Reconocimiento de microorganismos (Bacterias, hongos filamentosos y levaduras) en desechos agroindustriales

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(1)t-l, I .. I. Z)'- t+. V Se¡n¡ndt¡o Nacionale lnternacionatde Frutates. 99. (BACTERIAS,HONGOSFILAMENTOSOS Y LEVADURAS) DE MICROORGANISMOS RECONOCIMIENTO EN OESECHOSAGROINDUSTRIALES 'Gloria Franco. MaríaRestreDo '?l\4artha Ra mírez Galeano / Cecilia 'Patr icia EugeniaVélez Arango t. BESUMEN (bactetuvocomofinalidaddeterminary preservarlos microorgan¡smos El presenteestudiode t¡podescriptivo (cáscara agroindustrlales que residuos y sustrato diferentes rias,hongosfilamentosos levaduras) utilizancomo de empresasde la ciudadde de naranja,mandarÍna,cacao,mango,lodo de mora, lactosuero)provenientes cultivonaturalesempleando medios de y se elaboraron Parael desanollodel estudio \¡anizales susalrededores. condiciolos de a microorganismos, con el f in brindar estudiados, comomateriaDrimacadaunode losdesechos los varióla en cuales se tratamientos, residuo se 3 evaluaron nes sim¡laresa las de su hábitatnatural.En cada y g de esta Como control de agar agar. g, g) destilada 20 (30g, mL de agua cantidadde sustrato 50 70 en 1O0O papa y dextro' de malta agar nutritivo, agar extracto como: agar medios de cult¡vo sintéticos fasese emplearon sin diluir,con una de la leche,se empleódirectamente sa. El lactosuero,residuolíquidode la industrialización (natural respect¡vos medios de cultivo ga( fueron sembradas en los Las muestras concentraciónde a agardelzyo. del mediode cultivo, y sintético)y comocriteriode selecciónparala concenlración de sustratoen la elaboración con respectoal controlen mediode de microorganismos se utilizóaquellaque perm¡tióunamejorrecuperac¡ón cult¡vosintético. del mediode cultivonatural,se procedióa realizarel montajedelexperimento, Luegode determinar la elaboración en cadauno paralo cuallasmuestrasfueronrecolectadas aleatoriamente en tresmuestreosdiferentes,lomando '1 g 1 lasmuestrasfueronllevadasa cámarahúmedaporun perÍodode 000 ó 0OOmL de resjduo. Poster¡ormente con luegose desinfestaron 3 a 5 días con elfin de permitirla adaptacióny expresiónde los microorganismos; hipoclorito de sodioal 0.57.(muestrassólidas)y se lavaroncon aguadestiladaestéril.En el casodel lactosuero, se dejóa temperaturaambientepor un períodode 2 a 3 días. Parala s¡embrade las muestrassólidasfueron y otro en el que se tealizÓuna empleadosdos procedimientos, uno en el cual se sembrarond¡rectamente por agotamieny posteriormente se sembróa partirdel sobrenadante suspensiónmadre,la cualse homogenizó por agotamlento.Las slembrasse la siembrase realizód¡rectamente to; parael residuolÍquido(lactosuero), reallzarontantoen mediode cultivonaturalcomo en sintét¡coy para cada uno de éstasse efectuaroncinco repeticiones.Las cajasfueronincubadasa temperaturaambiente,realizandofecturasdiarias,haslaobservar (naluralo sintét¡co). A partirde paraprocedera purificarlascoloniasen el mediode cultivorespectivo crecimiento para grupo protocolos microb¡ano cada se realizóla ldentificación respectivade acuerdoa los cadaaislamiento a la (bacter¡as,hongosfilamentosos) en el caso de tevaduras,éstasfueronremitidaspara su identificaciÓn (ClB). paraInvestigaciones Biológicas Corporación con glicerolal 10% como empleandola técn¡cade congelación fueronpreservados Los aislamientos obten¡dos su viabilidad.Elestudiorealizado éstosfueronevaluadosun mesdespuéscon elfin de determinar crioprotector; y de estos presente residuos al tener disponibilidad permitiráidentificarla diversidadmicrobiana en estos de los la su acción en degradación a travésde la conformaciónde un cepario,determinar microorganismos, procesos en de de estos residuos y visualizar específ¡cos res¡duos de estamaneranuevasalternativas aplicación nativosespecial¡zados en dichossustratos. microbiana, de transformación a travésdel empleode aislamientos microbiana,residuosagro¡ndustriales. Palabrasclaves. Sustratosnaturales,biodiversidad. ' Bacterióloga. Calólica deManizales Docente. Un¡vers¡dad EspMicrobiologia. del\¡anizales Docente. LJniversidad Católica Esp.[,[icrobiologia. enBiologiay Ouímica, " Licenciada --- Baclerióloga, Ltda. Hongos deltrópico l\¡anizales, Hongos. Docenle. Católicade Universidad M Sc.Tecnologíade.

(2) lll. VSeninarioNacional e lntemacionat de Frutales. INTRODUCCION En la actualidad existena n¡velnacional y departamental diversasindustrias en lasquea travésdel procesode obtención de su producto final,se generandiferentes residuos sólidos(p.e.cubiertade frutasy verduras) (p.e.lactosuero), o líquidos la mayorpartede éstosse incinera o sondescartados puestoque se cons¡dera quecarecende valor;al ser eliminados inadecuadamente causanproblemasambientales enormesen el áreadondehansidodesechados.En ctertascircunstanctas una pequeñaporciónse recupera a travésde su empleocomocomplemento en la alimentación de animales,o comomateriaprimaparala producción de abonoorgán¡co, no siendoéstaslas mejores aplicaciones potencial que debidoal enorme poseenestossustratos.. a ¡ J J. :t ir¿. o. De acuerdoa lo anteriorse puededeterminar que existenpocosproductos que se agropecuarios utilicenen másde un 30%,debidoa que se satisfacen la mayorpartede nuestrasnecesidades extrayendo solamente aquelcomponente quese requiere y descartando el resto(Pauli,1996).De esta forma,se ha generadoel problemade la contaminación ambiental,el cual destruyelos ecos¡stemas y empobrecela biodiversidad, amenazando directamente la supervivencia de los m¡croorgan¡smos, reduciendo variedad y la (Salasy Padilla, el númerode espec¡es en la naturaleza 1993).Conla llegada deltercermilenio, el hombtehatomadoconciencia de losproblemas ecológicos quese vienenpresentando por un malmanejode losdesechosagroindustriales y de los recursos, porlo quesehavistoobligado parael rescatede Iabiodiversidad a buscarsoluciones y deldesarrollo sostenible. Colombia es unode lospaísesmásricosen cuantoa biodiversidad no sólode plantasy animales, sinode microorganismos. puedenserempleados Losmicroorganismos en condiciones adecuadas como pequeñasfábricasproductorasde una inlinidadde insumosque puedenser aplicadosen diferentes áreasa nivelagrícolae industrial.Sin embargoparaéstose requierede un altonivel tecnológico, el cuales costosoy de difícilconsecuc¡ón. Además,en la mayoríade trabajosquese hanpodidoadelantar esta en árease empleancepasforáneaslascuatessonintroducidas a condicionesdiferentes a lasde su ecosistema inicial^ disminuvendo asíel rendimiento en la obtención de producto. determinado Actualmente quelascolecciones seconsidera comomediode preservación de losmicroorganismos, constituyen un recursovaliosoparasu investigación, y desarrollo y en el aplicación en la industria campo,al ígualque el usoadecuado de los desechos agroindustriales conflnesbiológicos, lo cual disminuye parael rescalosproblemas de contaminación, de estalormaunaherramienla brindando te de la biodiversidad. Teniendo encuentalasconsideraciones anteriores, tuvocomoobjetivofadetermiestainvestigación pronac¡óny preservación queutilizancomosustratoresiduos agroindustriales de microorganismos venientes y susalrededores, paragenerarde estaforma,el de empresas de la ciudadde Manizales parala realización conocimiento posteriores básiconecesario sobrela aplicación de investigaciones de estosmicroorganismos en la obtención de compuestos útilesa part¡rde estossustratos. MATERIALES Y MÉTODOS El tipode estudiorealizado fuede tipodescriptivo. Ubicación.Lasmuestras fuerontomadasde diterentes industrias como:FFtUTASA, ubicadaen el municipio (Caldas) de Chinchiná sobrela víaa Palestina, LUKER(Santagueda), DISFRUGRANJA.

(3) V Seninao Nacional e lntemacional de Frutales 101 TA, FRUGY CentralLecherade Man¡zales(CELEMA),ubicadasen la ciudadde Manizales.La parte experimentalse realizóen el Laboratoriode Microbiología de la UniversidadCatólicade Manizales que presentauna temperaturaambientepromediode 16,5eC. Poblacióny muestra, La poblaciónesluvoconformadapor el residuo(cáscarade naranja,manoarina, cacao, mango, lodo de mora, lactosuero)obtenidode la empresaelegida,de acuerdoa la materiaprima que se explotanen cada una. Se realizarontres muestreosen diferentestiemoos. dondela cantidadde muestrarecolectada en cada uno fue de 1000g pararesiduossólidosy de 1000 mL para residuolíquido,los cualesse tomaronde maneraaleatoriael mismodía de la nroducción, Técnicas y procedim¡entos. Ensayo prel¡minarpara determ¡narla preparación del medio de cult¡vo natural: Se realizóun ensayopreliminarparadeterm¡narla cantidadde sustratoa emplearen la preparacióndel mediode cultivonatural,en el caso de los residuossólidos. Paratal fin se realizarontres tratam¡entos, los cualesse describena continuación: . . .. Tratamiento1: 309 de residuo+ 1000mL agua destiladaestéril. Tratamiento2: 50 g de res¡duo+ 1000mL agua destiladaestéril. Tratamiento3: 70 g de residuo+ 1000mL agua destiladaestéril.. Cadatratamientose licuódurante30 segundospara homogenizarel sustrato,la suspensiónobtenida se envasóen un erlenmeyery se le adicionaron20 g de agaragar,con el fin de dar consistencia y se llevó a calentamientohastadisolucióndel agar.En el caso del lactosuero,éste se empleósin difui¡ con una concentración de agat agar del2y". Posteriormente se procedióa esterilizarcadatratamientoa 121qCdurante15 minutosa 15 psi,luego se dejó enfriarhastaque el medioalcanzóaproximadamente los 40qC,paraseguidamenteservir un promed¡ode 15 mL por caja de Petriestéril. Se realizósiembrade la muestradirectamenteo a partirde suspensiónmadre,en cada mediode cultivo(5 cajaspor cada uno),procedimientos que seránexplicadosposteriormente;las cajassembradasse llevarona incubara temperaturaambiente,realizándoselecturasdiariashastaobservar crecimiento.Comocriteriode selección,se consideróaquellaconcentración que permitióuna mejor recuperaciónde microorganismos en el medio natural,con respectoal contÍolen mediode cult¡vo sintét¡co. Como controlde esta fase se emplearonmediosde cultivosintéticos,Agar Papa Dexfosa (ApD) para hongosfilamentosos, Agar Extractode Malta (AEM) para levaduras,Agar Nutr¡tivo(AN) para bacterias,estos mediosse prepararonde acuerdoa las especif¡cacionesde la casa comercial. Exper¡mento definitivo Preparacióndel medio de cultivo natural. Se empleópara cada residuola cantidadde susrraro determinadoen el ensayopreliminary se elaboróde acuerdoa las especificaciones anteriormente mencionadas. Preparacióndel medío de cultivo síntéfíco. Se prepararonde acuerdoa fas especificactones oe la casa comercial..

(4) e lnte,7/'acional deFru¡dles 102 VSeninao Ndc¡onel Preparaciónde muestras.Setomaronde la industria respectiva l OOO g de muestra; éstase transportóen cámarahúmeda,en cajasde icopornuevasen cuyofondoconteníanpapelabsorbente estérilhumedecido con aguadestiladaestér¡ly sobreel cualse colocaron trozosde los reslouos sólidos.Paralossustratos líquidos se utilizafon botellasestéÍiles.Lascajasse sellaronconcintay fueronempacadas en bolsasplásticas; por un lapsode cuatroa cincodías,con así permanecieron el fin de permitirla adaptación y crecimiento de los microorganismos en el sustrato;las botellas fueronllevadas a temperatura ambiente. Siembrade muestras.Lasmuestras sólidasse desinfestaron conhipoclorito de sodioal 0.5%por un periodode 30 segundos y posteriormente se procedieron a lavarconaguadest¡lada estér¡ldos veces(Vélezet al-,1997). Se realizaron dostiposde siembratantoen mediode cultivonaturalcomoen mediodecultivosintético: Siembraa partird€ suspensiónmadre.A 100g de muestra desinfestada se le ad¡cionaron 200 mLde aguadestilada estéril,éstose llevóal homogenizador (Stomacher) obteniéndose de este modola suspensión madre(10e).La siembrase realizóa partirde estasuspensión poragotamientoconasa . Se sembraron 5 cajas tantoen med¡ode cultivonaturalcomoen sintético. Siembradirecta. Setomaronaleatoriamente trozosde 1 cm,deáreade muestra desrnfestada. Sobrela superficie delagarfueronsembrados directamente trestrozosporcaja,en un totalde cincocajaspormediode cultivo(naturaly sintético). En el casodel lactosuero ésteúnicamente se sembróDorsiembradirecta. Unavezinoculados losmediosde cultivo,porlosdostiposde siembra,se incubaron a temperatura y en oscuridad, ambiente realizándose lecturasdiariashastaobservarcrecimiento. Posteriormente Iosmicroorganismos porpasessucesivos recuperados fueronpurificados en cajas de Petriconel mediode cultivocorrespondiente (natural o s¡ntético), dependiendo encuálse realizó primario.El ¡ncremento el a¡slamiento posterior se realizóen tubosde 16 x 150conagarinclinado. ldentifícaciónde los microorganismos aislados. parapermitirla identificac¡ón, Hongosfilamentosos,Se realizaron microcultivos tantode los hongos filamentosos aisladosen el mediode cultivonaturalcomoen el mediode cultivosintético; la identificación y microsse realizóteniendoen cuentacaracterísticas morfológicas macroscópicas (Madigan, cóp¡cas,de acuerdoa lasclavestaxonómicas et a\.,1997). Bacterias. La identificación de bacteriasse realizópor observación de las características y microscópicas pormediode unatinciónde Gram.Luegose real¡zaron macroscópicas laspruebas pefiinentes, partir puros. bioquÍmicas empleando el sistemaBBLCristal,a de cultivos Levaduras.Lasmuestras parasu identif para fueronremitidas icacióna la Corporación (ClB). cionesBiológicas Preservac¡ónde microorganismos. Los microorganismos recuperadosen el medio de cultivo naturaly en el mediosintético,se preservaronpor mediode la técnicade congelación,empleando como crioprotector el glicerolal1O"/".Pata ésto se incrementóuna coloniade cada microorganismo.

(5) VSemina o Nacional elntenacional deFrutates 103 en tuboy en cajade Petri,con el mediode cult¡vocorrespond¡ente y se llevóa incubar.Unavez obtenidoel crecimiento delaislamiento, el agarfuedivididoen trozosy adicionado a un erlenmeyer quecontenía glicerolal 10%estéril,realizando unasuspensión homogénea delmicroorganismo. A paftirdeestasuspensión se envasaron alícuotas l mLen tubos de Eppendorf estériles.Lacongelaciónrealizada f uegradual,de estaforma: . . . .. Unahoratemperatura ambiente Unahora8eC Unahora4eC Congelación a - 4eC.. Evaluaciónde la viabil¡dadun mes despuésde la preservación.Se tomarondosvialesal azar por microorganismo, los cualesse sometieron a choquetérmico,llevándolos al bañoserológico a 37eC porcincominutos y luegose llevaron a agitac¡ón.Lasiembrase realizóporestríaen el medio de cult¡vo correspondiente, realizando pormicroorganismo. 5 repeticiones Estascajasse llevaron a incubara temperatura ambiente en oscuridad, realizándose lecturas diariashastadeterminar la presenciao ausenciade crecimiento. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Mediode cultivonatural.El tratamiento elegidoparala elaboración delmediode cult¡vonatural, a partirde losresiduos de naranja, mandar¡na, mangoy cacaofueel número2, el cualconsistió de 50 gramosde sustrato(cáscara) en 1000mL de aguadestilada; parael residuolodode morael tratamientoelegidofueel número1, conformado por30 g de sustrato/1 0OOmLde aguadestilada.Éstos se seleccionaron porpresentar mejorescaracterístrcas la en recuperación de losmicroorganismos, conrespecto al control.Losmediosde cultivonaturales nofueronsuplementados, debidoa quese deseaba emplear el res¡duo comoúnicosoporte nutr¡cional, tampoco seempleóningúntipodeinhibidor, debidoa quela intencionalidad fue la recuperación presentes. de todoslosmicroorganismos Recuperaciónde microorganismos. De la tabla 1 a la 6 se describenlos génerosde m¡croorganismos recuperados a travésde los diferentes muestreos reatizados. Enel presente estudiose emplearon mediosde cultivonaturales conbaseen diferentes residuos, en loscualesse aislaron, pur¡ficaron, y preservaron, ¡dentificaron microorganismos obtenidos a partirde los mismos sustratos,con el fin de determinaren.investigaciones Tabla 1. l\4icroorganismos recuperados a partirde residuo futuras su actividaden la degracáscarade naranla d a c i ó n d e c a d a r e s i du o específicamente:estudiossimilaAgar natufal Agar sintét¡co res (Roussos,1989),se han reaCandida guillermondii Candida guillemond¡¡ l¡zado en café con el objetivode Candida inconsp¡cua Candida incospicua r e c u p e r a rh o n g o s f ¡ l a m e n t o s Kloeckera japonica autóctonosde los residuosubicaGeotr¡chum spp. Geotrichumspp. dos en suelo, hojas, madera en PaecilomycessppFusariumspp. descomposic¡ón,frutos de café Trichodermaspp. dañadospor plagaso en vía de Pseudomonasmaltophilia Escherichiavulneris Serratia marcescens Pseudomonas Dseudomalla descomposiciónnatural. Como resultadose recuperarony purifiEnterobacter agIomerans caron mrcroofganismos, a part¡r Salmonellacholerasu¡s.

(6) fQ!. VSeminario deFrutales Nacíonal e lntemacional. recuperados a partirde residuode Tabla2. Microorganismos cáscarade mandarina Aqar s¡ntético. Aqar natural Candidainconsp¡cua Candidattopicalis Koeckera apis. Candida ¡ncosp¡cua Kloeckera iaponica. Geotr¡chumspp. Paecilomyces spp. Trichodermaspp. Aspergillus niger. Geotrichumspp. Paecilomyces spp. Trichodermaspp. Fusarium spp.. Serrat¡arubidae mallei Pseudomonas Klebsiellaspp. sakasaki Enterobacter. Serratiarubiadae Entercbacter aglomerans cloacae Enterobacter KlebsiellaDlanticola Citrobacterfreund¡¡ Pseudomonas pseudomalIa Providencia alcalifaciens put¡da Pseudomonas. a partirde lodo de recuperados Tabla 3. Microorganismos mofa Aqar natural Candida krusei Candida guillermondi¡ Candida tropicalis Candida lusitiniae. Penicilliumspp. Geotrichumspp. Mucorspp.. Aqar sintético Candidakrusei Candidaguillermondii Candidatropical¡s Penicilliumspp. sPP. Geotr¡chum Mucorspp. Staphylococcusspp. spq. Corynebacter¡um. y a su identificaciÓn conbaseen café,paraluegoproceder de un mediode cultivonaturalelaborado hongos cepas de que más de 500 la aplicación tenian preservación; de estaformase determinó de la cafeínade la pulpade café. El autorresaltala imporfilamentosos en la degradación aisladas, de una loscualesse puedendomesticar silvestres, tanciade conocermejora losmicroorganismos viables a y soluciones así encontrar potencialidades metabólicas maneraevidente,graciasa sus necesidades. sus queel mismomundoindustr¡al¡zado problemas ha creadoparasatisfacer P/eurofus spp.,utilizó AsímismoGómez(1997),en unestudiosobreel cultivodelhongocomestible las cepas.El b¡oquímicamente adaptar fin de en la primerafaseun mediode cultivonaturalconel (43.7'k), y sobre molido de caféseco poragar agar(12.5%),pergamino medioestuvoconstituido papa dextrosa.El estemediose realizóel primerrepiquede lascepasqueestabanen el medioagar constiel cual estuvo natural, medio en las cepas recuperadas, repique de autorreportaun segundo se de las evaluaciones (87.5%). Luego y y pulpade caféseca molida tuidoporagaragar(12.55%\ y comolignina celulosa elementos concluyóque el medionaturalofrecea los microorganismos la lo quedemuestra biológica, permitiendo para su eficiencia mejorar su desarrollo, fundamentales.

(7) ilr ., Nacional e lnterndc¡onal de Frutales 105 V Seminario Tabla 4. l/icroorganismosrecuperadosa paftir de residuo de cáscarade mango. Aqar naturaL. Agar s¡ntético. Candida parasilosis Candida incospicua. Candida parasilosis Candida magnoliae Candida kefir Candida glabrata Hhodotorula spp.. Aspergillus niger Geotr¡chumspp. Paecilomycesspp. Asperqillusfumigatus. Aspergillusníger Geotrichumspp. Paecilomycesspp.. FIavob acter¡um odo ratum Proteus m¡rab¡lis. FIavobacterium od oratum Pseudomonas aeruginosa Baciflusspp. Flavobacterium meningosepticum. importancia condiciones similares a lasde su hábitatnaturalpara de brindara losmicroorganismos, dirigirsu actividad a la transformación de un sustratodado. metabólica a travésde pases aislamientos bassiana delhongoBeauveria González et al.,(1993')especializaron previossobrebrocade caféHypothenemus ¡ncrementos de estos en la virulencia hampe¡,logrando quemuestran a un losagentesmicrobianos Estoconfirma aislamientos. la capacidad de adaptación del de la actividad enzimática sustrato actúacomo¡nductor especifico, el cualenestecasoparticular mrcroorganrsmo. asociadaa de conocerla biotamicrobiana Actualmente se ha tomadoconciencia de la imoortancia procesos (productos de transformación los sustratos o subproductos) empleadosen diferentes paradesarrollar tecnolog¡as microbiana, conmirasa potenclalizar su accióny permitiroptimizarlos autóctonos biotecnológicos, máseficientes. Esimportante el usode microorganismos en losprocesos porla especialización metabólica debidoa quesonmuyef¡cientes en la transformación de sustratos que tienenen la degradaciónde una materiaprimadeterminada.Estose puedeevidenciaren los y porBlandónet a/.,(1998),quienesrealizaron la caracterización microbiológica trabajosreal¡zados conel fin de fisicoquímicade lossubproductos delbeneficio delcaféen el procesode compostaje, posteriores sobrela aplicación al reunirel conocimiento básicoparala realizacíón de investigaciones y los influencia áreas de acond¡cionamiento de suelode los compostes finalesobtenidos su en las que en los sustratosfrescosactúanprinc¡palmente suelosy su nutrición vegetal.Se estableció y levaduras; bacilosGramnegativos a losdos mesesseobservóla presenciade hongosfilamentosos y actinomycetos. y levaduras y en menorproporción Los Grampositivas, Gramnegativas bacterias provenientes proceso los del beneficro húmemateriales de subproductos finales del de compostaje tantoen variedadcomoen do del café(pulpay mucílago)presentaron unagranriquezamicrobiana, proveniente cantidad,aislándose 17 génerosparael casodelcomposte de pulpay 21 parala pulpa físicoquímicade los materiales mezclada conmucílago.Estacondición, aunadaa la composición caracterizados en este estudio,haceque éstossean consíderados como un insumobásicoen la y f ísico agricultura un estudiomicrobiológico orgánica.Estosmismosautores(1999),realizaron químicode la pulpade cafésolay mezclada en treseslados:fresca,condos meses con mucílago, porla lombrizErsenra foetida, conelfinde de almacenamiento en pilasy luegode sutransformación y presentan altariqueza conocersuvalorpotenc¡al comofertilizante biológico.Lapulpa el mucílago.

(8) Nacional e In¡emdcional de Frutales lQ$ V Senínarío. Tabla5. Microorganismos recuperados a partirde lactosuero Agar natural. Agar sintético. Cand¡da famata Cand¡da kef¡r CandidaIusitaniae. Candida famata Cand¡da krusei. Geotr¡chum spp. Burkholderiacepacia Acinetobacter lwoffi. Geotrichumsop. Burkholderiacepacia Ac¡netobacter lwoffi. Tabla 6. Hongosfilamentososrecuperadosa part¡rde cáscarade cacao Aqar natural Penicilliumspp. Mucor spp. Cladosporiumspp.. Aqar sintético Penicilliumspp. Mucorspp. Fusariumspp. frichoderma spp. Gliocladiumspp. Pesfa/ot,a spp. Hendersonulaspp.. principalmente m¡crobiana, y Streptom,bes en bacteriasy levaduras.Enterobacter, Escherichia se conservaron duranteel lombricompostaje de pulpasola;Citrobacter, Senatiay Pseudomonas en el lombricompostaje de pulpamezcladacon mucÍlago.El lombricompuesto obtenidode pulpasola presentó y mayoresporcentajes de mater¡a orgánica minerales. queexistenvariosgénerosmicrobianos Se puedeobservar quecoincia¡slados en estosestud¡os, denconlosrecuperados a partirde losdiferentes agroindustriales lo cualindidesechos evaluados, ca que son microorganismos que tienenafinidadpor los sustratosr¡cosen celulosay en otros presentesen éstos,porlo tantoparticipanen los procesosde transformación ca¡bohidratos y degradaciónde los mismos. A travésdeldesarrollo delpresente trabajose estáimplementado un bancode microorganismos lo cualpermitirá y científicos. disponer deestosaislamientos Losmicroorganismos confinesacadémicos recuperados en esteestudrofueronpreservados la técnicade congelacrón utilizando empleando glicerolal 10%;éstase seleccionó comocrioprotector con los recursos disponibles en la de acuerdo entídad.Un mesdespuésde su preservación fueronrecuperados fa mayoríade losaislamientos a excepción delhongofilamentoso PésfaloÍ,a spp.,recuperado a partirdeÉscaradecacao.Castañeda (2000),en estudiotitulado"Microorganismos bioconfoladores en el cultivode la palmade aceite: y producción", Reconocimiento, implementóun bancode microorganismos selección benéf¡cosseleccionando aquellos de utilidaden losesquemas de manejointegrado de la palma.Posaday Vélez (1997)realizaron unestudio todoslosaislamientos delhongoBeauvea similar, enel cualseevaluaron bassiana de la colección en el cualse registrósu procede hongosentomopatógenos de Cenicafé, geográfica, dencia,insectoatacado, ubicación de preservación, etc.,conel finde detercondiciones minarlascaracterísticas de ocurrencia regiones delpaís. Dichoestudio delhongoen lasdiferentes permitióuna selección de arslamientos con mayorprobabilidad de ser util¡zados en programas de manejointegrado de la brocadelcafé..

(9) l/a. t. '. ,1. deFrutales 107 e Intemac¡onal V Semina o Nacional paradeterm¡recuperados la evaluación de losaislamientos Esteestudioplanteacomoperspectiva (screening), de acuerde aislamiento específicos de lossustratos en la degradación narsu potencial queproduzcan paratal fin. do a losmetabolitos 'BtBLtocRAFÍA '. ln¡l\|co,. ¡¡. 1995. ProcedimientosDiagnóst¡costExámenesdirectos.MedellinClB. p 35. I BLANDoN C., c.; BOOnÍcugZ v., H.; OÁvtLA A., M,T. 1999.CaracterizaciónMicrobiológicay Físico química de la Pulpade Calé Sola y con Mucílago,en Procesode Lombricompostaje. Cenicafé50 (1):5-23. y Fís¡co-quÍmicade los Subproductosdel Beneticiodel Café en Procesode Compostaie -. 1998.CaracterizaclónN4icrobiológica Cenicafé49 (3)r169-185. / casf¡ñgo¡ Ico¡¡trtl. p., o.tr¡. 2ooo. Coleccióny Selecciónde Microorgan¡smosBenéf¡cos.Eñ: Palmas.Volumen21, N. Especial,Tomo 1 Terceraedición.FiladelfiarlnteÉmer¡cana,1972 p. 518'526, 549-550,554 s¡¡llH; BAKER; GALLAWAY |972. N,4icologÍa.. TGOMEZC., F.A. 1997, Estudiodel Cuttivode Hongos P/eurolusosf¡eatusy Pleurctussajor calü en Pulpa de Calé (Tesisde grado) UniversidadCatólicade ¡ranizales. j OOt'tZlleZ C., U.f ; pOSADA F.,F.,¡.:BUSTTLLOp.,A.E.1993. Desarollo de un Bioensayopara Evaluarla Patogenicidadde Beauveria bassianasobre Hypothenemushampei- Cenicafé(Colombia)44 (3): S3-102 I KONEMAN, B. 1987. MicologíaPrácticade Laboratorio.Terceraedición.Panamericana \t'¡¡OlctN, ¡r¡.;MAnINKO, J.; pARKER,J. 1997.Brock.Biologiade los Microorganismos. Octavaedición.EditorialPrenticeHall.España I p¡ULt, G, UpStZtt'¡G,1997. CienciaGenerat¡va InstitutoZEBY para Latinoaméricay Universidadde Manizales.Verano pp 39-51 I pOSaO¡, f.; VgUgZ, P.1997.Registrode Hospedantesy Aislamionlosde Beauvetiabass,a¡aen la colecciónde HongosEntomopatógenos de Cenicafé,Colombia.RevistaManeio Integradode plagas (Costa Rica) Nro. 46, pp 50-64 l''. nOUssos, S. et pupel del Microbiólogoen los ProcesosBiotecnológ¡cos.En: Revista Intsrfase N.32 pp. 122-123.. / vELEz, p: posaDA, F,; MAR|N, p.; GoNzaLEz, M.; osoRto, E.; BUsTlLLo, a. 1997. Técnicas para el control de calidad de FormulacionesdeHongosEntomopatógenos.BoletíntécnicoN 17 Chinchina CENlFACE p l3..

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