny intenlando asociarefectosestacionales conla hipobiosis. Unode los primeros queen ciertasépocasdel año numerosas larvasL4 de c¡|. (1957)en la GranBretaña,ellosobservaron Ostet'lag¡aoslerteg¡se acumulabanen el ganado durante el oloño y el invierno. Poster¡ormente, Andersony col. (1965)en Escociamostraronque unaalla proporc¡ón de larvasde esla especieingeridas en sept¡embrey octubre deteniansu desanollodesde tempranoen su cuarto estado tanto en los becenosque pastoreaban todaesaépocecomolosquelo hacíandurantedossemanas. Oesdeenlonces propus¡eron que era improbable que elementosde tipo inmunológico hayanlugadoalgún papelde por el contrario,que las bajas temperaturas importancieen el fenómeno,sugiriéndose, del otoño pudieronhaberproveídolos elementosestimulantes parala aparioiónde la h¡pob¡osis. Se ha delectadoel fenómenode hipobiosisen otros trichostrong¡lidos. Estos incluyen Haemonchus @ntoftus, Osteftagia circumcincfay Dictyocaulusfilaria en oveias, Cooperia oncophora, Dictyocaulus vivlparus,Nematodirusñervetianus en vacas y Hyostronúus rubdus en cerdos.olras especÍesa las que se ha demostradotener capacidadde h¡pob¡osisson Tñchostrongylus axe¡, Coopenapec't¡nata, Hdernonchusplacei, Cooperiapunc.tafa,Oesodtagosfomunradiatumy Mecístoc¡nusdigitatus. pareceestarligadaa la llegadade la épocafria. mientrasque en En climastempladosla hipob¡osis y áridastal condición paraceserinocua.Es decir,en estasregionesla hipobiosis áreastropicales puecte estar relac¡onadacon el in¡ciode la estaciónseca.Así, por ejemplo,trabajosreal¡zadosen Niger¡ae lsraefconf¡rmanlo anterioral observarlarvasL4 inhibidasde HaeÍnonchus contoftusen vacas al inicio de la estaciónseca.No obstante, pocaslas laNasque se tomanhipobióticas son relativamente en las regionestropicalespredom¡nantemente húmedas. Eslos trabajosy muchosmás de diferenlesinvest¡gadores en d¡versespartesdel mundohan señalado les relac¡onesexistenlesentre los condicionesmedioambientales desfavorablesy el surgim¡entode la h¡pobiosis. LaNas hipobióticasde nemátodosque han utilízadootras rutas de lransmisióntambién han sido encontradas, siendoeste fenómenode v¡tel importanciapara los parásitosque usene. tas v¡as. E,ri,e eflas lenemosfa infecciónprenataly transmamariade cachorroscotr Toxocorccanis,y Ancytcsto,na caninum,respectivamente; transmisiónintramamariaen c€rdospor Sfrongyrodesransu . En bov¡nos.

(4) Egldrrnbloqla y t¡.gnóst¡co de Patásitoslr crm3 dc los Ruml¡ntc6 (Metnorí.ECur6o). 13't. se cita la infecciónde becenoscn¡ Toxocaravitulorumvia caloslroo leche,apareciendolos huevoserl h6cesa las tres semanasde edad. queInducena hipob¡osis de la lnfecc¡ón en loscasosen que la trensm¡sión Pareceser que los est¡mulos del huésped,sea por edado son primariemente la resitenc¡a ocurrepor vía prenatalo lransmamaria resistencieadquírída. gastrointestinales la reanudacióndel desanollo de las larvas En el ceso de los T¡ichosfrongy,us y sincrónícamente, aunquese repolan casos hipobióticásgeneralmenteocune de manereespontánee que de des€rollo as¡ncrónicoún Osteftagiaosteñagi.El ejenplo clás¡co expllca los mecanismosde 'springrise"en el conteode huevosfecalesvisto sal¡dade las larvassincrónicemente es el denominado e¡ Haemonchuscot tottus. 'Spring rise" en conleo de huevos en ovejas ha sido asociadocon una aparenterelajacióndel estadoinmunedel huésped.Variosautoreshan asociadoesto con el partoy la lactac¡ón,espec¡almenteestá últime en ovejas y bovinos,donde se ha observadouna alta carga parasitarie en ellascon la consecuente mayorcontaminación de prederasdebidoprobablemente a la de orolactina. secreción. 3.. IMPORTANCIA EPIDEMIOLOGICA. Cuál es el s¡gn¡ficádode la h¡pob¡osispara la superv¡venciadel parás¡to?Cuál es la importancia epidemiológic€ de estefenómeno? El s¡ginif¡cado másimportante de estefenómeno a teneren cuentaes el hechode que el pafásitoen los puedesobrev¡v¡r eledios de hipobiosis en cond¡ciones medioamblentales desfavorables, resultando de ellounamayorcontaminac¡ón de las praderas cuandolas condiciones seanóptimasparele reanudac¡ón del desarrollolarval y el más suscept¡ble de los huéspedes, los neonalos,estén disponibles. En la h¡pobiosisEsulta ser una edaptación consecuencia, parás¡to pere del superarperíodosde advers¡dad extema(clima)e intema(resistencie del huésped). Pero la hipobiosisno solo signíf¡cafrenar su derrarrolfolarvel para evadir condicionesdesfevorables, significatembiénque cuandohay una grandensidaden la poblaciónde parásitosedultosen el huésped, una gran proporc¡ón de nuevaslarvasestencensu desanollo,lo cual se traduceen un mecanismo parala regulación eltamenta adaptativo de la poblac¡ón de formasadultasde parásitos. De olro lado,cuandolas concliciones med¡oambientales extemasson altemantemente favorablesy desfavorablespara el des€nollode las fomas no parasíticas,le d¡sponibilidad de larvas será mucho mayoral final del Períodofavorable.La consecuencia de estoes que los huéspedesestaránexpuesrosa un máximode ¡nvasiónen estaépoca,sign¡Rcendo el comienzode una rtegeneración del ambientepara los huéspedes, 1,. RECUPERACÍON DE LARVASHTPOBIOTICAS. Aunquehan sidoutilizados diferentes métodosparala extracción de L4 de nemátodos en tejtoos,son pocoslos eludios quehangomparado la efect¡vidad de cadaunode ellos.Se ha enc¡ntradosimilartasa de recuperación de larvesde Osteftag¡a circunc¡nclatantoen soluc¡ónsalinacomoen solücrónd¡qest¡va.

(5) |-.y D¡rgnóst¡code ParáEilo¡Inlcmo¡ dr los Rüniar cs (M€mr¡as Cur6o) Ep|:demiologl¡. l3{. pépticá.La recuperación de larvasde Ang¡ostrcngylus canfonens,sa part¡rde médulaespinalde perro fué exitosacuandose incubóen soluciónsalinanormal.Olro eludio comparóel total oe tarvas recuperadas de tej¡dosul¡lizando (soluciónsalinanormal,solucióntripsinay 3 dilerentessoluciones soluciónpepsina), encontrándose s¡limitud en los resultados. Sin embargo,la velocidadde recupereción peps¡na y fue más alta cuandose utilizósoluciónde por la fuerteiffitación trips¡na,posiblemente inducidapor el bejopH de las soluciones. A continuac¡ón se describela composic¡ón parala liberación de algunasde las soluciones utilizadas de larvasinh¡bidas : .. SoluciónsalinasalineNormal. 8.5gr. NaClen 1 litrode agua. .. Soluc¡óntrips¡na(2olo). 20 gr. tripsina(extracto) E gr.de NaCl 10gr.de NaHCO3 I l¡trode aguadestilada. o. pepsina(1%) Soluc¡ón. 10gr.de eltractode pepsina HCIhastaobtenerun pH de 1 I litrode eguadest¡lada.. ¡l.t.. Recuperación de larvash¡pob¡óticas L¡l a part¡rde tgidos medianteel uso de la solución digest¡vade p€psina. Preparación de la Soluc¡ón Pepsina Acidoclorhidrico Agua. 10 grs. 30 mt. 1000ml. Proc€dimiento 1. Pesar20 gramosde tejidoEbomasal o de raspado de la mucosa. 2. Sumergirlos en 100ml de la solución. 3. lncubarel melerialen estufapor 12 horasa 37 gradoscentigrados ó en bañode maría,a la misma temperatura. Agitarinterm¡tentemenle ó useun ag¡tador mecán¡co. 4. Vert¡rel materiale travésde un tamizde 2oo mallas,luegoen uno de ¡[00mallaspor putgada,y lavara chorropreferiblemente con aguacsl¡ente. 5. Mezclelos contenidosrecolectados en cadaunode lostem¡c€s..

(6) y DbgnóEticod! ParáslosIntcrno¡d. los Rum¡rntrc(M€rnoriasCurso) Ep¡damiolgEla. t34. 6. Agregeformolal 10 o/oy completehastaun litroconagua,Ag¡te. 7. Tome 10 ml de la solucióncon una pipetade boca anchay examineal eslereoscopio varias muelras en uns cejede petrimarcadecon lineasparalelas. Cadavermecorresponde a 100 en el cuajaro intestino.. 5.. CONCLUSIONES. parasiticas Lasasociaciones sonun complejo de internelaciones entreel huésped, el parásitoy el medio ambiente.Pareceque los nemátodos esián muy bien ubicadosen su rol como parásitosy todo el procesode desanollodesdelos estadosde v¡dano paresfticag la parasít¡caprobablemente sea menos queel de otrosorganismos traumático parasíticos. Pos¡blemente el fenómeno de la hipobiosis seaunode los másex¡tosos med¡osde adaptac¡ón de éstos, puesle permitela posibilidad permanecer dentrodel huéspeden un procesoletárgicobrindándole la oportunidad de s¡ncronizar su ciclode vidacon las c¡rcunslanc¡as medioambientales y del huésped, de tal maneraque la transmisiónDarasitaria seaalcanzada.. BIBLIOGRAFIA ASANJI,M.F.(1986).H.qronchos¡¡ in ahc€pand go¡ts ¡n S¡rrr¡ Lcona.Joumatof Hetmir{hotogy, 02,243249. GEUNER,L. & CABARET, J (1985)Cu.rent.nethodsto. c¡timatingparaaitepopul¡t¡ons:potent¡aland lim¡ts to contfol gEstroimed¡nalrnd pulmonarltongyles of ¡heep on pa6lurc-Li\€slockProduction Science, 19 5S70.. BENAVIDES,E. Métodos p¡r. rcco¡oc¡m¡ento y Y¡lofac¡ón dc l¡ g¡strocnlrrii¡6 p¡rrsitaria cn bov¡no6.En: 'Mernoriasgimpos¡oIntemacional sobre Estadoactualy perspecüvas det diagnóst¡c¡en satudy prodr¡ccktn animal'.ICA-GTZ.Bogqtá, Nov.21-23,f990. (R.Rodflguez, C. Lobo& E. Benavides. eds.).pp 7999.. HAYUNGA,E. (199|) Moehologicat adaprations of inlcstinal hclminths Journalof Parasitotogy, zZ(6), 86S73.. FABlYl. J.P. E COPEMAN, O.B (1gES) tnhibited dcv€loFrent ol trichostrongylidwofm¡ in graz¡ng c.nle. Australian Veterinary Joumat, 00(8),24O242. GIBBS,H C (1982).Méchanlsmsof surviv.l of nGmatode Far¡an.8 with .Íph.s¡. on hypgb¡o8¡B.Veterinary Pareqilo¡ogy. 11, 2148.. PROCIV,P (1989) Observationson the Destfiortem m¡grat¡onof nematodelarvae and ¡ts rol in t¡ssue d¡geEtiontcchn¡ques.JoumalofHelmintotogy 03, Zgl286.. i. THOMAS,R.J (r9E2) The.colog¡c¡t basis of parasite conlrol:NerÍ.todG6Velerinary Parasitology, l!, 9-24.

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