Control de MO

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Agentes físicos



_{Efecto de la temperatura}

 Efecto letal del calor.

 Efecto de las bajas temperaturas.

 _{Liofilización}  _Desecación  _Radiaciones  _Filtración

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Algunos parámetros

 _{Punto térmico mortal}_{: temperatura}

mínima que mata a todas las bacterias en 10 minutos

 _{Tiempo térmico mortal}_{: tiempo para que}

mueran todas las bacterias a una determinada temperatura

 _{Tiempo de reducción decimal}_(valor

(4)

Inactivación total y parcial

 _{Inactivación total= esterilización}  _{Inactivación parcial = desinfección}  _{Se deben a:}

 Desnaturalización de proteínas

 Fusión de lípidos de membrana

 _{La inactivación puede ser por:}

 Calor húmedo (más rápida por coagulación)

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Calor húmedo

 _Autoclave:

 Calienta agua a temperaturas >100ºC, en compartimiento estando a > P atmosférica

 Aplicaciones:

Esterilización medios y soluciones en lab.

Esterilización material quirúrgico

En Ind. de alimentos: conservas, bebidas

 _{Tindalización}

 Fases a): calentar material 100ºC x 15 min.

 Fases b): incubar material a 30-37ºC x 24h

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(7)

Calor húmedo

 _{Uperización: esterilización por calor}

húmedo a 150ºC x 20 seg

 _{Inactivación parcial por calor húmedo:}  Ebullición: 100ºC x 15 minutos

 Pasteurización clásica: 63ºC x 30 min

 Pasteurización instantánea: 72ºC x 15 seg

(8)

Calor seco

 _{Necesita mayores tiempos y}

temperaturas que el calor húmedo

 _{Aplicaciones:}

 Horno Pasteur: para esterilizar material inerte en el lab: vidrio, metales, aceites...  Flameado a la llama del asa de siembra

(9)

Horno bacteriológico

Flameado

(10)

Efecto de las bajas temperaturas

 _{NO efecto esterilizante, sino}

microbiostático (detiene crecimiento)

 _{Entre -1 y -10ºC el citoplasma queda en}

sobrefusión, pero hay pérdida de agua y formación de microcristales de hielo  [sales y electrolitos]

 desnaturalización de proteínas

(11)

La congelación como método

de preservar cultivos

 _{En nieve carbónica (-78ºC)}  _{En nitrógeno líquido (-180ºC)}

 _{En congelador (<-20ºC), poniendo en el} medio ciertas sustancias que promueven solidificación amorfa y vítrea:

 Glicerol, sacarosa, lactosa

 Leche, suero, extracto de carne

 Albúmina

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Liofilización

 _{Es la desecación al vacío de una} muestra previamente congelada (sublimación)

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Desecación al aire

 _{Mata a las células vegetativas, pero no a} las endosporas

 _{Causas de muerte:}

 Aumento de [sales intracelulares]

 Daños por oxidación

 _{Diversa sensibilidad, según especies:}

 Bacilo tuberculoso: muy resistente (meses)

(15)

Efecto de las radiaciones

sobre los microorganismos

 _{Conceptos generales sobre radiaciones} y biomoléculas

 _{Radiaciones ionizantes: Rayos X, Rayos} Gamma: efectos y aplicaciones

(16)

(17)

Efectos de las radiaciones

ionizantes

 _{Radiaciones ionizantes:}  Rayos X

 Rayos gamma

 _{Las bacterias son más resistentes que} organismos superiores (valores D10):

 Endosporas: 2000-3000 Gigaray (Gy)

 Deionococcus radiodurans: 2200 Gy

 Bacterias “normales”: 200-600 Gy

(18)

Efectos de las radiaciones

ionizantes

 _{Efecto letal directo (a altas dosis):}  Roturas y entrecruzamientos en el

cromosoma que no se pueden reparar  Efecto mutagénico:

 Daños menores que se reparan por mecanismos propensos a error

 _{Efecto letal indirecto: por radiolisis del} agua, que genera radicales OH· letales

(19)

Aplicaciones de las

radiaciones ionizantes

 _{Para la esterilización de:}

 Material farmacéutico (antibióticos, hormonas, etc)

 Material médico-quirúrgico (guantes cirujano, suturas, jeringas, agujas, bisturíes, catéteres, prótesis, etc)

(20)

Efectos de las radiaciones no

ionizantes: rayos ultravioleta

 _{El espectro de acción de los rayos UV} coincide con el espectro de absorción por el ADN: 260 nm

 _{No tienen actividad ionizante, pero} originan fotoproductos en el ADN:

 Dímeros de pirimidina (ej.: T-T)

 Fotoproducto de la endospora

(21)

Aplicaciones prácticas de la

luz UV

 _{Producida por lámparas de vapor de} mercurio (emiten a 254 nm)

 _{La luz UV no penetra en sólidos, poco} en líquidos y se apantalla por vidrio

 _{Aplicaciones:}

 Lámparas de desinfección de aire en hospitales y laboratorios

(22)

Efecto de la presión hidrostática

 _{Las bacterias de hábitats continentales no}

soportan grandes presiones

 _{Bacterias marinas:}

 Barotolerantes: crecen a presión atmosférica, pero

aguantan hasta 500 atm

 Barófilas

 Moderadas: óptimo a 400 atm, pero aguantan hasta

(viven entre 5000 y 7000 metros)

 Extremas: óptimos a > 600 atm, y no crecen a

(23)

Microorganismos osmófilos

 _{Sacarófilos (sobre todo levaduras)}

 Solutos compatibles: polioles

 _{Halotolerantes}  _Halófilos

 Moderados (ej: bacterias marinas): 3,5% de NaCl

 Hiperhalófilos (arqueas Halobacterium): requieren saturación de NaCl

 Soluto compatible: K+: acumulan hasta 7 M de K+

(24)

Acción de los agentes químicos

sobre los microorganismos

 _{Desinfectantes,}  _{antisépticos,}

(25)

Conceptos generales

 _{Agentes químicos para el control de los} microorganismos según sus efectos:

 Microbicidas

 Microbiostáticos

 _{Tipos generales de agentes químicos}  Esterilizantes

 Desinfectantes (germicidas)

 Antisépticos

(26)

Factores que afectan la

potencia de un agente químico

 _{Concentración del agente y tiempo} de actuación

 _pH

 _Temperatura

 _{Naturaleza y población de} microorganismos

(27)

Algunos desinfectantes y

antisépticos

 _{Para esterilizar superficies inertes de}

laboratorios e industrias alimentarias:

 Detergentes de sales cuaternarias de amonio (ej.:

cloruro de benzalconio)

 Formaldehído en solución (3-8%)

 _{Esterilización “en frío” (ej., en hospitales):}

 Óxido de etileno o formaldehído (gases)

 Peróxido de hidrógeno

(28)

Algunos desinfectantes y

antisépticos

 _{Agentes que dañan la membrana}_:  Fenoles: Desnaturalizan las PE

 Alcoholes: deshidratan, coagulan y desnaturalizan

las PE

 Detergentes: alteran la tensión superficial de la MC  _{Agentes que modifican grupos funcionales}

 Agentes oxidantes: halógenos.

 Metales pesados y sus compuestos. Ag, Cu, Mg, Cr.

Forman mercaptanos

(29)

Algunos desinfectantes y

antisépticos

 _{Los halógenos son oxidantes muy potentes y muy}

usados:

 Yodo: el mejor desinfectante para la piel

 Cloro

 Cloro gaseoso (Cl2) a 1-3 ppm: cloración de

aguas potables y piscinas

 Soluciones de hipocloritos: a 200 ppm como

líquidos (lejías) o en polvo: desinfección de maquinaria, superficies

 _{Ácidos orgánicos como conservantes alimentarios:}

(30)

Quimioterápicos y Antibióticos

 _Definición_{: antimicrobianos con toxicidad}

suficientemente baja como para poder ser

administrados a un organismo superior en el que alcanza concentraciones eficaces en sus tejidos

 _{Un poco de historia:}

 Ehrlich (1900-1915) : balas mágicas. Concepto de

quimioterapia

 Domagck (1932-1935): primer quimioterápico de síntesis

(sulfamidas). Woods (1940): descubre mecanismo de acción

 Fleming (1929) descubre la acción de la penicilina (primer

antibiótico = quimioterápico natural). Chain y Florey (1940) descubren su mecanismo de acción

(31)

Retrato robot de un quimioterápico

ideal (cualidades deseables)

 _{Toxicidad selectiva (“bala mágica”)}

 _{Microbicida (pero existen microbiostáticos)}  _{Que los microorganismos no desarrollen}

resistencias

 _{De amplio espectro}

 _{No alergénico ni con efectos secundarios}  _{Que permanezca activo en plasma y tejidos}

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