UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE: BIÓLOGO
Actividad antifúngica del extracto acuoso de hojas de Plantago major L. “llantén” sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae en condiciones de laboratorio.
AUTOR (A): Br. Soledad Bustamante, Mariela Arcenia ASESOR(A): Dr. Guerrero Padilla, Ana Marlene
TRUJILLO – PERÚ 2020
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DEDICATORIA
Este trabajo se lo dedico a Dios por tener la vida, y por permitirme desarrollar los dones que él me brindo.
A mis padres, María Edith y Segundo Mario, los cuales estuvieron en todo momento a mi lado dedicándome su amor, tiempo y comprensión en mi formación personal y profesional, les estaré eternamente agradecida.
A mis hermanos Marco y Marvin, gracias por todo su cariño, apoyo y protección.
A mis sobrinas que son la alegría de la casa y mis pequeñas compañeras, mi Orhiannita, Mayle, Alaniz y Valentina.
A mis amigos y compañeros que siempre estuvieron a mi lado en todo momento.
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JURADO DICTAMINADOR
________________________________
Dr. Marlene R. Rodríguez Espejo PRESIDENTA
_________________________________
Dr. Roger Veneros Terrones SECRETARIO
_________________________________
Dr. Ana Marlene Guerrero Padilla VOCAL
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AGRADECIMIENTO
Manifiesto mi especial agradecimiento a mi asesora Dr. Ana Marlene Guerrero Padilla, por su confianza, y apoyo incondicional en la elaboración del presente trabajo de investigación.
A todos mis maestros de la facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, que estuvieron a cargo de mi formación profesional.
A mis amigos y colegas que estuvieron en todo momento brindándome su ayuda en el transcurso de la carrera y en la elaboración de mi trabajo de investigación.
A mis amigos, hermanos y líderes de la Iglesia de Jesucristo de los Santos de los últimos días que siempre están pendientes de mi familia y de mi crecimiento espiritual y personal.
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ÍNDICE
Dedicatoria______________________________________________________________ii Jurado dictaminador ______________________________________________________iii Agradecimientos_________________________________________________________iv Índice__________________________________________________________________v De la Asesora ___________________________________________________________vi Presentación ____________________________________________________________vii Resumen ______________________________________________________________viii Abstract________________________________________________________________ix I. Introducción_________________________________________________________01 II. Material y Métodos___________________________________________________ 06 2.1. Material de estudio _____________________________________________ 06 2.2. Procedimiento__________________________________________________07 2.2.1. Elaboración del extracto acuoso____________________________________07 2.2.2. Preparación de medio de cultivo____________________________________07 2.3. Diseño experimental_______________________________________________ 08 2.4.Análisis estadísticos _______________________________________________ 10 III. Resultados __________________________________________________________ 11 IV. Discusión ___________________________________________________________ 15 V. Conclusiones_________________________________________________________19 Referencias bibliográficas __________________________________________________20 Anexos _________________________________________________________________24
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CERTIFICACIÓN DEL ASESOR
La que suscribe, en calidad de docente y asesora de la tesis Actividad antifúngica del extracto acuoso de hojas de Plantago major L. “llantén” sobre el Crecimiento de Lasiodiplodia theobromae en condiciones de laboratorio., certifica que la presente tesis ha
sido ejecutada conforme a los objetivos propuestos y con las orientaciones pertinentes al tesista.
El informe ha sido revisado y acogido a las observaciones y sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo al bachiller Mariela Arcenia Soledad Bustamante para continuar con los trámites correspondientes.
________________________________
Dr. Ana Marlene Guerrero Padilla Asesora
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PRESENTACIÓN
Señores miembros del jurado:
En cumplimiento con las disposiciones de reglamentos de grados y títulos de la escuela académico profesional de ciencias biológicas de la universidad nacional de Trujillo, someto a consideración y elevado criterio, el presente trabajo de investigación titulado.
Actividad antifúngica del extracto acuoso de hojas de Plantago major L. “llantén”
sobre el Crecimiento de Lasiodiplodia theobromae en condiciones de laboratorio.
Con el cual cumplo con uno de los requisitos indispensables para obtener el título profesional de biólogo.
Trujillo,17 de febrero del 2020
________________________________
Br. Mariela Arcenia Soledad Bustamante
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RESUMEN
La presente investigación tuvo como propósito evaluar la actividad antifúngica del extracto acuoso de Plantago major L. “llantén” sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio. Se preparó y esterilizo el medio agar dextrosa conteniendo concentraciones de dicho extracto de 0% (control), 25%, 30% y 35%, respectivamente. Se sembró por puntura central un fragmento de micelio proveniente de un cultivo monospórico del hongo en estudio, se incubó a temperatura ambiente por 9 días y se realizaron las lecturas del crecimiento midiendo el diámetro micelial en centímetros al tercer día de siembra.
Los resultados se analizaron mediante el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial, ANOVA y test Tukey, llegando a las siguientes conclusiones: El extracto acuoso de Plantago major L. presentó actividad antifúngica sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio, interrumpiendo el desarrollo del patógeno, teniendo como tratamiento adecuado el tratamiento 2, con un porcentaje de inhibición de crecimiento micelial del 60% al sexto día de evaluación.
La concentración del extracto acuoso de Plantago major L. en el tratamiento 4 al 35%
tuvo un porcentaje de inhibición del 40% ocasionando una estimulación en el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.
Palabras claves: Plantago major L., extracto acuoso, Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl., crecimiento.
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ABSTRACT
The purpose of this research was to evaluate the antifungal activity of the aqueous extract of Plantago major L. "plantain" on the growth of Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. under laboratory conditions. The dextrose agar medium was prepared and sterilized containing concentrations of said extract of 0% (control), 25%, 30% and 35%, respectively. A mycelium fragment from a monosporic culture of the fungus under study was seeded by central puncture, it was incubated at room temperature for 9 days and growth readings were made by measuring the mycelial diameter in centimeters on the third day of sowing.
The results were analyzed by the percentage of mycelial growth inhibition, ANOVA and Tukey test, reaching the following conclusions: The aqueous extract of Plantago major L. presented antifungal activity on the growth of Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon &
Maubl. under laboratory conditions, interrupting the development of the pathogen, having as adequate treatment treatment 2, with a percentage of mycelial growth inhibition of 60% on the sixth day of evaluation. The concentration of the aqueous extract of Plantago major L. in treatment 4 at 35% had an inhibition percentage of 40% causing a stimulation in the growth of Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.
Key Words: Plantago major L., aqueous extract, Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon &
Maubl., Growth.
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I. INTRODUCCIÓN
Persea americana Mill “aguacate o palta” es una de las frutas más completas para la alimentación humana, contiene vitaminas A, B6, B3, B2, C, D, E, K; minerales como potasio, manganeso, magnesio, hierro, fósforo y proteínas. Es tan alto su contenido en vitamina E, que la convierte en un poderoso antioxidante (Franciosi, 1992).
En la actualidad se produce Persea americana Mill en regiones tropicales y subtropicales de todo el mundo, con la producción que supera los 3 millones de toneladas al año, sobre una superficie mayor a las 400 000 hectáreas de cultivo según las estadísticas de la FAO. Siendo México el mayor productor y mayor exportador del mundo y el Perú ocupo el séptimo lugar en producción en el año 2007, Ministerio de Agricultura (MINAG, 2008).
Debido a su alto consumo per cápita en el extranjero, la demanda de fruta de palta exportable se ha incrementado notablemente, convirtiéndose en uno de los cultivos alternativos de gran preferencia en el Perú. En los últimos años las áreas sembradas de palto se han incrementado en 70%, aproximadamente (Álvarez, 2015).
En nuestro país se siembran aproximadamente 25 598 ha. Ministerio de Agricultura y Riego (MINAGRI, 2013), de las cuales la más importante es la variedad Hass. Los problemas fitosanitarios de las plantaciones establecidas principalmente de la variedad Hass, son asociados a la “muerte regresiva” de ramas, chancros en ramas y “pudrición del pedúnculo”, teniendo como agente causal a Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon &
Maubl (Muhammad et al., 2009).
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Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. es un hongo fitopatógeno que afecta severamente al cultivo de Persea americana M. “palto” en cualquier estado de desarrollo, causando infecciones en la zona de inserción patrón-injerto de plantas jóvenes,
“muerte descendente” de ramas, formación de chancros y necrosis del pedúnculo de los frutos (Álvarez, 2015).
La fuente principal de infección de este patógeno es debido a la presencia de plantas enfermas y restos de poda que quedan tirados en el campo. La diseminación mecánica se realiza por la utilización de herramientas contaminadas, tales como tijeras, sierras y machetes (Fraedrich, 1994), es favorecida por altas temperaturas, lluvias y humedad proporcionada por el riego, este factor ayuda a que las esporas sean expulsadas fuera de los picnidios, y se acumulen en la atmósfera que rodea el cultivo y suelo (Cibrián et al., 2007; Muhammad et al., 2009).
La importancia de las enfermedades ocasionadas por este patógeno radica en su complejo manejo de las infecciones. El control químico, principal medida de represión, tiene un efecto muy limitado además de los problemas que podrían ocasionar sus residuos en la fruta. En los últimos años, la tendencia de manejo de este tipo de infecciones en palto y otros cultivos se da mediante el uso de productos que activan diferentes rutas metabólicas asociadas a los sistemas de defensa de las plantas. El control biológico desarrolla alternativas naturales con resultados prometedores como es el caso de los extractos vegetales que tienen la ventaja de poseer un origen biológico, son biodegradables y manifiestan un mínimo impacto negativo sobre la salud humana y el medio ambiente (Bravo, 2000).
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Las plantas producen diversos metabolitos secundarios, tales como, flavonoides, fenoles, glicósidos de fenoles, saponinas, entre otros, que presentan actividad antifúngica.
En el Perú, existe una gran diversidad de especies botánicas que son empleadas para tratar enfermedades que afectan a los seres humanos, animales y plantas; sin embargo, su uso en el control de fitopatógenos es escaso (Montes, 1996).
Una de las especies utilizadas para uso fitopatógeno es Plantago major L. “llantén”, planta que pertenece a la división Magnoliópsida, clase Magnoliópsida, orden Plantaginales y a la familia Plantaginaceae (Ocampo, 2003). Plantago major L. es una hierba perenne que desarrolla su ciclo de vida entre seis y siete meses. Posee una altura entre los 15 cm a 30 cm;
sin embargo, su longitud puede variar según los distintos hábitats de crecimiento (Berit, 2000).
El tallo de Plantago major L. es un rizoma corto de color amarillo, el cual puede llegar a medir 15 cm de longitud en una planta adulta. Las hojas son glabras, ovaladas, de color verde claro y se unen al tallo por un largo pecíolo; poseen aproximadamente 50 cm de longitud y un ancho de 20 cm en plantas adultas. Presentan un margen liso o denticulado (Ranea, 2002). Presenta una inflorescencia tipo espiga, cuya mitad superior se recubre de pequeñas flores. Las flores poseen una coloración café-verdosa; su corola es amarilla y muy pequeña (unos 3mm de diámetro); por otra parte, las anteras son color lila, al inicio, y luego se vuelven amarillentas (Martínez, 1979).
Es polinizada por el viento. El fruto es una pequeña cápsula que, cuando madura, se abre transversalmente dejando caer las semillas que contiene. Se producen más de 20.000 semillas por planta, estas tienen forma ovalada, tamaño muy reducido y un ligero sabor
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amargo; se localizan de 8 a 16 semillas por cápsula. Con el clima húmedo, las semillas se vuelven pegajosas, lo que provoca que se adhieran a los animales y, de esta manera, logran dispersarse. El endospermo representa la mayor parte de la semilla y cubre completamente al embrión; las células del endospermo están constituidas por gruesas paredes de celulosa, cuyo lumen celular contienen proteínas y gran cantidad de aceites (Berit, 2000).
Alvarado y Moromi (2010), estudiaron la actividad antibacteriana in vitro de los extractos hidroalcohólicos de tres plantas medicinales: Plantago major L. “llantén”, Erythroxy lumnovo grantensevar truxillense “coca Trujillo” y Camellia sinensis “té verde”
mediante el método de difusión en agar con discos, sobre cinco cepas patrones de bacterias orales: Streptococcus mutans ATCC 25175, Lactobacillus acidophilus. Al realizar las pruebas de sensibilidad in vitro, se obtuvieron los siguientes resultados: los tres extractos hidroalcohólicos en ambas concentraciones presentaron actividad antibacteriana mayor al alcohol etílico (5,8 mm) sobre las cinco cepas bacterianas en estudio.
La mayor actividad presentó el extracto hidroalcohólico de Camellia sinensisa 50 μg/mL, la menor actividad presento Plantago major L. a 25 μg/mL. Se concluye que los tres extractos hidroalcohólicos en las diluciones de 25 y 50 μg/mL presentaron actividad antibacteriana sobre Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Actinomy cesviscosus, Prevotella melaninogenica y Fusobacterium nucleatum. El efecto antibacteriano aumentó con la concentración en P. melaninogenica, que fue la cepa más sensible y A. viscosusla menos sensible.
Mccutcheon, Hancock y Towers (2009) realizaron los extractos acuosos de Plantago major L., metanólico y etanólico al 50% y 70% por la técnica de difusión de disco sobre diferentes bacterias tanto Gram positivas como Gram negativas, midiendo la zona de
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inhibición para determinar el efecto. El extracto metanólico resultó activo contra Salmonella typhimurium, El extracto de etanol al 50% es activos contra S. aureus, B. subtilis, S.
disenteriae y E. coli, El extracto de etanol al 70% tiene actividad contra S. flexneri, Las actividades antibióticas registradas del Plantago major L. eran más débiles en comparación con la Gentamicina usado como control positivo.
Ruiz (2013), demostró mediante un estudio In Vitro, según el método de difusión con discos en agar Sabouraud, el efecto antifúngico de una crema elaborada con las hojas de Plantago major L. en una concentración de 20,7 mg de sólidos por cada gramo de ungüento hidrófilo; ésta resultó muy efectiva frente a Candida albicans, en menor grado, frente al Trichophytum rubrumy no se observó actividad antimicótica in vitro frente al Microsporum canis.
El objetivo de este proyecto es determinar la actividad antifúngica del extracto acuoso de la hoja de Plantago major L. “llantén” sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon
& Maubl. en condiciones de laboratorio, planteando así una alternativa para minimizar el daño causado por el patógeno, asegurando la calidad del producto final a exportar.
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II. MATERIAL Y MÉTODOS
2.1.Material de estudio
El material biológico Plantago major L. se obtuvo en la ribera del río Moche ubicado en el departamento de La Libertad, 7º46' y 8º15' de Latitud Sur y los 78º16' y 79º08' de Longitud Oeste.
Identificación y registro de Plantago major L. “llantén”en el herbario Truxillense (HUT), con el código 60453.
Fig. 1: Ejemplar de Plantago major L. codificada en el herbario Tuxillense (HUT)
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2.2.Procedimiento
2.2.1. Elaboración del extracto acuoso
Se realizó una maceración en frío al 10%, luego se almacenó en un frasco esterilizado durante 24 horas en un lugar fresco y oscuro. Finalmente, pasadas las 24 horas se filtró y estuvo listo para utilizar (Sharapin, 2000).
2.2.2. Preparación de medio de cultivo
El cultivo, fue elaborado con una muestra de peciolo contaminado de Persea americana Mill. Se aisló Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en 4 placas Petri, en un medio de agar dextrosa, se sembró el patógeno en el centro de la placa y se observó al tercer día posterior a la siembra (Segura, 2015).
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2.3.Diseño experimental .
El extracto acuoso de hojas de Plantago major L. “llantén”, se mezcló con el medio agar dextrosa estéril, en las concentraciones de 0, 25, 30 y 35 % (v/v), se pasó a dispensar en placas Petri. Luego de la solidificación del medio, se colocó en el centro de cada placa el micelio de 5 mm de diámetro, extraído del cultivo puro de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. incubado a temperatura ambiente 27± 2°C (Ramos De León et al., 2012).
Extracto acuoso de Plantago major L. Agar Dextrosa estéril
Siembra del patógeno.
Concentraciones de 25%, 30% y 35%.
Solidificación del medio.
Incubación a temperatura ambiente 27± 2°C.
Actividad antifúngica del extracto acuoso de hojas de Plantago major L. “llantén”
sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae en condiciones de laboratorio.
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Tabla 1: Tratamientos en diferentes concentraciones del extracto acuoso de Plantago major L. “llantén” sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon &
Maubl. en condiciones de laboratorio.
Leyenda
PDA= Agar dextrosa E.A. = Extracto acuoso
Tratamientos Repeticiones
1 2 3 4
1 PDA +E.A. P.
major 0%
2 PDA +E.A. P.
major 25%
3 PDA +E.A. P.
major 30%
4 PDA +E.A. P.
major 35%
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Se registró las medidas del diámetro de las colonias de cada tratamiento a partir del tercer día de experimentación, cada 24 horas, hasta que el micelio en el T1 (0% de inhibición) completó el diámetro de la placa Petri (9cm). Con los promedios de los datos obtenidos, se consiguió el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (ICM) mediante la siguiente formula (Singh et al., 2003).
%𝐼𝐶𝑀 =
(𝑑0 −𝑑𝑐)𝑑0
𝑥100
Donde:
% ICM = Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial.
𝑑0 = Diámetro de la colonia del testigo.
𝑑𝑐 = Diámetro de la colonia con la concentración prueba.
2.4.Análisis Estadístico
Se evaluó el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.
y la presencia y ausencia del halo de inhibición. Los datos obtenidos fueron evaluados mediante el análisis de varianza (ANOVA), y también se empleó el análisis de comparaciones múltiples de Tukey (p≤0,05) (Moncada, 2005; Briceño et al., 2011).
Se utilizó el programa STATGRAPHICS Versión Centurion 18.0. Versión de prueba.
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III. RESULTADOS
Fig. 2. Evaluación final del crecimiento micelial de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.: A (Testigo 0%) presencia de micelio con un diámetro de 9cm. B (Tratamiento 2 al 25%) presencia de micelio con un diámetro de 3,5cm. C (Tratamiento 3 al 30%) presencia de micelio con un diámetro de 4,6cm. D (Tratamiento 4 al 35%) presencia de micelio con un diámetro de 5,3cm.
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Tabla 2. Promedios de inhibición micelial, del extracto acuoso de Plantago major L. sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio.
Tabla 3. Promedios de inhibición micelial, del extracto acuoso de Plantago major L. sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio, evaluados mediante ANOVA.
Fuente de variación
Suma de cuadrados
Gl
Cuadrado medio
Razón-f Valor-p
Entre Tratamientos
48.6833 3 16.2278 139.10 0.0000
Error Experimental
0.933333 8 0.116667
Total 49.6167 11
p≤0.05 Promedios del crecimiento micelial (cm)
día 1 día 2 día 3 día 4 día 5 día 6
T1 1.5 2.7 3.8 7 8.3 8.9
T2 1.5 1.8 2 2.5 3.2 3.6
T3 1.8 2.3 2.6 2.7 3.4 4.5
T4 1.3 2.5 3.5 4 4.7 5.4
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Tabla 4. Promedios de inhibición micelial, del extracto acuoso de Plantago major L. sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio, evaluados mediante el test de comparación Tukey.
Tratamientos Repeticiones Media Grupos homogéneos
2 3 3.6 X
3 3 4.46667 X
4 3 5.36667 X
1 3 8.9 X
Tabla 5. Resultados del contraste entre tratamientos de los datos obtenidos en el análisis de comparaciones múltiples Tukey.
Contraste Sig. Diferencia +/- Límites
1 - 2 * 5.3 0.643115
1 - 3 * 4.43333 0.643115
1 - 4 * 3.53333 0.643115
2 - 3 * -0.866667 0.643115
2 - 4 * -1.76667 0.643115
3 - 4 * -0.9 0.643115
* indica una diferencia significativa.
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Tabla 6. Porcentaje de inhibición micelial, del extracto acuoso de Plantago major L. sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio.
Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (ICM) %
día 1 día 2 día 3 día 4 día 5 día 6
T1 100 100 100 100 100 100
T2 83.3 80.0 77.8 72.2 64.4 60.0
T3 80.0 74.4 71.1 70.0 62.2 50.0
T4 85.5 72.2 61.1 55.6 47.8 40.0
Fig. 3. Actividad del extracto acuoso de Plantago major L. en el porcentaje de inhibición micelial sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio.
100 100 100 100 100 100
83.3 80 77.8 72.2 64.4 60
80 74.4 71.1 70 62.2 50
85.5 72.2 61.1 55.6 47.8 40
D Í A 1 D Í A 2 D Í A 3 D Í A 4 D Í A 5 D Í A 6
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DEL CRECIMIENTO MICELIAL. (%)
DÍAS DE EVALUACIÓN T1 T2 T3 T4
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IV. DISCUSIÓN
Los cultivos se ven constantemente amenazados por las enfermedades, originadas con agentes infecciosos que atacan a los diferentes órganos de las plantas, muchos de los hongos como Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. son parásitos facultativos que viven en el suelo a temperaturas elevadas y varias de las enfermedades destructivas son causadas por ellos (Agrios, 1985).
Los investigadores buscaron disminuir el daño ocasionado por los patógenos con alternativas de origen biológico, trabajaron con diversas especies, como Plantago major L.
“llantén”, presentando acción antifúngica y antibacterial (Ruiz, 2013).
En la Fig. 2. se evaluó los resultados obtenidos luego de observar la actividad de inhibición del extracto acuoso de Plantago major L. “llantén” sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. encontrándose un cambio en el crecimiento de micelio del T2 (tratamiento al 25%), con respecto al T1 (testigo), de igual forma el T3 (tratamiento al 30%) y el T4(tratamiento al 35%). Montes et al., 2000 trabajó con extractos acuosos, y demostró que el efecto inhibitorio se puede manifestar desde un cambio en la forma, textura y color de las colonias de los hongos patógenos, hasta su total inhibición.
En el T4(tratamiento al 35%) a diferencia del T2 (tratamiento al 25%) se observó una clara dependencia en el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl., el diámetro micelial promedio fue de 5,4 cm sin embargo el investigador Montes et al., (2000) explica la existencia de una respuesta estimulatoria, en el desarrollo del hongo patógeno, el medio con extracto a diversas concentraciones fue más favorable que el medio
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de cultivo estándar, esto se obtuvo con extractos acuosos de Asclepias glauscecens H.B.K., Citrus limon L. y Ricimus comunis L. demostrando la dependencia de factores fitoquímicos para germinar.
En los resultados obtenidos en la investigación, los valores observados en la tabla 4, muestran la capacidad del extracto acuoso de Plantago major L. para inhibir o detener el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. (Fig. 3), comportándose como un eficiente controlador antifúngico coincidiendo con lo que afirmó Ruiz (2013) cuando realizó su investigación midiendo polifenoles totales y cuantificando catequinas por HPLC, observó una relación entre contenidos de polifenoles y catequinas específicas con los halos de inhibición presentados por cada planta, siendo Plantago major L. la que presentaba mejores resultados.
La tabla 3 presentó los resultados de los datos sometidos al análisis estadístico ANOVA, dividiendo la varianza de datos en dos componentes, entre tratamientos y repeticiones. La razón de Fisher fue igual a 139.095, cociente estimado entre tratamientos y repeticiones.
El valor de probabilidad en la prueba Fisher fue menor que 0.05, y evidenció una diferencia estadísticamente significativa entre la media de datos de un tratamiento a otro, con un nivel del 95.0% de confianza.
En las tablas 4 y 5 se aplicó un procedimiento de comparación múltiple para determinar si las medias eran significativamente diferentes. En la tabla 5 se observó los resultados del contraste entre tratamientos, comparándose con los intervalos se demostró diferencias estadísticamente significativas (*) con un nivel del 95.0% de confianza. El
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resultado afirma que el tratamiento 2 con una concentración del 25% tiene una mayor inhibición del crecimiento micelial a diferencia del tratamiento 3 y 4. Los resultados demostraron que la concentración del extracto al 35% presentaba un crecimiento del patógeno similar al testigo.
EL porcentaje de inhibición del crecimiento micelial del extracto acuoso de Plantago major L. sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon &
Maubl. en condiciones de laboratorio. (Tabla 6) tuvo como resultado para el tratamiento 2 (concentración al 25%) el 60.0 % a diferencia de los tratamientos 3 y 4 obteniendo el 50.0 % y 40.0 % respectivamente. Así mismo el tratamiento 2 obtuvo el mayor porcentaje de inhibición demostrando una concentración adecuada para posteriores trabajos de aplicación in vivo.
En los últimos años se han incluido las pruebas directas con metabolitos secundarios como: timol, eugenol, linalol, mentol y borneol. Las posibilidades de acción de los metabolitos secundarios de las plantas se pueden dar interrumpiendo procesos como la germinación de esporas, la formación de estructuras de penetración a las células para iniciar la infección, el desarrollo del micelio durante la colonización de los tejidos y la esporulación (Montes et al., 2000).
De lo anteriormente expuesto se concluye que es complejo establecer una metodología estándar para las pruebas de productos vegetales contra hongos, en función a la diversidad de relaciones planta-patógeno que implican desde saprófitos facultativos de fácil manejo en el laboratorio, hasta biótrofos altamente especializados con toda una serie de especies intermedias con diversos requerimientos ambientales; no obstante este problema, como en todos los fenómenos alelopáticos se requiere el establecimiento de
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protocolos de investigación que no dejen dudas sobre la naturaleza aleloquímica del fenómeno y sean replicables (Pratley et al., 1999).
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V. CONCLUSIONES
El extracto acuoso de Plantago major L. presentó actividad antifúngica sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condiciones de laboratorio, interrumpiendo el desarrollo del patógeno, teniendo como tratamiento adecuado el tratamiento 2, con un porcentaje de inhibición de crecimiento micelial del 60% al sexto día de evaluación.
La concentración del extracto acuoso de Plantago major L. en el tratamiento 4 al 35%
tuvo un porcentaje de inhibición del 40% ocasionando una estimulación en el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Agrios, G.N. 1985. Fitopatología. México, LIMUSA. 36-458p.
Alvarado N. 2010. “Plantas medicinales: efecto antibacteriano in vitro de Plantago major L., Erythroxy lumnovo granatense, Plowmanvartruxillensey Camellia sinensis sobre bacterias de importancia estomatológica, odontol”. 13(2), 21- 25.
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BIOLOGICAS
ANEXOS
Fig. 4: Hojas de Plantago major L. colocadas a secar.
Fig. 5: Hojas de Plantago major L. luego de la primera trituración.
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BIOLOGICAS
Fig. 6: Hojas de Plantago major L. luego de la segunda trituración, para obtener una textura homogénea.
Fig. 7: Extracto de Plantago major L.
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BIOLOGICAS
Fig. 8: Cultivo de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl.
Fig. 9: Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. vista en microscopio óptico a 1000x
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BIOLOGICAS
Tabla. 7. Datos generales de inhibición micelial, del extracto acuoso de Plantago major L. sobre el crecimiento de Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griffon & Maubl. en condicione de laboratorio, durante los seis días de evaluación.
DIA 1 DIA 2 DIA 3 DIA 4 DIA 5 DIA 6
REPETICIONES REPETICIONES REPETICIONES REPETICIONES REPETICIONES REPETICIONES
TRATAMIEN TOS
R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3 R1 R2 R3
T0 1,0 cm
1,6 cm
2,0 cm
2,5 cm
3,0 cm
2,5 cm
3,0 cm
4,0 cm
4,5 cm
6,9 cm
6,8 cm
7,2 cm
8,2 cm
8,0 cm
8,6 cm
9,0 cm
8,7 cm
9,0 cm T1
25%
1,5 cm
1,4 cm
1,6 cm
2,0 cm
1,5 cm
2,0 cm
2,0 cm
2,0 cm
2,0 cm
2,5 cm
2,8 cm
2,1 cm
3,2 cm
3,0 cm
3,4 cm
3,6 cm
3,5 cm
3,7 cm T2
30%
1,5 cm
2,5 cm
1,4 cm
2,0 cm
3,0 cm
2,0 cm
2,0 cm
3,2 cm
2,5 cm
2,0 cm
3,0 cm
3,2 cm
3,1 cm
3,5 cm
3,7 cm
4,0 cm
4,6 cm
4,8 cm T3
35%
1,3 cm
1,0 cm
1,6 cm
2,5 cm
2,6 cm
2,5 cm
3,6 cm
3,0 cm
4,0 cm
3,8 cm
3,5 cm
4,6 cm
3,9 cm
5,0 cm
5,4 cm
4,9 cm
5,3 cm
5,9 cm